JPH05506034A - アクチン結合性化合物の療法的使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 立ｊＪと【称 本発明は、政府援助を得てなされたものであり、政府が本発明に係る特定の装本 発明は、アクチン関連障害、特に血漿中の又は組織及び器官の細胞外空間に析出 されるアクチン・レベルを減少することが望ましい、障害の処置方法に関す１１ 立亙ｌ アクチンは、動物細胞のなかで最も豊富なタンパク質であり、多くの有核細胞の タンパク質の１０−２０％また筋細胞のタンパク質の３０％を構成する。アクチ ン分子は、それぞれＡＴＰ分子と結合し、長い糸状体に自己組立し、その間に動 物組織の損傷は、結果として血流を含む細胞外の空間へのアクチンの放出を生ず る。非筋細胞アクチンの約半分は、線維アクチン（球形アクチン単量体から組み 合わされる二重らせん、棒状、糸状体のアクチン）であるが、細胞外の流体のイ オン状態はアクチン重合を好むので、死にかけているＪＩＩｌｌから血液中に放 出される実質的にすべてのアクチンは、フィラメントに重合されると予測される （リント、ニス・イー等、＾＋ｓ　ｖ　Ｒｓ　ｉ　Ｄｉｓ　上：　４２９−４３ ４　（＋９８８））、精製溶液中で、フィラメント短縮タンパク質がない場合に は、アクチン・フィラメントは、容易に歎ミクロンの長さとなることもできる。

損傷した細胞から放出されるアクチンの断片は、不可逆的に変性するものもある が、以下に述べる細胞内のアクチン結合タンパク質の一つに結合するものもある 。このアクチンは、引き続き単量体のまアクチンと自然結合するタンパク質は多 数ある（アクチン結合生タンパク質については、ストツセル、ティー・ビー等、 Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　Ｃｅ１ｌ　８ｉｏ１．１：３５３−４０２　（＋９８５） ：ボラード、ティー・ディー等、Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　Ｂｉｏｃｈｅ＋＋、　５ ５：９８７−１０３５（１９８６）を参照）が、ゲルゾリン（ｇｅｌｓｏｌｉｎ ）及びＤＢＰ（ビタミンＤ結合性タンパク質）の２種類のタンパク質が、主に細 胞外アクチンの結合を担当してｔすると考えられてし＼る（ジャンミー、ビー・ エイ釈　胆立η刊＋５２９−５３０　（＋９８７））。

ゲルゾリンは、クローン化されており（キワットカウスキー、ディー・ジエイ等 、キワットカウスキー、ディー・ジエイ等５．Ｌ−急ｄ上」ユ劇、、　＋０８＋ １７１７−１７２６　（１９８９）、ウェイ、エム等、Ｊ、　Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏ ｌ、　１０９：５９３−６０５　（１９８９））、Ｄ　Ｂ　Ｐもクローン化され テイル（クーツ、エン・イー等、　ｌ’＋＋　＋ｎｖ　ｓｔ　Ｊ７＋２４２０− ２４２４　（１９８５）、ヤン、エフ等、Ｐｒｏｃ、　Ｎｔｌ、　Ａｃａｄ、　 Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　８２ニア９９４−７９９８　（＋９８５））。

細胞内のアクチンは大量であるので、死ζ二かけてしする細胞からのアクチンの 放出は、血漿の細胞外流体の粘性の増加及び／又は細胞のエントラップその他の 未確認の有害な効果を有する方法のいずれかによって、マイクロ環境に重大な影 響を与えるに十分な量のアクチンを提供する。ｌｌｌ１胞外遊離アクチンの浸出 （よ、動物細胞、特に腎及び心肺系に有害なものである（〕＼−／＜−、ケイ・ ディー等、Ｃｌ１ｎ。

のアクチンの浸出は、腎機能不全と一貫したＢＵＮ及びクレアチニン・レベルの 一時的な上昇を生ずる。

さらに、フィラメント状の細胞外アクチン分子それぞれが、これと結合してしす るＡＤＰを有しているため、血液中における細胞外アクチンの存在は、宿主ζ二 とって有益でない方法で血小板の凝集を誘発し、又は増大させる傾向（二ある（ リント、ニス・イー等、組、肱ニュ飢ムム」…ｌ］：４２９−４３４　（＋９８ ８）、スカーボロー等、旦うろことが提案されている（リント、ニス・イー等、 　１１ｎ■ｎｖＳｔ、７８　：　７３６−７ス、ディー・ビー等、Δ」Ｌ２−１ Ｌ、一旦ａｔｈ　ｊ旦ぶ、＋２６１−２６７　（１９８８）Ｈ二おし〜て、また ウサギのフェニルヒドラジン誘発容血（スミス、ダブリュー・オー等、　−ｕ： ２１４−２１８）においてみられることは知られてし＼るところである。臨床的 な憂結を二おｌＬＸて、成人呼吸疲労症候群ＣＡＲＤＳ）患者（リント、ニス・ イー等、Ａｍ、　Ｒｅｖ、　Ｒｅｓ　ｉｒ、　Ｄｉｓ。

を改善し、処理し、又は防止できる方法力（必要である。

１に且１ また、本発明の目的は、臨床サンプルのアクチン・レベル検出のための診断検能 動断片を投与することによって得られたものである。

Ｌ！Ｌ！Ｌ撮 明細書及び請求の範囲の理解をより明確かつ一貫したものとするため、かかる用 語に与えられる範囲を含めて、以下の定義を定める。

で投与できる。

血ＪＬＥ監 「血栓事象ノの用語は、結果として線維製溶解を生ずる血管の閉塞、血栓、梗塞 その他の生物学的摂動に係る血管の状態を意味する。

監！ 「動物」の用語は、血流又は細胞外空間における遊離アクチン又はアクチン・フ ィラメントの滞留が動物生理学的に有害となるすべての動物を含む、かかる動物 の中でも主要なものは人間であるが、本発明は人間に限定することを趣旨とする ものではなく、本発明の有利な効能を経験し得る一切の動物を処置することは、 本発明の趣旨の＠匣内である。

腹に五五１ アクチン結合性化合物の「効能のある量」は、動物に対するアクチンの有害な影 響を減するか又は除去するに十分な量である。

、　はとん　い 精製前に通常かつ自然的に見られる素材から実質的に精製された場合には、素材 は、「自然汚染物がほとんどない」状態にあるといえる。アクチン結合性化合物 と結合する可能性のある自然汚染物の例としては、非アクチン結合性ペプチド、 炭水化物、グリコシレートされたペプチド、脂質、皮膜等が挙げられる。また、 生体内又は試験管内の物質において通常かつ自然的に見られるかかる汚染物が素 材のサンプルにほとんどない場合には、素材に自然汚染物がほとんどないと言え る。「はとんどない」とは、完全に存在しないか、又はその存在が（１）当該調 製が動物に投与されるときにｗｉ製において活性剤（本明細書においてアクチン 結合性化合物）の希望の治覆土の効果に影響を与えず、かつ（２）かかる調製の 動物への投与の結果動物にとって有害とならないような低い濃度で存在する場合 のいずれかを意味する。

１亙 「投与」の用語は、医療の当業者に知られている適切な手段（経腸又は非経口的 （例えば静脈）投与を含むがこれらに限定されない）での動物へのアクチン結合 性化合物の導入を含む。

血１−４］ｕＬ１矢皇 「治療上受容可能な塩」の用語は、本発明のアクチン結合性化合物の塩を含むこ とが意図されている。かかる塩は、例を挙げれば、硫酸、塩酸、硝酸、リン酸等 の酸、又はアルカリ、もしくはアルカリ土金属水酸化物、水酸化アンモニウム、 水酸化アルキルアンモニウム等の基、といった医療上受容可能な酸又は基から形 成できる。

ｌ　ｔ 「治療上受容可能な運搬者」の用語は、本発明のアクチン結合性化合物の１１１ ｇ５の添加物として使用され、よってかかる化合物投与のキャリア又は補助剤を 提供する、溶剤、キャリ乙　希釈剤等を含むことが意図されている。

！ 「処置」又は「処置するＪの用語は、アクチン関連障害の予防、回復、防止又は 治療を含む目的のための対象物に対するアクチン結合性化合物の投与を含むこと が意図されている。

「断片Ｊの用語は、アクチン単量体を結合できるアクチン結合性化合物の部分を 提供する分子の部分を含む、この用語は、あらゆる原材料、例を挙げれば、自然 発生するペプチド・シーケンス、合成又は化学合成されたペプチド・シーケンス 及び遺伝的に処理されたペプチド・シーケンス算の原材料から形成されるアクチ ン結合性断片を含む、さらに、かかる断片がペプチドである場合には、かかるア クチン結合性タンパク質のペンプチドの断片は、アクチン結合性タンパク質の変 異体を含む。

【Ａ盗 アクチン結合性化合物等の化合物の「変異体」は、自生化合物又はその断片のい ずれかと構造的に、また生物学的活動において実質的にＩｌｌ偏する化合物をい う。

本発明の化合物の生物学的活動は、アクチンと結合し、修正されていないアクチ ンよりも富の少ない形態にアクチンを修正する能力である。かかる修正は、化合 物の本質的な結合の結果、又はかかる結合から生ずる化学的又は酵素による反応 の結果である。

１１班差差 アクチン結合性化合物の「官能誘導体」は、アクチン結合性化合物とほぼ類似す る生物学的活動を有する誘導体である。「はぼ項以する」とは、量的には興なる が、質的には同一の活動を意味する９例を挙げれば１本発明のアクチン結合性タ ンパク質の官能誘導体は、アクチン結合性タンパク質と同様のアミノ酸土台を含 むが、例えば診断検定又は医療処置の実施についての当該修正の必要性によって 、結合燐脂賀、又は共有結合する炭水化物等の翻訳後修正等のその他の修正を含 む０本明細書において使用される場合には、かかる用語は、アクチン結合性化合 物の化学的誘導体を含む、かかる誘導体は、化合物の可溶性、吸収、生物学的な 半減期等を改善できる。また、誘導体は、分子の毒性を減じ、又は分子等の望ま しくない副作用を除去もしくは減少できる。誘導体、特に、−かかる効能を媒介 できる化学的成分は、レミントンズ・ファーマセウティカル・サイエンス（Ｒｅ ＋＋ｉｎｇｔｏｎ″ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅｓ）（＋ ９８０）に開示されている。かかる成分を分子とカップリングする工程は、当Ｓ ｔに既知の工程である。「官能誘導体」の用語は、分子の「断片」、「変異体」 、「類似体」又は「化学的な誘導体ｊを含むことが意図されている。

１皿隻 本発明のアクチン結合性化合物の［類似体Ｊは、自生のアクチン結合性化合物又 はその断片のいずれかと機能的にほぼ類似する化合物を意味する０例えば、アク チン結合性タンパク質の類似体は、アクチン結合性タンパク質と同一のアミノ酸 シーケンスを有しないが、かかるアクチン結合性タンパク質の生物学的活動を得 られるに十分な程度にアクチン結合性化合物と相同間係にあるのタンパク質で島 本発明の方法は、２体のあらゆる部位の炎症又は損傷に反応して、アクチンとア クチン結合性タンパク質のゲルゾリン及びＤＢＰとの複合体が血中に現れ、血漿 中の遊離ゲルゾリン及びＤＢＰのレベルが大幅に低下したときに、その結果とし て肺及び／又は腎臓の二次的損傷がしばしば生じるという所見に、部分的に基づ いてい遊離細胞外アクチンの注入が肺及び腎臓にとって有毒であり、かつ繊維素 溶解を抑制することに鑑み、発明者は、肺及び腎臓の二次的組織損傷を引き起こ すのは血中の非複合アクチンであるという所見をなした０発明者は、さらに、組 織損傷及び炎症が、そのような有毒性遊離細胞外アクチンを複合させ、かつ除去 する宿主の機能を飽和状蟻にし得るというユニークな所見をなした。その結果１ 発明者は、細胞外アクチンの毒性効果、特に肺及び／又は腎臓に対する細胞保護 効果の改善は、細胞外アクチンを複合させるか、又はその他の方法で非毒性単量 体形態に変性させるのに十分な量のアクチン結合性化合物を対象物に投与するこ とによって得られるという結論に遣した。

本発明方法の対象である特定のアクチン結合性分子とは、精製された天然及び組 み替え型の７クチン結合性タンパク質、その他の非タンパク性アクチン結合性分 子、及びその生物学的活性断片であり、アクチンを単量体形１に封鎖するか、ア クチン・フィラメントを素早く分離又は解重合するか、宿主細胞にとって有毒で ある部位を被覆することのできる生物学的活性を有する、ユニークなアクチン結 合域の存在によって特徴づけられる。この生物学的活性を有する個々のアクチン 結合域はまた、合成による方法、酵素による方法、タンパク質分解による方法、 化学的方法又は組み替え型ＤＮＡによる方法によって生産し得る。

好適実施態様において、ゲルゾリン、ＤＢＰ、又はそのアクチン結合性断片、又 はゲルゾリンとＤＢＰ及び／又はそのアクチン結合性断片との化合物が、処置を 必要とする対象物に供給される。血漿ゲルゾリン（プレビン又はアクチン解重合 化要素ともいう）及びＤＢＰ（Ｇｃグロブリンともいう）は、血漿中に存在する 二つの高親和性アクチン結合性タンパク質である。高親和性アクチン結合性タン パク質は、アクチンをｌｏ−１よりφさいに−と結合させる。ゲルゾリン及びＤ ＢＰは両方とも血清中のアクチンに結合し、アクチン解重合化活性を有する＋Ｄ ＢＰは単量体アクチンと優先的に結合し、ゲルゾリンはアクチン・フィラメント と優先的に結合する。

ゲルゾリンは、哺乳項の細胞質及び細胞外液から摂取される多機能のアクチン結 合性タンパク質である。ｒｋＬ漿ゲルゾリンは、分子のアミノ末端において２５ 個のアミノ酸が追加されているという点でのみ、細胞ゲルゾリンと興なっており 、両方のゲルゾリンとも一つの遺伝子からの産物である。血漿ゲルゾリンには、 三つのアクチン結合域があり、高親和性をもって球状アクチン（Ｇ−ａｃｔｉｎ ）又は＋線維アクチン（Ｆ−ａｃｔｉｎ）のいずれかと結合する。

血漿ゲルゾリンは、第一アクチン分子と結合するときよりも高い親和性をもって 第二アクチン分子と結合し、従ってｌ対ｌの複合体よりも優先的に２対１の被合 体を形成し、単量体に優先してフィラメントと結合する。線維アクチンに添加さ れると、血漿ゲルゾリンは非タンパク質分解方法でフィラメントを分離し、新た に形成されたフィラメントの一方の端に結合されたままとなる。遊離ゲリゾリン 分子が存在する場合は、これらの分子は、２対ｌのアクチン−ゲルゾリン複合体 のみが存在する状態になるまで、アクチン・フィラメントを完璧に分離し、これ によってフィラメントを素早く解重合する。

′Ｉｌ！離ゲルゾリン分子と、（アクチンとの）複合ゲルゾリン分子は、機能的 特性において興なっている。遊離ゲルゾリンはアクチン・フィラメントを分離で きるが、アクチン−ゲルゾリン複合体はこれを分離できない。

血漿中のゲルゾリンの主な機能は、アクチン・フィラメントを分離することであ る。アクチンより多くゲルゾリンが存在する場合は、ゲルゾリン−アクチン複合 体のみが結果として生じる。アクチンのほうが多い場合は、遊離アクチン低重合 体及びゲルゾリン−アクチン複合体が存在する。アクチン分離は、隣接するアク チン分子の非共有結合の非タンパク質分解分割によって生じる。ゲルゾリンの分 離活性はミクロモルＣａ”−によって活性化され、ホスファチジル・イノシトー ル、パイホスフェート（ＰＩＦ２）及びホスファチジル・イノシトール・モノホ スフェート（ＰＩＦ）−二よって抑制されることが示されている。Ｊｌ胞外Ｃａ ”−濃度はミクロモル・レベルであり、細胞外液は通常、ゲルゾリンを抑制する 形態ではＰＩＰ又はＰＩＦ２を含まないため、血漿ゲルゾリンは細胞外液におい て本質的に活性である。

ＤＢＰにはアクチン結合域が一つあり、本質的に線維アクチンではなく単量体に 結合する。

ある実施態様においては、効能のあるレベルの７クチン結合性化合物が、過度の 細胞外アクチンの二次的毒性効果に対する治療上の恩恵を提供するために投与さ れる＋　「効能のあるレベル」のアクチン結合性化合物とは、遊離細胞外アクチ ンの毒性効果が最低限に改善されるレベルをいう、「過度の」細胞外アクチンと は、二次的組織損傷又は毒性効果なしに、アクチンを結合し、かつ細胞外液から アクチンを除去する血漿タンパク質の機能を越える細胞外アクチンの量を魁＼う 、「二次的」組織損傷又は毒性効果とは、血漿中の過度の細胞外アクチンの存在 によって。

何もなければ健康であった組織、器官及びその細胞に生じる組織損傷又Ｃよ毒性 効果で１通常は身体のあらゆる部位において生じた「−次的」組織損傷の結果と して生じる組織損傷又は毒性効果をいう。

本発明の方法において、アクチン結合性化合物（例えばゲルゾリン、ＤＢＰ、又 はそのアクチン結合性断片）を注入することにより、ａ）アクチン・フィラメン トへの薯結を防ぐためにアクチン単量体に結合し、及び／又はｂ）アクチン　フ ィラメントを単量体の状等に分割し、及び／又はＣ）アクチン結合性タンノ（り 質又Ｃよ断片（二複合したアクチンを、循環又は細胞外Ｍｉｌｌ環境から強化除 去することとなる。

アクチン結合性化合物は、化学的に又は遺伝子工学によって、その池の薬剤の断 片と共役され得るもので、これは目標作用位置にむけてアクチン結合性イし金物 を供給することとなる。

腎糸球体フィルターを介して移送する機能を有するアクチン結合性化合物又はそ の活性断片は、腎臓にとって有毒なアクチンを減少させるために使用することが できる。　６５ｋＤより小さい分子量を有するアクチン結合性化合物は、腎糸球 体フィルターを通過するものと思われ、濾過されたアクチンの毒性効果を中和す ることができる。このような化合物はまた、あらゆる器官の毛細血管又ζよ細胞 外に滞留するアクチンの栓をより容易に透過することができる。

また、その他の化合物は、化学的に又は遺伝子工学によって、アクチン結合性化 合物又はその活性断片に共役され得るもので、そのアクチン結合性化合物の適用 的特性、特にアクチンの毒性効果の軽減を促進する化合物の機能を強化する特性 を強化又は供給する０例えば、アクチンが脈管内の血液凝固を促進し、繊維素溶 解を抑制するため、組織プラスミノゲン活性剤及び／又はアンチトロンビン（例 えばヒルジン又はその活性断片）をアクチン結合性化合物に共役させることによ り、組織損傷がアクチンを解放し、それによって脈管内の血液凝固を促進した場 所を目標として繊維素溶解剤を供給することができる。

アクチン結合性化合物の投与量及び養生法は、アクチン関連の傷害１組織損傷及 び炎症の処置を行う医療技術に関する通常の知識を有する当業者によって難なく 決められる。一般的に、アクチン結合性化合物処置の適用量は、以下の点を考慮 することによって変化する。適用されるアクチン結合性化合物の種類、年齢、健 康状態、処置が施される状況、同時処置（もしあれば）の種類、処置の頻度及び 望ましい効果の質１組織損傷の範囲、性別、症状の持続期間１反対適用（ｃｏｕ ｎｔｅｒｉｎｄｉｃａｔｉｏ口Ｓ）（もしあれば）、及び個々の医師によって調 整されるその他の可変項目０ｇ１ましい結果を得るために、１回以上の適用によ って適用量は投与され得る。

適用量は、以下の方法で算出される１通常の血中ゲルゾリン濃度は２．４μＭ（ ２，４μｍｏｌ／Ｌ）であり、通常の血中ＤＢＰ濃度は５μＭ（Ｓμ慕ｏ１／Ｌ ）である、従って、総血中アクチン結合性容量（ＡＢＣ）は約７．５μＭ（７， ５μ謙ｏ１／Ｌ）である、血液量は体重の６１であるから、７０ｋｇの人は４． ２リツトルの血液を有し、（４，２Ｌ　ｘ　７．５μｍｏ１／Ｌ）３１．５μｍ ｏｌのＡＢＣを有しているということである。ＤＢＰ及びゲルゾリンは細胞外陣 （体重の１０％）に渡って分布しているので、身体には（７，５ｘ　７）５２． ５μ鳳０１のＡＢＣが含まれてしする。

内生＾ＢＣの全体的複合化又は除去を行うためには、３２μ曹ｏ１乃至５３μ馬 ｏ１のアクチン結合性化合物（又は０．４６μ■ｏｌ／ｋｇ体重）を投与するこ とが望ましい、　０．４２５＋＋ｇのアクチンは１μ鳳ｏ１に等しく、また骨格 筋１ｇにつき４．８６ｇのアクチンが存在するため、筋肉１ｇにつき１１．３μ ｍＯ１のアクチンが含まれ、又は４．６ｇの筋肉破損は１体中の全ＡＢＣを中和 し得る。しかし、アクチンの毒性効果はおそらく局所的であるか（例えば凝塊溶 解の抑制）、封鎖されるか、又は運動により決まるので（例えば結合性タンパク 質が器官を中和するよりも速くアクチンはその器官を透過する）、理論的に最小 限の適用量は、運動学的に好ましい治療効果を達成するために多めに調整されな ければならないものと思われる。運動学的効果は重要であり得る０例えば、約半 分の赤血球組織系の溶血現象（４，２μｍｏｌのアクチンだけを解放する）は血 漿ゲルゾリン濃度を急激に半分に減少させ（スミス嵜、胆７７２：２１４−２１ ８１　（＋９１１８））、脈管外域と血管域がゆっくりと平衡することを示す、 逆に言うと、アクチンの局部的沈着を分解することができる治療上効果的な状況 は、高濃度のアクチン結合性分子の過渡Ｗ　（Ｌｒａｎｓｉｅｎｔ　ｐｕｌｓｅ ）によってのみ達成可能である。

本発明の化合物は、投与のためのあらゆる適切な治療用運搬体によって投与′９ −ることができる。二の化合物は、人間及び動物の組繊損傷の予防条件、緩和条 件、予防可能条件、又は治癒条件に影響を与える形１で、投与することができる 。

本発明の非経口投与用のアクチン結合性タンパク質の製剤は、無菌水溶性又Ｉよ 非水溶性の溶媒、＠濁及び乳剤を含む、非水溶性Ｉ！！副の例は、プロピレン・ グリコール、ポリエチレン・グリコール、野菜油、魚油及び注入可能な有機エス テルである。水溶性運搬体は、水、水−アルコール溶液、乳剤又は＠４（塩水及 び塩イしナトリウムを含む緩衝医療用非経口運搬体を含む）、リンガ−のデキス トロース溶液、デキストロース及び塩化ナトリウムｔｉｎ、ラクトースを含むリ ンガ−溶液、又は混合油を含む、静脈内運搬体は、流体及び栄養補給剤、電解質 補給剤（１ノンガーのデキストロース（Ｒｉｎｇｓｒ’ｓ　ｄａｘｔｒｏｓｅ） 等に基づくものなど）を含む。

本発明の７クチン結合性タンパク質は、特に主な損傷が急性のものではなく延長 又は映発のものである場合、ポンプを介して、又は持続解放形態で投与する二と もできる。主な損傷がしばしば急性のものではなく延長又は映発のものである一 例はる脳梗塞であり、この場合、心筋への損傷は第一次心臓発作の後何日力１経 過するまで露見しない（又は持続する）、また１本発明のアクチン結合性分子を 、適切に注入されたカテーテルを介して、又は特定の暮富を目標とするよう番二 配列されたキメラ分子（又は複合体）の一部としてアクチン結合性分子を供給す ることによって、高濃度で特定の器官に送ることもできる。

延長期間中繰り返し注入を行うという二とが示された場合、患者ζ二とって持続 解放形態での投与が都合がよい３例えば、患者を最大限に楽な気分ｔニさせるた め、本究明の方法がアクチン関連の傷害に基づく遺伝的又は慢性の疾患の処置８ ；使用される場合、本発明のアクチン結合性タンパク質を持続的解放形態で投与 することが望ましい。

本発明のアクチン結合性タンパク質は、経口投与用の錠剤、カプセル、粉末又は 液体等の投与形態で使用され得る。但し、タンノくり質の生物学的活性力喀消化 過程において破壊されず、また化合物の特性により腸組織全体に渡ってそのタン ノくり質の吸収が可能となる場合に限る。

本発明の治療用組成物は、例えば、従来の混合、粒状化、ドラジエー製法（ｄｒ ａｇｅｅ−ｍａｋｉｎｇ）、溶解、凍結乾燥又は類似のプロセス番二よる１本質 的【二既知の方法によって製造される０本発明の組成物は本来、アクチン誘発生 理損傷の拳１四−おける効用を慢性又は急性のものとする９本発明の組成物は、 最大限の潜在能力をもって血流又は細胞外組履中の過度のアクチンに対処する身 体それ自体のメカニズムを導くものである。静脈投与の形態では１本発明の組成 物は、潜在的組織損傷の囃性処置に役立つように十分に速く作用が開始する。

さらに、ｑ度の又は慢性的アクチン関連傷害の処置におし）で、低効能のもの力 （有用である。

また、本発明の組成物は、動物の血流又は細胞外組織におけるアクチン・レベル を実験分析するための必須試薬を供給する。

自然汚染物がほとんどないアクチン結合性タンパク質は、このようなタンノくり 質を分離するのに従来使用されてきた当分野における従来の条件及び技術ζ：従 って（抽出、沈澱、クロマトグラフィー、アフィニティー・クロマトグラフィー 、電気泳働等）、その自然源又は組み替え源から分離され、力１つ浄イヒされ得 る。

当業者は、不当な実験によらずとも、従来技術を使用してアクチン結合性イし金 物の７クチン結合域を確認でき、かかる領域は、本発明の方法ζ：おし）て好適 である６例を挙げれば、自生アクチン結合性タンノくり質の誘導体、又は組み換 えによって生成されたアクチン結合性タンパク質の誘導体は、例えｉｉ′、ト１ ノブシン、キモトリプシン及びスブチリシン等の共通のプロテアーゼを有する標 準的な長さのアクチン結合性タンパク質のタンパク質量ａによって形成できる。

アクチン誘導樹脂との親和性クロマトグラフィーを、かかる断片のアクチン結合 能力の検定Ｃ二使用できる。

アクチン分離活動を有する化合物又はその断片の確認が望ましし１とき【二は、 かかる化合物又は断片を、例えば、ピレン標識線維アクチンの解重合率の追跡と し＼った、従来技術を使用して確認することもできる。

さらに、かかる断片は、機能が相同関係にあると予測される、その他の既知のア クチン結合又はアクチン分離領域に対する相同性によって確認できる１例を挙げ れば、セベリン、ゲルゾリン及びヴイリン、特にセパリン中のアミノ酸残量４０ −３５１及びゲルゾリン中のアミノ酸残量６３−３８３は、線維アクチン分離活 動を担当する領域において広範囲な相同関係を示してしすること力家知られてし する。

ゲルゾリンのＮ−末端側の半分、例えば、ＣＴ４５として知られて←λるＮ−末 端トリプシン断片は、線維アクチンを分離することができ、また２１１のアクチ ン結合部位を含む、これらの部位の１は、高い親和力でアクチン単量体及びフィ ラメントの端を結合する。キモトリプシン断片、ＣＴ１５Ｎ（ヒト・ゲルレゾリ ン残査２４−１５０）に存し、他方の部位は、！雄アクチンの側面をポリファス フｔイノシタイド調整方法で結合する、隣接断片ＣＴ、２８Ｎ（残量１５１−４ ００）ζ二含まれる。いずれの断片も、それ自体によってアクチン・フィラメン トを分離するものではない、線維アクチンを分離できる最小のゲルゾリン・ポリ ペプチドは、血漿ゲルゾリンの残量２５−１６５を包囲する。

自然汚染物がほとんどない効能のある量のＣＴ４５は、心臓又は組織（二対する 損傷が判明するまでの期間を通じて、深刻な心筋梗塞その他の血栓事象を有する 患者に投与できる＋佇冬されるペプチドの量は、死にかけている心＊Ｓ＋胞によ って放出されたアクチンとともに飽和状態になっている総ゲルゾリンの留分を決 定するために患者の血漿中の総ゲルゾリンに対する結合したゲルプリンの割合を 検定し、かつこの割合を最低でも健常者においてみられるレベルに回復するに十 分なアクチン結合能力を提供するに必要な量を算出した後に決定できる。さらに 、患者のＢＵＮ等の腎障害及びクレアチニン・レベルのインジケータは、綿密に 監視することができ、またかかるインジケータによって腎障害が生じていること が判明した場合には、必要に応じてアクチン結合性分子の投与量をさらに高くａ 整できる。

従って５本発明は、動物に対するアクチン結合性化合物を、（ａ）アクチン・フ ィラメントの形成を防止し、かつ／又は（ｂ）アクチン・フィラメントを［安定 した」単量体状態に処理するに十分なレベルで、遊離アクチンの滞留又は血流中 の放出について望ましくない生理的な影響を処置しかつ／又は防止するに十分な 量で投与するために使用できる。

さらに、アクチン結合性タンパク質等の化合物は、種の中で保存性が高（、非ヒ ト（ウシ属、ブタ）血漿及び／又は筋組織から容易に大量分離することができ。

またこれらのタンパク賀の断片は、従来技術によって化学的に又は酵素性分解に よって調製できる。従って、かかるアクチン結合性化合物は、本発明の治療法を 必要とする対象物に対して、深刻な免役反応を誘発することなく投与できる。

本適応において引用するすべての参考文献は、本明細書での言及によって本明細 書に組み込まれるものである０本発明を概括的に述べてきたので、以下の実施例 によって５　さらに本発明の遂行に使用される素材及び方法を詳述する。実施例 は、いかなる方法でも本発明を制限することを意図するものではない。

１息上 ＬＩＬ忠」２ ・　じ・ 効能のある量のアクチン結合性分子、例えばＣＴ４５．又は球形と線維アクチン を高い親和性をもって結合する血漿ゲルゾリンの残量２５−１６５を含むペプチ ドは、アクチン・フィラメントを分離する二とができ、また自然汚染物がほとん どない状態であり、また治療上受容可能な運搬者において、１に因の如何を問わ ず最近大量の障害、急性溶血現象又は横絞筋腫を経験した対象物に投与される。

与えられるアクチン結合性分子の量及び治療期間は１合計血漿ゲルゾリン濃度又 は血漿中で混合するアクチン・ゲルゾリンの測定によって細胞外アクチン結合能 力の消耗を監視することによって決定できる。内生ゲルゾリンは、自生ゲルゾＩ Ｊン分子の異なった領域におけるエキトープに向けられる単クローン抗体（かか る抗体は当業者によって知られている）によってゲルゾリンの治療上の断片から 容易ζ二分化できる。（シャポニアー等、Ｊ、　Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏｌ、　１０３ ：１４７３−１４８１　（１９８６））、さら１：、肺機能は、例えば、動脈血 液酸素飽和の測定によって、かつ／又は腎機能は、例えば血清ＢＵＮ及びクレア チニン濃度の測定によって監視する。

１五亘ユ ン 効能のある量のアクチン結合性分子を、動脈血栓による急性心筋梗塞を患った患 者に、血栓崩壊剤の投与前に又は投与と同時に与える。血漿ゲルゾリン・レベル が急性心筋梗塞の後で徐々に減少することが知られており、またアクチンがすべ ての血栓崩壊処置によって活性化される酵素である、プラスミンを抑止すること が示されていることから、この方法がとられる。また、これは、現行のすべての 繊維素溶解療法破損率が有限であること、すなわち動脈聞出が達成されな４％か 、あるいは再閉塞が生ずることもこの理由となっている。この破損が内生的に生 成されたプラスミンの抑制によって、又は血栓療法の結果として遊離アクチンが 壊死粉瘤斑又は梗塞を生じた心筋から浸出することによって生ずる範囲で、アク チン結合性分子療法は、この破損機構に向けられている。

本発明について十分に説明してきたが、本発明又はその実施態様の精神又は範囲 に影響を与えることなく、広範囲かつ相応の状態、パラメータ等の範囲内で目的 を遂行できることが当業者によって理解されるところである。

！−一れ 動物の血漿中の遊離アクチンの濃度を低下させる方法が記載されており、この方 法は、天然及び変性のアクチン結合性タンパク質の投与、特にゲルゾリンの天然 及び変性アクチン結合域を投与する方法を備える。該処置を必要とする動物を確 認するための診断方法も記載されている。

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Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．アクチンの滞留による組織損傷について、効能のあるレベルのアクチン結合 性分子を注入する方法を備える、対象物の組織損傷の予防又は低減方法。 ２．細胞外アクチンを結合させるのに十分な量のアクチン結合性分子を投与する 方法を備える、対象物の細胞外アクチン濃度の低下方法。 ３．前記対象物が、急性肺損傷、急性腎不全、筋肉損傷、もしくは高位ＢＵＮ又 はクレアチニン・レベルを有すると診断されている、請求項１又は請求項２のい ずれかに記載の方法。 ４．前記急性腎不全がＡＲＤＳである、請求項３記載の方法。 ５．遊離アクチンとアクチン結合性タンパク質の複合体を検出する機能について 該遊離アクチンのレベルを分析する方法を備える、血漿中の遊離アクチンの検出 方法。 ６．効能のあるレベルのアクチン結合性分子を患者に注入する方法を備える、患 者の繊維素溶解の抑制を予防する方法。 ７．前記繊維素溶解が急性心筋梗塞又はその他の血栓症の結果として生じる、請 求項６記載の方法。 ８．前記アクチン結合性タンパク質がゲルゾリン又はその活性断片である、請求 項１、請求項２、請求項３又は請求項６のいずれかに記載の方法。 ９．前記活性断片がキモトリプシン断片ＣＴ４５である、請求項８記載の方法。 １０．前記活性断片がゲルゾリンのアミノ酸残基２５−１６５を含む、請求項８ 記載の方法。 １１．前記アクチン結合性タンパク質がＤＢＰである、請求項１、請求項２、請 求項３又は請求項６のいずれかに記載の方法。 １２．（１）アクチン結合性化合物又はその生物学的活性断片で、自然汚染物が ほとんどない化合物又はその断片、 （２）治療上受容可能な運搬者、 を備える、アクチン結合性化合物を必要とする対象物に投与するための冶療用組 成物。