JPH0669382B2 - Ｌ―ソルボースの製造法 - Google Patents
Ｌ―ソルボースの製造法Info
- Publication number
- JPH0669382B2 JPH0669382B2 JP21295386A JP21295386A JPH0669382B2 JP H0669382 B2 JPH0669382 B2 JP H0669382B2 JP 21295386 A JP21295386 A JP 21295386A JP 21295386 A JP21295386 A JP 21295386A JP H0669382 B2 JPH0669382 B2 JP H0669382B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- sorbose
- sorbit
- strain
- ifo
- carbon source
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明はＬ−ソルボースの製造法に関する。さらに詳し
くは、グロコノバクター属に属し、Ｄ−ソルビットから
Ｌ−ソルボースを生産する能力を有し、Ｄ−ソルビット
を唯一炭素源として生育する能力が低められた微生物を
用いるＬ−ソルボースの製造法に関する。
くは、グロコノバクター属に属し、Ｄ−ソルビットから
Ｌ−ソルボースを生産する能力を有し、Ｄ−ソルビット
を唯一炭素源として生育する能力が低められた微生物を
用いるＬ−ソルボースの製造法に関する。
その目的とするところは、ビタミンＣ合成の重要な合成
中間体であるＬ−ソルボースの工業的に安価な製造法を
提供することにある。
中間体であるＬ−ソルボースの工業的に安価な製造法を
提供することにある。
従来の技術 現在Ｌ−ソルボースはＤ−ソルビットを微生物、主には
グルコノバクター属細菌によって酸化する方法で製造さ
れている。従来のＬ−ソルボースの発酵的生産法によっ
ても、原料であるＤ−ソルビットをＬ−ソルボースへ変
換する収率は90％を越えているものの、未だＤ−フラク
トース,5−ケトフラクトース,2−ケト−Ｄ−グルコン
酸、さらには低分子の有機酸類が同時に副生し、その方
法はＬ−ソルボースの収率面から十分に完成されたもの
ではない。
グルコノバクター属細菌によって酸化する方法で製造さ
れている。従来のＬ−ソルボースの発酵的生産法によっ
ても、原料であるＤ−ソルビットをＬ−ソルボースへ変
換する収率は90％を越えているものの、未だＤ−フラク
トース,5−ケトフラクトース,2−ケト−Ｄ−グルコン
酸、さらには低分子の有機酸類が同時に副生し、その方
法はＬ−ソルボースの収率面から十分に完成されたもの
ではない。
発明が解決しようとする問題点 ビタミンＣの原料コスト低減のために、その中間工程に
おけるＤ−ソルビットのＬ−ソルボースへの変換収率を
従来以上に向上させることは、ビタミンＣの工業生産に
とって切実な問題である。
おけるＤ−ソルビットのＬ−ソルボースへの変換収率を
従来以上に向上させることは、ビタミンＣの工業生産に
とって切実な問題である。
問題点を解決するための手段 本発明者らはこの様な状況に鑑み、Ｌ−ソルボース発酵
の効率化につき鋭意研究を重ねた結果、従来のＬ−ソル
ボース生産に用いられているグルコノバクター属細菌か
ら誘導したＤ−ソルビットを唯一炭素源として生育する
能力を低下せしめた菌株は著しくＤ−ソルビットのＬ−
ソルボースへの変換収率の改善されていることを見い出
し、本発明を完成するに到った。
の効率化につき鋭意研究を重ねた結果、従来のＬ−ソル
ボース生産に用いられているグルコノバクター属細菌か
ら誘導したＤ−ソルビットを唯一炭素源として生育する
能力を低下せしめた菌株は著しくＤ−ソルビットのＬ−
ソルボースへの変換収率の改善されていることを見い出
し、本発明を完成するに到った。
すなわち、本発明は（１）グルコノバクター属に属し、
Ｄ−ソルビットを唯一炭素源として生育する能力が低め
られた微生物を用いてＤ−ソルビットを微生物学的に酸
化せしめることを特徴とするＬ−ソルボースの製造法に
関するものである。
Ｄ−ソルビットを唯一炭素源として生育する能力が低め
られた微生物を用いてＤ−ソルビットを微生物学的に酸
化せしめることを特徴とするＬ−ソルボースの製造法に
関するものである。
本発明の製造法に使用する微生物は、グルコノバクター
属に属し、Ｌ−ソルボース生産能を有し、かつＤ−ソル
ビットとを唯一炭素源として生育する能力が低められた
微生物であれば、いずれもこれを用いることが出来る。
このような微生物は、グルコノバクター属に属し、Ｌ−
ソルボース生産能を有する微生物を親株として誘導する
ことができ、かかる親株となり得る微生物の種名とその
菌株を以下に例示する。
属に属し、Ｌ−ソルボース生産能を有し、かつＤ−ソル
ビットとを唯一炭素源として生育する能力が低められた
微生物であれば、いずれもこれを用いることが出来る。
このような微生物は、グルコノバクター属に属し、Ｌ−
ソルボース生産能を有する微生物を親株として誘導する
ことができ、かかる親株となり得る微生物の種名とその
菌株を以下に例示する。
本発明に用いられる微生物はＤ−ソルビットを唯一炭素
源とする最少培地では生育が極めて遅いという点で親株
と明らかに区別することができる。ここで用いる最少培
地は液体でも固体でも良い。固体培地ではレプリカ法が
親株との区別に便利である。液体培地を用いる場合はＤ
−ソルビットを唯一炭素源とする最少培地に親株と同じ
条件で本発明の微生物を植菌し、通常30℃前後で、１〜
３日間振盪培養する。得られる培養液中の生育度を吸光
度，濁度または菌体重量で公知の方法に従って測定して
親株と区別することが出来る。本発明に用いられる微生
物はこの様にして測定した生育度が親株よりも低められ
たものをいい、とりわけ１／10以下に低下したものが好
ましく用いられる。
源とする最少培地では生育が極めて遅いという点で親株
と明らかに区別することができる。ここで用いる最少培
地は液体でも固体でも良い。固体培地ではレプリカ法が
親株との区別に便利である。液体培地を用いる場合はＤ
−ソルビットを唯一炭素源とする最少培地に親株と同じ
条件で本発明の微生物を植菌し、通常30℃前後で、１〜
３日間振盪培養する。得られる培養液中の生育度を吸光
度，濁度または菌体重量で公知の方法に従って測定して
親株と区別することが出来る。本発明に用いられる微生
物はこの様にして測定した生育度が親株よりも低められ
たものをいい、とりわけ１／10以下に低下したものが好
ましく用いられる。
本発明に用いられる微生物の誘導および単離は通常の方
法によって容易に達成することができる。
法によって容易に達成することができる。
すなわち、上記のような親株を用いて通常の変異処理
法、例えば紫外線,X線，γ線を照射した細胞、またはＮ
−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン，メ
チルメタンスルホン酸，亜硝酸等で化学変異剤処理を施
した細胞の中から常法によって容易に選択分離すること
により、本発明で目的とする菌株を得ることができる。
法、例えば紫外線,X線，γ線を照射した細胞、またはＮ
−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン，メ
チルメタンスルホン酸，亜硝酸等で化学変異剤処理を施
した細胞の中から常法によって容易に選択分離すること
により、本発明で目的とする菌株を得ることができる。
また該微生物は上記の性質に加えて他の性質、例えば各
種栄養要求性，薬剤耐性，薬剤感受性等を併せ持ってい
てもよい。
種栄養要求性，薬剤耐性，薬剤感受性等を併せ持ってい
てもよい。
本発明に用いる微生物の具体例としては、Ｌ−ソルボー
ス生産菌であるグルコノバクター・サブオキシダンス
IFO 3254から誘導したグルコノバクター・サブオキシ
ダンス BL−９（IFO 14489,FERM Ｐ−8632）やBL−1
15（IFO 14490,FERM Ｐ−8631）あるいはグルコノバ
クター・オキシダンス IFO 12467から誘導したグルコ
ノバクター・オキシダンス GO−10（IFO 14537,FERM
BP−1169）やGO−14（IFO 14538,FERM BP−1170）
を挙げることができる。
ス生産菌であるグルコノバクター・サブオキシダンス
IFO 3254から誘導したグルコノバクター・サブオキシ
ダンス BL−９（IFO 14489,FERM Ｐ−8632）やBL−1
15（IFO 14490,FERM Ｐ−8631）あるいはグルコノバ
クター・オキシダンス IFO 12467から誘導したグルコ
ノバクター・オキシダンス GO−10（IFO 14537,FERM
BP−1169）やGO−14（IFO 14538,FERM BP−1170）
を挙げることができる。
上記のIFO番号は財団法人発酵研究所（IFO,大阪府大阪
市淀川区十三本町２丁目17番85号）への寄託番号を、ま
たFERMB Ｐ番号は工業技術院微生物工業技術研究所（F
RI,茨城県筑波郡谷田部町東１丁目１番３号）への寄託
番号をあらわす。さらにFERM BP番号はブタペスト条約
に基づくFRIへの寄託番号をあらわす。上記BL−９株お
よびBL−115株はIFOへは1986年１月21日に、またFRIへ
は1986年２月１日に、一方GO−10株およびGO−14株はIF
Oへは1986年８月28日に、またFRIへは1986年９月５日に
それぞれ寄託されている。
市淀川区十三本町２丁目17番85号）への寄託番号を、ま
たFERMB Ｐ番号は工業技術院微生物工業技術研究所（F
RI,茨城県筑波郡谷田部町東１丁目１番３号）への寄託
番号をあらわす。さらにFERM BP番号はブタペスト条約
に基づくFRIへの寄託番号をあらわす。上記BL−９株お
よびBL−115株はIFOへは1986年１月21日に、またFRIへ
は1986年２月１日に、一方GO−10株およびGO−14株はIF
Oへは1986年８月28日に、またFRIへは1986年９月５日に
それぞれ寄託されている。
なお、上記のBL−９株およびBL−１ 15株のFRIへの各
寄託については、該寄託がベタペスト条約に基づく寄託
に切り換えられてFERM Ｐ−8632はFERM BP−1241とし
て、またFERM Ｐ−8631はFERM BP−1240としてそれぞ
れFRIに保管されている。
寄託については、該寄託がベタペスト条約に基づく寄託
に切り換えられてFERM Ｐ−8632はFERM BP−1241とし
て、またFERM Ｐ−8631はFERM BP−1240としてそれぞ
れFRIに保管されている。
次に、Ｄ−ソルビットを微生物学的に酸化せしめる方法
について説明する。この具体的な方法としては、上記に
特定する微生物、すなわち、グルコノバクター属に属
し、Ｌ−ソルボース生産能を有し、Ｄ−ソルビットを唯
一炭素源として生育する能力が低められた微生物をＤ−
ソルビットを含有する培地に培養し、培養液中にＬ−ソ
ルボースを蓄積せしめ、次いで採取することにより実施
できる。
について説明する。この具体的な方法としては、上記に
特定する微生物、すなわち、グルコノバクター属に属
し、Ｌ−ソルボース生産能を有し、Ｄ−ソルビットを唯
一炭素源として生育する能力が低められた微生物をＤ−
ソルビットを含有する培地に培養し、培養液中にＬ−ソ
ルボースを蓄積せしめ、次いで採取することにより実施
できる。
本培地中のＤ−ソルビットは約10〜50％で用いられ、好
ましくは20〜50％である。培地としては炭素源、窒素
源、無機塩類、生育因子等を含有する栄養培地または合
成培地が用いられる。
ましくは20〜50％である。培地としては炭素源、窒素
源、無機塩類、生育因子等を含有する栄養培地または合
成培地が用いられる。
炭素源としてはＤ−グルコース、Ｄ−フラクトース、Ｄ
−マンニット、グリセリン、エタノール、糖密、澱粉加
水分解物などを必要に応じて添加してもよい。たとえ
ば、Ｄ−ソルビットを唯一炭素源とする最少培地でほぼ
完全に生育できなくなった微生物を用いる場合は、上記
Ｄ−ソルビットの使用量の約0.1〜10％の炭素源を添加
しておくのが一般に好ましい。一方、Ｄ−ソルビットを
唯一炭素源とする最少培地での生育度合が親株よりも著
しく低下せしめられているが、ある程度は生育しうる微
生物を用いる場合は、原料として用いるＤ−ソルビット
の一部が炭素源として利用でき、他の炭素源を添加する
ことなく培養することもできる。
−マンニット、グリセリン、エタノール、糖密、澱粉加
水分解物などを必要に応じて添加してもよい。たとえ
ば、Ｄ−ソルビットを唯一炭素源とする最少培地でほぼ
完全に生育できなくなった微生物を用いる場合は、上記
Ｄ−ソルビットの使用量の約0.1〜10％の炭素源を添加
しておくのが一般に好ましい。一方、Ｄ−ソルビットを
唯一炭素源とする最少培地での生育度合が親株よりも著
しく低下せしめられているが、ある程度は生育しうる微
生物を用いる場合は、原料として用いるＤ−ソルビット
の一部が炭素源として利用でき、他の炭素源を添加する
ことなく培養することもできる。
窒素源としてはコーンスティープリカー，酵母エキス，
乾燥酵母，脱脂大豆粉，肉エキス，ペプトン，ガザミノ
酸，その他の含窒素有機資源，硫酸アンモニウム，硝酸
アンモニウム，塩化アンモニウム，リン酸アンモニウ
ム，アンモニア水などの無機窒素化合物、グルタミン酸
ナトリウムなどのアミノ酸、その他尿素，酢酸アンモニ
ウム等も用いられる。
乾燥酵母，脱脂大豆粉，肉エキス，ペプトン，ガザミノ
酸，その他の含窒素有機資源，硫酸アンモニウム，硝酸
アンモニウム，塩化アンモニウム，リン酸アンモニウ
ム，アンモニア水などの無機窒素化合物、グルタミン酸
ナトリウムなどのアミノ酸、その他尿素，酢酸アンモニ
ウム等も用いられる。
培地には上記の炭素源や窒素源に加えて、微生物の生育
に必要な種々の金属，ビタミン，アミノ酸，核酸，リン
酸塩等が適宜添加される。
に必要な種々の金属，ビタミン，アミノ酸，核酸，リン
酸塩等が適宜添加される。
培養は通常、振盪または通気撹拌等の好気的条件下で行
うのが良い。培養温度は一般的には15℃〜40℃で好まし
くは25℃〜35℃であり、培地のpHは3.0ないし8.0で好ま
しくは4.0ないし6.5である。また培養時間は約10ないし
100時間であり、好ましくは15ないし40時間である。
うのが良い。培養温度は一般的には15℃〜40℃で好まし
くは25℃〜35℃であり、培地のpHは3.0ないし8.0で好ま
しくは4.0ないし6.5である。また培養時間は約10ないし
100時間であり、好ましくは15ないし40時間である。
以上の様にして培養を終了した培養物中のＬ−ソルボー
スは公知の方法によって精製単離される。例えば、培養
物をろ過して除菌後、活性炭を用いて脱色し、減圧濃縮
を経て、メタノール，エタノール，アセトンなどでＬ−
ソルボースを晶出させてこれを単離することが出来る。
スは公知の方法によって精製単離される。例えば、培養
物をろ過して除菌後、活性炭を用いて脱色し、減圧濃縮
を経て、メタノール，エタノール，アセトンなどでＬ−
ソルボースを晶出させてこれを単離することが出来る。
実施例 以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明す
る。
る。
実施例１ グルコノバクター・サブオキシダンスIFO3254株を、Ｄ
−ソルビット2.5％，ペプトン1.0％，酵母エキス1.0％
からなるSCM培地（pH7.0）5mlを含む試験管に接種し、3
0℃で一夜振盪培養した。この培養液0.25mlを同じ培地2
5mlを含む200ml容三角フラスコに移植し、30℃で６時間
振盪培養した。得られた培養液から遠心分離（10,000rp
m,10分）によって細胞を集め、続いて10mlのトリス・マ
レイン酸緩衝液（0.05M,pH6.0）で２回洗浄した。この
洗浄細胞をＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグ
アニジン100μｇ／mlを含む前記緩衝液5mlに懸濁（２×
109細胞／ml）して30℃で30分間振盪した。この処理液
から遠心分離によって細胞を集め、10mlの0.85％食塩水
で２回洗浄した。
−ソルビット2.5％，ペプトン1.0％，酵母エキス1.0％
からなるSCM培地（pH7.0）5mlを含む試験管に接種し、3
0℃で一夜振盪培養した。この培養液0.25mlを同じ培地2
5mlを含む200ml容三角フラスコに移植し、30℃で６時間
振盪培養した。得られた培養液から遠心分離（10,000rp
m,10分）によって細胞を集め、続いて10mlのトリス・マ
レイン酸緩衝液（0.05M,pH6.0）で２回洗浄した。この
洗浄細胞をＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグ
アニジン100μｇ／mlを含む前記緩衝液5mlに懸濁（２×
109細胞／ml）して30℃で30分間振盪した。この処理液
から遠心分離によって細胞を集め、10mlの0.85％食塩水
で２回洗浄した。
この洗浄細胞を2.5％のグリセリンを加えたSCM培地5ml
に移し、30℃で１時間振盪培養して変異株の分離（segr
egation）を促進した。
に移し、30℃で１時間振盪培養して変異株の分離（segr
egation）を促進した。
この様にして得られた変異処理細胞懸濁液を、グリセリ
ン（2.5％）を唯一炭素源として含む最少培地（第１
表）のプレートに、１枚当り約100個のコロニーが生じ
る様に撤き、28℃,3日間培養した。
ン（2.5％）を唯一炭素源として含む最少培地（第１
表）のプレートに、１枚当り約100個のコロニーが生じ
る様に撤き、28℃,3日間培養した。
生じたコロニーを、唯一炭素源としてＤ−ソルビット2.
5％を含む最少培地プレートと唯一炭素源としてＬ−ソ
ルボース2.5％を含む最少培地プレートにレプリカ法で
転写して、28℃,3日間培養した。その結果、グリセリン
を唯一炭素源とする最少培地では生育するが、Ｄ−ソル
ビットを唯一炭素源とする最少培地とＬ−ソルボースを
唯一炭素源とする培地では、生育しないか、または親株
であるIFO 3254株と比較して生育が著しく遅い変異株
を多数分離した。
5％を含む最少培地プレートと唯一炭素源としてＬ−ソ
ルボース2.5％を含む最少培地プレートにレプリカ法で
転写して、28℃,3日間培養した。その結果、グリセリン
を唯一炭素源とする最少培地では生育するが、Ｄ−ソル
ビットを唯一炭素源とする最少培地とＬ−ソルボースを
唯一炭素源とする培地では、生育しないか、または親株
であるIFO 3254株と比較して生育が著しく遅い変異株
を多数分離した。
この様な性質を示す変異株27株のＬ−ソルボース生産能
を後述の実施例２と同じ方法で調べ、特にＬ−ソルボー
ス生産能が親株より著しく優れた菌株として、BL−９株
とBL−115株を選択した。
を後述の実施例２と同じ方法で調べ、特にＬ−ソルボー
ス生産能が親株より著しく優れた菌株として、BL−９株
とBL−115株を選択した。
尚各種炭素源を唯一炭素源として含む最少培地でのグロ
コノバクター・サブオキシダンスBL−９株（IFO 1448
9,FERM BP−1241）とBL−115株（IFO 14490,FERM BP
−1240）の生育度を親株であるIFO 3254株と対比させ
て第２表に示した。この実験条件は以下の通りである。
コノバクター・サブオキシダンスBL−９株（IFO 1448
9,FERM BP−1241）とBL−115株（IFO 14490,FERM BP
−1240）の生育度を親株であるIFO 3254株と対比させ
て第２表に示した。この実験条件は以下の通りである。
第２表に示す炭素源（2.5％）を各々含む第１表の最少
培地5mlに上記３菌株の細胞懸濁液各々１滴を植菌し30
℃で２日間試験管振盪機で培養し、得られた培養液に0.
1mlの1N塩酸を添加して残存する炭素カルシウムを溶解
させた後、生育度を吸光度（600nm）で測定した。
培地5mlに上記３菌株の細胞懸濁液各々１滴を植菌し30
℃で２日間試験管振盪機で培養し、得られた培養液に0.
1mlの1N塩酸を添加して残存する炭素カルシウムを溶解
させた後、生育度を吸光度（600nm）で測定した。
第２表から明らかな様にBL−９株とBL−115株のＤ−ソ
ルビットを唯一炭素源とする最少培地での生育は親株IF
O 3254株と比較して著しく低下している。
ルビットを唯一炭素源とする最少培地での生育は親株IF
O 3254株と比較して著しく低下している。
実施例２ 種菌として、グツコノバクター・サブオキシダンス BL
−９株（IFO 14489,FERM BP−124）とBL−115株（IFO
14490,FERM BP−1240）を使用した。この両菌株をそ
れぞれＤ−ソルビット50g／，グリセリン5g／,L−
グラタミン酸モノナトリウム2g／，酵母エキス0.3g／
,KH2POB40.47g／,MgSO4・7H2O 0.1g／,CaCO3
0.18g／，ニコチン酸アミド30mg／，パントテン酸
カルシウム3mg／，ビタミンB2 1mgb／，パラアミ
ノ安息香酸1mg／,FeSO4・7H2OB 1.5mg／,MnSO4・7
H2O 0.1mg／からなる第１種培地（pH6.5）20mlを含
む200ml容三角フラスコに接種し、30℃で24時間培養し
た。この培養液2mlを第２種培地（第１種培地のＤ−ソ
ルビット濃度を200g／に増加したもの）20mlを含む20
0ml容三角フラスコに移植して30℃で24時間振盪培養
し、第２種培養液を得た。
−９株（IFO 14489,FERM BP−124）とBL−115株（IFO
14490,FERM BP−1240）を使用した。この両菌株をそ
れぞれＤ−ソルビット50g／，グリセリン5g／,L−
グラタミン酸モノナトリウム2g／，酵母エキス0.3g／
,KH2POB40.47g／,MgSO4・7H2O 0.1g／,CaCO3
0.18g／，ニコチン酸アミド30mg／，パントテン酸
カルシウム3mg／，ビタミンB2 1mgb／，パラアミ
ノ安息香酸1mg／,FeSO4・7H2OB 1.5mg／,MnSO4・7
H2O 0.1mg／からなる第１種培地（pH6.5）20mlを含
む200ml容三角フラスコに接種し、30℃で24時間培養し
た。この培養液2mlを第２種培地（第１種培地のＤ−ソ
ルビット濃度を200g／に増加したもの）20mlを含む20
0ml容三角フラスコに移植して30℃で24時間振盪培養
し、第２種培養液を得た。
この第２種培養液1mlを、Ｄ−ソルビット300g／，グ
リセリン1g／，酵母エキス0.3g／,KH2PO4 0.47g／
,MgSO4・7H2O 0.1g／,CaCO3 0.18g／，酢酸ア
ンモニウム 0.29g／，ニコチン酸アミド30mg／，
パントテン酸カルシウム3mg／，ビタミンB2 1mg／
パラアミノ安息香酸1mg／,FeSO4・7H2O 1.5mg／
,MnSO4・7H2O 0.1mg／からなる発酵培地（pH6.5）
20mlを含む200ml容のヒダ付（バッフル付）三角フラス
コに移植し、30℃で24時間振盪培養した。また対照とし
て親株であるグルコノバクター・サブオキシダンス IF
O 3254株を同一条件下で同時に培養し、これらの結果
を併せて第３表に示した。これらの培養液中のＤ−ソル
ビットは全て消費されていた。
リセリン1g／，酵母エキス0.3g／,KH2PO4 0.47g／
,MgSO4・7H2O 0.1g／,CaCO3 0.18g／，酢酸ア
ンモニウム 0.29g／，ニコチン酸アミド30mg／，
パントテン酸カルシウム3mg／，ビタミンB2 1mg／
パラアミノ安息香酸1mg／,FeSO4・7H2O 1.5mg／
,MnSO4・7H2O 0.1mg／からなる発酵培地（pH6.5）
20mlを含む200ml容のヒダ付（バッフル付）三角フラス
コに移植し、30℃で24時間振盪培養した。また対照とし
て親株であるグルコノバクター・サブオキシダンス IF
O 3254株を同一条件下で同時に培養し、これらの結果
を併せて第３表に示した。これらの培養液中のＤ−ソル
ビットは全て消費されていた。
尚、Ｄ−ソルビットとＬ−ソルボースの定量は、スルホ
ン加ポリスチレンゲル充填カラ（島津製作所,SCR−101H
カラム,7.9mm×30cm）を用いる高速液体クロマトグラフ
ィー法（移動層;pH2.2の希硫酸，流量／;0.5ml／min,検
出器；示差屈折計）で行った。
ン加ポリスチレンゲル充填カラ（島津製作所,SCR−101H
カラム,7.9mm×30cm）を用いる高速液体クロマトグラフ
ィー法（移動層;pH2.2の希硫酸，流量／;0.5ml／min,検
出器；示差屈折計）で行った。
実施例３ 種菌としてグルコノバクター・サブオキシダンス BL−
115株（IFO 14490,FERM BP−1240）を使用し、実施例
２と同じ方法で第２種培養液を得た。
115株（IFO 14490,FERM BP−1240）を使用し、実施例
２と同じ方法で第２種培養液を得た。
この第２種培養液150mlを実施例２と同じ発酵培地３
を含む５容発酵層に移植し、通気2.4／min,撹拌800
rpm,温度30℃の条件下に24時間培養した。
を含む５容発酵層に移植し、通気2.4／min,撹拌800
rpm,温度30℃の条件下に24時間培養した。
本培養で原料Ｄ−ソルビットは完全に酸化され、培養液
中にＬ−ソルボースが対Ｄ−ソルビット収率98.4％で蓄
積された。また親株であるグルコノバクター・サブオキ
シダンスIFO 3254株を同条件下で同時に培養したとこ
ろ、その培養液中には、Ｌ−ソルボースが対Ｄ−ソルビ
ット収率93.7％で蓄積していた。
中にＬ−ソルボースが対Ｄ−ソルビット収率98.4％で蓄
積された。また親株であるグルコノバクター・サブオキ
シダンスIFO 3254株を同条件下で同時に培養したとこ
ろ、その培養液中には、Ｌ−ソルボースが対Ｄ−ソルビ
ット収率93.7％で蓄積していた。
実施例４ グルコノバクター・オキシダンス IFO 12467株を実施
例１と同じ手順で、Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニ
トロソグアニジンによる突然変異誘起処理を行った。得
られた変異処理細胞懸濁液を、グリセリン（2.5％）を
唯一炭素源として含む最少培他（第１表）のプレート
に、１枚当り約100個のコロニーが生じる様に撤き、28
℃,4日間培養した。
例１と同じ手順で、Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニ
トロソグアニジンによる突然変異誘起処理を行った。得
られた変異処理細胞懸濁液を、グリセリン（2.5％）を
唯一炭素源として含む最少培他（第１表）のプレート
に、１枚当り約100個のコロニーが生じる様に撤き、28
℃,4日間培養した。
生じたコロニーを唯一炭素源としてＤ−ソルビット2.5
％を含む最少培地プレートにレプリカ法で転写して28
℃,3日間培養した。その結果、グリセリンを唯一炭素源
とする最少培地では生育するが、Ｄ−ソルビットを唯一
炭素源とする最少培地では、生育しないか、または親株
であるIFO 12467株と比較して生育が著しく遅い変異株
を多数分離した。
％を含む最少培地プレートにレプリカ法で転写して28
℃,3日間培養した。その結果、グリセリンを唯一炭素源
とする最少培地では生育するが、Ｄ−ソルビットを唯一
炭素源とする最少培地では、生育しないか、または親株
であるIFO 12467株と比較して生育が著しく遅い変異株
を多数分離した。
上記の様な性質を示す変異株43株のＬ−ソルボース生産
能を後述の実施例５と同じ方法で調べ、特にＬ−ソルボ
ース生産能が親株より著しく優れた菌株としてGO−10株
（IFO 14537,FERM BP−1169）とGO−14株（IFO 1453
8,FERM BP−1170）を選択した。
能を後述の実施例５と同じ方法で調べ、特にＬ−ソルボ
ース生産能が親株より著しく優れた菌株としてGO−10株
（IFO 14537,FERM BP−1169）とGO−14株（IFO 1453
8,FERM BP−1170）を選択した。
尚各種炭素源を唯一炭素源とに含む最少培地でのグルコ
ノバクター・オキシダンスGO−10株とGO−14株の生育度
を親株であるIFO 12467株と対比させて第４表に示し
た。この実験条件は実施例１と同じである。
ノバクター・オキシダンスGO−10株とGO−14株の生育度
を親株であるIFO 12467株と対比させて第４表に示し
た。この実験条件は実施例１と同じである。
第４表から明らかな様にGO−10株とGO−14株は、Ｄ−ソ
ルビットを唯一炭素源とする最少培地で殆ど生育するこ
とが出来なくなっている。なお、Ｌ−ソルボースを唯一
炭素源とする最少培地では親株であるIFO 12467自身殆
ど生育し得えず、GO−10株およびGO−14株も同様に殆ど
生育できなかった。
ルビットを唯一炭素源とする最少培地で殆ど生育するこ
とが出来なくなっている。なお、Ｌ−ソルボースを唯一
炭素源とする最少培地では親株であるIFO 12467自身殆
ど生育し得えず、GO−10株およびGO−14株も同様に殆ど
生育できなかった。
実施例５ 種菌としてグルコノバクター・オキシダンスGO−10株
（IFO 14537,FERM BP−1169）とGO−14株（IFO 1453
8,FERM BP−1170）を使用した。この両菌株をそれぞれ
Ｄ−ソルビット50g／，グリセリン5g／,L−グルタ
ミン酸モノナトリウム2g／，酵母エキス1g／,KH2PO
4 0.47g／,MgSO4・7H2O 0.1g／,CaCO3 0.18g／
，ニコチン酸アミド30mg／，パントテン酸カルシウ
ム3mg／，ビタミンB2 1mg／，パラアミノ安息香酸
1mg／,FeSO4・7H2O1.5mg／,MnSO4・7H2O 0.1mg
／からなる種培地（pH6.5）20mlを含む三角フラスコ
に接触し、30℃,24時間振盪培養した。
（IFO 14537,FERM BP−1169）とGO−14株（IFO 1453
8,FERM BP−1170）を使用した。この両菌株をそれぞれ
Ｄ−ソルビット50g／，グリセリン5g／,L−グルタ
ミン酸モノナトリウム2g／，酵母エキス1g／,KH2PO
4 0.47g／,MgSO4・7H2O 0.1g／,CaCO3 0.18g／
，ニコチン酸アミド30mg／，パントテン酸カルシウ
ム3mg／，ビタミンB2 1mg／，パラアミノ安息香酸
1mg／,FeSO4・7H2O1.5mg／,MnSO4・7H2O 0.1mg
／からなる種培地（pH6.5）20mlを含む三角フラスコ
に接触し、30℃,24時間振盪培養した。
この種培養液1mlを発酵培地（上記の種培地のＤ−ソル
ビットを200g／に増加したもの）20mlを含む20ml容フ
ラスコに移植して30℃で40時間振盪培養した。また対照
として、親株であるグルコノバクター・オキシダンスIF
O12467株を同一条件下で同時に培養し、これらの結果を
併せて第５表に示した。これらの培養液中のＤ−ソルビ
ットは全て消費されていた。
ビットを200g／に増加したもの）20mlを含む20ml容フ
ラスコに移植して30℃で40時間振盪培養した。また対照
として、親株であるグルコノバクター・オキシダンスIF
O12467株を同一条件下で同時に培養し、これらの結果を
併せて第５表に示した。これらの培養液中のＤ−ソルビ
ットは全て消費されていた。
なお、Ｄ−ソルビットとＬ−ソルボースの定量は、実施
例２に記載の方法で行った。
例２に記載の方法で行った。
発明の効果 本発明によると、Ｄ−ソルビットを微生物学的に酸化し
てＬ−ソルボースを製造する方法において従来法に比較
して、Ｌ−ソルボースの収率を増大させることができ
る。すなわち、従来法ではＤ−ソルビットに対するＬ−
ソルボースの収率は高くても約93％程度までであった
が、本発明法によると従来法よりも２〜３％以上収率を
上げることができ、しかもＤ−フラクトース,2−ケトグ
ルコン酸,5−ケトフラクトースなどの副生物の生成を少
なくすることができる。この結果、ビタミンＣ製造にお
いて原料コストの占める割合がきわめて高いＬ−ソルボ
ースを従来法よりも安価に供給することができ、医薬、
食品等において幅広い用途を有するビタミンＣの製造コ
ストを低減し得る。
てＬ−ソルボースを製造する方法において従来法に比較
して、Ｌ−ソルボースの収率を増大させることができ
る。すなわち、従来法ではＤ−ソルビットに対するＬ−
ソルボースの収率は高くても約93％程度までであった
が、本発明法によると従来法よりも２〜３％以上収率を
上げることができ、しかもＤ−フラクトース,2−ケトグ
ルコン酸,5−ケトフラクトースなどの副生物の生成を少
なくすることができる。この結果、ビタミンＣ製造にお
いて原料コストの占める割合がきわめて高いＬ−ソルボ
ースを従来法よりも安価に供給することができ、医薬、
食品等において幅広い用途を有するビタミンＣの製造コ
ストを低減し得る。
Claims (1)
- 【請求項１】グルコノバクター属に属し、Ｄ−ソルビッ
トを唯一炭素源として生育する能力が親株の１／10以下
に低められた微生物を用いてＤ−ソルビットを微生物学
的に酸化せしめることを特徴とするＬ−ソルボースの製
造法。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT87300973T ATE80662T1 (de) | 1986-02-11 | 1987-02-04 | Verfahren zur herstellung von l-sorbose. |
| DE8787300973T DE3781699T2 (de) | 1986-02-11 | 1987-02-04 | Verfahren zur herstellung von l-sorbose. |
| EP87300973A EP0233050B1 (en) | 1986-02-11 | 1987-02-04 | Method for producing l-sorbose |
| US07/011,826 US4904588A (en) | 1986-02-11 | 1987-02-06 | Method for producing L-sorbose |
| DK065887A DK172133B1 (da) | 1986-02-11 | 1987-02-10 | Fremgangsmåde til fremstilling af L-sorbose |
| IE33987A IE60975B1 (en) | 1986-02-11 | 1987-02-10 | Method for producing L-sorbose |
| CN87100655.3A CN1027084C (zh) | 1986-02-11 | 1987-02-11 | 生产l-山梨糖的方法 |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61-28719 | 1986-02-11 | ||
| JP2871986 | 1986-02-11 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3347894A Division JPH07102127B2 (ja) | 1986-02-11 | 1994-03-03 | Ｌ−ソルボースの生産菌 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62275692A JPS62275692A (ja) | 1987-11-30 |
| JPH0669382B2 true JPH0669382B2 (ja) | 1994-09-07 |
Family
ID=12256249
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP21295386A Expired - Fee Related JPH0669382B2 (ja) | 1986-02-11 | 1986-09-09 | Ｌ―ソルボースの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0669382B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19907115A1 (de) * | 1999-02-19 | 2000-08-24 | Basf Ag | Verfahren zur Herstellung von L-Sorbose |
-
1986
- 1986-09-09 JP JP21295386A patent/JPH0669382B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS62275692A (ja) | 1987-11-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6319699B1 (en) | Bacterial strains and use thereof in fermentation processes for 2-keto-l-gulonic acid protection | |
| US5312741A (en) | Process for producing 2-keto-L-gulonic acid | |
| JPH067157A (ja) | シュードグルコノバクター属酸化菌 | |
| EP0046284B1 (en) | Method for preparing 2,5-diketo-d-gluconic acid and microorganisms for carrying out the method | |
| EP0213591B1 (en) | Process for the manufacture of keto gulonic acid | |
| US5541108A (en) | Gluconobacter oxydans strains | |
| US3970522A (en) | Method for the production of D-ribose | |
| US4933289A (en) | Biologically pure cultures of Pseudomonas sorbosoxidans useful for producing 2-keto-L-gulonic acid | |
| US4892823A (en) | Method for producing 2-keto-L-gulonic acid | |
| EP0233050B1 (en) | Method for producing l-sorbose | |
| US3607648A (en) | Method for the production of d-ribose | |
| JPH0669382B2 (ja) | Ｌ―ソルボースの製造法 | |
| JP2574661B2 (ja) | ２−ケト−ｌ−グロン酸生成菌 | |
| WO1992018637A1 (en) | Method for the production of d-gluconic acid | |
| JPH0751054A (ja) | Ｌ−ソルボースの生産菌 | |
| US4749652A (en) | Lactic acid process | |
| JP3006907B2 (ja) | 発酵法によるｌ−アラニンの製造法 | |
| JP3682679B2 (ja) | 高純度ｌ−乳酸の生産菌およびｌ−乳酸の製造方法 | |
| US5234819A (en) | Method for preparing 2,5-diketo-D-gluconic acid | |
| JPS5820596B2 (ja) | コプロボルフイリン ３ ノ セイホウ | |
| JPS5914787A (ja) | 新規微生物 | |
| JPH0220290A (ja) | トランス−４−シアノシクロヘキサンカルボン酸アミドの製造方法 | |
| JPH0292292A (ja) | ４，５−ジヒドロ−４，５−ジヒドロキシフタル酸および／またはその塩の製造方法 | |
| JPS63173593A (ja) | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法 | |
| CZ20004105A3 (cs) | Kmen mikroorganismu Nocardia sp. |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |