JPH061786A - 生理活性物質ａｓ−１８６類縁体 - Google Patents
生理活性物質ａｓ−１８６類縁体Info
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- JPH061786A JPH061786A JP15672092A JP15672092A JPH061786A JP H061786 A JPH061786 A JP H061786A JP 15672092 A JP15672092 A JP 15672092A JP 15672092 A JP15672092 A JP 15672092A JP H061786 A JPH061786 A JP H061786A
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- formula
- substance
- analog
- cholesterol
- physiologically active
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- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Heterocyclic Compounds That Contain Two Or More Ring Oxygen Atoms (AREA)
Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【構成】 下記式（Ｉ）で表わされる生理活性物質ＡＳ
−１８６類縁体。 〔式中、Ｒは下記式（II）などの基を示す〕 【効果】 動脈硬化、高脂血症などの成人病の治療に有
効なＡＣＡＴ阻害活性を有する生理活性物質を提供する
ことができる。
−１８６類縁体。 〔式中、Ｒは下記式（II）などの基を示す〕 【効果】 動脈硬化、高脂血症などの成人病の治療に有
効なＡＣＡＴ阻害活性を有する生理活性物質を提供する
ことができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、アシルコエンザイムＡ
コレステロールアシル転移酵素（以下、ＡＣＡＴとい
う）阻害作用を有する生理活性物質ＡＳ−１８６類縁体
に関する。ＡＣＡＴ阻害活性を有する物質は、食物から
のコレステロールの吸収を抑えることによる血中のコレ
ステロール値の減少、動脈硬化症状の進行の抑制、余剰
遊離コレステロールの異化排出促進に関わり、動脈硬
化、高脂血症などの成人病の治療に有効である。
コレステロールアシル転移酵素（以下、ＡＣＡＴとい
う）阻害作用を有する生理活性物質ＡＳ−１８６類縁体
に関する。ＡＣＡＴ阻害活性を有する物質は、食物から
のコレステロールの吸収を抑えることによる血中のコレ
ステロール値の減少、動脈硬化症状の進行の抑制、余剰
遊離コレステロールの異化排出促進に関わり、動脈硬
化、高脂血症などの成人病の治療に有効である。
【０００２】
【従来の技術】従来、微生物由来のＡＣＡＴ阻害物質と
しては、下記の物質が知られている（特開平3-52884 号
公報) 。
しては、下記の物質が知られている（特開平3-52884 号
公報) 。
【０００３】
【化５】
【０００４】しかし、本発明生理活性物質ＡＳ−１８６
類縁体は文献未記載の新規物質である。
類縁体は文献未記載の新規物質である。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】コレステロールは、細
胞体そのものの構築に必要なものであり、動脈硬化発症
は体内でのコレステロールのバランスの異常と深く関わ
っている。体内で合成されたり、摂取した食事から吸収
されたりしたコレステロールは、リポタンパク質のかた
ちで血管中を運ばれ、主に肝臓で代謝される。様々な理
由で、血中の低比重リポタンパク量が著増した場合、こ
のリポタンパクは酸化などの変性を受けマクロファージ
に無制限に取り込まれ、泡沫細胞化し、動脈壁に付着し
て、その後の血管壁中膜の平滑筋細胞増殖、動脈壁の肥
厚を引き起こすと考えられている。
胞体そのものの構築に必要なものであり、動脈硬化発症
は体内でのコレステロールのバランスの異常と深く関わ
っている。体内で合成されたり、摂取した食事から吸収
されたりしたコレステロールは、リポタンパク質のかた
ちで血管中を運ばれ、主に肝臓で代謝される。様々な理
由で、血中の低比重リポタンパク量が著増した場合、こ
のリポタンパクは酸化などの変性を受けマクロファージ
に無制限に取り込まれ、泡沫細胞化し、動脈壁に付着し
て、その後の血管壁中膜の平滑筋細胞増殖、動脈壁の肥
厚を引き起こすと考えられている。
【０００６】以上のようなコレステロール代謝と動脈硬
化発症の機序において、ＡＣＡＴの作用としては、次の
３つが考えられる。 腸管粘膜細胞において、摂取した食物からコレステロ
ールをエステル化して取り込む。 マクロファージにおいて、取り込まれ過剰のコレステ
ロールをエステル化して蓄積させる。 肝臓において、余剰のコレステロールをエステル化し
貯蔵する。 そこでＡＣＡＴ阻害薬剤の効果としては、食物からの吸
収を抑えることによる血中のコレステロール値の減少、
動脈硬化症状の進行の抑制、余剰遊離コレステロールの
異化・排出促進が期待できる。
化発症の機序において、ＡＣＡＴの作用としては、次の
３つが考えられる。 腸管粘膜細胞において、摂取した食物からコレステロ
ールをエステル化して取り込む。 マクロファージにおいて、取り込まれ過剰のコレステ
ロールをエステル化して蓄積させる。 肝臓において、余剰のコレステロールをエステル化し
貯蔵する。 そこでＡＣＡＴ阻害薬剤の効果としては、食物からの吸
収を抑えることによる血中のコレステロール値の減少、
動脈硬化症状の進行の抑制、余剰遊離コレステロールの
異化・排出促進が期待できる。
【０００７】本発明の目的は、優れたＡＣＡＴ阻害活性
を有する物質を提供することにある。
を有する物質を提供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明によれば、式
（Ｉ）
（Ｉ）
【０００９】
【化６】
【００１０】〔式中、Ｒは式（II）
【００１１】
【化７】
【００１２】式（III ）
【００１３】
【化８】
【００１４】または式（IV)
【００１５】
【化９】
【００１６】を表わす。〕で表わされる生理活性物質Ａ
Ｓ−１８６類縁体を提供することができる。式（Ｉ）の
定義中、Ｒが式（II）である化合物をＡＳ−１８６ｃ及
びＡＳ−１８６ｇ、Ｒが式（III)である化合物をＡＳ−
１８６ｄ、Ｒが式（IV）である化合物をＡＳ−１８６ｄ
ｘと称する。
Ｓ−１８６類縁体を提供することができる。式（Ｉ）の
定義中、Ｒが式（II）である化合物をＡＳ−１８６ｃ及
びＡＳ−１８６ｇ、Ｒが式（III)である化合物をＡＳ−
１８６ｄ、Ｒが式（IV）である化合物をＡＳ−１８６ｄ
ｘと称する。
【００１７】以下に、本発明を詳細に説明する。ＡＳ−
１８６ｃ，ｄ，ｇおよびｄｘの物理化学的性質を第１、
２、３及び４表に示す。ＡＳ−１８６類はアセトキシ基
に関する二種の立体異性体の混合物であり、ＡＳ−１８
６ｃおよびｇはラクトン環の水酸基に関するジアステレ
オマーである。
１８６ｃ，ｄ，ｇおよびｄｘの物理化学的性質を第１、
２、３及び４表に示す。ＡＳ−１８６類はアセトキシ基
に関する二種の立体異性体の混合物であり、ＡＳ−１８
６ｃおよびｇはラクトン環の水酸基に関するジアステレ
オマーである。
【００１８】
【表１】
【００１９】
【表２】
【００２０】
【表３】
【００２１】
【表４】
【００２２】次に、各種展開剤によるＡＳ−１８６類縁
体の薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）のＲｆ値を第５
表に示す。なお、検出はヨード発色反応により行った。
体の薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）のＲｆ値を第５
表に示す。なお、検出はヨード発色反応により行った。
【００２３】
【表５】
【００２４】次にＡＳ−１８６類縁体の製造法について
説明する。ＡＳ−１８６ｃ、ＡＳ−１８６ｄ及びＡＳ−
１８６ｇは発酵法により、ＡＳ−１８６ｄｘは合成法に
より製造される。ＡＳ−１８６類は、ペニシリウム属に
属し、ＡＳ−１８６類縁体生産能を有する微生物を培地
に培養し、培養物中にＡＳ−１８６類縁体を生成蓄積さ
せ、該培養物からＡＳ−１８６類縁体を採取することに
より製造される。
説明する。ＡＳ−１８６ｃ、ＡＳ−１８６ｄ及びＡＳ−
１８６ｇは発酵法により、ＡＳ−１８６ｄｘは合成法に
より製造される。ＡＳ−１８６類は、ペニシリウム属に
属し、ＡＳ−１８６類縁体生産能を有する微生物を培地
に培養し、培養物中にＡＳ−１８６類縁体を生成蓄積さ
せ、該培養物からＡＳ−１８６類縁体を採取することに
より製造される。
【００２５】ＡＳ−１８６類縁体生産菌としては、ペニ
シリウム属に属し、ＡＳ−１８６類縁体生産能を有する
ものであればいずれの微生物でも良い。また、そのよう
な菌株を人工的変異方法、たとえば紫外線照射、Ｘ線照
射、変異誘起剤処理などによって変異させた変異株ある
いは自然的に変異した変異株などでもＡＳ−１８６類縁
体生産能を有していれば本発明に用いることができる。
具体的に好適な例としては、ペニシリウム・アスペロス
ポラム ( Penicillium asperosporum G. Smith, 1965
) に属する菌株をあげることができる。本微生物につ
いての菌学的性質は、ピット(Pitt)著、1979年、アカデ
ミック・プレス(Academic press)社の“ザ・ジーナス・
ペニシリウム・アンド・イッツ・テレオモーフィック・
ステイタス・ユーペニシリウム・アンド・タラロマイセ
ス（Thegenus Penicillium and its teleomorphic stat
es Eupenicillium and Talaromyces )"の 313〜315 ペ
ージに詳しく記載されている。本発明者らは、本菌株を
“ペニシリウム・アスペロスポラム (Penicillium aspe
rosuporum) C-186 "と命名し、ブダペスト条約に基づい
て平成４年６月１２日付で微工研条寄第3888号(FERM BP
-3888)として工業技術院微生物工業技術研究所に寄託し
た。
シリウム属に属し、ＡＳ−１８６類縁体生産能を有する
ものであればいずれの微生物でも良い。また、そのよう
な菌株を人工的変異方法、たとえば紫外線照射、Ｘ線照
射、変異誘起剤処理などによって変異させた変異株ある
いは自然的に変異した変異株などでもＡＳ−１８６類縁
体生産能を有していれば本発明に用いることができる。
具体的に好適な例としては、ペニシリウム・アスペロス
ポラム ( Penicillium asperosporum G. Smith, 1965
) に属する菌株をあげることができる。本微生物につ
いての菌学的性質は、ピット(Pitt)著、1979年、アカデ
ミック・プレス(Academic press)社の“ザ・ジーナス・
ペニシリウム・アンド・イッツ・テレオモーフィック・
ステイタス・ユーペニシリウム・アンド・タラロマイセ
ス（Thegenus Penicillium and its teleomorphic stat
es Eupenicillium and Talaromyces )"の 313〜315 ペ
ージに詳しく記載されている。本発明者らは、本菌株を
“ペニシリウム・アスペロスポラム (Penicillium aspe
rosuporum) C-186 "と命名し、ブダペスト条約に基づい
て平成４年６月１２日付で微工研条寄第3888号(FERM BP
-3888)として工業技術院微生物工業技術研究所に寄託し
た。
【００２６】微生物の培養に際しては、微生物の培養に
用いられる通常の培養方法が適用される。用いられる培
地は微生物の資化しうる炭素源、窒素源、無機物などを
程よく含有する培地であれば天然培地、合成培地のいず
れでも用いうる。炭素源としては、グルコース、フラク
トース、シュークロース、ラクトース、スタビロース、
澱粉、デキストリン、マンノース、マルトース、糖蜜、
マッシュポテトの素などの炭水化物、クエン酸、リンゴ
酸、酢酸、フマール酸等の有機酸、メタノール、エタノ
ールなどのアルコール、メタン、エタン、n-プロパンな
どの炭化水素、グルタミン酸などのアミノ酸あるいはグ
ルセロール、綿実油などが用いられる。
用いられる通常の培養方法が適用される。用いられる培
地は微生物の資化しうる炭素源、窒素源、無機物などを
程よく含有する培地であれば天然培地、合成培地のいず
れでも用いうる。炭素源としては、グルコース、フラク
トース、シュークロース、ラクトース、スタビロース、
澱粉、デキストリン、マンノース、マルトース、糖蜜、
マッシュポテトの素などの炭水化物、クエン酸、リンゴ
酸、酢酸、フマール酸等の有機酸、メタノール、エタノ
ールなどのアルコール、メタン、エタン、n-プロパンな
どの炭化水素、グルタミン酸などのアミノ酸あるいはグ
ルセロール、綿実油などが用いられる。
【００２７】窒素源としては、塩化アンモニウム、硫酸
アンモニウム、硝酸アンモニウム、リン酸アンモニウム
などのアンモニウム塩、アスパラギン酸、グルタミン、
シスチン、アラニンなどのアミノ酸、尿素、麦芽エキ
ス、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、コー
ン・スチープ・リーカー、大豆粉、綿実粕、大豆カゼイ
ン、カザミノ酸、ファーマメディア、ソルブル・ベンジ
タブル・プロティン、野菜・果実のジュースなどが用い
られる。
アンモニウム、硝酸アンモニウム、リン酸アンモニウム
などのアンモニウム塩、アスパラギン酸、グルタミン、
シスチン、アラニンなどのアミノ酸、尿素、麦芽エキ
ス、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、コー
ン・スチープ・リーカー、大豆粉、綿実粕、大豆カゼイ
ン、カザミノ酸、ファーマメディア、ソルブル・ベンジ
タブル・プロティン、野菜・果実のジュースなどが用い
られる。
【００２８】無機物としては、リン酸二水素カリウム、
リン酸水素二ナトリウム、リン酸マグネシウム、硫酸マ
グネシウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸コバル
ト、硫酸亜鉛、モリブデン酸アンモニウム、硫酸アルミ
ニウムカリウム、炭酸バリウム、炭酸カルシウム、塩化
コバルト、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナト
リウムなどが用いられる。
リン酸水素二ナトリウム、リン酸マグネシウム、硫酸マ
グネシウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸コバル
ト、硫酸亜鉛、モリブデン酸アンモニウム、硫酸アルミ
ニウムカリウム、炭酸バリウム、炭酸カルシウム、塩化
コバルト、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナト
リウムなどが用いられる。
【００２９】その他必要に応じて培地にビタミン（例え
ばパントテン酸）、ｐＨ緩衝剤〔例えば３−（Ｎ−モル
ホリノ）プロパンスルホン酸〕など菌体の増殖あるいは
ＡＳ−１８６類縁体の生産を促進あるいは安定化する物
質を加えることができる。用いられる微生物が特定の物
質を要求する場合は生育に必要なものを加えることが必
要である。
ばパントテン酸）、ｐＨ緩衝剤〔例えば３−（Ｎ−モル
ホリノ）プロパンスルホン酸〕など菌体の増殖あるいは
ＡＳ−１８６類縁体の生産を促進あるいは安定化する物
質を加えることができる。用いられる微生物が特定の物
質を要求する場合は生育に必要なものを加えることが必
要である。
【００３０】培養は振とう培養法、通気攪はん培養法な
どにより15〜30℃の温度で中性付近のpHで行われる。３
〜10日間の培養によってＡＳ−１８６類縁体の蓄積が最
大に達し、培養は完了する。蓄積したＡＳ−１８６類縁
体を菌体から単離採取するに際しては、通常の生理活性
物質を菌体から採取する方法が適用される。即ち、濾
過、遠心分離などによる菌体の採取、メタノール、アセ
トンなどの有機溶媒による菌体からの抽出、水または二
種以上の有機溶媒による分配、吸着樹脂、シリカゲル、
化学修飾シリカゲル、アルミナ、セルロース、珪藻土、
珪酸マグネシウム、ゲル濾過剤などを用いるカラムクロ
マトグラフィーもしくは薄層クロマトグラフィーによる
活性物質の吸脱着処理などによってＡＳ−１８６類縁体
を単離することができる。
どにより15〜30℃の温度で中性付近のpHで行われる。３
〜10日間の培養によってＡＳ−１８６類縁体の蓄積が最
大に達し、培養は完了する。蓄積したＡＳ−１８６類縁
体を菌体から単離採取するに際しては、通常の生理活性
物質を菌体から採取する方法が適用される。即ち、濾
過、遠心分離などによる菌体の採取、メタノール、アセ
トンなどの有機溶媒による菌体からの抽出、水または二
種以上の有機溶媒による分配、吸着樹脂、シリカゲル、
化学修飾シリカゲル、アルミナ、セルロース、珪藻土、
珪酸マグネシウム、ゲル濾過剤などを用いるカラムクロ
マトグラフィーもしくは薄層クロマトグラフィーによる
活性物質の吸脱着処理などによってＡＳ−１８６類縁体
を単離することができる。
【００３１】上記工程中のＡＳ−１８６類縁体の検出
は、シリカゲル薄層クロマトグラフィー、ついでヨード
発色を行うことにより、またはＣ−１８逆相シリカゲル
カラムを用いた高速液体クロマトグラフィーにおいて、
UV230nm または280nm の吸収を測定することにより行
う。次にＡＳ−１８６ｄｘの製造法について述べる。
は、シリカゲル薄層クロマトグラフィー、ついでヨード
発色を行うことにより、またはＣ−１８逆相シリカゲル
カラムを用いた高速液体クロマトグラフィーにおいて、
UV230nm または280nm の吸収を測定することにより行
う。次にＡＳ−１８６ｄｘの製造法について述べる。
【００３２】ＡＳ−１８６ｄｘはＡＳ−１８６ｄを縮環
反応に付すことにより製造される。縮環反応はＡＳ−１
８６ｄを溶媒中攪拌することにより脱メタノールさせる
ことにより行われる。好適な溶媒としてはジメチルスル
ホキシド、クロロホルム、メタノール等があげられ、単
独もくしは混合して用いられる。反応温度は０〜50℃で
あり、反応時間は溶媒、濃度及び反応温度により異なる
が、通常１時間〜３日間である。反応の進行は薄層クロ
マトグラフィーにより容易に追跡でき、目的化合物が適
当量得られた時点で反応を終了する。
反応に付すことにより製造される。縮環反応はＡＳ−１
８６ｄを溶媒中攪拌することにより脱メタノールさせる
ことにより行われる。好適な溶媒としてはジメチルスル
ホキシド、クロロホルム、メタノール等があげられ、単
独もくしは混合して用いられる。反応温度は０〜50℃で
あり、反応時間は溶媒、濃度及び反応温度により異なる
が、通常１時間〜３日間である。反応の進行は薄層クロ
マトグラフィーにより容易に追跡でき、目的化合物が適
当量得られた時点で反応を終了する。
【００３３】溶媒中からの目的化合物の単離、精製は、
有機合成化学で通常行われている方法が用いられる。例
えば濃縮、カラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグ
ラフィー、分取用高速液体クロマトグラフィー等により
目的化合物を単離、精製する。
有機合成化学で通常行われている方法が用いられる。例
えば濃縮、カラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグ
ラフィー、分取用高速液体クロマトグラフィー等により
目的化合物を単離、精製する。
【００３４】次に実験例により、ＡＳ−１８６類縁体の
ＡＣＡＴ阻害作用を説明する。 実験例 ＡＣＡＴ阻害作用 ２％コレステロール食を負荷した日本白色兎の肝よりMa
rco らの方法〔バイオキミカ・エト・バイオフィジカ・
アクタ (Biochimm. Biophys. Acta.),875, 599-604, 19
86) に準じて調製したミクロゾーム画分 100μｇ、2mM
ジチオスレイトール、25μM 牛血清アルブミン (BSA)、
50μM 〔14Ｃ〕オレオイルコエンザイムＡおよび薬剤
（メタノール溶液）からなる反応液（液量 200μl)を37
℃で45分反応させ、非標識コレステロールオレイン酸エ
ステルを含むクロロホルム−メタノール（２：１， v／
v)溶液 4mlを加えて反応を止めた。水0.８mlを加えてよ
く攪拌した後、遠心して２相に分離した。クロロホルム
層を減圧乾固した後、ＴＬＣにスポットし、ｎ−ヘキサ
ン：ジエチルエーテル：酢酸＝ 150 : 50 : 4 で展開し
て、コレステロールエステルの放射活性を測定した。Ａ
ＣＡＴ活性の阻害率は以下の式にしたがって算出した。
ＡＣＡＴ阻害作用を説明する。 実験例 ＡＣＡＴ阻害作用 ２％コレステロール食を負荷した日本白色兎の肝よりMa
rco らの方法〔バイオキミカ・エト・バイオフィジカ・
アクタ (Biochimm. Biophys. Acta.),875, 599-604, 19
86) に準じて調製したミクロゾーム画分 100μｇ、2mM
ジチオスレイトール、25μM 牛血清アルブミン (BSA)、
50μM 〔14Ｃ〕オレオイルコエンザイムＡおよび薬剤
（メタノール溶液）からなる反応液（液量 200μl)を37
℃で45分反応させ、非標識コレステロールオレイン酸エ
ステルを含むクロロホルム−メタノール（２：１， v／
v)溶液 4mlを加えて反応を止めた。水0.８mlを加えてよ
く攪拌した後、遠心して２相に分離した。クロロホルム
層を減圧乾固した後、ＴＬＣにスポットし、ｎ−ヘキサ
ン：ジエチルエーテル：酢酸＝ 150 : 50 : 4 で展開し
て、コレステロールエステルの放射活性を測定した。Ａ
ＣＡＴ活性の阻害率は以下の式にしたがって算出した。
【００３５】
【数１】
【００３６】ＡＣＡＴの活性を50％阻害するＡＳ−１８
６類縁体の濃度（ＩＣ50) は、ＡＳ−１８６ｃ：8.７μ
ｇ／ml、ＡＳ−１８６ｄ：9.８μｇ／ml、ＡＳ−１８６
ｇ：１0.５μｇ／ml、ＡＳ−１８６ｄｘ：１2.６μｇ／
mlであった。以下に実施例を示す。
６類縁体の濃度（ＩＣ50) は、ＡＳ−１８６ｃ：8.７μ
ｇ／ml、ＡＳ−１８６ｄ：9.８μｇ／ml、ＡＳ−１８６
ｇ：１0.５μｇ／ml、ＡＳ−１８６ｄｘ：１2.６μｇ／
mlであった。以下に実施例を示す。
【００３７】
実施例１ ＡＳ−１８６ｃ，ｄ及びｇ 種菌としてペニシリウム・アスペロスポラム（Penicill
ium asperosporum)Ｃ−１８６を用いる。該菌株をＶ−
８ジュース（キャンベル社製）、２０％(v/v)およびデ
キストリン３％の組成の種培地50mlを含む 300ml三角フ
ラスコに植菌し、25℃で菌が十分生育するまで振盪培養
した。この種培養液５mlを、グルコース５ｇ／l 、マル
トース 40 ｇ／l 、ソイビーンミール 10 ｇ／l 、ソル
ブル・ベジタブル・プロテイン15ｇ／l 、イーストエキ
ストラクト 5ｇ／l 、硫酸マグネシウム・7H2O 0.5 ｇ
／l およびリン酸マグネシウム・8H2O 0.5ｇ／l からな
る組成の発酵培地(pH6.5) 50mlを含む 300ml三角フラス
コに植菌した。
ium asperosporum)Ｃ−１８６を用いる。該菌株をＶ−
８ジュース（キャンベル社製）、２０％(v/v)およびデ
キストリン３％の組成の種培地50mlを含む 300ml三角フ
ラスコに植菌し、25℃で菌が十分生育するまで振盪培養
した。この種培養液５mlを、グルコース５ｇ／l 、マル
トース 40 ｇ／l 、ソイビーンミール 10 ｇ／l 、ソル
ブル・ベジタブル・プロテイン15ｇ／l 、イーストエキ
ストラクト 5ｇ／l 、硫酸マグネシウム・7H2O 0.5 ｇ
／l およびリン酸マグネシウム・8H2O 0.5ｇ／l からな
る組成の発酵培地(pH6.5) 50mlを含む 300ml三角フラス
コに植菌した。
【００３８】発酵培養は、三角フラスコ 300本、15リッ
トルで行い、25℃でロータリーシェイカーを用いて５日
間行った。培養終了後、培養液１２リットルを遠心分離
し、上清液と菌体とに分けた。菌体には15リットルのメ
タノールを添加し十分攪拌し、ＡＳ−１８６類縁体の抽
出を行った。菌体のメタノール抽出液に４倍溶の水を加
え、あらかじめ水で平衡化したダイヤイオンＨＰ−２０
（三菱化成社製）２リットルを充填したカラムに通塔し
た。50% メタノール10リットルでカラムを洗浄した後、
メタノール10リットルでＡＳ−１８６類縁体を溶出し
た。溶出液は減圧下で濃縮した後、あらかじめｎ−ヘキ
サンで充填したシリカゲル（メルク社製、Art. 7734)カ
ラム２リットルに通塔した。 10%、20% 、40% アセトン
をそれぞれ含むn-ヘキサン各４リットルで順次展開し、
溶出液を20mlずつ分取すると、フラクション番号 296〜
350 にＡＳ−１８６類縁体が溶出された。これらのフラ
クションを集め減圧下で濃縮すると、黄色油状物質が約
250mg得られた。この油状物質を 100mg／mlとなるよう
メタノールに溶かし、20mg／200 μl ずつ12回に分けて
分取用高速液体クロマトグラフィーを行った。逆相Ｃ−
１８シリカゲルカラム（ワイエムシィ社製、ＹＭＣ Ｓ
Ｈ−３６３−１０，Ｓ−１０ １２０Ａ ＯＤＳ，φ30
×250mm)を用い、流速20ml／分で85% メタノール水溶液
を用いて展開し、UV280nm で検出される保持時間約11分
のピークを分取し、ＡＳ−１８６類縁体43mgが得られ
た。このサンプルを50mg／mlとなるようメタノールに溶
かし、10mg／200 μl ずつ４回に分けて分取用高速液体
クロマトグラフィーを行った。上述の逆相Ｃ−１８シリ
カゲルカラムを用い、流速20ml／分で85% アセトニトリ
ル水溶液を用いて展開し、UV280nm で検出される保持時
間が約25分、約27分、約29分のピークをそれぞれ分取
し、保持時間の短い順にＡＳ−１８６ｄが13.6mg、ＡＳ
−１８６ｃが13.7mg、ＡＳ−１８６ｇが 6.1mg得られ
た。
トルで行い、25℃でロータリーシェイカーを用いて５日
間行った。培養終了後、培養液１２リットルを遠心分離
し、上清液と菌体とに分けた。菌体には15リットルのメ
タノールを添加し十分攪拌し、ＡＳ−１８６類縁体の抽
出を行った。菌体のメタノール抽出液に４倍溶の水を加
え、あらかじめ水で平衡化したダイヤイオンＨＰ−２０
（三菱化成社製）２リットルを充填したカラムに通塔し
た。50% メタノール10リットルでカラムを洗浄した後、
メタノール10リットルでＡＳ−１８６類縁体を溶出し
た。溶出液は減圧下で濃縮した後、あらかじめｎ−ヘキ
サンで充填したシリカゲル（メルク社製、Art. 7734)カ
ラム２リットルに通塔した。 10%、20% 、40% アセトン
をそれぞれ含むn-ヘキサン各４リットルで順次展開し、
溶出液を20mlずつ分取すると、フラクション番号 296〜
350 にＡＳ−１８６類縁体が溶出された。これらのフラ
クションを集め減圧下で濃縮すると、黄色油状物質が約
250mg得られた。この油状物質を 100mg／mlとなるよう
メタノールに溶かし、20mg／200 μl ずつ12回に分けて
分取用高速液体クロマトグラフィーを行った。逆相Ｃ−
１８シリカゲルカラム（ワイエムシィ社製、ＹＭＣ Ｓ
Ｈ−３６３−１０，Ｓ−１０ １２０Ａ ＯＤＳ，φ30
×250mm)を用い、流速20ml／分で85% メタノール水溶液
を用いて展開し、UV280nm で検出される保持時間約11分
のピークを分取し、ＡＳ−１８６類縁体43mgが得られ
た。このサンプルを50mg／mlとなるようメタノールに溶
かし、10mg／200 μl ずつ４回に分けて分取用高速液体
クロマトグラフィーを行った。上述の逆相Ｃ−１８シリ
カゲルカラムを用い、流速20ml／分で85% アセトニトリ
ル水溶液を用いて展開し、UV280nm で検出される保持時
間が約25分、約27分、約29分のピークをそれぞれ分取
し、保持時間の短い順にＡＳ−１８６ｄが13.6mg、ＡＳ
−１８６ｃが13.7mg、ＡＳ−１８６ｇが 6.1mg得られ
た。
【００３９】実施例２ ＡＳ−１８６ｄｘ 実施例１で得たＡＳ−１８６ｄ 7.0 mgをジメチルスル
ホキシド 0.5mlに溶解し、室温で３日間攪拌した。反応
混合物を凍結乾燥して得られる粗生成物を分取用高速液
体クロマトグラフィーで精製した。逆相Ｃ−１８シリカ
ゲルカラム（ワイエムシィ社製、YMC SH-343-5、S-5 1
20A ODS、φ20×250mm)を用い、流速10ml／分で70% ア
セトニトリル水溶液を用いて展開し、UV230nm で検出さ
れる保持時間約33分のピークを分取し、黄色粉末として
ＡＳ−１８６ｄｘを 2.8mg得た。
ホキシド 0.5mlに溶解し、室温で３日間攪拌した。反応
混合物を凍結乾燥して得られる粗生成物を分取用高速液
体クロマトグラフィーで精製した。逆相Ｃ−１８シリカ
ゲルカラム（ワイエムシィ社製、YMC SH-343-5、S-5 1
20A ODS、φ20×250mm)を用い、流速10ml／分で70% ア
セトニトリル水溶液を用いて展開し、UV230nm で検出さ
れる保持時間約33分のピークを分取し、黄色粉末として
ＡＳ−１８６ｄｘを 2.8mg得た。
【００４０】
【発明の効果】本発明により、ＡＣＡＴ阻害活性を有す
る生理活性物質ＡＳ−１８６類縁体を提供することがで
きる。
る生理活性物質ＡＳ−１８６類縁体を提供することがで
きる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 森下 芳知 大阪府豊中市西緑丘３−13−３ ヴェルデ 108 緑丘 301号 (72)発明者 川本 勲 神奈川県平塚市ふじみ野１−21−２ (72)発明者 松田 譲 東京都小金井市貫井南町１−22−７
Claims (1)
- 【請求項１】 式（Ｉ） 【化１】 〔式中、Ｒは式（II） 【化２】 式（III) 【化３】 または式（IV) 【化４】 を表わす。〕で表わされるＡＳ−１８６類縁体
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15672092A JPH061786A (ja) | 1992-06-16 | 1992-06-16 | 生理活性物質ａｓ−１８６類縁体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15672092A JPH061786A (ja) | 1992-06-16 | 1992-06-16 | 生理活性物質ａｓ−１８６類縁体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH061786A true JPH061786A (ja) | 1994-01-11 |
Family
ID=15633866
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15672092A Withdrawn JPH061786A (ja) | 1992-06-16 | 1992-06-16 | 生理活性物質ａｓ−１８６類縁体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH061786A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5923967A (en) * | 1995-11-17 | 1999-07-13 | Sharp Kabushiki Kaisha | Method for producing a thin film semiconductor device |
-
1992
- 1992-06-16 JP JP15672092A patent/JPH061786A/ja not_active Withdrawn
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5923967A (en) * | 1995-11-17 | 1999-07-13 | Sharp Kabushiki Kaisha | Method for producing a thin film semiconductor device |
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|---|---|---|---|
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