JPH0538282A - 新規微生物および該微生物を用いたｌ−イソロイシンの製造方法 - Google Patents
新規微生物および該微生物を用いたｌ−イソロイシンの製造方法Info
- Publication number
- JPH0538282A JPH0538282A JP19761391A JP19761391A JPH0538282A JP H0538282 A JPH0538282 A JP H0538282A JP 19761391 A JP19761391 A JP 19761391A JP 19761391 A JP19761391 A JP 19761391A JP H0538282 A JPH0538282 A JP H0538282A
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- Japan
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- isoleucine
- microorganism
- production
- agrobacterium
- glutamic acid
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】新規微生物アグロバクテリウム・エスピーＨＰ
−１９を用いることにより、入手が容易で、安価である
Ｌ−グルタミン酸を主原料として、Ｌ−イソロイシンを
製造する。 【構成】新規微生物アグロバクテリウム・エスピーＨＰ
−１９を、Ｌ−グルタミン酸を主炭素源とし、他に通常
の炭素源、窒素源、無機塩類、生育因子等を含む海水組
成倍地で常法により好気的に培養することによって、Ｌ
−イソロイシンを製造する。
−１９を用いることにより、入手が容易で、安価である
Ｌ−グルタミン酸を主原料として、Ｌ−イソロイシンを
製造する。 【構成】新規微生物アグロバクテリウム・エスピーＨＰ
−１９を、Ｌ−グルタミン酸を主炭素源とし、他に通常
の炭素源、窒素源、無機塩類、生育因子等を含む海水組
成倍地で常法により好気的に培養することによって、Ｌ
−イソロイシンを製造する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、アグロバクテリウム属
に属する新規な細菌に関するものである。この細菌は、
グルタミン酸を主炭素源とする培地からＬ−イソロイシ
ンを生産する能力を持つ。 本発明によれば高収量で効
率よくＬ−イソロイシンを製造することができる。
に属する新規な細菌に関するものである。この細菌は、
グルタミン酸を主炭素源とする培地からＬ−イソロイシ
ンを生産する能力を持つ。 本発明によれば高収量で効
率よくＬ−イソロイシンを製造することができる。
【０００２】Ｌ−イソロイシンは必須アミノ酸として、
人間および動物の栄養上重要な役割をするアミノ酸であ
り、医薬、食品、飼料強化剤としての需要は近年急激に
増加しつつある。
人間および動物の栄養上重要な役割をするアミノ酸であ
り、医薬、食品、飼料強化剤としての需要は近年急激に
増加しつつある。
【０００３】
【従来の技術】Ｌ−イソロイシンの工業的製造法として
は、他のアミノ酸の場合と同様に立体異性体が存在する
ため、化学合成法ではＬ体のみの製造は困難であり、主
に発酵法により生産が行われている。発酵法としてはＬ
−イソロイシンの前駆物質であるα−アミノ酪酸、α−
ケト酪酸あるいはスレオニンを培地に添加する方法（特
公昭４３−８７０９号公報、同４４−１２７２０号公
報、同４０−２８８０号公報等）や前駆物質を使用しな
い、いわゆる直接発酵法（特公昭３８−７０９１号公
報、特開昭４９−９３５８６号公報）が知られている
が、これらの公知の方法では炭素源として糖質（グルコ
ース、澱粉糖化液、デキストリン等）が用いられてい
る。また糖質以外の炭素源として、脂肪族炭化水素（特
公昭４８−２３５５号公報）、芳香族化合物（特開昭４
９−４８８９０号公報）、エタノール（特公昭５７−２
６７５５号公報）を用いたものが知られている。
は、他のアミノ酸の場合と同様に立体異性体が存在する
ため、化学合成法ではＬ体のみの製造は困難であり、主
に発酵法により生産が行われている。発酵法としてはＬ
−イソロイシンの前駆物質であるα−アミノ酪酸、α−
ケト酪酸あるいはスレオニンを培地に添加する方法（特
公昭４３−８７０９号公報、同４４−１２７２０号公
報、同４０−２８８０号公報等）や前駆物質を使用しな
い、いわゆる直接発酵法（特公昭３８−７０９１号公
報、特開昭４９−９３５８６号公報）が知られている
が、これらの公知の方法では炭素源として糖質（グルコ
ース、澱粉糖化液、デキストリン等）が用いられてい
る。また糖質以外の炭素源として、脂肪族炭化水素（特
公昭４８−２３５５号公報）、芳香族化合物（特開昭４
９−４８８９０号公報）、エタノール（特公昭５７−２
６７５５号公報）を用いたものが知られている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】従来知られているイソ
ロイシン製造法には、合成原料の原料費が高いあるいは
イソロイシンの蓄積量または収率が低いという問題点が
ある。したがって、本発明は、Ｌ−イソロイシンを生産
する能力を有する新規微生物、および、該微生物を用い
たＬ−イソロイシンの製造方法を提供することを目的と
する。
ロイシン製造法には、合成原料の原料費が高いあるいは
イソロイシンの蓄積量または収率が低いという問題点が
ある。したがって、本発明は、Ｌ−イソロイシンを生産
する能力を有する新規微生物、および、該微生物を用い
たＬ−イソロイシンの製造方法を提供することを目的と
する。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者等は入手が容易
で、近年価格が低下し将来的にも安定した供給が可能で
あり、さらに代謝化学的に蓄積量、収率において糖質よ
りはるかに有利なグルタミン酸を主炭素源とするＬ−イ
ソロイシンの工業的製造方法の開発を目標とし鋭意研究
を進めてきたところ、海水中より海水組成培地中でグル
タミン酸を効率よくイソロイシンに変換する能力を有す
る新規微生物ＨＰ−１９を分離し、該微生物をグルタミ
ン酸を主炭素源とする海水組成培地中に培養することに
より著量のＬ−イソロイシンを生成蓄積することを見い
だし本発明を完成した。以下に本発明の新規微生物ＨＰ
−１９の菌学的性質を示す。
で、近年価格が低下し将来的にも安定した供給が可能で
あり、さらに代謝化学的に蓄積量、収率において糖質よ
りはるかに有利なグルタミン酸を主炭素源とするＬ−イ
ソロイシンの工業的製造方法の開発を目標とし鋭意研究
を進めてきたところ、海水中より海水組成培地中でグル
タミン酸を効率よくイソロイシンに変換する能力を有す
る新規微生物ＨＰ−１９を分離し、該微生物をグルタミ
ン酸を主炭素源とする海水組成培地中に培養することに
より著量のＬ−イソロイシンを生成蓄積することを見い
だし本発明を完成した。以下に本発明の新規微生物ＨＰ
−１９の菌学的性質を示す。
【０００６】この微生物は工業技術院微生物工業研究所
に受理番号第１２３３７号（平成３年７月１日）として
受理されている。 菌学的性質 １） 顕微鏡的性質 １．細胞の形および大きさ：通常長さ２−３μｍ、幅
０．８−１μｍの短桿菌であるが、培地の塩濃度により
長桿菌あるいは球菌となる、多形性を示す。
に受理番号第１２３３７号（平成３年７月１日）として
受理されている。 菌学的性質 １） 顕微鏡的性質 １．細胞の形および大きさ：通常長さ２−３μｍ、幅
０．８−１μｍの短桿菌であるが、培地の塩濃度により
長桿菌あるいは球菌となる、多形性を示す。
【０００７】 ２．グラム染色 ：陰性 ３．運動性 ：なし ２） 培養的性質 ＨＰ−１９株の基本培地組成を表１に示す 表１の組成に１．５％寒天を加えた寒天培地での生育は
次の通りである。
次の通りである。
【０００８】 形状：円形 周縁：円滑 隆起：わずかに盛り上がる 表面：円滑 色調：わずかに黄色 人工海水を蒸留水に替えると表面が粗面となる ３） 生理学的性質 その他 １．酸素に対する態度 ：偏性好気性 ２．生育の範囲（ｐＨ）：至適ｐＨ ７．８ （温度）：至適温度 ２８．５℃ 生育温度 ４〜４２℃ ３．オキシダーゼ産生 ：＋ ４．カタラーゼ産生 ：＋ ５．硫黄化合物の酸化能：− ６．硫黄化合物の資化能：− ７．ＧＣ含量 ：６４％（ＨＰＬＣ法） ８．脂肪酸組成 ：非ヒドロキシ脂肪酸 Ｃ16:0１０．６％、Ｃ18:0７．２％ Ｃ18:1８２．２％ ３−ヒドロキシ脂肪酸 ｉ−Ｃ14:0１３．１％、Ｃ14:0３３．４％、ｉ −Ｃ18:0１９．０％、ｉ−Ｃ15:0３４．５％ ２−ヒドロキシ脂肪酸 なし ９．イソプレノイドキノン：ユビキノン（Ｑ−１０） １０．グリセロールからの ケト体生成 ：− １１．ラクトースからの ３−ケトラクトース の生成 ：− １２．糖からの酸生成 ：Ｄ−グルコース、Ｄ−フルクトース、Ｄ−キシ ロース、マンニトール、ラクトース、マルトー ス、シュークロースから生成 Ｌ−ラムノースからは生成しない 上記性状からマイクロバイオロジカルレビュー４５巻、
ＩＦＯ・リサーチコミュニケーション１４巻、バージー
ズマニュアル・オブ・システマティック・バクテリオロ
ジー、インターナショナル・ジャーナル・オブ・システ
マティック・バクテリオロジー等にもとずいて検索した
結果、ＨＰ−１９は、アグロバクテリウム属の新種であ
る可能性が高いと考えられるので、アグロバクテリウム
・エスピーＨＰ−１９（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｓｐ．ＨＰ−１９）と命名した。
ＩＦＯ・リサーチコミュニケーション１４巻、バージー
ズマニュアル・オブ・システマティック・バクテリオロ
ジー、インターナショナル・ジャーナル・オブ・システ
マティック・バクテリオロジー等にもとずいて検索した
結果、ＨＰ−１９は、アグロバクテリウム属の新種であ
る可能性が高いと考えられるので、アグロバクテリウム
・エスピーＨＰ−１９（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｓｐ．ＨＰ−１９）と命名した。
【０００９】この新規微生物を用いてＬ−イソロイシン
生産せしめるのに、グルタミン酸を主炭素源として用い
る他は、炭素源、窒素源、無機塩類、生育因子等を含有
する海水組成培地を用いて常法によって行うことができ
る。使用する炭素源としては、グルコース、シュークロ
ース、澱粉加水分解物などの糖類、乳酸等の有機酸類、
その他の炭化水素類等が使用できる。窒素源としては、
塩安、リン安、硫安、アンモニアその他を使用できる。
また、海水組成培地を調製するのに、表１に記載した人
工海水を用いても、天然海水を用いても構わない。 Ｌ
−イソロイシンの発酵生産の為の発酵条件としては、好
気培養が良く、発酵温度は２５〜３５℃、発酵日数は、
２〜４日間である。発酵液のｐＨは、６〜９の範囲内に
維持されるが、ｐＨ調整には、無機あるいは有機の酸、
あるいはアルカリ、炭酸カルシウム、アンモニア等を使
用することができる。
生産せしめるのに、グルタミン酸を主炭素源として用い
る他は、炭素源、窒素源、無機塩類、生育因子等を含有
する海水組成培地を用いて常法によって行うことができ
る。使用する炭素源としては、グルコース、シュークロ
ース、澱粉加水分解物などの糖類、乳酸等の有機酸類、
その他の炭化水素類等が使用できる。窒素源としては、
塩安、リン安、硫安、アンモニアその他を使用できる。
また、海水組成培地を調製するのに、表１に記載した人
工海水を用いても、天然海水を用いても構わない。 Ｌ
−イソロイシンの発酵生産の為の発酵条件としては、好
気培養が良く、発酵温度は２５〜３５℃、発酵日数は、
２〜４日間である。発酵液のｐＨは、６〜９の範囲内に
維持されるが、ｐＨ調整には、無機あるいは有機の酸、
あるいはアルカリ、炭酸カルシウム、アンモニア等を使
用することができる。
【００１０】本発明によれば、アグロバクテリウム・エ
スピーＨＰ−１９を用いて、Ｌ−グルタミン酸を原料と
して安価に効率よくＬ−イソロイシンを製造することが
できる。かかる知見は、従来全く知られていなかった。
スピーＨＰ−１９を用いて、Ｌ−グルタミン酸を原料と
して安価に効率よくＬ−イソロイシンを製造することが
できる。かかる知見は、従来全く知られていなかった。
【００１１】
【実施例】次に実施例によって本発明をさらに詳細に説
明する。
明する。
【００１２】
【実施例１】アグロバクテリウム・エスピーＨＰ−１９
を以下のように培養した。イソロイシン生産培地組成は
表２に示すとおりである。１５ｍｌ試験管に表２に記載
の組成の培地を２ｍｌ入れ殺菌し、表１の組成に１．５
％の寒天を加えた寒天培地に３０℃４８時間生育させた
アグロバクテリウム・エスピーＨＰ−１９（微工研菌寄
第１２３３７号）を１白金耳植菌する。そして３０℃に
て４８時間、振盪培養器にて培養した結果、培養液１ｍ
ｌ当たりのイソロイシンの蓄積量は３００μｇであっ
た。
を以下のように培養した。イソロイシン生産培地組成は
表２に示すとおりである。１５ｍｌ試験管に表２に記載
の組成の培地を２ｍｌ入れ殺菌し、表１の組成に１．５
％の寒天を加えた寒天培地に３０℃４８時間生育させた
アグロバクテリウム・エスピーＨＰ−１９（微工研菌寄
第１２３３７号）を１白金耳植菌する。そして３０℃に
て４８時間、振盪培養器にて培養した結果、培養液１ｍ
ｌ当たりのイソロイシンの蓄積量は３００μｇであっ
た。
【００１３】尚、Ｌ−イソロイシンの確認は、逆相クロ
マトグラムによるオルトフタル酸ラベル化アミノ酸の蛍
光検出の保持時間と、エセリシヤ・コリＣＧＳＣストレ
イン５０７４（Ｅ．Ｃｏｌｉ−ＣＧＳＣ５０７４）を用
いたマイクロバイオアッセイ法により行った。
マトグラムによるオルトフタル酸ラベル化アミノ酸の蛍
光検出の保持時間と、エセリシヤ・コリＣＧＳＣストレ
イン５０７４（Ｅ．Ｃｏｌｉ−ＣＧＳＣ５０７４）を用
いたマイクロバイオアッセイ法により行った。
【００１４】
【実施例２】表１に示した組成にグルコース１％、グル
タミン酸ナトリウム１％を加えてｐＨを７．２に調整し
た前培養培地１８ｍｌを、５００ｍｌ三角フラスコに分
注殺菌し、そこへ実施例１と同様の寒天培地に同様の条
件で生育させたアグロバクテリウム・エスピーＨＰ−１
９（微工研菌寄１２３３７号）を４白菌耳植菌し、３０
℃、１８０ｒｐｍにて４８時間振盪培養した。さらに表
２に示した組成に、コーンスティープリカー３．０％を
加えてｐＨ７．５に調整した本培養培地１８ｍｌを、５
００ｍｌ三角フラスコに分注殺菌し、そこへ前述の前培
養終了液１．８ｍｌを植菌した。そして３０℃、１８０
ｒｐｍにて４８時間振盪培養を行った。その結果培養４
８時間目のイソロイシンの蓄積量は、培養液１ｍｌ当た
り３００μｇであった。
タミン酸ナトリウム１％を加えてｐＨを７．２に調整し
た前培養培地１８ｍｌを、５００ｍｌ三角フラスコに分
注殺菌し、そこへ実施例１と同様の寒天培地に同様の条
件で生育させたアグロバクテリウム・エスピーＨＰ−１
９（微工研菌寄１２３３７号）を４白菌耳植菌し、３０
℃、１８０ｒｐｍにて４８時間振盪培養した。さらに表
２に示した組成に、コーンスティープリカー３．０％を
加えてｐＨ７．５に調整した本培養培地１８ｍｌを、５
００ｍｌ三角フラスコに分注殺菌し、そこへ前述の前培
養終了液１．８ｍｌを植菌した。そして３０℃、１８０
ｒｐｍにて４８時間振盪培養を行った。その結果培養４
８時間目のイソロイシンの蓄積量は、培養液１ｍｌ当た
り３００μｇであった。
【００１５】
【表１】
【００１６】
【表２】
【００１７】
【発明の効果】本発明によりグルタミン酸から、高収量
で効率よくＬ−イソロイシンを製造することができる。
で効率よくＬ−イソロイシンを製造することができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:01） (72)発明者 伏見 善也 宮崎県延岡市旭町６丁目4100番地 旭化成 工業株式会社内
Claims (2)
- 【請求項１】新規微生物のアグロバクテリウム・エスピ
ーＨＰ−１９ - 【請求項２】アグロバクテリウム・エスピーＨＰ−１９
を、グルタミン酸を主炭素源とする培地に好気的に培養
することを特徴とする、Ｌ−イソロイシンの製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19761391A JPH0538282A (ja) | 1991-08-07 | 1991-08-07 | 新規微生物および該微生物を用いたｌ−イソロイシンの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19761391A JPH0538282A (ja) | 1991-08-07 | 1991-08-07 | 新規微生物および該微生物を用いたｌ−イソロイシンの製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0538282A true JPH0538282A (ja) | 1993-02-19 |
Family
ID=16377390
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19761391A Withdrawn JPH0538282A (ja) | 1991-08-07 | 1991-08-07 | 新規微生物および該微生物を用いたｌ−イソロイシンの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0538282A (ja) |
-
1991
- 1991-08-07 JP JP19761391A patent/JPH0538282A/ja not_active Withdrawn
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 19981112 |