JPH06281638A - アフィニティクロマトグラフィー用充填剤 - Google Patents
アフィニティクロマトグラフィー用充填剤Info
- Publication number
- JPH06281638A JPH06281638A JP5066279A JP6627993A JPH06281638A JP H06281638 A JPH06281638 A JP H06281638A JP 5066279 A JP5066279 A JP 5066279A JP 6627993 A JP6627993 A JP 6627993A JP H06281638 A JPH06281638 A JP H06281638A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- carrier
- silica gel
- pore size
- porous silica
- increased
- Prior art date
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- Pending
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 抗体吸着容量が高く、精製純度を90％以上に
向上させることができるアフィニティクロマトグラフィ
ー用充填剤を提供する。 【構成】 リガンドを担持させる多孔質シリカゲルより
なる担体として、平均孔径が1000〜2500Åのものを使用
する。従来の平均孔径が300 〜500 Åのものと比較して
はるかに優れた精製純度を得ることができ、かつ抗体吸
着容量も高いレベルに維持される。
向上させることができるアフィニティクロマトグラフィ
ー用充填剤を提供する。 【構成】 リガンドを担持させる多孔質シリカゲルより
なる担体として、平均孔径が1000〜2500Åのものを使用
する。従来の平均孔径が300 〜500 Åのものと比較して
はるかに優れた精製純度を得ることができ、かつ抗体吸
着容量も高いレベルに維持される。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、マウス腹水、培養上清
等の原料液からＩｇＧ、ＩｇＭ等の抗体を精製する場合
に使用するに適したアフィニティクロマトグラフィー用
充填剤に関するものである。
等の原料液からＩｇＧ、ＩｇＭ等の抗体を精製する場合
に使用するに適したアフィニティクロマトグラフィー用
充填剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】ＩｇＧ、ＩｇＭ等の抗体を精製するため
の高速アフィニティクロマトグラフィーカラムには、機
械的強度に優れた多孔質シリカゲル担体に、1000〜5000
0 の分子量を持つプロティンＡ、プロティンＧ、プロタ
ミン等のリガンドを担持させたアフィニティクロマトグ
ラフィー用充填剤が従来から使用されている。このよう
な従来の多孔質シリカゲル担体は、平均孔径が300 〜50
0 Åの微細な気孔を有し粒子の表面積が非常に大きいた
めに多くのリガンドを担持させることができ、抗体吸着
容量も充填剤１mg当り14.8mgと非常に大きい利点があ
る。
の高速アフィニティクロマトグラフィーカラムには、機
械的強度に優れた多孔質シリカゲル担体に、1000〜5000
0 の分子量を持つプロティンＡ、プロティンＧ、プロタ
ミン等のリガンドを担持させたアフィニティクロマトグ
ラフィー用充填剤が従来から使用されている。このよう
な従来の多孔質シリカゲル担体は、平均孔径が300 〜50
0 Åの微細な気孔を有し粒子の表面積が非常に大きいた
めに多くのリガンドを担持させることができ、抗体吸着
容量も充填剤１mg当り14.8mgと非常に大きい利点があ
る。
【０００３】ところが精製前の原料液には目的物の他に
多くの夾雑蛋白質等の不純物が含まれており、目的物で
ある抗体の含有量は全体の１％程度とごく低いものであ
る。このために前記したような300 〜500 Åの平均孔径
を持つ多孔質シリカゲル担体を用いたアフィニティクロ
マトグラフィー用充填剤でこの原料液の精製を行うと、
分子量の大きいアルブミン等の夾雑蛋白質が孔内に入り
込んでしまうため、精製物純度が40〜70％と低くなり、
精製純度を向上させるためには何度も精製を繰り返す必
要があった。
多くの夾雑蛋白質等の不純物が含まれており、目的物で
ある抗体の含有量は全体の１％程度とごく低いものであ
る。このために前記したような300 〜500 Åの平均孔径
を持つ多孔質シリカゲル担体を用いたアフィニティクロ
マトグラフィー用充填剤でこの原料液の精製を行うと、
分子量の大きいアルブミン等の夾雑蛋白質が孔内に入り
込んでしまうため、精製物純度が40〜70％と低くなり、
精製純度を向上させるためには何度も精製を繰り返す必
要があった。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は上記した従来
の問題点を解決して、抗体吸着容量を高いレベルに維持
しつつ精製純度を90％以上に向上させることができるア
フィニティクロマトグラフィー用充填剤を提供するため
に完成されたものである。
の問題点を解決して、抗体吸着容量を高いレベルに維持
しつつ精製純度を90％以上に向上させることができるア
フィニティクロマトグラフィー用充填剤を提供するため
に完成されたものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】上記課題を解決するため
になされた本発明のアフィニティクロマトグラフィー用
充填剤は、平均孔径が1000〜2500Åの多孔質シリカゲル
よりなる担体に、リガンドを担持させたことを特徴とす
るものである。なお、リガンドとしては分子量が1000〜
50000 程度のプロティンＡ、プロティンＧ、プロタミン
等が用いられる。
になされた本発明のアフィニティクロマトグラフィー用
充填剤は、平均孔径が1000〜2500Åの多孔質シリカゲル
よりなる担体に、リガンドを担持させたことを特徴とす
るものである。なお、リガンドとしては分子量が1000〜
50000 程度のプロティンＡ、プロティンＧ、プロタミン
等が用いられる。
【０００６】このように、本発明では平均孔径が1000〜
2500Åの多孔質シリカゲルを用いた点に特徴がある。本
発明者の研究によれば、従来の300 〜500 Åの平均孔径
を持つ多孔質シリカゲルを用いた場合には、原料液中の
不純物として最も多い分子量が67000 のアルブミンが化
学的親和作用により充填剤の表面に非特異吸着し易くな
り、またアルブミンが孔の内部に丁度はまった形となっ
て洗浄液によって洗い流しにくくなるため、精製純度を
高めることができない。
2500Åの多孔質シリカゲルを用いた点に特徴がある。本
発明者の研究によれば、従来の300 〜500 Åの平均孔径
を持つ多孔質シリカゲルを用いた場合には、原料液中の
不純物として最も多い分子量が67000 のアルブミンが化
学的親和作用により充填剤の表面に非特異吸着し易くな
り、またアルブミンが孔の内部に丁度はまった形となっ
て洗浄液によって洗い流しにくくなるため、精製純度を
高めることができない。
【０００７】これに対して本発明のように平均孔径が10
00〜2500Åの多孔質シリカゲルを用いた場合には、分子
量が67000 のアルブミンが担体の孔の内部に自由に出入
りすることができるようになり、洗浄工程において容易
に洗い流すことが可能となるので、精製純度を高めるこ
とが可能となる。なお、多孔質シリカゲルの平均孔径が
1000Åよりも小さくなると上記の理由により精製純度が
低下するとともに、抗体のうち分子量が10万以上のもの
が孔の大きさによる立体障害のために孔の内部に入り込
んでいくことができなくなり、特に500 Å以下でリガン
ド利用率が低下して吸着容量の低下が発生する。
00〜2500Åの多孔質シリカゲルを用いた場合には、分子
量が67000 のアルブミンが担体の孔の内部に自由に出入
りすることができるようになり、洗浄工程において容易
に洗い流すことが可能となるので、精製純度を高めるこ
とが可能となる。なお、多孔質シリカゲルの平均孔径が
1000Åよりも小さくなると上記の理由により精製純度が
低下するとともに、抗体のうち分子量が10万以上のもの
が孔の大きさによる立体障害のために孔の内部に入り込
んでいくことができなくなり、特に500 Å以下でリガン
ド利用率が低下して吸着容量の低下が発生する。
【０００８】孔径を従来の300 〜500 Åより大きくする
ことにより多孔質シリカゲル担体の比表面積は小さくな
り、その結果リガンドの固定量の減少、抗体吸着容量の
減少となる。しかし孔径を大きくすることで、リガンド
の固定化率が増加し、比表面積が小さくなることに伴う
エガンド固定化量の減少を十分に打ち消すことができ
る。しかし多孔質シリカゲルの平均孔径が2500Åを越え
ると、担体の比表面積の影響が固定化率の影響よりも大
きくなるためにリガンドの固定化量が減少し、やはり担
体の容積当りの吸着容量が減少することとなる。
ことにより多孔質シリカゲル担体の比表面積は小さくな
り、その結果リガンドの固定量の減少、抗体吸着容量の
減少となる。しかし孔径を大きくすることで、リガンド
の固定化率が増加し、比表面積が小さくなることに伴う
エガンド固定化量の減少を十分に打ち消すことができ
る。しかし多孔質シリカゲルの平均孔径が2500Åを越え
ると、担体の比表面積の影響が固定化率の影響よりも大
きくなるためにリガンドの固定化量が減少し、やはり担
体の容積当りの吸着容量が減少することとなる。
【０００９】
【実施例】粒子径が30μm であり、平均孔径の異なる７
種類の多孔質シリカゲルを用い、分子量が42000 である
プロティンＡをその表面に固定化してアフィニティクロ
マトグラフィー用充填剤を作成した。これらの７種類の
各充填剤をアフィニティクロマトグラフィーカラム内に
充填し、牛血清を含む原料液から分子量が15万のＩｇＧ
を精製する試験を行った。図１のグラフはその結果を示
したもので、担体の平均孔径が1000Åを下回ると精製純
度の低下が大きく、2500Åを越えると吸着容量の低下が
見られることを示している。
種類の多孔質シリカゲルを用い、分子量が42000 である
プロティンＡをその表面に固定化してアフィニティクロ
マトグラフィー用充填剤を作成した。これらの７種類の
各充填剤をアフィニティクロマトグラフィーカラム内に
充填し、牛血清を含む原料液から分子量が15万のＩｇＧ
を精製する試験を行った。図１のグラフはその結果を示
したもので、担体の平均孔径が1000Åを下回ると精製純
度の低下が大きく、2500Åを越えると吸着容量の低下が
見られることを示している。
【００１０】
【発明の効果】以上に説明したように、本発明のアフィ
ニティクロマトグラフィー用充填剤は平均孔径が1000〜
2500Åの多孔質シリカゲルよりなる担体にリガンドを担
持させたことにより、抗体吸着容量を高いレベルに維持
しつつ精製純度を90％以上に向上させることができる。
よって本発明は従来の問題点を解決したものとして、産
業の発展に寄与するところはきわめて大きいものであ
る。
ニティクロマトグラフィー用充填剤は平均孔径が1000〜
2500Åの多孔質シリカゲルよりなる担体にリガンドを担
持させたことにより、抗体吸着容量を高いレベルに維持
しつつ精製純度を90％以上に向上させることができる。
よって本発明は従来の問題点を解決したものとして、産
業の発展に寄与するところはきわめて大きいものであ
る。
【図１】実施例における、担体の平均孔径と精製純度及
び抗体吸着容量との関係を示すグラフである。
び抗体吸着容量との関係を示すグラフである。
Claims (1)
- 【請求項１】 平均孔径が1000〜2500Åの多孔質シリカ
ゲルよりなる担体に、リガンドを担持させたことを特徴
とするアフィニティクロマトグラフィー用充填剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5066279A JPH06281638A (ja) | 1993-03-25 | 1993-03-25 | アフィニティクロマトグラフィー用充填剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5066279A JPH06281638A (ja) | 1993-03-25 | 1993-03-25 | アフィニティクロマトグラフィー用充填剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06281638A true JPH06281638A (ja) | 1994-10-07 |
Family
ID=13311238
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5066279A Pending JPH06281638A (ja) | 1993-03-25 | 1993-03-25 | アフィニティクロマトグラフィー用充填剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06281638A (ja) |
Cited By (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1332718C (zh) * | 2005-04-26 | 2007-08-22 | 广州康盛生物科技有限公司 | 硅胶载体蛋白a免疫吸附材料及其制备方法和应用 |
| WO2008146906A1 (ja) | 2007-05-30 | 2008-12-04 | Kaneka Corporation | ホルミル基含有多孔質担体、それを用いた吸着体、およびそれらの製造方法 |
| WO2010035757A1 (ja) | 2008-09-25 | 2010-04-01 | Jsr株式会社 | アフィニティークロマトグラフィー用充填剤 |
| WO2012124145A1 (ja) | 2011-03-15 | 2012-09-20 | オムロン株式会社 | 演算ユニット、支援装置、支援プログラム、支援プログラムを格納した記憶媒体、および、支援装置における動作方法 |
| JP2014194425A (ja) * | 2014-05-19 | 2014-10-09 | Kaneka Corp | 多孔質担体、およびそれを用いた精製用吸着体、およびそれらの製造方法、およびそれらを用いた精製方法 |
| JP2015062028A (ja) * | 2007-07-10 | 2015-04-02 | イー・エム・デイー・ミリポア・コーポレイシヨン | アフィニティークロマトグラフィーのための媒体 |
| US9040661B2 (en) | 2010-12-21 | 2015-05-26 | Jsr Corporation | Support for affinity chromatography and method for isolating immunoglobulin |
| US9051355B2 (en) | 2010-03-24 | 2015-06-09 | Jsr Corporation | Filler for affinity chromatography and method for isolating immunoglobulin |
| US9051375B2 (en) | 2010-12-21 | 2015-06-09 | The University Of Western Ontario | Alkali-resistant variants of protein A and their use in affinity chromatography |
| KR20170131433A (ko) | 2015-03-26 | 2017-11-29 | 제이에스알 가부시끼가이샤 | 이뮤노글로불린 결합 단백질 및 그것을 사용한 친화성 담체 |
| KR20180034425A (ko) | 2015-07-28 | 2018-04-04 | 제이에스알 가부시끼가이샤 | 친화성 담체 및 이뮤노글로불린을 단리하는 방법 |
| CN108693278A (zh) * | 2018-07-06 | 2018-10-23 | 漳州傲农牧业科技有限公司 | 一种猪血浆蛋白粉中IgG含量的测定方法 |
| US11229896B2 (en) | 2014-01-16 | 2022-01-25 | W.R. Grace & Co.—Conn. | Affinity chromatography media and chromatography devices |
-
1993
- 1993-03-25 JP JP5066279A patent/JPH06281638A/ja active Pending
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| US8828905B2 (en) | 2007-05-30 | 2014-09-09 | Kaneka Corporation | Porous base matrix having formyl group, adsorbent using the porous base matrix, method for production of the porous base matrix, and method for production of the adsorbent |
| JP2015062028A (ja) * | 2007-07-10 | 2015-04-02 | イー・エム・デイー・ミリポア・コーポレイシヨン | アフィニティークロマトグラフィーのための媒体 |
| WO2010035757A1 (ja) | 2008-09-25 | 2010-04-01 | Jsr株式会社 | アフィニティークロマトグラフィー用充填剤 |
| US8846877B2 (en) | 2008-09-25 | 2014-09-30 | Jsr Corporation | Packing material for affinity chromatography |
| US9051355B2 (en) | 2010-03-24 | 2015-06-09 | Jsr Corporation | Filler for affinity chromatography and method for isolating immunoglobulin |
| US9040661B2 (en) | 2010-12-21 | 2015-05-26 | Jsr Corporation | Support for affinity chromatography and method for isolating immunoglobulin |
| US9051375B2 (en) | 2010-12-21 | 2015-06-09 | The University Of Western Ontario | Alkali-resistant variants of protein A and their use in affinity chromatography |
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| US11229896B2 (en) | 2014-01-16 | 2022-01-25 | W.R. Grace & Co.—Conn. | Affinity chromatography media and chromatography devices |
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| US10723769B2 (en) | 2015-03-26 | 2020-07-28 | Jsr Corporation | Immunoglobulin-binding protein and affinity carrier using same |
| KR20180034425A (ko) | 2015-07-28 | 2018-04-04 | 제이에스알 가부시끼가이샤 | 친화성 담체 및 이뮤노글로불린을 단리하는 방법 |
| US10766924B2 (en) | 2015-07-28 | 2020-09-08 | Jsr Corporation | Affinity support and method for isolating immunoglobulin |
| CN108693278A (zh) * | 2018-07-06 | 2018-10-23 | 漳州傲农牧业科技有限公司 | 一种猪血浆蛋白粉中IgG含量的测定方法 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20010309 |