JPH0641192A - ペプチド又はその塩並びにそれらを含有する自己免疫性甲状腺疾患の診断薬又は治療薬 - Google Patents
ペプチド又はその塩並びにそれらを含有する自己免疫性甲状腺疾患の診断薬又は治療薬Info
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- JPH0641192A JPH0641192A JP4086718A JP8671892A JPH0641192A JP H0641192 A JPH0641192 A JP H0641192A JP 4086718 A JP4086718 A JP 4086718A JP 8671892 A JP8671892 A JP 8671892A JP H0641192 A JPH0641192 A JP H0641192A
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- amino acid
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- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
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- Peptides Or Proteins (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【目的】 自己免疫性甲状腺機能亢進症の診断薬又は治
療薬の有効成分として有用なペプチドを提供する。 【構成】 例えば下記〜で示されるアミノ酸配列を
有するペプチド又はその塩。 【効果】 従来の方法に比し自己免疫性甲状腺機能亢進
症の診断の測定操作が簡便である。
療薬の有効成分として有用なペプチドを提供する。 【構成】 例えば下記〜で示されるアミノ酸配列を
有するペプチド又はその塩。 【効果】 従来の方法に比し自己免疫性甲状腺機能亢進
症の診断の測定操作が簡便である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、新規なペプチド又はそ
の塩に関し、また、そのペプチド又はその塩を有効成分
として含有する自己免疫性甲状腺疾患の診断薬又は治療
薬に関する。
の塩に関し、また、そのペプチド又はその塩を有効成分
として含有する自己免疫性甲状腺疾患の診断薬又は治療
薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】自己免疫性甲状腺疾患の原因物質の一つ
として考えられる甲状腺刺激ホルモン（以下ＴＳＨと略
す）の受容体自己抗体には、甲状腺刺激抗体（以下ＴＳ
Ａｂと略す）とＴＳＨ結合阻害抗体（以下ＴＢＩＩと略
す）がある。その量的変化は病態を知る上で重要なマー
カーと考えられる。従来、前記抗体の測定にはアデニレ
ートシクラーゼの活性化によるサイクリックＡＭＰ（ｃ
ＡＭＰ）の産生を指標にしたスティミュレーション・ア
ッセイ法と１２５Ｉ−ＴＳＨを用いたラジオイムノアッ
セイによるバインディング・アッセイ法が知られてい
る。
として考えられる甲状腺刺激ホルモン（以下ＴＳＨと略
す）の受容体自己抗体には、甲状腺刺激抗体（以下ＴＳ
Ａｂと略す）とＴＳＨ結合阻害抗体（以下ＴＢＩＩと略
す）がある。その量的変化は病態を知る上で重要なマー
カーと考えられる。従来、前記抗体の測定にはアデニレ
ートシクラーゼの活性化によるサイクリックＡＭＰ（ｃ
ＡＭＰ）の産生を指標にしたスティミュレーション・ア
ッセイ法と１２５Ｉ−ＴＳＨを用いたラジオイムノアッ
セイによるバインディング・アッセイ法が知られてい
る。
【０００３】
【発明が解決しようとする問題点】スティミュレーショ
ン・アッセイ法では、小杉（Ｋｏｓｕｇｉ．Ｓ）らの方
法〔Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ １２５．Ｎ
ｏ．１ ４１０頁（１９８９）〕が知られている。この
方法ではラット甲状腺細胞株ＦＲＴＬ５を用い、ＴＳＡ
ｂとＴＳＨ受容体との結合によりアデニレートシクラー
ゼが活性化されることによって産生されるｃＡＭＰの量
を測定し、それを指標として、ＴＳＡｂの活性を測定す
る。一方、バインディング・アッセイ法ではスミス（Ｓ
ｍｉｔｈ．Ｂ．Ｒ）らの方法〔Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｅｎ
ｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ．１７．４０９頁（１
９８２）〕が知られており、その方法では１２５Ｉ−Ｔ
ＳＨを用い、ブタ甲状腺から可溶化したＴＳＨ受容体と
１２５Ｉ−ＴＳＨとの結合に対するＴＳＨ受容体自己抗
体による阻害の程度を測定する。ところがＴＳＨ受容体
自己抗体には種々のものが存在する。前者の方法ではＴ
ＳＡｂの活性のみが測定され、後者の方法ではＴＢＩＩ
の活性のみが測定される。従ってＴＳＨ受容体といずれ
か一方又は両方の前記自己抗体とが結合したか不明であ
る。また、従来の方法は測定に煩雑な操作を必要とする
ので、より簡易な方法の出現が望まれている。
ン・アッセイ法では、小杉（Ｋｏｓｕｇｉ．Ｓ）らの方
法〔Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ １２５．Ｎ
ｏ．１ ４１０頁（１９８９）〕が知られている。この
方法ではラット甲状腺細胞株ＦＲＴＬ５を用い、ＴＳＡ
ｂとＴＳＨ受容体との結合によりアデニレートシクラー
ゼが活性化されることによって産生されるｃＡＭＰの量
を測定し、それを指標として、ＴＳＡｂの活性を測定す
る。一方、バインディング・アッセイ法ではスミス（Ｓ
ｍｉｔｈ．Ｂ．Ｒ）らの方法〔Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｅｎ
ｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ．１７．４０９頁（１
９８２）〕が知られており、その方法では１２５Ｉ−Ｔ
ＳＨを用い、ブタ甲状腺から可溶化したＴＳＨ受容体と
１２５Ｉ−ＴＳＨとの結合に対するＴＳＨ受容体自己抗
体による阻害の程度を測定する。ところがＴＳＨ受容体
自己抗体には種々のものが存在する。前者の方法ではＴ
ＳＡｂの活性のみが測定され、後者の方法ではＴＢＩＩ
の活性のみが測定される。従ってＴＳＨ受容体といずれ
か一方又は両方の前記自己抗体とが結合したか不明であ
る。また、従来の方法は測定に煩雑な操作を必要とする
ので、より簡易な方法の出現が望まれている。
【０００４】本発明者らは特定のペプチドが、ＴＳＡｂ
を特異的に認識すること及びＴＳＡｂとＴＳＨ受容体と
の結合を阻害する作用を有することを見い出し、前記ペ
プチドが自己免疫性甲状腺疾患の診断薬又は治療薬とし
て有用であるとの知見を得、本発明を完成するに至っ
た。本発明はヒトのＴＳＨ受容体の一部構造に一致した
配列を有する合成ペプチドに関する。
を特異的に認識すること及びＴＳＡｂとＴＳＨ受容体と
の結合を阻害する作用を有することを見い出し、前記ペ
プチドが自己免疫性甲状腺疾患の診断薬又は治療薬とし
て有用であるとの知見を得、本発明を完成するに至っ
た。本発明はヒトのＴＳＨ受容体の一部構造に一致した
配列を有する合成ペプチドに関する。
【０００５】
【発明の構成】本発明は、配列表配列番号１で表わされ
るアミノ酸配列において、６番目及び７番目のＬｙｓ−
Ｐｈｅを含み、かつ７〜１６個のアミノ酸から構成され
るペプチド又はその塩を提供し、また、このものを含有
する自己免疫性甲状腺疾患の診断薬又は治療薬を提供す
るものである。
るアミノ酸配列において、６番目及び７番目のＬｙｓ−
Ｐｈｅを含み、かつ７〜１６個のアミノ酸から構成され
るペプチド又はその塩を提供し、また、このものを含有
する自己免疫性甲状腺疾患の診断薬又は治療薬を提供す
るものである。
【０００６】ここでいうペプチドの塩としては、薬理学
的に許容されるものであればいずれのものでもよいが、
例えば、ナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属塩、
マグネシウム、カルシウムなどのアルカリ土類金属塩、
モノメチルアミン、トリエチルアミンなどのアミン塩、
トリメチルエチルアンモニウム、テトラメチルアンモニ
ウムなどの第４級アンモニウム塩などの塩が挙げられ
る。
的に許容されるものであればいずれのものでもよいが、
例えば、ナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属塩、
マグネシウム、カルシウムなどのアルカリ土類金属塩、
モノメチルアミン、トリエチルアミンなどのアミン塩、
トリメチルエチルアンモニウム、テトラメチルアンモニ
ウムなどの第４級アンモニウム塩などの塩が挙げられ
る。
【０００７】また、本発明の具体的なペプチドとして
は、例えば、配列表配列番号２〜４で示されるアミノ酸
配列が挙げられ、なかでも配列表配列番号２が望まし
い。
は、例えば、配列表配列番号２〜４で示されるアミノ酸
配列が挙げられ、なかでも配列表配列番号２が望まし
い。
【０００８】なお、本明細書全般に亙り記載の略記号は
次の意味を有する。 Ｌｙｓ ； Ｌ−リジン Ｇｌｕ ； Ｌ−グルタミン酸 Ｐｒｏ ； Ｌ−プロリン Ｐｈｅ ； Ｌ−フェニルアラニン Ｇｌｎ ； Ｌ−グルタミン Ａｓｐ ； Ｌ−アスパラギン酸 Ｔｈｒ ； Ｌ−スレオニン Ａｓｎ ； Ｌ−アスパラギン Ｖａｌ ； Ｌ−バリン Ｉｌｅ ； Ｌ−イソロイシン Ｌｅｕ ； Ｌ−ロイシン Ｇｌｙ ； グリシン ＰＡＭ ； ４−オキシメチルフェニルアセタミ
ドメチル Ｂｏｃ ； ｔ−ブトキシカルボニル Ｆｍｏｃ ； ９−フルオレニルメチルオキシカル
ボニル ＴＦＡ ； トリフルオロ酢酸 ＴＦＭＳＡ ； トリフルオロメタンスルホン酸
次の意味を有する。 Ｌｙｓ ； Ｌ−リジン Ｇｌｕ ； Ｌ−グルタミン酸 Ｐｒｏ ； Ｌ−プロリン Ｐｈｅ ； Ｌ−フェニルアラニン Ｇｌｎ ； Ｌ−グルタミン Ａｓｐ ； Ｌ−アスパラギン酸 Ｔｈｒ ； Ｌ−スレオニン Ａｓｎ ； Ｌ−アスパラギン Ｖａｌ ； Ｌ−バリン Ｉｌｅ ； Ｌ−イソロイシン Ｌｅｕ ； Ｌ−ロイシン Ｇｌｙ ； グリシン ＰＡＭ ； ４−オキシメチルフェニルアセタミ
ドメチル Ｂｏｃ ； ｔ−ブトキシカルボニル Ｆｍｏｃ ； ９−フルオレニルメチルオキシカル
ボニル ＴＦＡ ； トリフルオロ酢酸 ＴＦＭＳＡ ； トリフルオロメタンスルホン酸
【０００９】本発明のペプチドは、従来の液相法、固相
法などの方法で得ることができるが、より簡便には、固
相法による市販のペプチド合成機を用いて得ることがで
きる。固相法においては、ポリマー性の支持体に前記ペ
プチドのＣ末端側から、そのアミノ酸残基に対応したア
ミノ酸を縮合させペプチド結合を形成させる。縮合方法
としては、例えばＤＣＣ法、酸無水物法、活性化エステ
ル法などの方法を使用することができる。α−アミノ基
の保護基としてはＢｏｃ基又はＦｍｏｃ基が使用でき
る。例えば、ペプチド自動合成装置を用いて合成する時
にはその装置のマニュアル指示に従い適宜アミノ酸の性
質を考慮して選択するのが好ましい。
法などの方法で得ることができるが、より簡便には、固
相法による市販のペプチド合成機を用いて得ることがで
きる。固相法においては、ポリマー性の支持体に前記ペ
プチドのＣ末端側から、そのアミノ酸残基に対応したア
ミノ酸を縮合させペプチド結合を形成させる。縮合方法
としては、例えばＤＣＣ法、酸無水物法、活性化エステ
ル法などの方法を使用することができる。α−アミノ基
の保護基としてはＢｏｃ基又はＦｍｏｃ基が使用でき
る。例えば、ペプチド自動合成装置を用いて合成する時
にはその装置のマニュアル指示に従い適宜アミノ酸の性
質を考慮して選択するのが好ましい。
【００１０】固相法において使用される保護アミノ酸の
保護基としては、ペプチド合成において一般的に使用さ
れるものが用いられる。例えば、α−アミノ基にＢｏｃ
基を用いるとき、Ａｓｐ、Ｇｌｕのカルボキシル基には
エステル基により保護されるベンジル基又はシクロヘキ
シル基が、Ｔｈｒ、Ｓｅｒのヒドロキシル基にはベンジ
ル基が、Ｌｙｓの側鎖アミノ基にはｐ−クロロベンジル
オキシカルボニル基が、Ｔｙｒのヒドロキシル基には２
−ブロモベンジルオキシカルボニル基が、Ｈｉｓのイミ
ダゾリル基にはトルエンスルホニル基、ベンジルオキシ
メチル基又は２，４−ジニトロフェニル基が、それぞれ
用いられる。またα−アミノ基にＦｍｏｃ基を用いると
き、Ａｓｐ、Ｇｌｕのカルボキシル基、Ｔｙｒ、Ｔｈ
ｒ、Ｓｅｒのヒドロキシル基には第三級ブチルエステル
が、Ｌｙｓの側鎖アミノ基にはｔ−ブトキシカルボニル
基が、Ｈｉｓのイミダゾリル基にはトリチル基が、それ
ぞれ用いられる。
保護基としては、ペプチド合成において一般的に使用さ
れるものが用いられる。例えば、α−アミノ基にＢｏｃ
基を用いるとき、Ａｓｐ、Ｇｌｕのカルボキシル基には
エステル基により保護されるベンジル基又はシクロヘキ
シル基が、Ｔｈｒ、Ｓｅｒのヒドロキシル基にはベンジ
ル基が、Ｌｙｓの側鎖アミノ基にはｐ−クロロベンジル
オキシカルボニル基が、Ｔｙｒのヒドロキシル基には２
−ブロモベンジルオキシカルボニル基が、Ｈｉｓのイミ
ダゾリル基にはトルエンスルホニル基、ベンジルオキシ
メチル基又は２，４−ジニトロフェニル基が、それぞれ
用いられる。またα−アミノ基にＦｍｏｃ基を用いると
き、Ａｓｐ、Ｇｌｕのカルボキシル基、Ｔｙｒ、Ｔｈ
ｒ、Ｓｅｒのヒドロキシル基には第三級ブチルエステル
が、Ｌｙｓの側鎖アミノ基にはｔ−ブトキシカルボニル
基が、Ｈｉｓのイミダゾリル基にはトリチル基が、それ
ぞれ用いられる。
【００１１】液相法にて合成する時には固相法と同様、
通常のペプチド合成法に従って行うことができる。公知
の方法として例えば泉屋信夫他著、〔「ペプチド合成の
基礎と実験」、丸善（株）、１９７５年〕などに記載さ
れている方法などが挙げられる。
通常のペプチド合成法に従って行うことができる。公知
の方法として例えば泉屋信夫他著、〔「ペプチド合成の
基礎と実験」、丸善（株）、１９７５年〕などに記載さ
れている方法などが挙げられる。
【００１２】次に保護基および支持体からの脱離は、α
−アミノ基の保護基としてＢｏｃ基を用いる時にはスカ
ベンジャーを含むフッ化水素、ＴＦＭＳＡなどを用いて
行われる。スカベンジャーとしてはチオアニソール、エ
タンジチオール、ジメチルスルフィドなどが用いられ
る。またα−アミノ基の保護基としてＦｍｏｃ基を用い
る時にはフェノールとＴＦＡとを含む混合物などを用い
ることができる。
−アミノ基の保護基としてＢｏｃ基を用いる時にはスカ
ベンジャーを含むフッ化水素、ＴＦＭＳＡなどを用いて
行われる。スカベンジャーとしてはチオアニソール、エ
タンジチオール、ジメチルスルフィドなどが用いられ
る。またα−アミノ基の保護基としてＦｍｏｃ基を用い
る時にはフェノールとＴＦＡとを含む混合物などを用い
ることができる。
【００１３】ペプチドの精製には一般的に使用されるイ
オン交換樹脂、分配クロマトグラフィー、ゲルクロマト
グラフィー、逆相型液体クロマトグラフィー等を単独に
あるいは組み合わせて用いることによって行うことがで
きる。精製されたペプチドのアミノ酸組成は、アミノ酸
分析装置により容易に測定することができる。
オン交換樹脂、分配クロマトグラフィー、ゲルクロマト
グラフィー、逆相型液体クロマトグラフィー等を単独に
あるいは組み合わせて用いることによって行うことがで
きる。精製されたペプチドのアミノ酸組成は、アミノ酸
分析装置により容易に測定することができる。
【００１４】本発明のペプチドはＴＳＡｂの量的変化を
簡便に把握する手段として有用であるので、自己免疫性
甲状腺疾患の診断薬として使用でき、またＴＳＡｂとＴ
ＳＨ受容体との結合を阻害する作用も有するので、甲状
腺疾患の治療薬としても使用できる。
簡便に把握する手段として有用であるので、自己免疫性
甲状腺疾患の診断薬として使用でき、またＴＳＡｂとＴ
ＳＨ受容体との結合を阻害する作用も有するので、甲状
腺疾患の治療薬としても使用できる。
【００１５】本発明では治療的に有効な量の前記ペプチ
ドを処理の必要な個体に投与することによって自己免疫
性甲状腺疾患を治療することができる。診断薬又は治療
薬として適用する場合、本発明のペプチドを診断学的あ
るいは製薬学的に許容できる担体と共に、それらに有効
な量を含有させて診断組成物又は治療組成物として製剤
することができる。本発明ペプチドを診断薬として使用
する場合、前記ペプチドが患者血清中のＴＳＡｂと特異
的に結合することを利用し、酵素又は放射性同位元素等
で標識された本ペプチドを用いてＴＳＡｂを定量するこ
とができる。また前記ペプチドを適当な担体と結合さ
せ、マウス、ラット、ウサギなどの動物に免疫させるこ
とによって得られる抗体を利用して定量することも可能
である。
ドを処理の必要な個体に投与することによって自己免疫
性甲状腺疾患を治療することができる。診断薬又は治療
薬として適用する場合、本発明のペプチドを診断学的あ
るいは製薬学的に許容できる担体と共に、それらに有効
な量を含有させて診断組成物又は治療組成物として製剤
することができる。本発明ペプチドを診断薬として使用
する場合、前記ペプチドが患者血清中のＴＳＡｂと特異
的に結合することを利用し、酵素又は放射性同位元素等
で標識された本ペプチドを用いてＴＳＡｂを定量するこ
とができる。また前記ペプチドを適当な担体と結合さ
せ、マウス、ラット、ウサギなどの動物に免疫させるこ
とによって得られる抗体を利用して定量することも可能
である。
【００１６】本発明のペプチドを治療薬として用いる場
合、例えば経口投与用剤型としては錠剤、カプセル剤、
顆粒剤又は粉剤などが挙げられ、あるいは非経口投与用
剤型としては注射剤などが挙げられる。薬剤の投与量
は、患者の症状の程度、年令及び体重、投与方法などに
依存し、専門医の適量決定試験によって決定されなけれ
ばならない。
合、例えば経口投与用剤型としては錠剤、カプセル剤、
顆粒剤又は粉剤などが挙げられ、あるいは非経口投与用
剤型としては注射剤などが挙げられる。薬剤の投与量
は、患者の症状の程度、年令及び体重、投与方法などに
依存し、専門医の適量決定試験によって決定されなけれ
ばならない。
【００１７】
実施例１ ペプチドＮｏ１ （配列表の配列番号２で示されるペプチド）Ｂｏｃ−Ａ
ｌａ−ＰＡＭ樹脂（後記ペプチド自動合成装置に設置）
６３４ｍｇ（Ａｌａ含量０．７９ｍｏｌ／ｇ）を原料と
して、ペプチド自動合成装置（アプライド、バイオシス
テム社製４３０Ａ型）を用いた固相合成法によって目的
のペプチドＮｏ１を合成した。常法に従い、前記アミノ
酸配列に従ってＣ末端Ａｌａから順次１３個のＬ体アミ
ノ酸をそれぞれ２ミリモルずつ反応させることによって
１．７ｇの保護ペプチド樹脂を得た。この反応に用いた
アミノ酸の側鎖官能基の保護については、Ｌｙｓの側鎖
アミノ基はｐ−クロロベンジルオキシカルボニル基で、
Ａｓｐ、Ｇｌｕのカルボキシル基はベンジル基で、Ｓｅ
ｒ、Ｔｈｒのヒドロキシル基はベンジル基でＴｙｒのヒ
ドロキシル基は２−ブロモベンジルオキシカルボニル基
で、Ｈｉｓのイミダゾリル基はベンジルオキシメチル基
でそれぞれ保護した。この保護ペプチド樹脂を乾燥後、
保護ペプチド樹脂１．５ｇを０．７５ｍｌのエタンジチ
オールと１．５ｍｌのチオアニソールの混合液で氷冷下
１０分間攪拌し、その後１５ｍｌのＴＦＡを加え、１０
分間攪拌した。この混合液の中に１．５ｍｌのＴＦＭＳ
Ａを加えて１０分間撹拌後、さらに室温にて５０分間攪
拌した。その後、５０ｍｌの無水エーテルを加えて粗ペ
プチドを沈殿させ、グラスフィルターにて粗ペプチドと
脱離した樹脂とを濾過した。グラスフィルター上の粗ペ
プチドに５ｍｌのＴＦＡを加え、溶解してＴＦＡ溶液を
得た。このものを分離後無水エーテルで数回洗浄した後
減圧下で乾燥した。その後、１５％酢酸水に溶解し、凍
結乾燥した。このようにして得られた粗ペプチドのうち
５００ｍｇを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）
にて次のような条件で精製した。カラムは逆相系ＯＤＳ
（ＵＬＴＲＯＮ ＳＣ１８）で０．１％ＴＦＡを含むア
セトニトリルグラジェント〔６０分間でアセトニトリル
（０．１％ＴＦＡを含む）１００％、流量１０ｍｌ／
分〕により分離、精製した。必要な溶出画分を濃縮後、
凍結乾燥することによって目的とするペプチドＮｏ．１
１５０ｍｇを得た。このようにして合成されたペプチ
ドＮｏ．１のアミノ酸分析を行った。アミノ酸分析につ
いては、６規定塩酸で１１０℃２０時間加水分解した
後、アミノ酸分析装置Ｌ８５００（日立製作所製）にて
測定した。 アミノ酸分析結果 上記のアミノ酸分析結果により本発明の目的物であるペ
プチドＮｏ．１が得られていることを確認した。
ｌａ−ＰＡＭ樹脂（後記ペプチド自動合成装置に設置）
６３４ｍｇ（Ａｌａ含量０．７９ｍｏｌ／ｇ）を原料と
して、ペプチド自動合成装置（アプライド、バイオシス
テム社製４３０Ａ型）を用いた固相合成法によって目的
のペプチドＮｏ１を合成した。常法に従い、前記アミノ
酸配列に従ってＣ末端Ａｌａから順次１３個のＬ体アミ
ノ酸をそれぞれ２ミリモルずつ反応させることによって
１．７ｇの保護ペプチド樹脂を得た。この反応に用いた
アミノ酸の側鎖官能基の保護については、Ｌｙｓの側鎖
アミノ基はｐ−クロロベンジルオキシカルボニル基で、
Ａｓｐ、Ｇｌｕのカルボキシル基はベンジル基で、Ｓｅ
ｒ、Ｔｈｒのヒドロキシル基はベンジル基でＴｙｒのヒ
ドロキシル基は２−ブロモベンジルオキシカルボニル基
で、Ｈｉｓのイミダゾリル基はベンジルオキシメチル基
でそれぞれ保護した。この保護ペプチド樹脂を乾燥後、
保護ペプチド樹脂１．５ｇを０．７５ｍｌのエタンジチ
オールと１．５ｍｌのチオアニソールの混合液で氷冷下
１０分間攪拌し、その後１５ｍｌのＴＦＡを加え、１０
分間攪拌した。この混合液の中に１．５ｍｌのＴＦＭＳ
Ａを加えて１０分間撹拌後、さらに室温にて５０分間攪
拌した。その後、５０ｍｌの無水エーテルを加えて粗ペ
プチドを沈殿させ、グラスフィルターにて粗ペプチドと
脱離した樹脂とを濾過した。グラスフィルター上の粗ペ
プチドに５ｍｌのＴＦＡを加え、溶解してＴＦＡ溶液を
得た。このものを分離後無水エーテルで数回洗浄した後
減圧下で乾燥した。その後、１５％酢酸水に溶解し、凍
結乾燥した。このようにして得られた粗ペプチドのうち
５００ｍｇを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）
にて次のような条件で精製した。カラムは逆相系ＯＤＳ
（ＵＬＴＲＯＮ ＳＣ１８）で０．１％ＴＦＡを含むア
セトニトリルグラジェント〔６０分間でアセトニトリル
（０．１％ＴＦＡを含む）１００％、流量１０ｍｌ／
分〕により分離、精製した。必要な溶出画分を濃縮後、
凍結乾燥することによって目的とするペプチドＮｏ．１
１５０ｍｇを得た。このようにして合成されたペプチ
ドＮｏ．１のアミノ酸分析を行った。アミノ酸分析につ
いては、６規定塩酸で１１０℃２０時間加水分解した
後、アミノ酸分析装置Ｌ８５００（日立製作所製）にて
測定した。 アミノ酸分析結果 上記のアミノ酸分析結果により本発明の目的物であるペ
プチドＮｏ．１が得られていることを確認した。
【００１８】実施例２及び３ 前記実施例１の場合と同様にペプチドＮｏ．２及びＮ
ｏ．３を得た。 ペプチドＮｏ．２ （配列表の配列番号３で示されるペプチド） ペプチドＮｏ．３ （配列表の配列番号４で示されるペプチド）
ｏ．３を得た。 ペプチドＮｏ．２ （配列表の配列番号３で示されるペプチド） ペプチドＮｏ．３ （配列表の配列番号４で示されるペプチド）
【００１９】ラット甲状腺細胞ＦＲＴＬ５を用い、ＴＳ
Ａｂの刺激によるｃＡＭＰの産生における当該ペプチド
の影響を小杉（Ｋｏｓｕｇｉ．Ｓ）らの方法〔Ｅｎｄｏ
ｃｒｉｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ．１２５ Ｎｏ．１ ４１
０頁（１９８９）〕に準じて調べる。以下その概略を示
す。 試験例１ 細胞は前培養したＦＲＴＬ５細胞１．５×１０５Ｃｅｌ
ｌｓ／ｍｌを９６穴のマルチプレートに１００μｌずつ
分注し、ＣＯ２インキュベーター中で培地（ＴＳＨを除
いたもの）交換をしながら６日間培養し、培地を除去し
て洗浄プレート上に細胞を調整して試験に供試する。Ｔ
ＳＡｂ陽性血清ＩｇＧ溶液４０μｌ又はｂ−ＴＳＨ２０
０μＵを含む溶液４０μｌと所望のペプチド５μｇを含
む溶液１０μｌをテストチューブ中で４℃で２０時間反
応させる。この反応液に、３−イソブチル−１−メチル
キサンチン０．５ｍＭ溶液５μｌを加え、先に調整した
ＦＲＴＬ５細胞に反応液５０μｌを添加し、３７℃、２
時間インキュベーションする。一方、コントロールとし
て正常者血清を用い同様にして試験を行う。それぞれの
サンプルについてＴＳＡｂの刺激により産生されたｃＡ
ＭＰについて市販のｃＡＭＰラジオイムノアッセイキッ
ト（１−ＶＱ１２：栄研化学（株）製造）を使用して定
量測定し、その結果を表１及び表２に示す。
Ａｂの刺激によるｃＡＭＰの産生における当該ペプチド
の影響を小杉（Ｋｏｓｕｇｉ．Ｓ）らの方法〔Ｅｎｄｏ
ｃｒｉｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ．１２５ Ｎｏ．１ ４１
０頁（１９８９）〕に準じて調べる。以下その概略を示
す。 試験例１ 細胞は前培養したＦＲＴＬ５細胞１．５×１０５Ｃｅｌ
ｌｓ／ｍｌを９６穴のマルチプレートに１００μｌずつ
分注し、ＣＯ２インキュベーター中で培地（ＴＳＨを除
いたもの）交換をしながら６日間培養し、培地を除去し
て洗浄プレート上に細胞を調整して試験に供試する。Ｔ
ＳＡｂ陽性血清ＩｇＧ溶液４０μｌ又はｂ−ＴＳＨ２０
０μＵを含む溶液４０μｌと所望のペプチド５μｇを含
む溶液１０μｌをテストチューブ中で４℃で２０時間反
応させる。この反応液に、３−イソブチル−１−メチル
キサンチン０．５ｍＭ溶液５μｌを加え、先に調整した
ＦＲＴＬ５細胞に反応液５０μｌを添加し、３７℃、２
時間インキュベーションする。一方、コントロールとし
て正常者血清を用い同様にして試験を行う。それぞれの
サンプルについてＴＳＡｂの刺激により産生されたｃＡ
ＭＰについて市販のｃＡＭＰラジオイムノアッセイキッ
ト（１−ＶＱ１２：栄研化学（株）製造）を使用して定
量測定し、その結果を表１及び表２に示す。
【００２０】表１は患者血清ＩｇＧ５サンプルについて
各ペプチドの作用を調べたものである。この結果から明
らかなように、ペプチドＮｏ．１は、それぞれの患者血
清ＩｇＧに対して抑制又は増強を示した。一方、ｂ−Ｔ
ＳＨに対する影響は各ペプチド共、刺激活性に対してほ
とんど作用しなかった。またコントロールとしての正常
者血清ＩｇＧはｃＡＭＰの産生を示さなかった。表２は
ある患者血清ＩｇＧサンプルについての各ペプチドの作
用を調べたものである。なお表１及び表２中の変化率は
各血清使用時のｃＡＭＰ産生量について無処理区に対す
る処理区の百分率を表したものである。
各ペプチドの作用を調べたものである。この結果から明
らかなように、ペプチドＮｏ．１は、それぞれの患者血
清ＩｇＧに対して抑制又は増強を示した。一方、ｂ−Ｔ
ＳＨに対する影響は各ペプチド共、刺激活性に対してほ
とんど作用しなかった。またコントロールとしての正常
者血清ＩｇＧはｃＡＭＰの産生を示さなかった。表２は
ある患者血清ＩｇＧサンプルについての各ペプチドの作
用を調べたものである。なお表１及び表２中の変化率は
各血清使用時のｃＡＭＰ産生量について無処理区に対す
る処理区の百分率を表したものである。
【００２１】
【表１】
【００２２】
【表２】
【００２３】
配列番号：１ 配列の長さ：１６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列
【００２４】配列番号：２ 配列の長さ：１３ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列
【００２５】配列番号：３ 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列
【００２６】配列番号：４ 配列の長さ：１０ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｇ０１Ｎ 33/50 Ｔ 7055−2Ｊ // Ｃ０７Ｋ 99:00
Claims (4)
- 【請求項１】 配列表配列番号１で示されるアミノ酸配
列において、６番目及び７番目のＬｙｓ−Ｐｈｅを含
み、かつ７〜１６個のアミノ酸から構成されることを特
徴とするペプチド又はその塩。 - 【請求項２】 前記ペプチドが配列表配列番号２、３又
は４で示されるアミノ酸配列で表わされる請求項１に記
載のペプチド又はその塩。 - 【請求項３】 配列表配列番号１で示されるアミノ酸配
列において、６番目及び７番目のＬｙｓ−Ｐｈｅを含
み、かつ７〜１６個のアミノ酸から構成されるペプチド
又はその塩を有効成分として含有することを特徴とする
自己免疫性甲状腺疾患の診断薬又は治療薬。 - 【請求項４】 前記ペプチドが配列表配列番号２、３又
は４で示されるアミノ酸配列で表わされる請求項３に記
載の自己免疫性甲状腺疾患の診断薬又は治療薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4086718A JPH0641192A (ja) | 1992-02-25 | 1992-02-25 | ペプチド又はその塩並びにそれらを含有する自己免疫性甲状腺疾患の診断薬又は治療薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4086718A JPH0641192A (ja) | 1992-02-25 | 1992-02-25 | ペプチド又はその塩並びにそれらを含有する自己免疫性甲状腺疾患の診断薬又は治療薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0641192A true JPH0641192A (ja) | 1994-02-15 |
Family
ID=13894666
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4086718A Pending JPH0641192A (ja) | 1992-02-25 | 1992-02-25 | ペプチド又はその塩並びにそれらを含有する自己免疫性甲状腺疾患の診断薬又は治療薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0641192A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7580264B2 (en) | 2005-01-14 | 2009-08-25 | Funai Electric Co., Ltd. | Power supply and fixing structure of heatsink and circuit board applicable to the same |
-
1992
- 1992-02-25 JP JP4086718A patent/JPH0641192A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7580264B2 (en) | 2005-01-14 | 2009-08-25 | Funai Electric Co., Ltd. | Power supply and fixing structure of heatsink and circuit board applicable to the same |
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