JPH05308974A - ピノシルビンシンターゼ遺伝子 - Google Patents

ピノシルビンシンターゼ遺伝子

Info

Publication number
JPH05308974A
JPH05308974A JP4273860A JP27386092A JPH05308974A JP H05308974 A JPH05308974 A JP H05308974A JP 4273860 A JP4273860 A JP 4273860A JP 27386092 A JP27386092 A JP 27386092A JP H05308974 A JPH05308974 A JP H05308974A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
gene
dna
plants
plant
pinosylvin
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP4273860A
Other languages
English (en)
Inventor
Helmut Kindl
ヘルムート・キンドル
Ruediger Hain
リユデイガー・ハイン
Hans-Joerg Reif
ハンス−イエルク・ライフ
Klaus Stenzel
クラウス・シユテンツエル
Juergen Thomzik
ユルゲン・トムツイク
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Bayer AG
Original Assignee
Bayer AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bayer AG filed Critical Bayer AG
Publication of JPH05308974A publication Critical patent/JPH05308974A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
    • C12N15/8282—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for fungal resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Abstract

(57)【要約】 【構成】 植物から分離されたピノシルビンシンターゼ
の新規な遺伝子およびベクター。 【効果】 宿主微生物および植物の形質転換のための、
および病害虫に対する抵抗性が増加した植物の発生のた
めに有用である。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】本発明は、植物から分離されたピノシルビ
ンシンターゼの新規な遺伝子および、ベクター、宿主有
機体および植物の形質転換のための、および病害虫に対
する抵抗性が増加した植物の発生のための、それらの使
用に関する。
【０００２】３，５−ジヒドロキシ−スチルベンは、植
物の中に存在し、そして病害虫、とくに菌類、バクテリ
アおよび昆虫に対して毒性作用を有し、したがってこれ
らの病害虫を回避するために適当であり、そしてピノシ
ルビンと呼ぶ。植物によるこれらの物質の合成の能力
は、重要な防御メカニズムと見なされる。不都合なこと
には、ほんのわずかの有益な植物は、病害虫に対する適
切な抵抗性を植物に付与する量で、ピノシルビンを形成
するか、あるいはそれを発生する能力を有する。病害虫
に対する抵抗性が増加した植物の発生のためのスチルベ
ンシンターゼ遺伝子の使用は、欧州特許出願（ＥＰ−
Ａ）第０，３０９，８６２号から既に知られている。グ
ラウンドナッツ（ｇｒｏｕｎｄｎｕｔ）植物（Ａｒａｃ
ｈｉｓ ｈｙｐｏｇｅａ）からのレスベラトロールシン
ターゼ遺伝子は、この出願に詳しく記載されている。
【０００３】ピノシルビンシンターゼのための新規な遺
伝子（「ピノシルビンシンターゼの遺伝子」）が今回発
見され、これはピノシルビンを発生しないか、あるいは
不適切なピノシルビンのみを発生する植物の遺伝因子
（ゲノム）の中に組み込み、これにより病害虫に対する
これらの植物の増加した抵抗性を発生させることができ
る。
【０００４】驚くべきことには、新規なピノシルビンシ
ターゼ構造遺伝子は、先行技術から既に知られている落
花生（ｇｒａｕｎｄｎｕｔ）からのレスベラトロールシ
ンターゼ遺伝子より、植物における病害虫に対する、か
なりいっそうすぐれた抵抗性を有する。
【０００５】ピノシルビンシンターゼの遺伝子とは、Ｒ
ＮＡに転写され、そしてタンパク質に翻訳された後、ピ
ノシルビンシンターゼの性質を有する酵素を形成させる
核酸（ＤＮＡ）であると理解すべきであり、この核酸は
その自然の環境から分離されるか、あるいはベクターの
中に組み込まれるか、あるいは原核生物または真核生物
のＤＮＡの中に「外来」ＤＮＡまたは「追加の」ＤＮＡ
として含有される。
【０００６】ピノシルビンシンターゼの遺伝子とは、ま
た、遺伝子の因子を妨害しないか、あるいは実質的に妨
害しないＤＮＡ配列を、それらの開始および／または終
わりに、なお含有するピノシルビンシンターゼの遺伝子
であると理解すべきである。これらのＤＮＡ配列は、ま
た、「遺伝子ユニット」と呼ばれ、例えば、制限酵素で
切除することによって形成される。なぜなら、正確にこ
の遺伝子の開始および終わりにおいて普通の制限酵素の
ために利用可能な切断点は存在しないからである。ピノ
シルビンシンターゼの遺伝子または遺伝子ユニットは、
また、各場合において取り扱いのために適当なＤＮＡ配
列（例えば、「リンカー」）を、それらの末端に、有す
ることができる。
【０００７】ピノシルビンシンターゼの遺伝子（または
遺伝子ユニット）は、それらが植物のゲノムの中に含有
される形態（「ゲノム」の形態は、ピノシルビンシンタ
ーゼをエンコードしないおよび／または調節作用もたな
い配列（例えば、イントロン）を包含する）で、あるい
は逆転写酵素／ポリメラーゼの助けによりｍＲＮＡを経
て得ることができるｃＤＮＡ（「コピー」）に相当する
（そしてイントロンをもはや含有しない）の形態で存在
することができる。
【０００８】本発明によるピノシルビンシンターゼの遺
伝子（または遺伝子ユニット）の中のＤＮＡセグメント
は、本質的に同一の作用を有する他のＤＮＡセグメント
またはＤＮＡにより置換することができる。
【０００９】本発明に関して、「外来」ＤＮＡとは、あ
る種の原核生物または真核生物のゲノムの中に自然に存
在しないが、人間による介在によってのみこのゲノムの
中に取り込まれるＤＮＡであると理解すべきである。
「追加の」ＤＮＡは、特定の原核生物または真核生物の
ゲノムの中に自然に存在するが、人間による介在により
追加の量で取り込まれたＤＮＡを意味する。「外来」Ｄ
ＮＡまたは「追加の」ＤＮＡの１または２以上のコピー
は、問題の場合の要件および性質に依存して、組み込む
ことができる。
【００１０】本発明によるピノシルビンシンターゼの遺
伝子（または遺伝子ユニット）の助けにより植物または
植物細胞の中で形成されるピノシルビンシンターゼは、
ピノシルビンシンターゼのように作用しそして、植物に
おいて、病害虫に対する抵抗性を増加する酵素を意味す
る。
【００１１】本発明の好ましいピノシルビンシンターゼ
の遺伝子は、プラスミドｐｉｎ５−４９またはその成分
の中に含有されているピノシルビンシンターゼのｃＤＮ
Ａ配列またはその成分と、あるいはＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：１に従うまたはその成分とハイブリダイゼーション
し、そしてピノシルビンシンターゼをエンコードするこ
とを特徴とする。
【００１２】本発明に従い好ましいピノシルビンシンタ
ーゼの遺伝子は、マツの木［ピヌス（Ｐｉｎｕｓ）
種］、とくに好ましくはピヌス・シルベストリス（Ｐｉ
ｎｕｓ・ｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓ）の中に存在し、そして
これらから分離することができる、ピノシルビンシンタ
ーゼの遺伝子である。
【００１３】その一部分の配列がプラスミドｐｉｎ５−
４９（これは下により詳細に記載する）上にｃＤＮＡの
形態で存在する、ピノシルビンシンターゼの遺伝子およ
び本質的に同一の作用を有するＤＮＡ配列は、本発明に
よるピノシルビンシンターゼの遺伝子としてことに好ま
しい。
【００１４】プラスミド上に含有されるｃＤＮＡはピヌ
ス・シルベストリス（Ｐｉｎｕｓ・ｓｙｌｖｅｓｔｒｉ
ｓ）から分離された。それは約１，３００塩基対の長さ
の配列から成る。５７０塩基対の一部分の配列は配列の
プロトコルＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１から由来する。
【００１５】植物［とくにマツの木およびことにピヌス
・シルベストリス（Ｐｉｎｕｓ・ｓｙｌｖｅｓｔｒｉ
ｓ）］の中に存在するピノシルビンシンターゼの遺伝子
は、ＤＮＡ配列の相同性の広い領域を有することが発見
された。配列の相同性に基づいて、本発明によるピノシ
ルビンシンターゼの遺伝子は、したがって、分子生物学
の既知の方法を使用して、プラスミドｐｉｎ５−４９ま
たはその成分の中に含有されているピノシルビンシンタ
ーゼのｃＤＮＡ配列またはその成分あるいはＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：１に従う配列の情報の助けにより、簡単な方
法で分離することができる。
【００１６】本発明によるピノシルビンシンターゼの遺
伝子を分離することができる、可能な植物は、とくにす
べての単子葉または双子葉の植物、好ましくは双子葉の
好ましくはマツの木［ピヌス（Ｐｉｎｕｓ）種］、およ
びとくに好ましくはピヌス・シルベストリス（Ｐｉｎｕ
ｓ・ｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓ）であり、これらは例として
かつ好ましいとして述べられる。
【００１７】既に述べたように、プラスミドｐｉｎ５−
４９上に横たわるｃＤＮＡとハイブリダイゼーションす
るピノシルビンシンターゼの遺伝子またはそのエンコー
ドする領域は本発明に従い好ましい。遺伝子または遺伝
子のエンコードする領域は、ｃＤＮＡの助けにより慣用
方法において得ることができる。
【００１８】大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌ
ｉ）菌株Ｅ．ｃｏｌｉ ｐｉｎ５−４９はプラスミドｐ
ｉｎ５−４９を含有する。この菌株は、ＤＳＭ、微生物
のドイツ菌株保存機関（Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌ
ｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ）、
ドイツ国Ｄ−３３００ブラウンシュウェイヒ、マシェオ
デルＷｅｇに、特許手続きの目的で微生物の寄託の国際
的認識についてのブダベスト条約の規定に従い受託され
た（受託日：１９９１年８月２９日）。それは受託番号
６６８９が与えられた。
【００１９】本発明は、また、この菌株およびその突然
変異体に関する。この宿主の中に堆積されたプラスミド
ｐｉｎ５−４９は、慣用方法で菌株を増殖させ、引き続
いてそのプラスミドを分離することによって、必要な量
で容易に得ることができる。機能的に完全な遺伝子、例
えば、本発明によるピノシルビンシンターゼの遺伝子
は、調節作用を有する成分（とくにプロモーター）およ
びタンパク質ピノシルビンシンターゼをエンコードする
構造遺伝子から成る。
【００２０】遺伝子の両者の部分は、互いに独立に使用
することができる。こうして、植物のゲノムの中に組み
込まれた後に発現される他のＤＮＡ配列（ピノシルビン
シンターゼの遺伝子から逸脱する）を、調節作用を有す
る成分の後に配置させることができる。植物または植物
の部分を表すことができる、比較的わずかのみの分離さ
れたプロモーターは既知であるので、本発明が同様に関
係するピノシルビンシンターゼの遺伝子のプロモーター
は、形質転換された植物または植物細胞の発生において
有用な助けとなる因子である。
【００２１】また、調節作用を有する「外来」成分をピ
ノシルビンシンターゼの構造遺伝子の前に配置させるこ
とができる。これは、調節作用を有するある種の（例え
ば、植物に対して内因性の）遺伝子のみがある種の植物
において十分な作用を有することができる場合、有利で
ある。したがって、ピノシルビンシンターゼの構造遺伝
子は独立に使用できる有用ユニットでありそして、すで
に述べたように、本発明は、また、それらに関する。本
発明によるピノシルビンシンターゼの遺伝子は、調節作
用を有する成分と構造遺伝子に慣用方法により分離する
ことができる。また、異なる天然に存在するピノシルビ
ンシンターゼの遺伝子の成分を組み合わせて、新規な機
能的「合成」遺伝子を形成することができる。本発明に
よる完全な自然ピノシルビンシンターゼの遺伝子（また
は遺伝子ユニット）は好ましく使用される。
【００２２】慣用方法の助けにより、ピノシルビンシン
ターゼの遺伝子（または遺伝子ユニット）またはそれら
の成分を１または数回（例えば、直列の配置で）、好ま
しくは１回、任意の所望の原核生物（好ましくはバクテ
リア）または真核生物（好ましくは植物）のＤＮＡの中
に、「外来」または「追加の」ＤＮＡとして組み込むこ
とができる。こうして、例えば、タンパク質をエンコー
ドするＤＮＡは調節配列を有することができ、そして植
物の中に組み込むことができる。本発明はこのようにし
て「修飾された」組み換えＤＮＡに関し、この組み換え
ＤＮＡは、例えば、植物または植物細胞の形質転換に使
用することができそして、形質転換後、植物または植物
細胞の中に含有される。
【００２３】ピノシルビンシンターゼの遺伝子（または
遺伝子ユニット）および／またはそれらの成分および組
み換えＤＮＡは、形質転換された微生物（好ましくはバ
クテリア、とくにグラム陰性バクテリア、例えば、Ｅ．
ｃｏｌｉ）の中におよび形質転換された植物細胞および
植物の中に、あるいはそれらのＤＮＡの中に、「外来」
ＤＮＡまたは「追加の」ＤＮＡとして、含有されること
ができる。本発明は、このようなベクター、形質転換さ
れた有機体（これは、また、これらのベクターを含有す
る）および形質転換された植物細胞および植物およびそ
れらのＤＮＡに関する。
【００２４】既に示したように、本発明によれば、ピノ
シルビンシンターゼの遺伝子（または遺伝子ユニット）
は、自然の植物ゲノムの中に、１または数回（ゲノムの
同一のまたは異なる点に）組み込まれ、また、異なる遺
伝子を互いに組み合わせることができる。既にピノシル
ビンシンターゼ合成あの能力を有する植物の場合におい
て、本発明による１または２以上のピノシルビンシンタ
ーゼの遺伝子の組み込みはかなり改良された抵抗性に導
くことができる。ピノシルビンシンターゼの遺伝子を含
有しない場合において、病害虫に対する増加した抵抗性
はこのような遺伝子の組み込みにより同様に達成され
る。適当ならば、本発明による構造遺伝子のみを使用
し、これらの前に、特定の植物から分離された、調節Ｄ
ＮＡ要素が存在する。
【００２５】本発明による形質転換された植物細胞およ
び植物の増加した抵抗性は、農学および森林のためにお
よび観賞植物の栽培、薬効のある植物の栽培および植物
の品種改良のために重要である。また、植物細胞の培
養、例えば、製剤学的に使用可能な物質の生産におい
て、微生物の病害虫、とくに菌類による攻撃に対して増
加した抵抗性を有することは有利である。
【００２６】こうして、本発明は、また、（ａ）１また
は２以上のピノシルビンシンターゼの遺伝子（または遺
伝子ユニット）および／またはピノシルビンシンターゼ
の遺伝子（または遺伝子ユニット）の成分および／また
は本発明による組み換えＤＮＡを、植物細胞（原形質体
を包含する）のゲノムの中に挿入し、そして適当なら
ば、（ｂ）完全な形質転換された植物を形質転換された
植物細胞（原形質体を包含する）から再生し、そして適
当ならば増殖させ、そして適当ならば、（ｃ）親の世代
またはそれから得られたそれ以上の世代の生ずるトラン
スジェニック植物から、所望の植物部分（種子を包含す
る）を得る、ことを特徴とする、病害虫に対する抵抗性
が増加した、トランスジェニック植物細胞（原形質体を
包含する）または植物（植物の部分または種子を包含す
る）を調製する方法に関する。
【００２７】プロセスの工程（ａ）、（ｂ）および
（ｃ）は、慣用方法で、既知のプロセスおよび方法によ
り実施することができる。
【００２８】本発明は、また、１または２以上のピノシ
ルビンシンターゼの遺伝子（または遺伝子ユニット）お
よび／またはピノシルビンシンターゼの遺伝子（または
遺伝子ユニット）の成分を「外来」ＤＮＡまたは「追加
の」ＤＮＡとして含有する、トランスジェニック植物細
胞（原形質体を包含する）および植物（植物の部分およ
び種子を包含する）、および上のプロセスにより得るこ
とができる、形質転換された植物細胞および植物に関す
る。
【００２９】本発明は、また、（ａ）植物細胞（原形質
体を包含する）および植物（植物の部分または種子を包
含する）の形質転換のための、ピノシルビンシンターゼ
の遺伝子（または遺伝子ユニット）および／またはそれ
らの成分および／または本発明による組み換えＤＮＡお
よび／または本発明による組み換えベクターおよび／ま
たは形質転換された微生物の使用、（ｂ）増殖材料の発
生のためのおよび新規な植物およびそれらの増殖材料の
発生のための、本発明によるトランスジェニック植物細
胞（原形質体を包含する）および植物（植物の部分また
は種子を包含する）の使用、（ｃ）病害虫を防除するた
めの、ピノシルビンシンターゼの遺伝子（または遺伝子
ユニット）および／またはそれらの成分および／または
本発明による組み換えＤＮＡの使用、および（ｄ）植物
からのピノシルビンシンターゼの遺伝子またはそれらの
成分の分離のための、および植物におけるおよび（一般
に）トランスジェニック植物細胞（原形質体を包含す
る）および植物（植物の部分または種子を包含する）の
発生のための、プラスミドｐｉｎ５−４９またはその成
分の中に含有されているピノシルビンシンターゼのｃＤ
ＮＡ配列またはその成分、およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
１に従う配列の情報に相当するＤＮＡ配列の使用。
【００３０】植物または植物細胞の遺伝学的材料の中
に、ピノシルビンシンターゼの遺伝子または遺伝子ユニ
ットまたはそれらの成分を、「外来」ＤＮＡまたは「追
加の」ＤＮＡとして、挿入するために利用可能な、ある
数の異なる方法が存在する。遺伝子の転移は、一般に、
普通に知られている方法により実施することができ、専
門家は困難なく特定の適当な方法を決定することができ
る。
【００３１】アグロバクテリウム・ツメファシエンス
（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎ
ｓ）からのＴｉプラスミドは、双子葉および単子葉の植
物のゲノムの中に外来ＤＮＡを転移するために、とくに
好適な、広く適用可能なベクターとして、入手可能であ
る。ピノシルビンシンターゼをエンコードする遺伝学的
物質を、適当なＴｉプラスミドのＴ−ＤＮＡの中に、調
節ＤＮＡ配列と一緒に挿入し（例えば、Ｚａｍｂｒｙｓ
ｋｉ ｅｔ ａｌ．１９８３）そして植物の感染、植物
の部分または植物の組織、例えば、葉、茎、胚軸、子
葉、分裂組織およびそれらから出る組織、例えば、二次
胚およびカルスの感染によるか、あるいは原形質体をア
グロバクテリウム・ツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃ
ｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）と同時培養する
ことによって転移される。
【００３２】別法は、所望の遺伝子を含有する精製した
ＤＮＡを植物原形質体の中で（例えば、Ｈａｉｎ ｅｔ
ａｌ．、１９８５；Ｋｒｅｎｓ ｅｔ ａｌ．１９８
２；Ｐａｓｚｋｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．、１９８４）
ポリカチオンまたはカルシウム塩およびポリエチレング
リコールの存在下にインキュベーションすることであ
る。
【００３３】ＤＮＡの吸収は、また、電場（エレクトロ
ポレイション）により追加的に促進することができる
（例えば、Ｆｒｏｍｍ ｅｔ ａｌ．、１９８６）。
【００３４】ＤＮＡは、また、既知の方法で植物の受粉
を経て、花粉を物理的に加速したＤＮＡを有する粒子で
「シューティング」することによって導入することがで
きる。
【００３５】植物は、既知の方法で適当な栄養培地の助
けにより再生される（例えば、ＮａｇｙおよびＭａｌｉ
ｇａ、１９７６）。
【００３６】本発明によるプロセスの好ましい実施態様
において［欧州特許出願（ＥＰ−Ａ）第１１６，７１８
号からの方法に従い］、ｐｉｎ５−４９からのｃＤＮＡ
に対して相補的に、ピヌス（Ｐｉｎｕｓ）のゲノムの中
に存在する遺伝子または遺伝子ユニットを、分離された
形態で、適当な中間体のＥ．ｃｏｌｉベクター、例え
ば、ｐＧＶ７００またはｐＧＶ７１０［参照、欧州特許
出願（ＥＰ−Ａ）第１１６，７１８号］、または好まし
くはそれらの誘導体、これらは、さらに、リポーター遺
伝子、例えば、ｎｐｔＩＩ（Ｈｅｒｒｅｔａ−Ｅｓｔｒ
ｅｌｌａ ｅｔａｌ．１９８３）またはｈｐｔ（Ｖａｎ
ｄｅｎ Ｅｌｚｅｎ ｅｔ ａｌ．１９８６）を含有
する、の中にクローニングする。
【００３７】このようにして構成されたプラスミドは、
慣用方法（例えば、Ｖａｎ Ｈａｕｔｅ ｅｔ ａｌ．
１９８３）により、例えば、ｐＧＶ３５０またはその誘
導体を含有するアグロバクテリウム・ツメファシエンス
（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎ
ｓ）（Ｚａｍｂｒｙｓｋｉ ｅｔ ａｌ．１９８３）に
転移される。あるいは、ピノシルビンシンターゼの遺伝
子ユニットを、ライブラリーのベクター、例えば、ｐＣ
Ｖ００１またはｐＣＶ００２（例えば、Ｋｏｎｃｚおよ
びＳｃｈｅｌｌ １９８６）の中にクローニングし、そ
して前述したように適当なアグロバクテリウム・ツメフ
ァシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆ
ａｃｉｅｎｓ）の中に転移する。生ずるアグロバクテリ
ウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）菌株は、ピノシル
ビンシンターゼの遺伝子または遺伝子ユニットを植物に
転移することができるの形態で含有し、引き続いて植物
の形質転換に使用する。
【００３８】他の好ましい実施態様において、分離され
たピノシルビンシンターゼの遺伝子ユニットは、適当な
らば、植物細胞のためのリポーター遺伝子、例えば、カ
ナマイシン抵抗性（例えば、Ｈｅｒｒｅｔａ−Ｅｓｔｒ
ｅｌｌａ ｅｔ ａｌ．１９８３）またはヒグロマイシ
ン抵抗性（ｖａｎ ｄｅｎ Ｅｌｚｅｎ ｅｔ ａｌ．
１９８６）、好ましくはｐＬＧＶｎｅｏ２１０３（Ｈａ
ｉｎ ｅｔ ａｌ．１９８５）、ｐＭＯＮ１２９（Ｆｒ
ａｌｅｙ Ｒ．Ｔ． ｅｔ ａｌ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８０、４８０３（１９
８３）、ｐＡＫ１００３、ｐＡＫ２００４（Ｖｅｌｔｅ
ｎ Ｊ． ｅｔ ａｌ．、ＥＭＢＯ Ｊｏｕｒｎ．Ｖｏ
ｌ．３、２７２３（１９８４）またはｐＧＳＳＴｎｅｏ
３（ｐＧＳＳＴ３）［欧州特許出願（ＥＰ−Ａ）第１８
９，７０７号］を含有する、他のプラスミドと一緒に、
慣用方法において、直接の遺伝子の転移（例えば、Ｈａ
ｉｎ ｅｔ ａｌ．１９８５）により植物の原形質体に
転移される。この場合において、１または２以上のプラ
スミドは円形の形態で存在することができるが、好まし
くは直線の形態である。リポーター遺伝子をもつプラス
ミドを使用する場合、カナマイシン抵抗性原形質体をピ
ノシルビンシンターゼの発現について検査する。そうで
なければ（リポーター遺伝子をもたない）、生ずるカル
スを１または２以上のピノシルビンシンターゼの遺伝子
の発現について検査する（慣用方法によるスクリーニン
グ）。
【００３９】形質転換された（トランスジェニック）植
物または植物細胞は、既知の方法により、例えば、葉の
ディスクの形質転換（例えば、Ｈｏｒｓｃｈ ｅｔ ａ
ｌ．１９８５）により、再生する植物の原形質体または
細胞の培養物をアグロバクテリウム・ツメファシエンス
（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎ
ｓ）（例えば、Ｍａｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ．１９７９、
Ｈａｉｎ ｅｔ ａｌ．１９８５）と同時培養すること
にによるか、あるいは直接のトランスフェクションによ
り発生させる。生ずる形質転換された植物は、リポータ
ー遺伝子の発現について選択することによって、例え
ば、試験管内で硫酸カナマイシンのリン酸化（Ｒｅｉｓ
ｓ ｅｔ ａｌ．１９８５；Ｓｃｈｒｅｉｅｒ ｅｔ
ａｌ．１９８５）によるか、あるいはノパリンシンター
ゼの発現（Ａｅｒｔｓ ｅｔ ａｌ．１９８３）または
ピノシルビンシンターゼの発現により、ノザンブロット
分析またはウェスタン・ブロット分析により検出され
る。ピノシルビンシンターゼおよびスチルベンは、ま
た、既知の方法で、形質転換された植物において特定の
抗体の助けにより検出することができる。ピノシルビン
シンターゼは、また、酵素活性試験により検出すること
ができる（Ｇｅｈｌｅｒｔ ｅｔ ａｌ．、１９９
０）。
【００４０】形質転換された植物細胞の培養および完全
な植物を形成する再生は、一般に普通の方法により、特
定の適当な栄養培地の助けにより実施する。
【００４１】本発明によるピノシルビンシンターゼの遺
伝子（または遺伝子ユニット）を含有しそして本発明が
関係する、形質転換された植物細胞および形質転換され
た植物の両者は、病害虫、とくに植物病原性菌類に対し
て、かなり高い抵抗性を示す。
【００４２】本発明に関して、用語「植物」は完全な植
物および、また、植物の一部分、例えば、葉、種子、塊
茎、切断片などの両者を意味する。「植物細胞」は、原
形質体、細胞系、植物のカルスなどを包含する。「増殖
材料」は、形質転換された植物および植物細胞の増殖の
ために使用することができる植物および植物細胞を意味
し、こうして本発明は、また、この材料に関する。
【００４３】本発明に関して、用語「本質的に同一の作
用を有するＤＮＡ配列」は、本発明が、また、ピノシル
ビンシンターゼがもはや形成されないか、あるいは調節
遺伝子の成分がもはや活性でないように、ピノシルビン
シンターゼの遺伝子およびそれらの成分の機能が損傷さ
れない、修飾に関することを意味する。対応する修飾
は、ＤＮＡの区画、個々のコドンおよび／または個々の
核酸の置換、付加および／または除去により、行うこと
ができる。
【００４４】本発明に従い使用することができる有機体
の場合において、「突然変異体」は、本発明の実施のた
めに必須な特徴をなお有し、そしてとくに、プラスミド
ｐｉｎ５−４９を含有する、修飾された微生物を意味す
る。
【００４５】本発明によるピノシルビンシンターゼの遺
伝子（または遺伝子ユニット）の組み込み（形質転換）
により、病害虫に対する抵抗性または増加された抵抗性
を与えることができる植物は、事実上すべての植物を包
含する。作物の植物、例えば、森林の植物、例えば、ト
ウヒ、モミ、ダグラスモミ、マツ、カラマツ、ブナノキ
およびオーク、ならびに食糧および原料、例えば、穀物
を供給する植物（とくにコムギ、ライムギ、オオムギ、
カラスムギ、キビ、イネおよびトウモロコシ、ジャガイ
モ、マメ科の植物（例えば、豆類およびとくにアルファ
ルファおよび大豆）、野菜（とくにキャベツの変種およ
びトマト）、果実（とくにリンゴ、モモ、チェリー、ブ
ドウ、柑橘類、パイナップルおよびバナナ）、ギネアブ
ラヤシ、茶、ココアおよびコーヒーの低木、タバコ、サ
イザルおよびワタにおいて、および薬効のある植物、例
えば、インドジャボク（Ｒａｕｗｏｌｆｉａ）およびジ
ギタリス（Ｄｉｇｉｔａｌｉｓ）の場合において、抵抗
性の発生が、もちろん、とくに必要とされている。ジャ
ガイモ、トマトおよびマメ科の植物をとくに好ましいと
して述べることのできる。本発明によるピノシルビンシ
ンターゼの遺伝子は、好ましくは、植物のゲノムの中に
「外来」ＤＮＡとして組み込まれる。
【００４６】本発明によるピノシルビンシンターゼの遺
伝子の助けにより抵抗性または増加した抵抗性を達成す
ることができる病害虫として、動物の病害虫、例えば、
昆虫、ダニおよび線虫、ならびに微生物の病害虫、例え
ば、植物病原性菌類、バクテリアおよびウイルスを述べ
ることのできる。微生物の病害虫、とくに植物病原性菌
類がとくに選択される。
【００４７】有害な昆虫は、とくに、次の目の昆虫を包
含する：直翅目（Ｏｒｔｈｏｐｔｅｒａ）、ハサミムシ
目（Ｄｅｒｍａｐｔｅｒａ）、等脚目（Iｓｏｐｏｄ
ａ）、アザミウマ目（Ｔｈｙｓａｎｏｐｔｅｒａ）、異
翅目（Ｈｅｔｅｒｏｐｔｅｒａ）、同翅目（Ｈｏｍｏｐ
ｔｅｒａ）、鞘翅目（Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａ）、鱗翅目
（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ）、鞘翅目（Ｃｏｌｅｏｐｔ
ｅｒａ）、膜翅目（Ｈｙｍｅｎｏｐｔｅｒａ）および双
翅目（Ｄｉｐｔｅｒａ）。
【００４８】有害なダニ類は、とくに次のものを包含す
る：ホコリダニ種（Ｔａｒｓｏｎｅｍｕｓ ｓｐ
ｐ.）、ミカンリンゴハダニ種（Ｐａｎｏｎｙｃｈｕｓ
ｓｐｐ.）およびナミハダニ種（Ｔｅｔｒａｎｙｃｈ
ｕｓ ｓｐｐ.）。
【００４９】有害な線虫類はとくに次のものを包含す
る：ネグサレセンチユウ種（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ
ｓｐｐ.）、シストセンチユウ種（Ｈｅｔｅｒｏｄｅ
ｒａｓｐｐ.）およびネコブセンチユウ種（Ｍｅｌｏｉ
ｄｏｇｙｎｅ ｓｐｐ.）。
【００５０】微生物の病害虫は、とくに、次の植物病原
性菌類を包含する：プラスモジオフォロミセテス(Ｐｌ
ａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒｏｍｙｃｅｔｅｓ)、卵菌類
（Ｏｏｍｙｃｅｔｅｓ）、キトリジオミセテス(Ｃｈｙ
ｔｒｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ)、接合菌類(Ｚｙｇｏｍｙ
ｃｅｔｅｓ）、嚢子菌類（Ａｓｃｏｍｙｃｅｔｅｓ）、
担子菌類（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ）および不完
全菌類（Ｄｅｕｔｅｒｏｍｙｃｅｔｅｓ）。
【００５１】植物病原性バクテリアは、とくに、次のも
のを包含する：シュードモナス科（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎ
ａｄｃｅａｅ）、リゾビウム科（Ｒｉｚｏｂｉａｃｅａ
ｅ）、腸内細菌科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅ
ａｅ）、コリネバクテリア科（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅ
ｒｉａｃｅａｅ）およびストレプトミセス科（Ｓｔｒｅ
ｐｔｏｍｙｃｅｔａｃｅａｅ）。
【００５２】ウイルスの病気は、とくに、次のものを包
含する：モザイク、矮化および黄色化のウイルスによる
病気。
【００５３】上に列挙した一般名に入るウイルス、菌類
およびバクテリアの病気のいくつかの病原性有機体を例
として述べることのできるが、これらに限定されない：
キサントモナス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ）種、例え
ば、キサントモナス・オリザエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａ
ｓ ｏｒｙｚａｅ）；シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍ
ｏｎａｓ）種、例えば、シュードモナス・ラクリマンス
（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｌａｃｈｒｙｍａｎｓ）；
エルウィニア（Ｅｒｗｉｎｉａ）種、例えば、エルウィ
ニア・アミロボラ（Ｅｒｗｉｎｉａ ａｍｙｌｏｖｏｒ
ａ）；ピチウム（Ｐｙｔｈｉｕｍ）種、例えば、ピチウ
ム・ウルチマム（Ｐｙｔｈｉｕｍ ｕｌｔｉｍｕｍ）；
フィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）種、例え
ば、フィトフトラ・インフェスタンス（Ｐｈｙｔｏｐｈ
ｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ）；シュードペロノス
ポラ（Ｐｓｅｕｄｏｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ）種、例え
ば、シュードペロノスポラ・フムリ（Ｐｓｅｕｄｏｐｅ
ｒｏｎｏｓｐｏｒａ ｈｕｍｕｌｉ）またはシュードペ
ロノスポラ・クベンス（Ｐｓｅｕｄｏｐｅｒｏｎｏｓｐ
ｏｒａ ｃｕｂｅｎｓｉｓ）；プラスモパラ（Ｐｌａｓ
ｍｏｐａｒａ）種、例えば、プラスモパラ・ヴィチコラ
（Ｐｌａｓｍｏｐａｒａ ｖｉｔｉｃｏｌａ）；ペロノ
スポラ（Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ）種、例えば、ペロノ
スポラ・ピシ（Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ ｐｉｓｏ）ま
たはＰ・ブラシカ（Ｐ．ｂｒａｓｓｉｃａｅ）；エリシ
フェ（Ｅｒｙｓｉｐｐｈｅ）種、例えば、エリシフェ・
グラミニス（Ｅｒｙｓｉｐｐｈｅ ｇｒａｍｉｎｉ
ｓ）；スフェロテカ（Ｓｐｈａｅｒｏｔｈｅｃａ）種、
例えば、スフェロテカ・フリギネア（Ｓｐｈａｅｒｏｔ
ｈｅｃａｆｕｌｉｇｉｎｅａ）；ポドスフェラ（Ｐｏｄ
ｏｓｐｈａｅｒａ）種、例えば、ポドスフェラ・ロイコ
トリチャ（Ｐｏｄｏｓｐｈａｅｒａ ｌｅｕｃｏｔｒｉ
ｃｈａ）；ヴェンチュリア（Ｖｅｎｔｕｒｉａ）種、例
えば、ヴェンチュリア・インエクアリス（Ｖｅｎｔｕｒ
ｉａ ｉｎａｅｑｕａｌｉｓ）；ピレノフォラ（Ｐｙｒ
ｅｎｏｐｈｏｒａ）種、例えば、ピレノフォラ・テレス
（Ｐｙｒｅｎｏｐｈｏｒａ ｔｅｒｅｓ）またはＰ．グ
ラミネ（Ｐ．ｇｒａｍｉｎｅａ）；（コニディア（Ｃｏ
ｎｉｄｉａ）型：ドレチュスレラ（Ｄｒｅｃｈｓｌｅｒ
ａ）、ｓｙｓ：ヘルミントスポリウム（Ｈｅｌｍｉｎｔ
ｈｏｓｐｏｒｉｕｍ））；コクリオボルス（Ｃｏｃｈｌ
ｉｏｂｏｌｕｓ）種、例えば、コクリオボルス・サチブ
ス（Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ ｓａｔｉｖｕｓ）（コ
ニディア（Ｃｏｎｉｄｉａ）型：ドレチュスレラ（Ｄｒ
ｅｃｈｓｌｅｒａ）、ｓｙｎ：ヘルミントスポリウム
（Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍ））；ウロミセス
（Ｕｒｏｍｙｃｅｔｓ）種、ウロミセス・アペンディク
ラツス（Ｕｒｏｍｙｃｅｔｓ ａｐｐｅｎｄｉｃｕｌａ
ｔｕｓ）；プクシニア（Ｐｕｃｃｉｎｉａ）種、例え
ば、プクシニア・レコンディタ（Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｒ
ｅｃｏｎｄｉｔｉａ）；チレチア（Ｔｉｌｌｅｔｉａ）
種、例えば、チレチア・カリエス（Ｔｉｌｌｅｔｉａ
ｃａｒｉｅｓ）；ウスチラゴ（Ｕｓｔｉｌａｇｏ）種、
例えば、ウスチラゴ・ヌダ（Ｕｓｔｉｌａｇｏ ｎｕｄ
ａ）またはウスチラゴ・アヴェナエ（Ｕｓｔｉｌａｇｏ
ａｖｅｎａｅ）；ペリクラリア（Ｐｅｌｌｉｃｕｌａ
ｒｉａ）種、例えば、ペリクラリア・ササキイ(Ｐｅｌ
ｌｉｃｕｌａｒｉａ ｓａｓａｋｉ)；ピリクラリア
（Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ）種、例えば、ピリクラリア
・オリザエ（Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ ｏｒｙｚａ
ｅ）；フサリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）種、例えば、フ
サリウム・クルモルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｃｕｌｍｏ
ｒｕｍ）；ハイイロカビ（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）種、例え
ば、ボツリティス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓｃｉｎ
ｅｒｅａ）；セプトリア（Ｓｅｐｔｏｒｉａ）種、例え
ば、セプトリア・ノドルム（Ｓｅｐｔｏｒｉａ ｎｏｄ
ｏｒｕｍ）；レプトスフェリア（Ｌｅｐｔｏｓｐｈａｅ
ｒｉａ）種、例えば、レプトスフェリア・ノドルム（Ｌ
ｅｐｔｏｓｐｈａｅｒｉａ ｎｏｄｏｒｕｍ）；セルコ
スポラ（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ）種、例えば、セルコス
ポラ・カネッセンス（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ ｃａｎｅ
ｓｃｅｎｓ）；アルテルナリア（Ａｌｔｅｒｎａｒｉ
ａ）種、例えば、アルテルナリア・ブラシカ（Ａｌｔｅ
ｒｎａｒｉａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ）；およびシュード
セルコスポレラ（Ｐｓｅｕｄｏｃｅｒｃｏｓｐｏｒｅｌ
ｌａ）種、例えば、シュードセルコスポレラ・ヘルポト
リコイデス（Ｐｓｅｕｄｏｃｅｒｃｏｓｐｏｒｅｌｌａ
ｈｅｒｐｏｔｒｉｃｈｏｉｄｅｓ）。ヘルミントスポ
リウム・カルボヌム（Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕ
ｍ ｃａｒｂｏｎｕｍ）をさらに述べることのできる。
【００５４】次の実施例によって、本発明をさらに詳細
に説明する。
【００５５】１、ピヌス（Ｐｉｎｕｓ）からのピノシル
ビンシンターゼの遺伝子の分離 ピヌス（Ｐｉｎｕｓ）［ピヌス・シルベストリス（Ｐｉ
ｎｕｓ・ｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓ）］からの植物および細
胞培養物は、ピノシルビンシンターゼの形成を引き起こ
すピノシルビンシンターゼの遺伝子を含有する（タンパ
ク質の大きさ４５００Ｄ；特定の抗血清との反応）（Ｇ
ｅｈｌｅｒｔ ｅｔ ａｌ．１９９０）。
【００５６】分子生物学の既知のプロセスおよび方法、
例えば、次の本に記載されている方法を、ピノシルビン
シンターゼの遺伝子の分離において使用した：サムブル
ック（Ｓａｍｂｒｏｏｋ）、Ｊ．、フリトシ（Ｆｒｉｔ
ｓｃｈ）、Ｅ．Ｆ．マニアチス（Ｍａｎｉａｔｉｓ）、
Ｔ．：分子クローニング：実験室のマニュアル（Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｙ Ｍａｎｕａｌ）；コールド・スプリング・ハーバ
ー・ラボラトリー（Ｃｏｌｄ ＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏ
ｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）、第２版、１９８９。
【００５７】ピヌス（Ｐｉｎｕｓ）のための「遺伝子ラ
イブラリー」をまず確立する：濃縮した細胞核からのゲ
ノムのＤＮＡ［ベドブルック（Ｂｅｄｂｒｏｏｋ）、
Ｊ．、植物の分子生物学のニューズレター（Ｐｌａｎｔ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｎｅｗｓｌｅ
ｔｔｅｒ）２、２４、１９８１］を制限酵素ＮｄｅＩＩ
で切断し、こうして約１２，０００ヌクレオチド対の平
均長さを有するＤＮＡ断片を形成する。これらの断片を
ラムダファージＥＭＢＬ４のＢａｍＨＩ部位の中にクロ
ーニングし［フリシャウフ（Ｆｒｉｓｃｈａｕｆ） ｅ
ｔ ａｌ．、ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオ
ロジー（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．）、１７０、８２７−
８４２、１９８３］、そしてファージをＥ．ｃｏｌｉの
中で増殖させる。ファージの集団はその全体で、一部分
クローニングされた断片、ピヌス（Ｐｉｎｕｓ）細胞の
全体のゲノムのＤＮＡ、したがって、また、ピノシルビ
ンシンターゼの遺伝子を含有する（マルチ遺伝子の
族）。
【００５８】ピノシルビンシンターゼの遺伝子、それら
のｍＲＮＡおよびピノシルビンシンターゼのｃＤＮＡの
各々は、互いから誘導することができる（遺伝子→ｍＲ
ＮＡ→ｃＤＮＡ）ので、同一の核酸配列を含有する。こ
れが意味するように、ピノシルビンシンターゼの遺伝子
は特定のピノシルビンシンターゼのｃＤＮＡと、あるい
は特定のオリゴヌクレオチドとの特異的ハイブリダイゼ
ーションにより同定することができる。この手順を使用
して、ピノシルビンシンターゼのためのゲノムのファー
ジのクローンを同定し、タバコに転移し、そして異種植
物においてピノシルビンの合成を指令することが発見さ
れた。トランスジェニック植物は、植物の病原体に対し
て増加した抵抗性を表した。これらの遺伝子をもつファ
ージをハイブリダイゼーションにより同定し、次いで分
離し、そして増殖させる。このファージの中でクローニ
ングしたピヌス（Ｐｉｎｕｓ）からのゲノムのＤＮＡ
を、さらに、種々の制限酵素によりマッピングし、そし
てピノシルビンシンターゼの遺伝子の位置をｃＤＮＡ配
列または合成オリゴヌクレオチドを使用するハイブリダ
イゼーション実験によりさらに決定する。最後に、遺伝
子ユニットをファージから制限酵素の消化により切断
し、対応して切断したプラスミドベクターｐＵＣ１８
［ギブコ（Ｇｉｂｃｏ）−ＢＲＬ ＧｍｂＨ、ドイツ国
エッゲンステイン］の中でクローニングし、そして組み
換えプラスミドとして増殖させる。
【００５９】２、プラスミドｐｉｎ５−４９の説明（参
照、第１図） プラスミドは２つの成分から成る： （ｉ）ピノシルビンシンターゼのｃＤＮＡ（部分配
列）：プラスミドｐＴ７／Ｔ３の中に挿入されたｃＤＮ
Ａは１．３ｋｂの長さであり、そしてプラスミドｐｉｎ
５−４９をＥｃｏＲＩで切断することができる。
【００６０】（ｉｉ）ベクターのプラスミド：ｃＤＮＡ
をベクターｐＴ７／Ｔ３［ファーマシア（Ｐｈａｒｍａ
ｃｉａ）ＬＫＢ ＧｍｂＨ、ドイツ国］の中でクローニ
ングする。ベクターの大きさは２８００ヌクレオチド対
である。それはアンピシリン抵抗性の遺伝子を有する、
すなわち、このプラスミドをもつＥ．ｃｏｌｉは、抗生
物質のアンピシリンを含有する栄養培地の中で成長し
た。Ｏｒｉ：Ｅ．ｃｏｌｉの中のプラスミドの増殖に必
要な配列の表示。
【００６１】プラスミドｐｉｎ５−４９はアンピシリン
抵抗性の遺伝子を有し、そして、ピノシルビンシンター
ゼのｃＤＮＡとして、約１．３ｋｂの前述のＥｃｏＲＩ
断片を含有する。それはｐｉｎ５−４９を含有するＥ．
ｃｏｌｉ細胞（Ｅ．ｃｏｌｉｐｉｎ５−４９）の中で慣
用方法で増殖することができる。
【００６２】ｐｉｎ５−４９を含有するＥ．ｃｏｌｉ細
胞（Ｅ．ｃｏｌｉ ｐｉｎ５−４９）のために好ましい
栄養培地［例えば、ＪＡ２２１、ナカムラ、Ｋ．、イノ
ウエ、Ｍ．、ＥＭＢＯ Ｊ．１、７７１−７７５、１９
８２）： Ｂａｃｔｏ−ペプトン＊ １０ｇ 酵母エキス ５ｇ ＮａＣｌ ５ｇ 寒天 ２０ｇ Ｈ2Ｏ １リットル ｐＨ７．５ 発酵：３７℃、好気的 （＊ Ｂａｃｔｏは、ＤＩＦＣＯ Ｌａｂ、米国デトロ
イト州、の商標である）。
【００６３】３、タバコの形質転換 ａ）タバコのシュートの培養およびタバコの原形質体の
分離：ニコチアナ・タバクム（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔ
ａｂａｃｕｍ）（ＰｅｔｉｔＨａｖａｎａ ＳＲ１）
を、ホルモン不含ＬＳ培地（Ｌｉｎｓｍａｉｅｒおよび
Ｓｋｏｏｇ １９６５）。シュートの切片を新鮮なＬＳ
培地に約６〜８週の間隔で転移した。シュートの培養物
を培養室内で２４〜２６℃において１２時間の光（１０
００〜３０００ルックス）の中に保持する。
【００６４】葉の原形質体の分離のために、約２ｇの葉
（約３〜５ｃｍの長さ）を新しいレーザーブレードで小
さい片（０．５ｃｍ×１ｃｍ）に切断する。葉の材料
を、Ｋ３培地（ＮａｇｙおよびＭａｌｉｇａ １９７
６）、０．４モルのスクロース、ｐＨ５．６、２％のゼ
ルラーゼ（Ｚｅｌｌｕｌａｓｅ）Ｒ１０（Ｓｅｒｖａ）
および０．５％のマセロジム（Ｍａｃｅｒｏｚｙｍ）Ｒ
１０（Ｓｅｒｖａ）から成る２０ｍｌの酵素溶液中で室
温において１４〜１６時間インキュベーションする。次
いで、原形質体を細胞残留物から０．３０ｍｍおよび
０．１ｍｍの鋼の篩で濾過することによって分離する。
濾液を１００×ｇにおいて１０分間遠心する。この分間
遠心の間に、完全な原形質体は酵素溶液の上部のへりに
帯で浮きそして集められる。細胞残留物の沈澱物および
酵素溶液をガラス毛管で吸引する。前以て精製した原形
質体を新鮮なＫ３培地（浸透圧剤として０．４モルのス
クロース）で１０ｍｌにし、そして再び浮く。洗浄培地
を吸引し、そして原形質体を１〜２×１０5／ｍｌに培
養のために希釈するか、あるいは引き続いてアグロバク
テリア（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉａ）（同時培養）で感
染させる。原形質体の濃度をカウンティング室内で決定
する。
【００６５】ｂ）アグロバクテリウム・ツメファシエン
ス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎ
ｓ）との同時培養による再生するタバコの原形質体の形
質転換：マートン（Ｍａｒｔｏｎ） ｅｔ ａｌ．１９
７９の方法を、小さい変更を加えて、下において使用す
る。原形質体を記載したようにして分離し、そして１〜
２×１０5／ｍｌの密度においてＫ３培地（０．４モル
のスクロース、０．１ｍｇ／ｌのＮＡＡ、０．２ｍｇの
カイネチン）２日間暗所で、そして１〜２日間弱い光
（５００ルックス）下に２６℃においてインキュベーシ
ョンする。原形質体の最初の分割が起こるとすぐに、最
小Ａ（Ａｍ）培地の中のアグロバクテリウム（Ａｇｒｏ
ｂａｃｔｅｒｉｕｍ）［密度、約１０9のアグロバクテ
リア（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉａ）／ｍｌ］の３０μｌ
を３ｍｌの再生する原形質体に添加する。同時培養の期
間は暗所で２０℃において３〜４日である。次いで、タ
バコ植物を１２ｍｌの遠心管の中に導入し、海水（６０
０ｍＯｓｍ／ｋｇ）で１０ｍｌに希釈し、そして６０×
ｇで１０分間沈澱させる。この洗浄操作をさらに１〜２
回反復して、アグロバクテリア（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒ
ｉａ）の大部分を除去する。細胞懸濁液を５〜１０4の
密度でＫ３培地（０．３モルのスクロース）の中で１ｍ
ｇ／ｌのＮＡＡ（ナフチル−１−酢酸）、０．２ｍｇ／
ｌのカイネチンおよび５００ｍｇ／ｌのセファロスポリ
ン抗生物質セフォタクシムとともに培養した。細胞懸濁
液を新鮮なＫ３培地で毎週希釈し、そして培地の浸透圧
値を０．０５モルのスクロース（約６０ｍＯｓｍ／ｋ
ｇ）／週により徐々に減少する。カナマイシンを使用す
る選択（１００ｍｇ／ｌの硫酸カナマイシン（Ｓｉｇｍ
ａ）、６６０ｍｇ／ｇの活性ｋｍ）を、アガロース「ビ
ーズ型培養」（Ｓｈｉｌｌｉｔｏ ｅｔ ａｌ．１９８
３）において同時培養後、２〜３週で開始する。カナマ
イシン抵抗性コロニーは、選択開始後、３〜４週で遅延
したコロニーのバックグラウンドから区別することがで
きる。
【００６６】ｃ）ＤＮＡによるタバコの原形質体の直接
形質転換。硝酸カルシウム−ＰＥＧ形質転換。
【００６７】１８０μｌのＫ３培地の中の約１０6原形
質体を、ペトリ皿の中で、０．５μｇ／μｌのゲノムの
ピノシルビンシンターゼの遺伝子を有するプラスミドお
よび０．５μｇ／μｌのｐＬＧＶｎｅｏ２１０３を含有
する２０μｌの水性ＤＮＡ溶液と注意して混合する（Ｈ
ａｉｎ ｅｔ ａｌ．１９８５）。次いで、２００μｌ
の融合溶液（０．１モルの硝酸カルシウム、０．４５モ
ルのマンニトール、２５％のポリエチレングリコール
（ＰＥＧ６０００）、ｐＨ９）を注意して添加する。１
５分後、５ｍｌの洗浄溶液（０．２７５モルの硝酸カル
シウム、ｐＨ６）を添加し、そしてさらに５分後、原形
質体を遠心管の中に移し、そして６０×ｇで沈澱させ
る。沈澱物を小さい量のＫ３培地の中に取り、そして次
の節に記載するように培養する。あるいは、原形質体は
ハイン（Ｈａｉｎ） ｅｔ ａｌ．１９８５に記載する
ように形質転換することができる。
【００６８】形質転換は、また、０．５μｇ／μｌのｐ
ＬＧＶｎｅｏ２１０３を添加しないで実施することがで
きる。リポーター遺伝子をの場合において使用しないの
で、生ずるカルスをドットブロットハイブリダイゼーシ
ョンの助けにより、ピノシルビンシンターゼの遺伝子の
存在について検査する。ｐｉｎ５−４９からのｃＤＮＡ
配列をハイブリダイゼーション試料として使用すること
ができる。他の検出方法、例えば、抗体を使用する試験
または菌の抵抗性の決定を、もちろん、また、使用する
ことができる。
【００６９】ｄ）ＤＮＡとインキュベーションした原形
質体の培養物およびカナマイシン抵抗性カルスの選択：
変更した「ビーズ型培養」技術（Ｓｈｉｌｉｔｏ ｅｔ
ａｌ．１９８３）を、培養および下に記載するカナマ
イシン抵抗性コロニーの選択に使用する。ＤＮＡで原形
質体を処理して１週後に（参照、ｃ）、３ｍｌの細胞培
養物を３μｌのＫ３培地（０．３モルのスクロース＋ホ
ルモン；１．２％（Ｓｅａｐｌａｑｕｅ）のＬＭＴアガ
ロース、Ｍａｒｉｎｅ Ｃｏｌｌｏｉｄｓ）と５ｃｍの
ペトリ皿中で混合し、アガロースを乾燥状態でオートク
レーブ処理しそして、Ｋ３培地の添加後、マイクロ波炉
内で短時間沸騰させる。アガロースを固化した後、アガ
ロースのディスク（「ビーズ」）を、それ以上の培養お
よび選択のために、埋め込んだタバコのマイクロカルス
を有する１０ｃｍのペトリ皿上に移し、そして各場合に
おいて、１０ｍｌのＫ３培地（０．３モルのスクロー
ス、１ｍｇ／ｌのＮＡＡ、０．２ｍｇ／ｌのカイネチ
ン）および１００ｍｇ／ｌの硫酸カナマイシン（Ｓｉｇ
ｍａ）を添加する。液体培地を毎週交換する。この手順
の間に、培地の浸透圧値を段階的に減少させる。
【００７０】置換培地（Ｋ３＋ｋｍ）を０．０５モルの
スクロース（約６０ｍＯｓｍ）／週により還元する。
【００７１】ＤＮＡの形質転換後のカナマイシン抵抗性
のタバココロニーの選択のタイムテーブル：
【００７２】
【表１】
【００７３】ｅ）カナマイシン抵抗性植物の再生：カナ
マイシン抵抗性のコロニーが約０．５ｃｍの直径に到達
するとすぐに、それらの半分を再生培地（ＬＳ培地、２
％のスクロース、０．５ｍｇ／ｌのベンジルアミノプリ
ンＢＡＰ）上に配置し、そして培養室内に１２時間の光
（３０００〜５０００ルックス）の中に２４℃において
保持する。他方の半分をカルス培養物として１ｍｇ／ｌ
のＮＡＡ、０．２ｍｇ／ｌのカイネチン、０．１ｍｇ／
ｌのＢＡＰおよび１００ｍｇ／ｌの硫酸カナマイシンを
有するＬＳ培地上で増殖させる。再生したシュートが約
１ｃｍの大きさであるとき、それらを切断し、そして、
根の形成のために、成長調節因子を含まない、１／２Ｌ
Ｓ培地上に配置する。シュートは１００ｍｇ／ｌの硫酸
カナマイシンを有する１／２ＭＳ培地上で根を形成し、
そしてこれを後に土の中に移す。
【００７４】ｆ）アグロバクテリウム・ツメファシエン
ス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎ
ｓ）による葉のディスクの形質転換 葉のディスクの形質転換のために（Ｈｏｒｓｃｈ ｅｔ
ａｌ．１９８５）、無菌のシュートの培養物からの長
さ約２〜３ｃｍの葉を直径１ｃｍのディスクにスタンピ
ングし、そしてＡｍ培地中の適当なアグロバクテリア
（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉａ）（約１０9／ｍｌ）の懸
濁液（参照、ｂ）と約５分間インキュベーションする。
葉の感染した片を、ホルモンを含まないＭＳ培地（下を
参照）上に約２４℃において３〜４日間保持する。この
期間の間に、アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ）は葉の片の上で成長する。次いで、葉の片を
ＭＳ培地（０．５ｍｇ／ｌのＢＡＰ、０．１ｍｇ／ｌの
ＮＡＡ）中で洗浄し、そして５００μｇ／ｍｌのセファ
トキシムおよび１００μｇ／ｍｌの硫酸カナマイシン
（Ｓｉｇｍａ）を有する同一培地（０．８％の寒天）上
に配置する。培地は２週後更新すべきである。形質転換
されたシュートはさらに２〜３週後視ることができる。
シュートの再生は、また、選択の圧力なしに平行に実施
すべきである。次いで、再生されたシュートを形質転換
について生物学的試験により、例えば、ノパリンシンタ
ーゼまたはピノシルビンシンターゼ活性について試験し
なくてはならない。１〜１０％の形質転換されたシュー
トはこの方法において得られる。
【００７５】形質転換の生化学的検出法 植物の組織中のノパリンの検出：ノパリンは、次のよう
にして、オッテン（Ｏｔｔｅｎ）およびシルペルート
（Ｓｃｈｉｌｐｅｒｏｏｒｔ）（１９７８）およびアエ
ルツ（Ａｅｒｔｓ）に記載されているように検出する。
５０ｍｌの植物材料（細胞または葉の片）を、ＬＳ培地
中で０．１モルのアルギニン中で室温においてエッペン
ドルフ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）容器内で一夜インキュベ
ーションする。次いで、植物材料を吸取紙上にスポッテ
ィングし、新鮮なエッペンドルフ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒ
ｆ）遠心容器中でガラス棒で均質化し、そしてエッペン
ドルフ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）遠心機中で２分間遠心し
た。２μｌの上澄み液を点の形態の方法で電気泳動に適
当な紙［ワットマン（Ｗｈａｔｍａｎ）３ＭＭ紙］（２
０×４０ｃｍ）上に移し、そして乾燥する。この紙を移
動相（５％のギ酸、１５％の酢酸、８０％のＨ2Ｏ、ｐ
Ｈ１．８）で含浸させ、そして４００ボルトにおいて４
５分間電気泳動にかける。ノパリンはカソードに向かっ
て走行する。次いで、紙を熱空気の流れで乾燥し、そし
てフェナントレンキノン着色剤（等しい体積のエタノー
ル中の０．０２％のフェナントレンキノンおよび６０％
のエタノール中の１０％のＮＨ4ＯＨ）を通して移動方
向に引く。乾燥した紙を長い波長の紫外線下でながめ、
そして写真撮影する。アルギニンおよびアルギニン誘導
体を蛍光性の黄色に試薬で染色する。 ネオマイシンホスホトランスフェラーゼ（ＮＰＴ Ｉ
Ｉ）酵素の試験：植物の組織中のＮＰＴ ＩＩ活性を検
出し、レイス（Ｒｅｉβ） ｅｔ ａｌ．（１９８４）
に記載されそしてシュレイエル（Ｓｃｈｒｅｉｅｒ）
ｅｔ ａｌ．（１９８５）により変更されたようにその
場のカナマイシンのリン酸化を実施する。５０ｍｇの植
物の組織を氷上で５０μｌの抽出緩衝液（１０％のグリ
セロール、５％の２−メルカプトエタノール、０．１％
のＳＤＳ、０．０２５％のブロモフェノールブルー、６
２．５ミリモルのトリスｐＨ６．８）中で、ガラス粉末
を添加して、均質化し、そしてエッペンドルフ（Ｅｐｐ
ｅｎｄｏｒｆ）遠心機中で４℃において１０分間遠心す
る。５０μｌの上澄み液を自然ポリアクリルアミドゲル
（１４５×１１０×１．２ｍｍ；分離ゲル：１０％のア
クリルアミド、０．３３％のビスアクリルアミド、０．
３７５モルのトリスｐＨ８．８、収集ゲル：５％のアク
リルアミド、０．１６５％のビスアクリルアミド、０．
１２５モルのトリスｐＨ６．８）に適用し、そして４℃
において６０ボルトの電気泳動に一夜かける。ブロモフ
ェノールブルーのマーカーがゲルから出るとすぐに、ゲ
ルを脱イオン水で２回１０分間洗浄し、そして反応緩衝
液（６７ミリモルのトリス−マレエート、ｐＨ７．１、
４２ミリモルのＭｇＣｌ2、４００ミリモルの塩化アン
モニウム）で１回３０分間洗浄する。ゲルを同一サイズ
のガラス板上に配置し、そして基質の硫酸カナマイシン
（２０μｇ／ｍｌ）および２０〜２００μＣｉの32Ｐ
ＡＴＰ（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を含有する反応緩衝液中の
４０ｍｌの１％強度のアガロースの層でカバーする。サ
ンドイッチのゲルを室温において３０分間インキュベー
ションし、次いでホスホセルロース紙Ｐ８１（Ｗｈａｔ
ｍａｎ）をアガロースの上に横たえた。４層の３ＭＭ濾
紙（Ｗｈａｔｍａｎ）およびわずかの紙ハンカチを上部
の上に積み重ねる。Ｐ８１紙上のその場でリン酸化した
放射性カナマイシンホスフェートの転移を３〜４時間後
に停止する。Ｐ８１紙をプロテイナーゼＫおよび１％の
ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の溶液中で６０℃に
おいて３０分間インキュベーションし、２５０ｍｌの１
０ミリモルのリン酸塩緩衝液ｐＨ７．５中で８０℃にお
いて３〜４回洗浄し、乾燥し、そして１〜１２時間−７
０℃においてオートラジオグラフにかける（ＸＡＲ５フ
ィルム、Ｋｏｄａｋ）。
【００７６】４、ソラヌム・ツベロスム（Ｓｏｌａｎｕ
ｍ Ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ）（ジャガイモ）の形質転換 形質転換は、正確に、欧州特許出願（ＥＰ−Ａ）第０，
２４２，２４６号、ｐｐ．１４−１５、に記載されてい
る方法で実施した、ピノシルビンシンターゼの遺伝子を
有するＴｉプラスミドを含有するアグロバクテリア（Ａ
ｇｒｏｂａｃｔｅｒｉａ）。
【００７７】上の実施例におけるすべての百分率のｄＡ
ＴＰは、特記しない限り、重量％に関する。
【００７８】上の実施例に従い得られた植物細胞および
植物（タバコ）中のピノシルビンシンターゼの遺伝子の
存在は、サザンブロット分析により確証された。ピノシ
ルビンシンターゼの遺伝子の発現はノザンブロット分析
により検出され、そしてピノシルビンシンターゼおよび
ピノシルビンは特異的抗体の助けにより検出された。形
質転換された植物および形質転換されない植物（比較の
ため）をボトリチス・シネラ（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉ
ｎｅｒａ）の胞子懸濁液で噴霧し、そして菌の攻撃を１
週後に等級付けた。形質転換された植物は、菌の攻撃に
対して増加した抵抗性を示した（形質転換されない比較
植物と比較して）。
【００７９】プラスミドｐｉｎ５−４９の中に含有され
るｃＤＮＡ配列またはＳＥＱ ＩＤＮＯ：１に従うｃＤ
ＮＡ配列とのハイブリダイゼーション 前述のように、本発明に従う好ましいピノシルビンシン
ターゼの遺伝子は、プラスミドｐｉｎ５−４９の中に含
有されるｃＤＮＡ配列またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に
従うｃＤＮＡ配列またはその成分とハイブリダイゼーシ
ョンし、そしてピノシルビンシンターゼをエンコードす
ることによって特徴づけられる。そのうえ、ハイブリダ
イゼーションは、一般に、例えば、植物または植物の部
分の中の、ピノシルビンシンターゼの遺伝子の分離およ
び決定のために使用することができる。
【００８０】ピノシルビンシンターゼの遺伝子を含有す
る好ましいファージのクローンは、低いストリンジェン
トの条件下にｐｉｎ５−４９（またはＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：１）とハイブリダイゼーションさせて、クローンの
サブポピュレーションを生産することによって同定する
ことができ、引き続いてサブポピュレーションピノシル
ビンシンターゼの遺伝子のクローンとして、例えば、植
物の中への直接の遺伝子転移（Ｈａｉｎ ｅｔ ａｌ．
１９８５、１９９０）およびトランスジェニック植物の
組織をピノシルビンシンターゼの酵素活性およびピノシ
ルビンの生産の分析により、同定することができる。
【００８１】１例として、ピノシルビンシンターゼの遺
伝子のクローンは、標準のハイブリダイゼーション条件
下にプローブとしてｃＤＮＡクローン５−４９（または
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）を使用して同定された。ハイ
ブリダイゼーションは、６８℃において、２ＳＳＣを含
有する標準の緩衝液中で１２時間実施した。洗浄は７４
℃において２ＳＳＣおよび０．１％のＳＤＳ中で実施し
（２回、３０分）、次いで０．２ＳＳＣ、０．１％のＳ
ＤＳ中で１０分間１回洗浄を実施した。ファージのクロ
ーンのＤＮＡを植物選択可能なマーカー（カナマイシン
抵抗性）とともにタバコの原形質体の中に同時転移さ
せ、そしてタバコ中でピノシルビンの合成を指令するこ
とが発見された。
【００８２】植物および植物細胞の形質転換において使
用した培地のいくつかを下に記載する： タバコの無菌のシュートの培養のための培地 マクロエレメント（ｍａｃｒｏｅｌｅｍｅｎｔ）ＭＳ塩類の濃度の１／２ ミクロエレメント（ｍｉｃｒｏｅｌｅｍｅｎｔ）ＭＳ塩類の濃度の１／２ Ｆｅ−ＥＤＴＡ ムラシゲ（Ｍｕｒａｓｈｉｇｅ）およびスクッグ（Ｓｋｏｏｇ ）（ＭＳ） ミオイノシトール １００ｍｇ／ｌ スクロース １０ｍｇ／ｌ 寒天 ８ｍｇ／ｌ ビタミン パントテン酸Ｃａ １ｍｇ／ｌ ビオチン １０ｍｇ／ｌ ニコチン酸 １ｍｇ／ｌ ピリドキシン １ｍｇ／ｌ チアミン １ｍｇ／ｌ オートクレーブ処理前のｐＨ５．７Ｋ３培地 ニコチアナ・タバクム（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａ
ｃｕｍ）ｐｅｔｉｔＨａｖａｎａ ＳＲ１、ニコチアナ
・タバクム（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ）Ｗ
ｉｓｃｏｎｓｉｎ ３８およびニコチアナ・プルンバギ
ニフォリア（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｐｌｕｍｂａｇｉｎ
ｉｆｏｌｉａ）の原形質体の培養のため（Ｎａｇｙおよ
びＭａｌｉｇａ、１９７６）
【００８３】
【表２】
【００８４】リンスマイアー（Ｌｉｎｓｍａｉｅｒ）お
よびスクッグ（Ｓｋｏｏｇ）培地（Ｌｉｎｓｍａｉｅｒ
およびＳｋｏｏｇ １９６５） 再生した原形質体の培養のためおよびタバコの腫瘍およ
びカルスの組織培養のため。リンスマイアー（Ｌｉｎｓ
ｍａｉｅｒ）およびスクッグ（Ｓｋｏｏｇ）（ＬＳ）培
地は、次の変更をもつムラシゲ（Ｍｕｒａｓｈｉｇｅ）
およびスクッグ（Ｓｋｏｏｇ）培地（Ｍｕｒａｓｈｉｇ
ｅおよびＳｋｏｏｇ、１９６２）である： − チアミンを０．１ｍｇ／ｌの代わりに０．４ｍｇ／
ｌのより高い濃度にする； − グリシン、ピリドキシンおよびニコチン酸は存在し
ない。
【００８５】
【表３】
【００８６】次の文献を植物および植物細胞の形質転換
について引用することができる：アーツ（Ａｅｒｔｓ）
Ｍ、ジャコブス（Ｊａｃｏｂｓ）Ｍ、ハーナルスティー
ンス（Ｈｅｒｎａｌｓｔｅｅｎｓ）ＪＰ、バン・モンタ
グ（Ｖａｎ Ｍｏｎｔａｇｕ）ｍ、シェル（Ｓｃｈｅｌ
ｌ）Ｊ（１９８３）、アラビドプシス・タリアナ（Ａｒ
ａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ）のクラウンゴ
ール腫瘍の誘導および試験管内の培養。Ｐｌａｎｔ Ｓ
ｃｉ Ｌｅｔｔ．１７：４３−５０。
【００８７】フロム（Ｆｒｏｍｍ）ＭＥ、タイラー（Ｔ
ａｙｌｏｒ）ＬＰ、ワルボット（Ｗａｌｂｏｔ）Ｖ（１
９８６）、エレクトロポレイションにより遺伝子転移後
のトウモロコシの安定な形質転換。ネイチャー（Ｎａｔ
ｕｒｅ）３１９：７９１−７９３。
【００８８】ゲーラート（Ｇｅｈｌｅｒｔ）、Ｒ．、シ
ェップナー（Ｓｃｈｏｅｐｐｎｅｒ）、Ａ．およびキン
ドル（ｋｉｎｄｌ）、Ｈ．（１９９０）、菌の感染に対
する応答における精製および誘導。分子植物−微生物の
相互作用（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ−Ｍｉｃｒ
ｏｂｅ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ）。Ｖｏｌ．３、Ｎ
ｏ．６、ｐｐ．４４４−４４９。
【００８９】ハイン（Ｈａｉｎ）、Ｒ．、ステイブル
（Ｓｔａｂｌｅ）、Ｐ．、ゼルニロフスキー（Ｃｚｅｒ
ｎｉｌｏｆｓｋｙ）、Ａ．Ｐｐ．、ステンビス（Ｓｔｅ
ｉｎｂｉβ），Ｈ．Ｈ．、ヘレラ−エストレラ（Ｈｅｒ
ｒｅｒａ−Ｅｓｔｒｅｌｌａ）、Ｌ．、シェル（Ｓｃｈ
ｅｌｌ）、Ｊ．（１９８５）、植物の原形質体により選
択可能なキメラ遺伝子の吸収、組み込み、発現および遺
伝学的伝達。モレキュラー・アンド・ジェネラル・ジェ
ネティックス（Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．）１９
９：１６１−１６８。
【００９０】ヘレラ−エストレラ（Ｈｅｒｒｒｅｒａ−
Ｅｓｔｒｅｌｌａ）Ｌ．、デ・ブロック（Ｄｅ Ｂｌｏ
ｃｋ）Ｍ．、メッセンス（Ｍｅｓｓｅｎｓ）Ｅ．、ヘル
ナルステーンス（Ｈｅｒｎａｌｓｔｅｅｎｓ）ＪＰ．、
バン・モンタグ（ｖａｎ Ｍｏｎｔａｇｕ）Ｍ．、シェ
ル（Ｓｃｈｅｌｌ）Ｊ．（１９８３）ＥＭＢＯ Ｊ．
２：９８７−９９５。
【００９１】ホーシュ（Ｈｏｒｓｃｈ）ＲＢ、フリイ
（Ｆｒｙ）ＪＥ、ホフマン（Ｈｏｆｆｍａｎｎ）ＮＬ、
エイチョルツズ（Ｅｉｃｈｈｏｌｔｚ）Ｄ、ロウジャー
ズ（Ｒｏｇｅｒｓ）ＳＧ、フラレイ（Ｆｒａｌｅｙ）Ｒ
Ｔ（１９８５）、遺伝子を植物の中に転移する簡単なか
つ一般的方法。サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）２２７：
１２２９−１２３１。
【００９２】クレンス（Ｋｒｅｎｓ）ＦＨ、モレンジジ
ク（Ｍｏｌｅｎｄｉｊｋ）Ｌ、ウレムス（Ｗｕｌｌｅｍ
ｓ）ＧＪ、シルペルールト（Ｓｃｈｉｌｐｅｒｏｏｒ
ｔ）ＲＡ（１９８２）、ＴｉプラスミドＤＮＡによる植
物の原形質体の試験管内の形質転換。ネイチャー（Ｎａ
ｔｕｒｅ）２９６：７２−７４。
【００９３】コンクズ（Ｋｏｎｃｚ）Ｃ、シェル（Ｓｃ
ｈｅｌｌ）Ｊ（１９８６）、ＴL−ＤＮＡ遺伝子５のプ
ロモーターはアグロバクテリウムのバイナリーベクター
の新規な型が有するキメラ遺伝子の組織特異的発現をコ
ントロールする。モレキュラー・アンド・ジェネラル・
ジェネティックス（Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．）
（１９８６）２０４：３３８−３９６。
【００９４】リンスマイアー（Ｌｉｎｓｍａｉｅｒ）Ｄ
Ｍ、スクッグ（Ｓｋｏｏｇ）Ｆ（１９６５）、タバコの
組織培養の有機成長因子の要件。Ｐｈｙｓｉｏｌ ｐｌ
ａｎｔ １８：１００−１２７。
【００９５】マートン（Ｍａｔｏｎ）Ｌ．、ウレムス
（Ｗｕｌｌｅｍｓ）ＧＪ、モレンッジク（Ｍｏｌｅｎｄ
ｉｊｋ）Ｌ、シルペルールト（Ｓｃｈｉｌｐｅｒｏｏｒ
ｔ）ＰＲ（１９７９）、アグロバクテリウム・ツメファ
シエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａ
ｃｉｅｎｓ）によりニコチアナ・タバクム（Ｎｉｃｏｔ
ｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ）からの培養した細胞の試験
管内の形質転換。ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）２７７：
１２２９−１３１。
【００９６】ムラシゲ（Ｍｕｒａｓｈｉｇｅ）Ｔ．およ
びスクッグ（Ｓｋｏｏｇ）Ｆ．（１９６２）、タバコの
組織培養を使用する変更された培地。Ｐｈｙｓｉｏｌ
Ｐｌａｎｔ．１５、４７。
【００９７】ナギイ（Ｎａｇｙ）ＪＩ、マリガ（Ｍａｌ
ｉｇａ）Ｐ（１９７６）、ニコチアナ・シルベストリス
（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓ）の葉肉
の原形質体からの細胞の誘導および植物の再生。Ｚ Ｐ
ｆｌａｎｚｅｎｐｈｙｓｉｏｌ ７８：４５３−４５
５。
【００９８】オッテン（Ｏｔｔｅｎ）ＬＡＢＭ、シルペ
ルールト（Ｓｃｈｉｌｐｅｒｏｏｒｔ）ＲＡ（１９７
８）、リソピン（Ｌｙｓｏｐｉｎ）およびノパリン（Ｎ
ｏｐａｌｉｎ）デヒドロゲナーゼの活性を検出する急速
に小規模の方法。バイオヒミカ・エト・バイオフィジカ
・アクタ（Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔ
ａ）５２７：５００。
【００９９】パスズコウスキ（Ｐａｓｚｋｏｗｓｋｉ）
Ｊ、シリト（Ｓｈｉｌｌｉｔｏ）ＲＤ、サウル（Ｓａｕ
ｌ）Ｍ、マンダク（Ｍａｎｄａｋ）Ｖ、ホーン（Ｈｏｈ
ｎ）Ｔ、ホーン（Ｈｏｈｎ）Ｂ、ポトリクス（Ｐｏｔｒ
ｙｋｕｓ）Ｉ（１９８４）、植物への遺伝子の直接の転
移。ＥＭＢＯ Ｊ．３：２７１７−２７７２２。
【０１００】シリト（Ｓｈｉｌｌｉｔｏ）ＲＤ、パスズ
コウスキ（Ｐａｓｚｋｏｗｓｋｉ）Ｊ．、ポトリクス
（Ｐｏｔｒｙｋｕｓ）Ｉ（１９８３）、アガロースのプ
レイティングおよびビード型培養技術は、ある数の植物
種における原形質体誘導クローンの発育を可能としかつ
刺激する。Ｐｌ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ ２：２４４−２４
７。
【０１０１】バン・デン・エルゼン（Ｖａｎ ｄｅｎ
Ｅｌｚｅｎ）ＰＪＭ、タウンセンド（Ｔｏｗｎｓｅｎ
ｄ）Ｊ、リー（Ｌｅｅ）ＫＹ、ベッドブルック（Ｂｅｄ
ｂｒｏｏｋ）ＪＲ（１９８５）、植物細胞中の選択可能
なマーカーとしてアキメリック（Ａｃｈｉｍａｅｒｉ
ｃ）抵抗性遺伝子。プラント・モレキュラー・バイオロ
ジー（Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．）５、２９９−
３０２。
【０１０２】バン・ハウテ（Ｖａｎ Ｈａｕｔｅ）Ｅ、
ジョース（Ｊｏｏｓ）Ｈ、マエス（Ｍａｅｓ）Ｍ、ワレ
ン（Ｗａｒｒｅｎ）Ｇ、バン・モンタグ（Ｖａｎ ｍｏ
ｎｔａｇｕ）Ｍ、シェル（Ｓｃｈｅｌｌ）Ｊ（１９８
３）、ｐＢＲ３２２中でクローニングした制限断片の遺
伝子間転移および交換組み換え：アグロバクテリウム・
ツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕ
ｍｅｆａｃｉｅｎｓ）のＴｉプラスミドの逆転遺伝学の
新規な方法。ＥＭＢＯ Ｊ．２：４１１−４１８。
【０１０３】ベルテン（Ｖｅｌｔｅｎ）Ｊ、ベルテン
（Ｖｅｌｔｅｎ）Ｌ、ハイン（Ｈａｉｎ）Ｒ、シェル
（Ｓｃｈｅｌｌ）Ｊ（１９８４）、アグロバクテリウム
・ツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔ
ｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）のＴｉプラスミドからの二重の
植物のプロモーターの断片の分離。ＥＭＢＯ Ｊ．１
２：２７２３−２７３０。
【０１０４】ウレムス（Ｗｕｌｌｅｍｓ）ＧＪ、モレン
ジジク（Ｍｏｌｅｎｄｉｊｋ）Ｌ、オーム（Ｏｏｍｓ）
Ｇ、シルペルールト（Ｓｃｈｉｌｐｅｒｏｏｒｔ）ＲＡ
（１９８１）、ニコチアナ・タバクム（Ｎｉｃｏｔｉａ
ｎａ ｔａｂａｃｕｍ）から誘導された細胞壁を再生す
る原形質体の試験管内のアグロバクテリウム・ツメファ
シエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａ
ｃｉｅｎｓ）誘導形質転換後得られた、形質転換体中の
クラウンゴールの腫瘍マーカーの示差的発現。プロシー
ディングス・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サ
イエンシズ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．）７８：４３４４−４３４８。
【０１０５】ザウブリスキ（Ｚａｍｂｒｙｓｋｉ）Ｐ、
ジョース（Ｊｏｏｓ）Ｈ、ジェネテロ（Ｇｅｎｅｔｅｌ
ｌｏ）Ｃ、バン・モンタグ（Ｍｏｎｔａｇｕ）Ｍ、シェ
ル（Ｓｃｈｅｌｌ）Ｊ（１９８３）、正常の再生能力を
変更しないで、植物細胞の中にＤＮＡを導入するための
Ｔｉプラスミドベクター。
【０１０６】レイス（Ｒｅｉｓｓ）Ｂ、スプレンゲル
（Ｓｐｒｅｎｇｅｌ）Ｒ、ウィル（Ｗｉｌｌ）Ｈおよび
シャラー（Ｓｃｈａｌｌｅｒ）Ｈ（１９８４）、粗製の
細胞管中のネオマイシンホスホトランスフェラーゼの定
性的および定量的アッセイの新規な感受性の方法。遺伝
子（Ｇｅｎｅ）１０８１：２１１−２１７。
【０１０７】シュレイアー（Ｓｃｈｒｅｉｅｒ）Ｐ、セ
フター（Ｓｅｆｔｏｒ）Ｅ、シェル（Ｓｃｈｅｌｌ）Ｊ
およびボーナート（Ｂｏｈｎｅｒｔ）Ｈ（１９８５）、
外来タンパク質の調節された合成および植物の原形質体
の中への輸送を指令する核エンコードされた配列の使
用。ＥＭＢＯ Ｊ．Ｖｏｌ．４、Ｎｏ．１：２５−３
２。
【０１０８】次の発行された特許出願をさらに述べるこ
とのできる： 欧州特許出願（ＥＰ−Ａ）第１１６，７１８号 欧州特許出願（ＥＰ−Ａ）第１５９，４１８号 欧州特許出願（ＥＰ−Ａ）第１２０，５１５号 欧州特許出願（ＥＰ−Ａ）第１２０，５１６号 欧州特許出願（ＥＰ−Ａ）第１７２，１１２号 欧州特許出願（ＥＰ−Ａ）第１４０，５５６号 欧州特許出願（ＥＰ−Ａ）第１７４，１６６号 欧州特許出願（ＥＰ−Ａ）第１２２，７９１号 欧州特許出願（ＥＰ−Ａ）第１２６，５４６号 欧州特許出願（ＥＰ−Ａ）第１６４，５９７号 欧州特許出願（ＥＰ−Ａ）第１７５，９６６号 ＷＯ ８４／０２９１３ ＷＯ ８４／０２９１９ ＷＯ ８４／０２９２０ ＷＯ ８４／０１１７６ 本発明の主な特徴および態様は、次の通りである。
【０１０９】１、ピノシルビンシンターゼの遺伝子。
【０１１０】２、プラスミドｐｉｎ５−４９またはその
成分の中に含有されているピノシルビンシンターゼのｃ
ＤＮＡ配列またはその成分と、あるいはＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：１に従うまたはその成分とハイブリダイゼーショ
ンし、そしてピノシルビンシンターゼをエンコードする
ことを特徴とする、ピノシルビンシンターゼの遺伝子。
【０１１１】３、双子葉植物から得ることができる、上
記第１および２項記載のピノシルビンシンターゼの遺伝
子。
【０１１２】４、ピヌス（Ｐｉｎｕｓ）から得ることが
できる、上記第１および２項記載のピノシルビンシンタ
ーゼの遺伝子。
【０１１３】５、調節作用を有する、上記第１〜４項の
いずれかに記載のピノシルビンシンターゼの遺伝子の成
分。
【０１１４】６、上記第１〜４項のいずれかに記載のピ
ノシルビンシンターゼの遺伝子の構造遺伝子。
【０１１５】７、「外来」ＤＮＡまたは「追加の」ＤＮ
Ａとして上記第１〜６項のいずれかに記載の１または２
以上のピノシルビンシンターゼの遺伝子またはそれらの
成分を含有する、組み換え原核生物または真核生物のＤ
ＮＡ。
【０１１６】８、植物細胞（原形質体を包含する）また
は植物（植物の部分または種子を包含する）の中に含有
される、上記第８項記載の組み換えＤＮＡ。
【０１１７】９、上記第１〜８項のいずれかに記載の１
または２以上のピノシルビンシンターゼの遺伝子または
それらの成分および／または上記第７項記載の組み換え
ＤＮＡを含有するベクター。
【０１１８】１０、ベクターのプラスミドｐｉｎ５−４
９． １１、上記第１〜８項のいずれかに記載の１または２以
上のピノシルビンシンターゼの遺伝子またはそれらの成
分および／または上記第７項記載の組み換えＤＮＡまた
は上記第９および１０項記載のベクターを含有する、形
質転換された微生物。
【０１１９】１２、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ
ｃｏｌｉ）菌株Ｅ．ｃｏｌｉ ｐｉｎ５−４９およびそ
の突然変異体。
【０１２０】１３、植物細胞（原形質体を包含する）ま
たは植物（植物の部分または種子を包含する）の形質転
換のための上記第１〜１２項のいずれかに記載のピノシ
ルビンシンターゼの遺伝子および／またはそれらの成分
および／または組み換えＤＮＡおよび／またはベクター
および／または形質転換された微生物の使用。
【０１２１】１４、「外来」ＤＮＡまたは「追加の」Ｄ
ＮＡとして上記第１〜７項のいずれかに記載の１または
２以上のピノシルビンシンターゼの遺伝子および／また
はそれらの成分および／または組み換えＤＮＡを含有す
る、トランスジェニック植物細胞（原形質体を包含す
る）または植物（植物の部分または種子を包含する）。 １５、（ａ）上記第１〜７項のいずれかに記載の１また
は２以上のピノシルビンシンターゼの遺伝子またはそれ
らの成分および／または組み換えＤＮＡを、植物細胞
（原形質体を包含する）のゲノムの中に挿入し、そして
適当ならば、（ｂ）完全なトランスジェニック植物を形
質転換された植物細胞（原形質体を包含する）から再生
し、そして適当ならば増殖させ、そして適当ならば、
（ｃ）親の世代またはそれから得られたそれ以上の世代
の生ずるトランスジェニック植物から、所望の植物部分
（種子を包含する）を得る、ことを特徴とする、病害虫
に対する抵抗性が増加した、トランスジェニック植物細
胞（原形質体を包含する）または植物（植物の部分また
は種子を包含する）を調製する方法。
【０１２２】１６、増殖材料の発生のための、および上
記第１〜６項のいずれかに記載のピノシルビンシンター
ゼの遺伝子またはそれらの成分または上記第７項記載の
組み換えＤＮＡ、およびそれらの増殖材料の発生のため
の、上記第１４項記載のトランスジェニック植物細胞
（原形質体を包含する）または植物（植物の部分または
種子を包含する）の使用。
【０１２３】１７、上記第１４項記載のトランスジェニ
ック植物細胞および植物の増殖により得ることができ
る、増殖材料。
【０１２４】１８、植物からピノシルビンシンターゼの
遺伝子を分離するための、および植物細胞（原形質体を
包含する）または植物（植物の部分または種子を包含す
る）の発生における、プラスミドｐｉｎ５−４９上に含
有されるか、あるいはＳＥＱＩＤ ＮＯ：１に記載され
ているｃＤＮＡに完全にまたは部分的に相当するＤＮＡ
配列の使用。
【図面の簡単な説明】
【図１】プラスミドｐｉｎ５−４９を表す。ピノシルビ
ンシンターゼのｃＤＮＡは約１．３ｋｂのサイズのＥｃ
ｏＲＩ断片上に横たわる。図１において、ＥはＥｃｏＲ
Ｉであり、ＢはＢａｍＨＩであり、ＨはＨｉｎｄＩＩＩ
であり、Ｐ１はプラスミドｐＴ７／Ｔ３からのポリリン
カーである。
【配列表１】 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１ 配列の型：対応するペプチドをもつヌクレオチド 配列の長さ：５７０塩基対 鎖の形態：一本鎖 トポロジー：線状 分子の型：ｃＤＮＡ もとの由来： 有機体：ピヌス・シルベストリス（Ｐｉｎｕｓ ｓｙｌ
ｖｅｓｔｒｉｓ） 直接の実験の由来：ピヌス・シルベストリス（Ｐｉｎｕ
ｓ ｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓ） 細胞系の名称： 特徴：１〜５７０の成熟ペプチド配列 性質：ピヌス・シルベストリス（Ｐｉｎｕｓ ｓｙｌｖ
ｅｓｔｒｉｓ）からのピノシルビンシンターゼの一部分
の配列
【表４】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｎ 1/21 7236−4Ｂ 5/10 15/73 15/84 //(Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者 ハンス−イエルク・ライフ ドイツ連邦共和国デー5000ケルン41・ゴツ テスベーク165 (72)発明者 クラウス・シユテンツエル ドイツ連邦共和国デー4000デユツセルドル フ13・ゼーゼナーシユトラーセ17 (72)発明者 ユルゲン・トムツイク ドイツ連邦共和国デー4018ランゲンフエル ト・ザウアーブルフシユトラーセ13アー

Claims (8)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ピノシルビンシンターゼ遺伝子。
  2. 【請求項２】 調節作用を有する請求項１記載のピノシ
    ルビンシンターゼ遺伝子の成分。
  3. 【請求項３】 請求項１記載のピノシルビンシンターゼ
    遺伝子の構造遺伝子。
  4. 【請求項４】 「外来」ＤＮＡまたは「追加の」ＤＮＡ
    として請求項１〜３のいずれかに記載の１または２以上
    のピノシルビンシンターゼ遺伝子またはそれらの成分を
    含有する、組み換え原核生物または真核生物のＤＮＡ。
  5. 【請求項５】 請求項１〜３のいずれかに記載の１また
    は２以上のピノシルビンシンターゼ遺伝子またはそれら
    の成分および／または請求項４記載の組み換えＤＮＡを
    含有するベクター。
  6. 【請求項６】 請求項１〜３のいずれかに記載の１また
    は２以上のピノシルビンシンターゼ遺伝子またはそれら
    の成分および／または請求項４記載の組み換えＤＮＡま
    たは請求項５記載のベクターを含有する形質転換された
    微生物。
  7. 【請求項７】 「外来」ＤＮＡまたは「追加の」ＤＮＡ
    として請求項１〜４のいずれかに記載の１または２以上
    のピノシルビンシンターゼ遺伝子および／またはそれら
    の成分および／または組み換えＤＮＡを含有する、トラ
    ンスジェニック植物細胞（原形質体を包含する）または
    植物（植物の部分または種子を包含する）。
  8. 【請求項８】 請求項７記載のトランスジェニック植物
    細胞および植物の増殖により得ることができる増殖材
    料。
JP4273860A 1991-09-18 1992-09-17 ピノシルビンシンターゼ遺伝子 Pending JPH05308974A (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE4130986A DE4130986A1 (de) 1991-09-18 1991-09-18 Pinosylvinsynthase-gene
DE4130986.3 1991-09-18

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JPH05308974A true JPH05308974A (ja) 1993-11-22

Family

ID=6440852

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP4273860A Pending JPH05308974A (ja) 1991-09-18 1992-09-17 ピノシルビンシンターゼ遺伝子

Country Status (7)

Country Link
US (3) US5391724A (ja)
EP (1) EP0533010A3 (ja)
JP (1) JPH05308974A (ja)
AR (1) AR248048A1 (ja)
BR (1) BR9203641A (ja)
DE (1) DE4130986A1 (ja)
MX (1) MX9205172A (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009543572A (ja) * 2006-07-20 2009-12-10 フラクソム サイエンシス エイ／エス ピノシルビンを生産するための代謝改変細胞

Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5689046A (en) * 1987-09-30 1997-11-18 Bayer Aktiengesellschaft Stilbene synthase gene
DE4130986A1 (de) * 1991-09-18 1993-03-25 Bayer Ag Pinosylvinsynthase-gene
DE4334791A1 (de) * 1993-10-13 1995-04-20 Bayer Ag Bibenzylsynthase-Gene
DE4423022C1 (de) * 1994-06-30 1995-05-24 Lutz Prof Dr Heide Transgene Pflanzen mit erhöhtem Gehalt an Sekundärstoffen
DE4440200A1 (de) * 1994-11-10 1996-05-15 Bayer Ag DNA-Sequenzen und ihre Verwendung
US6270780B1 (en) 1997-07-25 2001-08-07 Chesebrough-Pond's Usa Co., Division Of Conopco Cosmetic compositions containing resveratrol
DE19836774A1 (de) * 1998-08-13 2000-02-24 Gsf Forschungszentrum Umwelt Protein und DNA-Sequenz der Pinosylvin-3-0-methyltransferase (PMT)
US6358517B1 (en) 1999-10-22 2002-03-19 Unilever Home & Personal Care Usa, Division Of Conopco Cosmetic compositions containing resveratrol and retinoids
GB0503657D0 (en) 2005-02-22 2005-03-30 Fluxome Sciences As Metabolically engineered cells for the production of resveratrol or an oligomeric or glycosidically-bound derivative thereof
SG10201509864QA (en) 2007-06-01 2015-12-30 Solazyme Inc Production of oil in microorganisms
US7935515B2 (en) * 2008-11-28 2011-05-03 Solazyme, Inc. Recombinant microalgae cells producing novel oils
GB201008826D0 (en) 2010-05-26 2010-07-14 Fluxome Sciences As Production of metabolites
JP5868962B2 (ja) 2010-05-28 2016-02-24 ソラザイム, インコーポレイテッドSolazyme Inc 組み換え従属栄養性微生物から産生された用途に応じた油
CA3024641A1 (en) 2010-11-03 2012-05-10 Corbion Biotech, Inc. Microbial oils with lowered pour points, dielectric fluids produced therefrom, and related methods
US9249436B2 (en) 2011-02-02 2016-02-02 Solazyme, Inc. Tailored oils produced from recombinant oleaginous microorganisms
KR20140033378A (ko) 2011-05-06 2014-03-18 솔라짐, 인코포레이티드 자일로오스를 대사시키는 유전자 조작된 미생물
US9719114B2 (en) 2012-04-18 2017-08-01 Terravia Holdings, Inc. Tailored oils
ES2744868T3 (es) 2012-04-18 2020-02-26 Corbion Biotech Inc Aceites hechos a medida
SG10201802834YA (en) 2013-10-04 2018-05-30 Terravia Holdings Inc Tailored oils
US9969990B2 (en) 2014-07-10 2018-05-15 Corbion Biotech, Inc. Ketoacyl ACP synthase genes and uses thereof
JP6799010B2 (ja) 2015-05-28 2020-12-09 エヴォルヴァ エスアー．Ｅｖｏｌｖａ Ｓａ． フェニルプロパノイドおよびフェニルプロパノイド誘導体の生合成
CN113331059B (zh) * 2021-07-21 2022-09-09 贵州大学 一种以鸟王茶树胚轴为外植体建立高效再生体系的方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3733017A1 (de) * 1987-09-30 1989-04-13 Bayer Ag Stilbensynthase-gen
DE4130986A1 (de) * 1991-09-18 1993-03-25 Bayer Ag Pinosylvinsynthase-gene

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009543572A (ja) * 2006-07-20 2009-12-10 フラクソム サイエンシス エイ／エス ピノシルビンを生産するための代謝改変細胞

Also Published As

Publication number Publication date
US5973230A (en) 1999-10-26
BR9203641A (pt) 1993-04-13
EP0533010A2 (de) 1993-03-24
US5589621A (en) 1996-12-31
AR248048A1 (es) 1995-05-31
DE4130986A1 (de) 1993-03-25
US5391724A (en) 1995-02-21
EP0533010A3 (en) 1993-12-08
MX9205172A (es) 1993-03-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP3310307B2 (ja) ブドウからのスチルベンシンターゼ遺伝子
US5985647A (en) Stilbene synthase gene
US5689046A (en) Stilbene synthase gene
JPH05308974A (ja) ピノシルビンシンターゼ遺伝子
US5728570A (en) Caffeoyl-CoA 3-O-methyltransferase genes
EP0242246A1 (en) Plant cells resistant to glutamine synthetase inhibitors, made by genetic engineering
EP0668921A1 (en) A method for obtaining plants with reduced susceptibility to plant-parasitic nematodes
WO2007127186A2 (en) Disease-inducible promoters
JP3320064B2 (ja) 抵抗力を増大させるための植物中のリゾチーム遺伝子構造の使用
US5856127A (en) Antimicrobial peptides
US6063988A (en) DNA sequences encoding stilbene synthases and their use
JP2001509376A (ja) フィードバック不感性トレオニンデヒドラターゼ／デアミナーゼを発現する植物および微生物を製造するための方法および組成物
EP0666922A1 (en) Plants with reduced susceptibility to plant-parasitic nematodes
JP2002525033A (ja) 植物に疾患抵抗性を付与するＰｉ−ｔａ遺伝子
RU2169196C2 (ru) Дезоксирибонуклеиновая кислота, кодирующая белок глутатион-s-трансферазу iiic и белок с соответствующей аминокислотной последовательностью
US5589620A (en) Bibenzyl synthase genes
US20020138868A1 (en) Method and means for modulating plant cell cycle proteins and their use in plant cell growth control
US6262338B1 (en) Resistance genes
JPH0576373A (ja) 耐性遺伝子
Catranis Transgenic hybrid poplar expressing genes encoding antimicrobial peptides
Burke et al. Selection procedure for identifying transgenic cells, embryos, and plants without the use of antibiotics
CA2204744A1 (en) Dna sequence and its use
MXPA97003431A (es) Secuencia de dna que codifica para una sintetasa de estilbeno y sus usos