JPH06503320A - 再活性化酸素種に対する防御剤の使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 再活性化酸素種に対する防御剤の使用 背景技術 本発明は再活性化酸素種の有害作用を、阻害、防御、予防、または治療するため の方法に関する。また、本発明は虚血および再潅流性傷による組織の損傷を防御 する方法に関する。

過酸化ラジカル（０２つ、および過酸化水素（ＨｚＯＪおよび水酸基等の他の高 度に反応性の酸素種（本明細書中、反応性酸素種または“ＲＯＳ”と称する）は インビボで酵素的に、自然発生的に、および光化学酸化反応によって産生される 。ＲＯＳは電子移送の間にミトコンドリアによって産生される。０２−１ＨｔＯ ２の他の細胞内供給源は小胞体、ベルオキシソーム、および核および細胞質膜で ある。ＲＯＳの生産に関連する異常には以下のものが含まれる：細胞性リポ多糖 類エンドトキシン（ＬＰＳ）によって誘発される滑膜炎、アジュバント誘発性関 節炎によって引き起こされる炎症、ブレオマイシン誘導性肺繊維症、再潅流性傷 害、移植拒絶反応、高酸素症、および酸素および光によって引き起こされるあら ゆる疾患。ＲＯＳは高温性細胞損傷に関与しており［オマーら（Ｏｍａｒ　ｅｔ 　ａｌ、　）　Ｃａｎｅｅｒ　Ｒｅｓ、　４７：３４７３．１９８７１　、そし て温度感受性は遊離ラジカルの低い除去速度に関連していることが示唆された。

ある種の物質が過酸化物または他の酸素遊離基を誘発し得る。そのようなＲＯ８ 活性は、通常用いられている、モルモット肺胞マクロファージによる反応性酸素 代謝物（それは分光計でＡａ　ａ　ａ　−６４゜ｎｍにより測定可能である）の 産生を誘導する能力ロレールら（Ｌｅｕｒｓ　ｅｔ　ａｌ、　）　Ｂｉｏｃｈｅ ｍｉｓｔｒｙ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　１８（２）：２９５−２９９、１ ９８９１あるいは既知の炎症または化学発光試験モデルにより測定することがで きる。ＲＯＳの産生を促進すると知られている物質は以下の市販品から入手可能 な化合物を含むがこれらに限定されない：ブチオニンスルホキシミンのようなグ ルタチオン合成阻害物置、アントラサイクリン類、例えばアドリアマイシン（ド キソルビシン）、アドリアマイシノン（ドキソルビシン）、ダウノマイシン、ダ ウノマイシノン、ダウノルビシン誘導体、例えば５−イミノダウノルビシン、ユ ビキノン、酸青（Ａｃｉｄｓ　Ｂｌｕｅ）　２５．８０および４１．酸緑（Ａｃ ｉｄ　Ｇｒｅｅｎ）　２５、アントラキノンおよびその誘導体、例えば２−ブロ モアントラキン、１，２−ジヒドロキシアントラキノン、１，８−ジアミノアン トラキノン、２．６−ジアミノアントラキノン、１，５−ジクロロアントラキノ ン、１．２−ジアミノアントラキノン、および２−クロロアントラキノン、キニ ザリン、アントラルフィン、キラリザリン、アロエエモジンおよび関連化合物、 例えば５−ニトローアロ二一エモジン、５−アミノーアロエーエモジン、２−ア リルアロエーエモジン、アベルフィン、カラフンギン、アリザリンコンブレキソ ンニ水和物、ケルセチンニ水和物、酸黒（Ａｃｉｄｓ　ｂｌａｃｋ）　４８、プ ロシトキシド、ロイコトロフィナ、アジメキソン、およびメトキシシンーナモニ トリル。これらのＲＯＳ誘導性物質は静脈内投与または他の所望の方法で治療的 に投与することができる。

スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）として知られている１群の金属タンパ ク質類は酸化−還元反応（２０，−＋　２　Ｈ“→Ｈ，Ｏ，＋Ｏ，）を触媒し、 酸素毒性に対する防御機構の一部を提供している。真核性細胞は、細胞質ゾルに 優勢に見いだされる銅−亜鉛ＳＯＤと、主としてミトコンドリアに見いだされる Ｍｎ５ＯＤとを含有する。細胞外ＳＯＤは一義的に血漿、リンパ、および滑液等 の細胞外液に見いだされるが、組織内でも発生する［Ｈｊａｌ＋ａａｒｓｓｏｎ 　ｅｔ　ａｌ、、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ。

＾ｃａｄ、　Ｓｃｉ、　［ＪＳＡ　８４：６３４０．１９８７］。

科学文献は、ＳＯＤの投与が広範な臨床適用に有用であり得ると示唆している。

可能な適用として、発がんおよび腫瘍進行の阻止、炎症の治療、抗がん剤の細胞 毒性および心臓毒性作用の軽減、虚血性組織の保護、スペルマドシア（ｓｐｅｒ ｍａｔ。

ｚｏａ）の保護等が含まれる（欧州特許出願０２８４１０５Ａ２）。また酸素遊 離基はインフルエンザウィルス感染の病因に関与しており、ＳＯＤ投与がそれを 予防し得ることも示唆されている［オダら（Ｏｄａ　ｅｔ　ａｌ、）　５ｃｉｅ ｎｃｅ　２４４：９７４−９７６゜１９８９］。

虚血は細胞損傷を引き起こし、もしも十分な長さ続くとそれは細胞を死滅させる 。短期間の虚血後の再潅流は、長期的に見ればよいことであるが、しばしば再酸 素供給に際し、おそらく反応性酸素種の形成およびそれによると思われる組織の 初期損傷をもたらす。心臓、皮膚、腸、すい臓および様々な組織でのこのような 状況が記述されている。血栓崩壊治療の間の再酸素付加の際の防御、および移植 のための器官の保存の際の酸素付加からの防御も重要である。

Ｄ−因子（以下、ＤＦと称する）は既知の分子である。これは培養ラット交感神 経細胞による神経伝達物質表現型の選択を指令する、胚幹細胞および骨髄細胞の 成長および分化を制御する、および骨再形成（リモデル）および肝細胞の急性相 タンパク質合成の刺激を指令することができる。それはＤＩＡ、ＤＩＦ、ＤＲＦ ＳＨ３ＦＩ　Ｉ　Ｉ、ヒトインターロイキンＤＡ　（ＨＩＬＤＡ）およびＬＩＦ 　（白血病阻害因子）とも呼ばれる。このサイトカインは、それが胚、および成 人の場合は多くの組織および単核細胞、１核細胞、胚幹細胞、肝細胞、脂肪細胞 、骨芽細胞および神経細胞等の細胞型の機能、成長および分化を制御する機能に おいて、ＩＬ−６およびＴＧＦ−ベータにたとえられる［ヤマモリら（Ｙａｍａ ａ＋ｏｒｉ　ｅｔ　ａｌ、　）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２４６：１４１２　（１９８９ ）、ロウエら（Ｌｏｖｅ　ｅｔ　ａｌ、　）　ＤＮＡ　８（５）＋　３５１　（ １９８９）@； アベら（Ａｂｅ　ｅｔ　ａｌ、）　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｔ、　２６４（１５） ：　８９４１　（１９８９）コ。ＤＦはまた骨髄性白血病細胞の分化を誘導する ことが知られており、従って当業界では骨髄性白血病の治療に有用であることが 示唆されている。ＤＦは現在、商業的発展のために大量生産し得ない複雑な方法 で精製されている［ヒルトンら（Ｈｉｌｔｏｎ、　ｅｔ　ａｌ、）　Ａｎａｌｙ ｔ、　Ｂｉｏｃｈｅ＋＋、、　１７３：３５９　（１９８８）］　。照射や化学 療法による損傷の予防におけるＤＦの使用がＵＳＳＮ　０７１５０７．３４１　 （１９９０年、４月１０日出願）に開示されている。

成長ホルモン（ＧＨ）およびヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）は脳下垂体から分泌さ れる。成熟型ｈＧＨは１９１アミノ酸からなり、分子量約２２．０００である： その配列および性質は、例えばＨｏｒｍｏｎｅ　Ｄｒｕｇｓ、　Ｇｅｕｒｉｇｕ ｉａｎ　ｅｔ　ａｌ、、　ＵＳＰ、　Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ、　Ｒｏｃｋｖｉｌ ｌｅ　ｌｉｄ、　、　（１９８２）に記載されている。

ｈＧＨはこれまで下垂体機能低下性小人症の治療に用いられており、これによる 火傷、傷の治癒、ジストロフィー、骨の癒着、汎性胃出血および擬関節の治療が 示唆された。ＧＨの主な生物学的作用は成長の促進である。影響を受ける器官系 には、骨格筋、結合組織、筋肉、および肝臓、小腸、および腎臓などの内蔵が含 まれる。成長ホルモンはその作用を細胞膜上の特異的な受容体との相互反応に、 よって発揮する。肺機能不全およびベンチレーター依存の治療のための成長ホル モンの投与がＰＣＴＷＯ９０１０９１８９（１９９０年８月２３日公開）で提案 されたが、この出願では肺不全の原因を扉閉塞、肺炎、喘息、気腫、がん、自己 免疫疾患、発作のような神経学的異常、および胸部変形等の自然に起きた疾患と 同様、物理的な障害にあるとしている。

インターロイキン−１（ＩＬ−１）は活性化マクロファージによって生産される 。少なくとも２つの型、αおよびβが存在する［マーチら（ｌ［ａｒｃｈ　ｅｔ 　ａｌ、　）　Ｎａｔｕｒｅ　３１５：　６４１−６４７　（１９８５）］。Ｉ Ｌ−１は広範囲に及ぶ生物学的作用を媒介する：それは線維芽細胞の増殖を刺激 し、これらの細胞内でのコラゲナーゼ、プロスタグランディンＥ、およびインタ ーフェロンベーター２の合成を誘発し、脂肪細胞内でのりボタンバク質リパーゼ の活性を低下し、破骨細胞を活性化することが見いだされた。

腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）はミトゲンで刺激されたマクロファージ（ＴＮＦ−α） またはリンパ細胞（ＴＮＦ−β）によって生産され、これらはある種の悪性に形 質転換された細胞には毒性であるが、ある種の正常細胞には無害である［カース ウェルら（Ｅ、Ａ、Ｃａｒｓｖｅｌｌ　ｅｔ　ａｔ、）　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　７２：３６６６゜１９７５　F シュガーマンら（Ｂ、　Ｊ、Ｓｕｇａｒｍａｎ　ｅｔ　ａｌ、　）　５ｃｉｅｎ ｃｅ　２３０：９４３．１９８５：　シュルツエら（Ｓｃｈｕｌｔｚｅ　ｅｔ　 ａｌ、）　Ｊ、Ｉｓｍｕｎｏｌ、　１４０：３０００．１９８８］　、　ＴＮＦ −ａは癌または重篤な感染症患者における消耗および悪液質に関与しており、Ｔ ＮＦ−αおよびＮＦ−βのいずれも多くの他の生物学的作用を媒介することが知 られている。ＴＮＦはまたＭＭＣ抗原を誘発することが知られている。本発明者 らは、ここに、ＴＮＦが様々な形質転換された細胞系および正常な細胞系［ウオ ンら（ｌｏｎｇ　ｅｔａｌ、）　５ｃｉｅｎｃｅ　２４２：　９４１．１９８８ ］でＭｎ５ＯＤを誘発することと報告する。

ある用量のＴＮＦはマクロファージまたは好中球によるＲＯ９の生成の引金とナ ルコトが報告された［ツジモトら（Ｔｓｕｊｉｍｏｔｏ　ｅｔ　ａｌ、）　Ｂｉ ｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍｕｎ、１３７：１０９４ ．　１９８６；　マ゛ンノくうら（Ｍａｔｓｕｂａｒａ　ｅｔ　ａｌ、　）　Ｊ 、　Ｉｉｍｕｎｏ戟A　１３７ ：３２９５．１９８６；　シャラビーら（Ｓｈａｌａｂｙｅｔａｌ、）　Ｌｅｕ ｋ、Ｂｉｏｌ、４１：１９６．１９８７：　（ベルコーら（Ｂｅｒｋｏｖ　ｅｔ 　ａｌ、　）　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３９：３７８３．１９８７コ。文献 で（ま、あ、る用量のＴＮＦは反応性酸素種による組織損傷を助長することが繰 り返して示唆されてイル［例えば、クラークら（Ｃ１ａｒｋ　ｅｔ　ａｌ、　） 　Ｊ、Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　５ｕｐｐ１．１２Ａ、　ｐ、４０、１９８ ８年１月；スリパンら（Ｓｕｌｌｉｖａｎ　ｅｔ　ａｌ、）　Ｉｎｆｅｃｔ、ａ ｎｄ　Ｉｍｍｕｎｉｔｙ　５６（７）＋　１７２２−１７２９．１９８８；およ びチーゲスら（Ｔｉｅｇｓ　ｅｔ　ａｌ、）　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｐｈａｒｍａ ｃｏｌ、、３８（４）：６２７−６３１．１９８９参照］。

文献には、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１のような他のサイトカイン類が放射線治療 におけるイオン化照射による悪影響、例えば酵素の変成、脂質過酸化物およびＤ ＮＡ損傷等を予防することができること［ネタら（Ｎｅｔａ　ｅｔ　ａｌ、　） 　Ｊ、　Ｉｍｕｎｏｌ。

１３６（７）：　２４８３．１９８７；　Ｎｅｔａ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｌｙａ＋ ｐｈｏｋｉｎｅ　Ｒｅｓ、　５　ｅｔ　ａｔ、前掲；　Ｎｅ狽＝@ｅｔ　ａ ｌ、　、　Ｆｅｄ、　Ｐｒｏｃ、　４６二１２００（アブストラクト）、　１９ ８７：ウルバシエツクら（Ｕｒｂａｓｃｈｅｋ　ｅｔａｌ、　）　Ｌｙｍｐｈｏ ｋｉｎｅ　Ｒｅｓ、　６：１７９．１９８７；　ＵＳ　Ｐａｔｅｎｔ　Ｎｏ、　 ４．８６１．５８７；　Ｎｅｔａ@ｅｔ　ａｌ、。

Ｊ、　Ｉｍｕｎｏｌ、１４０：１０８．１９８８］およびＴＮＦ治療が致死量以 下の細胞毒性薬物または照射によって危険にさらされた動物の造血組織の修復を 促進すること［Ｎｅｔａ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｂｌｏｏｄ　７２（３）：１０９３ ．１９８８コが報告された。最近の記事はＴＮＦｉ二よる予備処理がマウスを致 死的な細菌感染から保護することが報告している［クロスら（Ｃｒｏｓｓ　ｅｔ 　ａｌ、）　Ｊ、Ｅｘｐ、１ｌｅｄ、１６９：　２０２１−２０２７．１９８９ ］。悪影響を及ぼす用量以下のＴＮＦおよび／またはＩＬ−１の投与が以後のＴ ＮＦおよび／またはＩＬ−１投与による悪影響を和らげる事を示している二二の 文献はさらにイオン化照射を増感剤として与えることができるとしている（欧州 特許出願ＥＰ　０２５９８６３　Ａ２）。

また、低濃度のＴＮＦ−αおよびＩＬ−１のいずれかによる細胞の前処理で、以 後のＴＮＦ−αおよびシクロヒキシミド併用治療の致死作用に対する抵抗性が付 与されると報告している［フラッシュら（ｌａｌｌａｓｈ）　Ｊ、Ｉ＋ｎｕｎｏ １．１３２：　２４６４．１９８４；バーンら（Ｈａｈｎ　ｅｔ　ａｌ、）　、 　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃｄ、　Ｓｃｉ、　［ＩＳＡ　８２：３８１４．１９ ８５；ホルタマンら（Ｈｏｌｔａｍａｎｎ　ｅｔ　ａｌ、）　Ｊ、Ｉ韻ｕｏｎ１ ．１３９：　１１６１．１９ｇ？］。不適切な内因性のＴＮＦ濃度は糖尿病およ び紅斑性狼蒼の発症に関与していると示唆された［ヤコブら（Ｊａｃｏｂ　ｅｔ 　ａｌ、）　Ｎａｔｕｒｅ　３３１：３５６−３５８．１９８８］。

サエズら［（Ｓａｅｚ　ｅｔ　ａｌ）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、＾ｃａｄ、Ｓｃ ｉ、ＵＳＡ　８４：３０５６−３０５９．１９８７コはＳＯＤがグルコースの不 足による培養神経細胞の死を予防することを示した。ツアンら［Ｔｓａｎ　ｅｔ 　ａｌ、　Ｊ、Ａｐｐｌ、　Ｐｈｙｓｉｏｌ、　６８（３）＋１２１１−１２１ ９．１９９０１は最近、ＴＮＦ（およびＩＬ−１、未公開データ）の気管ガス注 入がラットを酸素毒性から保護することを確認した。

ホワイトら（ｆｈｉｔｅ　ｅｔ　ａｌ、　Ｊ、Ｃｌ１ｎ、Ｉｎｖｅｓｔ、、　７ ９：１８６８−１８７３．１９８７）はＴＮＦおよびＩＬ−１の併用による前処 理が高酸素にさらされたラットでの肺損傷と死亡率を減少したが、ＴＮＦまたは ＩＬ−１のいずれか単独の腹腔内投与では、ラットの保護は食塩水に匹敵する程 度にすぎなないことを示した。

本発明は供給者から受容患者に提供される組織、骨または器官等の虚血性組織、 またはその酸素供給が阻害されている組織を、ＲＯ５の作用から保護する方法を 提供することを目的とする。

さらに本発明は、再潅流損傷、気管技肺炎形成異常、発作、動脈硬化症、アテロ ーム性硬化症、心筋梗塞症、炎症性自己免疫疾患、ウィルス感染症、炎症誘発性 関節炎、高酸素症、敗血症、糖尿病、インフルエンザ、多発性硬化症、未熟児出 産後の高圧治療、後天性免疫不全症候群、移植拒絶反応または移植損傷、プレオ マイシン誘発性肺繊維症、細菌性ＬＰＳエンドトキシンによる滑膜炎、免疫複合 体による肺損傷、がんの高圧治療、腎疾患、パーキンソン病、鎌状赤血球性貧血 、鎌状赤血球体質、アルコール性または非アルコール性肝硬変、または有害ＲＯ ８関連の他の疾患の阻害、予防または治療法を提供することを目的とするもので ある。

他の本発明の目的は、移植のための潅流液および摘出し潅流された組織を供給す ることにある。

これらのおよび他の本発明の目的は明細書全体を考慮して明らかになるである予 想外にも、そして文献の示唆とは反対に、本発明者らは、ある用量のＴＮＦおよ び／またはＩＬ−１の単独または成長ホルモンおよび／またはＤ−因子との併用 治療がＲＯＳ損傷の予防に有用であることを発見した。

本発明の目的はこれらの保護勧賞（類）　、ＴＮＦ、ＩＬ−１、ＧＨおよびＤＦ 。

のこれら作用を利用する方法によって達成された。１つの好ましい方法では、再 潅流による傷害のおそれのある患者を有効量の、しかし有害量以下の、これらの 物質の少なくとも１つを再潅流の前、その間、その後、しかし好ましくはその前 に投与する。他の態様では、ＲＯ３を伴う状態または疾患（上記）の患者を少な くとも１つのこれら物質の、その状態を防止、阻止または治療するに有効な量を 投与する。

他の好ましい態様は組織移植に関連する。１つの態様では、虚血組織を組織の再 潅流の前にＴＮＦ、ＧＨ，ＤＦおよび／またはＩＬ−１の有効量を投与すること により保護する。この虚血組織はドナーから摘出する前または後に、そしてそれ を受容患者に移す、または移植する前または後に処置される。

本発明はまた、少なくとも１個の上記保護剤の少なくとも１つを薬学的に許容さ れる賦形剤中に含有する潅流溶液、並びにそのような潅流液で潅流された、摘出 された組織を包含する。

他の態様では、保護剤（類）を組織の除去のために備える前に組織ドナーに投与 する。

図面の説明 図１はＴＮＦ前処置による虚血および再潅流による心臓損傷の予防を示す。

図２は再潅流前のＴＮＦ前処置された虚血ラットの心臓でのＭｎ５ＯＤの誘導を 示す。

図３はヒト（Ｈ）（配列番号１）およびネズミ（Ｍ）（配列番号２）Ｄ−因子の 成熟アミノ酸配列である。相同性領域を箱で囲んだ。

図４Ａは実施例２の結果であって、ＴＮＦ−αおよびＤＦによる成熟ラットの酸 素毒性からの保護を図示したものである。

図４ＢはＤＦとＴＮＦとの共働作用を示す。

図５は実施例２の結果であって、ＴＮＦ−αおよびＧＨによる成熟ラットの酸素 毒性からの保護を図示したものである。

図６はグルコース欠損後の神経細胞生存に対するＴＮＦの保護作用を示す。各条 件下での神経細胞の死亡（皿あたり合計１０，０００神経細胞）を示す。

詳細な説明 本明細書中、腫瘍壊死因子またはＴＮＦは、腫瘍細胞溶解、感染性物質の阻害、 ＭＨＣ抗原誘導、およびＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−βに対する抗体により中和さ れるが、他のサイトカイン類では中和されない、などの腫瘍壊死因子の生物学的 性質の１またはそれ以上を表す様々な形のＴＮＦを一般的に指す。ガンマインタ ーフェロンはＴＮＦの抗腫瘍または抗ウイルスアッセイにおいてＴＮＦと相乗的 であり、従って、本発明の実施にあたってＴＮＦと一緒に投与することが望まし い。

特に、本明細書中、有用な腫瘍壊死因子にはＴＮＦ−αおよびＴＮＦ−βが含ま れる。前者は出願中の欧州特許出願ＥＰ　Ｏ１６８２１４Ａ２にその組換え細胞 培養による合成方法と一緒に記載されている。同様に、後者（以前はリンホトキ シンと呼ばれた）とその適当な組換え合成法は出願中の欧州特許出願ＥＰ　Ｏ１ ６４９６５Ａ２に記載されている。これらの出願に記載のＴＮＦ−αおよびＴＮ Ｆ−βは細胞毒性のアミノ酸配列およびグリコジル化変異体を含み、それらも本 発明に使用する。勿論、非組換え供給源から得たＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−βも 本発明の実施に有用である。

ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−βは単独または最も効果的な臨床応答が得られると経 験上決定された割合で互いに混合して用いられる。ＴＮＦは種特異的でないので 、他の動物種、例えばブタまたはウシ由来のＴＮＦ類もヒトの治療に有用である 。ヒトの治療に好ましいＴＮＦは組換え微生物細胞培養由来の成熟ヒトＴＮＦ− αである。通常、ＴＮＦは感受性のＬ−９２９ネズミ細胞に対し、約ＩＸ１．０ ６単位／ｍｇ（ここに、１単位は上記の特許出願における定義と同意義である） 以上の細胞溶解活性を有するであろう。

本明細書に用いているように、“成長ホルモン“または“ＧＨ”という語句は組 換え細胞培養によって製造されたものと同様、天然起源から抽出および精製され たものを指す。“ｈＧＨ”はヒト成長ホルモンを指す。例えば、米国特許４゜３ ２１．８３２を参照。この語句は生物学的に活性なヒト成長ホルモン同等物、例 えば全配列中、１またはそれ以上のアミノ酸が異なるものをも同様に包含する。

さらに、本出願中、この語句はＧＨの置換、欠失および挿入によるアミノ酸変異 体または転写後修飾をも包含する意図で用いられる。

本明細書中、“ＩＬ−１”は組換え細胞培養により製造されたものと同様、天然 起源の抽出および精製で製造されたインターロイキン−１を指す。例えば、マー チ［Ｍａｒｃｈ　ｅｔ　ａｔ、、　Ｎａｔｕｒｅ　３１５：６４１−６４６　（ １９８５）］参照。この語句は生物学的に活性なＩＬ−１同等物、例えば全配列 中、１またはそれ以上のアミノ酸が異なるものをも同様に包含する。さらに、本 出願中、この語句はＩＬ−１の置換、欠失および挿入によるアミノ酸変異体また は転写後修飾をも包含する意図で用いられる。

図３に記載のヒト（Ｈ）およびネズミ（Ｍ）ＤＦの成熟アミノ酸配列はＥＰ　２ ８５゜４４８　（１９８８年１０月５日公開）特に図２６に、その組換え細胞培 養における製造方法をも含めて開示されている。ギアリングら［Ｄ、　Ｐ、　Ｇ ｅａｒｉｎｇ　ｅｔ　ａｌ、　、　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、　１ ６：９８５７（１９８ｇ）コ、ゴッホら［Ｎ、　Ｍ、　Ｇｏｕｇｈ　ｅｔ　ａｌ 、　、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　ＡｃａпA　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ ８５：２６２３−２６２７　（１９８８）］をも参照。本出願の目的から、ＤＦ は（ａ）下記定義の細胞保護活性および（ｂ）図３のアミノ酸配列のいずれかに 相同性のアミノ酸配列を有する任意のポリペプチド、と定義する。

本出願の目的から、相同性、例えばＤＦとの相同性、とは候補ポリペプチドが実 験動物に保護を与えることにおいて機能的な、ＤＦのエピトープを含有するか、 機能的に保存されているアミノ酸変異体を含有することを意味する。このエピト ープの決定は日常的な実験の問題である。最も典型的には、細胞保護活性の減少 または消滅を観察しながらＤＦ分子の系統的置換突然変異を行う。これは一般に 連続的に天然ＤＦ配列の各残基をアラニンで置換することで行われる。好ましく は、置換されるべき残基は（１）動物間で同一に保存されている、（２）ジスル フィド結合したループ上に位置する、そして（３）本質的に親水性のものであろ う。動物種間で同一に保存されている４以上の残基であって、グリコジル化部位 の約３残基内には見いだされないドメインが突然変異に適する。突然変異に好ま しい領域は図３の配列の１２−２５．３４−６０および１２１−１４３である。

どのような場合でも、ＤＦのサイズによって、大多数の置換はＤＦ活性には影響 しないが、もしもある効果が見られたら、それは適当に作用的または拮抗的であ ろう。ＤＦ変異体の大多数は、とりわけ、置換が保存的であれば、少なくともな んらかの細胞保護活性を有するであろう。保存的置換は以下のように定義される 同じクラスからの置換である。酸性（ＡＳＩ）ＳＧｌｕ）　、水酸基様（Ｃｙｓ 、　Ｓｅｒ、　Ｔｈｒ）。

アミド（Ａｓｎ、　Ｇｉｎ）、塩基性（Ｈｉｓ、　Ｌｙｓ、　Ａｒｇ）、脂肪族 様（Ｍｅｔ、　Ｉｌｅ、　Ｌｅｕ、　Ｖａｌ。

Ｇｌｙ、　Ａｌａ、　Ｐｒｏ）、および芳香性（Ｐｈｅ、　Ｔｙｒ、　Ｔｒｐ） 。９個のＣ−末端疎水性残基の置換は、ただ、他の疎水性残基との置換であるべ きである。最初の３個のＮ−末端残基は欠失、または自由に置換してよ（、Ｎ− 末端へのセリン残基の挿入も含む。

あるいは、加えて、活性部位は無傷の天然ＤＦに対する抗体を惹起し、中和抗体 をスクリーニングし、その中和抗体が結合する部位を決定することにより同定で きる。ＤＦに対する中和抗体はまた、特に、他のＤＦエピトープに対する非中和 抗体と一緒にサンドイッチ型イムノアッセイに用いる場合、ＤＦの診断的イムノ アッセイにおける用途が分かるであろう。

相同性配列では一般に、相同性の決定において、図３の天然配列のいずれかに関 して候補分子への挿入または欠失を無視し、同一のアミノ酸に基づき、約３０％ 以上が相同である。約５０．７０および９０％相同性は、その分子が必要な細胞 保護作用を有するかぎり、本発明の範囲に包含される。

本明細書で議論している細胞保護剤、例えば、ＤＦ、ＧＨ，ＴＮＦ、およびＩ　 。

Ｌ−１はその物質の非グリコジル化型と同様にグリコジル化変異体、該物質と異 種ポリペプチドとの融合、および該物質の断片を含む。ただし、その変異体が必 要な細胞保護活性を所有していることを条件とする。

製剤は、既にＲＯ３による損傷の予防的使用が示唆された化合物と同様、本明細 書記載の状態および疾患の治療への使用が既に示唆された化合物を含んでいてよ い。アスコルビン酸塩のような抗酸化剤、組織プラスミノーゲン活性化剤のよう な線維素溶解剤、および再潅流による傷害の阻止のための使用が以前に示唆され た他の化合物も含めることができる。ＴＮＦのＭｎ５ＯＤ−誘導活性を変えるこ となく、ＴＮＦおよび／またはＩＬ−１の高用量の毒性を阻害する物質、例えば グルココルチコイドおよびインドメタシン、も本発明の実施に用いることができ る。ＭＨＣ抗原の誘導を阻害する物質も投与することが望ましい。ＲＯ８に酸化 還元的に作用する化合物も製剤に用いることができる。保護剤（類）は半減期ま たは治療活性の改良または促進のために既知の物質と一緒に適当に製剤化し得る 。これらの他の物質または治療法はＴＮＦ、ＩＬ−１、ＧＨおよび／またはＤＦ と治療において同時にまたは連続的に用いられる。

ＴＮＦＳＤＦＳＧＨおよび／またはＩＬ−１は必要なコファクターと一緒に滅菌 した等張性製剤内に含ませる。製剤は１またはそれ以上の保護剤を含んでいて良 い。製剤は好ましくは液体、そして通常、普通の安定剤および／またはインシビ エント（ｉｎｃｉｐｉｅｎｔ）と−緒に含有する生理食塩水である。組成物はま た最終的に溶液にして到達させる凍結乾燥粉末の形で供給してもよい。他の非経 口性溶液またはバッファーも用いることができるが、食塩水は適当な担体である 。

薬学的な意味で、本発明の文脈から、治療有効量のＴＮＦ、ＤＦ、ＧＨおよび／ またはＩＬ−１とは正常な細胞をＲＯ８の有害作用から保護するに有効な量を指 す。ＴＮＦおよび／またはＩＬ−１＋ＧＨ１およびＴＮＦおよび／またはＩＬ− １＋ＤＦは高酸素症等によって起こる酸素フリーラジカル障害に対し、相乗効果 のある保護を与えるので、特定の物質を相対的に少量、投与することになるであ ろう（図４および５参照）。

現在ではＭｎ５ＯＤの誘導は細胞を損傷から保護するには十分でないと言われて いるが、そのＴＮＦによる誘導の監視は本発明によるＴＮＦ活性を示すのに好都 合である。図２に示すように、ＴＮＦは再潅流前にＴＮＦで処理した虚血ラット の心臓内でＭｎ５ＯＤを誘導する。

投与されるＴＮＦの量は、医師には良く知られているように、患者の種類、用い るＴＮＦの性質、例えば、その活性および生物学的半減期、製剤中のＴＮＦ濃度 、投与の速度、関与する患者の臨床耐性、患者の病理学的状態等に依存するが、 ヒト患者またはヒト組織に投与されるＴＮＦの治療有効量は一般に約１−２５０ ｇｇ／ｍ”／用量であり、好ましくは約１−１０μｇ／ｍ！、最も好ましくは１ ０μｇ／ｍ　２である。医師が任意のＴＮＦに関する臨床経験に基づいて治療用 量を調節すると良いであろう。好ましくは、ＴＮＦは静脈内投与または筋肉内投 与する。

使用されるＤＦ、ＧＨＳＴＮＦおよび／またはＩＬ−１の量は高酸素の使用、照 射または化学療法の使用、患者の状態、用いる物質の活性、投与経路、および通 常の技術者に理解される他の影響を考慮し、治療プロトコールにより変化する。

マウスでは、ＤＦ約７．５μｇｉ、ｐ、／マウスが許容され、約０．５μｇ−２ ０μｇ／日が、最低限、細胞の保護に有効な最小量から、安全かつ適当な上限の 量である。明らかに、用量は他の動物およびヒトでは異なり、また投与経路に依 存するであろう。マウスへのＩＬ−１の治療有効量は約０．５から２５ナノグラ ム／ｇマウス体重である。

ｈＧＨに関しては、ヒトへの適当な投与量はＯ，ＯＯＩＩｍｇ／ｋｇ体重／日か ら約０．２ｍｇ／ｋｇ体重／日である。一般に、ＧＨの一日当たりの投与量は約 ０．０５ａｇ／ｋｇ体重であろう。通常、約０．０７から０　、１５　ｆｆ１ｇ ／ｋｇを一日１またはそれ以上に分けて投与することが所望の結果を得るのに有 効であろう。他の方法では、ＧＨｌ特に時間−放出剤形のＧＨをより少ない回数 投与する、即ち、ある徴候に対し、１日おきまたは３日おきに投与する。今日、 ＧＨをフリーラジカルへの暴露から０−２４時間以内に投与することが好ましい とされている。

本発明の実施においては、治療有効量のＴＮＦ、ＤＦ、ＧＨおよび／またはＩＬ −１をＲＯ８による損傷を有するか損傷のおそれのある患者に投与する。従って 、本発明のある態様では、保護剤を上記のごと（単独または他の物質と一緒に、 ＲＯ３への暴露の前、同時または直後に、一時的な期間内、最も好ましくは２４ 時間以内、に投与する。再潅流の場合には、ＲＯ３への暴露は予め決定され熟考 されているか、あるいは他の治療法の結果であり得る。

他の態様では、上記の疾患および慢性状況の場合には確実なように、患者のＲＯ ８暴露は、より慢性的かつ規則的な性質のものとなる。このような状況では、長 期治療コースの一部として保護剤（類）を投与する。

ある態様では組遭、および器官として知られている複雑な組織の、受容患者内へ の移動および移植を扱う。本発明の目的から、“組織”という語句は筋肉組織、 結合組織、上皮組織、神経組織、血管組織、骨、脳、生殖器、呼吸器、消化器、 排泄器、尿器官、感覚器官、および骨格筋器官等を含むがこれらに限定されない 。

特に好ましい組織は心臓、肺、腎臓、肝臓、皮膚、および骨移植片である。適当 な組織はドナーから摘出されたものと同様、合成されたものである。

患者への転移または移植される前の、ドナーから摘出されるべき組織のＴＮＦ。

ＧＨ，ＤＦおよび／またはＩＬ−１による処理は幾つかの異なる方法で達成され る。保護剤（類）を上記の方法でドナーに投与する。あるいはドナーから摘出す る前または後に、そして患者への転移の前または後に、しかし最も好ましくは再 潅流の前または同時に、組織そのものを処置する。

１９６７年のスターツル（Ｓｔａｒｚｌ）による、最初のヒトでの正常位の肝臓 移植成功例以来、組織移植の方法並びに様々な物質を用いる適当な潅流法が当該 技術分野で一般的に知られるようになった。適当な潅流法および潅流液は、例え ば、カラヨグルら［Ｋａｌａｙｏｇｌｕ　ｅｔ　ａｌ、、Ｔｈｅ　Ｌａｎｃｅｔ 、　Ｍａｒｃｈ　１９．１９８ｇ、ｐｐ、６１７−６１９］に記載されている。

潅流は一般に、下記実施例１に記載のごとく、機械的ポンプを用いて行う。適当 な潅流液は乳酸化リンゲル液、ＵＷ溶液、および薬学的に許容される等張液を含 む。これらの溶液によればＴＮＦ、ＤＦ、ＧＨ，および／またはＩＬ−１処置組 織を連続潅流条件で、またはそれが受容患者に移植されるまで、保存し得る。

本発明の１態様では、ＴＮＦ、ＤＦＳＧＨおよび／またはＩＬ−１を約１−２５ ０ｇｇ／ｍ２と、薬学的に許容される等張液とを含有する潅流液を提供する。

それぞれの型の疾患または傷型について、そして治療される動物について、この 保護効果のために必要な、ＴＮＦ、ＤＦ、ＧＨおよび／またはＩＬ−１の正確に 保護的な量は本明細書記載の値から変動し得、また任意の特定の患者または動物 種のための正確な投与パラメーターは８富的な実験で決定されるだろう。典型的 には、患者または組織は、まず、例えば静脈または筋肉内に剤を投与された後、 ＲＯ８に暴露される。患者または組織を治療のあらゆる好影響または悪影響に関 して監視する。もしも最初の治療が部分的な成功または不成功であれば、所望に より用量または投与経路を修正して、このプロセスを繰り返す。

本発明によれば、あらゆる異なる種の患者を薬学的に有効な量のＴＮＦ、ＤＦ。

ＧＨおよび／またはＩＬ−１を、ＲＯ３の損傷効果を阻止、予防または保護する に十分な期間、薬学的に許容し得る投与法により治療する。

また本発明の実施においては、保護剤（類）の投与は照射、加熱、および／また はＲＯＳ誘導物質によるコース療法の投与と並行して行っても良い。該物質は、 単独で、または他の物質と一緒に、放射線、加熱またはＲＯ５誘導物賀物質露さ れる前、後または同時に患者に投与され得る。放射線、熱またはＲＯ８誘導物質 への暴露は予め決定し、熟考されているか、あるいは他の治療的手段の結果とし ておこり得る。熱またはＲＯ８誘導物質は、照射、および／または付加量のＴＮ Ｆ、ＤＦＳＧＨｌｌＬ−１と一緒に投与することができる。

ＲＯ３誘導物質およびそれらの投与方法は上に記載されている。照射および加熱 は上記の文献に記載されているように、医師に共通に知られている。一般に、照 射は１−８週間の間、総量が約１０００−１２００ラツドになるよう、パルスで 与える。熱は熱ブランケットまたは高熱室のような既知の方法で患者の体組織温 度が３７℃以上、好ましくは４０−４５℃、そして最も好ましくは約４２℃に達 するように与えられる。

高酸素障害を有する、またはそのおそれのある患者にＧＨを単独で投与するとき 、患者は通常の大気条件よりも高レベルの酸素の大気条件下に置かれるであろう 。本明細書記載の発明をより完全に理解するために、以下の実施例を記載する。

これらの実施例は単に例示を目的としており、いかなる点においても本発明を制 限するものと理解されるべきでない。

実施例１ 単離したラット心臓へのＴＮＦの作用 この実験は南カリフォルニア大学において、リンエラディ（Ｌｙｎｎ　Ｅｄｄｙ ）博士により行われた。体重２００〜３００ｇの健常な５ｐｒａｑｕｅ　Ｄａｗ ｌｅｙラットをフェノパルビタールナトリウム３０ｍｇ／ｋｇの腹腔内投与によ って麻酔する。ヘパリン（５００Ｕ）を静脈内投与する。開胸し、心臓を迅速に 摘出し、氷冷バ・ソファ−中に拍動がとまるまで置く。心臓の大動脈根にステン レス鋼製カニユーレを取り付け、逆行するような方法（Ｌａｎｇｅｎｄｏｆｆ） で大動脈を通して潅流する。実験を通して下記の組成のＫｒｅｂｓ−Ｂｅｎｓｅ ｌｅｉｔバッファーを用いた。（最終濃度をｍＭ／Ｌで表示）：ＮａＣ１，１１ ８：ＫＣｌ、４．７；ＣａＣ１，２，５：Ｍｇ５０，１２；ＫＨＰｏ、１．２； ＣａＥＤＴＡ、０．５：ＮａＨＣｏ、２５；グルコース。

１０゜バッファーを９５％Ｏ−５％ＣＯで通気する。潅流は、ぜん動性ポンプを 用い、流速１０ｍ１／分、潅流圧を大動脈流入カニユーレの側腕に取り付けたＰ ２３３　Ａ　Ａ　Ｓｔａｔｈａｍ変圧器で監視しながら行い、Ｈｅｖｌｅｔｔ　 Ｐａｃｋａｒｄ　７７０２Ｂレコーダーに記録する。完全な潅流システムは３７ ℃に維持した恒温調節プレキシガラス（ｐｌｅｘｉｇｌａｓｓ）室内部に維持さ れる。

心臓を３−４分間潅流して血液を除く。２０分の調整期間の後、ポンプを止め、 ９５％Ｏ−５％ＣＯを止めて広範な虚血を開始する。虚血期間の終にポンプを再 始動し、バッファーを再酸素付加する。

心臓細胞からの酵素漏出を、調整期間および再潅流期間の特定の時期に心臓から 採取した排液試料について測定する。乳酸デヒドロゲナーゼ（Ｌ、ＤＨ）活性は 、ピルビン酸を基質としＮＡＤＨの酸化を監視することで分析する。ＮＡＤＨは Ｐｅｒｋｉｎ　Ｅｌｍｅｒ　Ｌａｍｂｄａ　３記録分光光度計を用い、３４０　 ｎｍで監視する。図１に示すように、１０μｇＴＮＦで処理した心臓のＬＤＨ活 性と対照を比較すると、ＴＮＦが虚血および再潅流による損傷から保護している ことが分かる。

実施例２ この実験はベテランズアフェアーズメディカルセンター（Ｄｅｐａｒｔｓ＋ｅｎ ｔ　ｏｆ　Ｗｅｔｅｒａｎｓ　Ａｆｆａｉｒｓ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｅｎｔｅｒ 、　Ａｌｂａｎｙ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ）のミンフツァン（ｌａｉｎ−Ｆｕ　Ｔ ｓ≠氏j 博士により行われた。ＴＮＦ−アルファ、ＴＮＦ−ベータ、ＩＬ−１ベータ、イ ンターフェロン（ＩＦＮ）−ガンマ、成長ホルモンおよびＤＦ単独またはこれら の様々な組み合わせによる、ラットの酸素毒性に対する保護作用を調べた。

細胞保護剤の気管ガス注入およびラットの高酸素への暴露は、基本的にツサンら ［Ｔｓａｎ　ｅｔ　ａｌ、、Ｊ、Ａｐｐｌ、Ｐｈｙｓｉｏｌ、６８：　１２１１ −１２１９．１９９０］の記載に従って行った。簡単に言うと、体重２５０〜３ ５０ｇの呼吸器疾患のない雄性５ｐｒａｑｕｅ　Ｄａｙｌｅｙう・ソト（Ｈａｒ ｌａｎ　Ｓｐｒａｇｕｅ　Ｄａｗｌａｙ、　Ａｌｔａｍｏｎｔ、　ＮＹ、　ＵＳ Ａ）をメトキシフルラン（ＰｉｔＩｌａｎ−Ｍｏｏｒｅ　Ｉｎｃ、、　Ｗａｓｈ ｉｎｇｔｏｎ　Ｃｒｏｓｓｉｎｇ、　ＮＪ、　ＵＳＡ）で麻酔し、１６Ｇｉ。

■、カテーテル（＾ｎｇｉｏｃａｔｈ、　Ｂｅｃｔｏｎ　Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、 　５ａｎｄｙ、　Ｕｔａｈ、ＵＳＡ）を挿管した。カルシウムーマグネシウム不 含バンクの平衡化塩溶液（ＨＢＳＳ）中の保護剤（保護剤および濃度は次節に記 載）ＩＩｌｌ（または対照にはＨＢＳ３１ｍｌ）を投与し、次いで２ｍｌの空気 を気管内カテーテルを通して注入した。保護剤が肺に吸入されたことを確かめる ためにステタスコープ（ＳｔｈｅｔａＳＣＯｐｅ）による胸のアスキュレーショ ン（ａｓｃｕｌａｔｔｏｎ）を行った。ラットが麻酔効果から覚めた後、ラット を１００％０２を１５Ｌ／ｍｉｎで５分間スラッシュした後５Ｌ／ｍｉｎに維持 したルーサイト室（４５ｘ４５ｘ２５ｃｍ”）に５匹づつ入れた。酸素アナライ ザー（Ｉｌｌｕｄｓｏｎ　Ｏｘｙｇｅｎ　Ａｎａｌｙｚｅｒ、　Ｖｅｎｔｒｏｎ ｉｃｓ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ　Ｄｉｖｉｓｉｏｎ、　Ｔｅ５ｅｃ浮撃＝A　ＣＡ。

ＵＳＡ）で監視した室内の０２濃度は、終始、９５％以上であった。ラットは水 および餌を自由に与えられた。対照は室内の空気に暴露（酸素正常状態）した。

結果を図４．５に示し、３日後および７ａ後の生存率を以下に示す。

気管ガス注入　ｎ　３日後　７８後 ＨＢＳＳ　（対照）　４５　０　０ ＤＦ　５μｇ　１０　７０　４０ ＤＦ　１０μｇ　１０　４０　３０ ＧＨ５μｇ　１５　５３　２７ ＧＨ１０μｇ　１０　５０　４０ ＴＮＦ−α　５μｇ　１７　７６　７１ＴＮＦ−α　１μｇ　１０　０　０ ＤＦ５μｇ＋ＴＮＦ１μｇ　１５　１００　９３ＧＨ５μｇ＋ＴＮＦ１μｇ　１ ５　６７　６７示していないデータによると、ＩＬ−１もＴＮＦに匹敵する程、 保護的であった。これらの結果から、ＴＮＦまたはＩＬ−１単独で高酸素による 死の予防に有効であることが分かるであろう。成長ホルモンおよびＤＦは、単独 で用いた場合、同じ目的にとって、効果が少ないが、動物の保護において、ＴＮ Ｆおよび／またはＩＬ−１と協力的（相乗効果を有する）であった。この実験は これらの物質が、未熟児やかん患者への酸素治療を含む、なんらかの高圧治療に 有用であることを本実験はヨハンＡカスラー博士（Ｊｏｈｎ　Ａ、　Ｋａｓｓｌ ｅｒ、　Ｙｏｓｈｉｖａ大学、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ。

Ｎｅｗ　ＹｏｒｋのＡｌｂｅｒｔ　Ｅｉｎｓｔｅｉｎ医科大学）により行われた 。ＴＮＦのグルコース欠如（虚血後の栄養欠如に類似）後の神経細胞の生存への ＴＮＦの保護効果をサエズら（Ｓａｅｚ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ 、Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８４：３０５６−３９５９）の方法に従って行 った。図６に示すようにＴＮＦは強い保護効果を与えることが分かった。最大効 果はＴＮＦ１ｎｇ／ｍｌと示されている。

配列表 （１）一般的な情報 （ｉ）出願人：ジエネンテク、インコーポレイテッド（ｉｉ）発明の名称：反応 性酸素種に対する保護の方法（ｉｉｉ）配列の数：２ （ｉｖ）連絡先： （＾）あて名：ジエネンテク、インコーポレイテッド（Ｂ）通り：４６０ポイン ト　サン　プルノ　プルバード（Ｃ）市：サウス　サン　フランシスコ（Ｄ）州 ：カリフォルニア （Ｅ）国：米国 （Ｆ）ジップコード：　９４０８０ （Ｖ）コンピューター読み取り可能な形式：（＾）媒体型：５．２５インチ３６ ０　Ｋｂフロッピーディスク（Ｂ）：）ンビューター：　ＩＢＩＩ　ＰＣｃｏｍ ｐａｔｉｂｌｅ（Ｃ）オペレーティング’、ｙ　７．　チムニ　ＰＣ−ＤＯ３／ ｍ５−ＤＯ３（Ｄ）ソフトウェアー：　Ｉ）ａｔｉｎ　（ジェネンテク）（ｖｉ ）現出願のデータ： （＾）出願番号・ （Ｂ）出願臼：　２ｌ−ＯＣＴ−１９９１（Ｃ）分類： （ｖｉｉ）先の出願のデータ： （＾）出願番号・ＵＳＳＮ　０７／６０２８５０（Ｂ）出願臼：　２５”−０Ｃ Ｔ−１９９０（ｖｉｉｉ）代理人／エージェントの情報：（Ａ）氏名　アドラー 、カロリン（Ａｄｌｅｒ、　Ｃａｒｏｌｙｎ　Ｒ，）（Ｂ）登録番号：３２．３ ２４ （Ｃ）参照／整理番号：　６０５Ｐ１ （ｉｘ）電話連絡情報： （＾）電話：　４１５／２６６−２６１４（Ｂ）ファクシミリ：　４１５／９５ ２−９８８１（Ｃ）テレックス＋　９１０／３７１−７１６８（２）配列番号： １に関する情報： （ｉ）配列の特徴 （＾）長さ：１７９アミノ酸 （Ｂ）配列の型二アミノ酸 （Ｄ）トポロジー・線状 （ｉｖ）配列番号：１： Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ｉｌｅ　Ｔｈｒ　Ｐｒｏ　Ｖａｌ　Ａｓｎ　Ａｌａ　 Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ｉｌｅ　Ａｒｇ　Ｈｉｓｌ　５　１０　、　１５ Ｐｒｏ　Ｃｙｓ　Ｈｉｓ　Ａｓｎ　Ａｓｎ　Ｌｅｕ　Ｍｅｔ　Ａｓｎ　Ｇｉｎ　 Ｉｌｅ　Ａｒｇ　Ｓｅｒ　Ｇｉｎ　Ｌｅｕ＾１ａＧｌｎ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｇｌ ｙ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ａｓｎ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　Ｔｙ ｒ　Ｔｙｒ　Ｔｈｒ＾１ａ　Ｇ］、ｎ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｐｒｏ　Ｐｈｅ　Ｐｒ ｏ　Ａｓｎ　Ａｓｎ　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｃｙｓ　ＧｌｙＰｒｏ 　Ａｓｎ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ｐｈｅ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｐｈｅ　Ｈｉｓ 　Ａｌａ　Ａｓｎ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　ＧｌｕＬｙｓ　Ａｌａ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　 Ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ａｒｇ　Ｉｌｅ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　Ｔｙｒ　 Ｌｅｕ　Ｇｌｙ８０　８５　’　９０ Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ａｓｎ　Ｉｌｅ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ　Ａｓｐ　 Ｇｉｎ　Ｌｙｓ　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｐｒ。

Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｈｉｓ　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　 Ａｓｎ＾ｌａ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ａｓｐ　ｌ１ｅＬｅｕ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｌｅ ｕ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ａｓｎ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｃｙ ｓ　Ｓｅｒ　ＬｙｓＴｙｒ　Ｈｉｓ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｈｉｓ　Ｖａｌ　Ａｓｐ 　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｔｙｒ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ａｓｐ　Ｔｈｒ　５ｅｒＧｌｙ　 Ｌｙｓ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｐｈｅ　Ｇｉｎ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　 Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　Ｇｉｎ　Ｌｅｕ　ＬｅｕＧｌｙ　Ｌｙｓ　Ｔｙｒ　Ｌｙｓ　Ｇ ｌｎ　Ｉｌｅ　Ｉｌｅ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｇｉｎ　Ａｌａ　Ｐ ｈｅ（２）配列番号＝２に関する情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ：１７９アミノ酸 （Ｂ）配列の型二アミノ酸 （Ｄ）トポロジー−線状 （ｉｖ）配列番号＝２＝ Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ｉｌｅ　Ｔｈｒ　Ｐｒｏ　Ｖａｌ　Ａｓｎ　Ａｌａ　 Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ｉｌｅ　Ａｒｇ　Ｈｉｓｌ　５　１０　１５ Ｐｒｏ　Ｃｙｓ　Ｈｉｓ　Ｇｌｙ　Ａｓｎ　Ｌｅｕ　Ｍｅｔ　Ａｓｎ　Ｇｉｎ　 Ｉｌｅ　Ｌｙｓ　Ａｓｎ　Ｇｉｎ　Ｌｅｕ　ＡｌａＧｉｎ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｇ ｌｙ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ａｓｎ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　Ｉｌｅ　Ｓｅｒ　Ｔ ｙｒ　Ｔｙｒ　ＴｈｒＡｌａ　Ｇｉｎ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｐｒｏ　Ｐｈｅ　Ｐｒ ｏ　Ａｓｎ　Ａｓｎ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｃｙｓ＾１ａＰｒｏ　 Ａｓｎ　Ｍｅｔ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ｐｈｅ　Ｐｒｏ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ　Ｈｉｓ　 Ｇｌｙ　Ａｓｎ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　ＧｌｕＬｙｓ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｖ ａｌ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ａｒｇ　Ｍｅｔ　Ｖａｌ　Ａｌａ　Ｔｙｒ　Ｌ ｅｕ　５ｅｒＡｌａ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｔｈｒ　Ａｓｎ　Ｉｌｅ　Ｔｈｒ　Ａｒ ｇ　Ａｓｐ　Ｇｉｎ　Ｌｙｓ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｐｒ。

Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　 Ａｓｎ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ｉｌｅ　Ａｓｐ　Ｖａｌｌｌｏ　１１５　１２０ １１ｅｔ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ａｓｎ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ 　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｃｙｓ　Ａｓｎ　ＬｙｓＴｙｒ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　 Ｇｌｙ　Ｈｉｓ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　ｖａｌ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｖａｌ　Ｐｒｏ　 Ａｓｐ　Ｈｉｓ　５ｅｒ１．４０　１４５　１５０ Ａｓｐ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｐｈｅ　Ｇｉｎ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　 Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　Ｇｌｎ　Ｌｅｕ　ＬｅｕＧｌｙ　Ｔｈｒ　Ｔｙｒ　Ｌ ｙｓ　Ｇｉｎ　Ｖａｌ　Ｉｌｅ　Ｓｅｒ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　Ｇｉｎ　Ａ ｌａ　Ｐｈｅ再潅流（分） ＦＩＧ、　Ｉ ＴＮＦ−ｃＬ＝　−＋　−＋ Ｍｎ５ＯＤ　４ｋｂ　ｗ　−−− ＦＩＧ、　２ 時間（日＞　ＦＩＧ、４Ａ ＋２３４５６７ 時間（日）　ＦＩＧ、４Ｂ （％＞　＊ＳＸ γω南ａ樹 国際調査報告 Ｉｎ１ｃ＋ｙ＋ｌ＋ｅｈ＋ｌ　ＡｐＦｌｆ＋１ｉ−１，、ＰＣＴ／ｌ琴５９１１ ０７７５９；（：：＝、：：二；−二；〒−：：ｈ；、：τ：−二；＝７胃：＋ ニア開；＝、、＋　（二＝１：＝〕ｚ？　ｄ１°１°°゛”°””“゛h：二ｔ ａグ１ｊ）（π１“−＋ｗ＠ｅ“゛−ｎｗＩ＋＋＋ｖ＠ａｍＰｔ軸ｍｓｌｌｌｅ ｅＩｓＩｓｓａｗｖｙＩｌａｊｌｅＩ・ｔＩｋｗｅｔｓ＋’ｌｌｅｗ１ｍ＋’ｗ ｗｋ−會ｒ・脚−黷P−マーーｋｔＩＩ噌−１１噂言會−１―細ｗｗ＋ａｌｉｓ ａ。

Claims (14)

【特許請求の範囲】
1. １．反応性酸素種の息者に対する悪影響を予防および／または治療するための組 成物の製造における（ａ）成長ホルモン（ＧＨ）、（ｂ）Ｄ−因子（ＤＦ）また は（ｃ）ＩＬ−１および／または腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）プラスＧＨおよび／ま たはＤＦ、から選択される保護剤（類）の使用。
2. ２．該患者が再潅流損傷、気管枝肺炎形成異常、発作、動脈硬化症、アテローム 性硬化症、心筋梗塞症、敗血症、後天性免疫不全症候群、糖尿病、多発性硬化症 、炎症誘発性関節炎、未熟児出産後の高圧治療、高酸素症、移植拒絶反応または 移植損傷、鎌状赤血球性貧血、鎌状赤血球体質、がんの高圧治療、アルコール性 または非アルコール性肝硬変、ブレオマイシン誘発性肺繊維症、細菌性ＬＰＳエ ンドトキシンによる滑膜炎、免疫複合体による節損傷、またはパーキンソン病を 有するか、あるいはその恐れがある患者である請求項１の使用。
3. ３．該組成物がアルファ、ベータ、またはガンマーインターフェロンをも含有す る請求項１の使用。
4. ４．該腫瘍壊死因子が腫瘍壊死因子−αまたは腫瘍壊死因子−βである請求項１ の使用。
5. ５．該組成物が線維素溶解剤または抗酸化剤をも含有する請求項１の使用。
6. ６．虚血組織の保護に適した組成物の製造における（ａ）成長ホルモン（ＧＨ） 、（ｂ）Ｄ−因子（ＤＦ）または（ｃ）ＩＬ−１および／または腫瘍壊死因子（ ＴＮＦ）プラスＧＨおよび／またはＤＦ、から選択される保護剤（類）の使用。
7. ７．該組成物がアルファ、ベータ、またはガンマーインターフェロンをも含有す る請求項６の使用。
8. ８．該腫瘍壊死因子が腫瘍壊死因子−αまたは腫瘍壊死因子−βである請求項６ の使用。
9. ９．該組成物が該組織ヘの潅流のために製剤化されている請求項６の使用。
10. １０．該組成物が薬学的に許容される賦形剤をも含有する請求項６の使用。
11. １１．該組成物が抗酸化剤または線維素溶解剤をも含有する請求項６の使用。
12. １２．該組織が筋肉組織、結合組織、上皮組織、神経組織、血管組織、骨、脳、 生殖器、呼吸器、消化器、排泄器、尿器官、感覚器官、および骨格筋器官から選 択される請求項６の使用。
13. １３．組織および（ａ）成長ホルモン（ＧＨ）、（ｂ）Ｄ−因子（ＤＦ）、（ｃ ）ＴＮＦ、または（ｄ）ＩＬ−１および／または腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）プラス ＧＨおよび／またはＤＦから選択される保護剤（類）を含む潅流液を含む、移植 を意図する潅流された摘出組織。
14. １４．（ａ）成長ホルモン（ＧＨ）、（ｂ）Ｄ−因子（ＤＦ）、（ｃ）ＴＮＦ、 または（ｄ）ＩＬ−１および／または腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）プラスＧＨおよび ／またはＤＦから選択される保護剤（類）を含む薬学的に許容される等張性溶液 である潅流液。