JPH06220089A - ペプチド又はその塩並びにそれらを含有する自己免疫性甲状腺疾患の診断薬又は治療薬 - Google Patents
ペプチド又はその塩並びにそれらを含有する自己免疫性甲状腺疾患の診断薬又は治療薬Info
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- JPH06220089A JPH06220089A JP5047573A JP4757393A JPH06220089A JP H06220089 A JPH06220089 A JP H06220089A JP 5047573 A JP5047573 A JP 5047573A JP 4757393 A JP4757393 A JP 4757393A JP H06220089 A JPH06220089 A JP H06220089A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 本発明は、自己免疫性甲状腺疾患の診断薬又
は治療薬の有効成分として有用なペプチドを提供するに
あり、特に本発明によれば従来の方法に比し自己免疫性
甲状腺疾患の診断の測定操作が簡便である。 【構成】 前記ペプチドは、Ｃｙｓ Ｈｉｓ Ｇｌｎ
Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｌｙｓ Ａ
ｓｐ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｌｅｕ （配列番号
１）、Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ａ
ｓｎ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｈｉｓ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｉ
ｌｅ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ｉ
ｌｅ Ａｓｐ Ｐｒｏ （配列番号２）又はＬｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ｌｙｓ
Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｇ
ｌｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｍｅｔ Ｃｙｓ Ａｓｎ Ｇｌ
ｕ Ｓｅｒ （配列番号３）のアミノ酸配列で表わされ
るペプチド又はその塩である。
は治療薬の有効成分として有用なペプチドを提供するに
あり、特に本発明によれば従来の方法に比し自己免疫性
甲状腺疾患の診断の測定操作が簡便である。 【構成】 前記ペプチドは、Ｃｙｓ Ｈｉｓ Ｇｌｎ
Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｌｙｓ Ａ
ｓｐ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｌｅｕ （配列番号
１）、Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ａ
ｓｎ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｈｉｓ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｉ
ｌｅ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ｉ
ｌｅ Ａｓｐ Ｐｒｏ （配列番号２）又はＬｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ｌｙｓ
Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｇ
ｌｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｍｅｔ Ｃｙｓ Ａｓｎ Ｇｌ
ｕ Ｓｅｒ （配列番号３）のアミノ酸配列で表わされ
るペプチド又はその塩である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は新規なペプチド又はその
塩に関し、また、それらを有効成分として含有する自己
免疫性甲状腺疾患の診断薬又は治療薬に関する。
塩に関し、また、それらを有効成分として含有する自己
免疫性甲状腺疾患の診断薬又は治療薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】自己免疫性甲状腺疾患の原因物質の一つ
として考えられる甲状腺刺激ホルモン（以下ＴＳＨと略
す）の受容体自己抗体には、甲状腺刺激抗体（以下ＴＳ
Ａｂと略す）とＴＳＨ結合阻害抗体（以下ＴＢＩＩと略
す）がある。その量的変化は病態を知る上で重要なマー
カーと考えられる。従来、前記抗体の測定にはアデニレ
ートシクラーゼの活性化によるサイクリックＡＭＰ（ｃ
ＡＭＰ）の産生を指標にしたスティミュレーション・ア
ッセイ法と１２５Ｉ−ＴＳＨを用いたラジオイムノアッ
セイによるバインディング・アッセイ法が知られてい
る。
として考えられる甲状腺刺激ホルモン（以下ＴＳＨと略
す）の受容体自己抗体には、甲状腺刺激抗体（以下ＴＳ
Ａｂと略す）とＴＳＨ結合阻害抗体（以下ＴＢＩＩと略
す）がある。その量的変化は病態を知る上で重要なマー
カーと考えられる。従来、前記抗体の測定にはアデニレ
ートシクラーゼの活性化によるサイクリックＡＭＰ（ｃ
ＡＭＰ）の産生を指標にしたスティミュレーション・ア
ッセイ法と１２５Ｉ−ＴＳＨを用いたラジオイムノアッ
セイによるバインディング・アッセイ法が知られてい
る。
【０００３】
【発明が解決しようとする問題点】スティミュレーショ
ン・アッセイ法では、小杉（Ｋｏｓｕｇｉ．Ｓ）らの方
法〔Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ １２５．Ｎ
ｏ．１ ４１０頁（１９８９）〕が知られている。この
方法ではラット甲状腺細胞株ＦＲＴＬ５を用い、ＴＳＡ
ｂとＴＳＨ受容体との結合によりアデニレートシクラー
ゼが活性化されることによって産生されるｃＡＭＰの量
を測定し、それを指標として、ＴＳＡｂの活性を測定す
る。一方、バインディング・アッセイ法ではスミス（Ｓ
ｍｉｔｈ．Ｂ．Ｒ）らの方法〔Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｅｎ
ｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ．１７．４０９頁（１
９８２）〕が知られており、その方法では１２５Ｉ−Ｔ
ＳＨを用い、ブタ甲状腺から可溶化したＴＳＨ受容体と
１２５Ｉ−ＴＳＨとの結合に対するＴＳＨ受容体自己抗
体による阻害の程度を測定する。ところがＴＳＨ受容体
自己抗体には種々のものが存在し、また血清中にはＴＳ
Ｈが存在することも考慮に入れる必要がある。前者の方
法ではＴＳＡｂの活性のみが測定され、後者の方法では
ＴＢＩＩの活性のみが測定される。従ってＴＳＨ受容体
といずれか一方又は両方の前記自己抗体とが結合したか
不明である。また、従来の方法は測定に煩雑な操作を必
要とするので、より簡易な方法の出現が望まれている。
ン・アッセイ法では、小杉（Ｋｏｓｕｇｉ．Ｓ）らの方
法〔Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ １２５．Ｎ
ｏ．１ ４１０頁（１９８９）〕が知られている。この
方法ではラット甲状腺細胞株ＦＲＴＬ５を用い、ＴＳＡ
ｂとＴＳＨ受容体との結合によりアデニレートシクラー
ゼが活性化されることによって産生されるｃＡＭＰの量
を測定し、それを指標として、ＴＳＡｂの活性を測定す
る。一方、バインディング・アッセイ法ではスミス（Ｓ
ｍｉｔｈ．Ｂ．Ｒ）らの方法〔Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｅｎ
ｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ．１７．４０９頁（１
９８２）〕が知られており、その方法では１２５Ｉ−Ｔ
ＳＨを用い、ブタ甲状腺から可溶化したＴＳＨ受容体と
１２５Ｉ−ＴＳＨとの結合に対するＴＳＨ受容体自己抗
体による阻害の程度を測定する。ところがＴＳＨ受容体
自己抗体には種々のものが存在し、また血清中にはＴＳ
Ｈが存在することも考慮に入れる必要がある。前者の方
法ではＴＳＡｂの活性のみが測定され、後者の方法では
ＴＢＩＩの活性のみが測定される。従ってＴＳＨ受容体
といずれか一方又は両方の前記自己抗体とが結合したか
不明である。また、従来の方法は測定に煩雑な操作を必
要とするので、より簡易な方法の出現が望まれている。
【０００４】本発明者らは特定のペプチドがＴＳＡｂを
特異的に認識すること及びＴＳＡｂとＴＳＨ受容体との
結合を阻害する作用を有することを見い出し、前記ペプ
チドが自己免疫性甲状腺疾患の診断薬又は治療薬の有効
成分として有用であるとの知見を得、木発明を完成する
に至った。本発明はヒトのＴＳＨ受容体の一部構造に一
致した配列を有する合成ペプチドに関する。
特異的に認識すること及びＴＳＡｂとＴＳＨ受容体との
結合を阻害する作用を有することを見い出し、前記ペプ
チドが自己免疫性甲状腺疾患の診断薬又は治療薬の有効
成分として有用であるとの知見を得、木発明を完成する
に至った。本発明はヒトのＴＳＨ受容体の一部構造に一
致した配列を有する合成ペプチドに関する。
【０００５】
本発明は、アミノ酸配列 Ｃｙｓ Ｈｉｓ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｐ
ｈｅ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｌｙｓ Ａｓｐ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ａ
ｒｇ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｌｅｕ （配列番号１）、Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇ
ｌｕ Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌ
ｙｓ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｈｉｓ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｔ
ｈｒ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｐｒｏ
（配列番号２）及びＬｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｇ
ｌｙ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｍｅｔ Ｃｙｓ Ａｓｎ Ｇ
ｌｕ Ｓｅｒ （配列番号３）で表わされるペプチドか
らなる群より選ばれた少なくとも一種のペプチド又はそ
の塩を提供し、また、このものを有効成分として含有す
る自己免疫性甲状腺疾患の診断薬又は治療薬を提供する
ものである。
ｈｅ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｌｙｓ Ａｓｐ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ａ
ｒｇ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｌｅｕ （配列番号１）、Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇ
ｌｕ Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌ
ｙｓ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｈｉｓ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｔ
ｈｒ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｐｒｏ
（配列番号２）及びＬｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｇ
ｌｙ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｍｅｔ Ｃｙｓ Ａｓｎ Ｇ
ｌｕ Ｓｅｒ （配列番号３）で表わされるペプチドか
らなる群より選ばれた少なくとも一種のペプチド又はそ
の塩を提供し、また、このものを有効成分として含有す
る自己免疫性甲状腺疾患の診断薬又は治療薬を提供する
ものである。
【０００６】ここでいうペプチドの塩としては、薬理学
的に許容されるものであればいずれのものでもよいが、
例えば、ナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属塩、
マグネシウム、カルシウムなどのアルカリ土類金属塩、
モノメチルアミン、トリエチルアミンなどのアミン塩、
トリメチルエチルアンモニウム、テトラメチルアンモニ
ウムなどの第４級アンモニウム塩などの塩が挙げられ
る。
的に許容されるものであればいずれのものでもよいが、
例えば、ナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属塩、
マグネシウム、カルシウムなどのアルカリ土類金属塩、
モノメチルアミン、トリエチルアミンなどのアミン塩、
トリメチルエチルアンモニウム、テトラメチルアンモニ
ウムなどの第４級アンモニウム塩などの塩が挙げられ
る。
【０００７】なお、本明細書全般に亙り記載の略記号は
次の意味を有する。 Ｌｙｓ ； Ｌ−リジン Ｇｌｕ ； Ｌ−グルタミン酸 Ｐｒｏ ； Ｌ−プロリン Ｐｈｅ ； Ｌ−フェニルアラニン Ｇｌｎ ； Ｌ−グルタミン Ａｓｐ ； Ｌ−アスパラギン酸 Ｔｈｒ ； Ｌ−スレオニン Ａｓｎ ； Ｌ−アスパラギン Ｖａｌ ； Ｌ−バリン Ｉｌｅ ； Ｌ−イソロイシン Ｌｅｕ ； Ｌ−ロイシン Ｇｌｙ ； グリシン Ｃｙｓ ； Ｌ−システイン Ｈｉｓ ； Ｌ−ヒスチジン Ａｒｇ ； Ｌ−アルギニン Ｓｅｒ ； Ｌ−セリン Ｔｙｒ ； Ｌ−チロシン Ｍｅｔ ； Ｌ−メチオニン ＰＡＭ ； ４−オキシメチルフェニルアセタミ
ドメチル Ｂｏｃ ； ｔ−ブトキシカルボニル Ｆｍｏｃ ； ９−フルオレニルメチルオキシカル
ボニル ＴＦＡ ； トリフルオロ酢酸 ＴＦＭＳＡ ； トリフルオロメタンスルホン酸
次の意味を有する。 Ｌｙｓ ； Ｌ−リジン Ｇｌｕ ； Ｌ−グルタミン酸 Ｐｒｏ ； Ｌ−プロリン Ｐｈｅ ； Ｌ−フェニルアラニン Ｇｌｎ ； Ｌ−グルタミン Ａｓｐ ； Ｌ−アスパラギン酸 Ｔｈｒ ； Ｌ−スレオニン Ａｓｎ ； Ｌ−アスパラギン Ｖａｌ ； Ｌ−バリン Ｉｌｅ ； Ｌ−イソロイシン Ｌｅｕ ； Ｌ−ロイシン Ｇｌｙ ； グリシン Ｃｙｓ ； Ｌ−システイン Ｈｉｓ ； Ｌ−ヒスチジン Ａｒｇ ； Ｌ−アルギニン Ｓｅｒ ； Ｌ−セリン Ｔｙｒ ； Ｌ−チロシン Ｍｅｔ ； Ｌ−メチオニン ＰＡＭ ； ４−オキシメチルフェニルアセタミ
ドメチル Ｂｏｃ ； ｔ−ブトキシカルボニル Ｆｍｏｃ ； ９−フルオレニルメチルオキシカル
ボニル ＴＦＡ ； トリフルオロ酢酸 ＴＦＭＳＡ ； トリフルオロメタンスルホン酸
【０００８】本発明のペプチドは、従来の液相法、固相
法などの方法で得ることができるが、より簡便には、固
相法による市販のペプチド合成機を用いて得ることがで
きる。固相法においては、ポリマー性の支持体に前記ペ
プチドのＣ末端側から、そのアミノ酸残基に対応したア
ミノ酸を縮合させペプチド結合を形成させる。縮合方法
としては、例えばＤＣＣ法、酸無水物法、活性化エステ
ル法などの方法を使用することができる。α−アミノ基
の保護基としてはＢｏｃ基又はＦｍｏｃ基が使用でき
る。例えば、ペプチド自動合成装置を用いて合成する時
にはその装置のマニュアル指示に従い適宜アミノ酸の性
質を考慮して選択するのが好ましい。
法などの方法で得ることができるが、より簡便には、固
相法による市販のペプチド合成機を用いて得ることがで
きる。固相法においては、ポリマー性の支持体に前記ペ
プチドのＣ末端側から、そのアミノ酸残基に対応したア
ミノ酸を縮合させペプチド結合を形成させる。縮合方法
としては、例えばＤＣＣ法、酸無水物法、活性化エステ
ル法などの方法を使用することができる。α−アミノ基
の保護基としてはＢｏｃ基又はＦｍｏｃ基が使用でき
る。例えば、ペプチド自動合成装置を用いて合成する時
にはその装置のマニュアル指示に従い適宜アミノ酸の性
質を考慮して選択するのが好ましい。
【０００９】固相法において使用される保護アミノ酸の
保護基としては、ペプチド合成において一般的に使用さ
れるものが用いられる。例えば、α−アミノ基にＢｏｃ
基を用いるとき、Ａｓｐ、Ｇｌｕのカルボキシル基には
エステル基により保護されるベンジル基又はシクロヘキ
シル基が、Ｔｈｒ、Ｓｅｒのヒドロキシル基にはベンジ
ル基が、Ｌｙｓの側鎖アミノ基にはｐ−クロロベンジル
オキシカルボニル基が、Ｔｙｒのヒドロキシル基には２
−ブロモベンジルオキシカルボニル基が、Ｈｉｓのイミ
ダゾリル基にはトルエンスルホニル基、ベンジルオキシ
メチル基又は２，４−ジニトロフェニル基が、Ａｒｇの
グアニジノ基にはＰ−メトキシベンゼンスルホニル基又
はメシチレン−２−スルホニル基が、Ｃｙｓのメルカプ
ト基にはＰ−メトキシベンジル基又はアセトアミドメチ
ル基が、Ｍｅｔのチオメチル基にはスルホキシド基が、
それぞれ用いられる。またα−アミノ基にＦｍｏｃ基を
用いるとき、Ａｓｐ、Ｇｌｕのカルボキシル基、Ｔｙ
ｒ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒのヒドロキシル基には第三級ブチル
エステルが、Ｌｙｓの側鎖アミノ基にはｔ−ブトキシカ
ルボニル基が、Ｈｉｓのイミダゾリル基にはトリチル基
が、Ａｒｇのグアニジノ基には４−メトキシ−２，３，
６−トリメチルベンゼンスルホニル基又はＰ−トルエン
スルホニル基が、Ｃｙｓのメルカプト基にはアセトアミ
ドメチル基又はｔ−ブチル基が、それぞれ用いられる。
保護基としては、ペプチド合成において一般的に使用さ
れるものが用いられる。例えば、α−アミノ基にＢｏｃ
基を用いるとき、Ａｓｐ、Ｇｌｕのカルボキシル基には
エステル基により保護されるベンジル基又はシクロヘキ
シル基が、Ｔｈｒ、Ｓｅｒのヒドロキシル基にはベンジ
ル基が、Ｌｙｓの側鎖アミノ基にはｐ−クロロベンジル
オキシカルボニル基が、Ｔｙｒのヒドロキシル基には２
−ブロモベンジルオキシカルボニル基が、Ｈｉｓのイミ
ダゾリル基にはトルエンスルホニル基、ベンジルオキシ
メチル基又は２，４−ジニトロフェニル基が、Ａｒｇの
グアニジノ基にはＰ−メトキシベンゼンスルホニル基又
はメシチレン−２−スルホニル基が、Ｃｙｓのメルカプ
ト基にはＰ−メトキシベンジル基又はアセトアミドメチ
ル基が、Ｍｅｔのチオメチル基にはスルホキシド基が、
それぞれ用いられる。またα−アミノ基にＦｍｏｃ基を
用いるとき、Ａｓｐ、Ｇｌｕのカルボキシル基、Ｔｙ
ｒ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒのヒドロキシル基には第三級ブチル
エステルが、Ｌｙｓの側鎖アミノ基にはｔ−ブトキシカ
ルボニル基が、Ｈｉｓのイミダゾリル基にはトリチル基
が、Ａｒｇのグアニジノ基には４−メトキシ−２，３，
６−トリメチルベンゼンスルホニル基又はＰ−トルエン
スルホニル基が、Ｃｙｓのメルカプト基にはアセトアミ
ドメチル基又はｔ−ブチル基が、それぞれ用いられる。
【００１０】液相法にて合成する時には固相法と同様、
通常のペプチド合成法に従って行うことができる。公知
の方法として例えば泉屋信夫他著〔「ペプチド合成の基
礎と実験」、丸善（株）、１９７５年〕などに記載され
ている方法などが挙げられる。
通常のペプチド合成法に従って行うことができる。公知
の方法として例えば泉屋信夫他著〔「ペプチド合成の基
礎と実験」、丸善（株）、１９７５年〕などに記載され
ている方法などが挙げられる。
【００１１】次に保護基および支持体からの脱離は、α
−アミノ基の保護基としてＢｏｃ基を用いる時にはスカ
ベンジャーを含むフッ化水素、ＴＦＭＳＡなどを用いて
行われる。スカベンジャーとしてはチオアニソール、エ
タンジチオール、ジメチルスルフィドなどが用いられ
る。またα−アミノ基の保護基としてＦｍｏｃ基を用い
る時にはフェノールとＴＦＡとを含む混合物などを用い
ることができる。
−アミノ基の保護基としてＢｏｃ基を用いる時にはスカ
ベンジャーを含むフッ化水素、ＴＦＭＳＡなどを用いて
行われる。スカベンジャーとしてはチオアニソール、エ
タンジチオール、ジメチルスルフィドなどが用いられ
る。またα−アミノ基の保護基としてＦｍｏｃ基を用い
る時にはフェノールとＴＦＡとを含む混合物などを用い
ることができる。
【００１２】ペプチドの精製には一般的に使用されるイ
オン交換樹脂、分配クロマトグラフィー、ゲルクロマト
グラフィー、逆相型液体クロマトグラフィー等を単独に
あるいは組み合わせて用いることによって行うことがで
きる。精製されたペプチドのアミノ酸組成は、アミノ酸
分析装置により容易に測定することができる。
オン交換樹脂、分配クロマトグラフィー、ゲルクロマト
グラフィー、逆相型液体クロマトグラフィー等を単独に
あるいは組み合わせて用いることによって行うことがで
きる。精製されたペプチドのアミノ酸組成は、アミノ酸
分析装置により容易に測定することができる。
【００１３】本発明のペプチドはＴＳＡｂの量的変化を
簡便に把握する手段として有用であるので、自己免疫性
甲状腺疾患の診断薬の有効成分として使用でき、またＴ
ＳＡｂとＴＳＨ受容体との結合を阻害する作用も有する
ので、甲状腺疾患の治療薬の有効成分としても使用でき
る。
簡便に把握する手段として有用であるので、自己免疫性
甲状腺疾患の診断薬の有効成分として使用でき、またＴ
ＳＡｂとＴＳＨ受容体との結合を阻害する作用も有する
ので、甲状腺疾患の治療薬の有効成分としても使用でき
る。
【００１４】本発明では治療的に有効な量の前記ペプチ
ドを処理の必要な個体に投与するの有効成分ことによっ
て自己免疫性甲状腺疾患を治療することができる。診断
薬又は治療薬の有効成分として適用する場合、本発明の
ペプチドを診断学的あるいは製薬学的に許容できる担体
と共に、それに有効な量を含有させて診断組成物又は治
療組成物として製剤することができる。本発明ペプチド
を診断薬の有効成分として使用する場合、前記ペプチド
が患者血清中のＴＳＡｂと特異的に結合することを利用
し、酵素又は放射性同位元素等で標識された本ペプチド
を用いてＴＳＡｂを定量することができる。また前記ペ
プチドを適当な担体と結合させ、マウス、ラット、ウサ
ギなどの動物に免疫させることによって得られる抗体を
利用して定量することも可能である。
ドを処理の必要な個体に投与するの有効成分ことによっ
て自己免疫性甲状腺疾患を治療することができる。診断
薬又は治療薬の有効成分として適用する場合、本発明の
ペプチドを診断学的あるいは製薬学的に許容できる担体
と共に、それに有効な量を含有させて診断組成物又は治
療組成物として製剤することができる。本発明ペプチド
を診断薬の有効成分として使用する場合、前記ペプチド
が患者血清中のＴＳＡｂと特異的に結合することを利用
し、酵素又は放射性同位元素等で標識された本ペプチド
を用いてＴＳＡｂを定量することができる。また前記ペ
プチドを適当な担体と結合させ、マウス、ラット、ウサ
ギなどの動物に免疫させることによって得られる抗体を
利用して定量することも可能である。
【００１５】本発明のペプチドを治療薬の有効成分とし
て用いる場合、例えば経口投与用剤型としては錠剤、カ
プセル剤、顆粒剤又は粉剤などが挙げられ、あるいは非
経口投与用剤型としては注射剤などが挙げられる。薬剤
の投与量は、患者の症状の程度、年令及び体重、投与方
法などに依存し、専門医の適量決定試験によって決定さ
れなければならない。
て用いる場合、例えば経口投与用剤型としては錠剤、カ
プセル剤、顆粒剤又は粉剤などが挙げられ、あるいは非
経口投与用剤型としては注射剤などが挙げられる。薬剤
の投与量は、患者の症状の程度、年令及び体重、投与方
法などに依存し、専門医の適量決定試験によって決定さ
れなければならない。
【００１６】
実施例１ ペプチドＮｏ．１ （配列表の配列番号１で示されるペプチド）Ｂｏｃ−Ｌ
ｅｕ−ＰＡＭ樹脂（後記ペプチド自動合成装置に設置）
７３０ｍｇ（Ｌｅｕ含量０．７３ｍｍｏｌ／ｇ）を原料
として、ペプチド自動合成装置（アプライド、バイオシ
ステム社製４３０Ａ型）を用いた固相合成法によって、
目的のペプチドＮｏ．１を合成した。常法に従い、前記
アミノ酸配列に従ってＣ末端Ｌｅｕから順次１９個のＬ
体アミノ酸をそれぞれ２ミリモルずつ反応させることに
よって２ｇの保護ペプチド樹脂を得た。この反応に用い
たアミノ酸の側鎖官能基の保護については、Ｌｙｓの側
鎖アミノ基はｐ−クロロベンジルオキシカルボニル基
で、Ａｓｐ、Ｇｌｕのカルボキシル基はベンジル基で、
Ｓｅｒ、Ｔｈｒのヒドロキシル基はベンジル基で、Ｈｉ
ｓのイミダゾリル基はベンジルオキシメチル基で、Ａｒ
ｇのグアニジノ基はＰ−メトキシベンゼンスルホニル基
で、Ｃｙｓのメルカプト基はＰ−メトキシベンジル基
で、それぞれ保護した。この保護ペプチド樹脂を乾燥
後、保護ペプチド樹脂の１．５ｇを０．７５ｍｌのエタ
ンジチオールと１．５ｍｌのチオアニソールの混合液で
氷冷下１０分間攪拌し、その後１５ｍｌのＴＦＡを加え
て１０分間攪拌した。この混合液の中に１．５ｍｌのＴ
ＦＭＳＡを加え、１０分間攪拌後、さらに室温にて５０
分間攪拌した。その後、５０ｍｌの無水エーテルを加え
て粗ペプチドを沈殿させ、グラスフィルターにて粗ペプ
チドと脱離した樹脂とを濾過した。グラスフィルター上
の粗ペプチドに５ｍｌのＴＦＡを加え、溶解してＴＦＡ
溶液を得た。このものを分離後無水エーテルで数回洗浄
した後減圧下で乾燥した。その後、１５％酢酸水に溶解
し、凍結乾燥した。このようにして得られた粗ペプチド
のうち５００ｍｇを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰ
ＬＣ）にて次のような条件で精製した。カラムは逆相系
ＯＤＳ（製品名；ＵＬＴＲＯＮ ＳＣ１８）で０．１％
ＴＦＡを含むアセトニトリルグラジェント〔６０分間で
アセトニトリル（０．１％ＴＦＡを含む）１００％、流
量１０ｍｌ／分〕により分離、精製した。必要な溶出画
分を濃縮後、凍結乾燥することによって目的とする７７
ｍｇのペプチドＮｏ．１を得た。このようにして合成さ
れたペプチドＮｏ．１のアミノ酸分析を行った。アミノ
酸分析については、６規定塩酸で１１０℃２０時間加水
分解した後、アミノ酸分析装置Ｌ８５００（日立製作所
製）にて測定した。
ｅｕ−ＰＡＭ樹脂（後記ペプチド自動合成装置に設置）
７３０ｍｇ（Ｌｅｕ含量０．７３ｍｍｏｌ／ｇ）を原料
として、ペプチド自動合成装置（アプライド、バイオシ
ステム社製４３０Ａ型）を用いた固相合成法によって、
目的のペプチドＮｏ．１を合成した。常法に従い、前記
アミノ酸配列に従ってＣ末端Ｌｅｕから順次１９個のＬ
体アミノ酸をそれぞれ２ミリモルずつ反応させることに
よって２ｇの保護ペプチド樹脂を得た。この反応に用い
たアミノ酸の側鎖官能基の保護については、Ｌｙｓの側
鎖アミノ基はｐ−クロロベンジルオキシカルボニル基
で、Ａｓｐ、Ｇｌｕのカルボキシル基はベンジル基で、
Ｓｅｒ、Ｔｈｒのヒドロキシル基はベンジル基で、Ｈｉ
ｓのイミダゾリル基はベンジルオキシメチル基で、Ａｒ
ｇのグアニジノ基はＰ−メトキシベンゼンスルホニル基
で、Ｃｙｓのメルカプト基はＰ−メトキシベンジル基
で、それぞれ保護した。この保護ペプチド樹脂を乾燥
後、保護ペプチド樹脂の１．５ｇを０．７５ｍｌのエタ
ンジチオールと１．５ｍｌのチオアニソールの混合液で
氷冷下１０分間攪拌し、その後１５ｍｌのＴＦＡを加え
て１０分間攪拌した。この混合液の中に１．５ｍｌのＴ
ＦＭＳＡを加え、１０分間攪拌後、さらに室温にて５０
分間攪拌した。その後、５０ｍｌの無水エーテルを加え
て粗ペプチドを沈殿させ、グラスフィルターにて粗ペプ
チドと脱離した樹脂とを濾過した。グラスフィルター上
の粗ペプチドに５ｍｌのＴＦＡを加え、溶解してＴＦＡ
溶液を得た。このものを分離後無水エーテルで数回洗浄
した後減圧下で乾燥した。その後、１５％酢酸水に溶解
し、凍結乾燥した。このようにして得られた粗ペプチド
のうち５００ｍｇを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰ
ＬＣ）にて次のような条件で精製した。カラムは逆相系
ＯＤＳ（製品名；ＵＬＴＲＯＮ ＳＣ１８）で０．１％
ＴＦＡを含むアセトニトリルグラジェント〔６０分間で
アセトニトリル（０．１％ＴＦＡを含む）１００％、流
量１０ｍｌ／分〕により分離、精製した。必要な溶出画
分を濃縮後、凍結乾燥することによって目的とする７７
ｍｇのペプチドＮｏ．１を得た。このようにして合成さ
れたペプチドＮｏ．１のアミノ酸分析を行った。アミノ
酸分析については、６規定塩酸で１１０℃２０時間加水
分解した後、アミノ酸分析装置Ｌ８５００（日立製作所
製）にて測定した。
【００１７】アミノ酸分析結果 上記のアミノ酸分析結果により本発明の目的物であるペ
プチドＮｏ．１が得られていることを確認した。
プチドＮｏ．１が得られていることを確認した。
【００１８】実施例２ ペプチドＮｏ．２ （配列表の配列番号２で示されるペプチド）Ｂｏｃ−Ｐ
ｒｏ−ＰＡＭ樹脂（後記ペプチド自動合成装置に設置）
６５８ｍｇ（Ｐｒｏ含量０．７６ｍｍｏｌ／ｇ）を原料
として、ペプチド自動合成装置（アプライド、バイオシ
ステム社製４３０Ａ型）を用いた固相合成法によって、
目的のペプチドＮｏ．２を合成した。常法に従い、前記
アミノ酸配列に従ってＣ末端Ｐｒｏから順次２８個のＬ
体アミノ酸をそれぞれ２ミリモルずつ反応させることに
よって３ｇの保護ペプチド樹脂を得た。この反応に用い
たアミノ酸の側鎖官能基の保護については、Ｌｙｓの側
鎖アミノ基はｐ−クロロベンジルオキシカルボニル基
で、Ａｓｐ、Ｇｌｕのカルボキシル基はベンジル基で、
Ｓｅｒ、Ｔｈｒのヒドロキシル基はベンジル基で、Ｔｙ
ｒのヒドロキシル基は２−ブロモベンジルオキシカルボ
ニル基で、Ｈｉｓのイミダゾリル基はベンジルオキシメ
チル基で、Ａｒｇのグアニジノ基はＰ−メトキシベンゼ
ンスルホニル基で、それぞれ保護した。この保護ペプチ
ド樹脂を乾燥後、保護ペプチド樹脂の１．５ｇを０．７
５ｍｌのエタンジチオールと１．５ｍｌのチオアニソー
ルの混合液で氷冷下１０分間攪拌し、その後１５ｍｌの
ＴＦＡを加えて１０分間攪拌した。この混合液の中に
１．５ｍｌのＴＦＭＳＡを加え、１０分間攪拌後、さら
に室温にて５０分間攪拌した。その後、５０ｍｌの無水
エーテルを加えて粗ペプチドを沈殿させ、グラスフィル
ターにて粗ペプチドと脱離した樹脂とを濾過した。グラ
スフィルター上の粗ペプチドに５ｍｌのＴＦＡを加え、
溶解してＴＦＡ溶液を得た。このものを分離後無水エー
テルで数回洗浄した後減圧下で乾燥した。その後、１５
％酢酸水に溶解し、凍結乾燥した。このようにして得ら
れた粗ペプチドのうち５００ｍｇを高速液体クロマトグ
ラフィー（ＨＰＬＣ）にて次のような条件で精製した。
カラムは逆相系ＯＤＳ（製品名；ＵＬＴＲＯＮ ＳＣ
１８）で０．１％ＴＦＡを含むアセトニトリルグラジェ
ント〔６０分間でアセトニトリル（０．１％ＴＦＡを含
む）１００％、流量１０ｍｌ／分〕により分離、精製し
た。必要な溶出画分を濃縮後、凍結乾燥することによっ
て目的とする７５ｍｇのペプチドＮｏ．２を得た。この
ようにして合成されたペプチドＮｏ．２のアミノ酸分析
を行った。アミノ酸分析については、６規定塩酸で１１
０℃２０時間加水分解した後、アミノ酸分析装置Ｌ８５
００（日立製作所製）にて測定した。
ｒｏ−ＰＡＭ樹脂（後記ペプチド自動合成装置に設置）
６５８ｍｇ（Ｐｒｏ含量０．７６ｍｍｏｌ／ｇ）を原料
として、ペプチド自動合成装置（アプライド、バイオシ
ステム社製４３０Ａ型）を用いた固相合成法によって、
目的のペプチドＮｏ．２を合成した。常法に従い、前記
アミノ酸配列に従ってＣ末端Ｐｒｏから順次２８個のＬ
体アミノ酸をそれぞれ２ミリモルずつ反応させることに
よって３ｇの保護ペプチド樹脂を得た。この反応に用い
たアミノ酸の側鎖官能基の保護については、Ｌｙｓの側
鎖アミノ基はｐ−クロロベンジルオキシカルボニル基
で、Ａｓｐ、Ｇｌｕのカルボキシル基はベンジル基で、
Ｓｅｒ、Ｔｈｒのヒドロキシル基はベンジル基で、Ｔｙ
ｒのヒドロキシル基は２−ブロモベンジルオキシカルボ
ニル基で、Ｈｉｓのイミダゾリル基はベンジルオキシメ
チル基で、Ａｒｇのグアニジノ基はＰ−メトキシベンゼ
ンスルホニル基で、それぞれ保護した。この保護ペプチ
ド樹脂を乾燥後、保護ペプチド樹脂の１．５ｇを０．７
５ｍｌのエタンジチオールと１．５ｍｌのチオアニソー
ルの混合液で氷冷下１０分間攪拌し、その後１５ｍｌの
ＴＦＡを加えて１０分間攪拌した。この混合液の中に
１．５ｍｌのＴＦＭＳＡを加え、１０分間攪拌後、さら
に室温にて５０分間攪拌した。その後、５０ｍｌの無水
エーテルを加えて粗ペプチドを沈殿させ、グラスフィル
ターにて粗ペプチドと脱離した樹脂とを濾過した。グラ
スフィルター上の粗ペプチドに５ｍｌのＴＦＡを加え、
溶解してＴＦＡ溶液を得た。このものを分離後無水エー
テルで数回洗浄した後減圧下で乾燥した。その後、１５
％酢酸水に溶解し、凍結乾燥した。このようにして得ら
れた粗ペプチドのうち５００ｍｇを高速液体クロマトグ
ラフィー（ＨＰＬＣ）にて次のような条件で精製した。
カラムは逆相系ＯＤＳ（製品名；ＵＬＴＲＯＮ ＳＣ
１８）で０．１％ＴＦＡを含むアセトニトリルグラジェ
ント〔６０分間でアセトニトリル（０．１％ＴＦＡを含
む）１００％、流量１０ｍｌ／分〕により分離、精製し
た。必要な溶出画分を濃縮後、凍結乾燥することによっ
て目的とする７５ｍｇのペプチドＮｏ．２を得た。この
ようにして合成されたペプチドＮｏ．２のアミノ酸分析
を行った。アミノ酸分析については、６規定塩酸で１１
０℃２０時間加水分解した後、アミノ酸分析装置Ｌ８５
００（日立製作所製）にて測定した。
【００１９】アミノ酸分析結果 上記のアミノ酸分析結果により本発明の目的物であるペ
プチドＮｏ．２が得られていることを確認した。
プチドＮｏ．２が得られていることを確認した。
【００２０】実施例３ ペプチドＮｏ．３ （配列表の配列番号３で示されるペプチド）Ｂｏｃ−Ｓ
ｅｒ−ＰＡＭ樹脂（後記ペプチド自動合成装置に設置）
７３６ｍｇ（Ｓｅｒ含量０．６８ｍｍｏｌ／ｇ）を原料
として、ペプチド自動合成装置（アプライド、バイオシ
ステム社製４３０Ａ型）を用いた固相合成法によって、
目的のペプチドＮｏ．３を合成した。常法に従い、前記
アミノ酸配列に従ってＣ末端Ｓｅｒから順次１７個のＬ
体アミノ酸をそれぞれ２ミリモルずつ反応させることに
よって３ｇの保護ペプチド樹脂を得た。この反応に用い
たアミノ酸の側鎖官能基の保護については、Ｌｙｓの側
鎖アミノ基はｐ−クロロベンジルオキシカルボニル基
で、Ｇｌｕのカルボキシル基はベンジル基で、Ｓｅｒの
ヒドロキシル基はベンジル基で、Ａｒｇのグアニジノ基
はＰ−メトキシベンゼンスルホニル基で、Ｍｅｔのチオ
ニル基はスルホキシド基で、Ｃｙｓのメルカプト基はＰ
−メトキシベンジル基でそれぞれ保護した。この保護ペ
プチド樹脂を乾燥後、保護ペプチド樹脂の１．５ｇを
４．５ｍｌのジメチルスルフィドと１．５ｍｌのｍ−ク
レゾール、７．５ｍｌのＴＦＡ及び１．５ｍｌのＴＦＭ
ＳＡで氷冷下３時間攪拌し、その後、グラスフィルター
にて保護ペプチド樹脂を濾別し、再び０．７５ｍｌのエ
タンジチオールと１．５ｍｌのチオアニソールの混合液
で氷冷下１０分間攪拌し、その後１５ｍｌのＴＦＡを加
えて１０分間攪拌した。この混合液の中に１．５ｍｌの
ＴＦＭＳＡを加え、１０分間攪拌後、さらに室温にて５
０分間攪拌した。その後、５０ｍｌの無水エーテルを加
えて粗ペプチドを沈殿させ、グラスフィルターにて粗ペ
プチドと脱離した樹脂とを濾過した。グラスフィルター
上の粗ペプチドに５ｍｌのＴＦＡを加え、溶解してＴＦ
Ａ溶液を得た。このものを分離後無水エーテルで数回洗
浄した後減圧下で乾燥した。その後、１５％酢酸水に溶
解し、凍結乾燥した。このようにして得られた粗ペプチ
ドのうち６５０ｍｇを高速液体クロマトグラフィー（Ｈ
ＰＬＣ）にて次のような条件で精製した。カラムは逆相
系ＯＤＳ（製品名；ＵＬＴＲＯＮ ＳＣ１８）で０．１
％ＴＦＡを含むアセトニトリルグラジェント〔６０分間
でアセトニトリル（０．１％ＴＦＡを含む）１００％、
流量１０ｍｌ／分〕により分離、精製した。必要な溶出
画分を濃縮後、凍結乾燥することによって目的とする２
３０ｍｇのペプチドＮｏ．３を得た。このようにして合
成されたペプチドＮｏ．３のアミノ酸分析を行った。ア
ミノ酸分析については、６規定塩酸で１１０℃２０時間
加水分解した後、アミノ酸分析装置Ｌ８５００（日立製
作所製）にて測定した。
ｅｒ−ＰＡＭ樹脂（後記ペプチド自動合成装置に設置）
７３６ｍｇ（Ｓｅｒ含量０．６８ｍｍｏｌ／ｇ）を原料
として、ペプチド自動合成装置（アプライド、バイオシ
ステム社製４３０Ａ型）を用いた固相合成法によって、
目的のペプチドＮｏ．３を合成した。常法に従い、前記
アミノ酸配列に従ってＣ末端Ｓｅｒから順次１７個のＬ
体アミノ酸をそれぞれ２ミリモルずつ反応させることに
よって３ｇの保護ペプチド樹脂を得た。この反応に用い
たアミノ酸の側鎖官能基の保護については、Ｌｙｓの側
鎖アミノ基はｐ−クロロベンジルオキシカルボニル基
で、Ｇｌｕのカルボキシル基はベンジル基で、Ｓｅｒの
ヒドロキシル基はベンジル基で、Ａｒｇのグアニジノ基
はＰ−メトキシベンゼンスルホニル基で、Ｍｅｔのチオ
ニル基はスルホキシド基で、Ｃｙｓのメルカプト基はＰ
−メトキシベンジル基でそれぞれ保護した。この保護ペ
プチド樹脂を乾燥後、保護ペプチド樹脂の１．５ｇを
４．５ｍｌのジメチルスルフィドと１．５ｍｌのｍ−ク
レゾール、７．５ｍｌのＴＦＡ及び１．５ｍｌのＴＦＭ
ＳＡで氷冷下３時間攪拌し、その後、グラスフィルター
にて保護ペプチド樹脂を濾別し、再び０．７５ｍｌのエ
タンジチオールと１．５ｍｌのチオアニソールの混合液
で氷冷下１０分間攪拌し、その後１５ｍｌのＴＦＡを加
えて１０分間攪拌した。この混合液の中に１．５ｍｌの
ＴＦＭＳＡを加え、１０分間攪拌後、さらに室温にて５
０分間攪拌した。その後、５０ｍｌの無水エーテルを加
えて粗ペプチドを沈殿させ、グラスフィルターにて粗ペ
プチドと脱離した樹脂とを濾過した。グラスフィルター
上の粗ペプチドに５ｍｌのＴＦＡを加え、溶解してＴＦ
Ａ溶液を得た。このものを分離後無水エーテルで数回洗
浄した後減圧下で乾燥した。その後、１５％酢酸水に溶
解し、凍結乾燥した。このようにして得られた粗ペプチ
ドのうち６５０ｍｇを高速液体クロマトグラフィー（Ｈ
ＰＬＣ）にて次のような条件で精製した。カラムは逆相
系ＯＤＳ（製品名；ＵＬＴＲＯＮ ＳＣ１８）で０．１
％ＴＦＡを含むアセトニトリルグラジェント〔６０分間
でアセトニトリル（０．１％ＴＦＡを含む）１００％、
流量１０ｍｌ／分〕により分離、精製した。必要な溶出
画分を濃縮後、凍結乾燥することによって目的とする２
３０ｍｇのペプチドＮｏ．３を得た。このようにして合
成されたペプチドＮｏ．３のアミノ酸分析を行った。ア
ミノ酸分析については、６規定塩酸で１１０℃２０時間
加水分解した後、アミノ酸分析装置Ｌ８５００（日立製
作所製）にて測定した。
【００２１】アミノ酸分析結果 上記のアミノ酸分析結果により本発明の目的物であるペ
プチドＮｏ．３が得られていることを確認した。
プチドＮｏ．３が得られていることを確認した。
【００２２】ラット甲状腺細胞ＦＲＴＬ５を用い、ＴＳ
Ａｂの刺激によるｃＡＭＰの産生における当該ペプチド
の影響を小杉（Ｋｏｓｕｇｉ．Ｓ）らの方法〔Ｅｎｄｏ
ｃｒｉｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ．１２５ Ｎｏ．１ ４１
０頁（１９８９）〕に準じて調べる。以下その概略を示
す。 試験例１ 細胞は前培養したＦＲＴＬ５細胞１．５×１０５Ｃｅｌ
ｌｓ／ｍｌを９６穴のマルチプレートに１００μｌずつ
分注し、ＣＯ２インキュベーター中で培地（ＴＳＨを除
いたもの）交換をしながら６日間培養し、培地を除去し
て洗浄プレート上に細胞を調整して試験に供試する。Ｔ
ＳＡｂ陽性血清ＩｇＧ溶液４０μｌ又はウシ−ＴＳＨ
（以下ｂ−ＴＳＨと略す）２００μＵを含む溶液４０μ
ｌと所望のペプチド５μｇを含む溶液１０μｌをテスト
チューブ中で４℃で２０時間反応させる。この反応液
に、３−イソブチル−１−メチルキサンチン０．５ｍＭ
溶液５μｌを加え、先に調整したＦＲＴＬ５細胞に反応
液５０μｌを添加し、３７℃、２時間インキュベーショ
ンする。一方、コントロールとして正常者血清を用い同
様にして試験を行う。それぞれのサンプルについてＴＳ
Ａｂの刺激により産生されたｃＡＭＰについて市販のｃ
ＡＭＰラジオイムノアッセイキット（１−ＶＱ１２：栄
研化学（株）製造）を使用して定量測定し、後述の計算
方法に従ってＴＳＡｂ（％）を求めた。その結果を表
１、表２及び表３に示す。 ＴＳＡｂ（％）＝ ａ／ｂ×１００ ａ；患者血清ＩｇＧに対するｃＡＭＰの産生量 ｂ；正常者血清ＩｇＧに対するｃＡＭＰの産生量 また、ｂ−ＴＳＨの刺激により産生されたｃＡＭＰにつ
いて、同様に定量測定し、各ペプチドがｂ−ＴＳＨに作
用するか否かを調べた。その結果を表４に示す。
Ａｂの刺激によるｃＡＭＰの産生における当該ペプチド
の影響を小杉（Ｋｏｓｕｇｉ．Ｓ）らの方法〔Ｅｎｄｏ
ｃｒｉｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ．１２５ Ｎｏ．１ ４１
０頁（１９８９）〕に準じて調べる。以下その概略を示
す。 試験例１ 細胞は前培養したＦＲＴＬ５細胞１．５×１０５Ｃｅｌ
ｌｓ／ｍｌを９６穴のマルチプレートに１００μｌずつ
分注し、ＣＯ２インキュベーター中で培地（ＴＳＨを除
いたもの）交換をしながら６日間培養し、培地を除去し
て洗浄プレート上に細胞を調整して試験に供試する。Ｔ
ＳＡｂ陽性血清ＩｇＧ溶液４０μｌ又はウシ−ＴＳＨ
（以下ｂ−ＴＳＨと略す）２００μＵを含む溶液４０μ
ｌと所望のペプチド５μｇを含む溶液１０μｌをテスト
チューブ中で４℃で２０時間反応させる。この反応液
に、３−イソブチル−１−メチルキサンチン０．５ｍＭ
溶液５μｌを加え、先に調整したＦＲＴＬ５細胞に反応
液５０μｌを添加し、３７℃、２時間インキュベーショ
ンする。一方、コントロールとして正常者血清を用い同
様にして試験を行う。それぞれのサンプルについてＴＳ
Ａｂの刺激により産生されたｃＡＭＰについて市販のｃ
ＡＭＰラジオイムノアッセイキット（１−ＶＱ１２：栄
研化学（株）製造）を使用して定量測定し、後述の計算
方法に従ってＴＳＡｂ（％）を求めた。その結果を表
１、表２及び表３に示す。 ＴＳＡｂ（％）＝ ａ／ｂ×１００ ａ；患者血清ＩｇＧに対するｃＡＭＰの産生量 ｂ；正常者血清ＩｇＧに対するｃＡＭＰの産生量 また、ｂ−ＴＳＨの刺激により産生されたｃＡＭＰにつ
いて、同様に定量測定し、各ペプチドがｂ−ＴＳＨに作
用するか否かを調べた。その結果を表４に示す。
【００２３】
【表１】
【００２４】
【表２】
【００２５】
【表３】
【００２６】
【表４】
【００２７】表１、表２及び表３は５サンプルの患者血
清ＩｇＧについて各ペプチドの作用を調べたものであ
る。この結果から明らかなように、ペプチドＮｏ．１、
Ｎｏ．２及びＮｏ．３は、それぞれの患者血清ＩｇＧに
対して抑制を示した。一方、表４の結果から明らかなよ
うに、ｂ−ＴＳＨに対する影響は各ペプチド共、刺激活
性に対してほとんど作用しなかった。なお表１、表２及
び表３中の変化率は各患者血清使用時のＴＳＡｂ値につ
いて無処理区に対する処理区の百分率を表したものであ
る。
清ＩｇＧについて各ペプチドの作用を調べたものであ
る。この結果から明らかなように、ペプチドＮｏ．１、
Ｎｏ．２及びＮｏ．３は、それぞれの患者血清ＩｇＧに
対して抑制を示した。一方、表４の結果から明らかなよ
うに、ｂ−ＴＳＨに対する影響は各ペプチド共、刺激活
性に対してほとんど作用しなかった。なお表１、表２及
び表３中の変化率は各患者血清使用時のＴＳＡｂ値につ
いて無処理区に対する処理区の百分率を表したものであ
る。
【００２８】
【配列表】
【００２９】
【００３０】
フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ｃ０７Ｋ 99:00
Claims (2)
- 【請求項１】アミノ酸配列 Ｃｙｓ Ｈｉｓ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｐ
ｈｅ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｌｙｓ Ａｓｐ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ａ
ｒｇ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｌｅｕ （配列番号１）、Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇ
ｌｕ Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌ
ｙｓ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｈｉｓ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｔ
ｈｒ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｐｒｏ
（配列番号２）及びＬｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｇ
ｌｙ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｍｅｔ Ｃｙｓ Ａｓｎ Ｇ
ｌｕ Ｓｅｒ （配列番号３）で表わされるペプチドか
らなる群より選ばれた少なくとも一種のペプチド又はそ
の塩。 - 【請求項２】アミノ酸配列 Ｃｙｓ Ｈｉｓ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｐ
ｈｅ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｌｙｓ Ａｓｐ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ａ
ｒｇ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｌｅｕ （配列番号１）、Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇ
ｌｕ Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌ
ｙｓ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｈｉｓ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｔ
ｈｒ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｐｒｏ
（配列番号２）及びＬｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｇ
ｌｙ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｍｅｔ Ｃｙｓ Ａｓｎ Ｇ
ｌｕ Ｓｅｒ （配列番号３）で表わされるペプチドか
らなる群より選ばれた少なくとも一種のペプチド又はそ
の塩を有効成分として含有することを特徴とする自己免
疫性甲状腺疾患の診断薬又は治療薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5047573A JPH06220089A (ja) | 1993-01-27 | 1993-01-27 | ペプチド又はその塩並びにそれらを含有する自己免疫性甲状腺疾患の診断薬又は治療薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5047573A JPH06220089A (ja) | 1993-01-27 | 1993-01-27 | ペプチド又はその塩並びにそれらを含有する自己免疫性甲状腺疾患の診断薬又は治療薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06220089A true JPH06220089A (ja) | 1994-08-09 |
Family
ID=12778991
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5047573A Pending JPH06220089A (ja) | 1993-01-27 | 1993-01-27 | ペプチド又はその塩並びにそれらを含有する自己免疫性甲状腺疾患の診断薬又は治療薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06220089A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003018632A3 (en) * | 2001-08-23 | 2004-06-17 | Rsr Ltd | Epitope regions of a thyrotrophin (tsh) receptor, uses thereof and antibodies thereto |
-
1993
- 1993-01-27 JP JP5047573A patent/JPH06220089A/ja active Pending
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003018632A3 (en) * | 2001-08-23 | 2004-06-17 | Rsr Ltd | Epitope regions of a thyrotrophin (tsh) receptor, uses thereof and antibodies thereto |
| EP2383290A3 (en) * | 2001-08-23 | 2012-10-10 | Rsr Limited | Epitope regions of a thyrotrophin (TSH) receptor, uses thereof and antibodies thereto |
| US8298769B2 (en) | 2001-08-23 | 2012-10-30 | Rsr Limited | Epitope regions of a thyrotrophin (TSH) receptor, uses thereof and antibodies thereto |
| US8298771B2 (en) | 2001-08-23 | 2012-10-30 | Rsr Limited | Epitope regions of a thyrotrophin (TSH) receptor, uses thereof and antibodies thereto |
| US8309693B2 (en) | 2001-08-23 | 2012-11-13 | Rsr Limited | Epitope regions of a thyrotrophin (TSH) receptor, uses thereof and antibodies thereto |
| EP2383291A3 (en) * | 2001-08-23 | 2013-02-13 | Rsr Limited | Epitope regions of a thyrotrophin (TSH) receptor, uses thereof and antibodies thereto |
| US9751940B2 (en) | 2001-08-23 | 2017-09-05 | Rsr Limited | Epitope regions of a thyrotrophin (TSH) receptor, uses thereof and antibodies thereto |
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