JPH06262165A - バイオフイルムを抑制および除去するプロテアーゼ類 - Google Patents
バイオフイルムを抑制および除去するプロテアーゼ類Info
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- C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F3/00—Biological treatment of water, waste water, or sewage
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-
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- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 バイオフィルムを抑制および除去する方法を
提供する。 【構成】 任意に他の特定の酵素類および／または界面
活性剤と組み合わせて、本質的にプロテアーゼ類から成
る酵素組成物を、バイオフィルムを抑制もしくは除去す
るに有効量でこの系に添加することからなる、水系に接
触する表面からバイオフィルムを抑制または除去する方
法。
提供する。 【構成】 任意に他の特定の酵素類および／または界面
活性剤と組み合わせて、本質的にプロテアーゼ類から成
る酵素組成物を、バイオフィルムを抑制もしくは除去す
るに有効量でこの系に添加することからなる、水系に接
触する表面からバイオフィルムを抑制または除去する方
法。
Description
【０００１】
【発明の分野】本発明は、水系に接触する表面からバイ
オフィルム（biofilm）を抑制および／または除去する
方法に関するものであり、より詳細には、バイオフィル
ムを抑制および／または除去する目的で水系にプロテア
ーゼ類を用いることに関する。
オフィルム（biofilm）を抑制および／または除去する
方法に関するものであり、より詳細には、バイオフィル
ムを抑制および／または除去する目的で水系にプロテア
ーゼ類を用いることに関する。
【０００２】
【発明の背景】冷却水系、特に開放循環系は、微生物形
態（以後バイオフィルムと呼ぶ）の増殖に好適な環境を
与えている。水系の表面にバイオフィルムが堆積する
と、熱伝達表面の効率が低下し、管が詰まり、そしてこ
の系内の腐食がもたらされ得る。汚染された表面上のバ
イオフィルム堆積物が有する組成は、一般に、主として
細菌から成っている。バイオフィルムの中で見いだされ
る細菌属の中で多いものはグラム陰性種、特にシュード
モナス（Pseudomonas）、アシネトバクター（Acinetoba
cter）およびアエロバクター（Aerobacter）である。バ
イオフィルムの中に見いだされる他の属には、フラボバ
クテリウム（Flabovacterium）、デスルホビブリオ（De
sulfovibrio）、エシェリキア（Escherichia）が含ま
れ、そして少数であるがバチルス（Bacillus）およびサ
ルシナ（Sarcina）の如きグラム陽性属もいくつか含ま
れる。
態（以後バイオフィルムと呼ぶ）の増殖に好適な環境を
与えている。水系の表面にバイオフィルムが堆積する
と、熱伝達表面の効率が低下し、管が詰まり、そしてこ
の系内の腐食がもたらされ得る。汚染された表面上のバ
イオフィルム堆積物が有する組成は、一般に、主として
細菌から成っている。バイオフィルムの中で見いだされ
る細菌属の中で多いものはグラム陰性種、特にシュード
モナス（Pseudomonas）、アシネトバクター（Acinetoba
cter）およびアエロバクター（Aerobacter）である。バ
イオフィルムの中に見いだされる他の属には、フラボバ
クテリウム（Flabovacterium）、デスルホビブリオ（De
sulfovibrio）、エシェリキア（Escherichia）が含ま
れ、そして少数であるがバチルス（Bacillus）およびサ
ルシナ（Sarcina）の如きグラム陽性属もいくつか含ま
れる。
【０００３】グラム陰性細菌が有する細胞壁構造がバイ
オフィルム生成の原因となる重要な因子である。この細
胞壁は、アセチル−アミノ糖類とアミノ酸で出来ている
ペプチドグリカンから成っており、そして外側膜は、蛋
白質、リポ多糖類およびリポ蛋白質で構成されている。
それとは対照的に、グラム陽性細菌が有する細胞壁構造
は主にペプチドグリカンとテイコイル酸で出来ている。
オフィルム生成の原因となる重要な因子である。この細
胞壁は、アセチル−アミノ糖類とアミノ酸で出来ている
ペプチドグリカンから成っており、そして外側膜は、蛋
白質、リポ多糖類およびリポ蛋白質で構成されている。
それとは対照的に、グラム陽性細菌が有する細胞壁構造
は主にペプチドグリカンとテイコイル酸で出来ている。
【０００４】微生物もまた広範なスライム層もしくはカ
プセルを生じが、これらの組成は異なっている。極めて
少ない例を除き、細菌が生じるスライムの全ては、ある
形態の多糖類、例えばデキストラン類、グルカン類また
はポリウロニド類である。単一の細菌が生じるスライム
の体積は、単一の細菌が有する体積の数倍に及ぶ可能性
がある。Costerton他は、このスライム層を「グリコカ
リックス（glycocalyx）」と名付けた、と言うのは、こ
の組成は、炭水化物が豊富な特定の動物細胞に類似して
いるからである。このグリコカリックスは、バイオフィ
ルムの中で観察されるほとんど全ての細菌から生じ、そ
してこれは、表面への付着にとって重要ないくつかの機
構を与えている。１番目として、このグリコカリックス
は、その表面と細菌の間に緩衝領域を与え、これが、静
電的反発（これが接触を防止している）を低下させ、そ
して２番目として、このグリコカリックス内のポリマー
が、表面基質への物理的および／または静電的結合を生
じ得る。実験的証拠を基にして、表面に天然のバイオフ
ィルムが発達することは、細菌属の相続を伴い、これが
そのバイオフィルムの中の異なる層を形成している。こ
のバイオフィルムのマトリックスは雑多な組成を有する
ものであり得るが、これは主に多糖類類で出来ている。
このことによって、可能なバイオフィルム除去を目的と
する研究努力が、ポリサッカリダーゼ類（カルボヒドラ
ーゼ類）およびリパーゼ類（リポ多糖類およびリポ蛋白
質成分のための）の評価に向けられた。
プセルを生じが、これらの組成は異なっている。極めて
少ない例を除き、細菌が生じるスライムの全ては、ある
形態の多糖類、例えばデキストラン類、グルカン類また
はポリウロニド類である。単一の細菌が生じるスライム
の体積は、単一の細菌が有する体積の数倍に及ぶ可能性
がある。Costerton他は、このスライム層を「グリコカ
リックス（glycocalyx）」と名付けた、と言うのは、こ
の組成は、炭水化物が豊富な特定の動物細胞に類似して
いるからである。このグリコカリックスは、バイオフィ
ルムの中で観察されるほとんど全ての細菌から生じ、そ
してこれは、表面への付着にとって重要ないくつかの機
構を与えている。１番目として、このグリコカリックス
は、その表面と細菌の間に緩衝領域を与え、これが、静
電的反発（これが接触を防止している）を低下させ、そ
して２番目として、このグリコカリックス内のポリマー
が、表面基質への物理的および／または静電的結合を生
じ得る。実験的証拠を基にして、表面に天然のバイオフ
ィルムが発達することは、細菌属の相続を伴い、これが
そのバイオフィルムの中の異なる層を形成している。こ
のバイオフィルムのマトリックスは雑多な組成を有する
ものであり得るが、これは主に多糖類類で出来ている。
このことによって、可能なバイオフィルム除去を目的と
する研究努力が、ポリサッカリダーゼ類（カルボヒドラ
ーゼ類）およびリパーゼ類（リポ多糖類およびリポ蛋白
質成分のための）の評価に向けられた。
【０００５】浄化用のプロテアーゼ含有組成物は本分野
でよく知られている。上記組成物は商業的に入手可能で
あり、多くの従来技術の中に記述されている。この文献
の代表的なものは米国特許番号 RE 30,602; 3,553,139;
3,674,643; 3,697,451; 3,748,233; 3,790,482; 3,82
7,938; 3,871,963; 3,931,034; 4,162,987; 4,169,817;
4,287,101; 4,429,044; 4,480,037; 4,511,490; 4,51
5,705および4,543,333、並びにE. H. HouwinkおよびR.
R. Van der Meer編集「バイオテクノロジーの改革」（I
nnovations in Biotechnology）、31から52頁（Elsevie
r Science Publishers、 Amsterdam、 1984）である。
でよく知られている。上記組成物は商業的に入手可能で
あり、多くの従来技術の中に記述されている。この文献
の代表的なものは米国特許番号 RE 30,602; 3,553,139;
3,674,643; 3,697,451; 3,748,233; 3,790,482; 3,82
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5,705および4,543,333、並びにE. H. HouwinkおよびR.
R. Van der Meer編集「バイオテクノロジーの改革」（I
nnovations in Biotechnology）、31から52頁（Elsevie
r Science Publishers、 Amsterdam、 1984）である。
【０００６】浄化用組成物で最も幅広く用いられている
プロテアーゼは、種々のバチルス菌株由来のアルカリ性
プロテアーゼ類である。上記プロテアーゼ類（これら
は、Novo Nordisk Bioindustrials Inc.、 Danbury、 Con
n.からEsperaseTMおよびAlcalaseTMの如き商標で市販さ
れておりそしてGist-Brocades、 Charlotte、 N.C.からMa
xataseTMおよびMaxacalTMの如き商標で市販されてい
る）は、所望のアルカリ安定特性と蛋白分解活性を有し
ている。
プロテアーゼは、種々のバチルス菌株由来のアルカリ性
プロテアーゼ類である。上記プロテアーゼ類（これら
は、Novo Nordisk Bioindustrials Inc.、 Danbury、 Con
n.からEsperaseTMおよびAlcalaseTMの如き商標で市販さ
れておりそしてGist-Brocades、 Charlotte、 N.C.からMa
xataseTMおよびMaxacalTMの如き商標で市販されてい
る）は、所望のアルカリ安定特性と蛋白分解活性を有し
ている。
【０００７】米国特許番号4,865,983には、ビブリオ・
プロテオリチクス（Vibrio proteolyticus）（ATCC 535
59）産生プロテアーゼ（以後「ビブリオリシン（vibrio
lysin）」と呼ぶ）を浄化用組成物の中で用いることが
開示されている。他の数多くの種々のプロテアーゼ類お
よびそれらの個々の有効性もまた、Cowan他、Trends in
Biotechnology、第3巻、 No. 3、 68-72頁、 (1985）の中
に記述されている。
プロテオリチクス（Vibrio proteolyticus）（ATCC 535
59）産生プロテアーゼ（以後「ビブリオリシン（vibrio
lysin）」と呼ぶ）を浄化用組成物の中で用いることが
開示されている。他の数多くの種々のプロテアーゼ類お
よびそれらの個々の有効性もまた、Cowan他、Trends in
Biotechnology、第3巻、 No. 3、 68-72頁、 (1985）の中
に記述されている。
【０００８】
【発明の要約】本発明の１つの目的は、水系と接触する
表面からバイオフィルムを抑制および／または除去す
る、無害で生態学的に安全な方法を提供することにあ
る。
表面からバイオフィルムを抑制および／または除去す
る、無害で生態学的に安全な方法を提供することにあ
る。
【０００９】本発明の別の目的は、水系と接触する表面
上へのバイオフィルム蓄積防止で用いるための、プロテ
アーゼ類と界面活性剤との組み合わせを含んでいる新規
な組成物を提供することにある。
上へのバイオフィルム蓄積防止で用いるための、プロテ
アーゼ類と界面活性剤との組み合わせを含んでいる新規
な組成物を提供することにある。
【００１０】本発明の別の目的は、腐食抑制剤、スケー
ル抑制剤、殺生物剤、分散剤などの如き他の通常の水処
理剤に適合性を示すと共にそれらとの組み合わせで用い
るに有効な組成物を用いた、冷却タワーシステムの如き
産業用水系中の表面からバイオフィルムを除去する方法
を提供することにある。
ル抑制剤、殺生物剤、分散剤などの如き他の通常の水処
理剤に適合性を示すと共にそれらとの組み合わせで用い
るに有効な組成物を用いた、冷却タワーシステムの如き
産業用水系中の表面からバイオフィルムを除去する方法
を提供することにある。
【００１１】本発明に従い、バイオフィルムの堆積を抑
制または除去するに有効な用量で、本質的にプロテアー
ゼ類から成る酵素系をこの系に添加することを含む、水
系に接触する表面からバイオフィルムを抑制および／ま
たは除去する方法を提供した。
制または除去するに有効な用量で、本質的にプロテアー
ゼ類から成る酵素系をこの系に添加することを含む、水
系に接触する表面からバイオフィルムを抑制および／ま
たは除去する方法を提供した。
【００１２】本発明に従いまた、プロテアーゼ類と界面
活性剤との組み合わせを含んでいる、水系に接触する表
面からのバイオフィルム抑制または除去で用いるための
組成物を提供する。
活性剤との組み合わせを含んでいる、水系に接触する表
面からのバイオフィルム抑制または除去で用いるための
組成物を提供する。
【００１３】本発明に従いまた、１）本質的にプロテア
ーゼ類から成る酵素組成物を水系に添加し、２）この酵
素組成物を該水系に循環させることにより、該酵素組成
物とバイオフィルム堆積物とを接触させ、そして３）こ
の水系に少なくとも１種のリパーゼ、カルボヒドラーゼ
またはそれらの混合物を添加する、逐次的段階を含み、
そしてここで、該酵素組成物と該リパーゼ、カルボヒド
ラーゼまたはそれらの混合物を、該バイオフィルム堆積
物を抑制または除去するに充分な量で添加する、水系に
接触する表面からバイオフィルム堆積物を抑制または除
去するための、増強された方法を提供する。
ーゼ類から成る酵素組成物を水系に添加し、２）この酵
素組成物を該水系に循環させることにより、該酵素組成
物とバイオフィルム堆積物とを接触させ、そして３）こ
の水系に少なくとも１種のリパーゼ、カルボヒドラーゼ
またはそれらの混合物を添加する、逐次的段階を含み、
そしてここで、該酵素組成物と該リパーゼ、カルボヒド
ラーゼまたはそれらの混合物を、該バイオフィルム堆積
物を抑制または除去するに充分な量で添加する、水系に
接触する表面からバイオフィルム堆積物を抑制または除
去するための、増強された方法を提供する。
【００１４】
【詳細な記述】本発明は、水系に接触する表面からバイ
オフィルムを抑制または除去するための新規な特定方法
および組成物を意図したものである。ここで用いる言葉
「バイオフィルムの抑制または除去」は、該バイオフィ
ルムの接着を抑制することを表すものであり、この水系
の中に存在している微生物有機体を活性的に死滅させる
殺微生物活性を表すものではない。この方法は、水系に
接触する表面からバイオフィルムを抑制または除去する
に有効な量で、本質的にプロテアーゼ類から成る酵素組
成物を水系に添加することを含んでいる。これらの酵素
組成物は、任意に、追加的バイオフィルム除去を与える
種々の界面活性剤を含んでいてもよい。本発明の酵素組
成物はまた、バイオフィルムの抑制または除去を更に増
強させる有効量で、以下に定義する如き他の特定酵素と
の組み合わせで用いられてもよい。本発明の方法および
酵素組成物は、本質的に、その主要な活性を示す処理成
分としてのプロテアーゼ類から成っている。即ち、プロ
テアーゼ類単独で有効なバイオフィルム堆積抑制が得ら
れ、従ってバイオフィルム抑制は、セルラーゼまたはア
ミラーゼの如き他の酵素の存在を必要としないことを見
い出した。このような他の酵素類は、今まで、バイオフ
ィルム抑制に必要であると信じられていた。従って、本
発明に従う方法および酵素組成物は本質的にプロテアー
ゼ類から成っており、実質的に、セルラーゼ、アミラー
ゼの如き他の酵素類を含有していない。
オフィルムを抑制または除去するための新規な特定方法
および組成物を意図したものである。ここで用いる言葉
「バイオフィルムの抑制または除去」は、該バイオフィ
ルムの接着を抑制することを表すものであり、この水系
の中に存在している微生物有機体を活性的に死滅させる
殺微生物活性を表すものではない。この方法は、水系に
接触する表面からバイオフィルムを抑制または除去する
に有効な量で、本質的にプロテアーゼ類から成る酵素組
成物を水系に添加することを含んでいる。これらの酵素
組成物は、任意に、追加的バイオフィルム除去を与える
種々の界面活性剤を含んでいてもよい。本発明の酵素組
成物はまた、バイオフィルムの抑制または除去を更に増
強させる有効量で、以下に定義する如き他の特定酵素と
の組み合わせで用いられてもよい。本発明の方法および
酵素組成物は、本質的に、その主要な活性を示す処理成
分としてのプロテアーゼ類から成っている。即ち、プロ
テアーゼ類単独で有効なバイオフィルム堆積抑制が得ら
れ、従ってバイオフィルム抑制は、セルラーゼまたはア
ミラーゼの如き他の酵素の存在を必要としないことを見
い出した。このような他の酵素類は、今まで、バイオフ
ィルム抑制に必要であると信じられていた。従って、本
発明に従う方法および酵素組成物は本質的にプロテアー
ゼ類から成っており、実質的に、セルラーゼ、アミラー
ゼの如き他の酵素類を含有していない。
【００１５】本発明のプロテアーゼ組成物が示す、水系
中のバイオフィルムを抑制する有効性は、驚くべきこと
であると共に予想外であった、何故ならば、バイオフィ
ルムの接着は、プロテアーゼ類の影響を受けない多糖類
構成要素によるものであると信じられていたからであ
る。
中のバイオフィルムを抑制する有効性は、驚くべきこと
であると共に予想外であった、何故ならば、バイオフィ
ルムの接着は、プロテアーゼ類の影響を受けない多糖類
構成要素によるものであると信じられていたからであ
る。
【００１６】本発明で用いるに適切なプロテアーゼ類
は、これに限定されるものではないが、セリンプロテア
ーゼ類、例えばエスペラーゼ（Esperaase）（Novo）、
アルカラーゼ（Alcalase）（Novo）、スブチリシン（Si
gma）、マキサターゼ（Maxatase）（Gist-Brocade）、
マキサカール（Maxacal）（Gist-Brocade）、トリプシ
ン（Sigma）など、メタロプロテアーゼ類（metalloprot
eases）、例えばビブリオリシン（vibriolysin）（W.R.
Grace）、サーモリシン（Sigma）、サーモアーゼ（The
rmoase）（Daiwa Kasei KK）、ノボＴＳ（Novo TS）（N
ovo）、ニュートラーゼ（Neutrase）（Novo）、ＳＰ−
３６９（Novo）、プロテアーゼ２Ａ（Amano）、シープ
ローゼＳ（Seaprose S）（Amano）、プロチーム６（Pro
zyme 6）（Amano）など、システインプロテアーゼ類、
例えばパパイン、アスパラギン酸プロテアーゼなど、並
びにそれらの混合物、例えばセリンとメタロプロテアー
ゼ類の混合物（これは、商標PronaseTMの下でSigmaから
商業的に入手可能である）などが含まれる。
は、これに限定されるものではないが、セリンプロテア
ーゼ類、例えばエスペラーゼ（Esperaase）（Novo）、
アルカラーゼ（Alcalase）（Novo）、スブチリシン（Si
gma）、マキサターゼ（Maxatase）（Gist-Brocade）、
マキサカール（Maxacal）（Gist-Brocade）、トリプシ
ン（Sigma）など、メタロプロテアーゼ類（metalloprot
eases）、例えばビブリオリシン（vibriolysin）（W.R.
Grace）、サーモリシン（Sigma）、サーモアーゼ（The
rmoase）（Daiwa Kasei KK）、ノボＴＳ（Novo TS）（N
ovo）、ニュートラーゼ（Neutrase）（Novo）、ＳＰ−
３６９（Novo）、プロテアーゼ２Ａ（Amano）、シープ
ローゼＳ（Seaprose S）（Amano）、プロチーム６（Pro
zyme 6）（Amano）など、システインプロテアーゼ類、
例えばパパイン、アスパラギン酸プロテアーゼなど、並
びにそれらの混合物、例えばセリンとメタロプロテアー
ゼ類の混合物（これは、商標PronaseTMの下でSigmaから
商業的に入手可能である）などが含まれる。
【００１７】プロテアーゼ類は、粉末、顆粒、スラリー
および液体を含むいくつかの形態で商業的に入手可能で
ある。本発明は主に水系の処理を意図したものであるこ
とから、スラリーもしくは液体形態のプロテアーゼが好
適であるが、しかしながら一般に、如何なるプロテアー
ゼも本発明で用いるに適切である。本発明の方法および
組成物に対する特別な利点は、他の水処理組成物、例え
ば酸化剤、殺生物剤、スケール抑制剤、腐食抑制剤、光
学光沢剤、ホスフェート類、ホスホネート類、ポリホス
フェート類、シリケート類、緩衝剤、界面活性剤、カル
ボキシレート類、スルホネート類などの存在下の水系中
でプロテアーゼ類が安定性を示すことである。
および液体を含むいくつかの形態で商業的に入手可能で
ある。本発明は主に水系の処理を意図したものであるこ
とから、スラリーもしくは液体形態のプロテアーゼが好
適であるが、しかしながら一般に、如何なるプロテアー
ゼも本発明で用いるに適切である。本発明の方法および
組成物に対する特別な利点は、他の水処理組成物、例え
ば酸化剤、殺生物剤、スケール抑制剤、腐食抑制剤、光
学光沢剤、ホスフェート類、ホスホネート類、ポリホス
フェート類、シリケート類、緩衝剤、界面活性剤、カル
ボキシレート類、スルホネート類などの存在下の水系中
でプロテアーゼ類が安定性を示すことである。
【００１８】本分野の技術者によく知られているよう
に、特定のプロテアーゼ類は、特定のｐＨおよび温度条
件下で、増強された活性と上昇した安定性を示す。従っ
て、本発明の方法に従う最適な結果を得るための重要な
考慮は、処理すべき特別な水系が示す特別なｐＨおよび
温度条件下で高い活性と良好な安定性の両方を示す、適
当なプロテアーゼを選択することである。これに関し
て、米国特許番号4,865,983（これはその全体がここで
は参照にいれられる）に開示されている如きビブリオ・
プロテオリチクス（ATCC 53559）が分泌するプロテアー
ゼであるビブリオリシンは、幅広いｐＨおよび温度範囲
に渡って安定性を示すことから、幅広い範囲の水系の処
理で用いるに特に適切であることが見いだされた。加う
るに、ビブリオリシンは、クロリンの如き酸化剤の存在
下で優れた安定性を示す。ビブリオリシン、アルカラー
ゼおよびエスペラーゼはまた、これに限定されるもので
はないが、殺生物剤、スケール抑制剤、腐食抑制剤、光
学光沢剤、ホスフェート類、ホスホネート類、ポリホス
フェート類、シリケート類、緩衝剤、界面活性剤、カル
ボキシレート類、スルホネート類などを含む他の通常に
用いられている水処理剤の存在下で特に安定性を示す。
従って、本発明の好適な具体例は、ビブリオリシン、ア
ルカラーゼおよびエスペラーゼから成る群から選択され
るプロテアーゼのバイオフィルム抑制量をこの系に添加
することを含む、水系に接触する表面からバイオフィル
ムを抑制または除去する方法を意図したものである。
に、特定のプロテアーゼ類は、特定のｐＨおよび温度条
件下で、増強された活性と上昇した安定性を示す。従っ
て、本発明の方法に従う最適な結果を得るための重要な
考慮は、処理すべき特別な水系が示す特別なｐＨおよび
温度条件下で高い活性と良好な安定性の両方を示す、適
当なプロテアーゼを選択することである。これに関し
て、米国特許番号4,865,983（これはその全体がここで
は参照にいれられる）に開示されている如きビブリオ・
プロテオリチクス（ATCC 53559）が分泌するプロテアー
ゼであるビブリオリシンは、幅広いｐＨおよび温度範囲
に渡って安定性を示すことから、幅広い範囲の水系の処
理で用いるに特に適切であることが見いだされた。加う
るに、ビブリオリシンは、クロリンの如き酸化剤の存在
下で優れた安定性を示す。ビブリオリシン、アルカラー
ゼおよびエスペラーゼはまた、これに限定されるもので
はないが、殺生物剤、スケール抑制剤、腐食抑制剤、光
学光沢剤、ホスフェート類、ホスホネート類、ポリホス
フェート類、シリケート類、緩衝剤、界面活性剤、カル
ボキシレート類、スルホネート類などを含む他の通常に
用いられている水処理剤の存在下で特に安定性を示す。
従って、本発明の好適な具体例は、ビブリオリシン、ア
ルカラーゼおよびエスペラーゼから成る群から選択され
るプロテアーゼのバイオフィルム抑制量をこの系に添加
することを含む、水系に接触する表面からバイオフィル
ムを抑制または除去する方法を意図したものである。
【００１９】本発明のバイオフィルム抑制および除去剤
で有利に処理され得る水系には、これに限定されるもの
ではないが、冷却水系、例えば冷却タワー、脱塩装置、
パルプおよび紙製造系、ガススクラバー類、並びにバイ
オフィルム堆積が生じることが知られている他の循環水
系が含まれる。本発明は、６０度Ｆから２００度Ｆの温
度で運転される冷却水系、特に約８０度Ｆから１５０度
Ｆの温度で運転される開放循環冷却水系の処理で特に有
効である。
で有利に処理され得る水系には、これに限定されるもの
ではないが、冷却水系、例えば冷却タワー、脱塩装置、
パルプおよび紙製造系、ガススクラバー類、並びにバイ
オフィルム堆積が生じることが知られている他の循環水
系が含まれる。本発明は、６０度Ｆから２００度Ｆの温
度で運転される冷却水系、特に約８０度Ｆから１５０度
Ｆの温度で運転される開放循環冷却水系の処理で特に有
効である。
【００２０】本発明の酵素組成物は、該バイオフィルム
を抑制または除去するに有効な量で該水系に添加され
る。正確な用量は本質的に本発明にとって決定的でな
く、ある程度、処理すべき水系の性質および所望保護度
合に応じて幅広く変化し得る。しかしながら一般に、こ
の水系に添加されるプロテアーゼ濃度は、０．０００１
Ｕ／ｍＬから１００Ｕ／ｍＬであってもよく、ここで、
Ｕは、実施例４により詳しく記述する如き活性単位であ
る。この用量範囲内において、一般に低用量の０．００
０５から１Ｕ／ｍＬが好適である。勿論、バイオフィル
ム堆積物量が過剰な系に、より高い用量を添加すること
も可能である。しかしながら、純粋に経済的理由で、一
般的には、このような用量を推奨しない。
を抑制または除去するに有効な量で該水系に添加され
る。正確な用量は本質的に本発明にとって決定的でな
く、ある程度、処理すべき水系の性質および所望保護度
合に応じて幅広く変化し得る。しかしながら一般に、こ
の水系に添加されるプロテアーゼ濃度は、０．０００１
Ｕ／ｍＬから１００Ｕ／ｍＬであってもよく、ここで、
Ｕは、実施例４により詳しく記述する如き活性単位であ
る。この用量範囲内において、一般に低用量の０．００
０５から１Ｕ／ｍＬが好適である。勿論、バイオフィル
ム堆積物量が過剰な系に、より高い用量を添加すること
も可能である。しかしながら、純粋に経済的理由で、一
般的には、このような用量を推奨しない。
【００２１】産業用水系における本発明の一般的実施で
は、最初に、存在しているバイオフィルム堆積物を抑制
および／または除去する目的でより高い「開始」用量を
添加するのが好適である。次に、この開始用量に続い
て、最小限の抑制レベルを維持するに充分な量であるよ
り低い「制御」用量を用いる。勿論、この開始用量は、
処理すべき水系の性質およびこの系の中に存在している
バイオフィルム堆積物の度合に応じて幅広く変化し得
る。この開始用量は、好適には０．１Ｕ／ｍＬから１０
０Ｕ／ｍＬの範囲である。該制御用量は、好適には０．
００１Ｕ／ｍＬから１Ｕ／ｍＬの範囲である。特別な水
系に関して必要とされる正確な用量は、通常様式で本分
野の通常の技術者によって容易に決定され得る。
は、最初に、存在しているバイオフィルム堆積物を抑制
および／または除去する目的でより高い「開始」用量を
添加するのが好適である。次に、この開始用量に続い
て、最小限の抑制レベルを維持するに充分な量であるよ
り低い「制御」用量を用いる。勿論、この開始用量は、
処理すべき水系の性質およびこの系の中に存在している
バイオフィルム堆積物の度合に応じて幅広く変化し得
る。この開始用量は、好適には０．１Ｕ／ｍＬから１０
０Ｕ／ｍＬの範囲である。該制御用量は、好適には０．
００１Ｕ／ｍＬから１Ｕ／ｍＬの範囲である。特別な水
系に関して必要とされる正確な用量は、通常様式で本分
野の通常の技術者によって容易に決定され得る。
【００２２】別の好適な具体例において、本発明の方法
は、本質的にプロテアーゼ類から成る酵素組成物を１種
以上の界面活性剤と組み合わせて該水系に添加すること
を含んでいる。界面活性剤とプロテアーゼ類の両方がバ
イオフィルム抑制および除去特性を示すことから、この
特別な組み合わせが増強されたバイオフィルム抑制およ
び除去効果を示すことが見いだされた。従って、本発明
のこの面に従って、プロテアーゼと界面活性剤との組み
合わせを含んでいる、水系に接触する表面からのバイオ
フィルム抑制および／または除去を増強する新規な組成
物を提供した。この組成物中のこれらの成分の相対的比
率は、本発明にとって本質的に決定的であるとは見なさ
れないが、勿論、この処理される系内のその組み合わさ
れた用量が該バイオフィルム堆積物を抑制もしくは除去
するに有効であることを条件とする。一般に、この界面
活性剤は、重量／体積を基準にして０．００１％から１
％の用量範囲でその系に添加される。従って、この用量
は、それぞれ０．０００１：１から１００：１、好適に
はそれぞれ０．００５：１から１０：１の（プロテアー
ゼ活性単位）：（界面活性剤重量）比率を有する酵素−
界面活性剤組成物に相当している。これらの酵素および
界面活性剤は、該水系に独立して添加されるか、或は有
利に、上記比率を有する前混合された組成物として添加
されてもよい。
は、本質的にプロテアーゼ類から成る酵素組成物を１種
以上の界面活性剤と組み合わせて該水系に添加すること
を含んでいる。界面活性剤とプロテアーゼ類の両方がバ
イオフィルム抑制および除去特性を示すことから、この
特別な組み合わせが増強されたバイオフィルム抑制およ
び除去効果を示すことが見いだされた。従って、本発明
のこの面に従って、プロテアーゼと界面活性剤との組み
合わせを含んでいる、水系に接触する表面からのバイオ
フィルム抑制および／または除去を増強する新規な組成
物を提供した。この組成物中のこれらの成分の相対的比
率は、本発明にとって本質的に決定的であるとは見なさ
れないが、勿論、この処理される系内のその組み合わさ
れた用量が該バイオフィルム堆積物を抑制もしくは除去
するに有効であることを条件とする。一般に、この界面
活性剤は、重量／体積を基準にして０．００１％から１
％の用量範囲でその系に添加される。従って、この用量
は、それぞれ０．０００１：１から１００：１、好適に
はそれぞれ０．００５：１から１０：１の（プロテアー
ゼ活性単位）：（界面活性剤重量）比率を有する酵素−
界面活性剤組成物に相当している。これらの酵素および
界面活性剤は、該水系に独立して添加されるか、或は有
利に、上記比率を有する前混合された組成物として添加
されてもよい。
【００２３】本発明で用いるに適切な界面活性剤には、
カチオン系、非イオン系、アニオン系、両性および双性
界面活性剤が含まれる。非発泡性界面活性剤を用いるか
或は発泡性界面活性剤を低濃度で用いるのが一般に好適
である。制限することのない説明の目的で、適切なアニ
オン系界面活性剤には、アルキルベンゼンスルホネート
類、アルキルスルフェート類、アルキルポリエトキシエ
ーテルスルフェート類、パラフィンスルホネート類、ア
ルファ−オレフィンスルホネート類、アルファ−スルホ
カルボキシレートおよびそれらのエステル類、アルキル
グリセリルエーテルスルホネート類、脂肪酸モノグリセ
ライド類のスルフェート類およびスルホネート類、アル
キルフェノールポリエトキシエーテルスルフェート類、
２−アシルオキシ−アルカン−１−スルホネート類、お
よびベータ−アルキルオキシアルカンスルホネート類な
どの水溶性塩類が含まれる。適切な非イオン系界面活性
剤には、水溶性エトキシレート材料、例えば第一および
第二エトキシレート類およびアルキルフェノールエトキ
シレート類が含まれる。
カチオン系、非イオン系、アニオン系、両性および双性
界面活性剤が含まれる。非発泡性界面活性剤を用いるか
或は発泡性界面活性剤を低濃度で用いるのが一般に好適
である。制限することのない説明の目的で、適切なアニ
オン系界面活性剤には、アルキルベンゼンスルホネート
類、アルキルスルフェート類、アルキルポリエトキシエ
ーテルスルフェート類、パラフィンスルホネート類、ア
ルファ−オレフィンスルホネート類、アルファ−スルホ
カルボキシレートおよびそれらのエステル類、アルキル
グリセリルエーテルスルホネート類、脂肪酸モノグリセ
ライド類のスルフェート類およびスルホネート類、アル
キルフェノールポリエトキシエーテルスルフェート類、
２−アシルオキシ−アルカン−１−スルホネート類、お
よびベータ−アルキルオキシアルカンスルホネート類な
どの水溶性塩類が含まれる。適切な非イオン系界面活性
剤には、水溶性エトキシレート材料、例えば第一および
第二エトキシレート類およびアルキルフェノールエトキ
シレート類が含まれる。
【００２４】本発明の更に別の具体例において、上記プ
ロテアーゼ酵素組成物を該水系に添加した後、続いてリ
パーゼ類、カルボヒドラーゼ類またはそれらの混合物を
添加することによって、バイオフィルム除去が更に増強
され得る。本発明のこの具体例に従い、１）本質的にプ
ロテアーゼ類から成る酵素組成物を任意に界面活性剤と
の組み合わせで水系に添加し、２）この酵素組成物を循
環させることにより、該酵素組成物とバイオフィルム堆
積物とを接触させ、そして３）この水系に少なくとも１
種のリパーゼまたはカルボヒドラーゼまたはそれらの混
合物を添加する、逐次的段階を含み、そしてここで、該
酵素組成物と該リパーゼおよび／またはカルボヒドラー
ゼを、該バイオフィルム堆積物を抑制または除去するに
充分な量で添加する、水系に接触する表面からバイオフ
ィルム堆積物を抑制および／または除去する方法をここ
に提供した。このリパーゼ、カルボヒドラーゼまたはそ
れらの混合物の用量は、前に示したプロテアーゼ用量に
相当している。
ロテアーゼ酵素組成物を該水系に添加した後、続いてリ
パーゼ類、カルボヒドラーゼ類またはそれらの混合物を
添加することによって、バイオフィルム除去が更に増強
され得る。本発明のこの具体例に従い、１）本質的にプ
ロテアーゼ類から成る酵素組成物を任意に界面活性剤と
の組み合わせで水系に添加し、２）この酵素組成物を循
環させることにより、該酵素組成物とバイオフィルム堆
積物とを接触させ、そして３）この水系に少なくとも１
種のリパーゼまたはカルボヒドラーゼまたはそれらの混
合物を添加する、逐次的段階を含み、そしてここで、該
酵素組成物と該リパーゼおよび／またはカルボヒドラー
ゼを、該バイオフィルム堆積物を抑制または除去するに
充分な量で添加する、水系に接触する表面からバイオフ
ィルム堆積物を抑制および／または除去する方法をここ
に提供した。このリパーゼ、カルボヒドラーゼまたはそ
れらの混合物の用量は、前に示したプロテアーゼ用量に
相当している。
【００２５】適切なリパーゼ類には、リポラーゼ（Lipo
lase）（Novo）、リパーゼ（Lipase）P-30（Amano）、
リパーゼ MAP-10（Amano）、リパーゼ N（Amano）、リ
パーゼAP12（Amano）、ブタすい臓リパーゼ（Sigma）、
カンジダ（Candida）リパーゼ（Sigma）、シュードモナ
ス（Pseudomonas）リパーゼ（Amano）、リゾプス（Rhiz
opus）リパーゼ（Amano）、ムコル（Mucor）リパーゼ
（Amano）、アスペルギラス（Aspergillas）リパーゼ
（Amano）などが含まれる。
lase）（Novo）、リパーゼ（Lipase）P-30（Amano）、
リパーゼ MAP-10（Amano）、リパーゼ N（Amano）、リ
パーゼAP12（Amano）、ブタすい臓リパーゼ（Sigma）、
カンジダ（Candida）リパーゼ（Sigma）、シュードモナ
ス（Pseudomonas）リパーゼ（Amano）、リゾプス（Rhiz
opus）リパーゼ（Amano）、ムコル（Mucor）リパーゼ
（Amano）、アスペルギラス（Aspergillas）リパーゼ
（Amano）などが含まれる。
【００２６】適切なカルボヒドラーゼ類には、BAN 120L
（Novo）、ビスコチーム（Viscozyme）120L（Novo）、
ターマミル（Termamyl）120L（Novo）、セレフロ（Cere
flo）200L（Novo）、グルカナーゼ（Glucanase）（Sigm
a）、β−グルクロニダーゼ（β-Glucuronidase）（Sig
ma）、マキサミル（Maxamyl）（Gist-Brocade）、セル
ラーゼ（Cellulase）（Sigma）、デキストラナーゼ（De
xtranase）（Amano）、ペクチナーゼ（Pectinase）P-II
（Amano）、セルラーゼTAP（Amano）および；シトファ
ガ・グルコナーゼ（Cytophaga Gluconase）（Sigma）な
どが含まれる。
（Novo）、ビスコチーム（Viscozyme）120L（Novo）、
ターマミル（Termamyl）120L（Novo）、セレフロ（Cere
flo）200L（Novo）、グルカナーゼ（Glucanase）（Sigm
a）、β−グルクロニダーゼ（β-Glucuronidase）（Sig
ma）、マキサミル（Maxamyl）（Gist-Brocade）、セル
ラーゼ（Cellulase）（Sigma）、デキストラナーゼ（De
xtranase）（Amano）、ペクチナーゼ（Pectinase）P-II
（Amano）、セルラーゼTAP（Amano）および；シトファ
ガ・グルコナーゼ（Cytophaga Gluconase）（Sigma）な
どが含まれる。
【００２７】前に示した詳述を用いることで、本分野の
通常の技術は、更に一層の努力を行うことなく本発明を
最大度合で利用することができるものと考えられる。
通常の技術は、更に一層の努力を行うことなく本発明を
最大度合で利用することができるものと考えられる。
【００２８】以下に示す実施例は、本発明の原理に従っ
て本発明を説明する目的で与えるものであり、添付請求
の範囲に示すものを除き、如何なる様式でも本発明を制
限するものと解釈されるべきではない。全ての部および
パーセントは、特に明記されていない限り重量である。
て本発明を説明する目的で与えるものであり、添付請求
の範囲に示すものを除き、如何なる様式でも本発明を制
限するものと解釈されるべきではない。全ての部および
パーセントは、特に明記されていない限り重量である。
【００２９】
【実施例】実施例１ バイオフィルムの調製 種々の冷却タワー環境から単離した〜２００種の微生物
から選択した、１６種の代表的なバイオフィルム産生微
生物の共同体を用いて、バイオフィルムを生じさせた。
この共同体は、シュードモナス、アシネトバクター、セ
ラチア（Serratia）、好熱生物、並びに腸内細菌科１員
のいくつかを含む、異なる属からの有機体を含んでい
た。これらの菌株を、−７０℃の冷凍状態で純粋な培養
物として維持した。
から選択した、１６種の代表的なバイオフィルム産生微
生物の共同体を用いて、バイオフィルムを生じさせた。
この共同体は、シュードモナス、アシネトバクター、セ
ラチア（Serratia）、好熱生物、並びに腸内細菌科１員
のいくつかを含む、異なる属からの有機体を含んでい
た。これらの菌株を、−７０℃の冷凍状態で純粋な培養
物として維持した。
【００３０】バイオフィルム生成を樹立する目的で用い
た試験表面は、ステンレス鋼製の発生容器の中に入って
いる４０メッシュの３１６ステンレス鋼製ワイヤーメッ
シュスクリーンのクーポン（coupons）のラックであっ
た。
た試験表面は、ステンレス鋼製の発生容器の中に入って
いる４０メッシュの３１６ステンレス鋼製ワイヤーメッ
シュスクリーンのクーポン（coupons）のラックであっ
た。
【００３１】このバイオフィルム発生装置の中で用いた
増殖用培地は、４．７ｍＭのＭｇＳＯ4、２３．４ｍＭ
のＮａＣｌ、１１．５ｍＭのＮａ2ＳＯ4、４．４ｍＭの
ＮａＨＣＯ3、２．５ｍＭのＣａＣｌ2、２．６ｍＭのＣ
ａＳＯ4・Ｈ2Ｏおよび０．３ｍＭのＮａ2ＳｉＯ3・９Ｈ
2Ｏが入っている合成冷却タワー水（ＳＣＴＷ）から成
っていた。ＳＣＴＷに、グリセロールを２．２５ｇ／Ｌ
そしてTrypticase SoyBroth（ＴＳＢ）固体を０．４５
ｇ／Ｌ補った。バイオフィルム発生装置を撹拌し、空気
でスパージした後、バイオフィルムが増殖している間、
３０℃に維持すると共に、酸または塩基を添加すること
によりｐＨを７．２−７．８に維持した。このステンレ
ス鋼製クーポンの上にバイオフィルムが生じるには７日
から１０日間が必要であった。
増殖用培地は、４．７ｍＭのＭｇＳＯ4、２３．４ｍＭ
のＮａＣｌ、１１．５ｍＭのＮａ2ＳＯ4、４．４ｍＭの
ＮａＨＣＯ3、２．５ｍＭのＣａＣｌ2、２．６ｍＭのＣ
ａＳＯ4・Ｈ2Ｏおよび０．３ｍＭのＮａ2ＳｉＯ3・９Ｈ
2Ｏが入っている合成冷却タワー水（ＳＣＴＷ）から成
っていた。ＳＣＴＷに、グリセロールを２．２５ｇ／Ｌ
そしてTrypticase SoyBroth（ＴＳＢ）固体を０．４５
ｇ／Ｌ補った。バイオフィルム発生装置を撹拌し、空気
でスパージした後、バイオフィルムが増殖している間、
３０℃に維持すると共に、酸または塩基を添加すること
によりｐＨを７．２−７．８に維持した。このステンレ
ス鋼製クーポンの上にバイオフィルムが生じるには７日
から１０日間が必要であった。
【００３２】実施例２ クーポンの酵素処理 汚染されたクーポンを、その発生装置のラックから取り
出した後、奇麗なＳＣＴＷの中で短期間濯ぐことによ
り、プランクトン性細菌を除去した。各々の処理群に関
するクーポンを、薄いプラスチック片で、皿の底の上に
支持されている２つの空の四角いペトリ皿の中に入れ
た。各々の皿にプロテアーゼか或はプロテアーゼと界面
活性剤の溶液を加えることで、そのクーポンを若干覆っ
た。これらの皿をジャイロータリー（gyrotary）振とう
機の上に置き、穏やかな撹拌（６５ｒｐｍ）で２４時間
４０℃に保温した。該試験溶液と一緒に保温した後、各
々のクーポンを奇麗なＳＣＴＷで濯ぐことにより、接着
していないバイオフィルムを除去した。
出した後、奇麗なＳＣＴＷの中で短期間濯ぐことによ
り、プランクトン性細菌を除去した。各々の処理群に関
するクーポンを、薄いプラスチック片で、皿の底の上に
支持されている２つの空の四角いペトリ皿の中に入れ
た。各々の皿にプロテアーゼか或はプロテアーゼと界面
活性剤の溶液を加えることで、そのクーポンを若干覆っ
た。これらの皿をジャイロータリー（gyrotary）振とう
機の上に置き、穏やかな撹拌（６５ｒｐｍ）で２４時間
４０℃に保温した。該試験溶液と一緒に保温した後、各
々のクーポンを奇麗なＳＣＴＷで濯ぐことにより、接着
していないバイオフィルムを除去した。
【００３３】バイオフィルム予防実験では、該細菌共同
体を接種した後のバイオフィルム発生装置に直接、プロ
テアーゼか或はプロテアーゼと界面活性剤を添加した。
プロテアーゼを添加しなかった対照のバイオフィルム発
生装置を、その処理した発生装置と同じ時間に開始させ
た。実施例４に記述する２つのアッセイの１つを用い
て、この液体のプロテアーゼ活性を定期的に監視した。
最初のプロテアーゼ活性レベルを維持する目的で、必要
に応じて追加的に酵素を添加した。７日から１０日後、
発生装置からクーポンを取り出し、そして接着したバイ
オマスを測定するに先立って、奇麗なＳＣＴＷで濯い
だ。
体を接種した後のバイオフィルム発生装置に直接、プロ
テアーゼか或はプロテアーゼと界面活性剤を添加した。
プロテアーゼを添加しなかった対照のバイオフィルム発
生装置を、その処理した発生装置と同じ時間に開始させ
た。実施例４に記述する２つのアッセイの１つを用い
て、この液体のプロテアーゼ活性を定期的に監視した。
最初のプロテアーゼ活性レベルを維持する目的で、必要
に応じて追加的に酵素を添加した。７日から１０日後、
発生装置からクーポンを取り出し、そして接着したバイ
オマスを測定するに先立って、奇麗なＳＣＴＷで濯い
だ。
【００３４】実施例３ 接着したバイオマスの測定 実験が終了した時点で、該ステンレス鋼製クーポンとそ
れらに接着しているバイオマスを奇麗なＳＣＴＷの中で
濯いだ後、空気乾燥した。熱水可溶化段階を用いて、そ
の乾燥したバイオマスを取り出した。次に、Pierceから
商業的に入手可能なＢＣＡ蛋白質アッセイ試験キットを
用いて、各々のクーポンから得られる溶液を、クーポン
当たりの全蛋白質レベルに関して分析した。クーポンの
蛋白質レベルと、クーポン上の全バイオマスに関する実
際の乾燥重量測定との間の比較を基にして、上記アッセ
イはバイオフィルムレベルに関する満足される尺度であ
ることが確認された（表１参照）。
れらに接着しているバイオマスを奇麗なＳＣＴＷの中で
濯いだ後、空気乾燥した。熱水可溶化段階を用いて、そ
の乾燥したバイオマスを取り出した。次に、Pierceから
商業的に入手可能なＢＣＡ蛋白質アッセイ試験キットを
用いて、各々のクーポンから得られる溶液を、クーポン
当たりの全蛋白質レベルに関して分析した。クーポンの
蛋白質レベルと、クーポン上の全バイオマスに関する実
際の乾燥重量測定との間の比較を基にして、上記アッセ
イはバイオフィルムレベルに関する満足される尺度であ
ることが確認された（表１参照）。
【００３５】
【表１】 表１ 全蛋白質を用いて測定したバイオフィルム除去と、酵素処理後に測定したバイオ フィルムの直接的乾燥重量測定との比較 処理 除去された蛋白質％ 除去された乾燥重量％ ０．０５％のネオドール２５−７ １６(1) １１(1) １．０Ｕ／ｍＬのエスペラーゼ＋ ０．０５％のネオドール２５−７ ６９ ６４ ０．１Ｕ／ｍＬのエスペラーゼ＋ ０．０５％のネオドール２５−７ ３０ ２６ ０．０１Ｕ／ｍＬのエスペラーゼ＋ ０．０５％のネオドール２５−７ ２５ １４ ０．００１Ｕ／ｍＬのエスペラーゼ＋ ０．０５％のネオドール２５−７ ３０ １７ ０．０００１Ｕ／ｍＬのエスペラーゼ＋ ０．５％のネオドール２５−７ １３ １４(1) バイオフィルム除去が統計学的に有意であるため
には、蛋白質／乾燥重量除去は＞１２％（０．４ｇ）で
ある必要があった。
には、蛋白質／乾燥重量除去は＞１２％（０．４ｇ）で
ある必要があった。
【００３６】実施例４ 酵素活性の測定 バイオフィルムの除去もしくは防止実験で用いる酵素の
効率を評価しそして処理培養期間中の酵素が示す活性の
測定を行う、各々の実験に関する酵素活性を標準化する
目的で、下記の２つのアッセイを用いてプロテアーゼ活
性を監視した。 Ａ．アゾカゼイン（Azocasein）加水分解 アゾカゼイン（スルファニルアミド−アゾカゼイン、Si
gma Corp.、 St. Louis、 MO）が１．０ｍｇ／ｍＬ入って
いる５０Ｍｍのトリス−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．４）
中、３７℃で１０分間、プロテアーゼのサンプルを最終
体積が０．５ｍＬになるように培養する。この培養期間
の最後に、１０％ｗ／ｖのトリクロロ酢酸を０．５ｍＬ
加えた後直ちに混合し、そしてその後、この得られる混
合物を氷上に１０分間保存した。次に、この混合物を遠
心分離し、そして得られる上澄み液の光学密度を、４２
０ｎｍで、緩衝させたアゾカゼイン溶液の中に全く酵素
が入っていないか或は不活性化した酵素が入っているブ
ランクに対して測定した。４２０ｎｍで２．５の吸収変
化を生じさせるに必要な酵素量として１活性単位を定義
する。
効率を評価しそして処理培養期間中の酵素が示す活性の
測定を行う、各々の実験に関する酵素活性を標準化する
目的で、下記の２つのアッセイを用いてプロテアーゼ活
性を監視した。 Ａ．アゾカゼイン（Azocasein）加水分解 アゾカゼイン（スルファニルアミド−アゾカゼイン、Si
gma Corp.、 St. Louis、 MO）が１．０ｍｇ／ｍＬ入って
いる５０Ｍｍのトリス−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．４）
中、３７℃で１０分間、プロテアーゼのサンプルを最終
体積が０．５ｍＬになるように培養する。この培養期間
の最後に、１０％ｗ／ｖのトリクロロ酢酸を０．５ｍＬ
加えた後直ちに混合し、そしてその後、この得られる混
合物を氷上に１０分間保存した。次に、この混合物を遠
心分離し、そして得られる上澄み液の光学密度を、４２
０ｎｍで、緩衝させたアゾカゼイン溶液の中に全く酵素
が入っていないか或は不活性化した酵素が入っているブ
ランクに対して測定した。４２０ｎｍで２．５の吸収変
化を生じさせるに必要な酵素量として１活性単位を定義
する。
【００３７】Ｂ．セリンプロテアーゼ類に関するペプチ
ダーゼアッセイ このアッセイは、DelMar, E.G.他、 Anal. Biochem.、 9
9:316 (1979）の中に記述されている如き、スクシニル
−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−フ
ェニルアラニル−ｐ−ニトロアニリド（ｓＡＡＰＦｐ
Ｎ）からｐ−ニトロアニリンが放出されることによる、
４１０ｎｍにおける吸収の増大を測定するものである。
これらの反応混合物は、５０ｍＭのトリス緩衝液（ｐＨ
８．５）中１ｍＭのｓＡＡＰＦｐＮを含んでおり、そし
て最終体積である１．０ｍＬの中に適切な量のプロテア
ーゼを含んでいた。
ダーゼアッセイ このアッセイは、DelMar, E.G.他、 Anal. Biochem.、 9
9:316 (1979）の中に記述されている如き、スクシニル
−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−フ
ェニルアラニル−ｐ−ニトロアニリド（ｓＡＡＰＦｐ
Ｎ）からｐ−ニトロアニリンが放出されることによる、
４１０ｎｍにおける吸収の増大を測定するものである。
これらの反応混合物は、５０ｍＭのトリス緩衝液（ｐＨ
８．５）中１ｍＭのｓＡＡＰＦｐＮを含んでおり、そし
て最終体積である１．０ｍＬの中に適切な量のプロテア
ーゼを含んでいた。
【００３８】実施例５ ビブリオリシンの調製 下記の組成（１リットル当たりのｇまたはｍＬ）：ＮＺ
−アミンＢ、４０；Ｎａ2ＳＯ4、２５；デキストロー
ス、１０；Ｋ2ＨＰＯ4、４；ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ、０．
４；消泡剤、１．０ｍＬ；および微量元素溶液６．１ｍ
Ｌ；を有する培地の中で、ビブリオ・プロテオリチクス
（ATCC 53559）を培養した。この微量元素ストック溶液
は下記を含んでいる（１リットル当たりのグラム）；Ｚ
ｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ、１８．２９；ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ、
１８．８６；ＣａＳＯ4・２Ｈ2Ｏ、０．９１；ＨＢ
Ｏ3、０．０７；およびＮａ2ＭｏＯ4・２Ｈ2Ｏ、０．０
４。殺菌に先立って、ｐＨを７．０に調整した。
−アミンＢ、４０；Ｎａ2ＳＯ4、２５；デキストロー
ス、１０；Ｋ2ＨＰＯ4、４；ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ、０．
４；消泡剤、１．０ｍＬ；および微量元素溶液６．１ｍ
Ｌ；を有する培地の中で、ビブリオ・プロテオリチクス
（ATCC 53559）を培養した。この微量元素ストック溶液
は下記を含んでいる（１リットル当たりのグラム）；Ｚ
ｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ、１８．２９；ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ、
１８．８６；ＣａＳＯ4・２Ｈ2Ｏ、０．９１；ＨＢ
Ｏ3、０．０７；およびＮａ2ＭｏＯ4・２Ｈ2Ｏ、０．０
４。殺菌に先立って、ｐＨを７．０に調整した。
【００３９】１．５リットルか或は１０リットルの発酵
装置の中でＶ. プロテオリチクスを培養した。上述した
培地が入っている発酵装置に、同じ組成を有する培地が
入っている振とうフラスコの中でＶ. プロテオリチクス
を２０時間増殖させることによって得られた培養物を１
％（ｖ／ｖ）接種した。この発酵を、２８℃、１，００
０−１，２５０ｒｐｍ、および１分当たりの培地１体積
当たり１．０体積の空気から成る通気で行った。酸また
は塩基滴定標準液を自動添加することにより、この発酵
物のｐＨをｐＨ７．８に維持した。
装置の中でＶ. プロテオリチクスを培養した。上述した
培地が入っている発酵装置に、同じ組成を有する培地が
入っている振とうフラスコの中でＶ. プロテオリチクス
を２０時間増殖させることによって得られた培養物を１
％（ｖ／ｖ）接種した。この発酵を、２８℃、１，００
０−１，２５０ｒｐｍ、および１分当たりの培地１体積
当たり１．０体積の空気から成る通気で行った。酸また
は塩基滴定標準液を自動添加することにより、この発酵
物のｐＨをｐＨ７．８に維持した。
【００４０】６４０ｎｍの光学密度を測定することで
Ｖ．プロテオリチクスの増殖を監視し、そして前に記述
したアゾカゼインアッセイでプロテアーゼ活性を監視し
た。この発酵初期の安定増殖期の間に、この産生物であ
るプロテアーゼは、約８５，２００から１２７，８００
アゾカゼイン単位／リットルの滴定値に到達する。遠心
分離して細胞部分を分離することにより、ブロスを収穫
した。
Ｖ．プロテオリチクスの増殖を監視し、そして前に記述
したアゾカゼインアッセイでプロテアーゼ活性を監視し
た。この発酵初期の安定増殖期の間に、この産生物であ
るプロテアーゼは、約８５，２００から１２７，８００
アゾカゼイン単位／リットルの滴定値に到達する。遠心
分離して細胞部分を分離することにより、ブロスを収穫
した。
【００４１】蛋白分解活性を有する上澄み液を、螺旋に
巻かれているフィルターAmicon S10Y10（Amicon Corp.、
Lexington、 MA）を用いて濃縮した。この濃縮物を、こ
のレンテンテート（rententate）が示す伝導度が約１ｍ
ＳになりそしてｐＨが中性になるまで、１ｍＭのＣａＣ
ｌ2が入っている１０ｍＭのトリス緩衝液を用いたダイ
ヤフィルトレーションにかけた。この材料を凍結乾燥し
た後、使用するまで−２０℃で保存した。
巻かれているフィルターAmicon S10Y10（Amicon Corp.、
Lexington、 MA）を用いて濃縮した。この濃縮物を、こ
のレンテンテート（rententate）が示す伝導度が約１ｍ
ＳになりそしてｐＨが中性になるまで、１ｍＭのＣａＣ
ｌ2が入っている１０ｍＭのトリス緩衝液を用いたダイ
ヤフィルトレーションにかけた。この材料を凍結乾燥し
た後、使用するまで−２０℃で保存した。
【００４２】実施例６ エスペラーゼ８．０Ｌによるバイオフィルム除去 実施例１で調製したのと同じ汚染されたクーポンを、Ｓ
ＣＴＷ（ｐＨ８．５）中のエスペラーゼ８．０Ｌ溶液を
用い、４０℃で２４時間処理した。これらのクーポンが
入っている皿を６５ｒｐｍで渦巻き回転させることによ
り、その汚染された表面の上で酵素溶液を穏やかに動か
し続けた。ネオドール25-7（非イオン系、Shell Chemic
al）の如き界面活性剤を添加することにより、酵素単独
が示す効果よりもバイオフィルム除去が改良された。酵
素活性をアゾカゼイン単位数／ｍＬで表す。これらの結
果を表２に示す。
ＣＴＷ（ｐＨ８．５）中のエスペラーゼ８．０Ｌ溶液を
用い、４０℃で２４時間処理した。これらのクーポンが
入っている皿を６５ｒｐｍで渦巻き回転させることによ
り、その汚染された表面の上で酵素溶液を穏やかに動か
し続けた。ネオドール25-7（非イオン系、Shell Chemic
al）の如き界面活性剤を添加することにより、酵素単独
が示す効果よりもバイオフィルム除去が改良された。酵
素活性をアゾカゼイン単位数／ｍＬで表す。これらの結
果を表２に示す。
【００４３】
【表２】 表２ バイオフィルム除去に対して異なる濃度のエスペラーゼ８．０Ｌが示す効果 処理 除去された蛋白質ｍｇ(1)除去された蛋白質％ ０．０５％のネオドール２５−７ １．６ １６ ０．８Ｕ／ｍＬのエスペラーゼ （熱で不活性化） ０ ０ ０．８Ｕ／ｍＬのエスペラーゼ(2) ３．１ ３１ ０．８Ｕ／ｍＬのエスペラーゼ＋ ０．０５％のネオドール２５−７ ５．０ ５０ １．０Ｕ／ｍＬのエスペラーゼ＋ ０．０５％のネオドール２５−７ ５．２ ５２ ５．０Ｕ／ｍＬのエスペラーゼ＋ ０．０５％のネオドール２５−７ ４．４ ４４ 脚注(1) バイオフィルム除去が統計学的に有意であるため
には、蛋白質除去は≧１．３ｍｇの蛋白質（１３％の除
去）である必要があった。
には、蛋白質除去は≧１．３ｍｇの蛋白質（１３％の除
去）である必要があった。
【００４４】(2) １Ｕ／ｍＬのエスペラーゼは、約７
０μｇの酵素／ｍＬに相当している。
０μｇの酵素／ｍＬに相当している。
【００４５】実施例７ アルカラーゼ２．４Ｌによるバイオフィルム除去 実施例１で調製したのと同じ汚染されたクーポンを、Ｓ
ＣＴＷ（ｐＨ８．５）中のアルカラーゼ２．４Ｌ溶液
（Novo Nordisk Bioindustrials, Inc.）を用い、４０
℃で２４時間処理した。実施例６に記述した操作を繰り
返し、そしてその結果を表３に示す。
ＣＴＷ（ｐＨ８．５）中のアルカラーゼ２．４Ｌ溶液
（Novo Nordisk Bioindustrials, Inc.）を用い、４０
℃で２４時間処理した。実施例６に記述した操作を繰り
返し、そしてその結果を表３に示す。
【００４６】
【表３】 表３ 処理 除去された蛋白質ｍｇ(1)除去された蛋白質％ ０．０５％のネオドール ２．２３ ２５．６ １．０Ｕ／ｍＬのアルカラーゼ ５．９７ ６８．５ １．０Ｕ／ｍＬのアルカラーゼ＋ ０．０５％のネオドール ６．１８ ７１．０(1) バイオフィルム除去が統計学的に有意であるため
には、蛋白質除去は≧１．５６ｍｇの蛋白質または≧１
７．９％である必要があった。
には、蛋白質除去は≧１．５６ｍｇの蛋白質または≧１
７．９％である必要があった。
【００４７】実施例８ ビブリオリシンよるバイオフィルム除去 実施例１に従って、汚染されたクーポンを調製した後、
ＳＣＴＷ（ｐＨ８．５）中のビブリオリシン溶液を用
い、４０℃で２４時間処理した。実施例６に記述した操
作を繰り返し、そしてその結果を表４に示す。
ＳＣＴＷ（ｐＨ８．５）中のビブリオリシン溶液を用
い、４０℃で２４時間処理した。実施例６に記述した操
作を繰り返し、そしてその結果を表４に示す。
【００４８】
【表４】 表４ バイオフィルム除去に対して異なる濃度のビブリオリシンが示す効果 処理 除去された蛋白質ｍｇ(1)除去された蛋白質％ ０．０５％のネオドール２５−７ １．６ １６ ０．８Ｕ／ｍＬのビブリオリシン＋ ０．０５％のネオドール２５−７ ３．２ ３２ １．０Ｕ／ｍＬのビブリオリシン＋ ０．０５％のネオドール２５−７ ３．２ ３２ ５．０Ｕ／ｍＬのビブリオリシン＋ ０．０５％のネオドール２５−７ ４．０ ４０ 脚注(1) バイオフィルム除去が統計学的に有意であるため
には、蛋白質除去は≧１．３ｍｇの蛋白質（１３％の除
去）である必要があった。
には、蛋白質除去は≧１．３ｍｇの蛋白質（１３％の除
去）である必要があった。
【００４９】実施例９ バイオフィルム生成防止に対するエスペラーゼ＋ネオド
ール処理の効果 バイオフィルム生成防止に対する酵素／界面活性剤処理
を評価する目的で実験を行った。２つの発生装置を組み
立て、そして実施例１と同じ細菌共同体を接種した。１
つの発生装置を１Ｕ／ｍＬのエスペラーゼと０．０１％
のネオドール２５−７で処理する一方、対照の発生装置
には全く補充しなかった。その処理した発生装置のプロ
テアーゼ濃度を一定に保つ目的で、定期的にエスペラー
ゼを添加した。バイオフィルムの生成を刺激する目的
で、各々の発生装置に栄養素を定期的に添加した。１０
日経った後、各々の発生装置の中のクーポン上に残存し
ているバイオフィルムの量を乾燥重量と全蛋白質（ＢＣ
Ａ方法）で測定した。２日、４日および８日目に、プラ
ンクトン性微生物集団の生菌数を数えた。表５および６
に示すように、これらの結果は、この微生物集団は１０
8個の生菌／ｍＬの一定レベルに維持されたことを示し
ている。従って、この処理は、明らかに、殺生物作用よ
りはむしろ、細胞がクーポンに接着するのを防止してい
ることによるものである。
ール処理の効果 バイオフィルム生成防止に対する酵素／界面活性剤処理
を評価する目的で実験を行った。２つの発生装置を組み
立て、そして実施例１と同じ細菌共同体を接種した。１
つの発生装置を１Ｕ／ｍＬのエスペラーゼと０．０１％
のネオドール２５−７で処理する一方、対照の発生装置
には全く補充しなかった。その処理した発生装置のプロ
テアーゼ濃度を一定に保つ目的で、定期的にエスペラー
ゼを添加した。バイオフィルムの生成を刺激する目的
で、各々の発生装置に栄養素を定期的に添加した。１０
日経った後、各々の発生装置の中のクーポン上に残存し
ているバイオフィルムの量を乾燥重量と全蛋白質（ＢＣ
Ａ方法）で測定した。２日、４日および８日目に、プラ
ンクトン性微生物集団の生菌数を数えた。表５および６
に示すように、これらの結果は、この微生物集団は１０
8個の生菌／ｍＬの一定レベルに維持されたことを示し
ている。従って、この処理は、明らかに、殺生物作用よ
りはむしろ、細胞がクーポンに接着するのを防止してい
ることによるものである。
【００５０】
【表５】 表５ バイオフィルム生成防止に対する酵素／界面活性剤処理の効果 実験 処理 乾燥重量 バイオフィルム 蛋白質 蛋白質 （クーポン当たり 減少％ （mg/mL） 減少％ の平均ｍｇ） １ なし ３．６ ５．４ エスペラーゼ＋ ネオドール １．７ ５２．７ ２．３ ５７．４ ２ なし ３．３ ４．６ エスペラーゼ＋ ネオドール １．４ ５７．６ ３．０ ３４．８
【００５１】
【表６】 表６ 処理（エスペラーゼ／ネオドール）および未処理バイオフィルム発生装置で得ら れるプランクトン性微生物集団の評価 コロニーを生じる単位数（ｘ１０8）／ｍＬ （日数） 実験 処理 （２） （４） （８） １ なし ６．５ ６．１ ８．３ エスペラーゼ＋ネオドール ６．９ ７．０ ２．７ ２ なし ２．３ １．５ ２．６ エスペラーゼ＋ネオドール ２．３ １．０ ３．３実施例１０ バイオフィルム生成防止に対するアルカラーゼ＋ネオド
ール処理の効果 ２つの発生装置を組み立て、そして実施例１と同じ細菌
共同体を接種した。１つの発生装置を１Ｕ／ｍＬのアル
カラーゼ２．４Ｌと０．０１％のネオドール２５−７で
処理する一方、対照の発生装置には全く補充しなかっ
た。その処理した発生装置のプロテアーゼ濃度を一定に
保つ目的で、定期的にアルカラーゼを添加した。実施例
９と同様に栄養素を定期的に添加した。８日経った後、
クーポン上に残存しているバイオフィルムを実施例９と
同様に測定した。
ール処理の効果 ２つの発生装置を組み立て、そして実施例１と同じ細菌
共同体を接種した。１つの発生装置を１Ｕ／ｍＬのアル
カラーゼ２．４Ｌと０．０１％のネオドール２５−７で
処理する一方、対照の発生装置には全く補充しなかっ
た。その処理した発生装置のプロテアーゼ濃度を一定に
保つ目的で、定期的にアルカラーゼを添加した。実施例
９と同様に栄養素を定期的に添加した。８日経った後、
クーポン上に残存しているバイオフィルムを実施例９と
同様に測定した。
【００５２】
【表７】 表７ ８日間に渡るワイヤーメッシュクーポン上へのバイオフィルム堆積防止に対する アルカラーゼ＋ネオドールの効果 処理 微生物数1 全蛋白質 蛋白質減少 乾燥重量 バイオフィ （CFU/mL x 108）（mg/クーポン）（％） （ｍｇ） ルム減少％ なし ５．０ ６．７2 ８．５2 アルカラーゼ ＋ネオドール ５．７ ２．７ ５９．７ ２．０ ７６．５1 発生装置のブロス１ｍＬ当たりに生存している微生
物のコロニー生成単位2 ランダムに選択した１０個のクーポンに関する平均
値実施例１１ バイオフィルム生成防止に対するビブリオリシン＋ネオ
ドール処理の効果 ２つの発生装置を組み立て、そして実施例１と同じ細菌
共同体を接種した。１つの発生装置を１Ｕ／ｍＬのビブ
リオリシンと０．０１％のネオドール２５−７で処理す
る一方、対照の発生装置には全く補充しなかった。その
処理した発生装置のプロテアーゼ濃度を一定に保つ目的
で、定期的にビブリオリシンを添加した。実施例９と同
様に栄養素を両方の発生装置に定期的に添加した。８日
経った後、１２個のクーポン上に残存しているバイオフ
ィルムを実施例９と同様に測定した。
物のコロニー生成単位2 ランダムに選択した１０個のクーポンに関する平均
値実施例１１ バイオフィルム生成防止に対するビブリオリシン＋ネオ
ドール処理の効果 ２つの発生装置を組み立て、そして実施例１と同じ細菌
共同体を接種した。１つの発生装置を１Ｕ／ｍＬのビブ
リオリシンと０．０１％のネオドール２５−７で処理す
る一方、対照の発生装置には全く補充しなかった。その
処理した発生装置のプロテアーゼ濃度を一定に保つ目的
で、定期的にビブリオリシンを添加した。実施例９と同
様に栄養素を両方の発生装置に定期的に添加した。８日
経った後、１２個のクーポン上に残存しているバイオフ
ィルムを実施例９と同様に測定した。
【００５３】
【表８】 表８ バイオフィルム生成防止に対するビブリオリシン＋ネオドールの効果 処理 クーポン当たりの全蛋白質（ｍｇ） 蛋白質減少（％） なし ８．２７ ビブリオリシン＋ ネオドール ２．９９ ６３．８1 １２個のクーポンから得られた値の平均 この実施例で得られる残りの汚染されたクーポンが入っ
ている２つのタワーを、新鮮なＳＣＴＷが入っている２
つの発生装置に移した。次に、両方の発生装置にビブリ
オリシン（１Ｕ／ｍＬ）とネオドール２５−７（０．０
１％）を加えた。１ｍＬ当たり１アゾカゼイン単位で、
プロテアーゼ濃度を一定に維持する目的で、ビブリオリ
シンを定期的に添加した。実施例１と同様にして撹拌、
通気、ｐＨおよび温度を調節したが、追加的栄養素また
は細菌接種材料は全く添加しなかった。２日経った後、
ランダムに選択した１２個のクーポン上に残存している
バイオフィルムを実施例９と同様に測定した。
ている２つのタワーを、新鮮なＳＣＴＷが入っている２
つの発生装置に移した。次に、両方の発生装置にビブリ
オリシン（１Ｕ／ｍＬ）とネオドール２５−７（０．０
１％）を加えた。１ｍＬ当たり１アゾカゼイン単位で、
プロテアーゼ濃度を一定に維持する目的で、ビブリオリ
シンを定期的に添加した。実施例１と同様にして撹拌、
通気、ｐＨおよび温度を調節したが、追加的栄養素また
は細菌接種材料は全く添加しなかった。２日経った後、
ランダムに選択した１２個のクーポン上に残存している
バイオフィルムを実施例９と同様に測定した。
【００５４】
【表９】 表９ ビブリオリシン＋ネオドールを用いたバイオフィルムのインサイチュー除去 初期蛋白質濃度 最終蛋白質濃度 除去％ （ｍｇ／クーポン）1 （ｍｇ／クーポン）1 実験１ ２．９９ １．６１ ４６％ 実験２ ８．２７ ３．５８ ５７％1 １２個のクーポンから得られた値の平均実施例１２ プロテアーゼおよびリパーゼの逐次的処理によるバイオ
フィルム除去 この実施例は、ひどく汚染されたクーポンに対する、プ
ロテアーゼとリパーゼ酵素を逐次添加処理することの効
果を示すものである。合成冷却タワー水（ＳＣＴＷ）中
の未処理対照クーポン（〜１５ｍｇの蛋白質／クーポ
ン）および処理クーポンに対するバイオフィルム（蛋白
質）除去の間の差を用いて、処理効果を測定した。単一
処理（ａ）当たりの全培養時間は２４時間であり、一方
逐次処理（ｂ）培養は全体で４８時間であった。これら
の結果を表１０に示す。
フィルム除去 この実施例は、ひどく汚染されたクーポンに対する、プ
ロテアーゼとリパーゼ酵素を逐次添加処理することの効
果を示すものである。合成冷却タワー水（ＳＣＴＷ）中
の未処理対照クーポン（〜１５ｍｇの蛋白質／クーポ
ン）および処理クーポンに対するバイオフィルム（蛋白
質）除去の間の差を用いて、処理効果を測定した。単一
処理（ａ）当たりの全培養時間は２４時間であり、一方
逐次処理（ｂ）培養は全体で４８時間であった。これら
の結果を表１０に示す。
【００５５】
【表１０】 表１０ 処理 除去された蛋白質ｍｇ 除去された蛋白質％ （ａ）ＳＣＴＷ （ｂ）エスペラーゼ（１Ｕ／ｍＬ）＋０．０５％のネオドール２５−７ ５．６ ３７ （ａ）ＳＣＴＷ （ｂ）リポラーゼ （０．００３Ｕ／ｍＬ） １．６ １１ （ａ）エスペラーゼ（１Ｕ／ｍＬ） ＋０．０５％のネオドール２５−７ （ｂ）リポラーゼ （０．００３Ｕ／ｍＬ） ＋０．０５％のネオドール２５−７ ９．８ ６６ （ａ）リポラーゼ （０．００３Ｕ／ｍＬ） ＋０．０５％のネオドール２５−７ （ｂ）エスペラーゼ（１Ｕ／ｍＬ）＋０．０５％のネオドール２５−７ ５．２ ３５ エスペラーゼ／ネオドールを用いてクーポンを逐次的に
処理した後リポラーゼ／ネオドールで処理することで得
られる、汚染されたクーポンからの蛋白質除去は、各々
の酵素単独が示す添加効果よりも良好であった。予想外
に、その逆（例えば最初にリポラーゼで処理した後プロ
テアーゼで処理する）は有効でなかった。
処理した後リポラーゼ／ネオドールで処理することで得
られる、汚染されたクーポンからの蛋白質除去は、各々
の酵素単独が示す添加効果よりも良好であった。予想外
に、その逆（例えば最初にリポラーゼで処理した後プロ
テアーゼで処理する）は有効でなかった。
【００５６】実施例１３ 逐次的酵素処理を用いたバイオフィルム除去 この実施例は、プロテアーゼと、カルボヒドラーゼまた
はリパーゼ／カルボヒドラーゼ混合物とを用いた、汚染
されたクーポンに対する逐次的酵素処理の効果を示すも
のである。以下に示すデータは、独立した３つの実験の
平均を表している。合成冷却タワー水中の未処理対照ク
ーポン（ＳＣＴＷ、〜２．５ｍｇの蛋白質／クーポン）
および処理クーポンに対するバイオフィルム（蛋白質）
除去の間の差を用いて、処理効果を測定した。処理
（ａ）当たりの全培養時間は２４時間であり、一方逐次
的処理培養（ｂ）は全体で２４時間であった。これらの
結果を以下の表１１と１２に示す。
はリパーゼ／カルボヒドラーゼ混合物とを用いた、汚染
されたクーポンに対する逐次的酵素処理の効果を示すも
のである。以下に示すデータは、独立した３つの実験の
平均を表している。合成冷却タワー水中の未処理対照ク
ーポン（ＳＣＴＷ、〜２．５ｍｇの蛋白質／クーポン）
および処理クーポンに対するバイオフィルム（蛋白質）
除去の間の差を用いて、処理効果を測定した。処理
（ａ）当たりの全培養時間は２４時間であり、一方逐次
的処理培養（ｂ）は全体で２４時間であった。これらの
結果を以下の表１１と１２に示す。
【００５７】
【表１１】 表１１ エスペラーゼおよびカルボヒドラーゼを用いた逐次的酵素処理の効果 処理1 除去された全蛋白質％ （ａ）ＳＣＴＷ（ｂ）エスペラーゼ（０．７Ｕ／ｍＬ） ３６ （ａ）ＳＣＴＷ（ｂ）カルボヒドラーゼ（０．０００６Ｕ／ｍＬ） ８ （ａ）カルボヒドラーゼ（０．０００６Ｕ／ｍＬ）（ｂ）エスペラーゼ（０．７Ｕ／ｍＬ） ４０ （ａ）エスペラーゼ（０．７Ｕ／ｍＬ）（ｂ）カルボヒドラーゼ（０．０００６Ｕ／ｍＬ） ６３ 1 バイオフィルム除去が統計学的に有意であるために
は、バイオフィルム除去は＞１２％（０．３ｍｇ）の蛋
白質除去である必要があった。クーポンを、３ｍｇ／ク
ーポンの蛋白質負荷率で、単一の酵素／ＳＣＴＷ処理当
たり２４時間か或は全体で４８時間培養し、そしてａお
よびｂは、逐次的処理を表している。
は、バイオフィルム除去は＞１２％（０．３ｍｇ）の蛋
白質除去である必要があった。クーポンを、３ｍｇ／ク
ーポンの蛋白質負荷率で、単一の酵素／ＳＣＴＷ処理当
たり２４時間か或は全体で４８時間培養し、そしてａお
よびｂは、逐次的処理を表している。
【００５８】
【表１２】 表１２ 処理 除去された蛋白質ｍｇ 除去された蛋白質％ （２） （２） （ａ）ＳＣＴＷ（ｂ）エスペラーゼ（１Ｕ／ｍＬ） ０．８ ３１ （ａ）ＳＣＴＷ （ｂ）BAN 120L（０．００６Ｕ／ｍＬ） ＋リポラーゼ （０．００３Ｕ／ｍＬ） ０．２ ７ （ａ）エスペラーゼ（１Ｕ／ｍＬ） （ｂ）BAN 120L（０．００６Ｕ／ｍＬ） ＋リポラーゼ （０．００３Ｕ／ｍＬ） １．４ ５６ （ａ）BAN 120L（０．００６Ｕ／ｍＬ） ＋リポラーゼ （０．００３Ｕ／ｍＬ） （ｂ）エスペラーゼ（１Ｕ／ｍＬ） ０．５ ２１ これらの結果は、実施例１２に示すそれと一致してい
る。即ち、付加効果よりも高い効果を得るためには、汚
染された表面を最初にプロテアーゼで処理した後、酵素
（類）から成る第二群で処理する必要がある。再び、そ
の逆は予想外の結果をもたらした。
る。即ち、付加効果よりも高い効果を得るためには、汚
染された表面を最初にプロテアーゼで処理した後、酵素
（類）から成る第二群で処理する必要がある。再び、そ
の逆は予想外の結果をもたらした。
【００５９】実施例１４ 水処理化学品とエスペラーゼとの適合性 この実施例は、次亜塩素酸塩およびスケール用および腐
食用化学品を含む水処理化学品の存在下におけるエスペ
ラーゼ活性の安定性を示し、そして更に、殺生物剤の存
在下でエスペラーゼが有効にバイオフィルムを除去する
ことを同様に示すものである。これらの結果を表１３か
ら１６に示す。他の種類の処理化学品存在下におけるエ
スペラーゼの効力は、この酵素が有する健全な性質に如
何なる悪影響も示さないと期待される。
食用化学品を含む水処理化学品の存在下におけるエスペ
ラーゼ活性の安定性を示し、そして更に、殺生物剤の存
在下でエスペラーゼが有効にバイオフィルムを除去する
ことを同様に示すものである。これらの結果を表１３か
ら１６に示す。他の種類の処理化学品存在下におけるエ
スペラーゼの効力は、この酵素が有する健全な性質に如
何なる悪影響も示さないと期待される。
【００６０】
【表１３】 表１３ エスペラーゼの安定性に対するDearborn水処理化学品の影響 残存活性（％） 処理（１） ２４時間後 ４８時間後 エスペラーゼ（１Ｕ／ｍＬ） １０７ １２１ ＋５０ｐｐｍの分散剤 ９９ １２１ ＋２５０ｐｐｍのDearborn A ８２ ９７ ＋７５ｐｐｍのDearborn B ８４ ８９ ＋１５０ｐｐｍのDearborn C ９９ ８８ ＋０．０５％のネオドール25-7 １０３ １００ ＋０．０５％のネオドール25-7＋ ５０ｐｐｍの分散剤 １００ ９２ ＋０．０５％のネオドール25-7＋ ５０ｐｐｍのDearborn A ９６ １０５ ＋０．５％のネオドール25-7＋ ７５ｐｐｍのDearborn B ９６ ９１ ＋０．５％のネオドール25-7＋ １５０ｐｐｍのDearborn C １１４ １１３ ＋５ｐｐｍのＮａＣｌＯ＋ ０．０５％のネオドール25-7 ５ ５ ＋５ｐｐｍのＮａＣｌＯ＋ ０．０５％のネオドール25-7＋ ５０ｐｐｍの分散剤 １３ １３ ＋５ｐｐｍのＮａＣｌＯ＋ ０．０５％のネオドール25-7＋ ２５０ｐｐｍのDearborn A ３ ５ ＋５ｐｐｍのＮａＣｌＯ＋ ０．０５％のネオドール25-7＋ ７５ｐｐｍのDearborn B ３ ３ ＋５ｐｐｍのＮａＣｌＯ＋ ０．０５％のネオドール25-7＋ １５０ｐｐｍのDearborn C ６３ ５２ （１） 上記分散剤はアミド型の分散剤であり、そして
Dearborn A、Dearborn BおよびDearborn Cは、有機の金
属イオン封鎖剤と分散剤と腐食抑制剤のブレンドを含ん
でいる。この培養温度は４０℃であった。
Dearborn A、Dearborn BおよびDearborn Cは、有機の金
属イオン封鎖剤と分散剤と腐食抑制剤のブレンドを含ん
でいる。この培養温度は４０℃であった。
【００６１】
【表１４】 表１４ バイオフィルム除去に対する異なる水処理化学品の効果(1) 処理 除去された蛋白質ｍｇ(2) 除去された蛋白質％ ０．０５％のネオドール25-7 ０．２ ６ １５０ｐｐｍのDearborn C ０ ０ ７５ｐｐｍのDearborn B ０ ０ ２５０ｐｐｍのDearborn A ０．２ ６ ５０ｐｐｍの分散剤 ０ ０ エスペラーゼ（１Ｕ／ｍＬ） ＋０．０５％のネオドール ０．８ ２３ エスペラーゼ（１Ｕ／ｍＬ） ＋０．０５％のネオドール ＋１５０ｐｐｍのDearborn C １．０ ３０ エスペラーゼ（１Ｕ／ｍＬ） ＋０．０５％のネオドール ＋７５ｐｐｍのDearborn B ０．９ ２９ エスペラーゼ（１Ｕ／ｍＬ） ＋０．０５％のネオドール ＋２５０ｐｐｍのDearborn A １．７ ５２ エスペラーゼ（１Ｕ／ｍＬ） ＋０．０５％のネオドール ＋５０ｐｐｍの分散剤 ０．６ １７ （１） 分散剤、Dearborn A、Dearborn BおよびDearbo
rn Cは表１３で定義したのと同じである。培養温度は４
０℃であった。
rn Cは表１３で定義したのと同じである。培養温度は４
０℃であった。
【００６２】（２） バイオフィルム除去が統計学的に
有意であるためには、蛋白質除去は≧０．４ｍｇの蛋白
質（１２％）である必要があった。
有意であるためには、蛋白質除去は≧０．４ｍｇの蛋白
質（１２％）である必要があった。
【００６３】
【表１５】 表１５ 選択したDearborn殺生物剤とエスペラーゼとの適合性 残存活性（％） 処理(1) ２４時間 ４８時間 １Ｕ／ｍＬのエスペラーゼ＋ ０．０５％のネオドール25-7 １０２ １０６ ＋２５０ｐｐｍの殺生物剤Ａ ９６ ９３ ＋１００ｐｐｍの殺生物剤Ｂ １０１ １０２ ＋１００ｐｐｍの殺生物剤Ｃ １５０ １１６ ＋１２０ｐｐｍの殺生物剤Ｄ ７３ ６４ ＋１５０ｐｐｍの殺生物剤Ｅ ９９ ９４ ＋２００ｐｐｍの殺生物剤Ｆ ８９ １５０ ＋ １２ｐｐｍの殺生物剤Ｇ ９４ ９１ ＋１２５ｐｐｍの殺生物剤Ｈ ９１ １０９(1) 培養温度は４０℃であった。
【００６４】
【表１６】 表１６ Dearborn殺生物剤との組み合わせにおける汚染されたクーポンに対する酵素処理 の効果 処理(1) 除去された蛋白質ｍｇ(2)除去された蛋白質％(2) １Ｕ／ｍＬのエスペラーゼ ２．３ ３３ ２５０ｐｐｍの殺生物剤Ａ ０．４ ５ １２０ｐｐｍの殺生物剤Ｄ ０．８ １１ １５０ｐｐｍの殺生物剤Ｅ ０．６ ９ １Ｕ／ｍＬのエスペラーゼ ＋２５０ｐｐｍの殺生物剤Ａ ３．０ ４３ １Ｕ／ｍＬのエスペラーゼ ＋１２０ｐｐｍの殺生物剤Ｄ ２．７ ３８ １Ｕ／ｍＬのエスペラーゼ ＋１５０ｐｐｍの殺生物剤Ｅ ２．５ ３６(1) 表１５および１６に挙げる各々の殺生物剤が有す
る活性成分を以下に示す。全ての酵素処理は、ＳＣＴＷ
を用いた処理を除いて、ネオドール２５−７を０．０５
％添加することを含んでいた。
る活性成分を以下に示す。全ての酵素処理は、ＳＣＴＷ
を用いた処理を除いて、ネオドール２５−７を０．０５
％添加することを含んでいた。
【００６５】(2) バイオフィルム除去が統計学的に有
意であるためには、蛋白質除去は≧０．８ｍｇの蛋白質
（１２％の除去）である必要があった。
意であるためには、蛋白質除去は≧０．８ｍｇの蛋白質
（１２％の除去）である必要があった。
【００６６】殺生物剤Ａ− ５−クロロ−２−メチル−
４−イソチアゾリン−３−オン、２−メチル−４−イソ
チアジン−３−オン 殺生物剤Ｂ− Ｎ−アルキル−１，３−プロパンジアミ
ン 殺生物剤Ｃ− メチレンビス−（チオシアネート） 殺生物剤Ｄ− ジメチルジチオカルバミン酸ナトリウ
ム、エチレンビス（ジチオカルバミン酸）二ナトリウム 殺生物剤Ｅ− アルキルジメチルベンジルアンモニウム
クロライド、ビス（トリ−ｎ−ブチル錫）オキサイド 殺生物剤Ｆ− ポリ［オキシエチレン（ジメチルイミ
ノ）エチレン（ジメチルイミノ）エチレンジクロライ
ド］ 殺生物剤Ｇ− ２，２−ジブロモ−３−ニトリロプロピ
オナミド 殺生物剤Ｈ− Ｎ−アルキルジメチルベンジルアンモニ
ウムクロライド、ビス（トリ−ｗ−ブチル錫）オキサイ
ド、Ｎ−アルキル１，３−プロパンジアミン実施例１５ 水処理化学品とビブリオリシンおよびアルカラーゼとの
適合性 この実施例は、次亜塩素酸塩およびスケール用および腐
食用化学品を含む水処理化学品の存在下におけるビブリ
オリシン活性の安定性を示し、そして更に、殺生物剤の
存在下でビブリオリシンが有効にバイオフィルムを除去
することを同様に示すものである。これらの結果を表１
７−１９に示す。他の種類の処理化学品存在下における
ビブリオリシンの効力は、この酵素が有する健全な性質
に如何なる悪影響も示さないと期待される。
４−イソチアゾリン−３−オン、２−メチル−４−イソ
チアジン−３−オン 殺生物剤Ｂ− Ｎ−アルキル−１，３−プロパンジアミ
ン 殺生物剤Ｃ− メチレンビス−（チオシアネート） 殺生物剤Ｄ− ジメチルジチオカルバミン酸ナトリウ
ム、エチレンビス（ジチオカルバミン酸）二ナトリウム 殺生物剤Ｅ− アルキルジメチルベンジルアンモニウム
クロライド、ビス（トリ−ｎ−ブチル錫）オキサイド 殺生物剤Ｆ− ポリ［オキシエチレン（ジメチルイミ
ノ）エチレン（ジメチルイミノ）エチレンジクロライ
ド］ 殺生物剤Ｇ− ２，２−ジブロモ−３−ニトリロプロピ
オナミド 殺生物剤Ｈ− Ｎ−アルキルジメチルベンジルアンモニ
ウムクロライド、ビス（トリ−ｗ−ブチル錫）オキサイ
ド、Ｎ−アルキル１，３−プロパンジアミン実施例１５ 水処理化学品とビブリオリシンおよびアルカラーゼとの
適合性 この実施例は、次亜塩素酸塩およびスケール用および腐
食用化学品を含む水処理化学品の存在下におけるビブリ
オリシン活性の安定性を示し、そして更に、殺生物剤の
存在下でビブリオリシンが有効にバイオフィルムを除去
することを同様に示すものである。これらの結果を表１
７−１９に示す。他の種類の処理化学品存在下における
ビブリオリシンの効力は、この酵素が有する健全な性質
に如何なる悪影響も示さないと期待される。
【００６７】種々の殺生物剤存在下におけるアルカラー
ゼに関する安定性のデータを表２０に示す。これらの化
合物の存在下におけるバイオフィルム除去に対する試験
は行わなかったが、エスペラーゼとアルカラーゼとは類
似していることから、匹敵する性能が期待される。
ゼに関する安定性のデータを表２０に示す。これらの化
合物の存在下におけるバイオフィルム除去に対する試験
は行わなかったが、エスペラーゼとアルカラーゼとは類
似していることから、匹敵する性能が期待される。
【００６８】
【表１７】 表１７ ビブリオリシンの安定性に対するDearborn水処理化学品の影響(a) 残存活性（％） 処理(b) ２４時間後 ４８時間後 なし ６８ ６４ 分散液 ６９ ６４ Dearborn A ６９ ６６ Dearborn B ６６ ７０ Dearborn C ７６ ６７ ネオドール25-7 ６７ ６３ ネオドール25-7＋分散剤 ７７ ７１ ネオドール25-7＋Dearborn A ８７ ７８ ネオドール25-7＋Dearborn B ８２ ６８ ネオドール25-7＋Dearborn C ７６ ６３ ネオドール25-7＋ＮａＣｌＯ ８４ ８４ 分散剤＋ネオドール25-7＋ＮａＣｌＯ ８２ ７５ Dearborn A＋ネオドール25-7 ＋ＮａＣｌＯ ８０ ７７ ネオドール25-7＋Dearborn B ＋ＮａＣｌＯ ７８ ８３ ネオドール25-7＋Dearborn C ＋ＮａＣｌＯ ７３ ７４ （ａ） 種々の水処理化学品が入っているＳＣＴＷ中４
０℃でビブリオリシン（２０Ｕ／ｍＬ）を培養し、サン
プルを取り出した後、アゾカゼインアッセイを用いて残
存活性を分析した。
０℃でビブリオリシン（２０Ｕ／ｍＬ）を培養し、サン
プルを取り出した後、アゾカゼインアッセイを用いて残
存活性を分析した。
【００６９】（ｂ） 水処理化学品の濃度は下記の通り
であった。分散剤（５０ｐｐｍ）、Dearborn A（２５０
ｐｐｍ）、Dearborn B（７５ｐｐｍ）、Dearborn C（１
５０ｐｐｍ）、ネオドール２５−７（０．０５％）およ
びＮａＣｌＯ（５ｐｐｍ）。
であった。分散剤（５０ｐｐｍ）、Dearborn A（２５０
ｐｐｍ）、Dearborn B（７５ｐｐｍ）、Dearborn C（１
５０ｐｐｍ）、ネオドール２５−７（０．０５％）およ
びＮａＣｌＯ（５ｐｐｍ）。
【００７０】
【表１８】 表１８ 選択したDearborn殺生物剤とビブリオリシンとの適合性 残存活性（％） 処理(c) ２４時間 ４８時間 実験１(a) なし ７３ ６２ 殺生物剤Ａ ７５ ７１ 殺生物剤Ｂ ７２ ６８ 殺生物剤Ｃ ８６ ８３ 殺生物剤Ｄ ９２ ８１ 殺生物剤Ｅ ７３ ７５ 殺生物剤Ｆ ７２ ７１ 殺生物剤Ｇ ７５ ６４ 殺生物剤Ｈ ７８ ７４ 実験２(b) なし ７７ ６９ 殺生物剤Ａ ７０ ６４ 殺生物剤Ｂ ６９ ６６ 殺生物剤Ｃ ８１ ７８ 殺生物剤Ｄ ７９ ７０ 殺生物剤Ｅ ８０ ８０ 殺生物剤Ｆ ８１ ７０ 殺生物剤Ｇ ７７ ７１ 殺生物剤Ｈ ７９ ７３(a) 殺生物剤の有り無しで、０．０５％のネオドール
２５−７が入っているＳＣＴＷ中４０℃でビブリオリシ
ン（１Ｕ／ｍＬ）を培養した。
２５−７が入っているＳＣＴＷ中４０℃でビブリオリシ
ン（１Ｕ／ｍＬ）を培養した。
【００７１】(b) 殺生物剤の有り無しで、０．０５％
のネオドール２５−７と５ｐｐｍのＮａＣｌＯが入って
いるＳＣＴＷ中でビブリオリシン（２０Ｕ／ｍＬ）を培
養した。
のネオドール２５−７と５ｐｐｍのＮａＣｌＯが入って
いるＳＣＴＷ中でビブリオリシン（２０Ｕ／ｍＬ）を培
養した。
【００７２】(c) 殺生物剤の濃度は下記の通りであっ
た。Ａ（２５０ｐｐｍ）、Ｂ（１００ｐｐｍ）、Ｃ（１
００ｐｐｍ）、Ｄ（１２０ｐｐｍ）、Ｅ（１５０ｐｐ
ｍ）、Ｆ（２００ｐｐｍ）、Ｇ（１２ｐｐｍ）およびＨ
（１２５ｐｐｍ）。
た。Ａ（２５０ｐｐｍ）、Ｂ（１００ｐｐｍ）、Ｃ（１
００ｐｐｍ）、Ｄ（１２０ｐｐｍ）、Ｅ（１５０ｐｐ
ｍ）、Ｆ（２００ｐｐｍ）、Ｇ（１２ｐｐｍ）およびＨ
（１２５ｐｐｍ）。
【００７３】
【表１９】 表１９ ビブリオリシンの効力に対するDearborn水処理化学品の影響(a) 実験 処理 乾燥重量 除去された蛋白質％ （クーポン当たりの 平均ｍｇ） １(b) 酵素なし ７．８３ − 殺生物剤Ａ ５．６７ ２７．６ 殺生物剤Ｄ ５．１８ ３３．８ 殺生物剤Ｅ ５．５２ ２９．５ ネオドール ５．３０ ３２．５ ネオドール＋殺生物剤Ａ ５．１４ ３４．４ ネオドール＋殺生物剤Ｄ ４．４６ ４３．０ ネオドール＋殺生物剤Ｅ ４．９６ ３６．７ ２(c) 酵素なし ６．６５ − 殺生物剤Ａ ４．５４ ３０．７ 殺生物剤Ｄ ４．２０ ３５．９ 殺生物剤Ｅ ４．７９ ２６．９ ネオドール ３．７６ ４２．６ ネオドール＋殺生物剤Ａ ３．７８ ４２．３ ネオドール＋殺生物剤Ｄ ３．５４ ４６．０ ネオドール＋殺生物剤Ｅ ３．８７ ４０．９(a) ＳＣＴＷ中の汚染されたクーポンにビブリオリシ
ン（１Ｕ／ｍＬ）を添加し、そして水処理化学品有り無
しにおけるバイオフィルム除去の評価を行った。殺生物
剤とネオドールの濃度は表１８に記述した濃度であっ
た。
ン（１Ｕ／ｍＬ）を添加し、そして水処理化学品有り無
しにおけるバイオフィルム除去の評価を行った。殺生物
剤とネオドールの濃度は表１８に記述した濃度であっ
た。
【００７４】(b) バイオフィルム除去が統計学的に有
意であるためには、蛋白質除去は≧０．９ｍｇまたは１
１．５％の除去である必要があった。
意であるためには、蛋白質除去は≧０．９ｍｇまたは１
１．５％の除去である必要があった。
【００７５】(c) バイオフィルム除去が統計学的に有
意であるためには、蛋白質除去は≧０．４８ｍｇまたは
７．３％の除去である必要があった。
意であるためには、蛋白質除去は≧０．４８ｍｇまたは
７．３％の除去である必要があった。
【００７６】
【表２０】 表２０ アルカラーゼの安定性に対する水処理化学品の影響(a) 残存活性（％） 処理(b) ３０時間 ４８時間 なし ７４ ５１ 殺生物剤Ａ ７７ ５７ 殺生物剤Ｄ ７５ ５６ 殺生物剤Ｅ ７７ ６２ 殺生物剤Ｇ ６９ ５６ （ａ） 殺生物剤の有り無しで０．０５％のネオドール
２５−７が入っているＳＣＴＷ中４０℃でアルカラーゼ
（２０Ｕ／ｍＬ）を培養し、サンプルを取り出した後、
標準的アゾカゼインアッセイを用いて残存活性を分析し
た。
２５−７が入っているＳＣＴＷ中４０℃でアルカラーゼ
（２０Ｕ／ｍＬ）を培養し、サンプルを取り出した後、
標準的アゾカゼインアッセイを用いて残存活性を分析し
た。
【００７７】（ｂ） 殺生物剤の濃度は表１８に記述し
たのと同じであった。
たのと同じであった。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:20） (Ｃ１２Ｎ 9/52 Ｃ１２Ｒ 1:185） (Ｃ１２Ｎ 9/52 Ｃ１２Ｒ 1:07） (72)発明者 ドナルド・リチヤード・ダーハム アメリカ合衆国メリーランド州20760ゲイ ザーバーグ・ビーバーリツジロード20617 (72)発明者 ロウエナ・リザ・ロバーツ アメリカ合衆国メリーランド州20855ダー ウツド・デユウウツドドライブ7624 (72)発明者 ライ−ドウイエン・グレイス・フアン アメリカ合衆国イリノイ州60047レイクチ ユーリヒ・バークレイロード1165
Claims (20)
- 【請求項１】 バイオフィルム堆積物を抑制または除去
するに有効な用量で、本質的にプロテアーゼから成る酵
素組成物をこの系に添加することを特徴とする、水系と
接触する表面上のバイオフィルム堆積物を抑制または除
去する方法。 - 【請求項２】 該プロテアーゼが、セリンプロテアーゼ
類、メタロプロテアーゼ類、システインプロテアーゼ
類、アスパラギン酸プロテアーゼ類、およびそれらの混
合物から成る群より選択される請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 該プロテアーゼが、エスペラーゼ、アル
カラーゼ、スブチリシン、マキサターゼ、マキサカール
およびトリプシンから成る群より選択されるセリンプロ
テアーゼである請求項２記載の方法。 - 【請求項４】 該プロテアーゼがエスペラーゼである請
求項３記載の方法。 - 【請求項５】 該プロテアーゼがアルカラーゼである請
求項３記載の方法。 - 【請求項６】 該プロテアーゼが、ビブリオリシン、サ
ーモリシン、サーモアーゼ、ノボＴＳ、ニュートラー
ゼ、ＳＰ−３６９、プロテアーゼ２Ａ、シープローゼ
５、プロチーム６、およびそれらの混合物から成る群よ
り選択される請求項２記載の方法。 - 【請求項７】 該プロテアーゼがビブリオリシンである
請求項６記載の方法。 - 【請求項８】 該プロテアーゼ用量が０．０００１ｕ／
ｍＬないし１００ｕ／ｍＬの範囲である請求項１記載の
方法。 - 【請求項９】 該プロテアーゼ用量が０．０００５ｕ／
ｍＬないし１ｕ／ｍＬの範囲である請求項１記載の方
法。 - 【請求項１０】 殺生物剤、界面活性剤、腐食抑制剤、
スケール抑制剤、分散剤、キレート剤、ポリマー剤、ホ
スフェート類、ポリホスフェート類、シリケート類、緩
衝剤、カルボキシレート類、スルホネート類および光学
光沢剤から成る群より選択される１種以上の水処理剤と
組み合わせて該酵素組成物を該水系に添加する請求項１
記載の方法。 - 【請求項１１】 該酵素組成物が更に界面活性剤を含ん
でいる請求項１記載の方法。 - 【請求項１２】 該プロテアーゼ：界面活性剤の比率
が、それぞれプロテアーゼ活性単位：界面活性剤重量を
基準として０．０００１：１ないし１００：１の範囲で
ある請求項１１記載の方法。 - 【請求項１３】 該プロテアーゼ：界面活性剤の比率
が、それぞれプロテアーゼ活性単位：界面活性剤重量を
基準として０．００５：１ないし１０：１の範囲である
請求項１１記載の方法。 - 【請求項１４】 それぞれプロテアーゼ活性単位：界面
活性剤重量の比率が０．００１：１から１００：１の範
囲でプロテアーゼと界面活性剤を含んでいる、水系に接
触する表面上のバイオフィルム堆積物を抑制または除去
するための組成物。 - 【請求項１５】 １）本質的にプロテアーゼ類から成る
酵素組成物を水系に添加し、２）この酵素組成物を該水
系に循環させることにより、該酵素組成物とバイオフィ
ルム堆積物とを接触させ、そして３）この水系に少なく
とも１種のリパーゼ、カルボヒドラーゼまたはそれらの
混合物を添加する、逐次的段階を含み、そしてここで、
該酵素組成物と該リパーゼ、カルボヒドラーゼまたはそ
れらの混合物を、該バイオフィルム堆積物を抑制または
除去するに充分な量で添加する、水系に接触する表面か
らバイオフィルム堆積物を抑制または除去する方法。 - 【請求項１６】 殺生物剤、界面活性剤、腐食抑制剤、
スケール抑制剤、分散剤、キレート剤、ポリマー剤、ホ
スフェート類、ポリホスフェート類、シリケート類、緩
衝剤、カルボキシレート類、スルホネート類および光学
光沢剤から成る群より選択される１種以上の水処理剤と
組み合わせて該酵素組成物を該水系に添加する請求項１
５記載の方法。 - 【請求項１７】 該プロテアーゼ用量が０．０００１ｕ
／ｍＬないし１００ｕ／ｍＬの範囲である請求項１５記
載の方法。 - 【請求項１８】 該プロテアーゼ用量が０．０００５ｕ
／ｍＬないし１ｕ／ｍＬの範囲である請求項１５記載の
方法。 - 【請求項１９】 該リパーゼ、カルボヒドラーゼまたは
それらの混合物の用量が０．０００１ｕ／ｍＬないし１
００ｕ／ｍＬの範囲である請求項１５記載の方法。 - 【請求項２０】 該リパーゼ、カルボヒドラーゼまたは
それらの混合物の用量が０．０００５ｕ／ｍＬないし１
ｕ／ｍＬの範囲である請求項１５記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US95197492A | 1992-09-28 | 1992-09-28 | |
| US951974 | 1992-09-28 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06262165A true JPH06262165A (ja) | 1994-09-20 |
Family
ID=25492421
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5260425A Pending JPH06262165A (ja) | 1992-09-28 | 1993-09-27 | バイオフイルムを抑制および除去するプロテアーゼ類 |
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| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0590746B1 (ja) |
| JP (1) | JPH06262165A (ja) |
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| CA (1) | CA2106609A1 (ja) |
| DE (1) | DE69316501T2 (ja) |
| DK (1) | DK0590746T3 (ja) |
| ES (1) | ES2111710T3 (ja) |
Cited By (11)
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