JPH06506474A - 医薬エアロゾール組成物ならびにそれらのウイルス疾患の治療および予防用途 - Google Patents

Abstract

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Description

【発明の詳細な説明】 医薬エアロゾール組成物ならびにそれらのウィルス疾患の治療および予防用途 技術分野 本発明は、新規な医薬エアロゾール組成物ならびにそれらのウィルス疾患の治療 および予防用の使用に関する。

従来技術の記述 現在のところ、オルソミクソウィルス（インフルユンザウイルス）およびバラミ クソウィルスにより誘発される感染の進行を阻害しうるアマンタジン（ａｍａｎ ｔａｄｉｎｅ）　（Ｄｏｕｇｌａｓ、　Ｒ，Ｇ、−Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　Ｄ ｉｓｅａｓｅｓ。

１９７９、　４１３〜４２５ページ、Ｉｎ　：　”Ａｎｔｉｖｉｒａｌ　Ａｇｅ ｎｔ　ａｎｄ　ＶｉｒａｌＤｉｓｅａｓｅｓ　ｏｆ　Ｍａｎ、”　Ｒａｖｅｎ　 Ｐｒｅｓｓ、Ｎ、’／、、Ｇ、Ｇａ１ａｓｓｏり　、　リ　）くビ　ＩＪン（ｒ ｉｂａｖｉｒｉｎ）　（Ｇｏｕｇｌａｓ、　Ｒ，Ｇ、−同上４２５〜４２８ペー ジ）およびインターフェロンのような生活性ポリペプチド（Ｓｃｏｔｔら、Ｂｒ １ｔ、　Ｍｅｄ。

Ｊ、、　１９８２．ν、２８４．　１８２２ページ）などの数多くの治療物質が 知られでいる。これらの治療効果は、上記ウィルスの生殖の阻害能に起因する。

療法学的には、これらは各種の医藁荊形、すなわち錠剤、カプセル、注射液およ びエアロプールで使用されており、後者が最も好ましいものである。このことは 、つ・イルスー細菌性の呼吸疾患では、気管支腕が王として影響を受けるので、 活性ｆＡ賞を２００１Ｊｎを超えない微粒子の状態で呼吸管を通して使用するこ とが最も効果的であろうとの事実により説明されている。アマンタジン系医薬物 質のエアロプール量刑の使用は知られているが、上記の治療物［１１４よインフ ルエンザＡ型ウィルスに対してだけでな（、インフルエンザＢ型ウィルス、バラ ミクソウィルスおよび他の多くのウィルスにも活性がある。すなわち、それらは 選択的治療効果を示す。

プロテイナーゼインヒビターのアプロチニン類に基づく抗ウイルス医薬を創製す る試みが行われてきたことは知られている（Ｚｈｉｒｎｏｖ。

０、Ｐ、−Ｊ、　Ｍｅｄ、　Ｖｉｒｏｌ、、　１９Ｂ７．２１：　１６１＝１６ ７ページ）。アプロチニン類は、多樟なプロテイナーゼを阻害する天然の低分子 ポリペプチドである。公定書収載のアプロチニン型刻：　Ｇｏｒｄｏｘ　（Ｇｅ ｄｅｏｎ　Ｒｉｅｈｔｅｒ）。

Ｃｏｎｔｒｙｃａｌ　（Ｇｅｒ＊ｅｄ）、　Ｔｒａｓｙｌｏｌ　（Ｒａｙｅｒ　 ＡＧ）、　Ａｎｔａｇｏｓａｎ　（Ｂｅｂｒｉｎｇ）が存在する。抗ウイルス治 療効果（肺部の病因の阻害、動物の死亡の予防）は、スブロチニンの非経口（Ｑ 腔内）接種によりｉ）られた。

十分に高い用量のアプロチニン活性荊は、ｔｏ、ｏｏｏ〜１５，０００カリクレ イン−阻害単位（にＩＵ）　（動物７日）であった。非経口的に投与された場合 、アプロチニンポリペプチド類は血管中に吸収され、そこで各種の血液タンパク 質と結合すると、それらの物理化学的性’ｊｔ（電荷、イオン化度、分子量、配 置溝ａ）および作用特性を変化する。このようなタンパク賓の複合体化は、アプ ロチニン活性をマスクしそして阻害する可能性があり、さらに血液から呼吸管中 への複合体の通過を妨げる可能性がある。結果として、抗つィルス作用ｔＲ横が 変化して、治療効果が低下する。

本発明の主要な態樟の要約 本発明の主目的は、呼吸管疾患にかかるヒトおよび動物の治療および予防に強い 抗つ・イルス効果および病原性効果を低有効療法用緊で奏する水性溶液または固 体微粒子状態の生活性ポリペプチドの医薬エアロゾール組成物の開発にある。

この目的は、本発明の医薬エアロゾール組成物が活性物質と（−で、溶液１喝り 当りｌ　、　５００〜１０，０ＯＯＫＩυの量で水に溶解されたアブ口ヂニン群 のプロテイナーゼインヒビターを含むことによって解決される。

エアロゾールの安定化と呼竪管への吸収を高めるには、組成物中に界面活性剤、 好まし２くはＴ＠１ｎ−８０またはグリセロールを含めることが有効である。提 供される組成物は、主として呼吸管のいろいろな部位に適用される。

異なる湿分を有するアプロチニンの微粒子からなるエアロゾールは、空気流中へ 水溶液の噴霧または感染進行局所に関して適当な粒子サイズの生成物を提供する アトマイザ−によるプロパラントとして調製される。

この目的はまた、本発明の医薬エアロゾール組成物が、アプロチニン、その誘導 体およびアプロチニン様物質からなる群より選ばれたプロテイナーゼインヒヒタ ーの固体微粒子（平均サイズ０．５〜２０μｍ）を活性物質として含むことによ り解決される。

本発明の組成物の乾燥粉末または圧縮粉末エアロゾールは、粉末吸入器または投 与量メータを備活るエアロゾール装置により得られる。

この粒径を有する粉末エーロゾールは、気道内への投与によるウィルス性疾患の 処理における高い効能によって特徴付けられる。粉末エーロゾール組成物と、エ ーロゾールを安定化し、且つ気道への吸入または適用による効能を高める、各種 の製薬上許容できる成分：ビヒクル、界面活性剤とを組み合わせることが便利で ある。医薬ビヒクルは、気道の特定部分における活性物質の向上した吸着や、活 性物質の治療効果の延長に伝導し、その結果処置や予防のために投与量の減少を もたらす。

各種の植物油（カスター、ミント、ユーカリプタス）並びにグリセロール及び非 イオン性洗剤例えばＴｗｉｎ−８０を界面活性剤として使用できる。前記界面活 性剤は凝集を防止し、またエーロゾール組成物中の粒子の分散を改善し、気道上 皮表面の活性物質の吸着を向上させ、そしてエーロゾールの治療効果を改善する 。粉末組成物の適用では、本発明によると、投与計量器を具備するエーロゾール 装置において、製薬上許容できる液化ガス噴射側とともに使用される。

該エーロゾール組成物は、その他の予防及び治療配合物−相乗物：ペンタミジン 、ブロンコシレータ−１抗生物質をさらに含有してもよい。

本発明によると、組成物の超微粉粒子のエーロゾールは、鼻咽頭や気道中に投与 すると、ヒトまたは動物に対して向上した治療効果を発揮する。

アプロチニン、その誘導体またはブロチニン様物質のエーロゾールは、静脈注射 に必要な量の１００倍少ない投与量で使用した場合に、より強力な治療効果及び 顕著な予防効果を発揮する。該エーロゾールの最高効能は、０．５〜４μｍの範 囲内の超微粉化粒子の平均粒径の場合に、肺及び下部気道に対するその作用によ って実現された。

粒径を２０μｍまで増加させると、そのエーロゾールの最良の効果は、鼻咽頭及 び上部気道にあった。アプロチニン、その誘導体及びアプロチニン様物質の向上 した治療作用は、水溶液の静脈注射と比較して、気道内へエーロプール形で投与 された活性物質の病原作用の標的の変化及び活性物質の構造的変形によるものら しい。

アプロチニン分子のコンフォメーシジン及びイオン化は、特に相境界（空気−粒 子）におけるエーロゾール形への転移によって変化する。

エーロゾール化によって誘発される構造変形は、すべての可能性において、アプ ロチニン及びアプロチニン様物質の治療効果の定性的向上及び新たな生理学的機 構の出現をもたらす。

我々の意見では、アプロチニン、その誘導体、及びアプロチニン様物質のエーロ ゾールの適用は、皮膚、目の粘膜、鼻咽頭、喉、及び胃腸管といった粘膜及びか らだの細菌感染またはウィルス感染領域に、吸入によってのみではなく、点滴に よってもまた可能である。

図面の説明 以下、提案された本発明の実施Ｂ樟の変型を、図面を参照して例示するが、これ ら図面は、本発明によると：第１図は、アプロチニンエーロプール微粒子の分散 プロフィールを示し； 第２図は、インフルエンザウィルスに感染させてアプロチニンエーロゾールで処 理したネズミの体重量変化を示し；第３図、ａ、ｂ、ｃ、ｄは、Ａ／Ａｉｃｈｉ 　／２／６８　（ａ、ｃ）　。

５ｅｎｄａ　ｉ　／　９６０　（ｂ　）　、及びＢ／ＨＫ／７２　（ｄ）ウィル スに感染したネズミにおけるアプロチニンエーロプールの保護効果を示す。

発明の詳細な説明 エーロプール組成物は、ウィルス性呼吸疾、！！の処置及び予防に対して、その 他の医薬形態よりも有意な利点を有する。本発明によると、エーロゾール組成物 は、活性物質として、アプロチニン、その誘導体、または生物学的活性ポリペプ チドであるアプロチニン様物質から成る群から選択されたプロテイナーゼのイン ヒビターを含有する。

アプロチニンやアプロチニン樟ポリペプチドは、各種動物の器官から、並びにカ タツムリ、ヘビ毒、及びカイコの幼虫から得ることができる。アプロチニン誘導 体は、個々のアミノ酸及び共有結合を別の基で修飾することによって得られる。

主な生物学的及び抗プロテイナーゼ特性を保持する得られるアプロチニン誘導体 は、より高い安定性を獲得し、また医薬として使用した場合の一部の副作用を欠 損する（Ｇｅｒｂｈａｒｄ、　Ｗ、　ｅｔ　ａｌ、　−’Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ 　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ”Ｅｌｓｅｖｉｅｒ　５ｃｉｅｎｃｅ　Ｐｕｂｌｉｓｈ ｅｒｓ、　ｖ、１０．　ｐ、３７５−３８８．１９８６）。

ポリペプチドは、製薬上許容できる品質を達成するために、水性媒体中で抽出及 び精製される。アプロチニン、その誘導体、またはアプロチニン様物質を固体の 超微粉粒子の形態で得るには、これらの精製したポリペプチドの水溶液に凍結乾 燥及び微粉砕を施す。粒径は、微粉砕圧によって制御される。その方法で形成さ れる粒子の平均粒径は、０．５〜２０μｍ、主として０．５〜１０μｍの範囲に ある。

粒径が０．５〜４μｍのアプロチニン、その誘導体及びアプロチニン様粒子は、 気道の中間部分及び下方部分に活性物質を確実に運搬し、また粒径が４〜２０μ ｍのものは、鼻咽頭や上部気道に運搬する。

前記ポリペプチド及びその微小化された固体粒子の水溶液を吸入のために使用す ることができる。なお、他の既知ポリペプチド、例えばインターフェロンとは異 り、本発明におけるポリペプチドは固体状態及び水体状態で非常に安定である。

これらはまた、エアロゾルによるトリプシン阻害により決定されるエアロゾル化 後のそれらの機能的活性を保持する。

現在、アプロチニンの認定された調製物、例えばＧｏｒｄｏｘ　（Ｇｅｄｅｏｎ Ｒｉｃｈｔｅｒ）、Ｃｏｎｔｒｙｃａｌ　（Ｇｅｒｍｅｄ）、Ｔｒａｓｙｌｏｌ 　（Ｂａｙｅｒ　ＡＧ）、Ａｎｔａｇｏｓａｎ（Ｂｅｈｒｉｎｇｅｒ）が入手可 能であり、これらをエアロゾルの調製のために使用することができる。

アプロチニンの水溶液を調製するため、我々は、１ｄの溶液中に１　、５００〜 １０，０００カリクレイン阻害ユニツト（ＫＩｔｌ）を含有するように蒸留水中 に希釈したＧｏｒｄｏｘ、又はＣｏｎｔｒｙｃａｌ、　Ａｎｔａｇｏｓａｎを使 用した０これらの量は、逐次量−効果試験における実験的選択により碑文された 。

エアロゾルの安定性を増加するため、前記水溶性に界面活性剤、例えばトウィー ン〜８０、トリトンｘ−ｔｏｏを、水に容易に溶解する０、０１〜５．０重量％ の量で導入することができる。これらモ・）１面活性剤は、アプロチニン、その 誘導体又は７ブ１コチニン様物質のエフ１′ｊゾル粒子の活性表向を増加させ、 これここより呼吸器におけるぞね１：ｙの吸着を政善し２、そしてエアロゾルの 保護効果を層力１１させる。さらに、この溶液Ｌ：；、界面活性剤と１１．てグ リ＋（゛」−ルを０．０５〜１０重層％の量で自存することができるゆ 前記ポリペプチドの水溶液からのエアロゾルの調１のためにコ゛ジエクター型の ＦＪＺ縮空気系を用いることができる。ボ１１ベブ丁゛ドの水溶液は液体フルオ ロカーボン促進剤のｆ発により、ヌば高速ガス流７例えば圧縮空気の力１、二よ り分散さ１する３また、エアロゾルを形成するために、Ｍｕｓｓｏｎ　−Ｉ型の 超音波発生器（商標Ｎｏ、２５−２０１２．０７５−８９゜Ａｌｔａｙ　Ｉｎｓ ｔｒｕｍｅｎｔ−ｍａｋｉｎｇＰｌａｎｔ、　Ｂａｒｎａｕｌ、　Ｒｏｓｓｉｙ ａ）を使用することができる。

水溶液の超音波分散によりエアロモル雲が形成される。

前者の場合、得られるエアロゾルは主として０．５〜３．８μｍサイズの粒子か ら成っていた。この様な粒子の吸入は、呼吸器の中部及び下部へのアプロチニン 又はアプロチニン様物質の最も適切な供給を達成する。なお、圧縮空気法におい て、粒子の急速な乾燥のため、生ずるエアロモル雲ば、王として乾燥粒子から成 り　（９０％）、該エアロゾル中の水分含１は約０．０１ｍｇ／−である。

超音波法における空気液の欠如のため、エアロゾルの部分的凝集が生し、粒子乾 燥の程度は低い。得られるエアロモル雲は湿エアロゾルの性質を有する。

前記エアロゾルにおいて、粒子サイズは０．１〜１００　μｍ、主として３．５ 〜７μｍで異り、吸入の後、それは活性物質を鼻咽腔及び呼吸器の上部に通用す る。このエアロゾル供給の差が、怒染部の位π付けに依存してエアロゾルの調製 及び使用の可能な変化の１つの選択を可能にする。乾燥型及び湿潤型の両方のニ ー１０ゾルを用いることにより正の療法効果が達成され得るが　しがしながら、 乾燥エアロゾル中ル層よく副え−９れるごあろう。

エジェクター型の装置を通しての又はｒｓｐｉｎｈａｉｅｒ　Ｊ及び１’Ｒｏｔ ａｈａｌρｒ」型の空気吸入器を通しての乾燥粒子の霧化は１、アプロチニン、 その誘導体又はアプロチニン様物質の固体微小粒子からのエア１７ゾルのｍ製の ために用いることができる。他の変法は、液化推進剤を用いての懸説渣からの微 細化された粒子の霧化である。

第一の変法において、活性ポリペプチドの粒子はキャリヤーとの組合→！シこお いて使用され得る。キャリヤーの導入が活性物質粉末の調製及び標準化を促進し 、そして呼吸器の上部鼻咽腔、咽頭、喉頭、気管）へのその一層効果的な供給を 行う。キャリヤーは、使用されるポリペプチドに対して化学的に不活性であり且 つ粘膜に対して刺激性でなく且つ吸入のために許容される非毒性の物質でなけれ ばならない。キャリヤーとして、無機塩例えば炭酸カルシウム、モ、ノサンカラ イド、例えばラクトース、アラビノース；ポリサッカライド、例えばデキストリ ン、デキストランを使用することができる。活性成分を２〜９重量倍超える量で ラクトースを使用するのが好ましい。

エアロゾル、特に粉末エアロゾル中の粒子サイズは、呼吸器へのそれらの投与の だめの主たる制御因子である。従って、キャリヤー粒子は、特に２００μｍを超 えないあるサイズでなければならない。より大きなサイズにおいては、エーロゾ ル粒子は呼吸器組織を刺激し、それは許容されない。キャリヤー粒子が３０〜８ ０ｔＩｍのサイズを有することが好ましい。

第二の変法においては、アプロチニン、ぞの誘導体又はアプロチニン様物質の乾 燥微細化粒子は液化ガスエアロゾル推進剤中に懸濁され、そしてエアロゾルとし て、計量装置（バルブ）を有する圧縮容器に適用される。液化推進剤は室温（２ ０’Ｃ）において且つ大気圧においてガスである。すなわち、その沸点は大気圧 において２０゛Ｃ未満でなければならない。液体推進剤は非毒性でなければなら ない。

ジメチルエーテル、低級アルキルのクロライド、低級アルカンの弗素化、もしく は弗素・塩素化推進剤又はそれらの混合物を推進剤として使用することができる 。これらの推進剤はクロロフルオロメタン（「フロベレント１２Ｊ）、）リクロ ロフルオロメタン（「フロペレント１１」）、モノクロロジフルオロメタン（「 プロペラント２２」）、１．２−ジクロロテトラフルオロエタン（「プロペラン ト１４４」）である。

また、本発明に従って、圧縮した粉末状エアゾル組成物は、高圧ガス及びエアゾ ル粒子の二次成形中に活性物質の溶解性を改良し、かつまた吸着性を増強しそし て呼吸上皮上のエアゾルの刺激作用を軽減する界面活性剤を含有してもよい。

界面活性剤は、液状もしくは固形状の非イオン性界面活性剤でありうる。好まし くはそれは、グリセロール、植物油！（ミント、海狸香、ユーカリ）、オレイン 酸もしくはパルミチン酸から成る群より選択され、それらは５重量％までの量で 使用される。界面活性剤の使用の強制的条件は、その高圧ガスとの相溶性である 。高圧ガスへの界面活性剤の熔解性が高い程、界面活性剤としてのその活性は高 い。

組成物がドライ非圧縮粉末の形、すなわち、吸入用カプセルである場合には、使 用されるポリペプチドの一回量は０．０１〜２０．０＋ｍｇ、好ましくは０．０ ５〜０．５　ｍｇに変化可能である。

組成物が圧縮エアゾル組成物の形である場合には、エアゾル容器のバルブが０． ０２５〜０．２５社、好ましくは０．０５〜０．１ｍＬの一回量の噴霧を提供す ることが望ましい。

以下に提案された本発明の特定の態様の具体例を挙げる。

例１ アプロチニンの水性溶液からのエアゾルの製造及びマウスについての一回量の計 算 １ｍ中１，５００〜１０，０００カリクレイン（Ｋａｌｌｉｋｂｒｅｉｎ）抑制 性単位（ＫＩＵ）のアプロチニン（ａｐｒｏｔｉｎｔｎ、　Ｇｏｒｄｏｘ）を含 有する水性溶液を、圧縮エアスプレー用システムを備えた突出型装置の空気発生 器によりマウスインキュベージタン室に分散せしめた。アプロチニンの液滴由来 のエアゾルを圧縮気流によって生成せしめた。室内へのエアゾル混合物スプレー の速度（■ｃ）は９リットル／分であり、アプロチニン溶液の分散強度（Ｑ、） はＯ，ｂ＋Ｌ／分であった。生成したエアゾル中のアプロチニン濃度を、式Ｃｃ ＝Ｃ，・Ｑ、／ＶＣにより計算すると、それは０．０１７〜０．１２にＩＩＪ／ ｍＬであった。マウスでの実験のほとんどを、０．０５〜０．１０　ＫＩＤ／ｍ Ｌの濃度のエアゾルを用いて実施した。１匹のマウスが受けた薬用量を、式％式 ％（ 上式中、ＣＣ一時間を当りの室内のアプロチニンの相対累積濃度；Ｐ−マウス重 量（６〜ｌｏｇ）；Ｖ−マウスの特異的呼吸容量（１，２ｍＬ／ｇ／分）；Ｒ− マウス呼吸管中にとどまるエアゾル粒子の係数（０，７５）　；により計算した 。室外へ流出した空気のスピードは、室内へのエアゾルスプレーのものと同じで あり、係数Ｃｔは１と同等であるとみなした。計算の結果は、アプロチニンの平 均薬用量が５０〜１５０ＫＩｔｌ／マウス／日（１日当りのマウスの体重１ｇ当 り５〜１５ＫＩＵ）となった。ＩＫｌ［１は、０．３５ＴＩＵ及びアブロヂニン タンパク質０．１４μｇにほぼ対応する、 大気中におりるエーロプール安定性を改良し、その気道上皮に対Ｖる吸着を増強 するためｔ、−１いく′っがの実験において、溶液に界面活性剤を添加した・ノ ニーオ暴・洗浄側（Ｔｗｅｅｎ−８０またはＴｒｉｔｏｎ−Ｘ−１００）すｊよ び／またはグリセ「１−ルで、Ｍｌ純濃賓をそれぞれ０．０５−・−１０容看％ および０゜０１〜５，０７費％、−Ｊ−る。

第１図は１．チセンハーに供給されたアプロチニンエーロゾル粒子の分散プロフ ァイルを示す１粒￥−の直径およびそれろのエルロゾール中の重量含量を１７− ザーコ゛何・ローラーＭａｌνｅｒｎ−２２００により記録１−７だ。

縦座標」−−一エーロゾール中の所定の粒径の粒子の相対型を含量、重量５、槓 座欅−トー粒径（μｍ）４こよる粒子の類別＝１（直径０．５〜３．８）、２（ ３，８−６，５）、３　（６，５〜８．５）、４（８，５〜１０．５）、　５　 （１０，５〜１３．０）、６　（１３，８〜１６．７）、７　（１６，７〜２５ ．０）、８　（２５，１〜３５．０）　。

９　（３５，１〜４２．０）、１０　（４２，１＝−５３，５）、１１　（５３ ，５〜９０．５）　、粒子の９５％が３．８μｍｎまでの粒径であり、５％が６ ．５μｍまでの粒径であることが認められるであろう。そのような径の粒子は気 流、中で急速に乾燥し７、そのようなエーロプール中の水の濃度は空気湿度に近 いものであった（約０．０１ａ＋ｇ／　ｄ　）。

例２ 圧縮された粉末アプロチニンエーロゾルを調ａするために、Ａ　ＷＤ社（ドイツ 国）製のコントリカル（Ｃｏｎｔｒｙｃａｌ）　という名称の乾燥粉末か、ある いはＧｅｄｅｏｎ　Ｒｉｃｈｔｅｒ社及びＢｅｈｒｉｎｇ社製の凍結アプロチニ ン水ン容液からの真空凍結乾燥された粉末を使用した。粉末を５〜１２０ｐｓｉ Ｈのいろいろな圧力下に気流粉砕機で分散させ、続いて種々の分散度のワラクシ ３ンを混合して、０．５〜２０／／ｍの寸法範囲の粒子の混合物を得た。

０．０６ｄのユーカリ油を、３重量部の「プすゴベラント１１４」と１重量部の 「プロペラン目２」からなる混合物６ｍで希釈し、その後この液を、上記アブＩ ：ｉチニン粉末５０ｍｇと、粒子寸法範囲３０〜１ｏｏμｍのラクトース２５０ ｍｇと、０．０５ｄ／７＋　ライ７　（Ｔｌｄｉｎ）　−８０（７）懸ｆｉｆｉ ヲ作ルために使用し、この懸濁液を、単一の用ｉ　０　、０５　Ｉｌｌの分散液 用に較正した弁付きの６ｄのアルミニウム容器内に入れた。弁を押して、エーロ ゾルを分けたものをマウスの入った室内に供給した（１時間当り８〜１８回供給 ）。室内のアプロチニンエーロゾル濃度を例１のものに近づけるよう、エーロゾ ルの用量を選んだ。暴露室内のこの濃度を維持するため、エーロゾルを３−６分 ごとに供給した。

例１で説明したように調製したアプロチニンエーロゾルの治蒙及び予防効果をマ ウスで調べた。

マウス病源性インフルエンザＡ／アイチ／　２　／６Ｂ　（ｌ（３Ｎ２）　（オ ルソミクソウィルス）、Ｂ／ホンコン／７２ウィルス、及びバラミクソウィルス センダイ／９６０を、９日齢のニワトリの胚で増殖させた。１から１００までの アプロチニンエーロゾルの化学療法及び予防効果の調査において、５０％マウス 致死量（ＭＬＤｓ。）のウィルスをつ・イルスエーロゾルを鼻腔的注射するがあ るいは吸入によってマウスに投与した。感染の結果として、これらの動物にはウ ィルス性気管支肺炎の病状が現われ、後に空気からの微生物感染を併発した（ウ ィルス−細菌性肺炎）。

次の手順に従って実験を行った。

マウスを５０ＭＬＤｓｏ／マウスの量のＡ／アイチ／　２　／６Ｂまたはセンダ イ／９６０ウイルス、あるいはＩ　ＭＬＤｓｏ　／マウスの量のＢ　／ＩＩＫ／ ７２ウィルスに感染させ、次いでこれらの感染マウスのうちの一つの群（１群当 り２０〜３０匹）を室中においてガス−水混合物に、そしてもう一方を室中にお いてアプロチニンエーロゾルに、毎日２〜４回、３０〜６０分間さらした。肺の 炎症の強さとウィルス力価が最大に近づいたら、感染５日後に肺の病変を評価し た。このために、各群の２匹のマウスから肺を取出し、て組織学的に及び目視に よって調べた。

アプロチニンなしのガス−水混合物の吸入で処理した対照マウスは、実際上全部 （１００％）の肺炎組織（ウィルス−細菌性肺炎）を伴う完全出血性の炎症を示 した。アプロチニンエーロゾルの吸入で処理したマウスでは、炎症の強さはそれ ほど目立たず、出血性の炎症は肺領域の約３０〜５０％に及んでいた。肺に炎症 が及ぶ同様の様式が、センダイ／９６０ウイルス及びＢ／Ｈに／７２ウィルスに 感染し、同じようにしてアプロチニンエーロゾルで処理されたマウスの組織学的 及び顕＠鏡検査で認められた。

５０ＭＬＤｓｏのＡ／アイチ／　２　／６８またはセンダイ／９６０ウイルス惑 染マウスに６日間１日５〜６回注入の１０．０００〜１５．０００ＫＩＩＪ　／ マウス／日の用量でＧｏｒｄｏｘアプロチニン製剤の腹腔内投与後、肺の影響は 目視で調べて肺領域の４０〜６０％に広がっていた。従って、アプロチニンの５ ０〜１００ＫＩＩＩエーロゾル用量は、肺疾色の進行をアプロチニン溶液の１０ ，０００〜１５，０ＯＯＫＪυの非経口注射に比べてより効果的に阻害した。

また、治療効果の基準は動物の重さ増加であり、既に確立されているように、そ れらの回復を示す。図２はインフルエンザＡ／アイチ／２／６Ｂウィルスに感染 したマウスの重さの変化の力学を示す。

２０〜３０匹／′グループのマウスは５０門ＬＤ５゜／マウスの投与量で感染さ れ、チマンバーの中で標準法によりアプロチニンエーロゾルで処置された。感染 した後、重さを測定し平均値（ｇ）を縦座標とし、横座標を感染後の日数とした 。

線１は未感染マウスの重さ、線２はアプロチニンで処置し感染したマウスの重さ 、線３はアプロチニンを含まないガス−水混合物で処置した感染コントロールマ ウスの重さである。

６８ウイルスで感染したマウスのグループでは、重さは変化せずに保たれ、次い で動物の死によって減少を始めた。エーロゾル処置をした動物のグループでは、 感染の初期は重さの増加は少ないが、感染の５日後より重さがＩｇ／日で増し、 動物の回復を示した０重さの変化の同様なパターンがコントロールとエーロゾル 処ｔのマウスでセンダイウィルスで感染した動物において籠られた。このように 呼吸系の感染を患う動物に対するアプロチニンエーロゾルの適用は役に立つ治療 効果の努力をし、体重増の速い正常化を証明した。

検討の最終段階において、アプロチニンエーロゾルの保護効果を致死投与量のイ ンフルエンザＡ／アイチ／　２　／６８とＢ　／ＨＫ／７２ウィルスまたはセン ダイ／９６０ウイルスを用いた実験で評価した。インフルエンザＢ　／ＨＫ／７ ２ウィルスはマウスにとって致死度が他の２つのウィルスよりも少ないことを留 意すべきである。

図３ａ、ｂ、ｃ、ｄは該ウィルスで感染したマウスにおけるアプロチニンエーロ ゾルの保護効果を示す、マウスはＡ／アイチ／２／ε８ウィルス（ａ、ｃ）、セ ンダイ／９６０ウイルス（ｂ）、及びＢ／　“ＨＫ／７２ウィルス（ｄ）に、多 重度１（ｄ）または５０（ａ、ｂ、ｃ）ＭＬＤｓｏ　／マウスで感染させ、次に 上記のスケジュールによす６．５日間のアプロチニンエーロゾル吸入（ａ、ｂ、 ｄ）または内部腹腔注射（ｃ）の過程を与えた。感染後の動物の生存率を記録し た。縦軸は生存するマウスの数（累積％）、横軸は感染後の日数である。ｖＡｌ はコントロール感染であるが未処置のマウス、線２はアプロチニンエーロゾルで 処置したマウスである。

図３ｄはアプロチニンエーロゾルがＩ　ＭＬＤｓ。のＢ　／ＨＫ／７２ウィルス で感染したマウスの５０％を死から保護したことを示す、インフルエンザＡとセ ンダイウィルスの１〜ＩＯＭＬＤＳ。の感染投与量は両方の処置方法（非経口注 入とアプロチニンエーロゾルの吸入）は約９０〜１００％の保護を与えたため、 大量の感染投与量をこれらの処１方法の比較のために使用した：約５０御１００ において、未処置動物のグループの１００％致死率がインフルエンザ（パネルａ ）において５〜７日間以内に観察され、パラミクソウィルス注入（ｂ）において ６へ・８日間以内に観察された。処置した動物では、死亡がコントロールマウス よりも１〜４日遅く始まり、またその保護効果は約４０〜５０％であった。アプ ロチニンの（１５，０ＯＯＫＩＵ／マウス／日、５〜６回注射／日）Ｄ腔内注射 によって処置したマウスのパラレルのグループでは保護効果は第３ｃ図にあるよ うに３０％であった。この一連の実験の結果、低い投与量のアプロチニンエーロ ゾルの適用による高い治療効果が最終的に確証された。

アプロチニンエーロゾルの予防効果を評価するために、未感染のマウス（１０匹 ）及び、２匹にインフルエンザＡ／アイチ／　２　／６８ウィルスを約０．　１ ＭＬＤ５６／マウスを感染させて、同じかごに入れた。この１２匹のグループを ガス−水混合物及びアプロチニンエーロゾルで６〜７日、１日に３〜４回、各３ ０〜６０分暴露して処理した．アプロチニンなしにこの混合物を与えた対照グル ープでは、炎症の肩車が肺の中に検出され、多くの場合ウィルスが肺の中に検出 された。前記エーロゾルで処理した動物には、ウィルスも炎症肩車も検出されな かった。従って、このグループでは病気のマウスから正常なマウスへのウィルス の伝染は阻止され、アプロチニンエーロゾルの予防効果が観察された。

加えて、例１のようにして調製されたアプロチニンの水溶液を用いる実験で、界 面活性剤、特にＴｗｉｎ　８０、グリセリンの、インフルエンザ気管支肺炎に対 するマウスの治療効果への影響を検討した。

その結果を次の表に示す。

１、界面活性剤なし　４８ ２、０．３容量％Ｔｗｉｎ　８０　６０３、０．２容量％グリセリン　５６ 表かられかるように、エーロゾル組成物に界面活性剤を導入すると、エーロゾル の保護効果は１０％〜２０％増した。

例２のようにして調製した圧縮粉末エーロゾルを、水性エーロゾル組成物を用い る上記実験と同様にして、暴露室内で保育した、実験的に感染したマウスについ て試験した。この一連の実験で粒度０、５〜１００μｍの乾燥アプロチニンエー ロゾルの保護効果はインフルエンザＡ及びセンダイウィルスに対して約４０％〜 ６０％であることが見出された。

最初の臨床実験が、８２Ｎ２型インフルエンザウイルスにより発生したインフル エンザの間に行なわれ、インフルエンザに感染しり子供の顔面マスク又はへッド チャンバー（ｈｅａｄ　ｃｈａｍｂｅｒ）から吸入させて投与したアプロチニン エーロゾル（Ｇｏｒｄｏｘ調製）の治療効果が立証された。抗原保有期間の短縮 が見られた：未処置患者ではウィルスは鼻咽頭に約６日間検出されたが、アプロ チニンエーロゾルで処置した患者ではウィルスの抗原は３日迄の量検出された。

これはウィルスが体から早期に除かれたことを示す。アプロチニンエーロゾルの 施用は鼻感昌症状、せき、上部呼吸路のカタルの病気の持続期間を２〜３日短縮 し、２次合併症の発生を防いだ。

発明の分野 アプロチニン、その誘導体、又はアプロチニン様物質をヘースとする医薬エーロ ゾル組成物は、多数のウィルス群（インフルエンザ、バラインフルエンザ、肺炎 ウィルス、はしか、おたふくかぜ、呼吸性シンシチウムウイルス、コロナウィル ス、ロノウイルス（ｒｈｏｎｏｖｉｒｕｓｅｓ）　、アデノウィルス）、人間及 び動物の呼吸路の病気の原因物質に対する治療及び予防薬として大規模な医学、 獣医学上の応用を見出すであろう。

浄書（内容に変更なし） Ｆ広召ｄ 手続補正書（方式） ％式％ １、事件の表示 ＰＣＴ／ＲＵ　９２１００１６４ ２　発明の名称 医薬エアロゾール組成物ならびにそれらのウィルス疾患の治療および予防用途 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 氏名　ジルラフ２オレグ　ベトロピチ（外１名）４、代理人 住所　〒１０５東京都港区虎ノ門−丁目８番１０号氏名　弁理士（７７０９）宇 　井　正　−、−二→ ６、補正の対象 （１）　特許法第１８４条の５第１項の規定による書面 （２）明細書、請求の範囲及び要約書の翻訳文（３）図面の翻訳文 ７、補正の内容 一中一榊刺午斗事−５トか１ 薯→斗番 （１）−（子　明細書、請求の範囲及び要約書の翻訳文の浄書（内容に変更なし ） （２）手　図面の翻訳文の浄書（内容に変更なし）８、添付書類の目録 （１）特許法第１８４条の５第１項の 規定による書面　１通 （２）明細書、請求の範囲及び 要約書の翻訳文　各１通 （３）図面の翻訳文　１通 フロントページの続き （７２）発明者　オフチャレンコ、アレクサンドル　バレンティノビチ ロシア連邦、　１４１７００．モスコフスカヤ　オブラスト、ゲー、ドルゴプル ドニ、デー。

５５／３．クバルチーラ　１５２

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. １．溶液１ｍｌ当り１，５００〜１０，０００ＫＩＵの量で水に溶解されたアプ ロチニンの群からのプロテイナーゼの抑制因子を活性物質として含むことを特徴 とする製薬エーロゾール組成物。
2. ２．さらに界面活性剤を含むことを特徴とする請求項１記載の製薬エーロゾール 組成物。
3. ３．アプロチニン、その誘導体またはアプロチニン様物質からなる群から選ばれ るプロテイナーゼ抑制因子の固体超微粉砕粒子であって、０．５〜２０μｍの範 囲の平均粒径を有する粒子を活性物質として含むことを特徴とする製薬エーロゾ ール組成物。
4. ４．活性物質が製薬上許容されるキャリヤーと組み合わされていることを特徴と する請求項３記載の製薬エーロゾール組成物。
5. ５．さらに製薬上許容される液化ガス噴射剤を含むことを特徴とする請求項３記 載の製薬エーロゾール組成物。
6. ６．さらに製薬上許容される液化ガス噴射剤を含むことを特徴とする請求項４記 載の製薬エーロゾール組成物。
7. ７．さらに界面活性剤を含むことを特徴とする請求項５記載の製薬エーロゾール 組成物。
8. ８．ヒトおよび動物のウイルス性疾患の治療および予防に用いられることを特徴 とする請求項１または２記載の製薬エーロゾール組成物。
9. ９．ヒトおよび動物のウイルス性疾患の治療および予防に用いられることを特徴 とする請求項３〜７のいずれかに記載の製薬エーロゾール組成物。
10. １０．活性物質が肺および下部気道に供給される場合に有効であり、られる超微 粉砕固体粒子の平均粒径が０．５〜４μｍであることを特徴とする請求項３記載 の製薬エーロゾール組成物。
11. １１．活性物質が鼻咽頭および上部気道に供給される場合に有効であり、られる 超微粉砕固体粒子の平均粒径が４〜１００μｍであることを特徴とする請求項３ 記載の製薬エーロゾール組成物。