JPH0665075A - 抗腫瘍剤 - Google Patents
抗腫瘍剤Info
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- JPH0665075A JPH0665075A JP4191740A JP19174092A JPH0665075A JP H0665075 A JPH0665075 A JP H0665075A JP 4191740 A JP4191740 A JP 4191740A JP 19174092 A JP19174092 A JP 19174092A JP H0665075 A JPH0665075 A JP H0665075A
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- trihydroxy
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 有効成分としての８−ホルミル−２，５，７
−トリヒドロキシ−６−メチルフラバノンおよび医薬上
許容可能な担体を含有する抗腫瘍剤、並びに熱帯植物デ
スモス・チネンシスからの該化合物の製造方法。 【効果】 ８−ホルミル−２，５，７−トリヒドロキシ
−６−メチルフラバノンはチロシンキナーゼ阻害活性
（ＩＣ50値０．８５μｇ／ml，２．７０μＭ）をもち、
癌の化学療法に有効に使用し得る。
−トリヒドロキシ−６−メチルフラバノンおよび医薬上
許容可能な担体を含有する抗腫瘍剤、並びに熱帯植物デ
スモス・チネンシスからの該化合物の製造方法。 【効果】 ８−ホルミル−２，５，７−トリヒドロキシ
−６−メチルフラバノンはチロシンキナーゼ阻害活性
（ＩＣ50値０．８５μｇ／ml，２．７０μＭ）をもち、
癌の化学療法に有効に使用し得る。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、熱帯植物デスモス・チ
ネンシス（Desmos chinensis ）から得ることができる
チロシンキナーゼ阻害物質８−ホルミル−２，５，７−
トリヒドロキシ−６−メチルフラバノンを含有する抗腫
瘍剤およびその製造方法に関する。
ネンシス（Desmos chinensis ）から得ることができる
チロシンキナーゼ阻害物質８−ホルミル−２，５，７−
トリヒドロキシ−６−メチルフラバノンを含有する抗腫
瘍剤およびその製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】癌遺伝子は、プロト癌遺伝子に点突然変
異、転座、増幅などの異常が起こることで発生し、種々
のヒト腫瘍において存在している例が数多く見い出さ
れ、腫瘍の形成に重要な役割を果たしていると考えられ
ている。
異、転座、増幅などの異常が起こることで発生し、種々
のヒト腫瘍において存在している例が数多く見い出さ
れ、腫瘍の形成に重要な役割を果たしていると考えられ
ている。
【０００３】癌遺伝子はｓｒｃ、ｒａｓ、ｍｙｃなどに
代表される幾つかのグループに分類することができる
が、最も研究の進んでいるのはｓｒｃファミリーの癌遺
伝子である。この癌遺伝子産物はタンパク質中のチロシ
ン残基を特異的にリン酸化する活性、すなわちチロシン
キナーゼ活性をもち、この活性が細胞の癌化を引起こす
のに重要な役割を果たしていると考えられている（M.
S. Colletteら、Nature,285, 167〜169 (1980); T. Hu
nter とB. M. Sefton, Proc. Natl. Acad. Sci.USA., 7
7, 1311〜1315(1980)）。また、上皮細胞増殖因子（Ｅ
ＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、インスリン
などの増殖因子受容体にもｓｒｃファミリーの癌遺伝子
産物と類似したアミノ酸配列のドメインがありチロシン
キナーゼ活性をもつことが知られている（J.Downward
ら、Nature, 307, 521〜527 (1984)）。さらに、癌遺
伝子のうち少なくともいくつかは本来正常な細胞の役割
を果たしている増殖因子や増殖因子受容体の遺伝子の変
化したものであることが判明している（T. Yamamoto
ら、Cell, 35, 71〜78 (1983) ；C. I. Bargman ら、Ce
ll, 45, 649〜656 (1983)）。
代表される幾つかのグループに分類することができる
が、最も研究の進んでいるのはｓｒｃファミリーの癌遺
伝子である。この癌遺伝子産物はタンパク質中のチロシ
ン残基を特異的にリン酸化する活性、すなわちチロシン
キナーゼ活性をもち、この活性が細胞の癌化を引起こす
のに重要な役割を果たしていると考えられている（M.
S. Colletteら、Nature,285, 167〜169 (1980); T. Hu
nter とB. M. Sefton, Proc. Natl. Acad. Sci.USA., 7
7, 1311〜1315(1980)）。また、上皮細胞増殖因子（Ｅ
ＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、インスリン
などの増殖因子受容体にもｓｒｃファミリーの癌遺伝子
産物と類似したアミノ酸配列のドメインがありチロシン
キナーゼ活性をもつことが知られている（J.Downward
ら、Nature, 307, 521〜527 (1984)）。さらに、癌遺
伝子のうち少なくともいくつかは本来正常な細胞の役割
を果たしている増殖因子や増殖因子受容体の遺伝子の変
化したものであることが判明している（T. Yamamoto
ら、Cell, 35, 71〜78 (1983) ；C. I. Bargman ら、Ce
ll, 45, 649〜656 (1983)）。
【０００４】このため、癌遺伝子産物の機能を阻害する
物質の開発が、癌の基礎研究及び化学療法の面から重要
視されてきた。これまでに開発されたチロシンキナーゼ
阻害剤としては、ゲニスタイン（genistein ）、アーブ
スタチン（erbstatin ）、ハービマイシンＡ（herbimyc
in A）などの微生物産生物質及びＳＴ６３８のような化
学的に合成された物質が知られている（白石忠義、バイ
オサイエンスとインダストリー、第４７巻、第５号、第
３９〜４２頁、１９８９年）。
物質の開発が、癌の基礎研究及び化学療法の面から重要
視されてきた。これまでに開発されたチロシンキナーゼ
阻害剤としては、ゲニスタイン（genistein ）、アーブ
スタチン（erbstatin ）、ハービマイシンＡ（herbimyc
in A）などの微生物産生物質及びＳＴ６３８のような化
学的に合成された物質が知られている（白石忠義、バイ
オサイエンスとインダストリー、第４７巻、第５号、第
３９〜４２頁、１９８９年）。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】これまでに開発された
チロシンキナーゼ阻害剤は、上述のとおり微生物が産生
したものか又は化学的に合成されたものである。しか
し、公知のチロシンキナーゼ阻害剤のなかには、細胞膜
透過性が悪い、血清中で不安定であるなどの欠点を有す
るものもある。また、正常細胞に影響を及ぼさず、阻害
活性が十分強く且つ特異性の高いチロシンキナーゼ阻害
剤はまだないといってよい。そのため、正常細胞と異な
る癌遺伝子産物の構造及び機能を識別し、癌遺伝子産物
に強く作用する薬剤の開発が望まれてきた。
チロシンキナーゼ阻害剤は、上述のとおり微生物が産生
したものか又は化学的に合成されたものである。しか
し、公知のチロシンキナーゼ阻害剤のなかには、細胞膜
透過性が悪い、血清中で不安定であるなどの欠点を有す
るものもある。また、正常細胞に影響を及ぼさず、阻害
活性が十分強く且つ特異性の高いチロシンキナーゼ阻害
剤はまだないといってよい。そのため、正常細胞と異な
る癌遺伝子産物の構造及び機能を識別し、癌遺伝子産物
に強く作用する薬剤の開発が望まれてきた。
【０００６】本発明者らは、比較的毒性が低いと考えら
れる植物由来のチロシンキナーゼ阻害物質の探索を行な
った結果、熱帯植物デスモス・チネンシスにチロシンキ
ナーゼ阻害活性が有することを発見し、本発明を完成さ
せた。
れる植物由来のチロシンキナーゼ阻害物質の探索を行な
った結果、熱帯植物デスモス・チネンシスにチロシンキ
ナーゼ阻害活性が有することを発見し、本発明を完成さ
せた。
【０００７】本発明の目的は、新規のタイプのチロシン
キナーゼ阻害物質８−ホルミル−２，５，７−トリヒド
ロキシ−６−メチルフラバノンを含有する抗腫瘍剤を提
供することである。
キナーゼ阻害物質８−ホルミル−２，５，７−トリヒド
ロキシ−６−メチルフラバノンを含有する抗腫瘍剤を提
供することである。
【０００８】本発明の別の目的は、デスモス・チネンシ
スからの該フラバノン化合物の製造方法を提供すること
である。
スからの該フラバノン化合物の製造方法を提供すること
である。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明は、有効成分とし
ての８−ホルミル−２，５，７−トリヒドロキシ−６−
メチルフラバノンおよび医薬上許容可能な担体を含有す
る抗腫瘍剤を提供する。 ここで、８−ホルミル−２，
５，７−トリヒドロキシ−６−メチルフラバノンは、フ
ラボノイド系化合物の一種であり、下記の構造式：
ての８−ホルミル−２，５，７−トリヒドロキシ−６−
メチルフラバノンおよび医薬上許容可能な担体を含有す
る抗腫瘍剤を提供する。 ここで、８−ホルミル−２，
５，７−トリヒドロキシ−６−メチルフラバノンは、フ
ラボノイド系化合物の一種であり、下記の構造式：
【００１０】
【化１】 を有する。２位の炭素原子周囲の立体配置としては、チ
ロシンキナーゼ阻害活性をもつものが選択され、もし該
活性を有するならばラセミ体または種々の割合のＲ／Ｓ
混合物も包含される。さらに、構造活性相関等の技術を
用いてチロシンキナーゼ阻害活性をもつ、置換もしくは
付加誘導体のような本発明化合物の類縁体を誘導するこ
とも可能であろう。
ロシンキナーゼ阻害活性をもつものが選択され、もし該
活性を有するならばラセミ体または種々の割合のＲ／Ｓ
混合物も包含される。さらに、構造活性相関等の技術を
用いてチロシンキナーゼ阻害活性をもつ、置換もしくは
付加誘導体のような本発明化合物の類縁体を誘導するこ
とも可能であろう。
【００１１】上記有効成分はチロシンキナーゼ阻害活性
をもち、これによって、ＥＧＦレセプター，ＰＤＧＦレ
セプター等の増殖因子レセプター上で発現された、細胞
の癌化および増殖を誘導するチロシンキナーゼ活性が阻
害され得る。この様なチロシンキナーゼ阻害物質の１つ
に前述のゲニスタイン(genistein) が知られているが(A
kiyama,T. ら(1987)J.Biol.Chem. 262, 5592-5595)、こ
の化合物はイソフラボノイドの一種である。一方、本発
明の有効成分である８−ホルミル−２，５，７−トリヒ
ドロキシ−６−メチルフラバノンはフラバノンの一種で
あり、この種の化合物がチロシンキナーゼ阻害活性をも
つことについては、これまで全く知られていなかった。
をもち、これによって、ＥＧＦレセプター，ＰＤＧＦレ
セプター等の増殖因子レセプター上で発現された、細胞
の癌化および増殖を誘導するチロシンキナーゼ活性が阻
害され得る。この様なチロシンキナーゼ阻害物質の１つ
に前述のゲニスタイン(genistein) が知られているが(A
kiyama,T. ら(1987)J.Biol.Chem. 262, 5592-5595)、こ
の化合物はイソフラボノイドの一種である。一方、本発
明の有効成分である８−ホルミル−２，５，７−トリヒ
ドロキシ−６−メチルフラバノンはフラバノンの一種で
あり、この種の化合物がチロシンキナーゼ阻害活性をも
つことについては、これまで全く知られていなかった。
【００１２】本発明のチロシンキナーゼ阻害活性を、ヒ
ト上皮癌Ａ４３１細胞から調製された細胞膜（チロシン
キナーゼ含有）、ＥＧＦ、［γ−32Ｐ］−ＡＴＰ及びヒ
ストン（基質）から成る系に種々の濃度の本発明物質を
作用させたときのリン酸化ヒストンの放射能の残存率か
ら求めた結果、チロシンリン酸化を５０％阻害するとき
の阻害剤濃度ＩＣ50値は０．８５μｇ／ml(2.70 μM)で
あった。この値は公知のチロシンキナーゼ阻害剤である
アーブスタチン(MW179.17)のＩＣ50値０．５５μｇ／ml
(3.07 μM)［H. Umezawaら、J. Antibiotics, 39, 170
〜173 (1986)］を凌ぐものである。
ト上皮癌Ａ４３１細胞から調製された細胞膜（チロシン
キナーゼ含有）、ＥＧＦ、［γ−32Ｐ］−ＡＴＰ及びヒ
ストン（基質）から成る系に種々の濃度の本発明物質を
作用させたときのリン酸化ヒストンの放射能の残存率か
ら求めた結果、チロシンリン酸化を５０％阻害するとき
の阻害剤濃度ＩＣ50値は０．８５μｇ／ml(2.70 μM)で
あった。この値は公知のチロシンキナーゼ阻害剤である
アーブスタチン(MW179.17)のＩＣ50値０．５５μｇ／ml
(3.07 μM)［H. Umezawaら、J. Antibiotics, 39, 170
〜173 (1986)］を凌ぐものである。
【００１３】本発明の抗腫瘍剤に使用される医薬上許容
可能な担体としては、例えば天然もしくは合成ケイ酸ア
ルミニウム，微結晶セルロース，タルク，デキストリ
ン，澱粉，メタケイ酸アルミン酸マグネシウム，乳糖な
どの賦形剤、または、植物油，プロピレングリコールな
どの希釈剤が挙げられる。これに加えて、任意成分とし
ての医薬上許容可能な安定剤，崩壊剤，コーテイング
剤，懸濁化剤，乳化剤，溶解補助剤，保存剤，緩衝剤，
甘味剤なども存在させ得る。これらの添加剤としては、
公知のものを適宜組合せて使用し得る。また、剤型とし
ては、粉剤，顆粒剤，錠剤，カプセル剤，注射剤等の任
意形態で用いられる。
可能な担体としては、例えば天然もしくは合成ケイ酸ア
ルミニウム，微結晶セルロース，タルク，デキストリ
ン，澱粉，メタケイ酸アルミン酸マグネシウム，乳糖な
どの賦形剤、または、植物油，プロピレングリコールな
どの希釈剤が挙げられる。これに加えて、任意成分とし
ての医薬上許容可能な安定剤，崩壊剤，コーテイング
剤，懸濁化剤，乳化剤，溶解補助剤，保存剤，緩衝剤，
甘味剤なども存在させ得る。これらの添加剤としては、
公知のものを適宜組合せて使用し得る。また、剤型とし
ては、粉剤，顆粒剤，錠剤，カプセル剤，注射剤等の任
意形態で用いられる。
【００１４】本発明の抗腫瘍剤は主として経口投与され
るが、緊急を要する場合には静脈内投与を行ってもよ
く、本発明は投与方法によって特に限定されない。成人
１日当たりの投与量は投与方法によって異なる。主たる
投与方法である経口投与の場合で言えば０．１〜１ｇが
好ましい１日当たりの投与量である。しかし、本発明は
投与量によって限定されない。また、有効成分である本
発明のチロシンキナーゼ阻害物質は植物由来のものであ
るため低毒性であると考えられる。
るが、緊急を要する場合には静脈内投与を行ってもよ
く、本発明は投与方法によって特に限定されない。成人
１日当たりの投与量は投与方法によって異なる。主たる
投与方法である経口投与の場合で言えば０．１〜１ｇが
好ましい１日当たりの投与量である。しかし、本発明は
投与量によって限定されない。また、有効成分である本
発明のチロシンキナーゼ阻害物質は植物由来のものであ
るため低毒性であると考えられる。
【００１５】本発明はまた、デスモス・チネンシスから
の８−ホルミル−２，５，７−トリヒドロキシ−６−メ
チルフラバノンの製造方法を提供する。この方法は、熱
帯植物デスモス・チネンシスから８−ホルミル−２，
５，７−トリヒドロキシ−６−メチルフラバノンを溶媒
抽出し、次いで精製することを包含する。
の８−ホルミル−２，５，７−トリヒドロキシ−６−メ
チルフラバノンの製造方法を提供する。この方法は、熱
帯植物デスモス・チネンシスから８−ホルミル−２，
５，７−トリヒドロキシ−６−メチルフラバノンを溶媒
抽出し、次いで精製することを包含する。
【００１６】デスモス・チネンシス（Desmos chinensi
s ）は、バンレイシ科に属し、主にインド、ミャンマ
ー、インドシナ、マレーシアなどに生息する熱帯植物で
ある。原料植物は、保存、運搬等の理由から乾燥したも
のが好ましく使用される。また抽出に際しては粉砕した
ものが好ましい。
s ）は、バンレイシ科に属し、主にインド、ミャンマ
ー、インドシナ、マレーシアなどに生息する熱帯植物で
ある。原料植物は、保存、運搬等の理由から乾燥したも
のが好ましく使用される。また抽出に際しては粉砕した
ものが好ましい。
【００１７】本発明の実施態様により、抽出溶媒として
は、非極性溶媒が好ましく、特に炭化水素溶媒又はハロ
ゲン化炭化水素溶媒が好ましい。炭化水素溶媒として
は、例えばペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、
ベンゼン、トルエン、キシレンなどが挙げられ、特にヘ
キサンが好ましい。また、ハロゲン化炭化水素溶媒とし
ては、例えばクロロホルム、メチレンクロライド、四塩
化炭素などが挙げられ、特にクロロホルムが好ましい。
もちろん、これらの溶媒類に限定されるものではなく、
本化合物を安定に抽出し得る溶媒は全て本発明方法の範
囲に含まれる。
は、非極性溶媒が好ましく、特に炭化水素溶媒又はハロ
ゲン化炭化水素溶媒が好ましい。炭化水素溶媒として
は、例えばペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、
ベンゼン、トルエン、キシレンなどが挙げられ、特にヘ
キサンが好ましい。また、ハロゲン化炭化水素溶媒とし
ては、例えばクロロホルム、メチレンクロライド、四塩
化炭素などが挙げられ、特にクロロホルムが好ましい。
もちろん、これらの溶媒類に限定されるものではなく、
本化合物を安定に抽出し得る溶媒は全て本発明方法の範
囲に含まれる。
【００１８】溶媒の量は特に限定されないが、本発明の
阻害物質が抽出され得る量であればよく、一般に、乾燥
粉砕したデスモス・チネンシス５０ｇ当たり１００〜１
０００mlである。抽出温度も特に限定されないが、本発
明の阻害物質が分解を起こすことなく安定に抽出され得
る温度であればよく、好ましくは室温〜５０℃である。
抽出時間は温度により異なるが、例えば室温で抽出する
場合５〜１２時間である。なお、抽出は抽出率に応じて
２回以上繰り返してもよい。
阻害物質が抽出され得る量であればよく、一般に、乾燥
粉砕したデスモス・チネンシス５０ｇ当たり１００〜１
０００mlである。抽出温度も特に限定されないが、本発
明の阻害物質が分解を起こすことなく安定に抽出され得
る温度であればよく、好ましくは室温〜５０℃である。
抽出時間は温度により異なるが、例えば室温で抽出する
場合５〜１２時間である。なお、抽出は抽出率に応じて
２回以上繰り返してもよい。
【００１９】上述の抽出操作によって得られた粗抽出物
のチロシンキナーゼ阻害活性ＩＣ50値は、ヘキサン抽出
の場合４２μｇ／ml及びクロロホルム抽出の場合１２μ
ｇ／mlであった。
のチロシンキナーゼ阻害活性ＩＣ50値は、ヘキサン抽出
の場合４２μｇ／ml及びクロロホルム抽出の場合１２μ
ｇ／mlであった。
【００２０】得られた粗抽出物からさらにチロシンキナ
ーゼ阻害活性をもつ成分を単離するために、さらに抽出
物を精製工程に掛ける。精製は、例えば抽出物を一旦濃
縮した後にクロマトグラフィーに掛けて行うことができ
る。
ーゼ阻害活性をもつ成分を単離するために、さらに抽出
物を精製工程に掛ける。精製は、例えば抽出物を一旦濃
縮した後にクロマトグラフィーに掛けて行うことができ
る。
【００２１】本発明の実施態様により、クロマトグラフ
ィーは好ましくはシリカゲルクロマトグラフィー、ゲル
濾過クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィ
ー、薄層クロマトグラフィー又はこれらの組み合せを包
含し得る。適切に使用し得る担体及び溶媒系はそれぞ
れ、シリカゲルクロマトグラフィーの場合例えばMerck
Silicagel 60（メルク社製）及びヘキサン：酢酸エチル
＝５：１〜８：１であり、ゲル濾過クロマトグラフィー
の場合例えばトヨパールＨＷ４０（東ソー製）及びメタ
ノール又はセファデックスＬＨ２０（ファルマシア社
製）及びクロロホルム：メタノール＝１：２であり、高
速液体クロマトグラフィーの場合例えばヌクレオシル5
Ｃ18（ナーゲル社製）及び５０％アセトニトリル水溶液
であり、薄層クロマトグラフィーの場合例えばシリカゲ
ルＴＬＣ及びクロロホルム−メタノール混合溶媒であ
る。クロマトグラフィーは、上記クロマトグラフィーを
任意に組み合せて実施するのが好ましい。なお、クロマ
トグラフィー、担体及及び溶媒系の種類は上記のものに
限定されない。
ィーは好ましくはシリカゲルクロマトグラフィー、ゲル
濾過クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィ
ー、薄層クロマトグラフィー又はこれらの組み合せを包
含し得る。適切に使用し得る担体及び溶媒系はそれぞ
れ、シリカゲルクロマトグラフィーの場合例えばMerck
Silicagel 60（メルク社製）及びヘキサン：酢酸エチル
＝５：１〜８：１であり、ゲル濾過クロマトグラフィー
の場合例えばトヨパールＨＷ４０（東ソー製）及びメタ
ノール又はセファデックスＬＨ２０（ファルマシア社
製）及びクロロホルム：メタノール＝１：２であり、高
速液体クロマトグラフィーの場合例えばヌクレオシル5
Ｃ18（ナーゲル社製）及び５０％アセトニトリル水溶液
であり、薄層クロマトグラフィーの場合例えばシリカゲ
ルＴＬＣ及びクロロホルム−メタノール混合溶媒であ
る。クロマトグラフィーは、上記クロマトグラフィーを
任意に組み合せて実施するのが好ましい。なお、クロマ
トグラフィー、担体及及び溶媒系の種類は上記のものに
限定されない。
【００２２】本発明方法により、粗抽出物約２ｇから約
３０mgの８−ホルミル−２，５，７−トリヒドロキシ−
６−メチルフラバノンが９５％以上の純度で得られた。
さらに高純度を得るために、再結晶化を適用し得る。こ
の目的の溶媒としては、例えばベンゼン／トルエン／メ
タノールが好適である。
３０mgの８−ホルミル−２，５，７−トリヒドロキシ−
６−メチルフラバノンが９５％以上の純度で得られた。
さらに高純度を得るために、再結晶化を適用し得る。こ
の目的の溶媒としては、例えばベンゼン／トルエン／メ
タノールが好適である。
【００２３】８−ホルミル−２，５，７−トリヒドロキ
シ−６−メチルフラバノンは、本発明方法以外にUnona
lawii （J.Chopinら，Phytochemistry, 1987, Vol.1
7,pp.332-334 ）からも取り出すことが可能であるし、
また、化学合成によって得ることも可能であろう。
シ−６−メチルフラバノンは、本発明方法以外にUnona
lawii （J.Chopinら，Phytochemistry, 1987, Vol.1
7,pp.332-334 ）からも取り出すことが可能であるし、
また、化学合成によって得ることも可能であろう。
【００２４】
【実施例】以下の実施例により、本発明をさらに詳細に
説明するが、本発明はその実施例に限定されるものでは
ない。
説明するが、本発明はその実施例に限定されるものでは
ない。
【００２５】ヘキサンによるデスモス・チネンシスから
のチロシンキナーゼ阻害物質の抽出 乾燥後、粉砕されたデスモス・チネンシス５０ｇを加熱
器、攪拌機及びコンデンサーを備え付けた１ｌのガラス
抽出容器に入れ、ヘキサン２００mlを加え、撹拌下、室
温で約８時間抽出した。抽出後、濾過により抽出液と固
体残渣とに分離し、次いで固体残渣を同様の操作でさら
に２回抽出した。３回分の抽出液を合わせて減圧下にヘ
キサンを加熱留去し、次いで得られた残渣を凍結乾燥し
て粘稠な液状物質１．６ｇを得た。後述の方法により測
定されたヘキサン抽出物のチロシンキナーゼ阻害活性Ｉ
Ｃ50値は４２μｇ／mlであった。
のチロシンキナーゼ阻害物質の抽出 乾燥後、粉砕されたデスモス・チネンシス５０ｇを加熱
器、攪拌機及びコンデンサーを備え付けた１ｌのガラス
抽出容器に入れ、ヘキサン２００mlを加え、撹拌下、室
温で約８時間抽出した。抽出後、濾過により抽出液と固
体残渣とに分離し、次いで固体残渣を同様の操作でさら
に２回抽出した。３回分の抽出液を合わせて減圧下にヘ
キサンを加熱留去し、次いで得られた残渣を凍結乾燥し
て粘稠な液状物質１．６ｇを得た。後述の方法により測
定されたヘキサン抽出物のチロシンキナーゼ阻害活性Ｉ
Ｃ50値は４２μｇ／mlであった。
【００２６】クロロホルムによるデスモス・チネンシス
からのチロシンキナーゼ阻害物質の抽出 ヘキサンに代えてクロロホルムを用いた以外は上記の抽
出操作と全く同様に抽出を行った。その結果、デスモス
・チネンシス５０ｇから粘稠な液状物質３．３ｇを得
た。このクロロホルム抽出物のチロシンキナーゼ阻害活
性ＩＣ50値は１２μｇ／mlであった。
からのチロシンキナーゼ阻害物質の抽出 ヘキサンに代えてクロロホルムを用いた以外は上記の抽
出操作と全く同様に抽出を行った。その結果、デスモス
・チネンシス５０ｇから粘稠な液状物質３．３ｇを得
た。このクロロホルム抽出物のチロシンキナーゼ阻害活
性ＩＣ50値は１２μｇ／mlであった。
【００２７】抽出物からのチロシンキナーゼ阻害物質の
精製 クロロホルム抽出物２０００mgをMerck Silicagel 60
（メルク社製）を充填したシリカゲルカラム（４０φ×
１００mm）上に載置し、ヘキサン：酢酸エチルの混合溶
媒８：１及び５：１をそれぞれ７００ml及び２５０mlず
つ用いてこの順番で段階溶出した。活性画分を集め、減
圧下に溶媒を蒸発し、緑色の油状残渣を得た。次いで、
得られた油状残渣を少量のクロロホルムに溶解し、シリ
カゲルＴＬＣ（Merck 5715）にスポットした後、クロロ
ホルム：メタノール＝２０：１で展開し、ＵＶランプで
黄色に検出されるところを掻き取り、クロロホルム：メ
タノール＝５：１で抽出し、減圧下に溶媒を蒸発して黄
色油状物を得た。この油状物をさらにゲル濾過クロマト
グラフィー［トヨパールＨＷ４０（東ソー製）、カラム
サイズ４０φ×１２０mm］に掛け、メタノールで溶出
し、活性画分を集め、減圧下に溶媒を蒸発して透明の黄
色油状物としてチロシンキナーゼ阻害物質３０mgを得
た。
精製 クロロホルム抽出物２０００mgをMerck Silicagel 60
（メルク社製）を充填したシリカゲルカラム（４０φ×
１００mm）上に載置し、ヘキサン：酢酸エチルの混合溶
媒８：１及び５：１をそれぞれ７００ml及び２５０mlず
つ用いてこの順番で段階溶出した。活性画分を集め、減
圧下に溶媒を蒸発し、緑色の油状残渣を得た。次いで、
得られた油状残渣を少量のクロロホルムに溶解し、シリ
カゲルＴＬＣ（Merck 5715）にスポットした後、クロロ
ホルム：メタノール＝２０：１で展開し、ＵＶランプで
黄色に検出されるところを掻き取り、クロロホルム：メ
タノール＝５：１で抽出し、減圧下に溶媒を蒸発して黄
色油状物を得た。この油状物をさらにゲル濾過クロマト
グラフィー［トヨパールＨＷ４０（東ソー製）、カラム
サイズ４０φ×１２０mm］に掛け、メタノールで溶出
し、活性画分を集め、減圧下に溶媒を蒸発して透明の黄
色油状物としてチロシンキナーゼ阻害物質３０mgを得
た。
【００２８】この物質の純度は、ＴＬＣ分析（担体Merc
k 5715、展開溶媒クロロホルム：メタノール＝２０：
１）により単一スポットとなり、またＨＰＬＣ分析［カ
ラムヌクレオシル5 Ｃ18、４．６φ×２５０mm（ナーゲ
ル社製）、溶媒５０％アセトニトリル、検出２５４nm］
により９５．３％を示した。またこの物質の物理化学的
及び分光学的性質は以下のとおりであった。
k 5715、展開溶媒クロロホルム：メタノール＝２０：
１）により単一スポットとなり、またＨＰＬＣ分析［カ
ラムヌクレオシル5 Ｃ18、４．６φ×２５０mm（ナーゲ
ル社製）、溶媒５０％アセトニトリル、検出２５４nm］
により９５．３％を示した。またこの物質の物理化学的
及び分光学的性質は以下のとおりであった。
【００２９】（ａ）分子量：３１４（マススペクトルか
らの値）。
らの値）。
【００３０】（ｂ）分子式：Ｃ17Ｈ14Ｏ6 （元素分析：
Ｃ17Ｈ14Ｏ6 としての計算値 C64.96%,H4.49% ；実験値
C65.29%,H4.62%）。
Ｃ17Ｈ14Ｏ6 としての計算値 C64.96%,H4.49% ；実験値
C65.29%,H4.62%）。
【００３１】（ｃ） 1Ｈ−ＮＭＲ（アセトン−ｄ6 ）δ
13.05(1H,s,OH-5 またはOH-7);12.70(1H,s,OH-7 または
OH-5);10.15(1H,s,CHO);7.45-7.75(6H,m, Ｃ6 Ｈ5 およ
びOH-2);2.10(2H,s,CH2 -3);2.05(3H,s,CH3 )ppm。
13.05(1H,s,OH-5 またはOH-7);12.70(1H,s,OH-7 または
OH-5);10.15(1H,s,CHO);7.45-7.75(6H,m, Ｃ6 Ｈ5 およ
びOH-2);2.10(2H,s,CH2 -3);2.05(3H,s,CH3 )ppm。
【００３２】（ｄ）ＩＲ（ＫＢｒ）ν1633cm-1(C=O) ，
3341cm-1(OH)。
3341cm-1(OH)。
【００３３】（ｅ）シリカゲル薄層クロマトグラフィ
ー：Ｒf ＝0.48（ＣＨＣｌ3 ：ＭｅＯＨ＝５０：１）；
Ｒf ＝0.45（トルエン：アセトン＝１０：１）；Ｒf ＝
0.47（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）。
ー：Ｒf ＝0.48（ＣＨＣｌ3 ：ＭｅＯＨ＝５０：１）；
Ｒf ＝0.45（トルエン：アセトン＝１０：１）；Ｒf ＝
0.47（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）。
【００３４】（ｆ）溶媒に対する溶解性：ヘキサン、ク
ロロホルム、酢酸エチル、メタノール、トルエン、ジメ
チルスルホキシドに対し可溶性であり、水に対し不溶性
である。
ロロホルム、酢酸エチル、メタノール、トルエン、ジメ
チルスルホキシドに対し可溶性であり、水に対し不溶性
である。
【００３５】（ｇ）２，４−ジニトロフェニルヒドラジ
ン呈色反応：陽性。
ン呈色反応：陽性。
【００３６】Ｘ線結晶構造解析の結果（図１）をも考慮
すると、得られた物質は８−ホルミル−２，５，７−ト
リヒドロキシ−６−メチルフラバノンであることが判明
した。この化合物は、Ｊ．Ｃｈｏｐｉｎらが植物Unona
lawii の茎から見出だしたものの溶液中での推定構造
と同一であることが分った（Phytochemistry, 1978,Vo
l.17, pp.332-334）。
すると、得られた物質は８−ホルミル−２，５，７−ト
リヒドロキシ−６−メチルフラバノンであることが判明
した。この化合物は、Ｊ．Ｃｈｏｐｉｎらが植物Unona
lawii の茎から見出だしたものの溶液中での推定構造
と同一であることが分った（Phytochemistry, 1978,Vo
l.17, pp.332-334）。
【００３７】Ａ４３１細胞膜の調製 Ａ４３１細胞を底面積１７５cm2 のプラスチックシャー
レの中で５％仔牛血清（CS, Gibco Laboratories）を含
むＤＭＥＭ（Dulbecco′s modified Eagle′s mediu
m ）で３７℃で大量培養した。培地を捨て、ＰＢＳ溶液
（塩化ナトリウム２．０ｇ、塩化カリウム０．０５ｇ、
りん酸水素二ナトリウム（無水）０．２２９ｇ、りん酸
一カリウム０．０５ｇ／水２５０ml）適量で洗浄後ＰＢ
Ｓ溶液を１０ml加えて、増殖したＡ４３１細胞をラバー
ポリスマンで剥がし、−８０℃で保存した。
レの中で５％仔牛血清（CS, Gibco Laboratories）を含
むＤＭＥＭ（Dulbecco′s modified Eagle′s mediu
m ）で３７℃で大量培養した。培地を捨て、ＰＢＳ溶液
（塩化ナトリウム２．０ｇ、塩化カリウム０．０５ｇ、
りん酸水素二ナトリウム（無水）０．２２９ｇ、りん酸
一カリウム０．０５ｇ／水２５０ml）適量で洗浄後ＰＢ
Ｓ溶液を１０ml加えて、増殖したＡ４３１細胞をラバー
ポリスマンで剥がし、−８０℃で保存した。
【００３８】以下に示した手順は０℃で行った。上記で
得たＡ４３１細胞を含むＰＢＳ溶液を４５０×ｇで１０
分間遠心して沈殿した細胞を集めた。細胞の体積と等量
のハーベースティングソリューション（０．０５Ｍホウ
酸、０．１５Ｍ塩化ナトリウム、１ｍＭ塩化マグネシウ
ム、１ｍＭ塩化カルシウム、ｐＨ７．２）を加えよく懸
濁させ、エクストラクティングソリューション（０．０
２Ｍホウ酸、０．２ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ１０．２）１
００倍量中に滴下し分散させた。１０分間撹拌すること
により、細胞は、浸透圧で破裂し細胞膜は断片状にな
り、細胞質はゲル状になった。８倍量の０．５Ｍホウ酸
溶液（ｐＨ１０．２）を添加し５分間撹拌後、ナイロン
メッシュでゲル状の細胞質を除き４５０×ｇで１０分間
遠心して得た上澄みを12,000×ｇで３０分間遠心後、得
られた沈殿画分を３５％（ｗ／ｗ）ショ糖を含むＰＢＳ
溶液上にのせ、その上にＰＢＳ溶液をのせて24,000×ｇ
で１時間超遠心分離を行った。３５％ショ糖水溶液界面
に集まった細胞膜断片を集め、ＰＢＳ溶液を添加し 10
0,000×ｇで１０分間遠心分離を行い、得られた沈殿を
分注しＡ４３１細胞膜標品とした。
得たＡ４３１細胞を含むＰＢＳ溶液を４５０×ｇで１０
分間遠心して沈殿した細胞を集めた。細胞の体積と等量
のハーベースティングソリューション（０．０５Ｍホウ
酸、０．１５Ｍ塩化ナトリウム、１ｍＭ塩化マグネシウ
ム、１ｍＭ塩化カルシウム、ｐＨ７．２）を加えよく懸
濁させ、エクストラクティングソリューション（０．０
２Ｍホウ酸、０．２ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ１０．２）１
００倍量中に滴下し分散させた。１０分間撹拌すること
により、細胞は、浸透圧で破裂し細胞膜は断片状にな
り、細胞質はゲル状になった。８倍量の０．５Ｍホウ酸
溶液（ｐＨ１０．２）を添加し５分間撹拌後、ナイロン
メッシュでゲル状の細胞質を除き４５０×ｇで１０分間
遠心して得た上澄みを12,000×ｇで３０分間遠心後、得
られた沈殿画分を３５％（ｗ／ｗ）ショ糖を含むＰＢＳ
溶液上にのせ、その上にＰＢＳ溶液をのせて24,000×ｇ
で１時間超遠心分離を行った。３５％ショ糖水溶液界面
に集まった細胞膜断片を集め、ＰＢＳ溶液を添加し 10
0,000×ｇで１０分間遠心分離を行い、得られた沈殿を
分注しＡ４３１細胞膜標品とした。
【００３９】チロシンキナーゼ阻害活性の測定 ３．３mlのＨＥＰＥＳ緩衝液（ＨＥＰＥＳ ０．４８
ｇ、塩化マンガン １９．７mg、ＢＳＡ １２．５mg／
１００ml水 ｐＨ７．２）に、ＥＧＦ（濃度３．３μｇ
／ml）３００μl とヒストン（濃度１１０μｇ／ml）１
２μl を加えたものをＡバッファーとした。
ｇ、塩化マンガン １９．７mg、ＢＳＡ １２．５mg／
１００ml水 ｐＨ７．２）に、ＥＧＦ（濃度３．３μｇ
／ml）３００μl とヒストン（濃度１１０μｇ／ml）１
２μl を加えたものをＡバッファーとした。
【００４０】このＡバッファーをマイクロチューブに３
４μl とり、そこにジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）
に溶かし濃度を調整したサンプルを６μl 加えて、０℃
で１０分間プレインキュベートした。次に［γ−32Ｐ］
−ＡＴＰ（ＮＥＮ製；ＮＥＧ−002 adenosine ５′-tri
phosphate, tetra（triethylammonium） salt,［γ−32
Ｐ］−）１０μl を添加し３０分間０℃で反応させた。
４μl とり、そこにジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）
に溶かし濃度を調整したサンプルを６μl 加えて、０℃
で１０分間プレインキュベートした。次に［γ−32Ｐ］
−ＡＴＰ（ＮＥＮ製；ＮＥＧ−002 adenosine ５′-tri
phosphate, tetra（triethylammonium） salt,［γ−32
Ｐ］−）１０μl を添加し３０分間０℃で反応させた。
【００４１】そこから５０μl 取り出し、９６穴シャー
レに１０％ＴＣＡ溶液２００μl 入れた中に添加し反応
を停止させ１５分間冷蔵庫に静置した。
レに１０％ＴＣＡ溶液２００μl 入れた中に添加し反応
を停止させ１５分間冷蔵庫に静置した。
【００４２】それをセルハーベスターによりＴＣＡの不
溶画分を濾紙（Titertek Cat. No.78-115-05）に吸着さ
せ、液体シンチレーションカウンター（Beckman 社製；
ＬＳ−5000ＴＤ）でチェレンコフ効果により濾紙に吸着
した［γ−32Ｐ］−ＡＴＰにてリン酸化されたヒストン
の放射活性を測定した。
溶画分を濾紙（Titertek Cat. No.78-115-05）に吸着さ
せ、液体シンチレーションカウンター（Beckman 社製；
ＬＳ−5000ＴＤ）でチェレンコフ効果により濾紙に吸着
した［γ−32Ｐ］−ＡＴＰにてリン酸化されたヒストン
の放射活性を測定した。
【００４３】又、サンプル濃度０μｇ／mlとしたもの
（サンプルを加えず等容量のＤＭＳＯを加えた）をコン
トロールとし、サンプル濃度０μｇ／mlで反応時間０分
間としたもの（サンプルを加えず等容量のＤＭＳＯを加
え、反応を停止させる直前に［γ−32Ｐ］−ＡＴＰ １
０μl を加えた）をブランクとした。
（サンプルを加えず等容量のＤＭＳＯを加えた）をコン
トロールとし、サンプル濃度０μｇ／mlで反応時間０分
間としたもの（サンプルを加えず等容量のＤＭＳＯを加
え、反応を停止させる直前に［γ−32Ｐ］−ＡＴＰ １
０μl を加えた）をブランクとした。
【００４４】阻害率を次のように算出した。まずＴＣＡ
不溶性画分の放射活性をＳ（サンプル）、そして検体を
含まない放射活性をＣ（コントロール）、また検体を含
まずかつ反応時間を０分間にしたものの測定値をＢ（ブ
ランク）としてチロシンキナーゼ阻害率を計算し、チロ
シンキナーゼ活性を５０％阻害するために必要な検体の
濃度をＩＣ50値とした。
不溶性画分の放射活性をＳ（サンプル）、そして検体を
含まない放射活性をＣ（コントロール）、また検体を含
まずかつ反応時間を０分間にしたものの測定値をＢ（ブ
ランク）としてチロシンキナーゼ阻害率を計算し、チロ
シンキナーゼ活性を５０％阻害するために必要な検体の
濃度をＩＣ50値とした。
【００４５】阻害率（％）＝［１−｛（Ｓ−Ｂ）÷（Ｃ
−Ｂ）｝］×１００ 本発明の阻害物質では、濃度依存的にチロシンキナーゼ
阻害率が向上し、濃度２０μｇ／mlのとき阻害率９０％
を示した。またＩＣ50値は０．８５μｇ／ml（２．７０
μＭ）であった。
−Ｂ）｝］×１００ 本発明の阻害物質では、濃度依存的にチロシンキナーゼ
阻害率が向上し、濃度２０μｇ／mlのとき阻害率９０％
を示した。またＩＣ50値は０．８５μｇ／ml（２．７０
μＭ）であった。
【００４６】
【発明の効果】これまで説明してきたように、植物成分
である８−ホルミル−２，５，７−トリヒドロキシ−６
−メチルフラバノンがチロシンキナーゼ阻害活性をもつ
ことが判明したことにより、この物質が抗腫瘍剤として
癌の化学療法に有効に使用し得ることが分る。
である８−ホルミル−２，５，７−トリヒドロキシ−６
−メチルフラバノンがチロシンキナーゼ阻害活性をもつ
ことが判明したことにより、この物質が抗腫瘍剤として
癌の化学療法に有効に使用し得ることが分る。
【図１】Ｘ線結晶構造解析による８−ホルミル−２，
５，７−トリヒドロキシ−６−メチルフラバノンの立体
構造を示す図である。
５，７−トリヒドロキシ−６−メチルフラバノンの立体
構造を示す図である。
フロントページの続き (72)発明者 原 智子 埼玉県入間郡大井町西鶴ケ岡一丁目３番１ 号 東燃株式会社総合研究所内
Claims (2)
- 【請求項１】 有効成分としての８−ホルミル−２，
５，７−トリヒドロキシ−６−メチルフラバノンおよび
医薬上許容可能な担体を含有する抗腫瘍剤。 - 【請求項２】 ８−ホルミル−２，５，７−トリヒドロ
キシ−６−メチルフラバノンの製造方法であって、熱帯
植物デスモス・チネンシスから８−ホルミル−２，５，
７−トリヒドロキシ−６−メチルフラバノンを溶媒抽出
し、次いで精製することを包含する方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4191740A JPH0665075A (ja) | 1992-06-25 | 1992-06-25 | 抗腫瘍剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4191740A JPH0665075A (ja) | 1992-06-25 | 1992-06-25 | 抗腫瘍剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0665075A true JPH0665075A (ja) | 1994-03-08 |
Family
ID=16279715
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4191740A Pending JPH0665075A (ja) | 1992-06-25 | 1992-06-25 | 抗腫瘍剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0665075A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008291001A (ja) * | 2007-05-28 | 2008-12-04 | Maruzen Pharmaceut Co Ltd | 皮膚化粧料及び美容用飲食品 |
| US7819468B2 (en) | 2007-09-13 | 2010-10-26 | Honda Motor Co., Ltd. | Seat for vehicle |
-
1992
- 1992-06-25 JP JP4191740A patent/JPH0665075A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008291001A (ja) * | 2007-05-28 | 2008-12-04 | Maruzen Pharmaceut Co Ltd | 皮膚化粧料及び美容用飲食品 |
| US7819468B2 (en) | 2007-09-13 | 2010-10-26 | Honda Motor Co., Ltd. | Seat for vehicle |
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