JPH06510284A - キラルグルタレートエステル、それらの分割および誘導されるグルタルイミド化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 キラルグルタレートエステル、それらの分割および誘導されるグルタルイミド化 合物発明の分野 本発明は、キラル化合物およびそれらの分割に関連する。

発明の背景 ピリドグルテチイミド（ｐｙｒｉｄｏｇｌｕｔｅｔｈｉｍｉｄｅ）　（４−Ｐ　 Ｇとして本明細書に記載）としても知られている３−エチル−３−（４−ピリジ ル）ピペリジン−２，６−シオン（ログレトイミド（Ｒｏｇｌｅｔｉｍｉｄｅ） ）のラセミ化合物は、ホルモン依存性乳癌の処置に効果的であることが示されて いる。フォスター等、ジャーナル・オブ・メディカル・ケミストリー（Ｊ、Ｍｅ ｄ、Ｃｈｅｔ）　、２８巻、２００−２０４頁（１９８５年）に記載のように、 ４−ＰＧの作用様式は、酵素アロマターゼを阻害し、それ故に、エストロゲン生 合成を阻害すると思われている。４−ＰＧの誘導体は、５−アルキル誘導体を含 み、アロマターゼ阻害剤として良いまたはより良い場合もある；マッケイグおよ びロウランド、ジャーナル・オブ・メディカル・ケミストリー（Ｊ、Ｍｅｄ、Ｃ ｈｅｗ）　、印刷中、参照。

マッケイグ等、ジャーナル・オブ・ケミカル・ソサイエティー・パーキン・トラ ンスレーンＢ　ン（Ｊ、　Ｃｈｅｗ、　Ｓａｃ、　Ｐｅｒｋｉｎ　Ｔｒａｎｓ、 　）　、１巻、１９６−１９８頁（１９８９年）による記載のように、４−ＰＧ の（Ｒ）−エナンチオマーは（Ｓ）−エナンチオマーの２０倍の強力なアロマタ ーゼ阻害剤であると測定されている。

それ故に、（Ｒ）−異性体は、本質的にラセミ化合物において活性な組成物であ ると思われる。

４−ＰＧのエナンチオマーそれぞれを、カンファー誘導キラル補助剤（ａ　ｃａ ｎｍｐｈｏｒ−ｃｌｅｒｉｅｄ　ｃｈｉｒａｌ　ａｕｘｉｌｉａｒｙ）を用いて 調製した。この試薬は、高価であり、生成物のダラム量以上を生産するには、こ の方法は非実用的である。

発明の要約 本発明に従うと、４．−　Ｐ　Ｇのエナンチオマーおよびその類似体を生産する 問題点は、前駆体から非常に容易に分割出来るエナンチオマー形でそれらを調製 することによって解消される。新規方法は、４−ＰＧの単一のエナンチオマーの 大量生産に対して実用的であり、エステル前駆体の微生物的または酵素的生体内 変換に基づくものである。

本発明のエナンチオマー生成物は、式Ｉであり、新規前駆体は、式ＩＩであり、 これらの式は請求項１で定義している。ラセミの式Ｈの化合物を、１つのエナン チオマーに関して混合物を豊富化するエナンチオ特異性エステラーゼと、他のエ ナンチオマーと反応させて対応する酸（分離することもある）を形成することに より、接触させることもあり、慣用のカンファー誘導キラル補助剤での更なる分 割により部分的豊富化を高める場合がある。

発明の説明 ４−ＰＧは、式Ｉの化合物であり、Ｘはエチル、Ｙは４−ピリジルおよびＺは水 素である。今回は、説明だけを目的として、エナンチオマー４−ＰＧの生産に関 して、本発明に含んでいる工程を図表で略図を書いて記載する。図表は、どのよ うにして式ＩＩの化合物（特に式２）が、例えば、カリウムｔ−ブトキシドおよ びｔ−ブチルアルコールの存在下で、アルキル４−ピリジルアセテート（１）と ヨードエタン、次にアルキルアクリレートとの一連のアルキル化により調製され 得るかを示すものでもある。

ＲおよびＲ゛はエステル化する基であり、適切には、直鎖状アルキル、分校状ア ルキル、アリルアルキルおよび所望により例えばハロゲンで置換されるアリルか ら成る１０炭素原子までを含有するアルキル残基である。本発明の目的には、最 も単純なアルキル基（Ｒ，Ｒ’＝メチルまたはエチル）が妥当であり、化学的手 法を簡略化する点で好ましい。

図表に示した次の工程が本発明の特徴である。これはうセミのジエステル（２） の１つのエナンチオマーを優先的に加水分解し、光学的に豊富化した残留ジエス テル（３）およびモノエステル（４）を得る生体触媒の発見に基づいている。エ ステル酸のＲ−エナンチオマーを生産する生体触媒（すなわち、図表中の生体触 媒Ａ）およびＳ−エナンチオマーを生産する生体触媒（生体触媒Ｂ）がある。

適切なエステラーゼ活性をアシラーゼＩ　（アスペルギルス）、エステラーゼ３ ｏ、　ｏ　ｏ　ｏ、リゾープス・ジャポニカス・リパーゼ、Ｆ３リパーゼ、Ａ２ １Ｊパーゼ（豚膵臓）、Ｆ６リパーゼ（カンジダ由来）、豚肝臓エステラーゼ、 ＣＥリパーゼおよびＡＹリパーゼから入手出来ることもある。コレステロールエ ステラセーゼも代替となる。

生体内変換に適切な生体触媒の一例として、６０％ｅｅ（エナンチオマー過剰率 ）以上の旦−エステル酸を生産出来る微生物Ｐ３Ｕ１株がある。他の適切な（タ イプＢの）生体触媒としては、トリコスポロンＥＮＺＡＩ−３があり、この特徴 は、アラルカン酸エステルを酸、例えば、（旦）−ケトプロフェンに転化するそ のエナンチオ特異性を含むものであり、イギリス特許出願第９１１８１４９．５ の優先権主張もしている国際特許出願ＰＣＴ／ＥＰ９２１０１８９２に記載され ている。

ＥＮＺＡＩ−３株は、ブダペスト条約の下、１９９１年８月２０日にイギリス、 キュー（Ｋｅｙ）のインターナショナル・マイコロジカル・インスティチュート に寄託番号３４８９１７号で寄託されている。Ｐ３Ｕ１株もまた、ブダペスト条 約の下、１９９２年８月２０日にＮＣＩＭＢで寄託番号４０５１７号で寄託され ている。

生体内変換生成物は、中性ｐＨでの溶媒抽出により容易に分離されるものであり 、そのエナンチオマー的に豊富な４−ＰＧへの転化は、慣用的な化学技法によ尿 素と共に加熱することにより（））に転化することが出来る。

本発明の更なる特徴は、生体内変換から誘導される光学的に豊富な物質から振興 的であることは本質的要素ではない。本発明のこの点での実施態様において、放 出する物質において、例えば、酢酸エチル：エタノール（１０：１）から再結以 下の実施例は、本発明を説明するものである。

実施例Ｉ　Ｐ３Ｕ１の生育 Ｐ３Ｕ１株を栄養寒天プレートおよび５ｇ／ｌグルコース上で画線培養し、２３ ℃で６０時間インキュベートした。５００鳳１フラスコ当たり成長培地（Ｉｇ／ １（ＮＨ４）！ＳＯａ；　２ｇ／ＩＫＨｘＰＯａ；　０．２５ｇ／１Ｍｇ５０４ ；　０．Ｉｇ／ｌＣａＣ１ｚ；　０゜１■ＩＴＥＳ；１０■ＬＹＥ）１５０■ｌ を含有する種フラスコに栄養寒天プレートから接種し、２３℃、３５０ｒｐ■で ２４時間振盪した。２４時間後、５２０ｎ−での光学密度は２．１に達していた 。これを用いて（１０％接種を用いる）生産発酵層（ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｆ ｅｒｍｅｎｔｅｒｓ）　、すなわち、アングリコン（Ａｎｇｌｉｃｏｎ）発酵層 当たり１．５１の成長培地に接種した。これらを２３℃で振盪しながら生育させ 、通気を調節し、ＤＯ７５０％以上に保った。２４時間後、５２０ｎ■での光学 密度は２．５に達した。その後、細胞を１０分間５０００　ｒｐｍにかけて集め た。

実施例２　生体内変換 Ｐ３Ｕ１細胞の細胞塊を遠心分離により集め、これを酵母エキス（５ｇ／ｌ）を 含む１０ｍＭＫＨｔＰＯ４、ｐＨ７に再懸濁して、光学密度２（５２０ｎｍ）に した。

（＋）−ジメチル２−エチル−２−（４−ピリジル）グルタレートを加えて、最 終濃度３ｇ／ｌにした。細胞を２３℃で通気またはｐＨ調節せずに撹拌した。基 質のエナンチオマー過剰率（ｅ　ｅ）を（ジエステルからシクロヘキサンへの抽 出、続いてキラセル−０Ｊ−カラム（Ｃｈｉｒａｃｅｌ−ＯＪ−ｃｏｌｕｍｎ） でのシクロヘキサン層のＨＰＬＣ分析する）進歩した加水分解として追跡した。

７２時間後、残っているジエステルのｅｅは、６６％であり、生体内変換したも のを集めた。細胞を遠心分離で除き、その後、ジエステルを酢酸エチル（３ｘｌ ｌ）で抽出した。その後、水層を塩溶液（１０％重量ＮａＣ１）に浸し、ｐＨを 濃ＨＣＩを用いて２．６に調節した。その後、生成物をテトラヒドロフラン（Ｔ ＨＦ）で抽出した。ＴＨＦ抽出物を集め合わせて、減圧下蒸発させて、茶色油状 のものを得、これをトルエンと共にアゼオドロープすることにより乾燥した。ト ルエン溶液を等容量のアセトンと混合し、生じた非有機塩の沈殿を濾去した。溶 媒を蒸発させて、茶色油状のものを得、放置して固化した（収量４．１ｇ）。こ れは、実質的に旦−２−エチル−２−（４−ピリジル）グルタル酸１−モノメチ ルエステルであった。

実施例３　環化 イミドの環化は、実施例２由来の生成物を等重量の尿素と共に２０分加熱するこ とにより行った。

生成物を飽和重炭酸ナトリウム溶液と酢酸エチルの間に分配した。有機層を乾燥 （ＭｇＳＯ，）Ｌ、次に蒸発させて、粗３−エチル−３−（４−ピリジル）ピリ ジン−２，６−ジオン（１，１ｇ）を得た。これをシリカのフラッシュクロマト グラフィー（エーテル：トリエチルアミン２二１で溶出する）で精製して、純粋 なエナンチオマー的に豊富化した生成物（３００＋ｇ）を得た。ｅｅは、ダイセ ル・キラセルＯＪカラム（Ｄａｉｃｅｌ　Ｃｈｉｒａｃｅｌ　ＯＪ　ｃｏｌｕｍ ｎ）のＨＰＬＣにより測定すると、５６％であることが分かった。

実施例４　ｅｅ豊富化 実施例３由来の精製したイミド（３００ｍｇ）を酢酸エチル（１０ｍｌ）に溶解 した。この溶液にＩＲ−（−）−カンファースルホン酸（１，１モル当量、３５ ２＋ｇ）を加えた。周囲温度で０．５時間撹拌した後、混合物を還流状態にして 、十分なエタノール（３ｍｌ）を加えて、固体を溶解した。透明な溶液をゆっく りと５℃まで冷却させ、その後固体を濾過により除去した（ラセミ物質１９０１ ｇ）。液体中の生成物のエナンチオマー過剰率は、９６．２％であることが分か った。溶媒として９７．３％エナンチオマー過剰率で含有していた。

旦−豊富化旦一カンファースルホネート塩溶液を濃縮して乾燥し、その後、水（ ５ｍｌ）に懸濁した。混合物を２Ｎ水酸化ナトリウム溶液で塩基性化してｐＨ９ にした０生成物を酢、酸エチルで抽出し、宵機抽出物を乾燥（ＭｇＳＯｎ）した 。最終生成物を単離し、フラッシュクロマトグラフィーにより実施例３に記載の ように精製した。

実施例５　生体内変換 実施例２と同じ基質での生体内変換をｐＨ７に調節した０、１ＭＫＨ！ＰＯ，（ ＩＱＱｓｌ）、シクロヘキサン（１００８１）、ジメチルエステル（１ｇ）およ びムコール・ジャヴアニカス・リパーゼ（７００ｍｇ）を含有している調節した コニカル・フラスコ（ａ　ｂａｆｆｌｅｄ　ｃｏｎｉｃａｌ　ｆｌａｓｋ）（５ Ｑ　Ｑｍｌ）中で行った。フラスコ内容物を２３℃で振盪し、シクロヘキサン層 に残っている基質のｅｅをＨＰＬＣにより追跡した。４８時間後、残っている基 質のｅｅは、８４％の転化率で４６％（Ｒジエステル前で豊富化された）であっ た。

実施例６　生体内変換 実施例５に記載の方法を行ったが、生体触媒としてはカンジダ・シリンドラセア ・リパーゼを用いた。４８時間後、残っているジエステルのｅｅは、７２％のＥ ＮＺＡＩ３を新たに生育させたＹＭ（ディフコ）寒天プレートから２０１１容器 （成長培地は、Ｉｇ／ｌ　（ＮＨ４）ｚｓ０４．２ｇ／ｌＫＨ２ＰＯ４，０，２ ５ｇ／ｌＭｇＳＯ４・７Ｈ２０、Ｏ，Ｉｇ／ｌＣａＣ１４・２ＨｘＯ，Ｏ，１ｍ ｌ／１微量成分溶液、Ｌｏｇ／ｌ酵母エキスから成り、水酸化ナトリウムでｐＨ ７，０に調整した）中、成長培地５厘ｌに接種した。これを２３℃で２４時間振 盪しながらインキュベートした。

その後、細胞をまき取り、２０＋１容器（反応緩衝液は、ｌＱｍＭリン酸ナトリ ウム、５ｇ／ｌ酵母エキス（フォウルド・スプリンガー）、５０μｍ／１ツイー ン８０．３ｇ／ｌ　（＋）−ジメチル２−エチル−２−（４−ピリジルグルタレ ート）から成る）中５＋１の反応緩衝液に再懸濁した。これを４１時間振盪した 。エナンチオマー過剰率（ｅ　ｅ）をジエステルのシクロヘキサンへの抽出、続 いてシクロヘキサン層　。

のキラセル−ＯＪカラムでのＨＰＬＣ分析により測定した。２２時間後、残量ジ エステルは、Ｒ配置に関して、５４％のｅｅを有していた。

＋３ａｌ　１４ｂｌ　Ｄｂｌ　＋４ａｌ閏竪槓審輔失 フロントページの続き Ｃ，ＮＬ、ＳＥ）、ＡＵ、ＣＡ、ＪＰ、ＵＳ（７２）発明者　マッケイグ、レイ モンドイギリス、ケンブリッジ、シービー４・６イーイー、ミルトン、マンスフ イールド・クロース５番 （７２）発明者　ティラー、スチーブン・ジョン・クリフォード イギリス、ケンブリッジシャー、シービーフ・４エムテイー、エリイ、ケンブリ ッジ・ロード５２番

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. １．式Ｉ ▲数式、化学式、表等があります▼Ｉ （式中、ＸおよびＺは、Ｈまたは有機基であり、Ｙは環状基である）のキラル化 合物を少なくともそのエナンチオマーの１つの形で優位に製造するための、式Ｉ Ｉ▲数式、化学式、表等があります▼ＩＩ（式中、ＲおよびＲ′は、同じかまた は異なったエステル化するラジカルである）のキラル化合物の対応するエナンチ オマー形をアミド化により環化することから成る、方法。
2. ２．Ｘ、ＲおよびＲ′がそれぞれＣ１−１０アルキル基である、請求項１記載の 方法。
3. ３．Ｘがエチルである、請求項２記載の方法。
4. ４．Ｙが４−ピリジルである、前項いずれかに記載の方法。
5. ５．ＺがＨである、前項いずれかに記載の方法。
6. ６．式Ｉの化合物がアロマターゼ阻害剤である、前項いずれかに記載の方法。
7. ７．式Ｉの化合物が（Ｒ）−４−ピリドグルテチイミドである、請求項１記載の 方法。
8. ８．ＲおよびＲ′がそれぞれメチルまたはエチルである、前項いずれかに記載の 方法。
9. ９．環化が尿素またはアンモニアとの反応から成る、前項いずれかに記載の方法 。
10. １０．ラセミの式ＩＩ化合物をエナンチオ特異的エステラーゼと接触させ、更に （所望ならば）分割し、そして式ＩＩの化合物をエステラーゼ反応によって形成 される酸から分離する前工程から成る、前項いずれかに記載の方法。
11. １１．エステラーゼがトリコスポランＥＮＺＡＩ−３、ＩＭＩ３４８９１７また はＰＵ３１、ＮＣＩＭＢ４０５１７の特徴を持つ、請求項１０記載の方法。
12. １２．重なる分割が、カンファースルホネート塩または他の分割試薬を用いて行 われる、請求項１０または１１記載の方法。
13. １３．請求項１から８のいずれかで定義した式ＩＩの化合物。
14. １４．Ｘがエチルであり、Ｙが４−ピリジルである、請求項１３記載の化合物。
15. １５．エナンチオマーの混合物の形であり、その内１つが少なくとも５０％のエ ナンチオマー過剰率である、請求項１３または１４記載の化合物。
16. １６．１つのエナンチオマーの形であり、他のエナンチオマーは本質的に遊離で ある、請求項１３または１４記載の化合物。
17. １７．１つのエナンチオマーが（Ｒ）−エナンチオマーである、請求項１５また は１６載の化合物。
18. １８．（Ｒ）−４−ピリドグルテチイミドに対応する、請求項１７記載の化合物 。
19. １９．モノカルボキシル、アリルアルカノン酸エステルのその酸へのエナンチオ 特異的転化における使用を除く、トリコスポランＥＮＺＡＩ−３、ＩＭＩ３４８ ９１７。
20. ２０．Ｐ３Ｕ１株、ＮＣＩＭＢ４０５１７。