JPH06153955A - フコシルｓｓｅａ−１を認識する抗体の遺伝子断片等 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 キメラ型抗フコシルＳＳＥＡ−１抗体を作製
するために必要な、抗フコシルＳＳＥＡ−１抗体のＨ鎖
及びＬ鎖をコ−ドする遺伝子断片等を提供する。 【構成】 抗フコシルＳＳＥＡ−１抗体のＨ鎖又はＬ鎖
領域、これら領域をコ−ドする遺伝子断片、これら遺伝
子断片を含むベクタ−、これらベクタ−により形質転換
された宿主細胞及びこれら宿主細胞を培養することを特
徴とするキメラ型抗フコシルＳＳＥＡ−１抗体の製造方
法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明はフコシルＳＳＥＡ−１を
認識する抗体の遺伝子断片等に関するものであり、詳し
くはフコシルＳＳＥＡ−１を認識するマウス抗体のＨ鎖
及びＬ鎖のＶ領域をコ−ドする遺伝子等に関するもので
ある。

【０００２】

【従来の技術】胎児組織に特異的に発現されるＳＳＥＡ
−１抗原群は、ヒト癌組織にも見い出される癌関連抗原
である。ＳＳＥＡ−１抗原群は、Ｇａｌβ１→４（Ｆｕ
ｃα１→３）ＧｌｃＮＡｃβ１→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌ
ｃβ１→１Ｃｅｒを基本構造とする糖脂質の２型に位置
付けられる。ＳＳＥＡ−１抗原群のうち、末端のガラク
ト−スにフコ−スがα１→２で結合したものはフコシル
ＳＳＥＡ−１と呼ばれ、シアリルＳＳＥＡ−１等の他の
ＳＳＥＡ−１抗原群に比較して癌細胞表面に存在する頻
度が極めて高いことが知られており、これを特異的に認
識する抗体を使用した癌の診断薬や治療薬が期待されて
いる。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】フコシルＳＳＥＡ−１
を認識するマウスモノクロ−ナル抗体やこれを産生する
ハイブリド−マはすでに樹立されている（Hirashima
ら、J.Immunol.145 巻、 p224 、1990年）。しかし、マ
ウス由来抗体治療薬としてヒトに投与した場合、免疫応
答によるアナフィラキシ−の危険性が高くなったり、投
与した抗体が急速に分解を受けしまい、その本来の活性
が失われる等の課題がある。これを解決するにはヒト抗
体を使用すれば良いが、しかしながらヒトＢ細胞の集団
から目的とする抗体を産生するＢ細胞を単離し、これに
不死化能を与えて培養することは極めて難しい。

【０００４】最近、これらの問題を解決するためにキメ
ラ抗体が考案された。キメラ抗体とは、ヒト以外の動物
種由来の抗原結合領域すなわち可変領域（Ｖ領域）とヒ
ト由来の不変領域（Ｃ領域）から成る抗体（OiとMorris
on、Biotechnology 4巻、p214 、1986年）で、ヒト由
来のＣ領域は前記免疫応答を受けないため、前記課題を
解決し得るのである。このようなキメラ抗体を製造する
には、遺伝子工学的に抗体を製造することが必要にな
る。抗体のＶ領域を大腸菌で生産させる方法等が報告さ
れている（Wardら、Nature、341 巻、p544, 1989年）
が、キメラ型抗フコシルＳＳＥＡ−１抗体を作製するに
は、抗フコシルＳＳＥＡ−１抗体のＨ鎖及びＬ鎖をコ−
ドする遺伝子が必要である。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記課題
に鑑みてマウス由来抗フコシルＳＳＥＡ−１抗体のＨ鎖
又はＬ鎖の遺伝子について鋭意研究した結果、そのＶ領
域の遺伝子を見出し、前記課題を解決するに至った。即
ち本発明は、フコシルＳＳＥＡ−１を認識する抗体のＨ
鎖のＶ領域をコ−ドする遺伝子断片又はフコシルＳＳＥ
Ａ−１を認識する抗体のＬ鎖のＶ領域をコ−ドする遺伝
子断片である。また本発明は、前記遺伝子断片でコ−ド
されるフコシルＳＳＥＡ−１を認識する抗体のＨ鎖のＶ
領域であり、更には前記遺伝子断片でコ−ドされるフコ
シルＳＳＥＡ−１を認識する抗体のＬ鎖のＶ領域であ
る。

【０００６】また本発明は前記遺伝子断片の全部又は一
部を含み宿主細胞中でフコシルＳＳＥＡ−１を認識する
抗体のＨ鎖のＶ領域を発現させることができるベクタ−
であり、更には前記遺伝子断片の全部又は一部を含み宿
主細胞中でフコシルＳＳＥＡ−１を認識する抗体のＬ鎖
のＶ領域を発現させることができるベクタ−である。ま
た本発明は、前記遺伝子断片の全部又は一部、ヒト抗体
のＨ鎖のＣ領域をコ−ドする遺伝子断片及びヒト抗体の
Ｌ鎖のＣ領域をコ−ドする遺伝子断片を含み宿主細胞中
で該遺伝子断片を発現させることができるベクタ−であ
る。

【０００７】また本発明は、前記ベクタ−で形質転換さ
れた宿主細胞である。そして本発明は、この宿主細胞を
培養することを特徴とする、フコシルＳＳＥＡ−１を認
識する抗体のＨ鎖のＶ領域蛋白、フコシルＳＳＥＡ−１
を認識する抗体のＬ鎖のＶ領域蛋白、フコシルＳＳＥＡ
−１を認識する抗体のＨ鎖のＶ領域とヒト抗体のＨ鎖の
Ｃ領域のキメラ蛋白、フコシルＳＳＥＡ−１を認識する
抗体のＬ鎖のＶ領域とヒト抗体のＬ鎖のＣ領域のキメラ
蛋白又はフコシルＳＳＥＡ−１を認識する抗体のＶ領域
とヒト抗体のＣ領域のキメラ抗体の製造方法である。以
下、本発明を詳細に説明する。

【０００８】本発明の抗フコシルＳＳＥＡ−１抗体の遺
伝子断片は、Ｈ鎖のＶ領域をコ−ドする遺伝子又はＬ鎖
のＶ領域をコ−ドする遺伝子であり、ぞれぞれ図１又は
図２で示されるものである。その一例として、配列番
号：１又は配列番号：２で示される塩基配列を有するも
のがある。本発明の遺伝子断片は、抗フコシルＳＳＥＡ
−１抗体を産生するハイブリド−マを出発材料にして例
えば実施例１に示す方法で単離することができる。また
配列番号：１又は配列番号：２の遺伝子断片について
は、例えばＤＮＡ合成機を使用することによって調製で
きる。なお、本発明の遺伝子断片は、１個又は複数個の
塩基が付加され、１個又は複数個の塩基が欠失し、ある
いは１個又は複数個の塩基が置換されていても良い。

【０００９】本発明のフコシルＳＳＥＡ−１を認識する
抗体（Ｖ領域）は、前記した遺伝子断片でコ−ドされる
ものであり、例えばそれぞれ配列番号：１又は配列番
号：２の遺伝子断片でコ−ドされるものが例示できる。
なお、当該抗体（Ｖ領域）は、１個又は複数個のアミノ
酸残基が付加され、１個又は複数個のアミノ酸残基が欠
失し、あるいは１個又は複数個のアミノ酸残基が置換さ
れていても良い。

【００１０】抗フコシルＳＳＥＡ−１抗体を遺伝子工学
的に製造するには、これをコ−ドする遺伝子を含むベク
タ−が必要である。本発明のベクタ−は、前記遺伝子断
片、例えば配列番号：１又は配列番号：２の遺伝子断片
の全部又は一部を含み、宿主細胞中で該遺伝子断片を発
現させることができるものである。該ベクタ−は、本発
明の遺伝子断片以外に遺伝子断片を発現（転写）させる
ためのプロモ−タ−／オペレ−タ−、遺伝子断片の発現
（転写）を終了させるためのタ−ミネ−タ−、宿主細胞
中での複製のための遺伝子等、公知の遺伝子配列を含ん
でいて良い。

【００１１】前記本発明のベクタ−に、ヒト抗体のＣ領
域をコ−ドする遺伝子断片を更に付加することにより、
マウス−ヒトキメラ抗体のＨ鎖又はＬ鎖を製造するため
のベクタ−とすることができる。この場合、ヒト抗体の
遺伝子断片については、そのＨ鎖Ｃ領域は本発明のＨ鎖
Ｖ領域にフレ−ムが一致した状態となるように、Ｌ鎖Ｃ
領域は本発明のＬ鎖Ｖ領域にフレ−ムが一致した状態と
なるように調製する。なお、ヒト抗体のＨ鎖又はＬ鎖の
Ｃ領域をコ−ドする遺伝子断片は広く知られている（例
えばKameyamaら、FEBS Lett.、244 巻、p301、 1989
年）。

【００１２】本発明のベクタ−のうち、抗フコシルＳＳ
ＥＡ−１マウス−ヒトキメラ抗体を製造するためのベク
タ−は、前記遺伝子断片の全部又は一部、例えば配列番
号：１の遺伝子断片の全部又は一部及び配列番号：２の
遺伝子断片の全部又は一部とヒト抗体のＨ鎖のＣ領域を
コ−ドする遺伝子断片更にヒト抗体のＬ鎖のＣ領域をコ
−ドする遺伝子断片を含み、宿主細胞中で該遺伝子断片
を発現させることができるベクタ−である。ここで、ヒ
ト抗体の遺伝子断片については、そのＨ鎖Ｃ領域はＨ鎖
Ｖ領域にフレ−ムが一致した状態になるように、Ｌ鎖Ｃ
領域はＨ鎖Ｖ領域にフレ−ムが一致した状態になるよう
にベクタ−を構築する。

【００１３】本発明のベクタ−の他の一例として、本発
明のＨ鎖Ｖ領域をコ−ドする遺伝子断片と本発明のＬ鎖
Ｖ領域をコ−ドする遺伝子断片を含むものも例示でき
る。このベクタ−によれば、Ｃ領域を含まない、Ｖ領域
のみからなる抗フコシルＳＳＥＡ−１抗体（Ｆｖ抗体）
が製造できる。

【００１４】本発明は、以上に説明したベクタ−で形質
転換した宿主細胞である。前記ベクタ−による宿主細胞
の形質転換は通常の方法に従えば良く、特に制限はな
い。例えばベクタ−が大腸菌を対象とするものであれば
大腸菌を宿主として使用すれば良いし、酵母を対象とす
るのであればそれを宿主として使用すれば良い。

【００１５】このようにして形質転換した宿主細胞を適
当な条件下で培養することで、種々の蛋白を製造するこ
とができる。本発明では、使用したベクタ−に応じて種
々の蛋白を製造できるが、前記した本発明のベクタ−を
選択して使用すれば、フコシルＳＳＥＡ−１を認識する
抗体のＨ鎖のＶ領域蛋白、フコシルＳＳＥＡ−１を認識
する抗体のＬ鎖のＶ領域蛋白、フコシルＳＳＥＡ−１を
認識する抗体のＨ鎖のＶ領域とヒト抗体のＨ鎖のＣ領域
のキメラ蛋白、フコシルＳＳＥＡ−１を認識する抗体の
Ｌ鎖のＶ領域とヒト抗体のＬ鎖のＣ領域のキメラ蛋白又
はフコシルＳＳＥＡ−１を認識する抗体のＶ領域とヒト
抗体のＣ領域のキメラ抗体等を製造することができる。
この他にも、フコシルＳＳＥＡ−１を認識する抗体のＨ
鎖及びＬ鎖のＶ領域からなる抗体蛋白も製造できる。

【００１６】

【実施例】以下に本発明を更に詳細に説明するために実
施例を記載するが、本発明はこれら実施例に限定される
ものではない。

【００１７】実施例 １．ＨＡ１８抗体遺伝子の単離 まず、以下の方法で抗フコシルＳＳＥＡ−１マウス抗体
を産生するハイブリド−マ（ＨＡ１８Ａ）のＤＮＡを調
製した。ＲＰＭＩ１６４０で培養した１×10⁸個のＨ１
８Ａ（Hirashima ら、J. Immunol. 、145 巻、p224、19
90年）をＰＢＳで洗浄後、グアニジンイソチオシアネ−
ト溶液に懸濁し、塩化セシウムの上に重層して、超遠心
にかけ、ＤＮＡ（上清）とＲＮＡ（沈殿）を分離した。
上清は透析後、プロテイナ−ゼ処理、ＲＮａｓｅ処理
後、通常の方法で除蛋白及び精製を行い、１０mgのＤＮ
Ａを精製した。沈殿からは、通常の方法で除蛋白及び精
製を行い、１mg のＲＮＡを精製した。

【００１８】次に、以下の方法でゲノミックライブラリ
−を作製した。制限酵素ＥｃｏＲＩで完全消化したＨ１
８ＡのＤＮＡ２μｇと、同じくＥｃｏＲＩで完全消化し
たλＤＡＳＨ ＩＩ（東洋紡製）１μｇを１昼夜４℃で
ライゲ−ションしたのち、インビトロパッケ−ジングキ
ット（東洋紡）のファ−ジイクストラスト１チュ−ブと
混合し、20℃で２時間保温した後、ＳＭバッファ−を４
００μｌ加え、ゲノミックライブラリ−を作製した。

【００１９】抗体遺伝子の単離は以下のように行った。
１昼夜培養した大腸菌Ｐ２３９２を１０００mlの０．２
％マルト−ス及び１０ｍＭ ＭｇＳＯ₄ を含むＴＢ培地
に接種し、ＯＤが０．５まで培養してから菌を集め、２
０ ml の１０ mM ＭｇＳＯ₄に懸濁した。次に１×１０
⁶ 個に相当するのライブラリ−を含むＳＭバッファ−と
Ｐ２３９２を等量混合し、３７℃で３０分間保温し、８
mM ＭｇＳＯ₄ を含むＴＢアガロ−スプレ−ト（直径１
５ cm ）１０枚にプレ−ティングし、１昼夜３７℃で保
温した。翌日各プレ−トにナイロンフィルタ−をのせて
２分間静地し、フィルタ−をはがした。次にフィルタ−
を０．５N ＮａＯＨ、１．５M ＮａＣｌに浸してアルカ
リ処理し、０．５M Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、
１．５MＮａＣｌに浸して中和し、０．２×ＳＳＣに浸
した後、風乾した。それからＪ_Hプロ−ブ（Maki R.
ら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA、77、2138-2142 、1980）
あるいはＪ_κプロ−ブ（Sakano H. ら、Nature、280 、
288-294 、1979）を用いてプラ−クハイブリダイゼ−シ
ョンを行いＪ_H プロ−ブにハイブリダイズするクロ−
ン、ＨＥ７、Ｊ_κプロ−ブにハイブリダイズするクロ−
ン、ＨＨγ３をそれぞれ単離した。これらのインサ−ト
ＤＮＡを単離し、サザンブロット解析により同定した結
果、Ｊ_H プロ−ブにハイブリダイズする断片は３ kbp、
Ｊ_κプロ−ブにハイブリダイズする断片は２．８ kbpで
あることがわかった。これをそれぞれｐＢＬＵＥｓｃｒ
ｉｐｔに挿入し、ｐＢＬＵＥ／ＨＥ７とｐＢＬＵＥ／Ｈ
Ｈγ３を作製した。さらにインサ−トＤＮＡの制限酵素
地図を作製し、単離した遺伝子断片が再配列した抗体遺
伝子であることを確認した。ｐＢＬＵＥ／ＨＥ７とｐＢ
ＬＵＥ／ＨＨγ３の制限酵素地図を図１及び図２に示
す。

【００２０】実施例２．Ｈ１８Ａ抗体遺伝子の塩基配列
の決定 実施例１に示す方法で単離したＨ１８Ａ抗体のＨ鎖のＶ
領域及びＬ鎖のＶ領域の塩基配列を以下の方法で決定し
た。

【００２１】ｐＢＬＵＥ／ＨＥ７とｐＢＬＵＥ／ＨＨγ
３をそれぞれ大腸菌ＭＶ１１８４株に導入したのち、該
大腸菌を培養し、常法により一本鎖ＤＮＡを調製し、シ
−クエンス用テンプレ−トとして用いた。シ−クエンス
はＳｅｑｕｅｎａｓｅ Ｖｅｒｓｉｏｎ２．０ ＤＮＡ
Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ Ｋｉｔ（ＴＯＹＯＢＯ製）を
用いて、Ｈ１８Ａ抗体のＨ鎖あるいはＬ鎖のＶ領域遺伝
子の塩基配列を決定した。

【００２２】ｐＢＬＵＥ／ＨＥ７に関する結果（Ｈ鎖の
Ｖ領域）を図３に、ｐＢＬＵＥ／ＨＨγ３に関する結果
（Ｌ鎖のＶ領域）を図４に示す。

【００２３】実施例３．Ｈ１８Ａマウス・ヒトキメラ抗
体の作製 ｐＢＬＵＥ／ＨＥ７とｐＢＬＵＥ／ＨＨγ３のインサ−
トＤＮＡをマウス・ヒトキメラ型Ｈ鎖発現ベクタ−ｐＳ
Ｖ２−ＨＧ１ｇｐｔ及びマウス・ヒトキメラ型Ｌ鎖発現
ベクタ−ｐＳＶ２−ＨＣκｎｅｏ（Kameyamaら、FEBS L
ett.、244 巻、p301、1989年）にそれぞれ導入し、ｐＳ
Ｖ２−ＨＧ１ｇｐｔ／ＨＥ７及びｐＳＶ２−ＨＣκｎｅ
ｏ／ＨＨγ３を作製した。

【００２４】細胞への発現プラスミドの導入は以下のよ
うに行った。ＲＰＭＩ１６４０培地を用いた通常の方法
で培養したＳＰ２／０細胞１×１０⁷ 個をＰＢＳで洗
い、あらかじめ４℃に冷却しておいたＰＢＳの０．４ m
l でサスペンドした。これに、ｐＳＶ２−ＨＧ１ｇｐｔ
／ＨＥ７及びｐＳＶ２−ＨＣκｎｅｏ／ＨＨγ３のそれ
ぞれ５０μｌをＰＢＳに溶解し、氷上で冷却した溶液を
混合し、１０分間氷上に置いた。それから、Ｇｅｎｅ
Ｐｕｌｓｅｒ（バイオラッド社製）を用いて３００Ｖ、
９６０マイクロファラッドの条件でパルスをかけた。さ
らに１０分間氷上に置いた後、培地で洗い、通常の培地
で培養した。３日後、培地を選択培地（通常の培地にさ
らに、０．２５ mg/mlのキサンチンと０．０２５mg/ml
のミコフェノ−ル酸を含む）に換えて９６穴プレ−トに
まいた。７日後、１４日後に培地を交換し、２１日後に
上清のキメラ抗体価を測定し、ポジティブなクロ−ンを
１２クロ−ン選んだ。最終的に最も発現量の多いクロ−
ンＨ１８Ａ−７を選んだ。

【００２５】キメラ抗体価のアッセイは以下のように行
った。抗ヒトＩｇＧ１をコ−トしたプレ−トを１％ＢＳ
Ａ，ＰＢＳでブロッキングし、これに培養上清を加え、
２時間以上室温で放置した。プレ−トを洗浄後、ＨＲＰ
結合抗ヒトＩｇκを加え、２時間以上室温で放置した。
最後にプレ−トを洗浄後、発色試薬（大日本製薬製）を
加え、発色の程度をイムノリ−ダ−で測定した。その結
果、Ｈ１８Ａ−７は培養上清中に約２０μg/mlのキメラ
抗体を産生していることがわかった。

【００２６】作製したキメラ抗体の、フコシルＳＳＥＡ
−１への結合性は以下のように行った。まず、ルイスＹ
糖脂質を５μg/mlのホスファチジルコリンと２．５μg/
mlのコレステロ−ルを含むエタノ−ルで１μg/mlに調製
し、各ウエルに２０μl ずつ分注して、３７℃のホット
プレ−ト上で乾燥させた。このようにして作製されたフ
コシルＳＳＥＡ−１プレ−トに検体を加え、２時間以上
室温で放置した。プレ−トを洗浄後、ＨＲＰ結合抗Ｉｇ
κを加え、２時間以上室温で放置した。最後にプレ−ト
を洗浄後、発色試薬（大日本製薬製）を加え、発色の程
度をイムノリ−ダ−で測定した。

【００２７】結果を図５に示す。第５図から明らかなよ
うに、Ｈ１８Ａ−７の培養上清中に含まれるキメラ抗体
は、フコシルＳＳＥＡ−１との結合性を保持している。

【００２８】

【発明の効果】本発明で提供される抗フコシルＳＳＥＡ
−１抗体Ｈ鎖及びＬ鎖のＶ領域をコ−ドする遺伝子、さ
らには該抗体を遺伝子工学的手法を用いて生産するため
の手段及び方法により、種々の付加機能を有した該抗体
を大量に生産することが可能である。これらは、フコシ
ルＳＳＥＡ−１の生理的役割の解析に重要であり、癌に
対する治療薬診断薬開発に大きな意義をもつものであ
る。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１はＨ１８Ａ、Ｈ鎖のＶ領域の制限酵素地図
を示すもので、Ｅ、Ｈ、Ｘ又はＥｎはそれぞれEcoRＩサ
イト、HindＩＩＩサイト、Xba Ｉサイト又はエンハンサ
−を示している。

【図２】図２はＨ１８Ａ、Ｌ鎖のＶ領域の制限酵素地図
を示すもので、Ｈ又はＸはそれぞれHindＩＩＩサイト又
はXba Ｉサイトを示している。

【図３】図３はＨ１８Ａ、Ｈ鎖のＶ領域の塩基配列と、
当該配列から推定されるＨ鎖Ｖ領域のアミノ酸配列を示
す。

【図４】図４はＨ１８Ａ、Ｌ鎖のＶ領域の塩基配列と、
当該配列から推定されるＬ鎖Ｖ領域のアミノ酸配列を示
す。

【図５】図５は、実施例３に示す方法でキメラ型Ｈ１８
Ａ（○）、マウス型Ｈ１８Ａ（●）の、フコシルＳＳＥ
Ａ−１との結合を調べた時のプレ−トの発色の状況を示
すものであり、縦軸は５００nmにおける吸光度を示し、
横軸はフコシルＳＳＥＡ−１の希釈度を示している。

【配列表】

配列番号：１ 配列の長さ：３５７ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：他の核酸 Ｈ鎖のＶ領域をコ−ドするＤＮ
Ａ 配列 GAA GTG AAA CTG GTG GAG TCT GGG GGA GGC TTA GTG CAG CCT GGA GGG 48 Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 TCC CTG AAA CTC TCC TGT GCA ACC TCT GGA TTC ACT TTC AGT GAC TAT 96 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 TAT ATG TAT TGG GTT CGC CAG ACT CCA GAG AAG AGG CCG GAG TGG GTC 144 Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Pro Glu Trp Val 35 40 45 GCA TAC ATT AGT AAT GGT GGT GAT ATC CCC TAT TAT CTA GAC ACT GTA 192 Ala Tyr Ile Ser Asn Gly Gly Asp Ile Pro Tyr Tyr Leu Asp Thr Val 50 55 60 AAG GGC CGA TTC ACC ATC TCC AGA GAC AAT GCC AAG AAC ACC CTG TAC 240 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 60 65 70 75 CTG CAA ATG AGC CGT CTG AAG TCT GAG GAC ACA GCC ATG TAT TAC TGT 288 Leu Gln Met Ser Arg Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 80 85 90 GCA AGA GGG AAG TAC GAC GGG GCC TGG TTT GCT TAC TGG GGC CAA GGG 336 Ala Arg Gly Lys Tyr Asp Gly Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 95 100 105 ACT CTG GTC ACT GTC TCT GCA 357 Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 110 配列番号：２ 配列の長さ：３３９ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：他の核酸 Ｌ鎖のＶ領域をコ−ドするＤＮ
Ａ 配列 GAT GTT TTG ATG ACC CAA ACT CCA CTC TCC CTG CCT GTC AGT CTT GGA 48 Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 GAT CAA GCC TCC ATC TCT TGC GGA TCT AGT CAG AGC ATT ATA CAT ACT 96 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Gly Ser Ser Gln Ser Ile Ile His Thr 20 25 30 AAT GGA AAC ACC TAT TTA GAA TGG TAC CTG CAG AAA CCA GGC CAG TCT 144 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 CCA AAG CTC CTG ATC TAC AAA GTT TCC AAC CGA TTT TCT GGG GTC CCA 192 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 GAC AGG TTC AGT GGC AGT GGA TCA GGG ACA GAT TTC ACA CTC AAG ATC 240 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 AGC AGA GTG GAG GCT GAG GAT CTG GGA GTT TAT TAC TGC TTT CAA GGT 288 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 TCA CAT GTT CCA TTC ACG TTC GGC TCG GGG ACA AAG TTG GAA ATA AAA 336 Ser His Val Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 CGT 339 Ａｒｇ

Claims (15)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 フコシルＳＳＥＡ−１を認識する抗体の
   Ｈ鎖のＶ領域をコ−ドする遺伝子断片。
2. 【請求項２】 配列番号：１で表される、請求項１に記
   載の遺伝子断片。
3. 【請求項３】 フコシルＳＳＥＡ−１を認識する抗体の
   Ｌ鎖のＶ領域をコ−ドする遺伝子断片。
4. 【請求項４】 配列番号：２で表される、請求項３に記
   載の遺伝子断片。
5. 【請求項５】 請求項１の遺伝子断片でコ−ドされるフ
   コシルＳＳＥＡ−１を認識する抗体のＨ鎖のＶ領域。
6. 【請求項６】 配列番号：１で表される、請求項５のフ
   コシルＳＳＥＡ−１を認識する抗体のＨ鎖のＶ領域。
7. 【請求項７】 請求項３の遺伝子断片でコ−ドされるフ
   コシルＳＳＥＡ−１を認識する抗体のＬ鎖のＶ領域。
8. 【請求項８】 配列番号：２で表される、請求項７のフ
   コシルＳＳＥＡ−１を認識する抗体のＬ鎖のＶ領域。
9. 【請求項９】 請求項１の遺伝子断片の全部又は一部を
   含み、宿主細胞中で該遺伝子断片を発現させることがで
   きるベクタ−。
10. 【請求項１０】 請求項３の遺伝子断片の全部又は一部
    を含み、宿主細胞中で該遺伝子断片を発現させることが
    できるベクタ−。
11. 【請求項１１】 更に、ヒト抗体のＨ鎖のＣ領域をコ−
    ドする遺伝子断片を含む請求項９に記載のベクタ−。
12. 【請求項１２】 更に、ヒト抗体のＬ鎖のＣ領域をコ−
    ドする遺伝子断片を含む請求項１０に記載のベクタ−。
13. 【請求項１３】 請求項１の遺伝子断片の全部又は一
    部、請求項３の遺伝子断片の全部又は一部、ヒト抗体の
    Ｈ鎖のＣ領域をコ−ドする遺伝子断片及びヒト抗体のＬ
    鎖のＣ領域をコ−ドする遺伝子断片を含み、宿主細胞中
    で該遺伝子断片を発現させることができるベクタ−。
14. 【請求項１４】 請求項９〜１３いずれかに記載のベク
    タ−で形質転換された宿主細胞。
15. 【請求項１５】 請求項１４に記載の宿主細胞を培養す
    ることを特徴とする、フコシルＳＳＥＡ−１を認識する
    抗体のＨ鎖のＶ領域蛋白、フコシルＳＳＥＡ−１を認識
    する抗体のＬ鎖のＶ領域蛋白、フコシルＳＳＥＡ−１を
    認識する抗体のＨ鎖のＶ領域とヒト抗体のＨ鎖のＣ領域
    のキメラ蛋白、フコシルＳＳＥＡ−１を認識する抗体の
    Ｌ鎖のＶ領域とヒト抗体のＬ鎖のＣ領域のキメラ蛋白又
    はフコシルＳＳＥＡ−１を認識する抗体のＶ領域とヒト
    抗体のＣ領域のキメラ抗体の製造方法。