JPH0662858A - 動物細胞の固定化方法及び固定化用容器 - Google Patents
動物細胞の固定化方法及び固定化用容器Info
- Publication number
- JPH0662858A JPH0662858A JP4245774A JP24577492A JPH0662858A JP H0662858 A JPH0662858 A JP H0662858A JP 4245774 A JP4245774 A JP 4245774A JP 24577492 A JP24577492 A JP 24577492A JP H0662858 A JPH0662858 A JP H0662858A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- carrier
- immobilization
- cell
- container
- animal
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- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 固定化用容器の内側壁面上に動物細胞が付着
するのを防止して、担体への固定化を効率的に行う。 【構成】 動物細胞付着性材料からなる容器内で、動物
細胞固定化用担体を用いて動物細胞の固定化を行うにあ
たり、前記容器の内側表面の少なくとも１部分を動物細
胞非付着性ヒドロゲル層で覆う。 【効果】 動物細胞はヒドロゲルには付着しないので、
容器内側表面をヒドロゲル層で覆うと、担体への細胞付
着率が向上する。特に、細胞懸濁液を注入して細胞を担
体へ付着させた後、懸濁液を容器内で移動させ、未付着
細胞を担体と効率よく接触させ、付着率を飛躍的に向上
できる。
するのを防止して、担体への固定化を効率的に行う。 【構成】 動物細胞付着性材料からなる容器内で、動物
細胞固定化用担体を用いて動物細胞の固定化を行うにあ
たり、前記容器の内側表面の少なくとも１部分を動物細
胞非付着性ヒドロゲル層で覆う。 【効果】 動物細胞はヒドロゲルには付着しないので、
容器内側表面をヒドロゲル層で覆うと、担体への細胞付
着率が向上する。特に、細胞懸濁液を注入して細胞を担
体へ付着させた後、懸濁液を容器内で移動させ、未付着
細胞を担体と効率よく接触させ、付着率を飛躍的に向上
できる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、動物細胞の固定化方法
及び固定化用容器に関する。
及び固定化用容器に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】動物細
胞を担体に固定化する際には、ガラスなどからなる培養
容器（例えば、シャーレ）内に動物細胞固定化用担体を
配置し、動物細胞を懸濁させた培養液を注入して、担体
に動物細胞を接触させ、伸展させる方法が一般に行われ
ている。しかし、細胞懸濁液を培養容器に注入する固定
化工程において、細胞懸濁液に含まれる動物細胞の中に
は、担体と接触せずに沈降したり、浮遊したりしてシャ
ーレの内壁面と接触して伸展し、シャーレ内壁面上に付
着するものがある。このように、シャーレ内壁面上に付
着する動物細胞の数が多くなると、結果的に、担体に固
定化される動物細胞の数が減少するので、シャーレ内壁
面上に付着する動物細胞の数をできる限り少なくするこ
とが望ましい。本発明の目的は、動物細胞が前記のよう
にシャーレ内壁面上に付着するのを防止し、固定化を効
率よく実施することのできる手段を提供することにあ
る。
胞を担体に固定化する際には、ガラスなどからなる培養
容器（例えば、シャーレ）内に動物細胞固定化用担体を
配置し、動物細胞を懸濁させた培養液を注入して、担体
に動物細胞を接触させ、伸展させる方法が一般に行われ
ている。しかし、細胞懸濁液を培養容器に注入する固定
化工程において、細胞懸濁液に含まれる動物細胞の中に
は、担体と接触せずに沈降したり、浮遊したりしてシャ
ーレの内壁面と接触して伸展し、シャーレ内壁面上に付
着するものがある。このように、シャーレ内壁面上に付
着する動物細胞の数が多くなると、結果的に、担体に固
定化される動物細胞の数が減少するので、シャーレ内壁
面上に付着する動物細胞の数をできる限り少なくするこ
とが望ましい。本発明の目的は、動物細胞が前記のよう
にシャーレ内壁面上に付着するのを防止し、固定化を効
率よく実施することのできる手段を提供することにあ
る。
【０００３】
【課題を解決するための手段】前記の目的は、本発明に
よる、動物細胞付着性材料からなる容器内で、動物細胞
固定化用担体を用いて、動物細胞の固定化を行うにあた
り、前記容器の内側表面の少なくとも１部分を動物細胞
非付着性ヒドロゲル層で覆い、前記容器の内側表面と動
物細胞との接触を防止することを特徴とする、動物細胞
の固定化方法によって達成することができる。また、本
発明は、動物細胞付着性材料からなる容器の内側に動物
細胞固定化用担体を有すると共に、前記容器の内側表面
の少なくとも１部分に動物細胞非付着性ヒドロゲル層を
備えることを特徴とする、動物細胞の固定化用容器にも
関する。
よる、動物細胞付着性材料からなる容器内で、動物細胞
固定化用担体を用いて、動物細胞の固定化を行うにあた
り、前記容器の内側表面の少なくとも１部分を動物細胞
非付着性ヒドロゲル層で覆い、前記容器の内側表面と動
物細胞との接触を防止することを特徴とする、動物細胞
の固定化方法によって達成することができる。また、本
発明は、動物細胞付着性材料からなる容器の内側に動物
細胞固定化用担体を有すると共に、前記容器の内側表面
の少なくとも１部分に動物細胞非付着性ヒドロゲル層を
備えることを特徴とする、動物細胞の固定化用容器にも
関する。
【０００４】本発明は、動物細胞付着性材料からなる容
器及び動物細胞固定化用担体を用いて、動物細胞の固定
化工程、及び場合により引き続いて培養工程を実施する
場合に適用される。ここで動物細胞付着性材料とは、例
えば、ガラス、ポリスチレン、ポリメチルメタクリレー
ト、ポリエステル、ポリプロピレン，ポリエチレン、ポ
リアミド又はシリコーンであり、固定化及び／又は培養
工程に用いる容器（例えば、シャーレ、ビーカー、充填
槽）は、一般に、動物細胞付着性材料からなる。
器及び動物細胞固定化用担体を用いて、動物細胞の固定
化工程、及び場合により引き続いて培養工程を実施する
場合に適用される。ここで動物細胞付着性材料とは、例
えば、ガラス、ポリスチレン、ポリメチルメタクリレー
ト、ポリエステル、ポリプロピレン，ポリエチレン、ポ
リアミド又はシリコーンであり、固定化及び／又は培養
工程に用いる容器（例えば、シャーレ、ビーカー、充填
槽）は、一般に、動物細胞付着性材料からなる。
【０００５】本発明で用いる動物細胞固定化用担体は特
に限定されるものではなく、例えば、セルロース、キト
サン又はシラン等の多孔質ビーズを基材として用いるマ
イクロキャリア、或いは、各種の基材にコラーゲンをコ
ーティングして調製した固定化用担体などを挙げること
ができる。また、好ましい担体として、特願平３─２０
４７０号明細書に記載の簡易なオートクレーブ滅菌処理
が可能な動物細胞固定化用担体（親水性繊維を主体とす
る構成繊維が親水性樹脂によって結合されている不織布
であって、絹フィブロイン、骨粉、ゼラチン、コラーゲ
ン及び／又は二価陽イオン生成性塩が前記親水性樹脂と
の混合物の形で含まれている担体）、或いは、特願平４
−１４８５０７号明細書に記載の動物細胞固定化用担体
（絹フィブロイン、骨粉、ゼラチン、コラーゲン及び／
又は二価陽イオン生成性塩がキトサンとの混合物の形
で、多孔質基材の全表面上に、連続的に又は不連続的に
分散して含まれている担体）も挙げることができる。
に限定されるものではなく、例えば、セルロース、キト
サン又はシラン等の多孔質ビーズを基材として用いるマ
イクロキャリア、或いは、各種の基材にコラーゲンをコ
ーティングして調製した固定化用担体などを挙げること
ができる。また、好ましい担体として、特願平３─２０
４７０号明細書に記載の簡易なオートクレーブ滅菌処理
が可能な動物細胞固定化用担体（親水性繊維を主体とす
る構成繊維が親水性樹脂によって結合されている不織布
であって、絹フィブロイン、骨粉、ゼラチン、コラーゲ
ン及び／又は二価陽イオン生成性塩が前記親水性樹脂と
の混合物の形で含まれている担体）、或いは、特願平４
−１４８５０７号明細書に記載の動物細胞固定化用担体
（絹フィブロイン、骨粉、ゼラチン、コラーゲン及び／
又は二価陽イオン生成性塩がキトサンとの混合物の形
で、多孔質基材の全表面上に、連続的に又は不連続的に
分散して含まれている担体）も挙げることができる。
【０００６】本発明で用いる動物細胞非付着性ヒドロゲ
ルも特に限定されるものではなく、例えば、寒天、アル
ギン酸ゲル又はアクリルアミドゲルを挙げることができ
る。オートクレーブ耐性などを有する寒天を用いるのが
好ましい。本発明においては、容器の内側表面の少なく
とも１部分を動物細胞非付着性ヒドロゲル層で覆い、前
記容器の内側表面と動物細胞との接触を防止する。動物
細胞はヒドロゲルには付着しないので、ヒドロゲル層で
覆う前記容器の内側表面の割合が高くなればなるほど、
容器の内側表面に付着する動物細胞の割合は少なくな
り、結果的に、担体に固定化される動物細胞の比率が向
上する。
ルも特に限定されるものではなく、例えば、寒天、アル
ギン酸ゲル又はアクリルアミドゲルを挙げることができ
る。オートクレーブ耐性などを有する寒天を用いるのが
好ましい。本発明においては、容器の内側表面の少なく
とも１部分を動物細胞非付着性ヒドロゲル層で覆い、前
記容器の内側表面と動物細胞との接触を防止する。動物
細胞はヒドロゲルには付着しないので、ヒドロゲル層で
覆う前記容器の内側表面の割合が高くなればなるほど、
容器の内側表面に付着する動物細胞の割合は少なくな
り、結果的に、担体に固定化される動物細胞の比率が向
上する。
【０００７】ヒドロゲル層で覆う前記容器の内側表面の
割合や場所は、固定化工程及び場合により引き続いて行
う培養工程における、細胞懸濁液の挙動に応じて適宜選
択する。即ち、細胞懸濁液中の細胞が付着する可能性の
高い壁面部分をヒドロゲル層で覆う。例えば、固定化用
担体を配置した容器内に細胞懸濁液を注入した後に、細
胞懸濁液を攪拌や揺動により容器内で移動させ、細胞懸
濁液中の細胞と担体との接触頻度を増加させることによ
って固定化効率の向上を図る場合には、容器の底面だけ
でなく、容器の内側側面もヒドロゲル層で覆うのが好ま
しい。また、固定化用担体を配置した容器内に細胞懸濁
液を注入した後に、細胞懸濁液を攪拌したり、揺動した
りせず、一定時間経過後に、細胞懸濁液のピペッティン
グ（液をピペットに吸い込み、再度担体上に吐き出す操
作）を行う場合には、容器の底面だけをヒドロゲル層で
覆うだけでも十分な効果を得ることができる。
割合や場所は、固定化工程及び場合により引き続いて行
う培養工程における、細胞懸濁液の挙動に応じて適宜選
択する。即ち、細胞懸濁液中の細胞が付着する可能性の
高い壁面部分をヒドロゲル層で覆う。例えば、固定化用
担体を配置した容器内に細胞懸濁液を注入した後に、細
胞懸濁液を攪拌や揺動により容器内で移動させ、細胞懸
濁液中の細胞と担体との接触頻度を増加させることによ
って固定化効率の向上を図る場合には、容器の底面だけ
でなく、容器の内側側面もヒドロゲル層で覆うのが好ま
しい。また、固定化用担体を配置した容器内に細胞懸濁
液を注入した後に、細胞懸濁液を攪拌したり、揺動した
りせず、一定時間経過後に、細胞懸濁液のピペッティン
グ（液をピペットに吸い込み、再度担体上に吐き出す操
作）を行う場合には、容器の底面だけをヒドロゲル層で
覆うだけでも十分な効果を得ることができる。
【０００８】容器底面にヒドロゲル層を形成するには、
ヒドロゲル水溶液を容器に流し込んで常法によって固化
させればよく、形成された固化ヒドロゲル層の上に担体
を置くことができる。また、前記の方法で容器底面に固
化ヒドロゲル層を形成した後に、その固化ヒドロゲル層
の上に離型性材料（例えば、ポリテトラフルオロエチレ
ン）からなる型を置き、型と容器との間に更にヒドロゲ
ル水溶液を流し込んで固化させ、固化後に型を抜くと、
容器の底面及び内部側面に固化ヒドロゲル層を有する容
器が得られる。型を抜いた凹部に担体を置くことができ
る。ここで使用する型は、担体と同じ大きさでも、担体
より大きいものでもよい。なお、容器の内面にヒドロゲ
ルをコーティングして固化ヒドロゲル層を形成してもよ
く、更に、別の容器で固化させたヒドロゲル層を本発明
で用いる容器に移動することもできる。
ヒドロゲル水溶液を容器に流し込んで常法によって固化
させればよく、形成された固化ヒドロゲル層の上に担体
を置くことができる。また、前記の方法で容器底面に固
化ヒドロゲル層を形成した後に、その固化ヒドロゲル層
の上に離型性材料（例えば、ポリテトラフルオロエチレ
ン）からなる型を置き、型と容器との間に更にヒドロゲ
ル水溶液を流し込んで固化させ、固化後に型を抜くと、
容器の底面及び内部側面に固化ヒドロゲル層を有する容
器が得られる。型を抜いた凹部に担体を置くことができ
る。ここで使用する型は、担体と同じ大きさでも、担体
より大きいものでもよい。なお、容器の内面にヒドロゲ
ルをコーティングして固化ヒドロゲル層を形成してもよ
く、更に、別の容器で固化させたヒドロゲル層を本発明
で用いる容器に移動することもできる。
【０００９】本発明方法及び本発明容器は、動物細胞の
固定化工程のみを実施し、増殖工程を別の容器で実施す
る場合、更には、固定化工程及び増殖工程を同じ容器で
実施する場合のいずれにも適用することができる。
固定化工程のみを実施し、増殖工程を別の容器で実施す
る場合、更には、固定化工程及び増殖工程を同じ容器で
実施する場合のいずれにも適用することができる。
【００１０】
【実施例】以下、実施例によって本発明を具体的に説明
するが、これらは本発明の範囲を限定するものではな
い。担体製造例 レーヨン繊維ウェブ１７０ｇ／ｍ2 （平均繊維径＝１５
デニール：平均繊維長＝７６mm）にニードルパンチ処理
（針密度２００本／cm2 ）を施してニードルパンチフェ
ルトを得た。ポリウレタンエマルジョン（固形分３５
％）（メルシー５８９：東洋ポリマー）２０重量部とエ
ポキシ系架橋剤（ＡＤ−Ｃ−６５：東洋ポリマー）０．
５重量部とを含み、蒸留水で全体を１００重量部とした
バインダー液を用い、ステンレススチールマングルによ
り、スリット幅０．７mmで絞り、前記のニードルパンチ
フェルトに均一に含浸させた後、１５０℃で架橋乾燥さ
せた（バインダー量＝２５ｇ／ｍ2 ）。次に、キトサン
１％溶液〔キトサン（脱アセチル化率＝８５〜９５％；
和光純薬工業（株））１ｇを、蒸留水９８．４ｇ及びＬ
−乳酸（和光純薬工業（株））０．６ｇで、５８℃にて
溶液化して調製〕７０重量部、３％フィブロイン水溶液
２０重量部及び８％ゼラチン水溶液１０重量部からなる
被覆液を用い、ステンレススチールマングルにより、ス
リット幅０．８mmで絞り、前記のウレタン含浸ニードル
パンチフェルトに均一に含浸させた。１５０℃で乾燥さ
せた後、４％ＮａＯＨ水溶液で処理してキトサンを不溶
化し、水洗してからもう一度１５０℃で乾燥させて担体
を得た（目付＝２７０ｇ／ｍ2 ；厚み＝３．０mm）。こ
の担体を直径２０mmの円板状に裁断して以下の実施例及
び比較例で使用した。
するが、これらは本発明の範囲を限定するものではな
い。担体製造例 レーヨン繊維ウェブ１７０ｇ／ｍ2 （平均繊維径＝１５
デニール：平均繊維長＝７６mm）にニードルパンチ処理
（針密度２００本／cm2 ）を施してニードルパンチフェ
ルトを得た。ポリウレタンエマルジョン（固形分３５
％）（メルシー５８９：東洋ポリマー）２０重量部とエ
ポキシ系架橋剤（ＡＤ−Ｃ−６５：東洋ポリマー）０．
５重量部とを含み、蒸留水で全体を１００重量部とした
バインダー液を用い、ステンレススチールマングルによ
り、スリット幅０．７mmで絞り、前記のニードルパンチ
フェルトに均一に含浸させた後、１５０℃で架橋乾燥さ
せた（バインダー量＝２５ｇ／ｍ2 ）。次に、キトサン
１％溶液〔キトサン（脱アセチル化率＝８５〜９５％；
和光純薬工業（株））１ｇを、蒸留水９８．４ｇ及びＬ
−乳酸（和光純薬工業（株））０．６ｇで、５８℃にて
溶液化して調製〕７０重量部、３％フィブロイン水溶液
２０重量部及び８％ゼラチン水溶液１０重量部からなる
被覆液を用い、ステンレススチールマングルにより、ス
リット幅０．８mmで絞り、前記のウレタン含浸ニードル
パンチフェルトに均一に含浸させた。１５０℃で乾燥さ
せた後、４％ＮａＯＨ水溶液で処理してキトサンを不溶
化し、水洗してからもう一度１５０℃で乾燥させて担体
を得た（目付＝２７０ｇ／ｍ2 ；厚み＝３．０mm）。こ
の担体を直径２０mmの円板状に裁断して以下の実施例及
び比較例で使用した。
【００１１】実施例１ （１）ガラスシャーレ（直径２２mm）に３％寒天水溶液
１mlを入れ、紫外線照射クリーンベンチ中に放置して寒
天を固化させた。前記シャーレの底面上に形成された固
化寒天層の上に、前記の担体製造例で調製した動物細胞
固定化用不織布を置いた。 （２）ＤＭＥＭ培地に１０％牛血清を加えて培養用培地
を調製し、Ｌ９２９細胞を５×１０5 ／mlの濃度になる
ように分散させて細胞懸濁液を得た。この細胞懸濁液１
mlを前記シャーレ内の担体上に静かに滴下し、５％ＣＯ
2 雰囲気下のインキュベーター中で３７℃にて４時間静
置した後、１回ピペッティングを行った。更に同じ条件
で４時間静置した後、前記担体中及び担体の周囲の培養
液を回収し、その培養液に含まれる未固定化細胞を遠心
分離によって集めた。更に、前記担体を取り出した後で
シャーレにトリプシン水溶液を加え、１０分後にピペッ
ティングを行ってトリプシン水溶液を回収し、未固定化
細胞を遠心分離によって集めた。前記の回収培養液及び
トリプシン水溶液中の未固定化細胞数を計数し、接種細
胞数を１００％として付着率を算出したところ７０％で
あった。
１mlを入れ、紫外線照射クリーンベンチ中に放置して寒
天を固化させた。前記シャーレの底面上に形成された固
化寒天層の上に、前記の担体製造例で調製した動物細胞
固定化用不織布を置いた。 （２）ＤＭＥＭ培地に１０％牛血清を加えて培養用培地
を調製し、Ｌ９２９細胞を５×１０5 ／mlの濃度になる
ように分散させて細胞懸濁液を得た。この細胞懸濁液１
mlを前記シャーレ内の担体上に静かに滴下し、５％ＣＯ
2 雰囲気下のインキュベーター中で３７℃にて４時間静
置した後、１回ピペッティングを行った。更に同じ条件
で４時間静置した後、前記担体中及び担体の周囲の培養
液を回収し、その培養液に含まれる未固定化細胞を遠心
分離によって集めた。更に、前記担体を取り出した後で
シャーレにトリプシン水溶液を加え、１０分後にピペッ
ティングを行ってトリプシン水溶液を回収し、未固定化
細胞を遠心分離によって集めた。前記の回収培養液及び
トリプシン水溶液中の未固定化細胞数を計数し、接種細
胞数を１００％として付着率を算出したところ７０％で
あった。
【００１２】実施例２ アルギン酸ナトリウム（熱水）５％水溶液をガラスシャ
ーレ（直径２２mm）に入れ、ＣａＣｌ2 ５％水溶液を上
から加えて放置し、アルギン酸ナトリウムからなるゲル
層を前記シャーレの底面上に形成させた。続いて、前記
実施例１（２）と同様の固定化及び培養実験を行ったと
ころ、前記実施例１（２）とほぼ同様の付着率が得られ
た。
ーレ（直径２２mm）に入れ、ＣａＣｌ2 ５％水溶液を上
から加えて放置し、アルギン酸ナトリウムからなるゲル
層を前記シャーレの底面上に形成させた。続いて、前記
実施例１（２）と同様の固定化及び培養実験を行ったと
ころ、前記実施例１（２）とほぼ同様の付着率が得られ
た。
【００１３】実施例３ 水１００mlに、アクリルアミド（１０ｇ）、Ｎ，Ｎ’−
メチレンビスアクリルアミド（０．２７ｇ）、過硫酸ア
ンモニウム（４０mg）及びＮ，Ｎ’，Ｎ，Ｎ’−テトラ
メチルエチレンジアミン（２４０μｌ）を溶かし、得ら
れた水溶液をガラスシャーレ（直径２２mm）入れて放置
し、アクリルアミドゲル層を前記シャーレの底面上に形
成させた。前記実施例１（２）と同様の固定化及び培養
実験を行ったところ、前記実施例１（２）とほぼ同様の
付着率が得られた。
メチレンビスアクリルアミド（０．２７ｇ）、過硫酸ア
ンモニウム（４０mg）及びＮ，Ｎ’，Ｎ，Ｎ’−テトラ
メチルエチレンジアミン（２４０μｌ）を溶かし、得ら
れた水溶液をガラスシャーレ（直径２２mm）入れて放置
し、アクリルアミドゲル層を前記シャーレの底面上に形
成させた。前記実施例１（２）と同様の固定化及び培養
実験を行ったところ、前記実施例１（２）とほぼ同様の
付着率が得られた。
【００１４】実施例４ ガラスシャーレ（直径３５mm）に３％寒天水溶液３mlを
入れ、紫外線照射クリーンベンチ中に放置して寒天を固
化させた。前記シャーレの底面上に形成された固化寒天
層の中央に、ポリテトラフルオロエチレン（テフロン）
製の円柱型（直径２０mm；高さ５mm）を置き、その円柱
型の周囲に３％寒天水溶液３mlを注ぎ、紫外線照射クリ
ーンベンチ中に放置して周囲の寒天を固化させた。寒天
が固まった後で円柱型を取り除き、形成されたくぼみの
中に前記の担体製造例で調製した動物細胞固定化用不織
布を置いた。続いて、前記実施例１（２）と同様の固定
化及び培養実験を行ったところ、付着率は８０％であっ
た。
入れ、紫外線照射クリーンベンチ中に放置して寒天を固
化させた。前記シャーレの底面上に形成された固化寒天
層の中央に、ポリテトラフルオロエチレン（テフロン）
製の円柱型（直径２０mm；高さ５mm）を置き、その円柱
型の周囲に３％寒天水溶液３mlを注ぎ、紫外線照射クリ
ーンベンチ中に放置して周囲の寒天を固化させた。寒天
が固まった後で円柱型を取り除き、形成されたくぼみの
中に前記の担体製造例で調製した動物細胞固定化用不織
布を置いた。続いて、前記実施例１（２）と同様の固定
化及び培養実験を行ったところ、付着率は８０％であっ
た。
【００１５】比較例１ ガラスシャーレ（直径２２mm）に、前記の担体製造例で
調製した動物細胞固定化用不織布を置き、前記実施例１
（２）と同様の固定化及び培養実験を行ったところ、付
着率は４０％であった。
調製した動物細胞固定化用不織布を置き、前記実施例１
（２）と同様の固定化及び培養実験を行ったところ、付
着率は４０％であった。
【００１６】
【発明の効果】動物細胞はヒドロゲルには付着しないの
で、固定化用容器の内側表面をヒドロゲル層で覆うと、
容器壁面に接触して付着する細胞が無くなり、動物細胞
は担体以外には接触しなくなるので、担体への細胞付着
率が向上する。特に、本発明においては、担体を備えた
容器中に細胞懸濁液を注入して動物細胞を担体へ付着さ
せた後に、細胞懸濁液を容器内で移動させ、懸濁液中の
未付着動物細胞を担体と効率よく接触させ、細胞付着率
を飛躍的に向上させることができる。
で、固定化用容器の内側表面をヒドロゲル層で覆うと、
容器壁面に接触して付着する細胞が無くなり、動物細胞
は担体以外には接触しなくなるので、担体への細胞付着
率が向上する。特に、本発明においては、担体を備えた
容器中に細胞懸濁液を注入して動物細胞を担体へ付着さ
せた後に、細胞懸濁液を容器内で移動させ、懸濁液中の
未付着動物細胞を担体と効率よく接触させ、細胞付着率
を飛躍的に向上させることができる。
Claims (2)
- 【請求項１】 動物細胞付着性材料からなる容器内で、
動物細胞固定化用担体を用いて、動物細胞の固定化を行
うにあたり、前記容器の内側表面の少なくとも１部分を
動物細胞非付着性ヒドロゲル層で覆い、前記容器の内側
表面と動物細胞との接触を防止することを特徴とする、
動物細胞の固定化方法。 - 【請求項２】 動物細胞付着性材料からなる容器の内側
に動物細胞固定化用担体を有すると共に、前記容器の内
側表面の少なくとも１部分に動物細胞非付着性ヒドロゲ
ル層を備えることを特徴とする、動物細胞の固定化用容
器。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4245774A JPH0662858A (ja) | 1992-08-20 | 1992-08-20 | 動物細胞の固定化方法及び固定化用容器 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4245774A JPH0662858A (ja) | 1992-08-20 | 1992-08-20 | 動物細胞の固定化方法及び固定化用容器 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0662858A true JPH0662858A (ja) | 1994-03-08 |
Family
ID=17138620
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4245774A Pending JPH0662858A (ja) | 1992-08-20 | 1992-08-20 | 動物細胞の固定化方法及び固定化用容器 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0662858A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010537633A (ja) * | 2007-08-30 | 2010-12-09 | プレジデント・アンド・フェロウズ・オブ・ハーバード・カレッジ | コンプライアント表面のマルチウェル培養プレート |
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1992
- 1992-08-20 JP JP4245774A patent/JPH0662858A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010537633A (ja) * | 2007-08-30 | 2010-12-09 | プレジデント・アンド・フェロウズ・オブ・ハーバード・カレッジ | コンプライアント表面のマルチウェル培養プレート |
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