JPH01100192A - 新規オキセタノシン類およびその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は免疫抑制作用および抗ウィルス作用などの生理
活性を示す新規オキセタノシン類に関するものである。

〔従来の技術〕

従来免疫抑制剤として、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗
生物質、ステロイド剤、葉酸拮抗剤、植物アルカロイド
などが知られている。

またオキセタノシン自体は・ジャーナル・オブ・アンチ
バイオティックス（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｕｔｉｂ
ｉｏｔｉｃｓ　）３９巻、１１号、１６２３−２５（１
９８６）および特開昭６１−２９３９９２号に開示され
ている。

〔本発明が解決しようとする問題点〕

従来の免疫抑制剤のうち、ステロイド剤は消炎作用リン
パ球溶解作用等により免疫抑制を示すといわれ、作用が
多岐にわたるため、様々な副作用を伴うことは周知であ
る。その他の免疫抑制剤は、いわゆる細胞毒性に属すこ
とも周知である。リンパ球等の免疫担当細胞にのみ選択
的に作用し、免疫抑制作用以外の副作用が可及的に軽微
な薬剤が望まれている。

〔問題を解決するための手段〕

そこで、本発明者らは種々の研究の結果、一般式（１１ で示される式を意味する〕 で示される新規オキセタノシン類およびその薬理学的に
許容される塩が免疫抑制作用および抗ウィルス作用を有
することを見い出し、本発明を完成した。

本発明の一般式（１）の化合物を例示すると、次の通り
である。

化合物略号　　　一般式（１）のＲ（塩基の名称）素学
的手法を用いてその塩基部を変換することにより得るこ
とができる。

また下記一般式（Ｉｌｌ ル基または置換基を有してもよい低級アルキル基を示す
。但し、、Ｙが２．６−ジクロルプリンのとき、Ｒ＋は
水素以外の基を示す。） で示される新規オキセタノシン類は化合物２−ａｍｉｎ
ｏ　Ｏ　Ｘ　Ｔ　−　ＡおよびＯＸＴ−Ｇの合成中間体
として有用なものである。

これら一般式（ＩＩ）の化合物を例示すると次の通りで
ある。

■ 化合物番号　　　　Ｒ＋　　　　　　　　Ｙ本発明の一
般式（１１及び（ＩＩ）の化合物は酸と塩を形成する。

塩を形成するための酸としては、−般式の（１）の化合
物の場合、例えば薬理学上許容される酸であればよく、
例えば、塩酸、硫酸、リン酸などが好ましい。一般式（
Ｉｔ）の化合物は薬理学上許容される酸との塩の他、事
情に応じて各種の酸との塩の形で使用することも可能で
ある。

次に化合物０’ＸＴ−Ｘ、　２−ａｍｉｎｏ　０ＸＴ−
Ａおよび０ＸＴ−Ｇの製造法について簡単に説明する。

化合物０ＸＴ−Ｘの製造方法： 上記式でアデニン塩基を有するオキセタノシｙ　（Ｑｘ
ｅｔａｎｏｃｉｎ　）（１）に０ＸＴ−Ａを酸化して０
ＸＴ−Ｘにする能力を有する酵素、例えば微生物培養物
およびその処理物または動物組織六転採取物（例えばラ
ット肝臓のホモジネートもしくはそれらから精製単離さ
れた酵素を作用させると、上記式で化合物（２）を経由
して、キサンチン塩基を有する新規化合物０ＸＴ−Ｘを
得ることができる。

酵素は精製した酵素である必要はなく、微生物起源の酵
素を使用する場合には、上記酵素を生産する能力を有す
る微生物を栄養培地で培養して得られる微生物培養物（
菌体）をそのまま使用することができる。その他、微生
物のアセトン乾燥菌体、菌体の磨砕物、超音波処理物、
界面活性剤、トルエンあるいはリゾチーム等での処理物
から採取した粗酵素標品および天然あるいは合成ポリマ
ーに固定した菌体を同様に使用することができる。また
化合物（２）を精製単離する必要はなく、化合物（１）
から化合物０ＸＴ−Ｘまで連続して反応させることがで
きる。

具体的には、例えば下記に示す微生物が使用される。

表１ 本発萌において化合物０ＸＴ−Ｘの製造をより具体的に
説明すると、表１に示した微生物を栄養培地にて４０時
間培養した後、培養物をそのまま使用してもよいが、好
ましくは遠心分離により生菌体を集めＭ／２（ｌン酸緩
衝液（ｐＨ７，５）にて懸濁液を調整し、化合物（１）
と混ぜ２０℃〜５０℃、１０〜７０時間反応させること
により反応液中に目的とする化合物０ＸＴ−Ｘが生成さ
れる。反応液より生成物を採取するのは公知の方法に従
って行えばよく遠心分離等により菌体を除去し、水や有
機溶媒に対する溶解度の差を利用する方法や、活性炭や
吸着樹脂およびイオン交換樹脂による吸脱着法など適当
に組み合せて用いることができる。

例えば、化合物（１）を、表１に記載の洗浄菌体の作用
により、化合物０ＸＴ−Ｘとした後、遠心分離操作によ
り不活性物質あるいは使用済み菌体を除去する。

得られた炉液を、活性炭に通塔し、生成物を吸着させ、
水洗後、・含水メタノールにて溶出し、濃縮・乾固して
得られた粗生成物をカチオン交換樹脂に吸着させ、水に
て溶出し、濃縮乾固す、　ることにより無色粉末の化合
物０ＸＴ−Ｘを得る。

化合物２−　ａｍｉｎｏ　０ＸＴ−Ａの製造方法（第１
）２−ａｍｉｎｏＯＸＴ−Ａ （式中、Ｒ＋及びＲ２は保護基を示す。）２．６−ジア
ミツブリン塩基を有する化合物２−ａｍｉｎｏ　０ＸＴ
−Ａの製造は化合物０ＸＴ−Ｘの３′−ＣＩ−１２０１
−１及び４’　−ＣＨ２０１−１の水酸基を何らかの保
護基で保護しておき、更に化合物（３）の塩基部の２位
及び６位のカルボニル基を保護しておき、さらにアンモ
ノリシスの工程を経て行なわれる。

式（３）の水酸基の保護基（式中Ｒ，）としては核酸化
学あるいは糖化学の分野において使用される公知の水酸
基の保護基が用いられる。３’　−ＣＨ２０Ｈ及び４’
　−ＣＨ２０Ｈの水酸基の保護基の例としては、ホルミ
ルまたは置換基を有してもよい低級アルキルカルボニル
（置換基としてはハロゲンｉ子、低級アルコキシ、ベン
ゾイルなど）例えばアセチル、クロロアセチル、トリク
ロロアセチル、トリフロロアセチル、メトキシアセチル
、ヒバロイル、αまたはβ−ベンゾイルプロピオニル、
フェノキシアセチル、トリチルオキシアセチルなど、ま
たはベンゾイルなどのアシル基、置換基を有してもよい
低級アルキル基例えばｔ−ブチル基などの非置換低級ア
ルキル、トリチルまたはモノトキシトリチル、ジメトキ
シトリチル、トリメトキシトリチルなどの低級アルコキ
シトリチルなどの置換又は非置換トリチル基などの置換
低級アルキルが挙げられる。

上記の保護基を導入するには、公知の方法により行なう
ことができるが、後に保護基を脱離する際に効率よ（脱
離できる様な保護基を選択するのが好ましい。

式（４）でカルボニル基の保護基（式中Ｒ２）としては
、核酸化学の分野において使用される公知の保護基が用
いられる。２位及び６位のカルボニル基の保護基の例と
しては、ｐ−トルエンスルホニル、２，４．６−トリイ
ソプロビルベンゼンスルホニル基などが挙げられる。上
記の保護基の導入には公知の方法によって行なうことが
できるが、後に２位及び６位にアミン基を導入する際に
置換されやすい保護基を選択するのが好ましい。

化合物２−　ａｍｉｎｏ　０ＸＴ−Ａを製造するには化
合物（４）のアンモノリンスを行なえば良く、アンモノ
リシスは公知の方法により行なうことができる。

化合物２−　ａｍｉｎｏ　０ＸＴ−Ａ製造方法（第２）
（力　　　　　　　　　　　（８） （９）　　　　　　　　２−ａｍｉｎｏＯＸＴ−Ａ化合
物（１）をＮ−オキシド化してＮ〜オキシド体（５）を
得るが、このＮ−オキシド化は適当な酸化剤で酸化する
ことにより行なわれる。上記酸化剤としてはメタクロ口
過−安息香酸、過酢酸などの有機過酸、過酸化水素など
が挙げられ、上記の反応は通常、適当な溶媒中で行なわ
れ、反応溶媒としては含′水してもよい酢酸、アセトン
ジオキサンなどの有機溶媒が挙げられる。反応は通常室
温で進行し、反応液からＮ−オキシド体（５）を得るに
は、反応溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラ
フィーにより精製することができる。

次知、Ｎ−オキシド体（５）を亜硝酸ナトリウムで処理
して化合物（６）を得る。

上記の反応は通常水中にて、室温で進行する。

反応液から化合物（６）を得るには、反応液を濃縮後、
カチオン交換樹脂を用いたカラムクロマトグラフィーに
より精製することができる。式（８）の水酸基の保護基
０式中Ｒ１）としては、アセチル、クロロアセチル、ピ
バロイル、ベンゾイルなどのアシル基、トリチル、モノ
メトキシトリチルなどトリチル基類が挙げられる。上記
の保護基を導入するには、公知の方法により行なうこと
ができるが、後に保護基を脱離する際に効率よく脱離で
きるような保護基を選択するのが好ましい。上記の反応
は通常室温にて進行し、反応液から化合物（７）を得る
には溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィ
ーにより精製することができる。

次に、化合物（７）を含水メタノールに溶解し２０〜７
０℃で数日間撹拌すると化合物（８）が無色粉末として
析出する。これを濾取し、化合物（８）を得ることがで
きる。

このようにして得られた化合物（８）は、適当な有機塩
基存在下、新たに蒸留されたオキシ塩化りんによりクロ
ル化される。上記、有機塩基としては、トリエチルアミ
ン、ピリジン、２−ピコリンなどが挙げられる。

反応は通常、加熱下にて進行する。反応液から化合物（
９）を得るには、反応液を減圧濃縮し、残渣を適当な有
機溶媒に溶がし、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と分配
する。有機溶媒としてはクロロホルム、酢酸エチルなど
が挙げられる。

有機層を飽和食塩水にて洗った後、有機層を濃縮し、シ
リカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製すること
ができる。

次に、化合物（９）をアミノ化し、化合物２−ａｍｉｎ
ｏ　０ＸＴ−Ａを得るには、化合物（９）を適当な無水
有機溶媒に溶解し、液体アンモニアを加えることにより
行なわれる。

上記有機溶媒としては、メタノール、エタノール、アセ
トニトリルなどが挙げらｎ、上記の反応温度は通常、加
熱下にて進行する。反応液から化合物２−　ａｍｉｎｏ
　０ＸＴ−Ａを得るには、溶媒を留去し吸着樹脂を用い
たカラムクロマトグラフィーにより精製することができ
る。

化合物０ＸＴ−Ｇ製造方法 化合物２−　ａｍｒｎｏ　ＯＸ　Ｔ−Ａ−＋化合物０Ｘ
Ｔ−Ｇ化合物０ＸＴ−Ｇを製造するには化合物２−ａｍ
ｉｎｏ　０ＸＴ−Ａに°アデノシンデアミナーゼアルい
は同様な能力を有する微生物培養物および処理物または
動物組織からの採取物を作用させ化合物０ＸＴ−Ｇを得
ることができる。アデノシンデアミナーゼは市販品でよ
（、具体的には、シダマ社（Ｓｉｇｍａ　）　Ｅ　Ｃ，
３，５，４，４がある。

また同様の能力を有することが知られている動物組織よ
りの採取物あるいは微生物培養物およびそれより採取し
たアデノシンデアミナーゼ等その起源を問わず使用する
ことができる。

酵素は精製した酵素である必要はなく、微生物起源の酵
素を使用する場合にはアデノシンデアミナーゼを生産す
る能力を有する微生物を栄養培地で培養して得られる微
生物培養物（菌体）をそのまま使用することができる。

具体的には例えば表２に示す微生物が使用される。

表２ 本発明において化合物０ＸＴ−Ｇを製造するには化合物
２−　ａｍｉｎｏ　０ＸＴ−Ａとアデノシンデアミネー
スを１／１０Ｍ燐酸緩衝溶液（ｐＨ７，０）中２５℃で
数時間反応させることにより反応液中に目的とする化合
物０ＸＴ−Ｇが生成される。また培養微生物を用いる場
合は、表１に示した微生物を栄養培地にて２４時間培養
した後、培養物をそのまま使用してもよいが好ましくは
遠心分離により生菌体な集め、Ｍ／２０！Ｊン酸緩衝液
（ｐＨ７，０）Ｋて懸濁液を調製し、化合物２−ａｍｉ
ｎｏ　０ＸＴ−Ａと混ぜ、２０℃〜７０℃、最高２０時
間反応させることにより、反応液中に目的とする化合物
０ＸＴ−Ｇが生成される。反応液より生成物を採取する
には公知の方法に従って行えばよく、遠心分離等によっ
て不活性物を除去し、水や有機溶媒に対する溶解度の差
を利用する方法や、活性炭や吸着樹脂およびイオン交換
樹脂による吸脱着法など適当に組み合せて用いることが
できる。

例えば、化合物２−　ａｍｉｎｏＯＸＴ−Ａを上記酵素
あるいは表１記載の洗浄菌体と反応させた後、遠心分離
操作により不活性物質あるいは使用済み菌体を除去する
。得られた炉液を多孔性樹脂に通塔し生成物を吸着させ
、水洗後、含水メタノールにて溶出し、濃縮、乾固する
ことにより無色粉末の化合物０ＸＴ−Ｇが得られる。

尚必要に応じてセファデックス類の使用も可能ス剤なと
の医薬として用いる場合は、単独または賦形剤あるいは
担体と混合して注射剤、経口剤、または坐剤などとして
投与される。賦形剤及び担体としては薬剤学的に許容さ
れるものが選ばれ、その種類及び組成は投与経路や投与
方法によって決まる。

製剤中における本化合物の含量は製剤により種々異なる
が、通常０．１〜１００重量％好ましくは１〜９０重量
％である。例えば、注射液の場合には、通常０．１〜５
重量％の本化合物を含むようにすることがよい。経口投
与する場合には前記固体担体もしくは液状担体とともに
錠剤、カプセル剤、粉剤、顆粒剤、液剤、ドライシロッ
プ剤等の形態で用いられる。カプセル、錠剤、顆粒、粉
剤の場合は一般に本化合物の含量は約３〜１００ｉ量％
好ましくは５〜９０重量％であり、残部は担体である。

投与量は、患者の年令、体重、症状、治療目的等により
決定されるが、治療量は一般に非経口投与で１〜３００
１ｎｇ７／′ｋｇ・日、経口投与で５〜ｓ　ＯＯｍｇ／
ｋｇ−日である。

本化合物は低毒性であり、またいずれの化合物も連続投
与による毒性の蓄積性が小さいことが特徴的である。

本発明の一般式（１）の化合物を用いて製剤とするとき
は、例えば一般式（１）の化合物の塩酸塩３０重量部に
対し精製水を加え全量を２０００部としてこれを溶解後
ミリポアフィルターＧＳタイプを用いて除菌濾過する。

この炉液２ｇを１０ｍ１のバイアル瓶にとり凍結乾燥１
−１１バイアルに一般式（１）の化合物の塩酸塩３０ｎ
ｖを含む凍結乾燥注射剤を得た。

（作　用） 化合物０ＸＴ−Ｘ、　２−　ａｍｉｎｏＯＸＴ−Ａおよ
び０ＸＴ−ＧはＷａｉｔｈｅ等による方法（Ｗａｉｔｈ
ｅ　ｅｔａｌ、。

１１ａｎｄｂｏｏｋ　ｏｆ　ＥＸｐｃｒｉｍｅｎｔａｌ
　［ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ頁２６．１゜１９７８）に準じ
、リンパ球幼若化反応に対する作用を調べたところ化合
物０ＸＴ−Ｘ　、　２−　ａｍｉｎ。

０ＸＴ−Ａおよび０ＸＴ−ＧはＣｏｎ　Ａ（ニア　ンカ
ナバリンＡ）で刺激を受けたＴリンパ球の幼若化と、Ｌ
ＰＳ（！Ｊボポリサツカライド）で刺激を受けたＢリン
パ球の幼若化反応を著しく抑制した。

本化合物０ＸＴ−Ｘ　、　２−　ａｍｉｎｏ　０ＸＴ−
Ａおよび０ＸＴ−ＧがＢ　ＩＪンパ球及びＴ　ＩＪンパ
球の機能を抑制することを示す。この抑制作用は、それ
ぞれ体液性免疫及び細胞性免疫の抑制を意味するので、
その異常先進が原因と考えられる臓器移植あるいは皮膚
移植における拒絶反応の抑制、各種の自己免疫が主たる
原因と考えられる自己免疫病例えば多発性硬化症、溶血
性貧血、■型糖尿病、重症筋無力症、橋本甲状腺炎、ペ
ーチェット症候群リウマチの治療またはアレルギー疾患
の治療にも本化合物を有効成分とする免疫抑制剤は極め
て有用である。本化合物は従来の免疫抑制剤と異なる作
用機作が考えられるので細胞毒性物質に属する抑制剤に
共通に認められる造血器障害等、またステロイドホルモ
ンで認められる胃潰瘍、白内障等の重篤な副作用はない
と考えられ、副作用の面でも大変すぐれている。

次に本化合物の薬理作用を試験例により具体的に説明す
る。

試験例１゜ Ｃｏｎ　ＡによるＴ　ＩＪンバ球幼若化反応の抑制Ｂ　
Ａ　Ｌ　Ｂ　／′■マウスの肺細胞をマイクロプレート
に２×１０５個７０．２ｍｌ／ウェルになるように分注
し、対照群以外の各ウェルに各濃度の被験化合物を添加
し、さらにすべてのウェルにＣｏｎ　Ａを５μｇ／ｍｌ
になるよう加えたのち、この細胞浮遊液を３７℃で５％
の炭酸ガス培養器で７２時間培養した。リンパ球幼若化
反応は、培養終了の６時間前に３１−１−チミジンを１
μＣＩ　／ウェル添加し、培養細胞への取込み量を液体
シンチレーションカウンターで測定した。Ｃｏｎ　Ａの
みを添加したときの取込みカウントをＡｄｐｍ、　Ｃｏ
ｎ　Ａ及び薬物を加えたときのカウントを１３ｄｐｍと
して（１−１３ｄｐｍ　／　Ａｄｐｍ　）　Ｘ　Ｉ　０
０の数値を、幼若化に対する各薬物の抑制率とした。そ
の結果を表２に示す。

←　　　　　　　　　　　　　　＾ 上表から明らかなように本化合物はＴリンパ球幼若化反
応を強く抑制した。

試験例２゜ ＬＰＳ（リポポリサッカライド）による８９７７球幼若
化反応の抑制 試験例２の方法に準じ（ただし、Ｃｏｎ　Ａの代りに、
大腸菌のＬＰＳを１００μｇ／ｍｌになるよう加えた）
、幼若化Ｂ細胞に取りこまれた３Ｈ−チミジン／量を測
定した。被験化合物による抑制率を同様に求めた。

表３に示すように、本化合物はＬＰＳによる８９７７球
幼若化を著しく抑制した。

表４ 化合物０ＸＴ−Ｘ　、　２−　ａｍｉｎｏ　０ＸＴ−Ａ
および０ＸＴ−ＧのＬＰＳリンパ球幼若化抑制対照（薬
剤無添加）０％ また本発明化合物はウィルスに対し活性を示し、抗ウィ
ルス剤として有用なもので、次の各種のウィルスに対し
、抗ウィルス活性が期待される。

ＤＮＡウィルス ポックスウィルス、ヘルペスウィルス、アデノウィルス
、パポバウイルス、ヘパトドウィルス、パルボウイルス ＲＮＡウィルス ラブドウィルス、フィロウィルス、パラミクソウィルス
、オルソミクンウイルス、アレナウイルス、レトロウィ
ルス、コロナウィルス、プニャウイルス、トガウィルス
、ラブドウィルス、カリンウイルス、ピコルナウィルス
、レオウィルス そして、各種のウィルス性疾患、例えばヘルペス、エイ
ズなどの治療剤として期待される。

次に抗ウィルス活性につき試験例により具体的に示す。

試験例３゜ （ａ）　　抗ヘルペスウイルス活性 ９６　穴（Ｗｅｌｌ）のマイクロプレートを使用し、Ｖ
ｅｒｏ細胞の一重層上に本発明化合物の一定量を含む培
地およびヘルペス−ｆｌ型（１−ＩＳＶ−■）５〜１０
　ＴＣＩ　Ｄｓｏを加え、３７℃、５％（ｖ／ｖ　’）
炭酸ガスフ卵器中にて９６〜１２０時間培養したのち、
顕微鏡下でＶｅｒｏ細胞に対するＩＳＶ−１１のＣＰＥ
（ｃｙｔｏｐａｔｈｉｃ　ｅｆｆｅｃｔ　）の観察によ
り抗つィ／Ｉ／ス活性を測定した。抗ウィルス活性はＣ
ＰＥの５０％阻害濃度（μｇ　／　ｗｅｌｌ　）で表５
に示す。

表５　抗ウィルス作用（ＩＳＶ−１ｔ）ＯＸＴ−Ｘ　　
　　　　　１０７．５ ０　Ｘ　Ｔ　−０９’、　７ ２−　ａｒｎｉｎｏ　０ＸＴ−Ａ　　　　　　Ｉ　７．
６また本化合物はｌ−ｌ５Ｖ−１１のチミジンキナーセ
。

感受性株ばかりでなく耐性株に対しても優れた抗ウィル
ス作用を示す。

（ｂ）　　抗ＨＩＶ　（Ｉ−１ｌ−１ｕ　工ｍｍｕｎｏ
ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　Ｖｉｒｕｓ　）活性２４穴トレ
ーにＭＴ−４細胞約１０万個／ｍ１入れ、さらに本発明
化合物の一定量を含む溶液１００μｔを加え、３７℃、
５％（ｖ／ｖ　）炭酸ガスフ卵器中にて５時間培養した
後、ＨＩＶＩＯ”〜１０４感染単位を加え、４日間培養
後、培養液の一部をスライドグラスに塗抹し、アセトン
固定をした後、間接螢光抗体法にてウィルス抗原の発現
をみた。

なお、螢光抗体法の一次抗体にはエイズ患者の血清、二
次抗体にはＦＩＴＣをラベルした抗ヒトＩｇＧを用いた
。

尚、本発明化合物のＭＴ−４細胞に対する細胞変性は、
ウィルスを加えずに行い、顕微鏡下で観察した。

本発明化合物のＩ−Ｉ　Ｉ　Ｖに対する活性■なお本発
明化合物はＤＭＳＯに溶解して使用した。ＤＭＳＯのみ
でのウィルス抗原の発現は８０〜９０％であった。

以上から明らかなように本発明化合物は各種ウィルスに
対して優れた抗ウィルス活性を示しエイズ、ヘルペスな
どのウィルス性疾患の治療剤として期待さるものである
。

次に本発明化合物の製造法を実施例により具体的に示す
。

実施例１．〔化合物０ＸＴ−Ｘの製造法〕酵母粉末エキ
ス１％、デキストロース１％を含むｐ）（７，０の培地
１００ｍ１を５００　ｍｌ容三角フラスコに分注したの
ち、１２０℃、２０分間オートクレーブ滅菌した。

このフラスコにノカルディアインテルフォルマ（Ｍ４　
ｃ５　）　（Ｎｏｃａｒｄｉａ　ｉｎｔｅｒｆｏｒｍａ
　Ｍ４Ｃ５）を１白金耳接種し、２８０℃、４８時間好
気的に振盪培養を行なった。これとは別に同一組成培地
１００ｍ１を５００　ｍｌ容三角フラスコに分注したの
ち、１２０℃、２０分間滅菌したフラスコに上記培養液
２　ｍｌを移植し、２８０℃、４０時間振盪培養した。

次に、この培養液１１．７Ａを６５００回転／′分にて
１２分間遠心分離し、生菌体を集めＭ／２０リン酸緩衝
１　（ｐ）１７．５　）　５００ｍｌにて２回洗浄した
のち、同緩衝液５．４２にて懸濁した。この懸濁液を１
００ｍ１づつ５００ｍ１各三角フラスコ６０本に分注し
、これに各々化合物（１）２■／′ｍｌのＭ／２０１Ｊ
ン酸緩衝溶ｉ　１０　ｍｌを刀口え３７℃にて１８時間
振盪したのち、上記条件にて遠心分離にて除菌し、得ら
れた上清液を活性炭末（和光紬薬に、に、クロマト用）
３００ｍｌを充填したカラムに通塔し、生成物を吸着さ
せ、水洗後５０％含水メタノール２．１２にて溶出し、
濃縮乾固することにより化合物 ０ＸＴ−Ｘの黄色粉末１．４ｇを得た。この粗粉末を５
０ｍ１の水に溶かし、Ｄｏｗｅ　Ｘ■５０ＷＸ４（Ｈ型
、５０〜１００メツシユ）　９０　ｍｌを充填したカラ
ムに付し、吸着させ、水１．５．６にて溶出し濃縮、乾
固することにより無色粉末状の化合物０ＸＴ−Ｘ　１．
０２　ｇ　（収率７９．６％）を得た。

ＦＤ−ＭＳ：　　２６９（Ｍ＋Ｈ）” ｐＨ８，０ ＵＶ；λ　　　（ｌｏｇ　り　２５０．５ｕｍ（４，０
１）。

ａＸ ２７６．５ｕｍ（３，９５） ＮＭＲ（４００ＭＨｚ　、　Ｄ２０　）δｐｐｍ；　３
．６７〜３．９４　（５Ｈ。

７、８４　（Ｌ　Ｈ，ｓ、　８−Ｉ−１）本実施例に準
じて下記の微生物を用いても同様に０ＸＴ−Ｘを得るこ
とができる。

実施例２．〔化合物（３１（Ｒ＋　−−Ｃ０ＣＨ５）の
製造〕アセトニトリル５０　ｍｌに化合物０ＸＴ−Ｘｌ
、０２ｇを懸濁させ、トリエチルアミン１．０６　ｍｌ
、４−ジメチルアミノピリジン１１．６１１１ｇ、無水
酢酸０、７２　ｍｌの順に加え、室温で４時間撹拌した
。

反応液を減圧濃縮後、クロロホルム−メタノール（９：
１）５ｍｌＫ溶かし、シリカゲル（メルク社製、Ａｒｔ
７７３４　）　４０　ｇのカラムに付し、りｏｏホ／Ｌ
ｚ　Ａ　−メｐノール（９：　１　）５００ｍｌ、クロ
ロホルム−メタノール（８５：１５）８００ｍｌの順で
溶出した。シリカゲルＴＬＣ（メルク社製、Ａｒｔ５７
１５） （展開溶媒；クロロホルム−メタノール（３：１））で
Ｒｆ　Ｏ，２付近のフラクションを集め減圧濃縮、乾固
して化合物（３１１，２１ｇを得た。（収率９０％） 十 ＦＤ−ＭＳ：　　３５２（Ｍ） ＮＭＲ（６０ＭＨｚ、ＣＤａＯＤ）δｐｐ”　＊　２．
０８　（３１−１，ｓ。

−ＣＨ２０ＣＣｌ４３）、　　２．１７　（３Ｈ，Ｓ、
　−ＣＩ−１２０（４Ｈ，ｍ、　３’−ＣＨ２−０−Ｃ
−ＣＨ３，、４’−ＣＨ２０−６，３４（ＩＨ，ｄ、　
　２’−Ｈ）、　８．１０　（ＩＨ，ｓ、　　８−Ｉ−
１） 実施例３．〔化合物（４）　Ｃ，Ｒ１＝　　ＣＯＣＨ３
−Ｒ２＝　　Ｓｏ□−化合物（３）　１．３４　ｇを塩
化メチレン４５ｍ１に溶解し、トリエチルアミン４．２
４ｍ１，４−ジメチルアミノピリジン２３．２■、２，
４．６−）リイソプロビルベンゼンスルホニルクロリド
４．６１ｇの順に加え、室温で３時間撹拌した。

反応液を減圧濃縮、乾固後クロロホルム１５ｍ１に溶解
し、シリカゲル１２０ｇのカラムに付しクロロホルムで
溶出した。シリカゲルＴＬＣ（メルク社製、Ａｒｔ　５
７１５　） 〔展開溶媒：エーテル〕でＲｆＯ，４１付近のフラクシ
ョンを集め減圧濃縮、乾固（−１化合物（４）の粉末２
．６５ｇを得た。（収率７８．７％）ＦＡＢ−ＭＳ　　
；　　　　８　８　５　　（Ｍ＋Ｈ）”ＮＭＲ（６０Ｍ
）１２．　ＣＤＣｌ５）δｐｐｍ　：　１．１４〜１．
３２４．６４〜４．８６　（ＩＩ−］、　ｍ、　４’−
Ｈ）、　６．３３　（ｌｌ−１゜ｄ、　２’−Ｉ−１）
、　７．１８　（４ＩＬ　ｍ）、　８．４１　（１１１
゜５．８−Ｈ） 実施例４．〔化合物２−　ａｍｉｎｏ　０ＸＴ−Ａ　（
Ｄ製造（第１）〕実施例３で得た化合物（４１２，６５
ｇを無水エタノール１６ｍｔに溶解し、これに液体アン
モニア約５９ｍ１を加え、封管中にて１０５℃で５７時
間撹拌した。

アンモニアを除去後、水１００ｍ１を加え不溶物を除去
した後、ＭＣＩ（ｆｌ）ＧＥＬ　ＣＨＰ　−２０Ｐ　３
００ｍｌに吸着させ、水洗後、水−５０％含水メタノー
ル各１２００ｍ１よりなる直線濃度勾配法にて溶出した
。シリカゲルＴＬＣ（メルク社製、Ａｒｔ〔展開溶媒；
クロロホルム−メタノール（２：１））でＲｆｏ、４４
付近のフラクションを集め、減圧濃縮、乾固し、化合物
２−　ａｍｉｎｏ　ＯＸ　Ｔ−Ａの粉末４４５ｍｇを得
た。（収率５５，８％）ＦＤ−ＭＳ：　　２６６　（Ｍ
　） ”１２０（Ｉｏｇｇ）　　２５６ｎｍ（３，９６）、　
２７８ｎｍＵＶ・λｍａｘ （３，９５） ＮＭＲ（４００Ｍｌ−１ｚ　、　Ｄ２０　）δｐｐｍ　
：　３．６８〜３．９１　（５Ｈ。

ｍ）、　４．６８　（ｌｌ−１，ｍ）、　６．２５　（
ＩＨ，ｄ　）。

８．１３　（ＩＨ，Ｓ　”） 実施例５．　　Ｃ化合物’２−　ａｍｉｎｏ　０ＸＴ−
Ａの製造（第２）〕（イ）　〔化合物（５）の製造〕 化合物（１１８０８■及びｍ−クロロ過安息香酸７４８
ｍｇを水１３ｍ１−ジオキサ７６０ｍ１の混液に溶解し
、暗室中室温で１８時間撹拌した。反□　芯液を減圧濃
縮、乾固し、残渣をシリカゲル６ｇにまぶし、これを同
シリカゲル４５ｇのカラムに付し、クロロホルム−メタ
ノール（１０：ｌ）２００ｍｌ、クロロホルム−メタノ
ール（５：１）２００ｍｌ、クロロホルム−メタノール
（３：　１　）５００ｍｌの順で溶出した。シリカゲル
ＴＬＣＣ展開溶媒；クロロホルム−メタノール（２：　
１　））で１１４＝０．１８付近のフラクションを集め
減圧濃縮、乾固し、化合物（５１７２１■を得た。（収
率８３．９％） ＦＡＢ−ＭＳ；　　２６８（Ｍ＋ＩＮ”Ｉ］２０ ＵＶ；　λｍａｘ２３３．２６２．２９５ｎｍＮＭＲ（
６０ＭＨｚ　、　Ｄ２０　）δｐｐｍ　；　　３．９９
〜４．３０　（５１−１゜ｍ）、　４．７０（１１−１
，ｍ）、　６．７１　（ＩＩ−１，ｄ）。

８．７３（ＩＨ，Ｓ）、８．８７（Ｈｌ、Ｓ）（ロ）　
〔化合物（６）の製造〕 化合物（５１１１０ｍｇを水１．６　ｍｌ−酢酸０．６
　ｍｌ　）混液に溶解し、これに亜硝酸ナトリウム２７
６■を加え、室温にて３日間撹拌した。

■ 反応液を減圧濃縮後、濃縮液をＤｏｗｅｘ　５　ｏｗｘ
　８（Ｉ−１型）４ｍｌＯカラムに付し、水にて溶出し
た。

シリカゲルＴＬＣ〔展開溶媒；ｎ−ブタノール−酢酸−
水（３：１：２））でＲｆ　０．０８付近のフラクショ
ンを集め減圧濃縮、乾固して化合物（６）５８．６１１
１ｇを得た。（収率５３．３％）ＦＡＢ−ＭＳ；　　２
６９（Ｍ十Ｈ）＋、０．ｌＮＮａＯＨ２５６，２９４ｎ
ｍＵＶ・λｍａｘ ＮＭＩ？　（６０ＭＩ（ｚ　、　Ｄ２０　）δｐｐ’ｍ
　；　　３．７０〜４．３０　（５Ｈ。

ｍ）、　　４．６１　（ｌｌ−１，ｍ）、　　６．６０
　（ｌｌ−１，ｄ　）。

８．６０　（ＩＨ，ｓ　）、　　８．６７　（１１−１
，ｓ　）（ハ）　〔化合物（８１（Ｒ′１＝−ＣＯＣＩ
−１３）の製造〕化合物（６）　２０６　ｌ１１ｇをア
セトニトリ／ｌ／　１０　ｍｌに懸ン蜀し、トリエチル
アミン０．３１５ｍ１，４−ジメチルアミノピリジン１
０■、無水酢酸０，２５ｍ１の順に加え室温にて１８時
間撹拌した。反応液を減圧濃縮、乾固、残渣をクロロホ
ルムに溶解し、シリカゲル３０ｇのカラムに付し、クロ
ロホルム−メタノール（３０：１）２００ｍ１１クロロ
ホルム−メタノール（５：１）３００ｍｌの順で溶出し
た。シリカゲルＴＬＣ（展開溶媒；クロロホルム−メタ
ノール（１０：１））でＲｆＯ１５５付近のフラクショ
ンを集め減圧濃縮、乾固し化合物（７）を得た。化合物
（７）をメタノール−水（５：］）２２０ｍに溶解し４
３℃にて２日間撹拌すると無色の粉末が析出する。これ
を戸取し化合物（８）　１９８■を得た。（収率７４％
）ＦＡＢ−ＭＳ　；　　３５３　（Ｍ＋　１−１ど、Ｍ
ｅｏｌｌ ＵＶ、　棉ａｘ　　２４５．２５１ｅ　２７０ｎｍＮＭ
Ｒ（６０ＭＨｚ、　ＣＤ３０Ｄ）δｐｐ”　；２．　Ｉ
　Ｏ（３Ｈ，ｓ　）　。

２．１３　（３１−１，ｓ　）、　　４．４６付近（５
Ｈ，ｍ　）。

６．４３（ＩＨ，ｄ）、８．３３（ＩＮ、ｓ）、８．４
３（１）１．５） に）　〔化合物（９１（Ｒ，＝−ＣＯＣＩ−１，）の製
造〕実施例７と同様にして得た化合物（８１，５３■を
１　ｍｌのオキシ塩化りんとＱ、　３　ｍｌのトリエチ
ルアミンに懸濁し、２０分間加熱還流した。反応液を減
圧濃縮、乾固し、残渣をクロロホルム２０ｍ１と飽和炭
酸水素ナトリウム水溶’ｌＩＸ　２０　ｍｔとで分配し
１．有機層を飽和食塩水１０ｍ１で洗った後無水硫酸ナ
トリウムで脱水し、減圧乾固した。

残渣をシリカゲル１５ｇのカラムに付し、クロロホルム
−メタノール（３０：　１　）２００ｍｌで溶出した。

シリカゲルＴＬＣ（展開溶媒；クロロホルム−メタノー
ル（１０：１）：）でＲｆｏ、５６付近のフラクション
を集め減圧濃縮、乾固し化合物（９１１３，６ｆｆ１ｇ
を得た。（収率２３．２％）ＦＤ−ＭＳ；　　３８８　
（Ｍ　） ｅＯＨ Ｕｖ；λｍａＸ　２５２．２７３ｎｍ ＮＭＲ（６０ＭＨｚ　、　ＣＤ３０Ｄ　）δｐｐｍ；　
２．０８（６Ｈ，ｓ）。

４．４７付近（５Ｈ，ｍ）、６．５７（ＩＨ，ｄ）。

ｇ、ｓ　３　（ｔ）］、　ｓ　） （ホ）　〔化合物２−ａｍｉｎｏＯＸＴ−Ａの製造〕実
施例８と同様にして得た化合物（９１２７■をエタノー
ル１２ｍ１＋で懸濁させ、これに液体アンモニア１５ｍ
１を加え、封管中にて１１０℃で７２時間撹拌したニ アンモニアを除去後、反応液を減圧濃縮、乾固し、残渣
を水に溶解し、ＭＣＩ’　ＧＥＬ　ＣＨＰ−２０２０ｍ
ｌに付し、水−５０％含水メタノール（各８０ｍ１）の
直線濃度勾配にて溶出した。

シリカゲルＴＬＣ［：展開溶媒；クロロホルム−メタノ
ール（２：Ｉ）］にて１ｌｆｏ、４４付近のフラクショ
ンを集め減圧濃縮、乾固１−化合物２−ａｍｉｎｏ　Ｏ
Ｘ　Ｔ　−Ａの無色粉末１３．１ｍｇを得た。

（収率７１．３％） ＦＤ−ＭＳ；　　２６６（Ｍ） 、　　Ｉ−１□０ ＵＶ、　２ｍａＸ（ｌｏｇε）　　２５６ｎｍ（３，９
６）。

２７８ｎｍ（３，９５） ＮＭＲ（４００Ｍｌ−１２、Ｄ２０　）δｒ）ｌ）ｍ　
；　３．６８〜３．９１　（５Ｉ−１゜ｍ）、４．６８
（Ｉ１１’、ｍ）、６．２５（ＩＨ，ｄ）。

８．１　３　　（ＩＨ９ｓ　　） 実施例６．〔化合物０ＸＴ−Ｇの製造〕化合物２−　ａ
ｍｉｎｏ　０ＸＴ−Ａ　２４０　＋１１ｇをＭ／１０リ
ン酸緩衝ｔＬ（ｐＨ７，５）　１　ｓ　ｏｍｔに溶解さ
せ、アデノシン　デアミナーゼ（シグマ社製、ＥＣ３，
５゜４．４　）　１００　ｄ（１００ユニツト）を加え
、２２℃にて４１時間撹拌した。

コノ反応液をＭＣＩ”ＧＥＬ　ＣＩ−ＩＰ−２０１００
ｍｌに吸着させた後、水で溶出した。

シリカゲルＴＬＣ（展開溶媒；ｎ−ブタノール−酢酸−
水（４：１：２）］でＲｆ０．４２付近のフラクション
を集め減圧濃縮、乾固し無色粉末の化合物０ＸＴ−Ｇを
２４０■得た。（収率９９．６％）ＦＤ−ＭＳ；　　２
６８（Ｍ十Ｈ）＋ ＵＶ；ｙＨ，３Ｑ’（ｌＯｇｇ）２５３．５ｎｍ（４，
０９）ＮＭＲ（４００ＭＨｚ　、　Ｄ２０　）δｐｐｍ
；　　３．６９〜３．８７（５Ｈ，ｍ）、　　４．６６
〜４．６９　（ＩＨ，ｍ）、　　６．２９　（ＩＨ，ｄ
　）、　　８．１７　（ｌｌ−１，ｓ　）実施例７．〔
化合物０ＸＴ−Ｇの製造〕肉エキス０．３％、ペプトン
１．０％、食塩ｏ、７％を含むｐＨ＝　７．０の培地１
００ｍ１を５００　ｍｌ容三角フラスコに分注したのち
、１２０℃、２０分間オートクレーブ滅菌した。このフ
ラスコにエシェリヒア・コリーＮ　Ｉ　ＨＪ　（Ｅｓｃ
ｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉＮＩＨＪ）を１白金耳接種
し、３７℃、１８時間、好気的に振盪培養を行った。次
にこの培養液１．０００ｍ１を１０．０００回転回転釦
て１０分間遠心分離し、生菌体な集め同液量のＭ／２０
１Ｊン酸緩衝液（ｐＨ７，０）にて３回洗浄したのち、
同緩衝液１００ｍ１にて顕濁した。この懸濁液に化合物
２−　ａｍｉｎｏ　０ＸＴ−Ａ　５０　ｍｇを加え、３
７℃にて１８時間振盪にて反応させたのち１００℃にて
５分間加熱し、反応を停止し、前記条件にて遠心分離に
て除菌し、得られた上清液をＭＣＩ　Ｑｅｌ’ＣＨＰ−
２０Ｐ　５０　ｍｌを充填したカラムに通塔し、生成物
を吸着させ、水洗後、２０％含水メタノールｉｓｏｍｔ
にて溶出し、濃縮、乾固することにより無色、粉末状を
呈する化合物０ＸＴ−Ｇ４５．１ｒｒＩｇ（収率９０．
０％）を得た。

実施例８．〔化合物０ＸＴ−ＤＣＰの製造〕実施例６の
に）で得られた化合物（９１６，３ｍｇを１ｍｌのメタ
ノールに溶解し、これにＩＮアンモニア水溶液０．０４
　ｍｌを加え室温にて２時間撹拌した後、ＩＮ塩酸０．
０４　ｍｌを加えた。反応液を減圧濃縮、乾固し、残渣
を水に溶解しＭＣＩ”　ＧＥＬＣＩ−ＩＰ−２０（１０
ｍｌ　）に付し、水洗後、８０％含水メタノールにて溶
出した。シリカゲルＴＬＣ〔展開溶媒；クロロホルム−
メタノール（１０：１）〕にてＲｆｏ、３５付近のフラ
ションを集め減圧濃縮、乾固し、化合物（２）の無色粉
末４．４■をを得た。（収率９１％） Ｍｅ　０ｆ−１ ｕｖ：　２ｍａｘ　　２５２．２７３ｎｍＦＡＢ−ＭＳ
　；　　３０４　（Ｍ”）ＮＭＲ（４００ＭＨｚ　、　
ＣＤ３０Ｄ　）δｐｐｍ；　３．７２〜３．９３（５Ｈ
，ｍ）、　４．ｆｉ９（ＩＨ，ｍ）、　６．３３（Ｉｆ
（。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ）〔式中、Ｒ
   は▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化学式
   、表等があります▼、▲数式、化学式、表等があります
   ▼で示される基を意味する〕 で示される新規オキセタノシン類及びその薬理学上許容
   される塩。
2. （２）一般式（II） ▲数式、化学式、表等があります▼（II） 〔式中、Ｙは▲数式、化学式、表等があります▼、▲数
   式、化学式、表等があります▼または▲数式、化学式、
   表等があります▼を示し、Ｒ＿１は水素原子またはアシ
   ル基または置換基を有してもよい低級アルキル基を示す
   。但し、Ｙが２，６−ジクロルプリンのとき、Ｒ＿１は
   水素以外の基を示す。〕で示される新規オキセタノシン
   類およびその塩。
3. （３）一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ）〔式中、Ｒ
   は▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化学式
   、表等があります▼、▲数式、化学式、表等があります
   ▼または▲数式、化学式、表等があります▼で示される
   基を意味する。〕 で示される新規オキセタノシン類及びその薬理学上許容
   される塩を有効成分とする免疫抑制剤および抗ウィルス
   剤