JPH06107688A

JPH06107688A - マウス脳ナトリウム利尿ペプチド

Info

Publication number: JPH06107688A
Application number: JP4259488A
Authority: JP
Inventors: Hiroo Imura; 裕夫井村; Ichikazu Nakao; 一和中尾
Original assignee: Shionogi and Co Ltd
Current assignee: Shionogi and Co Ltd
Priority date: 1992-09-29
Filing date: 1992-09-29
Publication date: 1994-04-19

Abstract

(57)【要約】【構成】マウス由来の４５個のアミノ酸でなる脳ナト
リウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）およびそれをコードする
ＤＮＡ配列、該４５個のアミノ酸を含む９６個のアミノ
酸でなるプロＢＮＰおよびそれをコードするＤＮＡ配
列、および該９６個のアミノ酸を含む１２１個のアミノ
酸でなるプレプロＢＮＰおよびそれをコードするＤＮＡ
配列が提供される。上記ＤＮＡ配列は、マウスゲノムＤ
ＮＡライブラリーから、ラットＢＮＰのＤＮＡ配列をプ
ローブとして使用して得られた。【効果】マウスＢＮＰあるいはその前駆体またはその
ＤＮＡ配列を利用して、検体中のＢＮＰの検出、測定が
なされ、あるいはＢＮＰを含む各種試薬などが調製され
得る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、マウス由来の４５個の
アミノ酸でなる脳ナトリウム利尿ペプチドおよびそれを
コードするＤＮＡ配列、該４５個のアミノ酸を含む９６
個のアミノ酸でなるポリペプチドおよびそれをコードす
るＤＮＡ配列、および該９６個のアミノ酸を含む１２１
個のアミノ酸でなるポリペプチドおよびそれをコードす
るＤＮＡ配列に関する。

【０００２】

【従来の技術】脳ナトリウム利尿ペプチド（BNP）は、
おもに心室から分泌される心臓ホルモンであり、心房性
ナトリウム利尿ペプチド（ANP）と同様に、血圧、水電
解質代謝調節に関与する可能性が示唆されている（Muko
yamaら、J. Clin. Invest. 87:1402 (1991)およびOgawa
ら、Circ. Res. 69: 491 (1991)）。高血圧性心肥大あ
るいは重症心不全の患者において、血中のＢＮＰ濃度が
ＡＮＰ濃度よりもより著しく上昇することが報告されて
いる（Mukoyamaら、N. Engl. J. Med 323, 757 (199
0)）。さらに、重症心不全の患者にヒトＢＮＰを静脈内
投与して、ＢＮＰが心機能を改善をすることが見いださ
れ、報告された（Yoshimuraら、Circulation84, 1581
(1991)）。

【０００３】脳ナトリウム利尿ペプチドが、血圧や心機
能に及ぼす影響の作用機作についての詳細はまだ十分に
解明されていない。この解明を進め、心臓に関連する様
々な疾患の治療に役立てていく必要がある。その為には
まず、このようなペプチドの構造を解析することが望ま
れる。

【０００４】現在、脳ナトリウム利尿ペプチドのうち、
以下のものはその全アミノ酸配列が解明されている：ブ
タ由来ペプチド（Sudohら、Nature 332:78-81 (198
8)）、ラット由来ペプチド（Nakaoら、Hypertension 1
5:774-778 (1990)）、ヒト由来ペプチド（Kambayashi
ら、FEBS Lett 259:341-345 (1990)およびHinoら、BBRC
167: 693-700 (1990)）、およびウシ由来ペプチド（Ng
uyenら、Mol. Endocrinology3:1823-1829 (1989)）。さ
らに、以下の脳ナトリウム利尿ペプチドをコードするＤ
ＮＡ配列が解明されている。ラット由来ペプチド（Koji
maら、BBRC 159:1420-1426 (1989)）、ヒト由来ペプチ
ド（Sudohら、BBRC 159:1427-1434 (1989)）、ヒト由来
ペプチドおよびイヌ由来ペプチド（Seilhamerら、BBRC
165:650-658(1989)）。

【０００５】

【発明の目的】本発明の目的は、脳ナトリウム利尿ペプ
チド（ＢＮＰ）、特にマウス脳ナトリウム利尿ペプチド
およびその前駆体のアミノ酸配列およびＤＮＡ配列を明
かにすることである。

【０００６】

【発明の構成】発明者らは、マウスゲノムＤＮＡライブ
ラリーを、ラットＢＮＰのｃＤＮＡ断片をプローブとし
て用いたスクリーニングに供し、マウス由来のＢＮＰの
ＤＮＡ断片を得て、その配列の決定を行うことにより、
本発明を完成するに至った。

【０００７】本発明のポリペプチドは、配列表の配列番
号１の１位のSerから４５位のLeuまでのアミノ酸配列を
含む。

【０００８】本発明のポリペプチドは、配列表の配列番
号１の−５１位のSerから４５位のLeuまでのアミノ酸配
列を含む。

【０００９】本発明のポリペプチドは、配列表の配列番
号１の−７６位のMetから４５位のLeuまでのアミノ酸配
列を含む。

【００１０】本発明のポリペプチドは、配列表の配列番
号３の−５０位のSerから４５位のLeuまでのアミノ酸配
列を含む。

【００１１】本発明のポリペプチドは、配列表の配列番
号３の−７５位のMetから４５位のLeuまでのアミノ酸配
列を含む。

【００１２】本発明のＤＮＡ配列は、上記いずれかのポ
リペプチドをコードする。

【００１３】本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡ
配列は、配列表の配列番号１の４３８位のＴから５７２
位のＧまでのＤＮＡ配列でなる。

【００１４】本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡ
配列は、配列表の配列番号１の２８５位のＴから５７２
位のＧまでのＤＮＡ配列でなる。

【００１５】本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡ
配列は、配列表の配列番号１の２１０位のＡから５７２
位のＧまでのＤＮＡ配列でなる。

【００１６】本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡ
配列は、配列表の配列番号３の２８５位のＴから５６９
位のＧまでのＤＮＡ配列でなる。

【００１７】本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡ
配列は、配列表の配列番号３の２１０位のＡから５６９
位のＧまでのＤＮＡ配列でなる。

【００１８】本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡ
配列は、配列表の配列番号２の６３２位のＴから１２０
９位のＧまでのＤＮＡ配列でなる、マウスゲノム由来の
ＤＮＡ配列である。

【００１９】本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡ
配列は、配列表の配列番号２の２８５位のＴから１２０
９位のＧまでのＤＮＡ配列でなる、マウスゲノム由来の
ＤＮＡ配列である。

【００２０】本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡ
配列は、配列表の配列番号２の２１０位のＡから１２０
９位のＧまでのＤＮＡ配列でなる、マウスゲノム由来の
ＤＮＡ配列である。

【００２１】本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡ
配列は、配列表の配列番号４の２８５位のＴから１２０
６位のＧまでのＤＮＡ配列でなる、マウスゲノム由来の
ＤＮＡ配列である。

【００２２】本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡ
配列は、配列表の配列番号４の２１０位のＡから１２０
６位のＧまでのＤＮＡ配列でなる、マウスゲノム由来の
ＤＮＡ配列である。

【００２３】本発明のマウスＢＮＰおよびその前駆体の
ＤＮＡ配列の同定の一例を、工程の順に以下に示す。

【００２４】（１）マウスゲノムＤＮＡライブラリーの
スクリーニングならびにマウスＢＮＰおよびその前駆体
をコードするＤＮＡの配列の決定既に配列が知られているラットＢＮＰｃＤＮＡ（Ogawa
ら、Circ. Res. 69:491-500 (1991)）の一部のＤＮＡ断
片をプローブとし、マウスゲノムＤＮＡライブラリー
（Clontech Inc., Mountain View, CA）をスクリーニン
グして、陽性のプラスミドクローンを得る。この陽性の
クローンに含まれるＤＮＡインサートを適当な制限酵素
で切り出し、サブクローニングを行った後、ジデオキシ
法などの公知のＤＮＡシークエンス法で塩基配列の決定
を行う。このようにして、１つのＤＮＡインサートから
得られたマウスＢＮＰを含むポリペプチドをコードする
ゲノムの塩基配列およびそれに対応するアミノ酸配列を
配列表の配列番号２に示す。

【００２５】（２）マウスＢＮＰおよびその前駆体のｃ
ＤＮＡ配列の決定上記（１）項で得られたゲノムＤＮＡの配列と比較する
ために、次のようにしてマウスＢＮＰのｃＤＮＡのクロ
ーニングを行い、その塩基配列を決定する。それにはま
ず、マウス心室の細胞から、常法によりＲＮＡを抽出す
る。このＲＮＡに逆転写酵素を作用させてｃＤＮＡを作
成する。このｃＤＮＡを鋳型として、適当なプライマー
を用いたＰＣＲ法にて、目的のＢＮＰｃＤＮＡを増幅さ
せて得ることができる。ＰＣＲ法に用いるプライマー
は、例えば上記（１）項で得られたゲノムＤＮＡの配列
を基に作成する。

【００２６】このようにして得られたマウスＢＮＰのｃ
ＤＮＡ配列を適当なベクターにサブクローニングして、
同様にジデオキシ法などの公知のＤＮＡシークエンス法
で塩基配列の決定を行う。このようにして得られたマウ
ス脳利尿ペプチドのｃＤＮＡ塩基配列およびそれに対応
するアミノ酸配列を配列表の配列番号１に示す。

【００２７】（３）マウスＢＮＰおよびその前駆体のゲ
ノムＤＮＡ配列の解析配列表の配列番号２に記載のように、マウスＢＮＰのＤ
ＮＡ配列は、少なくとも３個のエキソンと２個のイント
ロンとを有すると考えられる。イントロンは、３３６位
のＧから５２９位のＧまで、および７５３位のＧから１
１９５位のＧまでであると考えられる。このイントロン
の位置は、上記（１）項で得られたゲノムＤＮＡの配列
と上記（２）項で得られたｃＤＮＡ配列とを比較するこ
とにより、決定された。

【００２８】配列の５’側には、推定の翻訳開始部位か
ら約１００ｂｐ上流に、典型的なＴＡＴＡＡＡ配列（Ｔ
ＡＴＡｂｏｘ）が認められた。ヒト、ブタおよびイヌの
ＢＮＰ遺伝子の５’非翻訳部位にみられるＡＧＣ反復配
列は認められなかった。

【００２９】上記遺伝子構造から、マウスＢＮＰとして
は配列表の配列番号１に示すように、−７６位のアミノ
酸であるMetから４５位のLeuまでの１２１個のアミノ酸
でなるプレプロ型のＢＮＰ、−５１位のSerから４５位
のLeuまでの９６個のアミノ酸でなるプロ型のＢＮＰ、
および１位のSerから４５位のLeuまでの４５個のアミノ
酸でなるＢＮＰが存在することがわかる。マウスプレプ
ロ型ＢＮＰは、ラットプレプロ型ＢＮＰと７８％の相同
性しか有さず、さらにマウスＢＮＰとラットＢＮＰとで
は６４％の相同性しかなかった。このことは、マウスＡ
ＮＰとラットＡＮＰとが同一であることと、対照的であ
った。

【００３０】同様の工程で、第２エキソンの先頭のLys
が欠損しているＢＮＰも得られた。この欠損ＢＮＰのｃ
ＤＮＡ配列を配列表の配列番号３に、ゲノムＤＮＡ配列
を配列表の配列番号４に示す。

【００３１】（４）マウスＢＮＰおよびその前駆体のＤ
ＮＡを用いた発現ベクターの構築および該発現ベクター
を用いたポリペプチドの発現マウスＢＮＰおよびその前駆体のＤＮＡ配列配列を用い
て、発現ベクターが構築される。例えば、ヒトインター
フェロンγ融合グルカゴン発現プラスミドであるTrppAT
ΔCyshuIFNγ／グルカゴン（ヨーロッパ特許出願公開０
３８１４３３号）に本発明のＤＮＡ断片を挿入して構築
される。この発現ベクターを適当な宿主細胞に導入する
ことによって形質転換体が得られる。宿主細胞として
は、例えば大腸菌Ｋ１２株Ｃ６００、ＪＭ１０３、ＡＧ
−１、９３１などが挙げられる。この形質転換体を適当
な条件で培養することにより、所望のマウスＢＮＰある
いはその前駆体が得られる。

【００３２】（５）マウス各組織におけるＢＮＰｍＲＮ
Ａの存在種々のマウス組織から全ＲＮＡを単離し、プローブとし
て本発明のマウスＢＮＰをコードする放射線標識ＤＮＡ
断片を用いて、ノーザンブロットハイブリダイゼーショ
ンを行った。その結果、マウスＢＮＰのＲＮＡは、マウ
スの心室および心房で検出され、心室および心房がＢＮ
Ｐの主要な産生部位であることが確認された。

【００３３】

【実施例】本発明を以下の実施例によりさらに説明す
る。

【００３４】（１）マウスゲノムライブラリーのスクリ
ーニングおよびマウスＢＮＰおよびその前駆体をコード
するＤＮＡ配列の決定マウスゲノムＤＮＡライブラリー（Clontech Inc., Mou
ntain View, CA）を、ハイブリダイゼーション用プロー
ブとして既に報告されているラットＢＮＰｃＤＮＡ（Og
awaら、Circ. Res. 69:491-500 (1991)）の断片を用い
て次のように２回スクリーニングした。

【００３５】まず、バクテリオファージλＥＭＢＬ−３
ＳＰ６／Ｔ７ベクターを用いて作成された上記マウスゲ
ノムＤＮＡライブラリーを、E. coli LE391株に導入し
た。これをコロニー／プラークスクリーンフィルター
（Du Pont. Boston, MA）へ、二本鎖の状態で移した。
フィルターと結合したＤＮＡを変性させ、ＵＶ照射機
（Stratalinker, Stratagene, La Jolla, CA）を用いた
ＵＶ照射によって固定させた。そのフィルターを２００
ｍＭトリス塩酸（ｐＨ７．５）、１ＭＮａＣｌ、１０％
デキストラン硫酸、１％ＳＤＳ、２００μｇ／ｍｌ酵母
ｔＲＮＡおよび２００μｇ／ｍｌ剪断サケ精子ＤＮＡ含
有の溶液中で６０℃においてプレハイブリダイズさせ
た。次に、上記プレハイブリダイゼーション溶液に³²Ｐ
標識した上記ラットＢＮＰｃＤＮＡプローブを加え、こ
の容器を用いてハイブリダイゼーションを行った。

【００３６】ハイブリダイゼーションの後、そのフィル
ターを、２×ＳＳＣ（１×ＳＳＣは０．１６ＭＮａＣ
ｌ、０．０１６Ｍクエン酸ナトリウム）および０．１％
ＳＤＳで室温で３０分間、２×ＳＳＣおよび０．１％Ｓ
ＤＳで５０℃で１５分間、２×ＳＳＣおよび０．１％Ｓ
ＤＳで、６０℃で３０分間、連続して洗浄した。スクリ
ーニングの２段階目においては、フィルターにＤＮＡを
結合させた後、２×ＳＳＣおよび０．１％ＳＤＳで、室
温で１５分間、次に２×ＳＳＣおよび０．１％ＳＤＳ
で、６０℃で３０分間洗浄した。

【００３７】約１×１０⁶個のクローンをスクリーニン
グし、９個の陽性のクローンを得た。１つのクローン
（λｍＢＮＰ２０）由来で約１６．２ｋｂのマウスＢＮ
Ｐ遺伝子断片を有するＤＮＡおよび該ＤＮＡの約３．２
ｋｂのEcoRI-EcoRI消化断片をさらに次のように分析し
た。

【００３８】上記約３．２ｋｂのＤＮＡ断片をBluescri
ptベクターへサブクローニングし、ジデオキシ鎖停止法
によってＤＮＡの配列決定を行った。二本鎖ＤＮＡの両
方の鎖を解読することにより上記ＤＮＡ配列の正しいこ
とが立証された。

【００３９】決定されたＤＮＡ配列を配列表の配列番号
２に示す。

【００４０】（２）マウスＢＮＰをコードするＤＮＡ配
列の解析マウスの心室細胞由来のＲＮＡから、逆転写酵素を用い
てｃＤＮＡを調製した。次に、既知の上記（１）項で得
られたＢＮＰのゲノムＤＮＡ配列を基に、ＢＮＰの翻訳
部分が含まれるようにプライマーを設定し、このｃＤＮ
ＡをＰＣＲ法により増幅させた。増幅させたＤＮＡ断片
をBluescriptベクターにクローニングして、常法により
その塩基配列を決定した。塩基配列を配列表の配列番号
１に示す。この配列と上記（１）項で得られたゲノムＤ
ＮＡ配列とを比較して、エキソンおよびイントロンの位
置を決定した。

【００４１】（３）マウス各組織におけるＢＮＰｍＲＮ
Ａの存在マウス各組織から、全ＲＮＡをグアニジウムイソシアネ
ート／塩化セシウム法で単離した。全ＲＮＡを１．４％
アガロースゲルで分離し、２０×ＳＳＣ中でそれぞれの
バンドをナイロンメンブレン（Schleicher & Schuell I
nc., Keene, NH）に移した。

【００４２】ブロットを５０％ホルムアミド、４×ＳＳ
Ｃ、５×デンハルト溶液、０．５％ＳＤＳ、１０％デキ
ストラン硫酸、２５０μｇ／ｍｌ変性サケ精子ＤＮＡお
よびプローブとして上記（１）項で作成したＤＮＡ断片
（ランダムプライミング法で標識）を含む溶液中で、４
２℃にて１６時間ハイブリダイゼーションを行った。ブ
ロットを室温で２０分ずつ、２×ＳＳＣおよび０．１％
ＳＤＳを含む溶液で２回洗浄し、さらに５５℃で２回
（３０分ずつ）０．１×ＳＳＣと０．１％ＳＤＳとを含
む溶液で洗浄し、その後オートラジオグラフィーを行っ
た。その結果から、マウス心室および心房由来の組織中
に０．９ｋｂのバンドが確認され、本発明のＢＮＰのｍ
ＲＮＡが主に心室および心房に存在することがわかっ
た。

【００４３】

【発明の効果】本発明によれば、このように、マウス由
来の４５個のアミノ酸でなるＢＮＰおよびそれをコード
するＤＮＡ配列、該４５個のアミノ酸を含む９６個のア
ミノ酸でなるプロＢＮＰおよびそれをコードするＤＮＡ
配列、および該９６個のアミノ酸を含む１２１個のアミ
ノ酸でなるプレプロＢＮＰおよびそれをコードするＤＮ
Ａ配列が得られる。これらを用いて検体中のＢＮＰの検
出、測定、あるいはＢＮＰを用いた各種試薬、薬剤など
が調製可能となる。

【００４４】

【配列表】

【００４５】

【配列番号：１】配列の長さ：831 配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA 起源生物名：マウス配列の特徴特徴を表す記号：CDS 存在位置：210..572 特徴を決定した方法：S 配列 GAATTCTCAG GTCCTGAGCT CAGCCGGCAG GAATCAGCTG ATAAATCAGA GATAACCCCA 60 CCCCTACTCC GTGAAAAGGT CTGGCCGGAC ACTCAGCCCC AGTATAAAAG GCAGAGGCAC 120 CGTTGTTGAA GACACCAGTG CACAAGCTGC TTGGGGAGGC GAGACAAGGG AGAACACGGC 180 ATCATTGCCT GGCCCATCGC TTCTGCGGC ATG GAT CTC CTG AAG GTG CTG TCC 233 Met Asp Leu Leu Lys Val Leu Ser -75 -70 CAG ATG ATT CTG TTT CTG CTT TTC CTT TAT CTG TCA CCG CTG GGA GGT 281 Gln Met Ile Leu Phe Leu Leu Phe Leu Tyr Leu Ser Pro Leu Gly Gly -65 -60 -55 CAC TCC TAT CCT CTG GGA AGT CCT AGC CAG TCT CCA GAG CAA TTC AAG 329 His Ser Tyr Pro Leu Gly Ser Pro Ser Gln Ser Pro Glu Gln Phe Lys -50 -45 -40 ATG CAG AAG CTG CTG GAG CTG ATA AGA GAA AAG TCG GAG GAA ATG GCC 377 Met Gln Lys Leu Leu Glu Leu Ile Arg Glu Lys Ser Glu Glu Met Ala -35 -30 -25 CAG AGA CAG CTC TTG AAG GAC CAA GGC CTC ACA AAA GAA CAC CCA AAA 425 Gln Arg Gln Leu Leu Lys Asp Gln Gly Leu Thr Lys Glu His Pro Lys -20 -15 -10 -5 AGA GTC CTT CGG TCT CAA GGC AGC ACC CTC CGG GTC CAG CAG AGA CCT 473 Arg Val Leu Arg Ser Gln Gly Ser Thr Leu Arg Val Gln Gln Arg Pro 1 5 10 CAA AAT TCC AAG GTG ACA CAT ATC TCA AGC TGC TTT GGG CAC AAG ATA 521 Gln Asn Ser Lys Val Thr His Ile Ser Ser Cys Phe Gly His Lys Ile 15 20 25 GAC CGG ATC GGA TCC GTC AGT CGT TTG GGC TGT AAC GCA CTG AAG TTG 569 Asp Arg Ile Gly Ser Val Ser Arg Leu Gly Cys Asn Ala Leu Lys Leu 30 35 40 TTG TAGGAAGACC TCCTGGCTGC AGGAGACTCC AGTTTCTGAC TCTGCCTGGG 622 Leu 45 TCTCTTTCCC CAGCTCTGGG ACCACCTTTG AAGTGATCCT ATTTATTTAT TTATTTATAT 682 TTATTTTTAT TTTTATTTTT TAATTTATTT TGTTGTTTTT CTACAAGACT GTTTCTTATC 742 TTGGAGCACA AACTTGCCAC AACATAATAA ACATAGCGTA TTTCCTGCTT TTGAAAAGGA 802 TTTGTGTCCG TGAGTTTCAA TCTATCTCT 831

【００４６】

【配列番号：２】配列の長さ：1468 配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：Genomic DNA 起源生物名：マウス配列の特徴特徴を表す記号：CDS 存在位置：210..1209 特徴を決定した方法：S 配列 GAATTCTCAG GTCCTGAGCT CAGCCGGCAG GAATCAGCTG ATAAATCAGA GATAACCCCA 60 CCCCTACTCC GTGAAAAGGT CTGGCCGGAC ACTCAGCCCC AGTATAAAAG GCAGAGGCAC 120 CGTTGTTGAA GACACCAGTG CACAAGCTGC TTGGGGAGGC GAGACAAGGG AGAACACGGC 180 ATCATTGCCT GGCCCATCGC TTCTGCGGC ATG GAT CTC CTG AAG GTG CTG TCC 233 Met Asp Leu Leu Lys Val Leu Ser -75 -70 CAG ATG ATT CTG TTT CTG CTT TTC CTT TAT CTG TCA CCG CTG GGA GGT 281 Gln Met Ile Leu Phe Leu Leu Phe Leu Tyr Leu Ser Pro Leu Gly Gly -65 -60 -55 CAC TCC TAT CCT CTG GGA AGT CCT AGC CAG TCT CCA GAG CAA TTC AAG 329 His Ser Tyr Pro Leu Gly Ser Pro Ser Gln Ser Pro Glu Gln Phe Lys -50 -45 -40 ATG CAG GTGAGCACTG AGGGTCTGCC TGAAGGGTTT GGGAAGCGGC AATGAAAAGA 385 Met Gln -35 CCTCGAGTCC TTTGGGAATT AGCCATGTGA GAGTCAGCAA ACTGAAAGAT TGGGCAGCAT 445 ATCTCTTAAC TGATGAGCAC TATGGAAGGA TGGGGGATTC AGGTGTGTGT GTTTCTGACG 505 TCTGGGCTCC CCAATCCATC ACAG AAG CTG CTG GAG CTG ATA AGA GAA AAG TCG 559 Lys Leu Leu Glu Leu Ile Arg Glu Lys Ser -30 -25 GAG GAA ATG GCC CAG AGA CAG CTC TTG AAG GAC CAA GGC CTC ACA AAA 607 Glu Glu Met Ala Gln Arg Gln Leu Leu Lys Asp Gln Gly Leu Thr Lys -20 -15 -10 GAA CAC CCA AAA AGA GTC CTT CGG TCT CAA GGC AGC ACC CTC CGG GTC 655 Glu His Pro Lys Arg Val Leu Arg Ser Gln Gly Ser Thr Leu Arg Val -5 1 5 CAG CAG AGA CCT CAA AAT TCC AAG GTG ACA CAT ATC TCA AGC TGC TTT 703 Gln Gln Arg Pro Gln Asn Ser Lys Val Thr His Ile Ser Ser Cys Phe 10 15 20 GGG CAC AAG ATA GAC CGG ATC GGA TCC GTC AGT CGT TTG GGC TGT AAC 751 Gly His Lys Ile Asp Arg Ile Gly Ser Val Ser Arg Leu Gly Cys Asn 25 30 35 40 G GTGAGCACCT ACCTTGCCAC TTCCCTGCAA AGCTGCACAC CCATCCCATC 802 Ala CCCGTGCATG CTACCCTTAG AGGCCCCTAG GTTTGCTATC TGGCATACTC CTGCAGCCTG 862 TCAGGAAATA TCACATGGGT TCTGCATTAC ATTCTCACAG GTCAGCACCT ACCTTCCATC 922 AGAGGGGTCA CACGCTCTGA GGGAGCAGAC TGCCTGATGT CTAATCACCC CTTCACAAGG 982 CAGAAAGAGT TCTGAGCATT TCCCCTCAGG CAAAGGGCAT GCCCAACCCA CTTTACAGGA 1042 GAAACAGAGG CCCTGTGAGA TAGCTTTTTC CAGAGCCTTA AACTTCGACA TCATCTGGGG 1102 ACTGAAGATG GGGGTGTGGT GGTGGTGGGG GACTCGGCAC CTGCTTCAGT TTCACTTCCG 1162 AGTGTGACAT TGCCCTGTCT CTCCTCCCCA CAG CA CTG AAG TTG TTG TAGGAAGACC 1219 Leu Lys Leu Leu 45 TCCTGGCTGC AGGAGACTCC AGTTTCTGAC TCTGCCTGGG TCTCTTTCCC CAGCTCTGGG 1279 ACCACCTTTG AAGTGATCCT ATTTATTTAT TTATTTATAT TTATTTTTAT TTTTATTTTT 1339 TAATTTATTT TGTTGTTTTT CTACAAGACT GTTTCTTATC TTGGAGCACA AACTTGCCAC 1399 AACATAATAA ACATAGCGTA TTTCCTGCTT TTGAAAAGGA TTTGTGTCCG TGAGTTTCAA 1459 TCTATCTCT 1468

【００４７】

【配列番号：３】配列の長さ：828 配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA 起源生物名：マウス配列の特徴特徴を表す記号：CDS 存在位置：210..569 特徴を決定した方法：S 配列 GAATTCTCAG GTCCTGAGCT CAGCCGGCAG GAATCAGCTG ATAAATCAGA GATAACCCCA 60 CCCCTACTCC GTGAAAAGGT CTGGCCGGAC ACTCAGCCCC AGTATAAAAG GCAGAGGCAC 120 CGTTGTTGAA GACACCAGTG CACAAGCTGC TTGGGGAGGC GAGACAAGGG AGAACACGGC 180 ATCATTGCCT GGCCCATCGC TTCTGCGGC ATG GAT CTC CTG AAG GTG CTG TCC 233 Met Asp Leu Leu Lys Val Leu Ser -75 -70 CAG ATG ATT CTG TTT CTG CTT TTC CTT TAT CTG TCA CCG CTG GGA GGT 281 Gln Met Ile Leu Phe Leu Leu Phe Leu Tyr Leu Ser Pro Leu Gly Gly -65 -60 -55 CAC TCC TAT CCT CTG GGA AGT CCT AGC CAG TCT CCA GAG CAA TTC AAG 329 His Ser Tyr Pro Leu Gly Ser Pro Ser Gln Ser Pro Glu Gln Phe Lys -50 -45 -40 ATG CAG CTG CTG GAG CTG ATA AGA GAA AAG TCG GAG GAA ATG GCC CAG 377 Met Gln Leu Leu Glu Leu Ile Arg Glu Lys Ser Glu Glu Met Ala Gln -35 -30 -25 -20 AGA CAG CTC TTG AAG GAC CAA GGC CTC ACA AAA GAA CAC CCA AAA AGA 425 Arg Gln Leu Leu Lys Asp Gln Gly Leu Thr Lys Glu His Pro Lys Arg -15 -10 -5 GTC CTT CGG TCT CAA GGC AGC ACC CTC CGG GTC CAG CAG AGA CCT CAA 473 Val Leu Arg Ser Gln Gly Ser Thr Leu Arg Val Gln Gln Arg Pro Gln 1 5 10 AAT TCC AAG GTG ACA CAT ATC TCA AGC TGC TTT GGG CAC AAG ATA GAC 521 Asn Ser Lys Val Thr His Ile Ser Ser Cys Phe Gly His Lys Ile Asp 15 20 25 CGG ATC GGA TCC GTC AGT CGT TTG GGC TGT AAC GCA CTG AAG TTG TTG 569 Arg Ile Gly Ser Val Ser Arg Leu Gly Cys Asn Ala Leu Lys Leu Leu 30 35 40 45 TAGGAAGACC TCCTGGCTGC AGGAGACTCC AGTTTCTGAC TCTGCCTGGG TCTCTTTCCC 629 CAGCTCTGGG ACCACCTTTG AAGTGATCCT ATTTATTTAT TTATTTATAT TTATTTTTAT 689 TTTTATTTTT TAATTTATTT TGTTGTTTTT CTACAAGACT GTTTCTTATC TTGGAGCACA 749 AACTTGCCAC AACATAATAA ACATAGCGTA TTTCCTGCTT TTGAAAAGGA TTTGTGTCCG 809 TGAGTTTCAA TCTATCTCT 828

【００４８】

【配列番号：４】配列の長さ：1465 配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：Genomic DNA 起源生物名：マウス配列の特徴特徴を表す記号：CDS 存在位置：210..1206 特徴を決定した方法：S 配列 GAATTCTCAG GTCCTGAGCT CAGCCGGCAG GAATCAGCTG ATAAATCAGA GATAACCCCA 60 CCCCTACTCC GTGAAAAGGT CTGGCCGGAC ACTCAGCCCC AGTATAAAAG GCAGAGGCAC 120 CGTTGTTGAA GACACCAGTG CACAAGCTGC TTGGGGAGGC GAGACAAGGG AGAACACGGC 180 ATCATTGCCT GGCCCATCGC TTCTGCGGC ATG GAT CTC CTG AAG GTG CTG TCC 233 Met Asp Leu Leu Lys Val Leu Ser -75 -70 CAG ATG ATT CTG TTT CTG CTT TTC CTT TAT CTG TCA CCG CTG GGA GGT 281 Gln Met Ile Leu Phe Leu Leu Phe Leu Tyr Leu Ser Pro Leu Gly Gly -65 -60 -55 CAC TCC TAT CCT CTG GGA AGT CCT AGC CAG TCT CCA GAG CAA TTC AAG 329 His Ser Tyr Pro Leu Gly Ser Pro Ser Gln Ser Pro Glu Gln Phe Lys -50 -45 -40 ATG CAG GTGAGCACTG AGGGTCTGCC TGAAGGGTTT GGGAAGCGGC AATGAAAAGA 385 Met Gln -35 CCTCGAGTCC TTTGGGAATT AGCCATGTGA GAGTCAGCAA ACTGAAAGAT TGGGCAGCAT 445 ATCTCTTAAC TGATGAGCAC TATGGAAGGA TGGGGGATTC AGGTGTGTGT GTTTCTGACG 505 TCTGGGCTCC CCAATCCATC ACAG CTG CTG GAG CTG ATA AGA GAA AAG TCG GAG 559 Leu Leu Glu Leu Ile Arg Glu Lys Ser Glu −３０
−２５ＧＡＡＡＴＧＧＣＣＣＡＧＡＧＡＣＡＧＣＴＣＴＴＧＡＡＧ
ＧＡＣＣＡＡＧＧＣＣＴＣＡＣＡＡＡＡＧＡＡ６０７ＧｌｕＭｅｔＡｌａＧｌｎＡｒｇＧｌｎＬｅｕＬｅｕＬｙｓ
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５ＣＡＧＡＧＡＣＣＴＣＡＡＡＡＴＴＣＣＡＡＧＧＴＧＡＣＡ
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２０２５ＣＡＣＡＡＧＡＴＡＧＡＣＣＧＧＡＴＣＧＧＡＴＣＣＧＴＣ
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３５４０ＧＴＧＡＧＣＡＣＣＴＡＣＣＴＴＧＣＣＡＣＴＴＣＣＣＴＧＣＡＡＡＧＣ
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ＴＴＧＴＴＧＴＡＧＧＡＡＧＡＣＣＴＣＣＴＧＧＣＴＧＣ１２２６ＬｅｕＬｙｓ
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ＴＴＴＴＴＡＴＴＴＴＴＡＴＴＴＴＴＴＡＡＴＴＴＡＴＴＴ１３４６ＴＧＴＴＧＴＴＴＴＴＣＴＡＣＡＡＧＡＣＴＧＴＴＴＣＴＴＡＴＣＴＴＧ
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ＧＴＧＴＣＣＧＴＧＡＧＴＴＴＣＡＡＴＣＴＡＴＣＴＣＴ１４６５

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ 7823−4ＢＧ０１Ｎ 33/53 Ｄ 8310−2Ｊ (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19）Ｃ０７Ｋ 99:00

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】配列表の配列番号１の１位のSerから４５
位のLeuまでのアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【請求項２】配列表の配列番号１の−５１位のSerから
４５位のLeuまでのアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【請求項３】配列表の配列番号１の−７６位のMetから
４５位のLeuまでのアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【請求項４】配列表の配列番号３の−５０位のSerから
４５位のLeuまでのアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【請求項５】配列表の配列番号３の−７５位のMetから
４５位のLeuまでのアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【請求項６】請求項１から５のいずれかに記載のポリペ
プチドをコードするＤＮＡ配列。
【請求項７】配列表の配列番号１の４３８位のＴから５
７２位のＧまでのＤＮＡ配列でなる、請求項６に記載の
ＤＮＡ配列。
【請求項８】配列表の配列番号１の２８５位のＴから５
７２位のＧまでのＤＮＡ配列でなる、請求項６に記載の
ＤＮＡ配列。
【請求項９】配列表の配列番号１の２１０位のＡから５
７２位のＧまでのＤＮＡ配列でなる、請求項６に記載の
ＤＮＡ配列。
【請求項１０】配列表の配列番号３の２８５位のＴから
５６９位のＧまでのＤＮＡ配列でなる、請求項６に記載
のＤＮＡ配列。
【請求項１１】配列表の配列番号３の２１０位のＡから
５６９位のＧまでのＤＮＡ配列でなる、請求項６に記載
のＤＮＡ配列。
【請求項１２】配列表の配列番号２の６３２位のＴから
１２０９位のＧまでのＤＮＡ配列でなる、マウスゲノム
由来のＤＮＡ配列。
【請求項１３】配列表の配列番号２の２８５位のＴから
１２０９位のＧまでのＤＮＡ配列でなる、マウスゲノム
由来のＤＮＡ配列。
【請求項１４】配列表の配列番号２の２１０位のＡから
１２０９位のＧまでのＤＮＡ配列でなる、マウスゲノム
由来のＤＮＡ配列。
【請求項１５】配列表の配列番号４の２８５位のＴから
１２０６位のＧまでのＤＮＡ配列でなる、マウスゲノム
由来のＤＮＡ配列。
【請求項１６】配列表の配列番号４の２１０位のＡから
１２０６位のＧまでのＤＮＡ配列でなる、マウスゲノム
由来のＤＮＡ配列。