JPH06153992A - リパーゼ測定法 - Google Patents
リパーゼ測定法Info
- Publication number
- JPH06153992A JPH06153992A JP34122792A JP34122792A JPH06153992A JP H06153992 A JPH06153992 A JP H06153992A JP 34122792 A JP34122792 A JP 34122792A JP 34122792 A JP34122792 A JP 34122792A JP H06153992 A JPH06153992 A JP H06153992A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- lipase
- triglyceride
- substrate
- analysis
- pancreatic lipase
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
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- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】リパーゼ活性測定法に関し、とりわけ膵疾患の
指標として臨床検査分野において日常的に測定される体
液中の膵リパーゼ測定法を提供する。 【構成】基質にトリグリセライドを用い、膵リパーゼに
よりトリグリセライドから生成するジグリセライド及び
／又はモノグリセライドに、ジグリセライド及びモノグ
リセライドには作用するが、トリグリセライドには実質
的に作用せず、且つ至適pHが８付近にあり、生体成分及
び界面活性剤等により阻害を受けない部分グリセライド
リパーゼを用いることにより迅速・簡便で、正確性の高
い測定が可能である。
指標として臨床検査分野において日常的に測定される体
液中の膵リパーゼ測定法を提供する。 【構成】基質にトリグリセライドを用い、膵リパーゼに
よりトリグリセライドから生成するジグリセライド及び
／又はモノグリセライドに、ジグリセライド及びモノグ
リセライドには作用するが、トリグリセライドには実質
的に作用せず、且つ至適pHが８付近にあり、生体成分及
び界面活性剤等により阻害を受けない部分グリセライド
リパーゼを用いることにより迅速・簡便で、正確性の高
い測定が可能である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はリパーゼ活性測定法に関
し、とりわけ膵疾患の指標として臨床検査分野において
日常的に測定される体液中の膵リパーゼ測定法に関す
る。
し、とりわけ膵疾患の指標として臨床検査分野において
日常的に測定される体液中の膵リパーゼ測定法に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】リパーゼ活性測定法としては各種の方法
が知られており、例えば、乳化オリーブ油を基質にして
遊離した脂肪酸を滴定により求める方法や同じく乳化オ
リーブ油を基質にして基質の分解とともに減少する濁度
を測定する方法等がある。
が知られており、例えば、乳化オリーブ油を基質にして
遊離した脂肪酸を滴定により求める方法や同じく乳化オ
リーブ油を基質にして基質の分解とともに減少する濁度
を測定する方法等がある。
【０００３】更に基質にジグリセライドを用い、生成す
るモノグリセライドにモノグリセライドリパーゼを作用
させ、膵リパーゼ活性を測定する方法が報告されている
（特開昭63-245672)。
るモノグリセライドにモノグリセライドリパーゼを作用
させ、膵リパーゼ活性を測定する方法が報告されている
（特開昭63-245672)。
【０００４】さらに、基質にトリグリセライドを用い、
リパーゼによりトリグリセライドから生成するジグリセ
ライド又はモノグリセライドを部分グリセライドリパー
ゼにより測定する方法が報告されている（特開平2-1869
99）。
リパーゼによりトリグリセライドから生成するジグリセ
ライド又はモノグリセライドを部分グリセライドリパー
ゼにより測定する方法が報告されている（特開平2-1869
99）。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】乳化オリーブ油を基質
として用いる方法は、何れも操作性や正確性において優
れた方法とはいえない。また、ジグリセライドを基質と
して使用する方法はリパーゼ本来の基質であるトリグリ
セライドを用いていない点から、リパーゼ測定法として
は問題がある。
として用いる方法は、何れも操作性や正確性において優
れた方法とはいえない。また、ジグリセライドを基質と
して使用する方法はリパーゼ本来の基質であるトリグリ
セライドを用いていない点から、リパーゼ測定法として
は問題がある。
【０００６】これらの問題点を解決する手段として、特
開平2-186999の方法が開発された。しかしながら、この
方法は原理的には優れた方法であるが、使用しているジ
グリセライドリパーゼの至適pHが５付近であり、測定対
象である膵リパーゼの至適pH９付近とは大きく離れてい
る。更にこのジグリセライドリパーゼは血清に由来する
アルブミンや測定に使用する界面活性剤により阻害を受
ける欠点を有している。
開平2-186999の方法が開発された。しかしながら、この
方法は原理的には優れた方法であるが、使用しているジ
グリセライドリパーゼの至適pHが５付近であり、測定対
象である膵リパーゼの至適pH９付近とは大きく離れてい
る。更にこのジグリセライドリパーゼは血清に由来する
アルブミンや測定に使用する界面活性剤により阻害を受
ける欠点を有している。
【０００７】至適pHが７以上であるジグリセライドリパ
ーゼも報告されている（特開昭55-42532）が、本酵素は
トリグリセライドにも作用することから上記の測定法に
応用することはできない。
ーゼも報告されている（特開昭55-42532）が、本酵素は
トリグリセライドにも作用することから上記の測定法に
応用することはできない。
【０００８】本発明は、前述のリパーゼ測定法における
問題点を解決し、有用なリパーゼ測定法を提供するもの
である。即ち、膵リパーゼの最適基質であるトリグリセ
ライドを用い、更に膵リパーゼの最適pHであるpH８〜９
付近での測定を可能にした、膵リパーゼの活性測定法を
提供するものである。
問題点を解決し、有用なリパーゼ測定法を提供するもの
である。即ち、膵リパーゼの最適基質であるトリグリセ
ライドを用い、更に膵リパーゼの最適pHであるpH８〜９
付近での測定を可能にした、膵リパーゼの活性測定法を
提供するものである。
【０００９】
【課題を解決するための手段】トリグリセライドを基質
として、膵リパーゼにより生成されるジグリセライド及
び／又はモノグリセライドを部分グリセライドリパーゼ
により分解し、生成するグルセロール又は脂肪酸を定量
することにより膵リパーゼ活性を求める方法において、
膵リパーゼの至適pHとこの測定に供される酵素類の至適
pHが近似すること、又測定対象となる検体中の成分によ
り阻害されないことは測定上極めて重要な問題である。
として、膵リパーゼにより生成されるジグリセライド及
び／又はモノグリセライドを部分グリセライドリパーゼ
により分解し、生成するグルセロール又は脂肪酸を定量
することにより膵リパーゼ活性を求める方法において、
膵リパーゼの至適pHとこの測定に供される酵素類の至適
pHが近似すること、又測定対象となる検体中の成分によ
り阻害されないことは測定上極めて重要な問題である。
【００１０】本発明者らは、基質にトリグリセライドを
用い、膵リパーゼによりトリグリセライドから生成する
ジグリセライド及び／又はモノグリセライドをそれらに
作用する部分グリセライドリパーゼにより測定する方法
において、部分グリセライドリパーゼとしてジグリセラ
イド及びモノグリセライドには作用するが、トリグリセ
ライドには実質的に作用せず、且つ至適pHが８付近にあ
り、生体成分及び界面活性剤等により阻害を受けない部
分グリセライドリパーゼを用いることにより迅速・簡便
で、正確性の高い測定法を開発し本発明を完成した。
用い、膵リパーゼによりトリグリセライドから生成する
ジグリセライド及び／又はモノグリセライドをそれらに
作用する部分グリセライドリパーゼにより測定する方法
において、部分グリセライドリパーゼとしてジグリセラ
イド及びモノグリセライドには作用するが、トリグリセ
ライドには実質的に作用せず、且つ至適pHが８付近にあ
り、生体成分及び界面活性剤等により阻害を受けない部
分グリセライドリパーゼを用いることにより迅速・簡便
で、正確性の高い測定法を開発し本発明を完成した。
【００１１】即ち、本発明は基質としてトリグリセライ
ドを用い、膵リパーゼによって生成したモノグリセライ
ド及び／又はジグリセライドに部分グリセライドリパー
ゼを作用させ、生成するグリセロール又は脂肪酸を検出
する測定法に関する。
ドを用い、膵リパーゼによって生成したモノグリセライ
ド及び／又はジグリセライドに部分グリセライドリパー
ゼを作用させ、生成するグリセロール又は脂肪酸を検出
する測定法に関する。
【００１２】本発明において基質として用いられるトリ
グリセライドは、特に限定されることはないが、本来の
膵リパーゼの基質である長鎖脂肪酸のトリグリセライド
が望ましく、例えばオレイン酸、リノール酸、リノレン
酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ラウリン酸又はミリ
スチン酸等のトリグリセライドが好適に用いられる。
グリセライドは、特に限定されることはないが、本来の
膵リパーゼの基質である長鎖脂肪酸のトリグリセライド
が望ましく、例えばオレイン酸、リノール酸、リノレン
酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ラウリン酸又はミリ
スチン酸等のトリグリセライドが好適に用いられる。
【００１３】検出する試薬系としては生成したグリセロ
ール又は脂肪酸を検出するものであれば、いずれでもよ
い。例えば、生成したグリセロールを定量する方法とし
てはグリセロールキナーゼ、グリセロリン酸酸化酵素、
ペルオキシダーゼの作用によりキノン色素に導く方法、
グリセロール脱水素酵素によりNADからNADHに導く方法
等が挙げられる。
ール又は脂肪酸を検出するものであれば、いずれでもよ
い。例えば、生成したグリセロールを定量する方法とし
てはグリセロールキナーゼ、グリセロリン酸酸化酵素、
ペルオキシダーゼの作用によりキノン色素に導く方法、
グリセロール脱水素酵素によりNADからNADHに導く方法
等が挙げられる。
【００１４】又生成した脂肪酸を検出する方法としては
アシルCoA合成酵素、アシルCoA酸化酵素、ペルオキシダ
ーゼの作用によりキノン色素に導く方法等が挙げられ
る。
アシルCoA合成酵素、アシルCoA酸化酵素、ペルオキシダ
ーゼの作用によりキノン色素に導く方法等が挙げられ
る。
【００１５】部分グリセライドリパーゼとしては、pH７
〜10で最大活性を示し、トリグリセライドには実質的に
作用せず、生体成分及び界面活性剤等により阻害を受け
ないものであれば特に制限されることはない。例えば、
ＰＧＬ”アマノ”（商品名：天野製薬製 シュードモナ
ス属由来）が挙げられ、本酵素は至適pHが８付近であり
本発明に好適に利用できる。
〜10で最大活性を示し、トリグリセライドには実質的に
作用せず、生体成分及び界面活性剤等により阻害を受け
ないものであれば特に制限されることはない。例えば、
ＰＧＬ”アマノ”（商品名：天野製薬製 シュードモナ
ス属由来）が挙げられ、本酵素は至適pHが８付近であり
本発明に好適に利用できる。
【００１６】本発明における膵リパーゼの測定は図１に
記載の測定原理に基づいて実施される。即ち、部分グリ
セライドリパーゼにより遊離したグリセロール又は脂肪
酸を前述したような公知の反応系により定量することに
より膵リパーゼ活性を測定する。
記載の測定原理に基づいて実施される。即ち、部分グリ
セライドリパーゼにより遊離したグリセロール又は脂肪
酸を前述したような公知の反応系により定量することに
より膵リパーゼ活性を測定する。
【００１７】以下に、実施例、試験例にて本発明を具体
的に説明するが、本発明はこれらによって何等限定され
るものではない。
的に説明するが、本発明はこれらによって何等限定され
るものではない。
【００１８】試験例１ 試液： ４−アミノアンチピリン ２mM TOOS １mM ATP・２Na ２mM MgSo4・７H2O １mM グリセロリン酸オキシダーゼ 10単位／ml グリセロールキナーゼ １単位／ml ペルオキシダーゼ 2.5単位／ml トリリノレイン 0.2mM デオキシコール酸ナトリウム ４mM CaCl2 ５mM コリパーゼ ２μg／ml エマルゲン７０７ 0.1％ 部分グリセライドリパーゼ ２単位／ml 100mM トリス塩酸緩衝液（pH 8.0）
【００１９】試液 1.0mlを37℃に予備加温し、希釈した
膵リパーゼサンプル 0.02mlを加え混合し、波長555nmで
吸光度の増加量を求めた。結果は図２に示す如くリパー
ゼの希釈倍率と吸光度の増加量との間には直線関係が認
められた。
膵リパーゼサンプル 0.02mlを加え混合し、波長555nmで
吸光度の増加量を求めた。結果は図２に示す如くリパー
ゼの希釈倍率と吸光度の増加量との間には直線関係が認
められた。
【００２０】試験例２ 試液： NAD ４mM MgSo4・７H2O １mM グリセロールデヒドロゲナーゼ 10単位／ml ジヒドロキシアセトンキナーゼ １単位／ml トリリノレイン 0.2mM デオキシコール酸ナトリウム ４mM CaCl2 ５mM コリパーゼ ２μg／ml エマルゲン７０７ 0.1％ 部分グリセライドリパーゼ ２単位／ml 100mM トリス塩酸緩衝液（pH 8.5）
【００２１】試液 １mlを37℃に予備加温し、希釈した
膵リパーゼサンプル 0.02mlを加え混合し、波長340nmで
吸光度の増加量を求めた。結果は図３に示す如くリパー
ゼの希釈倍率と吸光度の増加量との間には直線関係が認
められた。
膵リパーゼサンプル 0.02mlを加え混合し、波長340nmで
吸光度の増加量を求めた。結果は図３に示す如くリパー
ゼの希釈倍率と吸光度の増加量との間には直線関係が認
められた。
【００２２】
実施例１ 試験例１の試液 １mlを37℃にて予備加温し、ヒト血清
0.02mlを加え混合し、波長555nmで吸光度の増加量を求
めた。
0.02mlを加え混合し、波長555nmで吸光度の増加量を求
めた。
【００２３】同様にジグリセライドを基質に用いる市販
のリパーゼ測定試薬ネスコートリパーゼキットＶＥ（日
本商事製）を用いて測定を行った。その結果を表１に示
す。
のリパーゼ測定試薬ネスコートリパーゼキットＶＥ（日
本商事製）を用いて測定を行った。その結果を表１に示
す。
【００２４】
【表１】
【００２５】実施例２ 試験例２の試液 １mlを37℃にて予備加温し、ヒト血清
0.02mlを加え混合し、波長340nmで吸光度の増加量を求
めた。その結果を表２に示す。
0.02mlを加え混合し、波長340nmで吸光度の増加量を求
めた。その結果を表２に示す。
【００２６】
【表２】
【００２７】実施例１及び実施例２の結果より、本発明
のリパーゼ活性測定法は現在市販の膵リパーゼ測定試薬
による測定結果と良好な相関関係を有することが判る。
のリパーゼ活性測定法は現在市販の膵リパーゼ測定試薬
による測定結果と良好な相関関係を有することが判る。
【００２８】
【発明の効果】本発明により、膵リパーゼ本来の基質で
あるトリグリセライドを用い、至適pH付近で測定するこ
とが可能となり、迅速・簡便で、正確性の高い測定法が
提供される。
あるトリグリセライドを用い、至適pH付近で測定するこ
とが可能となり、迅速・簡便で、正確性の高い測定法が
提供される。
【図１】本発明の膵リパーゼ測定原理を示す。
【図２】試験例１におけるリパーゼの希釈倍率と吸光度
との関係を示す。
との関係を示す。
【図３】試験例２におけるリパーゼの希釈倍率と吸光度
との関係を示す。
との関係を示す。
Claims (1)
- 【請求項１】体液中のリパーゼ活性を測定する方法にお
いて、当該リパーゼをトリグリセライドに作用させ、生
成するジグリセライド及び／又はモノグリセライドに、
トリグリセライドには実質的に作用せず、至適pHが７以
上である部分グリセライドリパーゼを作用させることを
特徴とするリパーゼ測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP34122792A JPH06153992A (ja) | 1992-11-27 | 1992-11-27 | リパーゼ測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP34122792A JPH06153992A (ja) | 1992-11-27 | 1992-11-27 | リパーゼ測定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06153992A true JPH06153992A (ja) | 1994-06-03 |
Family
ID=18344369
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP34122792A Pending JPH06153992A (ja) | 1992-11-27 | 1992-11-27 | リパーゼ測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06153992A (ja) |
-
1992
- 1992-11-27 JP JP34122792A patent/JPH06153992A/ja active Pending
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