JPH0920798A - ヒト抗ＨＢｓ抗体 - Google Patents
ヒト抗ＨＢｓ抗体Info
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- JPH0920798A JPH0920798A JP7174752A JP17475295A JPH0920798A JP H0920798 A JPH0920798 A JP H0920798A JP 7174752 A JP7174752 A JP 7174752A JP 17475295 A JP17475295 A JP 17475295A JP H0920798 A JPH0920798 A JP H0920798A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 ａｄｒ型ＨＢウイルスの感染によるＢ型肝炎
の発症予防に有効かつ人体への投与に安全なヒト抗ＨＢ
ｓモノクロ−ナル抗体製剤の提供を可能とする。 【構成】 Ｈ鎖可変領域のＣＤＲ−１のアミノ酸配列が
(Ser/Asp)-His-Gly-Met-HisかつＬ鎖可変領域のＣＤＲ
−２のアミノ酸配列がAla-Ala-Ser-Ser-Leu-Gln-Serで
あり、ａｄｒ型ＨＢｓ抗原に結合するヒトモノクロ−ナ
ル抗体。当該抗体は、ａｄｒ型ＨＢウイルスの感染によ
るＢ型肝炎の発症予防に使用しうる。ここで（）
は、（）内に記載されたアミノ酸のいずれか１つである
ことを表す。
の発症予防に有効かつ人体への投与に安全なヒト抗ＨＢ
ｓモノクロ−ナル抗体製剤の提供を可能とする。 【構成】 Ｈ鎖可変領域のＣＤＲ−１のアミノ酸配列が
(Ser/Asp)-His-Gly-Met-HisかつＬ鎖可変領域のＣＤＲ
−２のアミノ酸配列がAla-Ala-Ser-Ser-Leu-Gln-Serで
あり、ａｄｒ型ＨＢｓ抗原に結合するヒトモノクロ−ナ
ル抗体。当該抗体は、ａｄｒ型ＨＢウイルスの感染によ
るＢ型肝炎の発症予防に使用しうる。ここで（）
は、（）内に記載されたアミノ酸のいずれか１つである
ことを表す。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ＨＢｓ抗原に対するヒ
トモノクロ−ナル抗体に関し、特にａｄｒ型ＨＢウイル
スによるＢ型肝炎の発症予防に使用しうるヒトモノクロ
−ナル抗体に関する。
トモノクロ−ナル抗体に関し、特にａｄｒ型ＨＢウイル
スによるＢ型肝炎の発症予防に使用しうるヒトモノクロ
−ナル抗体に関する。
【０００２】
【従来の技術】ＨＢウイルスが感染すると、急性肝炎や
慢性肝炎、時には劇症肝炎などのＢ型肝炎が発症する。
慢性肝炎は肝硬変や肝癌に移行することが知られてお
り、劇症肝炎とともに生命に関わる疾患である。Ｂ型肝
炎の患者数は全世界的に増加の傾向にあり、日本を含む
アジア地域にも多くのウイルス感染者（キャリア−）が
存在する。Ｂ型肝炎の治療薬としてはインターフェロン
ーαなどが知られているが、血中のウイルス量が多い場
合には効果がない。このように有効な抗ウイルス剤が存
在しない現状では、発症を予防することは極めて重要で
あり、ワクチンや抗体による予防が注目されている。
慢性肝炎、時には劇症肝炎などのＢ型肝炎が発症する。
慢性肝炎は肝硬変や肝癌に移行することが知られてお
り、劇症肝炎とともに生命に関わる疾患である。Ｂ型肝
炎の患者数は全世界的に増加の傾向にあり、日本を含む
アジア地域にも多くのウイルス感染者（キャリア−）が
存在する。Ｂ型肝炎の治療薬としてはインターフェロン
ーαなどが知られているが、血中のウイルス量が多い場
合には効果がない。このように有効な抗ウイルス剤が存
在しない現状では、発症を予防することは極めて重要で
あり、ワクチンや抗体による予防が注目されている。
【０００３】抗体には、ワクチンに比べ、Ａ）投与後直
ちに効果が現れるので、針刺し事故などの緊急時にも有
効である、Ｂ）ワクチンに対する感受性の低い人や免疫
不全状態の人にも有効である、といったメリットがあ
る。実際にＨＢウイルスへの感染予防を目的としたヒト
イムノグロブリン製剤が商品化されている。またより安
全な抗体製剤として、ヒトモノクロ−ナル抗体が知られ
ている。モノクローナル抗体とは特定の抗原に結合する
単一種の抗体であり、ＨＢウイルスの表面蛋白質ＨＢｓ
抗原に対するヒトモノクロ−ナル抗体が報告されている
（ＷＯ９４／１１４９５号公開明細書、ＷＯ９３／２０
２０５号公開明細書、ＥＰ１７９４８３号公開明細
書）。ＨＢｓ抗原には、肝細胞への感染に必須な領域が
含まれており、抗ＨＢｓ抗体にはウイルスの感染阻害効
果が期待される。
ちに効果が現れるので、針刺し事故などの緊急時にも有
効である、Ｂ）ワクチンに対する感受性の低い人や免疫
不全状態の人にも有効である、といったメリットがあ
る。実際にＨＢウイルスへの感染予防を目的としたヒト
イムノグロブリン製剤が商品化されている。またより安
全な抗体製剤として、ヒトモノクロ−ナル抗体が知られ
ている。モノクローナル抗体とは特定の抗原に結合する
単一種の抗体であり、ＨＢウイルスの表面蛋白質ＨＢｓ
抗原に対するヒトモノクロ−ナル抗体が報告されている
（ＷＯ９４／１１４９５号公開明細書、ＷＯ９３／２０
２０５号公開明細書、ＥＰ１７９４８３号公開明細
書）。ＨＢｓ抗原には、肝細胞への感染に必須な領域が
含まれており、抗ＨＢｓ抗体にはウイルスの感染阻害効
果が期待される。
【０００４】ＨＢｓ抗原にはａｄｗ、ａｄｒ、ａｙｗ、
ａｙｒの４種の型が知られており、それに対応してＨＢ
ウイルスは４種に分類される。従ってＨＢｓを抗原とす
るモノクローナル抗体は、それぞれのウイルスのアミノ
酸配列に合わせたものである必要がある。日本を含むア
ジア地域でよく見つかるウイルスはａｄｒ型のウイルス
であるといわれている（ウイルス肝炎 辻孝夫、南江堂
（１９９３年））。上に示した先行技術において、抗原
となるＨＢｓの型を明確にし、その抗体はａｙｗ型、ａ
ｙｒ型、ａｄｗ型ＨＢｓに結合するものであるとの記載
がある（ＷＯ９４／１１４９５号公開明細書）。しか
し、ａｄｒ型ＨＢｓに結合することを明確にしたヒトモ
ノクロ−ナル抗体は未だ知られていない。
ａｙｒの４種の型が知られており、それに対応してＨＢ
ウイルスは４種に分類される。従ってＨＢｓを抗原とす
るモノクローナル抗体は、それぞれのウイルスのアミノ
酸配列に合わせたものである必要がある。日本を含むア
ジア地域でよく見つかるウイルスはａｄｒ型のウイルス
であるといわれている（ウイルス肝炎 辻孝夫、南江堂
（１９９３年））。上に示した先行技術において、抗原
となるＨＢｓの型を明確にし、その抗体はａｙｗ型、ａ
ｙｒ型、ａｄｗ型ＨＢｓに結合するものであるとの記載
がある（ＷＯ９４／１１４９５号公開明細書）。しか
し、ａｄｒ型ＨＢｓに結合することを明確にしたヒトモ
ノクロ−ナル抗体は未だ知られていない。
【０００５】抗原特異的抗体を遺伝子工学的に作製する
には抗原特異的な可変領域塩基配列及び定常領域遺伝子
の２つが必要である。定常領域遺伝子には少数のクラス
しかなく調製が容易であるが、Ｈ鎖Ｌ鎖の可変領域塩基
配列は極めて多様性が高く、目的とする可変領域塩基配
列の取得は従来非常に困難である。ヒト型の抗原特異的
なＨ鎖Ｌ鎖可変領域塩基配列のスクリ−ニング法として
ＷＯ９５／１５３９３号記載の方法は、ヒト末梢血Ｂリ
ンパ球から調製した抗体の可変領域塩基配列を用いて動
物細胞膜上に種々の膜結合型抗体を発現させ、標識抗原
との結合性を指標に特定の抗原特異的抗体を発現した細
胞を選別、分離して抗原特異的抗体の可変領域塩基配列
を取得するというものであり、以下この方法を膜結合型
抗体スクリ−ニング法と呼ぶ。
には抗原特異的な可変領域塩基配列及び定常領域遺伝子
の２つが必要である。定常領域遺伝子には少数のクラス
しかなく調製が容易であるが、Ｈ鎖Ｌ鎖の可変領域塩基
配列は極めて多様性が高く、目的とする可変領域塩基配
列の取得は従来非常に困難である。ヒト型の抗原特異的
なＨ鎖Ｌ鎖可変領域塩基配列のスクリ−ニング法として
ＷＯ９５／１５３９３号記載の方法は、ヒト末梢血Ｂリ
ンパ球から調製した抗体の可変領域塩基配列を用いて動
物細胞膜上に種々の膜結合型抗体を発現させ、標識抗原
との結合性を指標に特定の抗原特異的抗体を発現した細
胞を選別、分離して抗原特異的抗体の可変領域塩基配列
を取得するというものであり、以下この方法を膜結合型
抗体スクリ−ニング法と呼ぶ。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】上記のように、ａｄｒ
型ＨＢウイルスの感染予防を対象とするヒト抗ａｄｒ型
ＨＢｓモノクローナル抗体の開発が望まれている。
型ＨＢウイルスの感染予防を対象とするヒト抗ａｄｒ型
ＨＢｓモノクローナル抗体の開発が望まれている。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明の目的は、ａｄｒ
型ＨＢウイルスによって引き起こされるＢ型肝炎の感染
予防に有効であり、かつ人体への投与に際して安全なヒ
ト抗ＨＢｓモノクロ−ナル抗体製剤を提供することにあ
る。本発明者らは、この課題の解決法として、ａｄｒ型
ＨＢｓに結合するヒト抗ＨＢｓモノクロ−ナル抗体の可
変領域塩基配列を取得し、遺伝子組換え技術による製剤
製造を可能とすることを考えて鋭意研究を重ねた結果、
発明を完成した。
型ＨＢウイルスによって引き起こされるＢ型肝炎の感染
予防に有効であり、かつ人体への投与に際して安全なヒ
ト抗ＨＢｓモノクロ−ナル抗体製剤を提供することにあ
る。本発明者らは、この課題の解決法として、ａｄｒ型
ＨＢｓに結合するヒト抗ＨＢｓモノクロ−ナル抗体の可
変領域塩基配列を取得し、遺伝子組換え技術による製剤
製造を可能とすることを考えて鋭意研究を重ねた結果、
発明を完成した。
【０００８】本発明は、以下の構成から成る。 （１） 少なくとも下記の性質を特徴とするヒトモノク
ロ−ナル抗体。 （Ａ）Ｈ鎖可変領域のＣＤＲ−１が、式（１）で表され
るアミノ酸配列である。 (Ser/Asp)-His-Gly-Met-His （１） ここで（Ser/Asp ）は、セリンまたはアスパラギン酸の
いずれかであることを表す。 （Ｂ）Ｌ鎖可変領域のＣＤＲ−２が、式（２）で表され
るアミノ酸配列である。 Ala-Ala-Ser-Ser-Leu-Gln-Ser （２） （Ｃ）ａｄｒ型ＨＢｓ抗原に結合する。 （２） 上記構成（１）記載のヒトモノクロ−ナル抗体
において、Ｈ鎖可変領域のＣＤＲ−３が式（３）で表さ
れ、Ｌ鎖可変領域のＣＤＲ−３が、式（４）で表される
抗体。 Glu-Ala-Thr-Asp-Phe-Val-Val-Lys-Phe-Asp-Leu （３） Gln-Glu-Ser-Asn-Ser-Ile-Pro-Leu-Thr （４）
ロ−ナル抗体。 （Ａ）Ｈ鎖可変領域のＣＤＲ−１が、式（１）で表され
るアミノ酸配列である。 (Ser/Asp)-His-Gly-Met-His （１） ここで（Ser/Asp ）は、セリンまたはアスパラギン酸の
いずれかであることを表す。 （Ｂ）Ｌ鎖可変領域のＣＤＲ−２が、式（２）で表され
るアミノ酸配列である。 Ala-Ala-Ser-Ser-Leu-Gln-Ser （２） （Ｃ）ａｄｒ型ＨＢｓ抗原に結合する。 （２） 上記構成（１）記載のヒトモノクロ−ナル抗体
において、Ｈ鎖可変領域のＣＤＲ−３が式（３）で表さ
れ、Ｌ鎖可変領域のＣＤＲ−３が、式（４）で表される
抗体。 Glu-Ala-Thr-Asp-Phe-Val-Val-Lys-Phe-Asp-Leu （３） Gln-Glu-Ser-Asn-Ser-Ile-Pro-Leu-Thr （４）
【０００９】（３） 上記構成（２）記載のヒトモノク
ロ−ナル抗体において、そのＨ鎖可変領域のＣＤＲ−２
が、式（５）で表される抗体。 (Val/Leu)-Ile-Trp-(His/Ala)-Asp-Gly-(Thr/Ser)-Asn-
(Gln/Lys)-Tyr-Tyr-(Ala/Thr)-Asp-(Ser/Ala)-Val-(Lys
/Glu)-Gly （５） ここで（）は（）内に記載されたアミノ酸のいずれか１
つであることを表す。 （４） 上記構成（３）記載のヒトモノクロ−ナル抗体
において、そのＨ鎖可変領域のＣＤＲ−２が、式（６）
で表される抗体。 Val-Ile-Trp-Ala-Asp-Gly-Thr-Asn-Lys-Tyr-Tyr-Ala-As
p-Ala-Val-Lys-Gly（６） （５） 上記構成（３）記載のヒトモノクロ−ナル抗体
において、そのＬ鎖可変領域のＣＤＲ−１が、式（７）
で表される抗体。 Arg-Ala-Ser-Gln-(Ser/Asn/Thr)-Ile-(Ser/Asp/Gly)-(S
er/Arg/Asn)-(Tyr/His)-Leu-Asn （７） ここで（）は、（）内に記載されたアミノ酸のいずれか
１つであることを表す。
ロ−ナル抗体において、そのＨ鎖可変領域のＣＤＲ−２
が、式（５）で表される抗体。 (Val/Leu)-Ile-Trp-(His/Ala)-Asp-Gly-(Thr/Ser)-Asn-
(Gln/Lys)-Tyr-Tyr-(Ala/Thr)-Asp-(Ser/Ala)-Val-(Lys
/Glu)-Gly （５） ここで（）は（）内に記載されたアミノ酸のいずれか１
つであることを表す。 （４） 上記構成（３）記載のヒトモノクロ−ナル抗体
において、そのＨ鎖可変領域のＣＤＲ−２が、式（６）
で表される抗体。 Val-Ile-Trp-Ala-Asp-Gly-Thr-Asn-Lys-Tyr-Tyr-Ala-As
p-Ala-Val-Lys-Gly（６） （５） 上記構成（３）記載のヒトモノクロ−ナル抗体
において、そのＬ鎖可変領域のＣＤＲ−１が、式（７）
で表される抗体。 Arg-Ala-Ser-Gln-(Ser/Asn/Thr)-Ile-(Ser/Asp/Gly)-(S
er/Arg/Asn)-(Tyr/His)-Leu-Asn （７） ここで（）は、（）内に記載されたアミノ酸のいずれか
１つであることを表す。
【００１０】（６） 上記構成（４）記載のヒトモノク
ロ−ナル抗体において、そのＬ鎖可変領域のＣＤＲ−１
が、式（８）で表される抗体。 Arg-Ala-Ser-Gln-Ser-Ile-Ser-Ser-Tyr-Leu-Asn （８） （７） 少なくとも下記の性質を特徴とするヒトモノク
ロ−ナル抗体。 （Ａ）Ｈ鎖可変領域が配列表の配列番号１のアミノ酸３
位〜１１６位に記載された配列と本質的に同じ性能のア
ミノ酸配列を含む。 （Ｂ）Ｌ鎖可変領域が配列表の配列番号５のアミノ酸３
位〜１１１位に記載された配列と本質的に同じ性能のア
ミノ酸配列を含む。 （Ｃ）ａｄｒ型ＨＢｓ抗原に結合する。
ロ−ナル抗体において、そのＬ鎖可変領域のＣＤＲ−１
が、式（８）で表される抗体。 Arg-Ala-Ser-Gln-Ser-Ile-Ser-Ser-Tyr-Leu-Asn （８） （７） 少なくとも下記の性質を特徴とするヒトモノク
ロ−ナル抗体。 （Ａ）Ｈ鎖可変領域が配列表の配列番号１のアミノ酸３
位〜１１６位に記載された配列と本質的に同じ性能のア
ミノ酸配列を含む。 （Ｂ）Ｌ鎖可変領域が配列表の配列番号５のアミノ酸３
位〜１１１位に記載された配列と本質的に同じ性能のア
ミノ酸配列を含む。 （Ｃ）ａｄｒ型ＨＢｓ抗原に結合する。
【００１１】（８） 少なくとも下記の性質を特徴とす
るヒトモノクロ−ナル抗体。 （Ａ）Ｈ鎖可変領域が配列表の配列番号９のアミノ酸３
位〜１１６位に記載された配列と本質的に同じ性能のア
ミノ酸配列を含む。 （Ｂ）Ｌ鎖可変領域が配列表の配列番号１３のアミノ酸
３位〜１１１位に記載された配列と本質的に同じ性能の
アミノ酸配列を含む。 （Ｃ）ａｄｒ型ＨＢｓ抗原に結合する。
るヒトモノクロ−ナル抗体。 （Ａ）Ｈ鎖可変領域が配列表の配列番号９のアミノ酸３
位〜１１６位に記載された配列と本質的に同じ性能のア
ミノ酸配列を含む。 （Ｂ）Ｌ鎖可変領域が配列表の配列番号１３のアミノ酸
３位〜１１１位に記載された配列と本質的に同じ性能の
アミノ酸配列を含む。 （Ｃ）ａｄｒ型ＨＢｓ抗原に結合する。
【００１２】（９） 少なくとも下記の性質を特徴とす
るヒトモノクロ−ナル抗体。 （Ａ）Ｈ鎖可変領域が配列表の配列番号１７のアミノ酸
３位〜１１６位にに記載された配列と本質的に同じ性能
のアミノ酸配列を含む。 （Ｂ）Ｌ鎖可変領域が配列表の配列番号２１のアミノ酸
３位〜１１０位に記載された配列と本質的に同じ性能の
アミノ酸配列を含む。 （Ｃ）ａｄｒ型ＨＢｓ抗原に結合する。 （１０） 少なくとも下記の性質を特徴とするヒトモノ
クロ−ナル抗体。 （Ａ）Ｈ鎖可変領域が配列表の配列番号２５のアミノ酸
３位〜１１６位に記載された配列と本質的に同じ性能の
アミノ酸配列を含む。 （Ｂ）Ｌ鎖可変領域が配列表の配列番号２９のアミノ酸
３位〜１１１位に記載された配列と本質的に同じ性能の
アミノ酸配列を含む。 （Ｃ）ａｄｒ型ＨＢｓ抗原に結合する。
るヒトモノクロ−ナル抗体。 （Ａ）Ｈ鎖可変領域が配列表の配列番号１７のアミノ酸
３位〜１１６位にに記載された配列と本質的に同じ性能
のアミノ酸配列を含む。 （Ｂ）Ｌ鎖可変領域が配列表の配列番号２１のアミノ酸
３位〜１１０位に記載された配列と本質的に同じ性能の
アミノ酸配列を含む。 （Ｃ）ａｄｒ型ＨＢｓ抗原に結合する。 （１０） 少なくとも下記の性質を特徴とするヒトモノ
クロ−ナル抗体。 （Ａ）Ｈ鎖可変領域が配列表の配列番号２５のアミノ酸
３位〜１１６位に記載された配列と本質的に同じ性能の
アミノ酸配列を含む。 （Ｂ）Ｌ鎖可変領域が配列表の配列番号２９のアミノ酸
３位〜１１１位に記載された配列と本質的に同じ性能の
アミノ酸配列を含む。 （Ｃ）ａｄｒ型ＨＢｓ抗原に結合する。
【００１３】（１１）（Ａ）通商産業省工業技術院生命
工学工業技術研究所に寄託されたプラスミッドベクター
ｐＳＥαＨＢｓ＃１（ＦＥＲＭ Ｐー１４７１９）でコ
ードされる膜結合型抗体の分泌型と本質的に同じ性能の
アミノ酸配列を含み、（Ｂ）ａｄｒ型ＨＢｓ抗原に結合
する、ことを特徴とするヒトモノクロ−ナル抗体。（１
２）（Ａ）通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究
所に寄託されたプラスミッドベクターｐＳＥαＨＢｓ＃
２（ＦＥＲＭ Ｐ−１４７２０）でコードされる膜結合
型抗体の分泌型と本質的に同じ性能のアミノ酸配列を含
み、（Ｂ）ａｄｒ型ＨＢｓ抗原に結合する、ことを特徴
とするヒトモノクローナル抗体。
工学工業技術研究所に寄託されたプラスミッドベクター
ｐＳＥαＨＢｓ＃１（ＦＥＲＭ Ｐー１４７１９）でコ
ードされる膜結合型抗体の分泌型と本質的に同じ性能の
アミノ酸配列を含み、（Ｂ）ａｄｒ型ＨＢｓ抗原に結合
する、ことを特徴とするヒトモノクロ−ナル抗体。（１
２）（Ａ）通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究
所に寄託されたプラスミッドベクターｐＳＥαＨＢｓ＃
２（ＦＥＲＭ Ｐ−１４７２０）でコードされる膜結合
型抗体の分泌型と本質的に同じ性能のアミノ酸配列を含
み、（Ｂ）ａｄｒ型ＨＢｓ抗原に結合する、ことを特徴
とするヒトモノクローナル抗体。
【００１４】（１３）（Ａ）通商産業省工業技術院生命
工学工業技術研究所に寄託されたプラスミッドベクター
ｐＳＥαＨＢｓ＃１７（ＦＥＲＭ Ｐ−１４７２２）で
コードされる膜結合型抗体の分泌型と本質的に同じ性能
のアミノ酸配列を含み、（Ｂ）ａｄｒ型ＨＢｓ抗原に結
合する、ことを特徴とするヒトモノクローナル抗体。
（１４）（Ａ）通商産業省工業技術院生命工学工業技術
研究所に寄託されたプラスミッドベクターｐＳＥαＨＢ
ｓ＃３１（ＦＥＲＭ Ｐ−１４７２３）でコードされる
膜結合型抗体の分泌型と本質的に同じ性能のアミノ酸配
列を含み、（Ｂ）ａｄｒ型ＨＢｓ抗原に結合する、こと
を特徴とするヒトモノクローナル抗体。
工学工業技術研究所に寄託されたプラスミッドベクター
ｐＳＥαＨＢｓ＃１７（ＦＥＲＭ Ｐ−１４７２２）で
コードされる膜結合型抗体の分泌型と本質的に同じ性能
のアミノ酸配列を含み、（Ｂ）ａｄｒ型ＨＢｓ抗原に結
合する、ことを特徴とするヒトモノクローナル抗体。
（１４）（Ａ）通商産業省工業技術院生命工学工業技術
研究所に寄託されたプラスミッドベクターｐＳＥαＨＢ
ｓ＃３１（ＦＥＲＭ Ｐ−１４７２３）でコードされる
膜結合型抗体の分泌型と本質的に同じ性能のアミノ酸配
列を含み、（Ｂ）ａｄｒ型ＨＢｓ抗原に結合する、こと
を特徴とするヒトモノクローナル抗体。
【００１５】さらに本発明は、上記記載の本発明のヒト
モノクローナル抗体をコードする核酸からなる。さらに
また本発明は、上記記載の本発明のヒトモノクロ−ナル
抗体と医薬的に許容しうる担体とからなる医薬組成物を
提供する。抗体は大小２種類のポリペプチドからなり、
その大きい方の鎖を「Ｈ鎖」といい、小さい方の鎖を
「Ｌ鎖」という。また、それぞれの鎖はＮ末端側に存在
して抗原結合部位を形成する「可変領域」と、抗体のク
ラス別に一定の定常領域からなっている。可変領域は、
更に、特に抗原結合部位の形成に密接に関係している相
補性決定領域「ＣＤＲ」とその間に介在する枠組領域
（フレームワーク）に分けられる。ＣＤＲには、Ｈ鎖と
Ｌ鎖のそれぞれについて、Ｎ末端側から「ＣＤＲ−１」
「ＣＤＲ−２」「ＣＤＲ−３」と呼ばれる３つの領域が
存在することが知られている。図１にＩｇＧの構造模式
図を示す。
モノクローナル抗体をコードする核酸からなる。さらに
また本発明は、上記記載の本発明のヒトモノクロ−ナル
抗体と医薬的に許容しうる担体とからなる医薬組成物を
提供する。抗体は大小２種類のポリペプチドからなり、
その大きい方の鎖を「Ｈ鎖」といい、小さい方の鎖を
「Ｌ鎖」という。また、それぞれの鎖はＮ末端側に存在
して抗原結合部位を形成する「可変領域」と、抗体のク
ラス別に一定の定常領域からなっている。可変領域は、
更に、特に抗原結合部位の形成に密接に関係している相
補性決定領域「ＣＤＲ」とその間に介在する枠組領域
（フレームワーク）に分けられる。ＣＤＲには、Ｈ鎖と
Ｌ鎖のそれぞれについて、Ｎ末端側から「ＣＤＲ−１」
「ＣＤＲ−２」「ＣＤＲ−３」と呼ばれる３つの領域が
存在することが知られている。図１にＩｇＧの構造模式
図を示す。
【００１６】本発明でいう「ヒトモノクローナル抗体」
とは、完全な抗体の他に、Ｈ鎖とＬ鎖の可変領域の組み
合わせで形成される抗原結合部位を少なくとも１つ含む
Ｆａｂなどのような抗体の一部も指す。本発明でいう
「ａｄｒ型ＨＢｓ抗原」とは、組換えＤＮＡ技術を応用
して酵母に産生させたａｄｒ型のＢ型肝炎ウィルス表面
抗原をいう。本発明でいう「本質的に同じ性能」とは、
抗原分子上のエピトープ、抗原との結合力が実質上同じ
であることをいう。可変領域のフレームワークや定常領
域におけるアミノ酸置換は、しばしば本質的に同じ性能
の抗体を生成することが知られている。本発明でいう
「膜結合型抗体の分泌型」とは、細胞膜貫通領域を持ち
細胞表面上に保持される膜結合型抗体から細胞膜貫通領
域を除いた、細胞外に分泌される可溶性抗体をいう。
とは、完全な抗体の他に、Ｈ鎖とＬ鎖の可変領域の組み
合わせで形成される抗原結合部位を少なくとも１つ含む
Ｆａｂなどのような抗体の一部も指す。本発明でいう
「ａｄｒ型ＨＢｓ抗原」とは、組換えＤＮＡ技術を応用
して酵母に産生させたａｄｒ型のＢ型肝炎ウィルス表面
抗原をいう。本発明でいう「本質的に同じ性能」とは、
抗原分子上のエピトープ、抗原との結合力が実質上同じ
であることをいう。可変領域のフレームワークや定常領
域におけるアミノ酸置換は、しばしば本質的に同じ性能
の抗体を生成することが知られている。本発明でいう
「膜結合型抗体の分泌型」とは、細胞膜貫通領域を持ち
細胞表面上に保持される膜結合型抗体から細胞膜貫通領
域を除いた、細胞外に分泌される可溶性抗体をいう。
【００１７】本発明では、ａｄｒ型ＨＢｓを酵母で発現
させた遺伝子組換え体にビオチン標識したものを抗原と
して使用し、ＨＢｓ特異的ヒトモノクロ−ナル抗体の取
得を図った。膜結合型抗体スクリ−ニング法を採用する
ことによって、４種の抗ＨＢｓ抗体が得られ、その塩基
配列の比較解析によってＣＤＲ領域のアミノ酸配列に顕
著な特徴を見いだした。抗体の抗原特異性と抗原への結
合の強さが、主にＣＤＲのアミノ酸配列によって決定さ
れることはマウス抗体のヒト化で示されている（Ｇｕｓ
ｓｏｗ，Ｄ． ａｎｄ Ｓｅｅｍａｎｎ，Ｇ．，Ｍｅｔ
ｈｏｄｓ ｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２０３：９９−
１２１（１９９１）；Ｇｌａｓｅｒ，Ｓ．Ｍ． ｅｔ
ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １４９：２６０７
−２６１４（１９９２））。
させた遺伝子組換え体にビオチン標識したものを抗原と
して使用し、ＨＢｓ特異的ヒトモノクロ−ナル抗体の取
得を図った。膜結合型抗体スクリ−ニング法を採用する
ことによって、４種の抗ＨＢｓ抗体が得られ、その塩基
配列の比較解析によってＣＤＲ領域のアミノ酸配列に顕
著な特徴を見いだした。抗体の抗原特異性と抗原への結
合の強さが、主にＣＤＲのアミノ酸配列によって決定さ
れることはマウス抗体のヒト化で示されている（Ｇｕｓ
ｓｏｗ，Ｄ． ａｎｄ Ｓｅｅｍａｎｎ，Ｇ．，Ｍｅｔ
ｈｏｄｓ ｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２０３：９９−
１２１（１９９１）；Ｇｌａｓｅｒ，Ｓ．Ｍ． ｅｔ
ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １４９：２６０７
−２６１４（１９９２））。
【００１８】ヒト抗ＨＢｓ抗体可変領域塩基配列の取得
とその塩基配列の解析は、実施例１記載の方法で可能で
ある。ＨＢウイルスの感染予防に用いる抗体の持つべき
性質の１つとして、ＨＢｓ抗原への結合活性が強いこと
があげられる。膜結合型抗体スクリ−ニング法の原理に
基づくと、抗原結合活性の高い抗原特異的抗体を取得す
るためには次のような工夫をするのが望ましい。１つ
は、血中の抗ＨＢｓ抗体価が高い人を供血者とするこ
と、１つはスクリ−ニングの条件をより厳しくするこ
と、１つは得られたＨ鎖Ｌ鎖可変領域塩基配列を基にし
て、より抗原結合活性が高くなるようなＨ鎖Ｌ鎖可変領
域塩基配列の組合わせを再び選ぶ（ＣｈａｉｎＳｈｕｆ
ｆｌｉｎｇ）（Ｋａｎｇ，Ａ．Ｓ．，Ｊｏｎｅｓ，Ｔ．
Ｍ．，ａｎｄＢｕｒｔｏｎ，Ｄ．Ｒ．（１９９１）；Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８，
１１１２０−１１１２３．）ことであるが、本発明では
供血者の選定を重視することにした。
とその塩基配列の解析は、実施例１記載の方法で可能で
ある。ＨＢウイルスの感染予防に用いる抗体の持つべき
性質の１つとして、ＨＢｓ抗原への結合活性が強いこと
があげられる。膜結合型抗体スクリ−ニング法の原理に
基づくと、抗原結合活性の高い抗原特異的抗体を取得す
るためには次のような工夫をするのが望ましい。１つ
は、血中の抗ＨＢｓ抗体価が高い人を供血者とするこ
と、１つはスクリ−ニングの条件をより厳しくするこ
と、１つは得られたＨ鎖Ｌ鎖可変領域塩基配列を基にし
て、より抗原結合活性が高くなるようなＨ鎖Ｌ鎖可変領
域塩基配列の組合わせを再び選ぶ（ＣｈａｉｎＳｈｕｆ
ｆｌｉｎｇ）（Ｋａｎｇ，Ａ．Ｓ．，Ｊｏｎｅｓ，Ｔ．
Ｍ．，ａｎｄＢｕｒｔｏｎ，Ｄ．Ｒ．（１９９１）；Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８，
１１１２０−１１１２３．）ことであるが、本発明では
供血者の選定を重視することにした。
【００１９】接種前既に有意な血中抗ＨＢｓ抗体価を持
っていた３人のボランティアに、Ｂ型肝炎ワクチン接種
を追加して行い、血中抗ＨＢｓ抗体価が最も高くなった
人を供血者に選定した。膜結合型抗体スクリ−ニング法
の詳細は、ＷＯ９５／１５３９３号公開明細書に記載さ
れており、このプロセスは大別してリンパ球を含む末梢
血単核球画分の調製、単核球由来ｃＤＮＡの調製、ＰＣ
Ｒによるヒト抗体可変領域塩基配列の調製、膜結合型ヒ
ト抗体発現ＣＯＳ７細胞ライブラリ−の作製、フロ−サ
イトメ−タ−による選別、選別細胞からのプラスミド回
収（Ｈｉｒｔ法）という６つのステップからなってい
る。前３者の実験操作はＷＯ９５／１５３９３号公開明
細書の実施例７，後３者の実験操作は同明細書の実施例
８の記載に従って行なうことが可能である。フロ−サイ
トメ−タ−による選別を３回行って得られたプラスミド
ｐＳＥｈＶＨＢｓを大腸菌ＤＨ５へ組み込み、出現した
コロニ−の約８割に相当する７９個のクロ−ンからそれ
ぞれプラスミドＤＮＡを単離後ＣＯＳ７細胞へ導入し
て、ヒト抗体の発現とＨＢｓ抗原への結合を調べた。抗
ＨＢｓ抗体を発現するクロ−ンは７９個中５８個存在し
ており、ＨＢｓとは結合しないヒト抗体を発現するクロ
−ンが２個得られた。
っていた３人のボランティアに、Ｂ型肝炎ワクチン接種
を追加して行い、血中抗ＨＢｓ抗体価が最も高くなった
人を供血者に選定した。膜結合型抗体スクリ−ニング法
の詳細は、ＷＯ９５／１５３９３号公開明細書に記載さ
れており、このプロセスは大別してリンパ球を含む末梢
血単核球画分の調製、単核球由来ｃＤＮＡの調製、ＰＣ
Ｒによるヒト抗体可変領域塩基配列の調製、膜結合型ヒ
ト抗体発現ＣＯＳ７細胞ライブラリ−の作製、フロ−サ
イトメ−タ−による選別、選別細胞からのプラスミド回
収（Ｈｉｒｔ法）という６つのステップからなってい
る。前３者の実験操作はＷＯ９５／１５３９３号公開明
細書の実施例７，後３者の実験操作は同明細書の実施例
８の記載に従って行なうことが可能である。フロ−サイ
トメ−タ−による選別を３回行って得られたプラスミド
ｐＳＥｈＶＨＢｓを大腸菌ＤＨ５へ組み込み、出現した
コロニ−の約８割に相当する７９個のクロ−ンからそれ
ぞれプラスミドＤＮＡを単離後ＣＯＳ７細胞へ導入し
て、ヒト抗体の発現とＨＢｓ抗原への結合を調べた。抗
ＨＢｓ抗体を発現するクロ−ンは７９個中５８個存在し
ており、ＨＢｓとは結合しないヒト抗体を発現するクロ
−ンが２個得られた。
【００２０】抗ＨＢｓ抗体５８クロ−ンのうち３３クロ
−ンのＨ鎖Ｌ鎖可変領域塩基配列を調べたところ、これ
らは４種に分類され、特定の制限酵素切断部位の有無か
ら識別が可能であることがわかった。（ｐＳＥ αＨＢ
ｓ＃１、ｐＳＥ αＨＢｓ＃２、ｐＳＥ αＨＢｓ＃１
７、ｐＳＥ αＨＢｓ＃３１）。残る２５個のクロ−ン
の上記制限酵素による切断パタ−ンは全てこの４種のう
ちのいずれかに分類された。これら４種のクロ−ンのＨ
鎖Ｌ鎖ＣＤＲ領域アミノ酸配列の比較により、Ｈ鎖ＣＤ
Ｒ−１及びＬ鎖ＣＤＲ−２にクロ−ン間で相同性の高い
アミノ酸配列が存在することを見いだした。ＣＤＲ領域
は抗体と抗原の結合に重要な領域であり、該ＣＤＲ領域
にこのコンセンサス配列を有するＨ鎖とＬ鎖を持つこと
がａｄｒ型ＨＢｓ抗原への結合に必須であることが示さ
れた。
−ンのＨ鎖Ｌ鎖可変領域塩基配列を調べたところ、これ
らは４種に分類され、特定の制限酵素切断部位の有無か
ら識別が可能であることがわかった。（ｐＳＥ αＨＢ
ｓ＃１、ｐＳＥ αＨＢｓ＃２、ｐＳＥ αＨＢｓ＃１
７、ｐＳＥ αＨＢｓ＃３１）。残る２５個のクロ−ン
の上記制限酵素による切断パタ−ンは全てこの４種のう
ちのいずれかに分類された。これら４種のクロ−ンのＨ
鎖Ｌ鎖ＣＤＲ領域アミノ酸配列の比較により、Ｈ鎖ＣＤ
Ｒ−１及びＬ鎖ＣＤＲ−２にクロ−ン間で相同性の高い
アミノ酸配列が存在することを見いだした。ＣＤＲ領域
は抗体と抗原の結合に重要な領域であり、該ＣＤＲ領域
にこのコンセンサス配列を有するＨ鎖とＬ鎖を持つこと
がａｄｒ型ＨＢｓ抗原への結合に必須であることが示さ
れた。
【００２１】本発明のヒトモノクローナル抗体を得るに
は、例えば実施例１で得られたクローンから得られたＨ
鎖及びＬ鎖可変領域塩基配列を分泌型抗体産生ベクター
へ組換え、ＣＯＳ７細胞を宿主とする発現生産を行うこ
とで可能である。ＣＯＳ７細胞による抗体の分泌発現に
は、種々のベクタ−が使用可能であるが（Ｗｈｉｔｔｌ
ｅ，Ｎ．ａｎｄ Ａｄａｉｒ，Ｊ． ｅｔ ａｌ．（１
９８７），Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．，１（６），４９
９−５０５．； Ｓｕｔｔｅｒ，Ｋ．Ｄ．ａｎｄ Ｆｅ
ｙｓ，Ｖ． ｅｔ ａｌ．（１９９２），Ｇｅｎｅ １
１３，２２３−３０．）、本発明では膜結合型抗体の発
現に用いたベクタ−ｐＳＥを母体としてＴＭを除去した
ベクタ−ｐＧ１を使用した。ｐＳＥとｐＧ１はＨ鎖Ｌ鎖
の可変領域塩基配列を含む領域が共通の配列となってい
るため、膜結合型抗体から分泌型抗体への変換が容易に
行える利点がある。その概略は、ｐＳＥのＬ鎖可変領域
の５’末端にあるＸｈｏＩ部位から、Ｈ鎖可変領域の
３’末端にあるＥｃｏＲＩ部位に至る断片を入れ換える
というものである。このようにして４種の分泌型抗ＨＢ
ｓ抗体発現プラスミド及びＨＢｓとは結合しないヒト抗
体の分泌発現プラスミドを作製した（ｐＧ１ αＨＢｓ
＃１、ｐＧ１ αＨＢｓ＃２、ｐＧ１ αＨＢｓ＃１
７、ｐＧ１ αＨＢｓ＃３１）。これらをＣＯＳ７細胞
へ組み込み、ヒト抗ＨＢｓ抗体および対照に用いる分泌
型ヒト抗体の生産を行える。
は、例えば実施例１で得られたクローンから得られたＨ
鎖及びＬ鎖可変領域塩基配列を分泌型抗体産生ベクター
へ組換え、ＣＯＳ７細胞を宿主とする発現生産を行うこ
とで可能である。ＣＯＳ７細胞による抗体の分泌発現に
は、種々のベクタ−が使用可能であるが（Ｗｈｉｔｔｌ
ｅ，Ｎ．ａｎｄ Ａｄａｉｒ，Ｊ． ｅｔ ａｌ．（１
９８７），Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．，１（６），４９
９−５０５．； Ｓｕｔｔｅｒ，Ｋ．Ｄ．ａｎｄ Ｆｅ
ｙｓ，Ｖ． ｅｔ ａｌ．（１９９２），Ｇｅｎｅ １
１３，２２３−３０．）、本発明では膜結合型抗体の発
現に用いたベクタ−ｐＳＥを母体としてＴＭを除去した
ベクタ−ｐＧ１を使用した。ｐＳＥとｐＧ１はＨ鎖Ｌ鎖
の可変領域塩基配列を含む領域が共通の配列となってい
るため、膜結合型抗体から分泌型抗体への変換が容易に
行える利点がある。その概略は、ｐＳＥのＬ鎖可変領域
の５’末端にあるＸｈｏＩ部位から、Ｈ鎖可変領域の
３’末端にあるＥｃｏＲＩ部位に至る断片を入れ換える
というものである。このようにして４種の分泌型抗ＨＢ
ｓ抗体発現プラスミド及びＨＢｓとは結合しないヒト抗
体の分泌発現プラスミドを作製した（ｐＧ１ αＨＢｓ
＃１、ｐＧ１ αＨＢｓ＃２、ｐＧ１ αＨＢｓ＃１
７、ｐＧ１ αＨＢｓ＃３１）。これらをＣＯＳ７細胞
へ組み込み、ヒト抗ＨＢｓ抗体および対照に用いる分泌
型ヒト抗体の生産を行える。
【００２２】ＣＯＳ７細胞は、通常１０％ウシ胎児血清
加Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌ
ｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ培地）を用い、５％Ｃ
Ｏ2存在下３７℃で培養する。ＣＯＳ７細胞への遺伝子
導入法や遺伝子導入後の細胞の育種生産法は、バイオマ
ニュアルシリ−ズ４ 遺伝子導入と発現・解析法；横田
祟、新井 賢一 羊土社（１９９４）等の実験書に記
載されている。ＣＯＳ７細胞への遺伝子導入法は、電気
穿孔法の他、 ＤＥＡＥデキストラン法（Ｂｅｂｂｉｎ
ｇｔｏｎ，Ｃ．Ｒ．（１９９１）； ＭＥＴＨＯＤＳ：
ＡＣｏｍｐａｎｉｏｎ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉ
ｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２（２），１３６−４
５．）であっても良い。本発明では、ｐＧ１に組み込ま
れた定常領域遺伝子がＣγ１であるため、各クロ−ンは
ＩｇＧ１として発現した。分泌型抗体の生産時には、血
清由来のウシ抗体の混入を避けるために、無血清のＤＭ
ＥＭ培地によって培養することが望ましい。こうして培
養上清中に分泌された抗ＨＢｓ抗体は、例えばプロテイ
ンＡやプロテインＧを用いる一般的なＩｇＧ抗体の精製
法によって容易に精製することができる。
加Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌ
ｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ培地）を用い、５％Ｃ
Ｏ2存在下３７℃で培養する。ＣＯＳ７細胞への遺伝子
導入法や遺伝子導入後の細胞の育種生産法は、バイオマ
ニュアルシリ−ズ４ 遺伝子導入と発現・解析法；横田
祟、新井 賢一 羊土社（１９９４）等の実験書に記
載されている。ＣＯＳ７細胞への遺伝子導入法は、電気
穿孔法の他、 ＤＥＡＥデキストラン法（Ｂｅｂｂｉｎ
ｇｔｏｎ，Ｃ．Ｒ．（１９９１）； ＭＥＴＨＯＤＳ：
ＡＣｏｍｐａｎｉｏｎ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉ
ｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２（２），１３６−４
５．）であっても良い。本発明では、ｐＧ１に組み込ま
れた定常領域遺伝子がＣγ１であるため、各クロ−ンは
ＩｇＧ１として発現した。分泌型抗体の生産時には、血
清由来のウシ抗体の混入を避けるために、無血清のＤＭ
ＥＭ培地によって培養することが望ましい。こうして培
養上清中に分泌された抗ＨＢｓ抗体は、例えばプロテイ
ンＡやプロテインＧを用いる一般的なＩｇＧ抗体の精製
法によって容易に精製することができる。
【００２３】抗ＨＢｓ抗体各クロ−ンの精製標品とＨＢ
ｓ抗原の結合は、ＨＢｓ抗原を固相化したプレ−トを用
いて調べることができる。ＨＢｓ抗原に結合しないヒト
抗体クロ−ンを対照として、４種の代表的な抗ＨＢｓ抗
体クロ−ンの抗原結合活性を比較した結果、全てのクロ
−ンに抗原結合活性が認められ、実施例１記載の事実が
確認された。より詳細には、各クロ−ンの抗原結合活性
はｐＧ１ αＨＢｓ＃２が最も高く、次いでｐＧ１ α
ＨＢｓ＃１、ｐＧ１ αＨＢｓ＃１７、ｐＧ１αＨＢｓ
＃３１の順となった。クロ−ン間での抗原結合活性の違
いは、クロ−ン間で最も相同性の低かったＨ鎖及びＬ鎖
のＣＤＲ−３領域のアミノ酸配列の違いを反映したもの
と考えられた。従ってＨＢｓ抗原に対する結合活性を持
つ抗体の特徴として、実施例１記載の特徴を有するＨ鎖
Ｌ鎖によって構成されるもの、より望ましくは実施例１
記載の特徴を有するＨ鎖Ｌ鎖によって構成され、かつＨ
鎖Ｌ鎖ＣＤＲ−３領域のアミノ酸配列がｐＧ１ αＨＢ
ｓ＃２の該当する配列に相同または同一な配列であるも
の、が挙げられる。
ｓ抗原の結合は、ＨＢｓ抗原を固相化したプレ−トを用
いて調べることができる。ＨＢｓ抗原に結合しないヒト
抗体クロ−ンを対照として、４種の代表的な抗ＨＢｓ抗
体クロ−ンの抗原結合活性を比較した結果、全てのクロ
−ンに抗原結合活性が認められ、実施例１記載の事実が
確認された。より詳細には、各クロ−ンの抗原結合活性
はｐＧ１ αＨＢｓ＃２が最も高く、次いでｐＧ１ α
ＨＢｓ＃１、ｐＧ１ αＨＢｓ＃１７、ｐＧ１αＨＢｓ
＃３１の順となった。クロ−ン間での抗原結合活性の違
いは、クロ−ン間で最も相同性の低かったＨ鎖及びＬ鎖
のＣＤＲ−３領域のアミノ酸配列の違いを反映したもの
と考えられた。従ってＨＢｓ抗原に対する結合活性を持
つ抗体の特徴として、実施例１記載の特徴を有するＨ鎖
Ｌ鎖によって構成されるもの、より望ましくは実施例１
記載の特徴を有するＨ鎖Ｌ鎖によって構成され、かつＨ
鎖Ｌ鎖ＣＤＲ−３領域のアミノ酸配列がｐＧ１ αＨＢ
ｓ＃２の該当する配列に相同または同一な配列であるも
の、が挙げられる。
【００２４】工業生産の場合の宿主としてはＣＨＯ細
胞、ミエロ−マＳｐ２／０細胞がよく知られている（Ｘ
ｉａｎｇ，Ｊ． ｅｔ ａｌ．（１９９０） Ｍｏｌ．
Ｉｍｍｕｎ．，２７，８０９； Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏ
ｎ，Ｃ．Ｒ． ｅｔ ａｌ．（１９９２） Ｂｉｏ／ｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０，１６９；Ｌａｒｒｉｃｋ，
Ｊ．Ｗ．ａｎｄ Ｗａｌｌａｃｅ，Ｅ．Ｆ． ｅｔ ａ
ｌ．（１９９２） Ｉｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．１３０，６
９−８５．； Ｄｅｙｅｖ，Ｓ．Ｍ．ａｎｄＬｉｅｂｅ
ｒ，Ａ． ｅｔ ａｌ．（１９９４） Ａｐｐｌ．Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．４７（２−３），
１４３−５４．）。例えばＣＨＯ細胞では、ＭＴＸ等の
薬剤により生産性の高いクロ−ンを選択する方法も報告
されており（Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ，Ｃ．Ｒ． （１９
９１） ＭＥＴＨＯＤＳ： ＡＣｏｍｐａｎｉｏｎ ｔ
ｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２
（２），１３６−４５．）、安定な高生産株が取得でき
れば、その株を組換え抗ＨＢｓ抗体の工業的生産に利用
できる。
胞、ミエロ−マＳｐ２／０細胞がよく知られている（Ｘ
ｉａｎｇ，Ｊ． ｅｔ ａｌ．（１９９０） Ｍｏｌ．
Ｉｍｍｕｎ．，２７，８０９； Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏ
ｎ，Ｃ．Ｒ． ｅｔ ａｌ．（１９９２） Ｂｉｏ／ｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０，１６９；Ｌａｒｒｉｃｋ，
Ｊ．Ｗ．ａｎｄ Ｗａｌｌａｃｅ，Ｅ．Ｆ． ｅｔ ａ
ｌ．（１９９２） Ｉｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．１３０，６
９−８５．； Ｄｅｙｅｖ，Ｓ．Ｍ．ａｎｄＬｉｅｂｅ
ｒ，Ａ． ｅｔ ａｌ．（１９９４） Ａｐｐｌ．Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．４７（２−３），
１４３−５４．）。例えばＣＨＯ細胞では、ＭＴＸ等の
薬剤により生産性の高いクロ−ンを選択する方法も報告
されており（Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ，Ｃ．Ｒ． （１９
９１） ＭＥＴＨＯＤＳ： ＡＣｏｍｐａｎｉｏｎ ｔ
ｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２
（２），１３６−４５．）、安定な高生産株が取得でき
れば、その株を組換え抗ＨＢｓ抗体の工業的生産に利用
できる。
【００２５】こうして得られた本発明の抗ＨＢｓ抗体
は、種々の形態の治療用製剤を提供する。例えば医薬的
に許容しうる成分組成の担体や安定化剤など人体への投
与に際し、該抗体の活性を保持させるために使用される
物質とともに医薬用組成物中に含まれていてもよい。医
薬的に許容しうるとは、悪心、目眩、吐き気等投与に伴
う望ましくない副作用、頻回投与時の製剤に対する免疫
応答などが起きないことを意味する。また、医薬的に許
容しうる適当な溶剤や希釈剤、安定化剤とともに溶解さ
れた液状の医薬用組成物でもよい。さらに上記の医薬組
成物に加えて生体内における濃度調節を目的とするミク
ロスフィア−、リポゾ−ム等の徐放移植体を含む医薬用
組成物であってもよい。
は、種々の形態の治療用製剤を提供する。例えば医薬的
に許容しうる成分組成の担体や安定化剤など人体への投
与に際し、該抗体の活性を保持させるために使用される
物質とともに医薬用組成物中に含まれていてもよい。医
薬的に許容しうるとは、悪心、目眩、吐き気等投与に伴
う望ましくない副作用、頻回投与時の製剤に対する免疫
応答などが起きないことを意味する。また、医薬的に許
容しうる適当な溶剤や希釈剤、安定化剤とともに溶解さ
れた液状の医薬用組成物でもよい。さらに上記の医薬組
成物に加えて生体内における濃度調節を目的とするミク
ロスフィア−、リポゾ−ム等の徐放移植体を含む医薬用
組成物であってもよい。
【００２６】
【実施例】以下、本発明の実施例を記述するが、これら
実施例は具体例により本発明を更に説明するものであっ
て、本発明を限定するものではない。
実施例は具体例により本発明を更に説明するものであっ
て、本発明を限定するものではない。
【００２７】
【実施例１】ａｄｒ型のＢ型肝炎ウィルス表面抗原（Ｈ
Ｂｓ）を組換えＤＮＡ技術によって酵母に産生させたＢ
型肝炎ワクチン「ビームゲン」（化学及血清療法研究所
製）を健常人のボランティア３人に投与し、ワクチン接
種６日後の血中の抗ＨＢｓ抗体価を調べた。抗体価の測
定はエス・ア−ル・エル（株）に測定を依頼した。この
３人はもともと有意な血中抗ＨＢｓ抗体価を持っていた
が、接種６日後に最も抗体価が高かった人を供血者とし
て選定した。
Ｂｓ）を組換えＤＮＡ技術によって酵母に産生させたＢ
型肝炎ワクチン「ビームゲン」（化学及血清療法研究所
製）を健常人のボランティア３人に投与し、ワクチン接
種６日後の血中の抗ＨＢｓ抗体価を調べた。抗体価の測
定はエス・ア−ル・エル（株）に測定を依頼した。この
３人はもともと有意な血中抗ＨＢｓ抗体価を持っていた
が、接種６日後に最も抗体価が高かった人を供血者とし
て選定した。
【００２８】ワクチン接種後６日後にこの供血者から採
取した末梢血をソ−スとして、以下膜結合型スクリ−ニ
ング法による抗ＨＢｓ抗体の可変領域塩基配列の取得を
行った。膜結合型抗体スクリ−ニング法の詳細は、ＷＯ
９５／１５３９３号公開明細書に記載されている。この
プロセスは大別してリンパ球を含む末梢血単核球画分の
調製、単核球由来ｃＤＮＡの調製、ＰＣＲによるヒト抗
体可変領域塩基配列の調製、膜結合型ヒト抗体発現ＣＯ
Ｓ７細胞ライブラリ−の作製、フロ−サイトメ−タ−に
よる選別、選別細胞からのプラスミド回収（Ｈｉｒｔ
法）という６つのステップからなっており、前３者の実
験操作はＷＯ９５／１５３９３号公開明細書の実施例
７，後３者の実験操作は同明細書の実施例８の記載に従
って行なった。本発明での結果の要点を記すと、１５０
ｍｌの末梢血から１．２ｘ１０７個の単核球を得てＨ鎖
Ｌ鎖の可変領域塩基配列を調製した。両可変領域塩基配
列を組み込んだヒト抗体可変領域プラスミドライブラリ
−（ｐＳＥｈＶｍｉｘ）は、約１．０ｘ１０７個の大腸
菌コロニーから調製した。ｐＳＥｈＶｍｉｘをＣＯＳ７
細胞へ導入して得られるライブラリ−をフロ−サイトメ
−タ−によって３回選別して抗ＨＢｓ抗体の可変領域塩
基配列を含むプラスミドを濃縮し、最終的にｐＳＥｈＶ
ＨＢｓを得た。
取した末梢血をソ−スとして、以下膜結合型スクリ−ニ
ング法による抗ＨＢｓ抗体の可変領域塩基配列の取得を
行った。膜結合型抗体スクリ−ニング法の詳細は、ＷＯ
９５／１５３９３号公開明細書に記載されている。この
プロセスは大別してリンパ球を含む末梢血単核球画分の
調製、単核球由来ｃＤＮＡの調製、ＰＣＲによるヒト抗
体可変領域塩基配列の調製、膜結合型ヒト抗体発現ＣＯ
Ｓ７細胞ライブラリ−の作製、フロ−サイトメ−タ−に
よる選別、選別細胞からのプラスミド回収（Ｈｉｒｔ
法）という６つのステップからなっており、前３者の実
験操作はＷＯ９５／１５３９３号公開明細書の実施例
７，後３者の実験操作は同明細書の実施例８の記載に従
って行なった。本発明での結果の要点を記すと、１５０
ｍｌの末梢血から１．２ｘ１０７個の単核球を得てＨ鎖
Ｌ鎖の可変領域塩基配列を調製した。両可変領域塩基配
列を組み込んだヒト抗体可変領域プラスミドライブラリ
−（ｐＳＥｈＶｍｉｘ）は、約１．０ｘ１０７個の大腸
菌コロニーから調製した。ｐＳＥｈＶｍｉｘをＣＯＳ７
細胞へ導入して得られるライブラリ−をフロ−サイトメ
−タ−によって３回選別して抗ＨＢｓ抗体の可変領域塩
基配列を含むプラスミドを濃縮し、最終的にｐＳＥｈＶ
ＨＢｓを得た。
【００２９】ｐＳＥｈＶＨＢｓを大腸菌ＤＨ５へ導入し
て出現したコロニ−１００個から７９個を単離してプラ
スミドＤＮＡを抽出精製した後、電気穿孔法によりＣＯ
Ｓ７細胞へ組み込み、膜結合型ヒト抗体の発現とビオチ
ン標識ｙＨＢｓとの結合を調べた。この実験操作はＷＯ
９５／１５３９３号公開明細書の実施例８の記載に従っ
て行なった。その結果、単離した７９個のうち５８個の
クロ−ンがヒト抗体を発現し、かつｙＨＢｓに結合し
た。また、２クロ−ンは膜結合型ヒト抗体は発現した
が、ｙＨＢｓには結合しなかった（ｐＳＥ＃３７，ｐＳ
Ｅ＃５３）。そこでｙＨＢｓに結合した５８クロ−ンの
うち３３クロ−ンについて、Ｈ鎖及びＬ鎖の可変領域塩
基配列を決定した。塩基配列の決定はＤＮＡ シークエ
ンサー Ｖｅｒ．１．２．０ ，Ｍｏｄｅｌ３７３Ａ
（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）を用い、
メーカーのプロトコールに従って行った。標識反応は、
Ｈ鎖はSEQHC （５’CTCTTGGAGGAGGGTGCCAG３’）を、κ
鎖はSEQLC （５’CCAGATTTCAACTGCTCATCAGA ３’）をプ
ライマーとして、ＰＲＩＳＭ Ｒｅａｄｙ Ｒｅａｃｔ
ｉｏｎ ＤｙｅＤｅｏｘｙ Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ Ｃ
ｙｃｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉ
ｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）を用い、方法は添付の
プロトコールに従った。
て出現したコロニ−１００個から７９個を単離してプラ
スミドＤＮＡを抽出精製した後、電気穿孔法によりＣＯ
Ｓ７細胞へ組み込み、膜結合型ヒト抗体の発現とビオチ
ン標識ｙＨＢｓとの結合を調べた。この実験操作はＷＯ
９５／１５３９３号公開明細書の実施例８の記載に従っ
て行なった。その結果、単離した７９個のうち５８個の
クロ−ンがヒト抗体を発現し、かつｙＨＢｓに結合し
た。また、２クロ−ンは膜結合型ヒト抗体は発現した
が、ｙＨＢｓには結合しなかった（ｐＳＥ＃３７，ｐＳ
Ｅ＃５３）。そこでｙＨＢｓに結合した５８クロ−ンの
うち３３クロ−ンについて、Ｈ鎖及びＬ鎖の可変領域塩
基配列を決定した。塩基配列の決定はＤＮＡ シークエ
ンサー Ｖｅｒ．１．２．０ ，Ｍｏｄｅｌ３７３Ａ
（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）を用い、
メーカーのプロトコールに従って行った。標識反応は、
Ｈ鎖はSEQHC （５’CTCTTGGAGGAGGGTGCCAG３’）を、κ
鎖はSEQLC （５’CCAGATTTCAACTGCTCATCAGA ３’）をプ
ライマーとして、ＰＲＩＳＭ Ｒｅａｄｙ Ｒｅａｃｔ
ｉｏｎ ＤｙｅＤｅｏｘｙ Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ Ｃ
ｙｃｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉ
ｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）を用い、方法は添付の
プロトコールに従った。
【００３０】塩基配列解析の結果、この３３クロ−ンは
４種に分類された。この４種のクロ−ンは制限酵素Ｓｐ
ｈＩ、ＳａｌＩ、ＮｃｏＩ、ＳｃａＩ、ＰｓｔＩの切断
部位の有無によって分類識別することが可能であった。 ・ｐＳＥ αＨＢｓ＃１（Ｈ鎖：配列番号１、Ｌ鎖：配
列番号５；通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究
所寄託 ＦＥＲＭ Ｐ−１４７１９）ＳｐｈＩ及びＮｃ
ｏＩによって切断される。 ・ｐＳＥ αＨＢｓ＃２（Ｈ鎖：配列番号９、Ｌ鎖：配
列番号１３；通商産業省工業技術院生命工学工業技術研
究所寄託 ＦＥＲＭ Ｐ−１４７２０）ＳｐｈＩ、Ｎｃ
ｏＩ、ＳａｌＩによって切断される。 ・ｐＳＥ αＨＢｓ＃１７（Ｈ鎖：配列番号１７、 Ｌ
鎖：配列番号２１；通商産業省工業技術院生命工学工業
技術研究所寄託 ＦＥＲＭ Ｐ−１４７２２）ＳｐｈＩ
及びＳｃａＩによって切断される。 ・ｐＳＥ αＨＢｓ＃３１（Ｈ鎖：配列番号２５、Ｌ
鎖：配列番号２９；通商産業省工業技術院生命工学工業
技術研究所寄託 ＦＥＲＭ Ｐ−１４７２３）ＳｐｈＩ
及びＰｓｔＩによって切断される。 ｙＨＢｓに結合するヒト抗体を発現した残る２５クロ−
ンを上記の制限酵素で分類したところ、全てのクロ−ン
がこの４種のいずれかと同じ切断パタ−ンを示したが、
ｙＨＢｓに結合しなかった２クロ−ンの上記制限酵素に
よる切断パタ−ンは、これらとは異なっていた。
４種に分類された。この４種のクロ−ンは制限酵素Ｓｐ
ｈＩ、ＳａｌＩ、ＮｃｏＩ、ＳｃａＩ、ＰｓｔＩの切断
部位の有無によって分類識別することが可能であった。 ・ｐＳＥ αＨＢｓ＃１（Ｈ鎖：配列番号１、Ｌ鎖：配
列番号５；通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究
所寄託 ＦＥＲＭ Ｐ−１４７１９）ＳｐｈＩ及びＮｃ
ｏＩによって切断される。 ・ｐＳＥ αＨＢｓ＃２（Ｈ鎖：配列番号９、Ｌ鎖：配
列番号１３；通商産業省工業技術院生命工学工業技術研
究所寄託 ＦＥＲＭ Ｐ−１４７２０）ＳｐｈＩ、Ｎｃ
ｏＩ、ＳａｌＩによって切断される。 ・ｐＳＥ αＨＢｓ＃１７（Ｈ鎖：配列番号１７、 Ｌ
鎖：配列番号２１；通商産業省工業技術院生命工学工業
技術研究所寄託 ＦＥＲＭ Ｐ−１４７２２）ＳｐｈＩ
及びＳｃａＩによって切断される。 ・ｐＳＥ αＨＢｓ＃３１（Ｈ鎖：配列番号２５、Ｌ
鎖：配列番号２９；通商産業省工業技術院生命工学工業
技術研究所寄託 ＦＥＲＭ Ｐ−１４７２３）ＳｐｈＩ
及びＰｓｔＩによって切断される。 ｙＨＢｓに結合するヒト抗体を発現した残る２５クロ−
ンを上記の制限酵素で分類したところ、全てのクロ−ン
がこの４種のいずれかと同じ切断パタ−ンを示したが、
ｙＨＢｓに結合しなかった２クロ−ンの上記制限酵素に
よる切断パタ−ンは、これらとは異なっていた。
【００３１】クロ−ンｐＳＥ αＨＢｓ＃１のＨ鎖ＣＤ
Ｒは順に以下のアミノ酸配列となっていた。ＣＤＲ−
１：Ser-His-Gly-Met-His （配列番号２）、ＣＤＲ−
２：Val-Ile-Trp-His-Asp-Gly-Thr-Asn-Gln-Tyr-Tyr-Th
r-Asp-Ser-Val-Glu-Gly （配列番号３）、ＣＤＲ３：Gl
u-Gly-Leu-Glu-Trp-Phe-Pro-Ile-Leu-Asp-Tyr （配列番
号４）。一方、Ｌ鎖ＣＤＲは順にＣＤＲ−１：Arg-Ala-
Ser-Gln-Ser-Ile-Ser-Ser-Tyr-Leu-Asn （配列番号
６）、ＣＤＲ−２：Ala-Ala-Ser-Ser-Leu-Gln-Ser （配
列番号７）、ＣＤＲ−３：Gln-Gln-Ser-Tyr-Ser-Thr-Pr
o-Arg-Thr （配列番号８）であった。
Ｒは順に以下のアミノ酸配列となっていた。ＣＤＲ−
１：Ser-His-Gly-Met-His （配列番号２）、ＣＤＲ−
２：Val-Ile-Trp-His-Asp-Gly-Thr-Asn-Gln-Tyr-Tyr-Th
r-Asp-Ser-Val-Glu-Gly （配列番号３）、ＣＤＲ３：Gl
u-Gly-Leu-Glu-Trp-Phe-Pro-Ile-Leu-Asp-Tyr （配列番
号４）。一方、Ｌ鎖ＣＤＲは順にＣＤＲ−１：Arg-Ala-
Ser-Gln-Ser-Ile-Ser-Ser-Tyr-Leu-Asn （配列番号
６）、ＣＤＲ−２：Ala-Ala-Ser-Ser-Leu-Gln-Ser （配
列番号７）、ＣＤＲ−３：Gln-Gln-Ser-Tyr-Ser-Thr-Pr
o-Arg-Thr （配列番号８）であった。
【００３２】クロ−ンｐＳＥ αＨＢｓ＃２のＨ鎖ＣＤ
Ｒは順に以下のアミノ酸配列となっていた。ＣＤＲ−
１： Asp-His-Gly-Met-His（配列番号１０）、ＣＤＲ−
２：Val-Ile-Trp-Ala-Asp-Gly-Thr-Asn-Lys-Tyr-Tyr-Al
a-Asp-Ala-Val-Lys-Gly （配列番号１１）、ＣＤＲ−
３：Glu-Ala-Thr-Asp-Phe-Val-Val-Lys-Phe-Asp-Leu
（配列番号１２）。一方、Ｌ鎖ＣＤＲは順にＣＤＲ−
１：Arg-Ala-Ser-Gln-Ser-Ile-Ser-Ser-Tyr-Leu-Asn
（配列番号１４）、ＣＤＲ−２：Ala-Ala-Ser-Ser-Leu-
Gln-Ser （配列番号１５）、ＣＤＲ−３：Gln-Glu-Ser-
Asn-Ser-Ile-Pro-Leu-Thr （配列番号１６）であった。
Ｒは順に以下のアミノ酸配列となっていた。ＣＤＲ−
１： Asp-His-Gly-Met-His（配列番号１０）、ＣＤＲ−
２：Val-Ile-Trp-Ala-Asp-Gly-Thr-Asn-Lys-Tyr-Tyr-Al
a-Asp-Ala-Val-Lys-Gly （配列番号１１）、ＣＤＲ−
３：Glu-Ala-Thr-Asp-Phe-Val-Val-Lys-Phe-Asp-Leu
（配列番号１２）。一方、Ｌ鎖ＣＤＲは順にＣＤＲ−
１：Arg-Ala-Ser-Gln-Ser-Ile-Ser-Ser-Tyr-Leu-Asn
（配列番号１４）、ＣＤＲ−２：Ala-Ala-Ser-Ser-Leu-
Gln-Ser （配列番号１５）、ＣＤＲ−３：Gln-Glu-Ser-
Asn-Ser-Ile-Pro-Leu-Thr （配列番号１６）であった。
【００３３】クロ−ンｐＳＥ αＨＢｓ＃１７のＨ鎖Ｃ
ＤＲは順に以下のアミノ酸配列となっていた。ＣＤＲ−
１：Ser-His-Gly-Met-His （配列番号１８）、ＣＤＲ−
２：Val-Ile-Trp-His-Asp-Gly-Ser-Asn-Lys-Tyr-Tyr-Al
a-Asp-Ser-Val-Lys-Gly （配列番号１９）、ＣＤＲ−
３：Glu-Ala-Leu-Leu-Leu-Trp-Thr-Ile-Phe-Asp-Ser
（配列番号２０）。一方、Ｌ鎖ＣＤＲは順にＣＤＲ−
１：Arg-Ala-Ser-Gln-Asn-Ile-Asp-Arg-Tyr-Leu-Asn
（配列番号２２）、ＣＤＲ−２：Ala-Ala-Ser-Ser-Leu-
Gln-Ser （配列番号２３）、ＣＤＲ−３：Gln-Gln-Ser-
Tyr-Ser-Ala-Leu-Thr （配列番号２４）であった。
ＤＲは順に以下のアミノ酸配列となっていた。ＣＤＲ−
１：Ser-His-Gly-Met-His （配列番号１８）、ＣＤＲ−
２：Val-Ile-Trp-His-Asp-Gly-Ser-Asn-Lys-Tyr-Tyr-Al
a-Asp-Ser-Val-Lys-Gly （配列番号１９）、ＣＤＲ−
３：Glu-Ala-Leu-Leu-Leu-Trp-Thr-Ile-Phe-Asp-Ser
（配列番号２０）。一方、Ｌ鎖ＣＤＲは順にＣＤＲ−
１：Arg-Ala-Ser-Gln-Asn-Ile-Asp-Arg-Tyr-Leu-Asn
（配列番号２２）、ＣＤＲ−２：Ala-Ala-Ser-Ser-Leu-
Gln-Ser （配列番号２３）、ＣＤＲ−３：Gln-Gln-Ser-
Tyr-Ser-Ala-Leu-Thr （配列番号２４）であった。
【００３４】クロ−ンｐＳＥ αＨＢｓ＃３１のＨ鎖Ｃ
ＤＲは順に以下のアミノ酸配列となっていた。ＣＤＲ−
１： Ser-His-Gly-Met-His（配列番号２６）、ＣＤＲ−
２：Leu-Ile-Trp-Ala-Asp-Gly-Thr-Asn-Lys-Tyr-Tyr-Al
a-Asp-Ser-Val-Lys-Gly（配列番号２７）、ＣＤＲ−
３：Glu-Glu-Leu-Thr-Leu-Val-Thr-Ala-Phe-Gly-Tyr
（配列番号２８）。一方、Ｌ鎖ＣＤＲは順に ＣＤＲ−
１：Arg-Ala-Ser-Gln-Thr-Ile-Gly-Asn-His-Leu-Asn
（配列番号３０）、ＣＤＲ−２： Ala-Ala-Ser-Ser-Leu
-Gln-Ser（配列番号３１）、ＣＤＲ−３：Gln-Gln-Ser-
Tyr-Asp-Thr-Pro-Arg-Thr （配列番号３２）。
ＤＲは順に以下のアミノ酸配列となっていた。ＣＤＲ−
１： Ser-His-Gly-Met-His（配列番号２６）、ＣＤＲ−
２：Leu-Ile-Trp-Ala-Asp-Gly-Thr-Asn-Lys-Tyr-Tyr-Al
a-Asp-Ser-Val-Lys-Gly（配列番号２７）、ＣＤＲ−
３：Glu-Glu-Leu-Thr-Leu-Val-Thr-Ala-Phe-Gly-Tyr
（配列番号２８）。一方、Ｌ鎖ＣＤＲは順に ＣＤＲ−
１：Arg-Ala-Ser-Gln-Thr-Ile-Gly-Asn-His-Leu-Asn
（配列番号３０）、ＣＤＲ−２： Ala-Ala-Ser-Ser-Leu
-Gln-Ser（配列番号３１）、ＣＤＲ−３：Gln-Gln-Ser-
Tyr-Asp-Thr-Pro-Arg-Thr （配列番号３２）。
【００３５】上記４種の抗ＨＢｓ抗体各クロ−ンのＣＤ
Ｒ領域のアミノ酸配列の比較から、Ｈ鎖ＣＤＲ−１、Ｌ
鎖ＣＤＲ−２にクロ−ン間で類似した配列が含まれてい
ることが明らかとなった。より詳細にはＨ鎖ＣＤＲ−１
のコンセンサス配列として式（１）（Asp/Ser)-His-Gly
-Met-His、Ｌ鎖ＣＤＲ−２のコンセンサス配列として式
（２） Ala-Ala-Ser-Ser-Leu-Gln-Serが導かれた。ＣＤ
Ｒ領域は抗原との結合に重要な部位であり、該ＣＤＲ領
域にこれらコンセンサス配列を含むＨ鎖Ｌ鎖を持つこと
がａｄｒ型ＨＢｓを抗原とする抗体に必須である。
Ｒ領域のアミノ酸配列の比較から、Ｈ鎖ＣＤＲ−１、Ｌ
鎖ＣＤＲ−２にクロ−ン間で類似した配列が含まれてい
ることが明らかとなった。より詳細にはＨ鎖ＣＤＲ−１
のコンセンサス配列として式（１）（Asp/Ser)-His-Gly
-Met-His、Ｌ鎖ＣＤＲ−２のコンセンサス配列として式
（２） Ala-Ala-Ser-Ser-Leu-Gln-Serが導かれた。ＣＤ
Ｒ領域は抗原との結合に重要な部位であり、該ＣＤＲ領
域にこれらコンセンサス配列を含むＨ鎖Ｌ鎖を持つこと
がａｄｒ型ＨＢｓを抗原とする抗体に必須である。
【００３６】
【実施例２】膜結合型ヒト抗体の発現ベクタ−ｐＳＥの
膜貫通領域（ＴＭ）を除去し、ヒト抗体を分泌発現可能
なベクタ−を作製した。まずｐＳＥを制限酵素ＳａｌＩ
で消化後、切断末端を平滑化した。この反応は、ＤＮＡ
Ｂｌｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ（宝酒造）を用い、添付の
プロトコ−ルに従って操作した。以上の処理を行ったｐ
ＳＥを制限酵素ＡｐａＩで消化後、０．７％アガロ−ス
ゲルにて電気泳動し、Ｃγ１遺伝子及び膜貫通領域（Ｔ
Ｍ）を含む遺伝子領域が欠失したｐＳＥベクタ−ＤＮＡ
を抽出精製した。この反応はＧｅｎｅＣｌｅａｎＩＩ
Ｋｉｔ（フナコシ）を用い、添付のプロトコ−ルに従っ
て操作した。抽出したｐＳＥベクタ−の制限酵素切断末
端は、ウシアルカリフォスファタ−ゼ（宝酒造）によ
り、自己環化が起きないよう処理した。次に、ヒトＣγ
１遺伝子の全長が組み込まれたプラスミドＤＮＡ ｐＵ
ＣＣＧ１を制限酵素ＫｐｎＩ（宝酒造）で消化し、切断
末端を平滑末端化した後、制限酵素ＡｐａＩで消化し
た。この反応物を０．７％アガロ−スゲルにて電気泳動
し、Ｃγ１遺伝子の全長を含むＤＮＡ断片を抽出精製し
た。このＤＮＡ断片と、先の処理を行ったｐＳＥベクタ
−をライゲ−ションキットＶｅｒ．２（宝酒造）を用い
て連結し、連結反応産物を大腸菌ＤＨ５株へ導入した。
出現したコロニ−から数個を選んで培養し、常法に従っ
てプラスミドＤＮＡを抽出精製した。ｐＳＥに存在する
適当な制限酵素を用いてこれらプラスミドの切断パタ−
ンを調べ、予想されたパタ−ンに一致したものを選び出
した。以上の操作によって得られたプラスミドをｐＧ１
とした。図２に作製フロ−を示した。
膜貫通領域（ＴＭ）を除去し、ヒト抗体を分泌発現可能
なベクタ−を作製した。まずｐＳＥを制限酵素ＳａｌＩ
で消化後、切断末端を平滑化した。この反応は、ＤＮＡ
Ｂｌｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ（宝酒造）を用い、添付の
プロトコ−ルに従って操作した。以上の処理を行ったｐ
ＳＥを制限酵素ＡｐａＩで消化後、０．７％アガロ−ス
ゲルにて電気泳動し、Ｃγ１遺伝子及び膜貫通領域（Ｔ
Ｍ）を含む遺伝子領域が欠失したｐＳＥベクタ−ＤＮＡ
を抽出精製した。この反応はＧｅｎｅＣｌｅａｎＩＩ
Ｋｉｔ（フナコシ）を用い、添付のプロトコ−ルに従っ
て操作した。抽出したｐＳＥベクタ−の制限酵素切断末
端は、ウシアルカリフォスファタ−ゼ（宝酒造）によ
り、自己環化が起きないよう処理した。次に、ヒトＣγ
１遺伝子の全長が組み込まれたプラスミドＤＮＡ ｐＵ
ＣＣＧ１を制限酵素ＫｐｎＩ（宝酒造）で消化し、切断
末端を平滑末端化した後、制限酵素ＡｐａＩで消化し
た。この反応物を０．７％アガロ−スゲルにて電気泳動
し、Ｃγ１遺伝子の全長を含むＤＮＡ断片を抽出精製し
た。このＤＮＡ断片と、先の処理を行ったｐＳＥベクタ
−をライゲ−ションキットＶｅｒ．２（宝酒造）を用い
て連結し、連結反応産物を大腸菌ＤＨ５株へ導入した。
出現したコロニ−から数個を選んで培養し、常法に従っ
てプラスミドＤＮＡを抽出精製した。ｐＳＥに存在する
適当な制限酵素を用いてこれらプラスミドの切断パタ−
ンを調べ、予想されたパタ−ンに一致したものを選び出
した。以上の操作によって得られたプラスミドをｐＧ１
とした。図２に作製フロ−を示した。
【００３７】実施例１で得られた４種のクロ−ンから抗
ＨＢｓ抗体のＨ鎖Ｌ鎖可変領域塩基配列を含む遺伝子断
片をｐＧ１へ組み込み、分泌型抗ＨＢｓ抗体を発現可能
なプラスミドを作製した。各クロ−ンのプラスミドＤＮ
Ａを制限酵素ＸｈｏＩ（宝酒造）及びＥｃｏＲＩ（宝酒
造）で消化後、０．７％アガロ−スゲルにて電気泳動
し、Ｌ鎖及びＨ鎖可変領域塩基配列を含むＤＮＡ断片を
切り出し抽出した。アガロ−スゲルからのＤＮＡ断片の
抽出には、ＧｅｎｅＣｌｅａｎＩＩ Ｋｉｔ（フナコ
シ）を用い、添付のプロトコ−ルに従って操作を行っ
た。次に、ベクタ−ｐＧ１を制限酵素ＸｈｏＩ及びＥｃ
ｏＲＩで消化後、０．７％アガロ−スゲルにて同様に切
り出し抽出したものと連結し、連結反応物を大腸菌ＤＨ
５株へ導入した。この連結反応には、ライゲ−ションキ
ットｖｅｒ．２（宝酒造）を用いた。形質転換した大腸
菌をアンピシリン含有ＬＢプレ−トに蒔いて一晩培養
し、出現したコロニ−の中から数個を選び、常法に従っ
てプラスミドＤＮＡを抽出精製した。これらを組み込み
に用いた制限酵素ＸｈｏＩ及びＥｃｏＲＩにて消化し、
Ｈ鎖及びＬ鎖可変領域塩基配列を含む断片が挿入された
ものを選び出した。以上の方法にて得られた分泌型抗体
発現プラスミドをそれぞれｐＧ１ αＨＢｓ＃１、ｐＧ
１ αＨＢｓ＃２、ｐＧ１ αＨＢｓ＃１７、ｐＧ１
αＨＢｓ＃３１とした。また、ＨＢｓに結合しない膜結
合型ヒト抗体クロ−ンの遺伝子の組換えも同じ方法で行
い、ｐＧ１ ＃５３を得た。以上の手順の概略を図３に
示した。
ＨＢｓ抗体のＨ鎖Ｌ鎖可変領域塩基配列を含む遺伝子断
片をｐＧ１へ組み込み、分泌型抗ＨＢｓ抗体を発現可能
なプラスミドを作製した。各クロ−ンのプラスミドＤＮ
Ａを制限酵素ＸｈｏＩ（宝酒造）及びＥｃｏＲＩ（宝酒
造）で消化後、０．７％アガロ−スゲルにて電気泳動
し、Ｌ鎖及びＨ鎖可変領域塩基配列を含むＤＮＡ断片を
切り出し抽出した。アガロ−スゲルからのＤＮＡ断片の
抽出には、ＧｅｎｅＣｌｅａｎＩＩ Ｋｉｔ（フナコ
シ）を用い、添付のプロトコ−ルに従って操作を行っ
た。次に、ベクタ−ｐＧ１を制限酵素ＸｈｏＩ及びＥｃ
ｏＲＩで消化後、０．７％アガロ−スゲルにて同様に切
り出し抽出したものと連結し、連結反応物を大腸菌ＤＨ
５株へ導入した。この連結反応には、ライゲ−ションキ
ットｖｅｒ．２（宝酒造）を用いた。形質転換した大腸
菌をアンピシリン含有ＬＢプレ−トに蒔いて一晩培養
し、出現したコロニ−の中から数個を選び、常法に従っ
てプラスミドＤＮＡを抽出精製した。これらを組み込み
に用いた制限酵素ＸｈｏＩ及びＥｃｏＲＩにて消化し、
Ｈ鎖及びＬ鎖可変領域塩基配列を含む断片が挿入された
ものを選び出した。以上の方法にて得られた分泌型抗体
発現プラスミドをそれぞれｐＧ１ αＨＢｓ＃１、ｐＧ
１ αＨＢｓ＃２、ｐＧ１ αＨＢｓ＃１７、ｐＧ１
αＨＢｓ＃３１とした。また、ＨＢｓに結合しない膜結
合型ヒト抗体クロ−ンの遺伝子の組換えも同じ方法で行
い、ｐＧ１ ＃５３を得た。以上の手順の概略を図３に
示した。
【００３８】以上５種の分泌型抗体発現プラスミドを、
ＤＥＡＥデキストラン法（Ｂｅｂ−ｂｉｎｇｔｏｎ，
Ｃ．Ｒ．（１９９１）； ＭＥＴＨＯＤＳ：Ａ Ｃｏｍ
ｐａ−ｎｉｏｎ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚ
ｙｍｏｌｏｇｙ，２（２），１３６−４５．）にてそれ
ぞれＣＯＳ７細胞へ導入した。ＣＯＳ７細胞を１０％ウ
シ胎児血清（ＦＣＳ）加Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄ
ｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥ
Ｍ）にて、遺伝子組み込みの２日前に直径１００ｍｍの
ディッシュあたり約１．９ｘ１０６C ｅｌｌｓ／１０ｍ
ｌとなるよう蒔き直し、培養した。２日後、まず上清を
除き、ＰＢＳ（−）にて細胞を静かに洗浄して、４ｍｌ
の１０％ＦＣＳ加Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉ
ｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ （ＤＭＥＭ）を
加え、次いでＤＥＡＥデキストラン／分泌型抗体発現プ
ラスミド混合液を細胞へ均一にふりかけて、３７℃で４
時間インキュベ−トした。この混合液は２０ｍｇ／ｍｌ
のＤＥＡＥデキストラン（ファルマシア社 Ｃｏｄｅ
Ｎｏ．１７０３５０−０１，Ｌｏｔ．ＰＦ９７３２
３）水溶液と、分泌型抗体プラスミドをＴＢＳ（−）
（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ・ＨＣｌ（ｐＨ７．４），０．１
５Ｍ ＮａＣｌ）により０．１７μｇ／μｌとした溶液
を２：１（ｖ／ｖ）で混合したものであり、ディッシュ
あたり１８０μｌを添加する。インキュベ−ション後、
上清を捨て、１０％ジメチルスルフォキシド（ＤＭＳ
Ｏ）加ＰＢＳ（−）５ｍｌを加えて１分静置した。次い
で上清を捨て、ＰＢＳ（−）で洗浄後、１００μＭクロ
ロキン（Ｓｉｇｍａ Ｎｏ− ６６２８）入りの２％Ｆ
ＣＳ加ＤＭＥＭ ７ｍｌを加え、３７℃で３時間インキ
ュベ−トした。その後、上清を捨て、ＰＢＳ（−）で洗
浄して、１０％ ＦＣＳ加ＤＭＥＭ１０ｍｌを加え、培
養した。翌日、ＰＢＳ（−）及びＤＭＥＭにてＦＣＳ加
ＤＭＥＭをよく除去した後、無血清のＤＭＥＭ１０ｍｌ
を加え、生産を開始した。
ＤＥＡＥデキストラン法（Ｂｅｂ−ｂｉｎｇｔｏｎ，
Ｃ．Ｒ．（１９９１）； ＭＥＴＨＯＤＳ：Ａ Ｃｏｍ
ｐａ−ｎｉｏｎ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚ
ｙｍｏｌｏｇｙ，２（２），１３６−４５．）にてそれ
ぞれＣＯＳ７細胞へ導入した。ＣＯＳ７細胞を１０％ウ
シ胎児血清（ＦＣＳ）加Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄ
ｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥ
Ｍ）にて、遺伝子組み込みの２日前に直径１００ｍｍの
ディッシュあたり約１．９ｘ１０６C ｅｌｌｓ／１０ｍ
ｌとなるよう蒔き直し、培養した。２日後、まず上清を
除き、ＰＢＳ（−）にて細胞を静かに洗浄して、４ｍｌ
の１０％ＦＣＳ加Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉ
ｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ （ＤＭＥＭ）を
加え、次いでＤＥＡＥデキストラン／分泌型抗体発現プ
ラスミド混合液を細胞へ均一にふりかけて、３７℃で４
時間インキュベ−トした。この混合液は２０ｍｇ／ｍｌ
のＤＥＡＥデキストラン（ファルマシア社 Ｃｏｄｅ
Ｎｏ．１７０３５０−０１，Ｌｏｔ．ＰＦ９７３２
３）水溶液と、分泌型抗体プラスミドをＴＢＳ（−）
（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ・ＨＣｌ（ｐＨ７．４），０．１
５Ｍ ＮａＣｌ）により０．１７μｇ／μｌとした溶液
を２：１（ｖ／ｖ）で混合したものであり、ディッシュ
あたり１８０μｌを添加する。インキュベ−ション後、
上清を捨て、１０％ジメチルスルフォキシド（ＤＭＳ
Ｏ）加ＰＢＳ（−）５ｍｌを加えて１分静置した。次い
で上清を捨て、ＰＢＳ（−）で洗浄後、１００μＭクロ
ロキン（Ｓｉｇｍａ Ｎｏ− ６６２８）入りの２％Ｆ
ＣＳ加ＤＭＥＭ ７ｍｌを加え、３７℃で３時間インキ
ュベ−トした。その後、上清を捨て、ＰＢＳ（−）で洗
浄して、１０％ ＦＣＳ加ＤＭＥＭ１０ｍｌを加え、培
養した。翌日、ＰＢＳ（−）及びＤＭＥＭにてＦＣＳ加
ＤＭＥＭをよく除去した後、無血清のＤＭＥＭ１０ｍｌ
を加え、生産を開始した。
【００３９】生産開始から２日後の培養上清の一部をと
り、ヒトＩｇＧの定量を行った。定量は、ヤギ抗ヒトＩ
ｇＧ抗体（Ｃａｐｐｅｌ社 ｃａｔ．＃５５００７）を
固相化し、ペルオキシダ−ゼ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆ
ｃ）抗体（Ｃａｐｐｅｌ社ｃａｔ．＃５５２２６）を２
次抗体、ヒトＩｇＧ（Ｃａｐｐｅｌ社 ｃａｔ．＃５５
９０８）をスタンダ−ドとする酵素免疫測定系（ＥＬＩ
ＳＡ）を用いた。ＥＬＩＳＡの一般的な方法は、生化学
実験講座１１ エンザイムイムノアッセイ石川栄治監訳
東京化学同人（１９８９）等の実験書に記載されてい
る。各クロ−ンともヒトＩｇＧが生産されていることを
確認しながら、約２週間生産を続けた。得られた培養上
清を集め、分子量３００００カットの限外濾過膜で濃縮
した後、プロテインＡ セファロ−スカラムクロマトグ
ラフィ−により精製した。
り、ヒトＩｇＧの定量を行った。定量は、ヤギ抗ヒトＩ
ｇＧ抗体（Ｃａｐｐｅｌ社 ｃａｔ．＃５５００７）を
固相化し、ペルオキシダ−ゼ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆ
ｃ）抗体（Ｃａｐｐｅｌ社ｃａｔ．＃５５２２６）を２
次抗体、ヒトＩｇＧ（Ｃａｐｐｅｌ社 ｃａｔ．＃５５
９０８）をスタンダ−ドとする酵素免疫測定系（ＥＬＩ
ＳＡ）を用いた。ＥＬＩＳＡの一般的な方法は、生化学
実験講座１１ エンザイムイムノアッセイ石川栄治監訳
東京化学同人（１９８９）等の実験書に記載されてい
る。各クロ−ンともヒトＩｇＧが生産されていることを
確認しながら、約２週間生産を続けた。得られた培養上
清を集め、分子量３００００カットの限外濾過膜で濃縮
した後、プロテインＡ セファロ−スカラムクロマトグ
ラフィ−により精製した。
【００４０】各クロ−ン精製標品のｙＨＢｓ抗原（組換
えＤＮＡ技術を応用して酵母に産生させたａｄｒ型ＨＢ
ｓ抗原）への結合は次の方法により確認した。９６穴プ
レ−ト（Ｎｕｎｃ社Ｉｍｍｕｎｏｐｌａｔｅ）の各ウェ
ルに、ＰＢＳ（−）にて５０μｇ／ｍｌに濃度を調整し
たｙＨＢｓ抗原を５０μｌずつ分注し、４℃にて２４時
間静置した。静置後、ｙＨＢｓ抗原を回収し、洗浄液
（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０加ＰＢＳ（−））で３回洗
浄してから５０％ ＦＣＳ／ＰＢＳ（−）を各ウェル５
０μｌ添加し、室温にて２時間ブロッキングを行った。
その後、ブロッキング剤を捨て、洗浄液で３回洗浄を行
った後、各クロ−ンの精製標品を各ウェル５０μｌずつ
加え、室温１２時間反応させた。反応後、３回洗浄液で
洗浄し、ペルオキシダ−ゼ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆ
ｃ）抗体（１／８０００希釈）を各ウェル５０μｌずつ
加えて、室温で１時間反応させた。反応後、５回洗浄を
行い、１．５ｍｇ／ｍｌのテトラメチルベンジジン（Ｔ
ＭＢＺ）、０．０３％過酸化水素を５０μｌ基質として
加え１２分間発色させた。２Ｎ硫酸５０μｌにより発色
停止後、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。図４
に、各クロ−ン精製標品のｙＨＢｓ抗原への結合を比活
性で表した。
えＤＮＡ技術を応用して酵母に産生させたａｄｒ型ＨＢ
ｓ抗原）への結合は次の方法により確認した。９６穴プ
レ−ト（Ｎｕｎｃ社Ｉｍｍｕｎｏｐｌａｔｅ）の各ウェ
ルに、ＰＢＳ（−）にて５０μｇ／ｍｌに濃度を調整し
たｙＨＢｓ抗原を５０μｌずつ分注し、４℃にて２４時
間静置した。静置後、ｙＨＢｓ抗原を回収し、洗浄液
（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０加ＰＢＳ（−））で３回洗
浄してから５０％ ＦＣＳ／ＰＢＳ（−）を各ウェル５
０μｌ添加し、室温にて２時間ブロッキングを行った。
その後、ブロッキング剤を捨て、洗浄液で３回洗浄を行
った後、各クロ−ンの精製標品を各ウェル５０μｌずつ
加え、室温１２時間反応させた。反応後、３回洗浄液で
洗浄し、ペルオキシダ−ゼ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆ
ｃ）抗体（１／８０００希釈）を各ウェル５０μｌずつ
加えて、室温で１時間反応させた。反応後、５回洗浄を
行い、１．５ｍｇ／ｍｌのテトラメチルベンジジン（Ｔ
ＭＢＺ）、０．０３％過酸化水素を５０μｌ基質として
加え１２分間発色させた。２Ｎ硫酸５０μｌにより発色
停止後、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。図４
に、各クロ−ン精製標品のｙＨＢｓ抗原への結合を比活
性で表した。
【００４１】ＨＢｓとは結合しないクローンｐＧ１ ＃
５３の吸光度をバックグラウンドとして補正後比較する
と、抗ＨＢｓ抗体ｐＧ１ αＨＢｓ＃１、ｐＧ１ αＨ
Ｂｓ＃２、ｐＧ１ αＨＢｓ＃１７、ｐＧ１ αＨＢｓ
＃３１由来の精製標品は全て、ｙＨＢｓ抗原への結合活
性を保持していることが確認され、実施例１記載の特徴
を有する分泌型のヒトモノクロ−ナル抗体にはＨＢｓ抗
原に対する結合活性があることが実証された。各クロ−
ンのＨＢｓ抗原への結合活性はｐＧ１ αＨＢｓ＃２が
最も高く、次いでｐＧ１ αＨＢｓ＃１、ｐＧ１ αＨ
Ｂｓ＃１７、ｐＧ１ αＨＢｓ＃３１の順となった。こ
のクロ−ン間での抗原結合活性の違いは、各クロ−ン間
で最も相同性が低いＨ鎖Ｌ鎖のＣＤＲ−３領域のアミノ
酸配列の違いを反映していると考えられた。
５３の吸光度をバックグラウンドとして補正後比較する
と、抗ＨＢｓ抗体ｐＧ１ αＨＢｓ＃１、ｐＧ１ αＨ
Ｂｓ＃２、ｐＧ１ αＨＢｓ＃１７、ｐＧ１ αＨＢｓ
＃３１由来の精製標品は全て、ｙＨＢｓ抗原への結合活
性を保持していることが確認され、実施例１記載の特徴
を有する分泌型のヒトモノクロ−ナル抗体にはＨＢｓ抗
原に対する結合活性があることが実証された。各クロ−
ンのＨＢｓ抗原への結合活性はｐＧ１ αＨＢｓ＃２が
最も高く、次いでｐＧ１ αＨＢｓ＃１、ｐＧ１ αＨ
Ｂｓ＃１７、ｐＧ１ αＨＢｓ＃３１の順となった。こ
のクロ−ン間での抗原結合活性の違いは、各クロ−ン間
で最も相同性が低いＨ鎖Ｌ鎖のＣＤＲ−３領域のアミノ
酸配列の違いを反映していると考えられた。
【００４２】
【発明の効果】本発明によれば、人体投与に際して安全
性が高くａｄｒ型ＨＢウイルスに有効なヒト型抗ＨＢｓ
モノクロ−ナル抗体製剤が提供可能となる。
性が高くａｄｒ型ＨＢウイルスに有効なヒト型抗ＨＢｓ
モノクロ−ナル抗体製剤が提供可能となる。
【００４３】
配列番号：１ 配列の長さ：３５７ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 起源： 生物名：ヒト 配列 G GAT CCG CTG GTG GAG TCT GGG GGA GAC GTG GTC CAG CCT GGG AGG 46 Asp Pro Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Val Val Gln Pro Gly Arg 5 10 15 TCC CTG AGA CTC TCC TGT GCA GCG TCT GGA TTC ACC TTC AGT AGC CAT 94 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser His 20 25 30 GGC ATG CAC TGG GTC CGC CAA GGT CCA GGC AAG GGG CTG GAG TGG CTG 142 Gly Met His Trp Val Arg Gln Gly Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 GCA GTT ATT TGG CAT GAC GGA ACT AAT CAA TAC TAT ACA GAC TCC GTG 190 Ala Val Ile Trp His Asp Gly Thr Asn Gln Tyr Tyr Thr Asp Ser Val 50 55 60 GAG GGC CGA TTC ACC ATC TCC AGA GAC AAT TCC AAG AGC ACA CTG TAT 238 Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr Leu Tyr 65 70 75 CTG CAA ATG AAC AGC CTG AGA GCC GAG GAC ACG GCT GTG TAT TAC TGT 286 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 80 85 90 95 GCG AGA GAG GGT TTG GAG TGG TTT CCA ATC CTT GAC TAC TGG GGC CAA 334 Ala Arg Glu Gly Leu Glu Trp Phe Pro Ile Leu Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 GGG ACC CCG GTC ACC GTG AAT TC 357 Gly Thr Pro Val Thr Val Asn 115 配列番号：２ 配列の長さ：１５ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 起源： 生物名：ヒト 配列 AGC CAT GGC ATG CAC 15 Ser His Gly Met His
【００４４】配列番号：３ 配列の長さ：５１ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 起源： 生物名：ヒト 配列 GTT ATT TGG CAT GAC GGA ACT AAT CAA TAC TAT ACA GAC TCC GTG GAG 48 Val Ile Trp His Asp Gly Thr Asn Gln Tyr Tyr Thr Asp Ser Val Glu 5 10 15 GGC 51 Gly 配列番号：４ 配列の長さ：３３ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 起源： 生物名：ヒト 配列番号：５ 配列の長さ：３４１ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 起源： 生物名：ヒト 配列 CTC GAG ATG ACC CAG TCT CCT TCT TCC CTG TCT GCA TCT GTA GGA GAC 48 Leu Glu Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp 5 10 15 AGA GTC ACC ATC ACT TGC CGG GCA AGT CAG AGC ATT AGC AGC TAT TTA 96 Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu 20 25 30 AAC TGG TAT CAG CAG AAA CCA GGG AAA GCC CCT AAG CTC CTG ATC TAT 144 Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 35 40 45 GCT GCA TCC AGT TTG CAA AGT GGG GTC CCA TCA AGG TTC AGT GGC AGT 192 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 GGA TCT GGG ACA GAT TTC ACT CTC ACC ATC AGC AGT CTG CAA CCT GAA 240 Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 GAT TTT GCA ACT TAC TAC TGT CAA CAG AGT TAC AGT ACC CCT CGA ACG 288 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Arg Thr 85 90 95 TTC GGC CAA GGG ACC AAG GTG GAA ATC AAA CGT ACT GTG GCT GCA CCA 336 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110 CTA GT 341 Leu Val
【００４５】配列番号：６ 配列の長さ：３３ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 起源： 生物名：ヒト 配列番号：７ 配列の長さ：２１ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 起源： 生物名：ヒト 配列番号：８ 配列の長さ：２７ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 起源： 生物名：ヒト 配列番号：９ 配列の長さ：３５８ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：cDNA 起源： 生物名：ヒト 配列 G GAT CCG CTG GTG GAG TCT GGG GGA GAC TTG GTC CAG CCT GGG AGG 46 Asp Pro Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Gly Arg 5 10 15 TCC CTG AGA CTC TCC TGT GCA GCG TCT GGA TTC ACC TTC AGT GAC CAT 94 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp His 20 25 30 GGC ATG CAC TGG GTC CGC CAG GCT CCA GGC AAG GGG CTG GAG TGG CTG 142 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 GCA GTC ATT TGG GCT GAT GGA ACT AAT AAA TAC TAT GCG GAC GCC GTG 190 Ala Val Ile Trp Ala Asp Gly Thr Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ala Val 50 55 60 AAG GGC CGA ATC ACC ATC GCC AGA GAC AAT TTC AAG AAC ACA CTG TTT 238 Lys Gly Arg Ile Thr Ile Ala Arg Asp Asn Phe Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 CTG CAA GTG AAC AGC CTG AAG GTC GAC GAC ACG GCT GTC TAT TAC TGT 286 Leu Gln Val Asn Ser Leu Lys Val Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 80 85 90 95 GTC AGA GAG GCC ACA GAC TTT GTG GTG AAG TTT GAC CTC TGG GGC CAA 334 Val Arg Glu Ala Thr Asp Phe Val Val Lys Phe Asp Leu Trp Gly Gln 100 105 110 GGG ACC ACG GTC ACC GTG AAT TC 358 Gly Thr Thr Val Thr Val Asn Ser 115
【００４６】配列番号：１０ 配列の長さ：１５ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：cDNA 起源： 生物名：ヒト 配列番号：１１ 配列の長さ：５１ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：cDNA 起源： 生物名：ヒト 配列 GTC ATT TGG GCT GAT GGA ACT AAT AAA TAC TAT GCG GAC GCC GTG AAG 48 Val Ile Trp Ala Asp Gly Thr Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ala Val Lys 5 10 15 GGC 51 Gly 配列番号：１２ 配列の長さ：３３ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：cDNA 起源： 生物名：ヒト 配列 GAG GCC ACA GAC TTT GTG GTG AAG TTT GAC CTC 33 Glu Ala Thr Asp Phe Val Val Lys Phe Asp Leu 5 10
【００４７】配列番号：１３ 配列の長さ：３４１ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 起源： 生物名：ヒト 配列 CTC GAG GTG ACC CAG TCT CCA TCT TCC CTG TCT GCA TCT GTA GGA GAC 48 Leu Glu Val Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp 5 10 15 AGA GTC ACC ATC ACT TGC CGG GCA AGT CAG AGC ATT AGC AGC TAT TTA 96 Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu 20 25 30 AAT TGG TAT CAG CAG AAA CCA GGG AAA GCC CCT AAG CTC CTG ATC TAT 144 Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 35 40 45 GCT GCA TCC AGT TTG CAA AGT GGG GTC CCA TCA AGG TTC AGT GGC AGT 192 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 GGA TCT GGG ACA GAT TTC ACT CTC ACC ATC AGC AGT CTG CAA CCT GAA 240 Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 GAT TTT GCA ACT TAC TAC TGT CAA GAG AGT AAC AGT ATA CCG CTC ACT 288 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Glu Ser Asn Ser Ile Pro Leu Thr 85 90 95 TTC GGC GGA GGG ACC AAG GTG GAG ATC AAA CGT ACT GTG GCT GCA CCA 336 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110 CTA GT 341 Leu 配列番号：１４ 配列の長さ：３３ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 起源： 生物名：ヒト 配列番号：１５ 配列の長さ：２１ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 起源： 生物名：ヒト
【００４８】配列番号：１６ 配列の長さ：２７ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 起源： 生物名：ヒト 配列番号：１７ 配列の長さ：３５７ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 起源： 生物名：ヒト 配列 G GAT CCG CTG GTG GAG TCT GGA GGA GGC TTG GTC CGG CCT GGG AGG 46 Asp Pro Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Arg Pro Gly Arg 5 10 15 TCC CTG AGA CTC TCC TGT GAA GCG TCT GGA TTC ACG TTC GGC AGT CAT 94 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Ser His 20 25 30 GGC ATG CAC TGG GTC CGC CAG GCT CCA GGC AAG GGG CTG GAG TGG GTG 142 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 GGA GTT ATA TGG CAC GAT GGA AGT AAT AAG TAC TAT GCA GAC TCC GTG 190 Gly Val Ile Trp His Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 AAG GGC CGG TTC ACC ATC TCC AGA GAC AAT TCC AAA AAC ACA CTG TAT 238 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 CTG CAA ATG AAC AGT CTG AGC GCC GAG GAC ACG GCT GTG TAC TAC TGT 286 Leu Gln Met Asn Ser Leu Ser Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 80 85 90 95 GCG AGA GAA GCA CTA CTC CTG TGG ACC ATT TTT GAC TCC TGG GGC CAA 334 Ala Arg Glu Ala Leu Leu Leu Trp Thr Ile Phe Asp Ser Trp Gly Gln 100 105 110 GGC ACA CTG GTC ACC GTG AAT TC 357 Gly Thr Leu Val Thr Val Asn Ser 115 配列番号：１８ 配列の長さ：１５ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 起源： 生物名：ヒト 配列番号：１９ 配列の長さ：５１ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 起源： 生物名：ヒト 配列 GTT ATA TGG CAC GAT GGA AGT AAT AAG TAC TAT GCA GAC TCC GTG AAG 48 Val Ile Trp His Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 5 10 15 GGC 51 Gly
【００４９】配列番号：２０ 配列の長さ：３３ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 起源： 生物名：ヒト 配列番号：２１ 配列の長さ：３３８ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 起源： 生物名：ヒト 配列 CTC GAG GTG ACC CAG TCT CCT TCC TCC CTG TCT GCA TCT GTA GGA GAC 48 Leu Glu Val Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp 5 10 15 AGA GTC ACC ATC ACT TGC CGG GCA AGT CAG AAC ATT GAC AGA TAT TTA 96 Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Asp Arg Tyr Leu 20 25 30 AAT TGG TAT CAG CAG AAA CCA GGG AAA GCC CCT AAG CTC CTG ATC TAT 144 Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 35 40 45 GCT GCA TCC AGT TTG CAA AGT GGA GTC CCA TCA AGG TTC AGT GGC AGT 192 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 GGA TCT GTG ACA GAT TTC ACT CTC ACC ATC AGC AAT CTG CAA CCT GAA 240 Gly Ser Val Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 GAT TTT GCA ACT TAC TAC TGT CAG CAG AGT TAC AGT GCC CTC ACT TTC 288 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Ala Leu Thr Phe 85 90 95 GGC GGA GGG ACC AAG GTG GAG ATC AAA CGT ACT GTG GCT GCA CCA CTA 336 Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Leu 100 105 110 GT 338 Val 配列番号：２２ 配列の長さ：３３ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 起源： 生物名：ヒト 配列 CGG GCA AGT CAG AAC ATT GAC AGA TAT TTA AAT 33 Arg Ala Ser Gln Asn Ile Asp Arg Tyr Leu Asn 5 10
【００５０】配列番号：２３ 配列の長さ：２１ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 起源： 生物名：ヒト 配列番号：２４ 配列の長さ：２４ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 起源： 生物名：ヒト 配列番号：２５ 配列の長さ：３５８ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：cDNA 起源： 生物名：ヒト 配列 G GAT CCG CTG GTG GAG TCT GGG GGA GAC GTG GTC CAG CCT GGG GGG TCC 48 Asp Pro Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Val Val Gln Pro Gly Gly Ser 5 10 15 CTG AGA CTC TCC TGT GCA GCG TCT GGA TTC ACC TTC AGT AGT CAT GGC 96 Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser His Gly 20 25 30 ATG CAC TGG GTC CGC CAG GCT CCA GGC AAG GGG CTG GAG TGG GTG GCA 144 Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala 35 40 45 CTT ATA TGG GCT GAC GGA ACT AAT AAA TAT TAT GCT GAC TCC GTG AAG 192 Leu Ile Trp Ala Asp Gly Thr Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 GGC CGA TTC ACC ATC TCC AGA GAC AAT TCC AAG AAC ACG CTG TAT CTG 240 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 CAG ATG AAC AGC CTG AGA GCC GAG GAC ACG GCT GTG TAT TAC TGT GCG 288 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 AGA GAA GAG CTG ACT CTG GTG ACT GCC TTT GGC TAC TGG GGC CAG GGC 336 Arg Glu Glu Leu Thr Leu Val Thr Ala Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 ACA CCG GTC ACC GTG AAT TC 358 Thr Pro Val Thr Val Asn Ser 115
【００５１】配列番号：２６ 配列の長さ：１５ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：cDNA 起源： 生物名：ヒト 配列番号：２７ 配列の長さ：５１ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：cDNA 起源： 生物名：ヒト 配列 CTT ATA TGG GCT GAC GGA ACT AAT AAA TAT TAT GCT GAC TCC GTG AAG 48 Leu Ile Trp Ala Asp Gly Thr Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 5 10 15 GGC 51 Gly 配列番号：２８ 配列の長さ：３３ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：cDNA 起源： 生物名：ヒト 配列 GAA GAG CTG ACT CTG GTG ACT GCC TTT GGC TAC 33 Glu Glu Leu Thr Leu Val Thr Ala Phe Gly Tyr 5 10
【００５２】配列番号：２９ 配列の長さ：３４１ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：cDNA 起源： 生物名：ヒト 配列 CTC GAG GTG ACC CAG TCT CCT TCT TCC CTG TCT GCA TCT ATA GGA GAC 48 Leu Glu Val Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Ile Gly Asp 5 10 15 ACA GTC ACC ATC ACT TGC CGG GCA AGT CAG ACC ATC GGC AAC CAT TTA 96 Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Gly Asn His Leu 20 25 30 AAT TGG TAT CGC CAC AAG CCA GGG AAA GCC CCT AAC CTC CTG ATC TAT 144 Asn Trp Tyr Arg His Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile Tyr 35 40 45 GCT GCA TCC AGT TTG CAA AGT GGG GTC CCA TCA AGG TTC ATT GGC AGT 192 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ile Gly Ser 50 55 60 GGA TCT GGG ACA GAT TTC ACT CTC ACC ATC ACT TCT CTG CAA CCT GAA 240 Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 GAT CTT GCA ACT TAC TAC TGT CAA CAG AGT TAC GAT ACC CCT CGC ACA 288 Asp Leu Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Asp Thr Pro Arg Thr 85 90 95 TTC GGC CAG GGG ACC AGG GTG GAC ATC AAA CGT ACT GTG GCT GCA CCA 336 Phe Gly Gln Gly Thr Arg Val Asp Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110 CTA GT 341 Leu Val 配列番号：３０ 配列の長さ：３３ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：cDNA 起源： 生物名：ヒト 配列 CGG GCA AGT CAG ACC ATC GGC AAC CAT TTA AAT 33 Arg Ala Ser Gln Thr Ile Gly Asn His Leu Asn 5 10 配列番号：３１ 配列の長さ：２１ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：cDNA 起源： 生物名：ヒト 配列 GCT GCA TCC AGT TTG CAA AGT 21 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 5 配列番号：３２ 配列の長さ：２７ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：cDNA 起源： 生物名：ヒト
【図面の簡単な説明】
【図１】ＩｇＧの構造を模式的に示したものである。
【図２】ｐＧ１作製手順の概略図である。
【図３】膜結合型抗ＨＢｓ抗体発現プラスミドから、分
泌型抗ＨＢｓ抗体発現プラスミドを作製する手順の概略
図である。
泌型抗ＨＢｓ抗体発現プラスミドを作製する手順の概略
図である。
【図４】ＨＢｓ抗原固相化プレ−トを用い、各クロ−ン
とＨＢｓ抗原の結合能を示す図である。
とＨＢｓ抗原の結合能を示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｇ０１Ｎ 33/576 Ｂ Ｇ０１Ｎ 33/53 33/577 Ｂ 33/576 9162−4Ｂ Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ 33/577 9162−4Ｂ ＺＮＡＣ //(Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91）
Claims (20)
- 【請求項１】 少なくとも下記の性質を特徴とするヒト
モノクロ−ナル抗体。 （Ａ）Ｈ鎖可変領域のＣＤＲ−１が、式（１）で表され
るアミノ酸配列である。 (Ser/Asp)-His-Gly-Met-His （１） ここで（Ser/Asp ）は、セリンまたはアスパラギン酸の
いずれかであることを表す。 （Ｂ）Ｌ鎖可変領域のＣＤＲ−２が、式（２）で表され
るアミノ酸配列である。 Ala-Ala-Ser-Ser-Leu-Gln-Ser （２） （Ｃ）ａｄｒ型ＨＢｓ抗原に結合する。 - 【請求項２】 請求項１記載のヒトモノクロ−ナル抗体
において、Ｈ鎖可変領域のＣＤＲ−３が式（３）で表さ
れ、Ｌ鎖可変領域のＣＤＲ−３が、式（４）で表される
抗体。 Glu-Ala-Thr-Asp-Phe-Val-Val-Lys-Phe-Asp-Leu （３） Gln-Glu-Ser-Asn-Ser-Ile-Pro-Leu-Thr （４） - 【請求項３】 請求項２記載のヒトモノクロ−ナル抗体
において、そのＨ鎖可変領域のＣＤＲ−２が、式（５）
で表される抗体。 (Val/Leu)-Ile-Trp-(His/Ala)-Asp-Gly-(Thr/Ser)-Asn-
(Gln/Lys)-Tyr-Tyr-(Ala/Thr)-Asp-(Ser/Ala)-Val-(Lys
/Glu)-Gly （５） ここで（）は（）内に記載されたアミノ酸のいずれか１
つであることを表す。 - 【請求項４】 請求項３記載のヒトモノクロ−ナル抗体
において、そのＨ鎖可変領域のＣＤＲ−２が、式（６）
で表される抗体。 Val-Ile-Trp-Ala-Asp-Gly-Thr-Asn-Lys-Tyr-Tyr-Ala-As
p-Ala-Val-Lys-Gly（６） - 【請求項５】 請求項３記載のヒトモノクロ−ナル抗体
において、そのＬ鎖可変領域のＣＤＲ−１が、式（７）
で表される抗体。 Arg-Ala-Ser-Gln-(Ser/Asn/Thr)-Ile-(Ser/Asp/Gly)-(S
er/Arg/Asn)-(Tyr/His)-Leu-Asn （７） ここで（）は、（）内に記載されたアミノ酸のいずれか
１つであることを表す。 - 【請求項６】 請求項４記載のヒトモノクロ−ナル抗体
において、そのＬ鎖可変領域のＣＤＲ−１が、式（８）
で表される抗体。 Arg-Ala-Ser-Gln-Ser-Ile-Ser-Ser-Tyr-Leu-Asn （８） - 【請求項７】 少なくとも下記の性質を特徴とするヒト
モノクロ−ナル抗体。 （Ａ）Ｈ鎖可変領域が配列表の配列番号１のアミノ酸３
位〜１１６位に記載された配列と本質的に同じ性能のア
ミノ酸配列を含む。 （Ｂ）Ｌ鎖可変領域が配列表の配列番号５のアミノ酸３
位〜１１１位に記載された配列と本質的に同じ性能のア
ミノ酸配列を含む。 （Ｃ）ａｄｒ型ＨＢｓ抗原に結合する。 - 【請求項８】 少なくとも下記の性質を特徴とするヒト
モノクロ−ナル抗体。 （Ａ）Ｈ鎖可変領域が配列表の配列番号９のアミノ酸３
位〜１１６位に記載された配列と本質的に同じ性能のア
ミノ酸配列を含む。 （Ｂ）Ｌ鎖可変領域が配列表の配列番号１３のアミノ酸
３位〜１１１位に記載された配列と本質的に同じ性能の
アミノ酸配列を含む。 （Ｃ）ａｄｒ型ＨＢｓ抗原に結合する。 - 【請求項９】 少なくとも下記の性質を特徴とするヒト
モノクロ−ナル抗体。 （Ａ）Ｈ鎖可変領域が配列表の配列番号１７のアミノ酸
３位〜１１６位にに記載された配列と本質的に同じ性能
のアミノ酸配列を含む。 （Ｂ）Ｌ鎖可変領域が配列表の配列番号２１のアミノ酸
３位〜１１０位に記載された配列と本質的に同じ性能の
アミノ酸配列を含む。 （Ｃ）ａｄｒ型ＨＢｓ抗原に結合する。 - 【請求項１０】 少なくとも下記の性質を特徴とするヒ
トモノクロ−ナル抗体。 （Ａ）Ｈ鎖可変領域が配列表の配列番号２５のアミノ酸
３位〜１１６位に記載された配列と本質的に同じ性能の
アミノ酸配列を含む。 （Ｂ）Ｌ鎖可変領域が配列表の配列番号２９のアミノ酸
３位〜１１１位に記載された配列と本質的に同じ性能の
アミノ酸配列を含む。 （Ｃ）ａｄｒ型ＨＢｓ抗原に結合する。 - 【請求項１１】（Ａ）通商産業省工業技術院生命工学工
業技術研究所に寄託されたプラスミッドベクターｐＳＥ
αＨＢｓ＃１（ＦＥＲＭ Ｐー１４７１９）でコードさ
れる膜結合型抗体の分泌型と本質的に同じ性能のアミノ
酸配列を含み、（Ｂ）ａｄｒ型ＨＢｓ抗原に結合する、
ことを特徴とするヒトモノクロ−ナル抗体。 - 【請求項１２】（Ａ）通商産業省工業技術院生命工学工
業技術研究所に寄託されたプラスミッドベクターｐＳＥ
αＨＢｓ＃２（ＦＥＲＭ Ｐ−１４７２０）でコードさ
れる膜結合型抗体の分泌型と本質的に同じ性能のアミノ
酸配列を含み、（Ｂ）ａｄｒ型ＨＢｓ抗原に結合する、
ことを特徴とするヒトモノクローナル抗体。 - 【請求項１３】（Ａ）通商産業省工業技術院生命工学工
業技術研究所に寄託されたプラスミッドベクターｐＳＥ
αＨＢｓ＃１７（ＦＥＲＭ Ｐ−１４７２２）でコード
される膜結合型抗体の分泌型と本質的に同じ性能のアミ
ノ酸配列を含み、（Ｂ）ａｄｒ型ＨＢｓ抗原に結合す
る、ことを特徴とするヒトモノクローナル抗体。 - 【請求項１４】（Ａ）通商産業省工業技術院生命工学工
業技術研究所に寄託されたプラスミッドベクターｐＳＥ
αＨＢｓ＃３１（ＦＥＲＭ Ｐ−１４７２３）でコード
される膜結合型抗体の分泌型と本質的に同じ性能のアミ
ノ酸配列を含み、（Ｂ）ａｄｒ型ＨＢｓ抗原に結合す
る、ことを特徴とするヒトモノクローナル抗体。 - 【請求項１５】 請求項１記載のヒトモノクローナル抗
体をコードする核酸。 - 【請求項１６】 請求項７記載のヒトモノクローナル抗
体をコードする核酸。 - 【請求項１７】 請求項８記載のヒトモノクローナル抗
体をコードする核酸。 - 【請求項１８】 請求項９記載のヒトモノクローナル抗
体をコードする核酸。 - 【請求項１９】 請求項１０記載のヒトモノクロ−ナル
抗体をコ−ドする核酸。 - 【請求項２０】 請求項１記載のヒトモノクロ−ナル抗
体と医薬的に許容しうる担体とからなる医薬組成物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7174752A JPH0920798A (ja) | 1995-07-11 | 1995-07-11 | ヒト抗ＨＢｓ抗体 |
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7174752A JPH0920798A (ja) | 1995-07-11 | 1995-07-11 | ヒト抗ＨＢｓ抗体 |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0920798A true JPH0920798A (ja) | 1997-01-21 |
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ID=15984070
Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
| JP7174752A Withdrawn JPH0920798A (ja) | 1995-07-11 | 1995-07-11 | ヒト抗ＨＢｓ抗体 |
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| JP (1) | JPH0920798A (ja) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| JP2007014267A (ja) * | 2005-07-07 | 2007-01-25 | Toyama Univ | Ｂ型肝炎ウイルスのＨＢｓ抗原に対するモノクローナル抗体、それに関連する遺伝子およびペプチド、並びにＢ型肝炎ウイルスの検定方法、Ｂ型肝炎の診断方法、治療方法 |
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-
1995
- 1995-07-11 JP JP7174752A patent/JPH0920798A/ja not_active Withdrawn
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