JPH05260872A - はたけしめじの人工栽培用種菌及び 人工栽培方法 - Google Patents
はたけしめじの人工栽培用種菌及び 人工栽培方法Info
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- JPH05260872A JPH05260872A JP4091450A JP9145092A JPH05260872A JP H05260872 A JPH05260872 A JP H05260872A JP 4091450 A JP4091450 A JP 4091450A JP 9145092 A JP9145092 A JP 9145092A JP H05260872 A JPH05260872 A JP H05260872A
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- mycelium
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- cultured
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- Mushroom Cultivation (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 はたけしめじ菌糸体を酵素によってプロトプ
ラストとし、得られたプロトプラストを培養し、子実体
形成能を有する菌株を選択分離して種菌とし、これを用
いてはたけしめじを人工栽培する。 【効果】 従来ほとんど人工栽培できなかったはたけし
めじをはじめて多量人工栽培することができた。
ラストとし、得られたプロトプラストを培養し、子実体
形成能を有する菌株を選択分離して種菌とし、これを用
いてはたけしめじを人工栽培する。 【効果】 従来ほとんど人工栽培できなかったはたけし
めじをはじめて多量人工栽培することができた。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】この発明は、はたけしめじの新規
な種菌及び人工栽培方法に関するものである。
な種菌及び人工栽培方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】はたけしめじの野生株を天然界より採取
し、これより菌糸体を分離し、これを培養増殖し、得ら
れた種菌を人工培地に接種しても、子実体形成が難し
く、人工培地での栽培は殆ど行われていない。
し、これより菌糸体を分離し、これを培養増殖し、得ら
れた種菌を人工培地に接種しても、子実体形成が難し
く、人工培地での栽培は殆ど行われていない。
【０００３】はたけしめじは、きしめじ科、しめじ属に
属し、秋に林内や庭園、畑地、道端などのほか、時には
床下に多数群がって発生するが、食用とすればきわめて
美味である。はたけしめじの株の根本には菌束があり、
地下に埋まった木材などにつながっている（今関六也、
本郷次雄：原色日本新菌類図鑑 1 保育社．１９８７）
といわれており、これら自然界に発生したものが採取さ
れ、食用に供されているのが実情である。しかし、はた
けしめじは比較的その生育場所が特定個所に限定される
ことなく発生していることより、その人工栽培方法につ
いて、特開平３−２４４３２０号公報では、組織栽培で
得た菌糸体を継代培養により無菌の種菌を得て、これを
バーク堆肥又はオガクズと米糠を２〜５：１に混合した
培養基を充填したポリプロピレン栽培瓶に接種し、７０
日前後培養した後、菌掻きを行ない、水分を補給後瓶開
口部を黒ボク土により覆土を行なって、更に３０日前後
栽培を行なうと子実体が形成され、はたけしめじを得る
ことが出来るとしている。
属し、秋に林内や庭園、畑地、道端などのほか、時には
床下に多数群がって発生するが、食用とすればきわめて
美味である。はたけしめじの株の根本には菌束があり、
地下に埋まった木材などにつながっている（今関六也、
本郷次雄：原色日本新菌類図鑑 1 保育社．１９８７）
といわれており、これら自然界に発生したものが採取さ
れ、食用に供されているのが実情である。しかし、はた
けしめじは比較的その生育場所が特定個所に限定される
ことなく発生していることより、その人工栽培方法につ
いて、特開平３−２４４３２０号公報では、組織栽培で
得た菌糸体を継代培養により無菌の種菌を得て、これを
バーク堆肥又はオガクズと米糠を２〜５：１に混合した
培養基を充填したポリプロピレン栽培瓶に接種し、７０
日前後培養した後、菌掻きを行ない、水分を補給後瓶開
口部を黒ボク土により覆土を行なって、更に３０日前後
栽培を行なうと子実体が形成され、はたけしめじを得る
ことが出来るとしている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】人工培地でのはたけし
めじの栽培は、菌の生育がきわめて不安定であるばかり
か、菌糸の蔓延後も子実体形成に確実性がない。又前記
特開平３−２４４３２０号公報に示されるように、菌掻
きし、水分を補給した後、瓶開口部に鉱物質の覆土を行
なうことで子実体発生の安定性を確保し、栽培期間の短
縮を行なう方法もあるが、一般のひらたけ、えのきたけ
等の人工栽培における培地量に対する子実体収量に比
べ、その収量は少ない。
めじの栽培は、菌の生育がきわめて不安定であるばかり
か、菌糸の蔓延後も子実体形成に確実性がない。又前記
特開平３−２４４３２０号公報に示されるように、菌掻
きし、水分を補給した後、瓶開口部に鉱物質の覆土を行
なうことで子実体発生の安定性を確保し、栽培期間の短
縮を行なう方法もあるが、一般のひらたけ、えのきたけ
等の人工栽培における培地量に対する子実体収量に比
べ、その収量は少ない。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、従来人工
栽培が難しく殆ど行なわれておらず、天然界よりの採取
のみに頼っていたはたけしめじについて、これを他の一
般きのこ同様人工培地で栽培を確実なものにするべく鋭
意研究を行なったところ、極めて収量が高く、栽培日数
も短時日で子実体を採取し得るはたけしめじの栽培方法
を見出したものである。
栽培が難しく殆ど行なわれておらず、天然界よりの採取
のみに頼っていたはたけしめじについて、これを他の一
般きのこ同様人工培地で栽培を確実なものにするべく鋭
意研究を行なったところ、極めて収量が高く、栽培日数
も短時日で子実体を採取し得るはたけしめじの栽培方法
を見出したものである。
【０００６】即ち、本発明者らは自然界より採取し分離
したはたけしめじ野生株を純粋培養して種菌とするに際
し、予め野生株はその菌糸体を酵素処理によりプロトプ
ラスト化してから再生のための培養により細胞壁を再生
すると、二核細胞菌糸体と一核細胞菌糸体コロニーが形
成されることにより、子実体形成能を有する二核細胞菌
糸体のみを分離し、これを液体培養により増殖して種菌
を得、この種菌をオガクズ、バーク堆肥、ふすま、大豆
粕を主体とする固形培地に接種して栽培を行なうことで
はたけしめじ子実体を確実に得ることが出来たものであ
る。
したはたけしめじ野生株を純粋培養して種菌とするに際
し、予め野生株はその菌糸体を酵素処理によりプロトプ
ラスト化してから再生のための培養により細胞壁を再生
すると、二核細胞菌糸体と一核細胞菌糸体コロニーが形
成されることにより、子実体形成能を有する二核細胞菌
糸体のみを分離し、これを液体培養により増殖して種菌
を得、この種菌をオガクズ、バーク堆肥、ふすま、大豆
粕を主体とする固形培地に接種して栽培を行なうことで
はたけしめじ子実体を確実に得ることが出来たものであ
る。
【０００７】植物体のプロトプラストを培養して再生す
る方法については各種植物について、それぞれに適した
条件の下に数多くの例が見られるが、担子菌の場合は子
実体への再生が難しいため極めて少なく、例えば本発明
者らが特公昭６３−６３１９６号公報で示している様
に、まいたけの種菌を確保するのに継代培養を反復する
ことで形質の劣化したのをプロトプラスト化して培養
し、子実体形成能を改善する方法はあるが、広く野生株
を自然界より採取し、この菌糸体をプロトプラスト化し
て培養し、固形培地での子実体形成を安定かつ良好とす
る栽培例は無く、特に野生はたけしめじでのプロトプラ
スト再生並びにこれによって得られた種菌を使用しての
人工固形培地での子実体形成は、従来その例を全く見な
い。
る方法については各種植物について、それぞれに適した
条件の下に数多くの例が見られるが、担子菌の場合は子
実体への再生が難しいため極めて少なく、例えば本発明
者らが特公昭６３−６３１９６号公報で示している様
に、まいたけの種菌を確保するのに継代培養を反復する
ことで形質の劣化したのをプロトプラスト化して培養
し、子実体形成能を改善する方法はあるが、広く野生株
を自然界より採取し、この菌糸体をプロトプラスト化し
て培養し、固形培地での子実体形成を安定かつ良好とす
る栽培例は無く、特に野生はたけしめじでのプロトプラ
スト再生並びにこれによって得られた種菌を使用しての
人工固形培地での子実体形成は、従来その例を全く見な
い。
【０００８】野生はたけしめじ菌糸体の採取は、一般の
きのこにおける菌糸体採取と同様胞子よりの培養、ある
いは菌株を固形培地または液体培地にて純粋培養して得
ることが出来る。
きのこにおける菌糸体採取と同様胞子よりの培養、ある
いは菌株を固形培地または液体培地にて純粋培養して得
ることが出来る。
【０００９】次いで菌糸体のプロトプラスト化は細胞壁
を構成するセルロース、キチン質、ペクチン等を分解す
る酵素処理を行なうが、酵素剤としては糸状菌の細胞壁
溶解酵素として知られる各種酵素が使用出来、例えばセ
ルラーゼ、キチナーゼ、β−１，３グルカナーゼ等であ
り、これら酵素は個々に作用させても良いが同時に作用
させても良い。この酵素処理は菌糸体をソルビトール、
マンニトール、ＫＣｌ、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ等の浸透圧
調整剤を含むｐＨ４．０〜７．０の緩衝液で洗浄後に行
なう。酵素処理液はマンニトール、ソルビトール等の浸
透圧調整剤と共に蒸留水、緩衝液等に酵素を溶解して処
理液とする。
を構成するセルロース、キチン質、ペクチン等を分解す
る酵素処理を行なうが、酵素剤としては糸状菌の細胞壁
溶解酵素として知られる各種酵素が使用出来、例えばセ
ルラーゼ、キチナーゼ、β−１，３グルカナーゼ等であ
り、これら酵素は個々に作用させても良いが同時に作用
させても良い。この酵素処理は菌糸体をソルビトール、
マンニトール、ＫＣｌ、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ等の浸透圧
調整剤を含むｐＨ４．０〜７．０の緩衝液で洗浄後に行
なう。酵素処理液はマンニトール、ソルビトール等の浸
透圧調整剤と共に蒸留水、緩衝液等に酵素を溶解して処
理液とする。
【００１０】酵素処理終了後、生成したプロトプラスト
はグラスフィルター（３Ｇ３〜３Ｇ３．５程度）等を用
いた濾過等で菌糸体残さを取り除いた濾液部分を遠心分
離することで得られる。
はグラスフィルター（３Ｇ３〜３Ｇ３．５程度）等を用
いた濾過等で菌糸体残さを取り除いた濾液部分を遠心分
離することで得られる。
【００１１】ここで得られるプロトプラストはその殆ど
が二核細胞の子実体形成能を有するものであるが、一部
一核細胞の子実体形成能の無いものを含むので、これら
は後の選択分離において取り除くものである。
が二核細胞の子実体形成能を有するものであるが、一部
一核細胞の子実体形成能の無いものを含むので、これら
は後の選択分離において取り除くものである。
【００１２】次いで、これらプロトプラストは前記した
ような浸透圧調整剤を含む液体培地により培養して細胞
壁の再生を行ない、正常な菌糸体とするものであるが、
この時生成している菌糸体には子実体形成能の無い一核
細胞菌糸体を含むため、これと二核細胞菌糸体の分離を
行なうが、この分離は顕微鏡下、若しくはコロニー形成
等で行なうことが出来、分離方法の容易性からコロニー
形成による方法が好ましい。
ような浸透圧調整剤を含む液体培地により培養して細胞
壁の再生を行ない、正常な菌糸体とするものであるが、
この時生成している菌糸体には子実体形成能の無い一核
細胞菌糸体を含むため、これと二核細胞菌糸体の分離を
行なうが、この分離は顕微鏡下、若しくはコロニー形成
等で行なうことが出来、分離方法の容易性からコロニー
形成による方法が好ましい。
【００１３】このコロニー形成による分離の例を説明す
ると、浸透圧調整剤として、０．６Ｍマンニトールを含
む０．１Ｍクエン酸・リン酸二ナトリウム緩衝液（ｐＨ
６．０）に菌糸体を懸濁させ、これを前記同様に浸透圧
調整剤０．６Ｍマンニトールを含む寒天培地平板に塗
布、重層して２３〜２５℃で２〜４週間培養すると細胞
壁は再生する。この時プロトプラストには一核細胞と二
核細胞が混在しており、細胞壁を再生した菌糸体のコロ
ニーは、一核菌糸コロニーと二核菌糸コロニーに分かれ
るので、これより子実体形成能を有する二核菌糸は容易
に選択分離出来る。この選択分離の方法としては、例え
ば細胞核を蛍光染色するか、あるいはクランプコネクシ
ョンの有無で選別すれば良く、クランプコネクションの
有無で選択分離する場合は各コロニーの菌糸を顕微鏡で
観察し、クランプコネクションを有する菌株を選択すれ
ば良い。
ると、浸透圧調整剤として、０．６Ｍマンニトールを含
む０．１Ｍクエン酸・リン酸二ナトリウム緩衝液（ｐＨ
６．０）に菌糸体を懸濁させ、これを前記同様に浸透圧
調整剤０．６Ｍマンニトールを含む寒天培地平板に塗
布、重層して２３〜２５℃で２〜４週間培養すると細胞
壁は再生する。この時プロトプラストには一核細胞と二
核細胞が混在しており、細胞壁を再生した菌糸体のコロ
ニーは、一核菌糸コロニーと二核菌糸コロニーに分かれ
るので、これより子実体形成能を有する二核菌糸は容易
に選択分離出来る。この選択分離の方法としては、例え
ば細胞核を蛍光染色するか、あるいはクランプコネクシ
ョンの有無で選別すれば良く、クランプコネクションの
有無で選択分離する場合は各コロニーの菌糸を顕微鏡で
観察し、クランプコネクションを有する菌株を選択すれ
ば良い。
【００１４】この様に選択分離された二核細胞菌糸は、
これをそのままきのこ栽培用固形培地に接種しても良い
が、固形培地又は液体培地により種菌培養を行ない増殖
させて種菌とした後、栽培用培地に接種して使用するの
が好ましい。
これをそのままきのこ栽培用固形培地に接種しても良い
が、固形培地又は液体培地により種菌培養を行ない増殖
させて種菌とした後、栽培用培地に接種して使用するの
が好ましい。
【００１５】本発明では、種菌増殖培養は取り扱い易さ
と生育が良く、又日数が固形培地に比べ短い液体培地を
用いることが好ましく、通常きのこが生育する培地であ
ればいずれも使用できるが、特に好ましい例としてはグ
ルコース２％、イーストエキストラクト０．１５％、バ
クトソイトーン０．１５％（以下ＬＭ培地と称する）に
糖蜜０．５％（糖として）を添加し、ｐＨ６．０に調整
した培地であり、これに必要に応じ菌体パルプ化のため
溶性デンプンあるいはデキストリンを２％添加するもの
である。
と生育が良く、又日数が固形培地に比べ短い液体培地を
用いることが好ましく、通常きのこが生育する培地であ
ればいずれも使用できるが、特に好ましい例としてはグ
ルコース２％、イーストエキストラクト０．１５％、バ
クトソイトーン０．１５％（以下ＬＭ培地と称する）に
糖蜜０．５％（糖として）を添加し、ｐＨ６．０に調整
した培地であり、これに必要に応じ菌体パルプ化のため
溶性デンプンあるいはデキストリンを２％添加するもの
である。
【００１６】次いで、これら種菌より子実体への栽培は
ポリプロピレン製の８００〜１，０００ｍｌの栽培瓶あ
るいは５，０００〜７，０００ｍｌの袋を用いるが、本
発明では袋を用いるのが好ましく、これら栽培容器中に
オガクズ、バーク堆肥、ふすま、大豆粕等に水を加え水
分６０〜７０％程度とした培養基を充填して１２０℃で
１〜３時間程度殺菌後、種菌を接種する。接種後は室内
温度２０〜２５℃、湿度６０〜７０％に調整した室内で
５０〜７０日培養すると、栽培袋内に菌糸が蔓延すると
共に更に菌糸膜に覆われ、原基の発生が見られる状態と
なる。この時点で栽培袋を切り裂き、菌糸膜で覆われレ
ンガ状に固形化した培地塊を取り出しそのまま発生室棚
に載置し、温度１５〜１９℃、湿度９５〜１００％、照
度１００〜３００ルックス１２時間明暗周期の発茸条件
に調整して２０〜３０日間栽培を継続することによりは
たけしめじ子実体を収穫することが出来るものである。
ポリプロピレン製の８００〜１，０００ｍｌの栽培瓶あ
るいは５，０００〜７，０００ｍｌの袋を用いるが、本
発明では袋を用いるのが好ましく、これら栽培容器中に
オガクズ、バーク堆肥、ふすま、大豆粕等に水を加え水
分６０〜７０％程度とした培養基を充填して１２０℃で
１〜３時間程度殺菌後、種菌を接種する。接種後は室内
温度２０〜２５℃、湿度６０〜７０％に調整した室内で
５０〜７０日培養すると、栽培袋内に菌糸が蔓延すると
共に更に菌糸膜に覆われ、原基の発生が見られる状態と
なる。この時点で栽培袋を切り裂き、菌糸膜で覆われレ
ンガ状に固形化した培地塊を取り出しそのまま発生室棚
に載置し、温度１５〜１９℃、湿度９５〜１００％、照
度１００〜３００ルックス１２時間明暗周期の発茸条件
に調整して２０〜３０日間栽培を継続することによりは
たけしめじ子実体を収穫することが出来るものである。
【００１７】
【作用】本発明は人工培地での子実体形成の難しいはた
けしめじを予めその菌糸をプロトプラスト化処理し、こ
れを培養して子実体形成能の旺盛な二核細胞菌糸を選択
分離して種菌としているので、人工培地への接種後の生
育も極めて良好でかつ確実に子実体の形成が見られるこ
とになる。又本発明の袋栽培では、菌糸が蔓延すると共
に菌糸膜が培地を覆った時点で袋より取り出して発茸室
棚に載置して栽培しているので、培地周囲全面を大気と
接して通気性を良くし、発茸室内の湿度環境を培地全面
で対応してより良い発茸環境を構成して子実体を形成す
るものである。
けしめじを予めその菌糸をプロトプラスト化処理し、こ
れを培養して子実体形成能の旺盛な二核細胞菌糸を選択
分離して種菌としているので、人工培地への接種後の生
育も極めて良好でかつ確実に子実体の形成が見られるこ
とになる。又本発明の袋栽培では、菌糸が蔓延すると共
に菌糸膜が培地を覆った時点で袋より取り出して発茸室
棚に載置して栽培しているので、培地周囲全面を大気と
接して通気性を良くし、発茸室内の湿度環境を培地全面
で対応してより良い発茸環境を構成して子実体を形成す
るものである。
【００１８】以下実施例を述べる。
【００１９】
【実施例】はたけしめじ菌株は帯広市郊外で採取した野
生株（ＳＩ−５９９−１）１株をＬＭ寒天培地で２５
℃、２週間培養後、グルコース２％、ポリペプトン０．
５％、マルエキストラクト０．３％、イーストエキスト
ラクト０．３％、Ｋ2ＨＰＯ4０．１％、ＭｇＳＯ4・７
Ｈ2Ｏ、ｐＨ６．０の培地（以下ＡＭ培地と称する）５
０ｍｌの入った２００ｍｌ容三角フラスコ（オートクレ
ープ滅菌済）に２白金茸接種し、２５℃、３週間定期的
に振盪することで菌糸体を良く分散させながら静置培養
した。次に、この培養物５ｍｌをＡＭ培地１００ｍｌの
入った５００ｍｌ容振盪フラスコ（オートクレープ滅菌
済）に接種し、２５℃、１０日間振盪培養した。振盪培
養後、この培養物５ｍｌを遠沈し、０．６Ｍマンニトー
ルを含む０．１Ｍクエン酸・リン酸二ナトリウム緩衝液
（ｐＨ６．０）で２回洗浄後、遠沈して菌糸体を集め
た。これにセルラーゼ（ノボザイム２３４：商品名）１
ｍｇ／ｍｌ、キチナーゼ（シグマ社）１ｍｇ／ｍｌ、β
−１，３グルカナーゼ（ザイモリアーゼ２０Ｔ：商品
名）９ｍｇ／ｍｌ及び０．６Ｍマンニトールを含む０．
１Ｍクエン酸・リン酸二ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．
０）１ｍｌを添加し、３０℃で４時間振盪して酵素処理
を行なった。処理後直ちに０．６Ｍマンニトールを含む
０．１Ｍクエン酸・リン酸二ナトリウム緩衝液（ｐＨ
６．０）で洗浄し、同緩衝液に懸濁後、グラスフィルタ
ー（３Ｇ３及び３Ｇ３．５）で濾過することにより菌糸
体残さを除去した。この濾液を遠沈してプロトプラスト
を集めた。集められたプロトプラスト生成数は２．３×
１０4ケ／ｍｇ菌糸体乾物であった。
生株（ＳＩ−５９９−１）１株をＬＭ寒天培地で２５
℃、２週間培養後、グルコース２％、ポリペプトン０．
５％、マルエキストラクト０．３％、イーストエキスト
ラクト０．３％、Ｋ2ＨＰＯ4０．１％、ＭｇＳＯ4・７
Ｈ2Ｏ、ｐＨ６．０の培地（以下ＡＭ培地と称する）５
０ｍｌの入った２００ｍｌ容三角フラスコ（オートクレ
ープ滅菌済）に２白金茸接種し、２５℃、３週間定期的
に振盪することで菌糸体を良く分散させながら静置培養
した。次に、この培養物５ｍｌをＡＭ培地１００ｍｌの
入った５００ｍｌ容振盪フラスコ（オートクレープ滅菌
済）に接種し、２５℃、１０日間振盪培養した。振盪培
養後、この培養物５ｍｌを遠沈し、０．６Ｍマンニトー
ルを含む０．１Ｍクエン酸・リン酸二ナトリウム緩衝液
（ｐＨ６．０）で２回洗浄後、遠沈して菌糸体を集め
た。これにセルラーゼ（ノボザイム２３４：商品名）１
ｍｇ／ｍｌ、キチナーゼ（シグマ社）１ｍｇ／ｍｌ、β
−１，３グルカナーゼ（ザイモリアーゼ２０Ｔ：商品
名）９ｍｇ／ｍｌ及び０．６Ｍマンニトールを含む０．
１Ｍクエン酸・リン酸二ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．
０）１ｍｌを添加し、３０℃で４時間振盪して酵素処理
を行なった。処理後直ちに０．６Ｍマンニトールを含む
０．１Ｍクエン酸・リン酸二ナトリウム緩衝液（ｐＨ
６．０）で洗浄し、同緩衝液に懸濁後、グラスフィルタ
ー（３Ｇ３及び３Ｇ３．５）で濾過することにより菌糸
体残さを除去した。この濾液を遠沈してプロトプラスト
を集めた。集められたプロトプラスト生成数は２．３×
１０4ケ／ｍｇ菌糸体乾物であった。
【００２０】次いで集められたプロトプラストに前記ｐ
Ｈ６．０の緩衝液１ｍｌを添加し、プロトプラスト懸濁
液を調整した。この懸濁液０．１ｍｌは０．６Ｍマンニ
トールを含むＡＭ寒天培地（寒天１．５％）平板に塗布
後、０．６Ｍマンニトールを含む寒天濃度０．５％の同
培地を重層して２５℃、４週間培養した。培養後プロト
プラストが細胞壁を再生して形成したコロニーの内から
生育の良好なコロニーを選択し、このコロニーから更に
顕微鏡下においてクランプコネクションを有する菌株を
多数選択し、細胞壁を再生したプロトプラスト再生株
（二核菌糸）を得た。
Ｈ６．０の緩衝液１ｍｌを添加し、プロトプラスト懸濁
液を調整した。この懸濁液０．１ｍｌは０．６Ｍマンニ
トールを含むＡＭ寒天培地（寒天１．５％）平板に塗布
後、０．６Ｍマンニトールを含む寒天濃度０．５％の同
培地を重層して２５℃、４週間培養した。培養後プロト
プラストが細胞壁を再生して形成したコロニーの内から
生育の良好なコロニーを選択し、このコロニーから更に
顕微鏡下においてクランプコネクションを有する菌株を
多数選択し、細胞壁を再生したプロトプラスト再生株
（二核菌糸）を得た。
【００２１】これら再生菌株はＬＭ培地に甘しょ糖蜜
０．５％（糖として）を添加し、ｐＨ６．０に調整後、
菌体パルプ化のための増粘剤としてデキストリン２％を
添加した培地１００ｍｌの入った５００ｍｌ容振盪フラ
スコ（オートクレープ滅菌済）で２５℃、１４日間培養
して種菌を調製した。調製したプロトプラスト再生株か
らの種菌は、それぞれカバオガクズ７００ｇ、バーク堆
肥１００ｇ、ふすま７０ｇ、大豆粕７０ｇ、コーン糠７
０ｇに水を加えて水分約６４％の人工培養基を調製し、
これを市販の７，０００ｍｌ容ポリプロピレン製栽培袋
に２，０００ｇを充填し、レンガ状に成型し１２０℃、
１８０分滅菌した培地に接種した。種菌はそれぞれのプ
ロトプラスト再生株毎に各１０袋に接種し、培養室で２
５℃、湿度６０〜７０％で５０〜７０日間培養し、菌糸
が蔓延し菌糸膜が培養基を覆い、原基が形成され始めた
後、温度１５〜１９℃、相対湿度９５〜１００％の発茸
室に移し、ポリプロピレン袋を切り裂いて培養基を取り
出して棚に載置した。発茸室では１００〜３００ルック
ス１２時間明暗周期の照明条件で栽培し子実体を形成さ
せた。
０．５％（糖として）を添加し、ｐＨ６．０に調整後、
菌体パルプ化のための増粘剤としてデキストリン２％を
添加した培地１００ｍｌの入った５００ｍｌ容振盪フラ
スコ（オートクレープ滅菌済）で２５℃、１４日間培養
して種菌を調製した。調製したプロトプラスト再生株か
らの種菌は、それぞれカバオガクズ７００ｇ、バーク堆
肥１００ｇ、ふすま７０ｇ、大豆粕７０ｇ、コーン糠７
０ｇに水を加えて水分約６４％の人工培養基を調製し、
これを市販の７，０００ｍｌ容ポリプロピレン製栽培袋
に２，０００ｇを充填し、レンガ状に成型し１２０℃、
１８０分滅菌した培地に接種した。種菌はそれぞれのプ
ロトプラスト再生株毎に各１０袋に接種し、培養室で２
５℃、湿度６０〜７０％で５０〜７０日間培養し、菌糸
が蔓延し菌糸膜が培養基を覆い、原基が形成され始めた
後、温度１５〜１９℃、相対湿度９５〜１００％の発茸
室に移し、ポリプロピレン袋を切り裂いて培養基を取り
出して棚に載置した。発茸室では１００〜３００ルック
ス１２時間明暗周期の照明条件で栽培し子実体を形成さ
せた。
【００２２】この処理と平行して酵素処理を施さない前
記菌株（親株）についても、菌糸培養日数を６０〜８０
日間とした以外全く同じ条件による栽培方法で子実体を
形成させた。両者の結果を表１に示す。
記菌株（親株）についても、菌糸培養日数を６０〜８０
日間とした以外全く同じ条件による栽培方法で子実体を
形成させた。両者の結果を表１に示す。
【００２３】
【表１】
【００２４】プロトプラスト再生株は栽培日数、子実体
収量供に親株より優れたものとなっており、プロトプラ
スト処理により形質が変わり、人工培養基に極めて適し
た菌株となっているものであり、更に食味においてもプ
ロトプラスト株は全く遜色のないものであった。
収量供に親株より優れたものとなっており、プロトプラ
スト処理により形質が変わり、人工培養基に極めて適し
た菌株となっているものであり、更に食味においてもプ
ロトプラスト株は全く遜色のないものであった。
【００２５】
【発明の効果】本発明は、はたけしめじ菌糸体を酵素処
理してプロトプラスト化し、これを再生して種菌とした
ため、野生株では人工培養基での栽培の難しかったもの
が普通のきのこ人工栽培同様に子実体を得ることを可能
とし、かつその栽培日数を極めて短時日としながらその
収量は培地量に対し通常のきのこに劣らない量以上を得
ることが出来るものである。
理してプロトプラスト化し、これを再生して種菌とした
ため、野生株では人工培養基での栽培の難しかったもの
が普通のきのこ人工栽培同様に子実体を得ることを可能
とし、かつその栽培日数を極めて短時日としながらその
収量は培地量に対し通常のきのこに劣らない量以上を得
ることが出来るものである。
Claims (2)
- 【請求項１】 はたけしめじ菌糸体を酵素によってプロ
トプラストとし、得られたプロトプラストを培養し、子
実体形成能を有する菌株を選択分離してなるはたけしめ
じの人工栽培用種菌。 - 【請求項２】 はたけしめじ菌糸体を酵素によってプロ
トプラストとし、得られたプロトプラストを培養し、子
実体形成能を有する菌種を選択分離し、種菌培養し、得
られた種菌を人工培養基に接種して栽培することを特徴
とするはたけしめじの人工栽培方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4091450A JP2998815B2 (ja) | 1992-03-18 | 1992-03-18 | はたけしめじの人工栽培用種菌及び人工栽培方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4091450A JP2998815B2 (ja) | 1992-03-18 | 1992-03-18 | はたけしめじの人工栽培用種菌及び人工栽培方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05260872A true JPH05260872A (ja) | 1993-10-12 |
| JP2998815B2 JP2998815B2 (ja) | 2000-01-17 |
Family
ID=14026705
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4091450A Expired - Lifetime JP2998815B2 (ja) | 1992-03-18 | 1992-03-18 | はたけしめじの人工栽培用種菌及び人工栽培方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2998815B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007195432A (ja) * | 2006-01-25 | 2007-08-09 | Hokken Co Ltd | ハタケシメジの栽培方法及びその子実体 |
| CN104087548A (zh) * | 2013-04-01 | 2014-10-08 | 梁倩倩 | 一种荷叶离褶伞原生质体制备及再生方法 |
| WO2015180624A1 (en) * | 2014-05-27 | 2015-12-03 | Novozymes A/S | Methods for mushroom cultivation |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6251978A (ja) * | 1985-08-30 | 1987-03-06 | Matsumura Shuichi | 組織培養による松茸の育成方法 |
| JPH02113835A (ja) * | 1988-10-24 | 1990-04-26 | Nakano Vinegar Co Ltd | 新規きのこ |
-
1992
- 1992-03-18 JP JP4091450A patent/JP2998815B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6251978A (ja) * | 1985-08-30 | 1987-03-06 | Matsumura Shuichi | 組織培養による松茸の育成方法 |
| JPH02113835A (ja) * | 1988-10-24 | 1990-04-26 | Nakano Vinegar Co Ltd | 新規きのこ |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007195432A (ja) * | 2006-01-25 | 2007-08-09 | Hokken Co Ltd | ハタケシメジの栽培方法及びその子実体 |
| CN104087548A (zh) * | 2013-04-01 | 2014-10-08 | 梁倩倩 | 一种荷叶离褶伞原生质体制备及再生方法 |
| CN104087548B (zh) * | 2013-04-01 | 2017-04-05 | 梁倩倩 | 一种荷叶离褶伞原生质体制备及再生方法 |
| WO2015180624A1 (en) * | 2014-05-27 | 2015-12-03 | Novozymes A/S | Methods for mushroom cultivation |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2998815B2 (ja) | 2000-01-17 |
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