JPH05271093A - 血管内皮細胞増殖剤 - Google Patents
血管内皮細胞増殖剤Info
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- JPH05271093A JPH05271093A JP4074681A JP7468192A JPH05271093A JP H05271093 A JPH05271093 A JP H05271093A JP 4074681 A JP4074681 A JP 4074681A JP 7468192 A JP7468192 A JP 7468192A JP H05271093 A JPH05271093 A JP H05271093A
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- JP
- Japan
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- mcaf
- cell
- vascular endothelial
- cells
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【構成】 単球走化性活性化因子（ＭＣＡＦ）を有効成
分とする血管内皮細胞増殖剤。 【効果】 ＭＣＡＦは優れた血管内皮細胞増殖促進作用
があるため、特に火傷や創傷などの治癒促進剤、炎症時
の組織修復剤および血管障害の治療剤として有用であ
る。
分とする血管内皮細胞増殖剤。 【効果】 ＭＣＡＦは優れた血管内皮細胞増殖促進作用
があるため、特に火傷や創傷などの治癒促進剤、炎症時
の組織修復剤および血管障害の治療剤として有用であ
る。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、医薬あるいは診断薬と
して、さらには血管内皮研究上有用である新規な血管内
皮細胞増殖剤に関する。
して、さらには血管内皮研究上有用である新規な血管内
皮細胞増殖剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】近年、日本人の死亡率の上位を占める、
脳卒中、心臓病の主原因は血管の老化、損傷、機能低下
と考えられている。血管内皮細胞は血管の内腔を覆う単
層を形成する細胞であり、血管の老化や損傷を引き起こ
す動脈硬化の原因である脂質代謝にも関与していること
が推察されている。また、悪性腫瘍の増殖は血管新生と
密接に関連しており、血管内皮細胞の増殖が必須条件で
ある。さらには、やけどや創傷の治療にも血管新生が必
要であり、血管内皮細胞増殖因子の関与が明らかであ
る。
脳卒中、心臓病の主原因は血管の老化、損傷、機能低下
と考えられている。血管内皮細胞は血管の内腔を覆う単
層を形成する細胞であり、血管の老化や損傷を引き起こ
す動脈硬化の原因である脂質代謝にも関与していること
が推察されている。また、悪性腫瘍の増殖は血管新生と
密接に関連しており、血管内皮細胞の増殖が必須条件で
ある。さらには、やけどや創傷の治療にも血管新生が必
要であり、血管内皮細胞増殖因子の関与が明らかであ
る。
【０００３】以上のことから、血管内皮細胞増殖活性を
有する血管内皮細胞増殖剤（Endothlial cell growth a
gent、以下、ＥＣＧＡと略す）を調製してその利用がで
きれば、動脈硬化に伴う血管内皮損傷の保護薬および治
療薬、またやけどや創傷などの治療促進薬となり得るこ
とが期待できる。またＥＣＧＡは、血管内皮を被覆した
生体適合性の良い人口血管を作成する際の血管内皮形成
剤としても利用できる。さらに、ＥＣＧＡの拮抗薬は血
管新生を阻害すると考えられることから、ＥＣＧＡは、
抗悪性腫瘍および慢性関節リウマチや網膜症や治療開発
のための極めて有用な材料の一つとなり得ることが期待
できる。
有する血管内皮細胞増殖剤（Endothlial cell growth a
gent、以下、ＥＣＧＡと略す）を調製してその利用がで
きれば、動脈硬化に伴う血管内皮損傷の保護薬および治
療薬、またやけどや創傷などの治療促進薬となり得るこ
とが期待できる。またＥＣＧＡは、血管内皮を被覆した
生体適合性の良い人口血管を作成する際の血管内皮形成
剤としても利用できる。さらに、ＥＣＧＡの拮抗薬は血
管新生を阻害すると考えられることから、ＥＣＧＡは、
抗悪性腫瘍および慢性関節リウマチや網膜症や治療開発
のための極めて有用な材料の一つとなり得ることが期待
できる。
【０００４】このように、ＥＣＧＡの医療上における存
在価値は極めて高く、ちなみに、悪性腫瘍、脳卒中、心
臓病が、日本人の死亡率の上位３位までを占めているこ
と（昭和６１年度）から考えても、ＥＣＧＡの医療への
利用、応用の有用性は明らかである。
在価値は極めて高く、ちなみに、悪性腫瘍、脳卒中、心
臓病が、日本人の死亡率の上位３位までを占めているこ
と（昭和６１年度）から考えても、ＥＣＧＡの医療への
利用、応用の有用性は明らかである。
【０００５】今まで述べてきた背景と期待から、ＥＣＧ
Ａの研究は近年、精力的に行なわれており、たとえば、
ポリペプチド系では現在までに、ＦＧＦ(fibroblastgro
wthfactor）、ＰＤ−ＥＣＧＦ（platelet-derived endo
thelial cell growth factor 、ＶＰＦ／ＶＥＧＦ（vas
cular permeability factor/vascular endotherialgrow
th factor ）、ｆ−ＥＣＧＦ（fibroblast-derived end
othelial cell growth factor ）などが血管内皮に増殖
促進活性を有する因子として見つかっている（総説とし
て：内海潤、ＢＩＯｍｅｄｉｃａ，５，1484-1488, 199
0 ）。
Ａの研究は近年、精力的に行なわれており、たとえば、
ポリペプチド系では現在までに、ＦＧＦ(fibroblastgro
wthfactor）、ＰＤ−ＥＣＧＦ（platelet-derived endo
thelial cell growth factor 、ＶＰＦ／ＶＥＧＦ（vas
cular permeability factor/vascular endotherialgrow
th factor ）、ｆ−ＥＣＧＦ（fibroblast-derived end
othelial cell growth factor ）などが血管内皮に増殖
促進活性を有する因子として見つかっている（総説とし
て：内海潤、ＢＩＯｍｅｄｉｃａ，５，1484-1488, 199
0 ）。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】ＥＣＧＡの有用性の高
さから、すでに述べてきたように種々のＥＣＧＡのため
の因子が探索され、発見されてきている。しかしその応
用展開と実用化のための研究はまだ続けられており、そ
の一方でさらに新規で有用なＥＣＧＡ候補となる因子を
探す努力も続けられている。作用メカニズムが異なる複
数のＥＣＧＡの併用により、単独因子よりもさらに高い
効果も期待できることから、いろいろなタイプのＥＣＧ
Ａが開発され、それらの活性や作用点、特性などを吟味
しながら使いわけていくことが望まれている。しかしな
がら現状は数種のＥＣＧＡ候補因子が見出だされつつあ
るところであり、さらなるＥＣＧＡ候補因子の探索と実
用化のための研究が課題として残されている。
さから、すでに述べてきたように種々のＥＣＧＡのため
の因子が探索され、発見されてきている。しかしその応
用展開と実用化のための研究はまだ続けられており、そ
の一方でさらに新規で有用なＥＣＧＡ候補となる因子を
探す努力も続けられている。作用メカニズムが異なる複
数のＥＣＧＡの併用により、単独因子よりもさらに高い
効果も期待できることから、いろいろなタイプのＥＣＧ
Ａが開発され、それらの活性や作用点、特性などを吟味
しながら使いわけていくことが望まれている。しかしな
がら現状は数種のＥＣＧＡ候補因子が見出だされつつあ
るところであり、さらなるＥＣＧＡ候補因子の探索と実
用化のための研究が課題として残されている。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明は、単球走化性活
性化因子（monocyte chemotactic and activating fact
or: 以下、ＭＣＡＦと略す）を有効成分とするポリペプ
チド系のＥＣＧＡである。また本発明は、有効成分とし
て、血管内皮増殖に有効なグルココルチコイドをさらに
含有させても良い。
性化因子（monocyte chemotactic and activating fact
or: 以下、ＭＣＡＦと略す）を有効成分とするポリペプ
チド系のＥＣＧＡである。また本発明は、有効成分とし
て、血管内皮増殖に有効なグルココルチコイドをさらに
含有させても良い。
【０００８】ＭＣＡＦは、ＭＣＰ−１（monocyte chemo
attractant protein-1）とも呼ばれ、単球走化性活性化
因子として発見されたアミノ酸７６残基からなるポリペ
プチドであり、単球の走化性のみならず単球の活性化作
用を有する（久野耕嗣と松島綱治、免疫薬理、９、１９
７−２０５，１９９１）。このサイトカインの血管内皮
細胞増殖促進活性についてはまだ報告がなく、本発明に
よって明らかにされた。
attractant protein-1）とも呼ばれ、単球走化性活性化
因子として発見されたアミノ酸７６残基からなるポリペ
プチドであり、単球の走化性のみならず単球の活性化作
用を有する（久野耕嗣と松島綱治、免疫薬理、９、１９
７−２０５，１９９１）。このサイトカインの血管内皮
細胞増殖促進活性についてはまだ報告がなく、本発明に
よって明らかにされた。
【０００９】ＥＣＧＡの有効成分として用いる場合のＭ
ＣＡＦは、天然の細胞から産生されたもの、あるいは遺
伝子組換え技術を用いて作製されたもの、さらには化学
合成されたもののいずれでも良く、特に限定されない。
ＣＡＦは、天然の細胞から産生されたもの、あるいは遺
伝子組換え技術を用いて作製されたもの、さらには化学
合成されたもののいずれでも良く、特に限定されない。
【００１０】ＭＣＡＦの産生細胞としては、正常細胞で
は末梢血白血球、線維芽細胞、角化細胞、血管内皮細胞
などがあげられ、レクチン、ＬＰＳ（リポ多糖）やポリ
Ｉ：ポリＣなどの誘発剤、あるいはＩＬ−１、ＴＮＦ
（腫瘍壊死因子）などのサイトカインで誘導することで
産生される。腫瘍細胞においてはＭＣＡＦの持続産生株
が得られれば効率良く生産することができる。また遺伝
子組換え技術を用いて生産する場合には、ＣＨＯ（チャ
イニーズハムスター卵巣）細胞、マウスＣ１２７細胞な
どを宿主細胞に用いることができる。同様にカイコ、夜
盗蛾などの昆虫細胞、大腸菌、枯草菌、酵母などの微生
物を宿主とすることも可能である。
は末梢血白血球、線維芽細胞、角化細胞、血管内皮細胞
などがあげられ、レクチン、ＬＰＳ（リポ多糖）やポリ
Ｉ：ポリＣなどの誘発剤、あるいはＩＬ−１、ＴＮＦ
（腫瘍壊死因子）などのサイトカインで誘導することで
産生される。腫瘍細胞においてはＭＣＡＦの持続産生株
が得られれば効率良く生産することができる。また遺伝
子組換え技術を用いて生産する場合には、ＣＨＯ（チャ
イニーズハムスター卵巣）細胞、マウスＣ１２７細胞な
どを宿主細胞に用いることができる。同様にカイコ、夜
盗蛾などの昆虫細胞、大腸菌、枯草菌、酵母などの微生
物を宿主とすることも可能である。
【００１１】正常細胞あるいは腫瘍細胞で産生する場合
はその培養上清、また遺伝子組換え動物細胞を用いる場
合はその培養上清、遺伝子組換え昆虫細胞あるいは成虫
においてはその培養上清か虫体抽出液、さらに遺伝子組
換え微生物にあってはその培養上清あるいは菌体抽出液
をそれぞれ原料として、種々のクロマトグラフィーによ
り分離することができる。クロマトグラフィーはＭＣＡ
Ｆに親和性をもつものであれば、いずれも利用できる。
例えば、二酸化ケイ素やリン酸カルシウムを素材とする
カラム、ヘパリンや疎水基をリガンドとして有するカラ
ム、金属キレートカラム、イオン交換カラムなどであ
り、さらに分子ふるいカラムも利用可能な担体として挙
げることができる。
はその培養上清、また遺伝子組換え動物細胞を用いる場
合はその培養上清、遺伝子組換え昆虫細胞あるいは成虫
においてはその培養上清か虫体抽出液、さらに遺伝子組
換え微生物にあってはその培養上清あるいは菌体抽出液
をそれぞれ原料として、種々のクロマトグラフィーによ
り分離することができる。クロマトグラフィーはＭＣＡ
Ｆに親和性をもつものであれば、いずれも利用できる。
例えば、二酸化ケイ素やリン酸カルシウムを素材とする
カラム、ヘパリンや疎水基をリガンドとして有するカラ
ム、金属キレートカラム、イオン交換カラムなどであ
り、さらに分子ふるいカラムも利用可能な担体として挙
げることができる。
【００１２】経口投与のための剤形としては、具体的に
は錠剤、丸剤、散剤、カプセル剤、顆粒剤、シロップ
剤、乳剤、懸濁剤などが挙げられる。かかる剤形は自体
公知の方法によって製造され、製剤分野において通常用
いられる担体もしくは賦形剤を含有するものである。非
経口投与のための剤形としては、たとえば、軟膏剤、注
射剤、湿布剤、塗布剤、吸入剤、坐剤、経皮吸入剤など
が挙げられる。
は錠剤、丸剤、散剤、カプセル剤、顆粒剤、シロップ
剤、乳剤、懸濁剤などが挙げられる。かかる剤形は自体
公知の方法によって製造され、製剤分野において通常用
いられる担体もしくは賦形剤を含有するものである。非
経口投与のための剤形としては、たとえば、軟膏剤、注
射剤、湿布剤、塗布剤、吸入剤、坐剤、経皮吸入剤など
が挙げられる。
【００１３】有効成分として用いられるＭＣＡＦの作用
濃度範囲は１ｎｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌであり、好
ましくは０．０１〜１μｇ／ｍｌである。またグルココ
ルチコイドを用いる場合は、天然物（コルチゾール（ヒ
ドロコルチゾン）、コルチコステロン、コルチゾンな
ど）、あるいは化学合成物（デキサメタジン、プレドニ
ゾロンなど）のどちらでも良く、その作用濃度範囲は１
０-9〜１０-3Ｍであり、好ましくは１０-7〜１０-4Ｍで
ある。
濃度範囲は１ｎｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌであり、好
ましくは０．０１〜１μｇ／ｍｌである。またグルココ
ルチコイドを用いる場合は、天然物（コルチゾール（ヒ
ドロコルチゾン）、コルチコステロン、コルチゾンな
ど）、あるいは化学合成物（デキサメタジン、プレドニ
ゾロンなど）のどちらでも良く、その作用濃度範囲は１
０-9〜１０-3Ｍであり、好ましくは１０-7〜１０-4Ｍで
ある。
【００１４】本発明の血管内皮細胞増殖剤の有効投与量
および投与回数は、投与形態、患者の年齢、体重、治療
すべき症状の性質もしくは重篤度によっても異なるが、
通常０．１〜１００μｇ／ｋｇ、好ましくは１〜１０μ
ｇ／ｋｇを一回または数回に分けて投与することができ
る。
および投与回数は、投与形態、患者の年齢、体重、治療
すべき症状の性質もしくは重篤度によっても異なるが、
通常０．１〜１００μｇ／ｋｇ、好ましくは１〜１０μ
ｇ／ｋｇを一回または数回に分けて投与することができ
る。
【００１５】なお、本発明にかかるＭＣＡＦの定量は、
ヒト単球（Matsushima et al., J.Exp. Med., 169, 148
5, 1989）の走化能を指標にして定量することができ
る。
ヒト単球（Matsushima et al., J.Exp. Med., 169, 148
5, 1989）の走化能を指標にして定量することができ
る。
【００１６】
【実施例】次に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に
説明するが、本発明はこれらに限定されるものではな
い。
説明するが、本発明はこれらに限定されるものではな
い。
【００１７】実施例１ 天然型ＭＣＡＦの調製法：ヒト線維芽細胞を１×１０6
細胞／ｍｌで５％新生仔ウシ血清を含むイーグルＭＥＭ
１リットルに播種し、２リットルのガラス培養層で０．
３％マイクロキャリヤー（“Ｃｙｔｏｄｅｘ１”、ファ
ルマシア社）に接着させて、攪拌しながら３７℃、５日
間培養した。その後、無血清イーグルＭＥＭ培地１リッ
トルに交換し、１００国際単位／ｍｌでヒト・インター
フェロンβを加えた。２４時間後、さらにポリ（Ｉ）：
ポリ（Ｃ）を１０μｇ／ｍｌで加え、その２時間後、少
量のメチルセルロースを含むイーグルＭＥＭ培地に置換
し、その後６日間培養を続けた。培養終了後、マイクロ
キャリヤーを沈降させた後、上清を別の容器に移し、Ｍ
ＣＡＦ精製原液とした。
細胞／ｍｌで５％新生仔ウシ血清を含むイーグルＭＥＭ
１リットルに播種し、２リットルのガラス培養層で０．
３％マイクロキャリヤー（“Ｃｙｔｏｄｅｘ１”、ファ
ルマシア社）に接着させて、攪拌しながら３７℃、５日
間培養した。その後、無血清イーグルＭＥＭ培地１リッ
トルに交換し、１００国際単位／ｍｌでヒト・インター
フェロンβを加えた。２４時間後、さらにポリ（Ｉ）：
ポリ（Ｃ）を１０μｇ／ｍｌで加え、その２時間後、少
量のメチルセルロースを含むイーグルＭＥＭ培地に置換
し、その後６日間培養を続けた。培養終了後、マイクロ
キャリヤーを沈降させた後、上清を別の容器に移し、Ｍ
ＣＡＦ精製原液とした。
【００１８】このＭＣＡＦ精製原液から次に示すよう
に、シリカ、ヘパリン、逆相クロマトグラフィーにより
ＭＣＡＦを分離した。フィルターで濾過して不容物を除
去した精製原液１リットルを高圧蒸気滅菌したシリカカ
ラム（８ｍｌ、５０００ｎｍpore、富士デビソン）に流
し、２０ｍＭリン酸緩衝液（ＰＢ）（ｐＨ７）２５ｍｌ
で．洗浄した後、２０ｍＭ塩酸（ｐＨ２）で溶出を行な
い、ＭＣＡＦ画分１０ｍｌを得た。この画分に０．３Ｍ
リン酸水素２ナトリウム溶液を添加してｐＨ６．４に調
整し、沈殿物を遠心分離（３０００ｒｐｍ、３０分）し
てから“ＡＦ−ヘパリン・トヨパール６５０Ｍ”カラム
（１ｍｌ、東ソー）に遠心上清をかけた。このカラムを
１０ｍＭ ＰＢ（ｐＨ６．４）５ｍｌで洗浄後、さらに
０．３Ｍ塩酸ナトリウムを含む２０ｍＭ ＰＢ（ｐＨ
７．２）５ｍｌで洗浄、続いて２Ｍ塩化ナトリウムを含
む２０ｍＭ ＰＢ（ｐＨ７．２）２ｍｌでＭＣＡＦを溶
出させた。さらに純度を上げるために、２ｍｌのＭＣＡ
Ｆ画分をＣ１８カラム（”ＺｏｒｂｏｘＰＲＯ−１０
ＰＬ”、４．６×２５０ｍｍ、三井東圧）に吸着させ、
０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（ｐＨ２）を含む
アセトニトリルの濃度勾配溶離による高速液体クロマト
グラフィー（ＨＰＬＣ）によりＭＣＡＦを分離した。得
られた標品はＣ１８−ＨＰＬＣおよびＳＤＳ−ポリアミ
ドケル電気泳動による純度検定で純度９５％以上を示し
た。また、この標品のエンドトキシン含量は“エンドス
ペシー”（生化学工業）による測定で０．０５ＥＵ／ｍ
ｌであった。ＭＣＡＦ精製標本はＴＦＡとアセトニトリ
ルを除去するため凍結乾燥を行なって実験に供した。
に、シリカ、ヘパリン、逆相クロマトグラフィーにより
ＭＣＡＦを分離した。フィルターで濾過して不容物を除
去した精製原液１リットルを高圧蒸気滅菌したシリカカ
ラム（８ｍｌ、５０００ｎｍpore、富士デビソン）に流
し、２０ｍＭリン酸緩衝液（ＰＢ）（ｐＨ７）２５ｍｌ
で．洗浄した後、２０ｍＭ塩酸（ｐＨ２）で溶出を行な
い、ＭＣＡＦ画分１０ｍｌを得た。この画分に０．３Ｍ
リン酸水素２ナトリウム溶液を添加してｐＨ６．４に調
整し、沈殿物を遠心分離（３０００ｒｐｍ、３０分）し
てから“ＡＦ−ヘパリン・トヨパール６５０Ｍ”カラム
（１ｍｌ、東ソー）に遠心上清をかけた。このカラムを
１０ｍＭ ＰＢ（ｐＨ６．４）５ｍｌで洗浄後、さらに
０．３Ｍ塩酸ナトリウムを含む２０ｍＭ ＰＢ（ｐＨ
７．２）５ｍｌで洗浄、続いて２Ｍ塩化ナトリウムを含
む２０ｍＭ ＰＢ（ｐＨ７．２）２ｍｌでＭＣＡＦを溶
出させた。さらに純度を上げるために、２ｍｌのＭＣＡ
Ｆ画分をＣ１８カラム（”ＺｏｒｂｏｘＰＲＯ−１０
ＰＬ”、４．６×２５０ｍｍ、三井東圧）に吸着させ、
０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（ｐＨ２）を含む
アセトニトリルの濃度勾配溶離による高速液体クロマト
グラフィー（ＨＰＬＣ）によりＭＣＡＦを分離した。得
られた標品はＣ１８−ＨＰＬＣおよびＳＤＳ−ポリアミ
ドケル電気泳動による純度検定で純度９５％以上を示し
た。また、この標品のエンドトキシン含量は“エンドス
ペシー”（生化学工業）による測定で０．０５ＥＵ／ｍ
ｌであった。ＭＣＡＦ精製標本はＴＦＡとアセトニトリ
ルを除去するため凍結乾燥を行なって実験に供した。
【００１９】実施例２ ヒト血管内皮細胞増殖活性測定：分娩後に廃棄されたヒ
ト臍帯から分離された血管内皮細胞（endothelial cel
l: ＥＣ）を被験細胞として、次の通り行なった。
ト臍帯から分離された血管内皮細胞（endothelial cel
l: ＥＣ）を被験細胞として、次の通り行なった。
【００２０】ＥＣを２５cm2 プラスチックフラスコ中で
１０％ウシ胎児血清を含むＭ１９９培地（Flow社）８ｍ
ｌに、ＥＣの増殖支持因子としてヒト線維芽細胞の無血
清培養上清（fibroblast-conditioned medium:ＦＣＭ）
を１０％で加え、３７℃、５％ＣＯ2 でコンフルエント
になるまで培養を続けた。
１０％ウシ胎児血清を含むＭ１９９培地（Flow社）８ｍ
ｌに、ＥＣの増殖支持因子としてヒト線維芽細胞の無血
清培養上清（fibroblast-conditioned medium:ＦＣＭ）
を１０％で加え、３７℃、５％ＣＯ2 でコンフルエント
になるまで培養を続けた。
【００２１】コンフルエントになったＥＣを０．２５％
トリプシン処理して剥がし、２．５％ウシ胎児血清およ
び１０％ＦＣＭを含むＭ１９９培地中に懸濁し、Ｉ型コ
ラーゲンをコートした２４ウェル・プラスチック・プレ
ート（Corning 社）に５０００個／０．５ｍｌ／ウェル
で播種した。３７℃、１日培養後、実施例１で得られた
ＭＣＡＦを適量加えて、さらに３７℃、５％ＣＯ2 下で
５日間培養を続けた。培養終了後、各ウェルのＥＣを
０．２５％トリプシンで剥がし、コールカウンターＺＭ
で細胞数を計測した。この測定では１測定条件について
３ウェルを使用し、細胞数は対照に対する割合（％）で
算出し、同時に標準偏差も求めた。
トリプシン処理して剥がし、２．５％ウシ胎児血清およ
び１０％ＦＣＭを含むＭ１９９培地中に懸濁し、Ｉ型コ
ラーゲンをコートした２４ウェル・プラスチック・プレ
ート（Corning 社）に５０００個／０．５ｍｌ／ウェル
で播種した。３７℃、１日培養後、実施例１で得られた
ＭＣＡＦを適量加えて、さらに３７℃、５％ＣＯ2 下で
５日間培養を続けた。培養終了後、各ウェルのＥＣを
０．２５％トリプシンで剥がし、コールカウンターＺＭ
で細胞数を計測した。この測定では１測定条件について
３ウェルを使用し、細胞数は対照に対する割合（％）で
算出し、同時に標準偏差も求めた。
【００２２】この結果を、図１（ＭＣＡＦのＥＣ増殖促
進作用）に示す。図１から明らかなように、培養液中へ
のＭＣＡＦの添加量の増加に伴ってＥＣの増殖促進が認
められた。
進作用）に示す。図１から明らかなように、培養液中へ
のＭＣＡＦの添加量の増加に伴ってＥＣの増殖促進が認
められた。
【００２３】
【発明の効果】本発明のＭＣＡＦを有効成分とする血管
内皮細胞増殖剤は、火傷や創傷などの治癒促進剤、炎症
時の組織修復剤および血管障害の治療剤として有用であ
る。
内皮細胞増殖剤は、火傷や創傷などの治癒促進剤、炎症
時の組織修復剤および血管障害の治療剤として有用であ
る。
【図１】 ＭＣＡＦの血管内皮細胞（ＥＣ）増殖促進作
用を示す。
用を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＤＵ
Claims (1)
- 【請求項１】 単球走化性活性化因子を有効成分とする
血管内皮細胞増殖剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4074681A JPH05271093A (ja) | 1992-03-30 | 1992-03-30 | 血管内皮細胞増殖剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4074681A JPH05271093A (ja) | 1992-03-30 | 1992-03-30 | 血管内皮細胞増殖剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05271093A true JPH05271093A (ja) | 1993-10-19 |
Family
ID=13554217
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4074681A Pending JPH05271093A (ja) | 1992-03-30 | 1992-03-30 | 血管内皮細胞増殖剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH05271093A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1994021809A1 (en) * | 1993-03-15 | 1994-09-29 | Institute Of Cytosignal Research, Inc. | Monocyte or macrophage migration factor |
| EP0669134A1 (en) * | 1993-09-13 | 1995-08-30 | Toray Industries, Inc. | Remedy for wound |
| US6673915B1 (en) | 1996-09-30 | 2004-01-06 | General Hospital Corporation | Nucleic acid encoding monocyte chemotactic protein 4 |
| JP2009544690A (ja) * | 2006-07-24 | 2009-12-17 | イェダ リサーチ アンド デベロップメント カンパニー リミテッド | Ｃｃｌ２を含む医薬組成物および炎症の処置のためのその使用 |
-
1992
- 1992-03-30 JP JP4074681A patent/JPH05271093A/ja active Pending
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1994021809A1 (en) * | 1993-03-15 | 1994-09-29 | Institute Of Cytosignal Research, Inc. | Monocyte or macrophage migration factor |
| EP0669134A1 (en) * | 1993-09-13 | 1995-08-30 | Toray Industries, Inc. | Remedy for wound |
| EP0669134A4 (en) * | 1993-09-13 | 1999-05-26 | Toray Industries | Wound medicine. |
| US6673915B1 (en) | 1996-09-30 | 2004-01-06 | General Hospital Corporation | Nucleic acid encoding monocyte chemotactic protein 4 |
| JP2009544690A (ja) * | 2006-07-24 | 2009-12-17 | イェダ リサーチ アンド デベロップメント カンパニー リミテッド | Ｃｃｌ２を含む医薬組成物および炎症の処置のためのその使用 |
| EP2056857A4 (en) * | 2006-07-24 | 2011-02-16 | Yeda Res & Dev | PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS WITH CCL2 AND THEIR USE IN THE TREATMENT OF INFLAMMATION |
| AU2007278054B2 (en) * | 2006-07-24 | 2012-11-22 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Pharmaceutical compositions comprising CCL2 and use of same for the treatment of inflammation |
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