JPH05230100A - 蛋白分画、その単離法、該蛋白分画を含有する有効物質濃縮物、及び該蛋白分画を含有する、皮膚手入れ及び／又は炎症性皮膚病の治療用製剤 - Google Patents
蛋白分画、その単離法、該蛋白分画を含有する有効物質濃縮物、及び該蛋白分画を含有する、皮膚手入れ及び／又は炎症性皮膚病の治療用製剤Info
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- JPH05230100A JPH05230100A JP4243226A JP24322692A JPH05230100A JP H05230100 A JPH05230100 A JP H05230100A JP 4243226 A JP4243226 A JP 4243226A JP 24322692 A JP24322692 A JP 24322692A JP H05230100 A JPH05230100 A JP H05230100A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 牛由来の有効物質に代わる、皮膚手入れ及び
／又は炎症性皮膚病の治療のために有効な代替物質を提
供する。 【構成】 該代替物質は、ドデシルスルホン酸ナトリウ
ムを用いたポリアクリルアミドゲル電気泳動において少
なくとも１つのバンド、相対分子量３０００〜３０００
０ｇ／ｍｏｌ、蛋白含量に対する全窒素含量１４〜２０
％及びアミノ窒素含量１〜２％、及びその他の、請求項
１に定義したパラメータを有するマメ科植物の種子由来
の蛋白分画からなる。
／又は炎症性皮膚病の治療のために有効な代替物質を提
供する。 【構成】 該代替物質は、ドデシルスルホン酸ナトリウ
ムを用いたポリアクリルアミドゲル電気泳動において少
なくとも１つのバンド、相対分子量３０００〜３０００
０ｇ／ｍｏｌ、蛋白含量に対する全窒素含量１４〜２０
％及びアミノ窒素含量１〜２％、及びその他の、請求項
１に定義したパラメータを有するマメ科植物の種子由来
の蛋白分画からなる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、蛋白分画、その単離
法、該蛋白分画を含有する有効物質濃縮物、及び該蛋白
分画を含有する、皮膚手入れ及び／又は炎症性皮膚病の
治療用製剤に関する。
法、該蛋白分画を含有する有効物質濃縮物、及び該蛋白
分画を含有する、皮膚手入れ及び／又は炎症性皮膚病の
治療用製剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】生物を被覆する器官としての皮膚の役割
は、外界に対する密閉及び媒介する機能にある。種々の
生化学的及び生物物理学的系は、この露出した器官の保
全の維持に役立つ。例えば免疫系は皮膚を病原性微生物
による損傷から保護し、メラニンを形成する系は色素沈
着を制御しかつ光線障害から皮膚を守り、脂質系は皮膚
通過性水分損失を抑制する脂質ミセルを生産し、かつ制
御されたケラチン合成はヒトの抵抗性角質層を提供す
る。前記系は、その経過が酵素により維持されかつ酵素
阻害剤によって調節される複雑な化学的プロセスを基礎
とする。しかしながら、皮膚の目に見えかつ触知されう
る状態は、美しさ、健康及び若さの尺度であり、これら
のことを得ることは、手入れ用化粧品の一般的目的であ
る。
は、外界に対する密閉及び媒介する機能にある。種々の
生化学的及び生物物理学的系は、この露出した器官の保
全の維持に役立つ。例えば免疫系は皮膚を病原性微生物
による損傷から保護し、メラニンを形成する系は色素沈
着を制御しかつ光線障害から皮膚を守り、脂質系は皮膚
通過性水分損失を抑制する脂質ミセルを生産し、かつ制
御されたケラチン合成はヒトの抵抗性角質層を提供す
る。前記系は、その経過が酵素により維持されかつ酵素
阻害剤によって調節される複雑な化学的プロセスを基礎
とする。しかしながら、皮膚の目に見えかつ触知されう
る状態は、美しさ、健康及び若さの尺度であり、これら
のことを得ることは、手入れ用化粧品の一般的目的であ
る。
【０００３】皮膚の含水量は、皮膚の外見、弾性及び触
知可能な組織にとって決定的に重要である。伸張性の弾
性境界膜、即ち角質層と生きた表皮の間にあるストラツ
ム・コンユクツム(Stratum conjunctum)は、健康な皮膚
の場合には皮膚通過性水損失を防止する。この透過性バ
リヤは、脂質、蛋白及び炭水化物からなる、従って多種
多様な影響により損傷される。例えば、界面活性剤で洗
浄すると脂質を抽出し、それによりストラツム・コンユ
クツムの透水性を高めることがあり、紫外線は蛋白、プ
ロテオグリカン及び多糖の網状結合又は分解に触媒作用
し、それにより弾性低下及びストラツム・コンユンクツ
ムの高い損傷可能性を惹起することがあり、細菌酵素は
ストラツム・コンユンクツムの蛋白及び炭水化物の分解
を触媒作用し、炎症過程及び免疫反応の際に、過剰に可
動性化された生体に特有な酵素、例えばトリプターゼ、
エラスターゼ及びカテプシンは皮膚、特にその透過性バ
リヤに作用することがある。
知可能な組織にとって決定的に重要である。伸張性の弾
性境界膜、即ち角質層と生きた表皮の間にあるストラツ
ム・コンユクツム(Stratum conjunctum)は、健康な皮膚
の場合には皮膚通過性水損失を防止する。この透過性バ
リヤは、脂質、蛋白及び炭水化物からなる、従って多種
多様な影響により損傷される。例えば、界面活性剤で洗
浄すると脂質を抽出し、それによりストラツム・コンユ
クツムの透水性を高めることがあり、紫外線は蛋白、プ
ロテオグリカン及び多糖の網状結合又は分解に触媒作用
し、それにより弾性低下及びストラツム・コンユンクツ
ムの高い損傷可能性を惹起することがあり、細菌酵素は
ストラツム・コンユンクツムの蛋白及び炭水化物の分解
を触媒作用し、炎症過程及び免疫反応の際に、過剰に可
動性化された生体に特有な酵素、例えばトリプターゼ、
エラスターゼ及びカテプシンは皮膚、特にその透過性バ
リヤに作用することがある。
【０００４】皮膚の含水率を高め、ひいては性状を改善
する努力において、種々の化粧用の皮膚手入れ剤が開発
された。水和作用する化粧品用有効物質の概要は、S.D.
Randazzo 及び P. Morganti著, J. Appl. Cosmetol.
8, 93-102, (1990)に記載されている。親水性、吸湿性
物質、例えばグリセリン、ソルビット、種々の糖又は蛋
白加水分解物が使用された。しかしながら、これらの物
質は全て容易に洗い流され、若干のものは不快な、粘着
性感触を皮膚表面に残し、他のものは、特に顕著な吸水
性特性の場合には、しかも角質層を付加的に乾燥させる
ことがある。皮膚に一層水分を供給しかつ保持するため
に、油中型水乳液も使用された。しかし、これらも皮膚
表面に密閉性油層を残し、鬱水、角質層の不快な膨潤及
び長期間の場合にはストラツム・コンユンクツムの脂質
組成の治癒困難な障害を生じる恐れがある。透過性バリ
ヤを強化するために牛の脳由来のグリコリピド及びホス
ホリピドを含有する皮膚の手入れ剤は、プロバンドの皮
膚内に明らかに高められた含水率を生じ、この場合には
角質層上に好ましくない、不透過性の油膜を形成しな
い。しかし今や、牛の脳由来の脂質は、牛のスポンジ形
脳疾患(bovinen spongiformen Encephalopathie)（ＢＳ
Ｅ，牛精神障害）の病原体の潜伏性キャリヤであり得る
ので、たとえ確実に該病原体を排除する方法に基づき製
造されたとしても、このような製品のためには、極めて
制限された需要が生じるにすぎない。
する努力において、種々の化粧用の皮膚手入れ剤が開発
された。水和作用する化粧品用有効物質の概要は、S.D.
Randazzo 及び P. Morganti著, J. Appl. Cosmetol.
8, 93-102, (1990)に記載されている。親水性、吸湿性
物質、例えばグリセリン、ソルビット、種々の糖又は蛋
白加水分解物が使用された。しかしながら、これらの物
質は全て容易に洗い流され、若干のものは不快な、粘着
性感触を皮膚表面に残し、他のものは、特に顕著な吸水
性特性の場合には、しかも角質層を付加的に乾燥させる
ことがある。皮膚に一層水分を供給しかつ保持するため
に、油中型水乳液も使用された。しかし、これらも皮膚
表面に密閉性油層を残し、鬱水、角質層の不快な膨潤及
び長期間の場合にはストラツム・コンユンクツムの脂質
組成の治癒困難な障害を生じる恐れがある。透過性バリ
ヤを強化するために牛の脳由来のグリコリピド及びホス
ホリピドを含有する皮膚の手入れ剤は、プロバンドの皮
膚内に明らかに高められた含水率を生じ、この場合には
角質層上に好ましくない、不透過性の油膜を形成しな
い。しかし今や、牛の脳由来の脂質は、牛のスポンジ形
脳疾患(bovinen spongiformen Encephalopathie)（ＢＳ
Ｅ，牛精神障害）の病原体の潜伏性キャリヤであり得る
ので、たとえ確実に該病原体を排除する方法に基づき製
造されたとしても、このような製品のためには、極めて
制限された需要が生じるにすぎない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、でき
るかぎり牛由来の有効物質に代わる代替物質を見出すこ
とであった。
るかぎり牛由来の有効物質に代わる代替物質を見出すこ
とであった。
【０００６】
【課題を解決するための手段】前記課題を解決するため
に、プロバンドで種々の植物性脂質及び蛋白の水和作用
の調査を行った。ところで、マメ科植物の種子から抽出
された蛋白が局所的適用後に皮膚の含水率を特に強度に
かつ公知の水和剤に比較して持続的に高めることが判明
した。しかも驚異的に、マメ科植物の種子からの蛋白の
製剤は若干のプロバンドにおいては虫に刺された箇所の
かゆみ刺激を軽減しかつ乾癬に苦しむプロバンドの場合
には、損傷部位のかゆみ刺激、皮膚の発赤及び鱗屑が明
らかに減少することが判明した。更に、引き続いてのマ
メ科植物の種子からの蛋白の消炎作用の系統的作用で
は、これらの物質はトリクロルエチレンによりプロバン
ドに発生させた局所的皮膚の発赤を、マメ科植物の蛋白
を有しない類似の製剤よりも急速に鎮静し、かつ消炎性
作用はフルメタソン(Flumethason)を含有する対照製剤
とほぼ同じであることが判明した。更に、マメ科植物の
種子由来の蛋白で処理した皮膚部位の弾性は明らかに向
上することが判明した。更に、マメ科植物の種子由来の
前記蛋白、例えばトリターゼ、ＰＭＮ−エラスターゼ、
線維芽細胞エラスターゼ及びトリシンはプロテイナーゼ
を抑制することが判明した。
に、プロバンドで種々の植物性脂質及び蛋白の水和作用
の調査を行った。ところで、マメ科植物の種子から抽出
された蛋白が局所的適用後に皮膚の含水率を特に強度に
かつ公知の水和剤に比較して持続的に高めることが判明
した。しかも驚異的に、マメ科植物の種子からの蛋白の
製剤は若干のプロバンドにおいては虫に刺された箇所の
かゆみ刺激を軽減しかつ乾癬に苦しむプロバンドの場合
には、損傷部位のかゆみ刺激、皮膚の発赤及び鱗屑が明
らかに減少することが判明した。更に、引き続いてのマ
メ科植物の種子からの蛋白の消炎作用の系統的作用で
は、これらの物質はトリクロルエチレンによりプロバン
ドに発生させた局所的皮膚の発赤を、マメ科植物の蛋白
を有しない類似の製剤よりも急速に鎮静し、かつ消炎性
作用はフルメタソン(Flumethason)を含有する対照製剤
とほぼ同じであることが判明した。更に、マメ科植物の
種子由来の蛋白で処理した皮膚部位の弾性は明らかに向
上することが判明した。更に、マメ科植物の種子由来の
前記蛋白、例えばトリターゼ、ＰＭＮ−エラスターゼ、
線維芽細胞エラスターゼ及びトリシンはプロテイナーゼ
を抑制することが判明した。
【０００７】よって、本発明は、蛋白分画及び該蛋白分
画を含有する有効物質濃縮物及び消炎性作用、水和作
用、皮膚弾性を向上する作用、プロテイナーゼ抑制作用
を有する、少なくとも１種のマメ科植物の種子から得ら
れた蛋白又は蛋白分画を含有する皮膚の手入れ及び／又
は炎症性皮膚疾患の治療用製剤に関する。
画を含有する有効物質濃縮物及び消炎性作用、水和作
用、皮膚弾性を向上する作用、プロテイナーゼ抑制作用
を有する、少なくとも１種のマメ科植物の種子から得ら
れた蛋白又は蛋白分画を含有する皮膚の手入れ及び／又
は炎症性皮膚疾患の治療用製剤に関する。
【０００８】本発明による蛋白を取得するためのマメ科
植物の種子としては、インゲン類、例えばアズキ(Phase
olus angularis)、リママメ(Phaseolus lunatus)、ファ
セオルス・アウレウス（Phaseolus aureus)、ゴガツサ
サゲ（Phaseolus vulgaris)、ベニバナインゲン(Phaseo
lus coccineus)、ファセオルス・リメンシス(Phaseolus
limensis)、エンドウ類、例えばスイートピー(Lathyru
s odoratus)、ダイズ（Glycine max)及び(Glycine hisp
ida)、ラッカセイ(Arachis hypogaea)並びにカジャヌス
(Cajanus)、ドリクス(Dolicus)、ビグナ(Vigna)及びビ
キア(Vicia)類の熱帯性マメ科植物の種子が適当であ
る。
植物の種子としては、インゲン類、例えばアズキ(Phase
olus angularis)、リママメ(Phaseolus lunatus)、ファ
セオルス・アウレウス（Phaseolus aureus)、ゴガツサ
サゲ（Phaseolus vulgaris)、ベニバナインゲン(Phaseo
lus coccineus)、ファセオルス・リメンシス(Phaseolus
limensis)、エンドウ類、例えばスイートピー(Lathyru
s odoratus)、ダイズ（Glycine max)及び(Glycine hisp
ida)、ラッカセイ(Arachis hypogaea)並びにカジャヌス
(Cajanus)、ドリクス(Dolicus)、ビグナ(Vigna)及びビ
キア(Vicia)類の熱帯性マメ科植物の種子が適当であ
る。
【０００９】本発明による蛋白分画は、前記のマメ科植
物の種子から、乾燥した種子を粉砕し、得られた粉を有
機溶剤又は溶剤混合物で抽出し、乾燥しかつそのように
して脱脂した粉を水及び電解質水溶液でｐＨ２〜１０、
有利にはｐＨ５〜６で抽出し、抽出物をｐＨ５〜７に調
整し、真空中で濃縮し、該濃縮物を例えばケイソウ土の
ような濾過助剤を加えて濾過するか又は遠心分離し、そ
れから蛋白を、例えば３０〜８０％飽和させた硫酸アン
モニウムでの塩析、例えばエタノールのような水と混和
可能な有機溶剤での沈殿により分離し、濾過及び遠心分
離により集め、かつ最後に直接真空中で乾燥するか、又
は予め塩を透析、ゲル濾過又は超音波濾過により除去
し、次いで凍結乾燥することにより取得することができ
る。乾燥物質として蛋白分画が得られ、該蛋白分画はポ
リアクリルアミドゲル電気泳動でドデシル硫酸ナトリウ
ムの存在下で（Phastsystem, Pharmacia Biosystem, Up
psala, Ｓ）少なくとも１つのバンドを有し、その移動
度から相対分子量は３０００〜３００００ｇ／ｍｏｌで
あると推察できる。得られた蛋白分画は、それぞれ蛋白
含量に対して、全窒素１４〜２０％及びアミノ窒素１〜
２％を含有し、水及び電解質水溶液中に可溶であり、エ
タノール及びアセトン中に不溶性である、かつ水溶液中
でトリクロル酢酸、スルホサリシル酸、ピクリン酸又は
塩化ベンゼトニウムの添加後に、激しい析出を呈する。
更に、該蛋白分画はプロテナーゼを抑制しかつ例えばト
リプシンで測定してＩ50値＜１０μｇ（乾燥物質に対し
て）／ｍｌ試験混合物、ＰＭＮ−エラスターゼで測定し
てＩ50値＜１００μｇ（乾燥物質に対して）／ｍｌ試験
混合物、トリプターゼで測定してＩ50値＜２００μｇ
（乾燥物質に対して）／ｍｌ試験混合物及び線維芽細胞
エラスターゼで測定してＩ50値＜３５０μｇ（乾燥物質
に対して）／ｍｌ試験混合物を呈する。得られた蛋白分
画を、０．１〜２％の濃度（乾燥物質として計刺して）
で適当な化粧用又は皮膚科学的賦形剤に配合して、ヒト
のプロバンドの皮膚に適用すると、水和、鎮痒、炎症抑
制、及び皮膚弾性を高める作用を及ぼす。
物の種子から、乾燥した種子を粉砕し、得られた粉を有
機溶剤又は溶剤混合物で抽出し、乾燥しかつそのように
して脱脂した粉を水及び電解質水溶液でｐＨ２〜１０、
有利にはｐＨ５〜６で抽出し、抽出物をｐＨ５〜７に調
整し、真空中で濃縮し、該濃縮物を例えばケイソウ土の
ような濾過助剤を加えて濾過するか又は遠心分離し、そ
れから蛋白を、例えば３０〜８０％飽和させた硫酸アン
モニウムでの塩析、例えばエタノールのような水と混和
可能な有機溶剤での沈殿により分離し、濾過及び遠心分
離により集め、かつ最後に直接真空中で乾燥するか、又
は予め塩を透析、ゲル濾過又は超音波濾過により除去
し、次いで凍結乾燥することにより取得することができ
る。乾燥物質として蛋白分画が得られ、該蛋白分画はポ
リアクリルアミドゲル電気泳動でドデシル硫酸ナトリウ
ムの存在下で（Phastsystem, Pharmacia Biosystem, Up
psala, Ｓ）少なくとも１つのバンドを有し、その移動
度から相対分子量は３０００〜３００００ｇ／ｍｏｌで
あると推察できる。得られた蛋白分画は、それぞれ蛋白
含量に対して、全窒素１４〜２０％及びアミノ窒素１〜
２％を含有し、水及び電解質水溶液中に可溶であり、エ
タノール及びアセトン中に不溶性である、かつ水溶液中
でトリクロル酢酸、スルホサリシル酸、ピクリン酸又は
塩化ベンゼトニウムの添加後に、激しい析出を呈する。
更に、該蛋白分画はプロテナーゼを抑制しかつ例えばト
リプシンで測定してＩ50値＜１０μｇ（乾燥物質に対し
て）／ｍｌ試験混合物、ＰＭＮ−エラスターゼで測定し
てＩ50値＜１００μｇ（乾燥物質に対して）／ｍｌ試験
混合物、トリプターゼで測定してＩ50値＜２００μｇ
（乾燥物質に対して）／ｍｌ試験混合物及び線維芽細胞
エラスターゼで測定してＩ50値＜３５０μｇ（乾燥物質
に対して）／ｍｌ試験混合物を呈する。得られた蛋白分
画を、０．１〜２％の濃度（乾燥物質として計刺して）
で適当な化粧用又は皮膚科学的賦形剤に配合して、ヒト
のプロバンドの皮膚に適用すると、水和、鎮痒、炎症抑
制、及び皮膚弾性を高める作用を及ぼす。
【００１０】皮膚科学的及び化粧用適用のためには、本
発明による物質は、有利には皮膚にやさしい賦形剤中
で、例えばクリーム、ローション、ゲル、パック、パウ
ダー又はプラスターとして使用される。一般に、完成し
た製剤は、プラスターを除き、乾燥物質として有効物質
０．０１〜５重量％、有利には０．１〜２重量％を含有
する。更に、本発明による製剤の皮膚浸透性適用のため
のプラスターは、９０重量％まで有効物質を含有するこ
とができる。液状又は半固体製剤の調製を簡単にするた
めに、本発明による蛋白分画を水に溶かしかつ微生物の
生長を防止するための水溶性保存剤、例えばメチル−ｐ
−オキシベンゾエート、蛋白安定化のための多価のアル
コール、例えばエチレングリコール又はプロピレングリ
コール及び疎水性相互作用、それに結び付いた蛋白凝結
を抑制するための非イオン性もしくは両性界面活性剤、
例えばポリソルバート８０、オクトキシノール、ココア
ムポグリシネート又はココアミドプロピルベタインを添
加することにより、乾燥物質として有効物質１〜１５重
量％、有利には約７．５重量％を含有する良好に調合可
能な安定な有効物質濃縮物を該蛋白分画から製造するこ
とができる。
発明による物質は、有利には皮膚にやさしい賦形剤中
で、例えばクリーム、ローション、ゲル、パック、パウ
ダー又はプラスターとして使用される。一般に、完成し
た製剤は、プラスターを除き、乾燥物質として有効物質
０．０１〜５重量％、有利には０．１〜２重量％を含有
する。更に、本発明による製剤の皮膚浸透性適用のため
のプラスターは、９０重量％まで有効物質を含有するこ
とができる。液状又は半固体製剤の調製を簡単にするた
めに、本発明による蛋白分画を水に溶かしかつ微生物の
生長を防止するための水溶性保存剤、例えばメチル−ｐ
−オキシベンゾエート、蛋白安定化のための多価のアル
コール、例えばエチレングリコール又はプロピレングリ
コール及び疎水性相互作用、それに結び付いた蛋白凝結
を抑制するための非イオン性もしくは両性界面活性剤、
例えばポリソルバート８０、オクトキシノール、ココア
ムポグリシネート又はココアミドプロピルベタインを添
加することにより、乾燥物質として有効物質１〜１５重
量％、有利には約７．５重量％を含有する良好に調合可
能な安定な有効物質濃縮物を該蛋白分画から製造するこ
とができる。
【００１１】本発明による製剤の消炎作用を測定するた
めには、例えばＨ．フリードリッヒ(Friederich)著“Ar
ztliche Forschung 20, 549-552, 1966)に基づくトリク
ロルエチレン赤斑試験、及びその光度分析評価のために
は、例えばクロマメータＣＲ−３００（ミノルタＣ
ｏ．）のような規約反射率カラー測定器が好適である。
めには、例えばＨ．フリードリッヒ(Friederich)著“Ar
ztliche Forschung 20, 549-552, 1966)に基づくトリク
ロルエチレン赤斑試験、及びその光度分析評価のために
は、例えばクロマメータＣＲ−３００（ミノルタＣ
ｏ．）のような規約反射率カラー測定器が好適である。
【００１２】皮膚弾性の測定は、プロバンドの皮膚を規
定した負圧下にある有溝ゾンデで吸引し、皮膚のゾンデ
内への侵入深さを測定し、その後圧力を通気により正常
に戻し、再び放圧した皮膚のゾンデ内への侵入深さを測
定することにより行うことができる。負圧により伸張し
た皮膚の復元速度及び復元度が皮膚の弾性の尺度をな
す。この原理に基づく皮膚弾性の測定のためには、マイ
クロプロセッサを装備した記録装置、Firma Courage &
Khazaka electronic GmbH, Koeln, D の“Cutometer”
が極めて好適である。皮膚の湿度の測定は、電子測定器
“Corneometer”（Courage & Khazaka）を用いて行うこ
とができる。この測定原理は、水と皮膚構成成分との異
なった誘電定数の識別を基礎とする。
定した負圧下にある有溝ゾンデで吸引し、皮膚のゾンデ
内への侵入深さを測定し、その後圧力を通気により正常
に戻し、再び放圧した皮膚のゾンデ内への侵入深さを測
定することにより行うことができる。負圧により伸張し
た皮膚の復元速度及び復元度が皮膚の弾性の尺度をな
す。この原理に基づく皮膚弾性の測定のためには、マイ
クロプロセッサを装備した記録装置、Firma Courage &
Khazaka electronic GmbH, Koeln, D の“Cutometer”
が極めて好適である。皮膚の湿度の測定は、電子測定器
“Corneometer”（Courage & Khazaka）を用いて行うこ
とができる。この測定原理は、水と皮膚構成成分との異
なった誘電定数の識別を基礎とする。
【００１３】本発明による製剤の試験管測定のために
は、抑制すべき酵素を阻害剤ないしはプラシーボーと共
に一定時間保温し、その後発色性蛋白基質を加え、かつ
単位時間当たり残留する、抑制されなかった酵素によっ
て触媒されたｐ−ニトロアニリン発生を光度分析的によ
り、４０５ｎｍの波長でＤＡ405／ｔとして測定する。
対照ＤＡ／ｔと試料ＤＡ／ｔの差から、Ｉ50値を、一定
の条件下で酵素を５０％まで抑制する製剤量として計算
することができる。発色性基質としては、ＰＭＮ−エラ
スターゼ及び線維芽細胞エラスターゼのためには：Ｍｅ
ＯＳｕｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−ｐＮＡ、
トリプシンのためにはＢｚ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−
ｐＮＡ及びトリプターゼのためには：Ｔｏｓ−Ｇｌｙ−
Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ｐＮＡが好適である（発色性基質を用
いたプロテイナーゼ及びその阻害剤を測定する方法の詳
細は、I. Witt, Eur. J. Clin. Chem. Biol.,29, 355-3
74,1991に記載されている）。
は、抑制すべき酵素を阻害剤ないしはプラシーボーと共
に一定時間保温し、その後発色性蛋白基質を加え、かつ
単位時間当たり残留する、抑制されなかった酵素によっ
て触媒されたｐ−ニトロアニリン発生を光度分析的によ
り、４０５ｎｍの波長でＤＡ405／ｔとして測定する。
対照ＤＡ／ｔと試料ＤＡ／ｔの差から、Ｉ50値を、一定
の条件下で酵素を５０％まで抑制する製剤量として計算
することができる。発色性基質としては、ＰＭＮ−エラ
スターゼ及び線維芽細胞エラスターゼのためには：Ｍｅ
ＯＳｕｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−ｐＮＡ、
トリプシンのためにはＢｚ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−
ｐＮＡ及びトリプターゼのためには：Ｔｏｓ−Ｇｌｙ−
Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ｐＮＡが好適である（発色性基質を用
いたプロテイナーゼ及びその阻害剤を測定する方法の詳
細は、I. Witt, Eur. J. Clin. Chem. Biol.,29, 355-3
74,1991に記載されている）。
【００１４】プロテイナーゼ阻害作用は、またリゼイト
内で培養した線維芽細胞で表示することができる。該測
定は、既に述べたように、発色性プロテイナーゼで行う
ことができる。
内で培養した線維芽細胞で表示することができる。該測
定は、既に述べたように、発色性プロテイナーゼで行う
ことができる。
【００１５】生体外系内でのエラスターゼ抑制を表示す
るためには、エラスチン分の豊富な組織、例えば腱を器
官浴内でＰＭＮ−エラスターゼを添加することにより損
傷させることができる。これは本発明による製剤を同時
添加することにより阻止することができる。
るためには、エラスチン分の豊富な組織、例えば腱を器
官浴内でＰＭＮ−エラスターゼを添加することにより損
傷させることができる。これは本発明による製剤を同時
添加することにより阻止することができる。
【００１６】
【実施例】次に図示の実施例により本発明を詳細に説明
する。
する。
【００１７】例１ダイズから消炎性蛋白分画の製造 乾燥したダイズ１００ｇを粉砕し、２回オクタンそれぞ
れ３００ｍｌと一緒にそれぞれ３時間撹拌し、吸引濾過
器を通して濾過し、徹底的に絞り出しかつこのようにし
て脱脂した材料を真空下で乾燥した。乾燥した材料を脱
塩したかつ静菌剤フェノニップ（Phenonip(R)）０．５
％を含有する水１．３５ｌ中に懸濁させ、該懸濁液のｐ
Ｈ値を塩酸で２．５〜３に調整し、該混合物を２０℃で
２時間撹拌し、引き続き遠心分離した。乳光を発する上
澄みをｐＨ５．２に調整し、真空中で４０〜５０℃で２
００ｍｌに濃縮し、硫酸アンモニウム飽和溶液４００ｍ
ｌを加えかつ室温で１５時間放置した。蛋白析出物を遠
心分離により分離し、フェノニップ水溶液（０．５％）
１００ｍｌ中に懸濁させ、一晩フェノニップ水２ｌに対
して透析し、アスベスト不含の濾過層を通して濾過する
ことにより析出した物質を除去し、最後に凍結乾燥し
た。ポリアクリルアミド電気泳動でドデシル硫酸ナトリ
ウムの存在下に４つのバンドを有し、その電気泳動移動
度から相対分子量３０００〜３００００ｇ／ｍｏｌであ
ることが推論された蛋白分画が得られた。得られた蛋白
分画は、それぞれ蛋白含量に対して、全窒素の含量１
５．２％及びアミノ窒素の含量１４％を有し、水及び電
解質水溶液中で可溶性であり、エタノール及びアセトン
中で不溶性であり、水溶液中でトリクロル酢酸、スルホ
サリシル酸、ピクリン酸又は塩化ベンゼトニウムを添加
した後に強度の析出を呈し、かつトリプセンで測定して
Ｉ50値＝３μｇ（乾燥物質に対して）／ｍｌ試験混合
物、ＰＭＮ−エラスターゼで測定して、Ｉ50値＝６８μ
ｇ（乾燥物質に対して）／ｍｌを示した。得られた蛋白
分画を、０．７５％の濃度で化粧用ローションに加工
し、ヒトのプロバンドの皮膚に適用し、水和、鎮痒、炎
症抑制、及び皮膚弾性を高める作用を及ぼした 例２リママメからの消炎性蛋白分画の製造 乾燥したリママメ(Phaseolus lunatus)１００ｇを粉砕
し、エタノール（９５％）５００ｍｌと一緒に１時間撹
拌し、吸引濾過し、湿潤した残留物を２回酢酸（１Ｎ）
それぞれ５００ｍｌと一緒にそれぞれ１時間撹拌し、か
つ新たに吸引濾過した。合した酢酸抽出物を真空中で１
００ｍｌに濃縮し、エタノール５０容量％を加え、析出
したポリサッカリドを濾過により除去し、濾液から活性
蛋白をエタノール濃度を８０％に上昇させることにより
析出させ、吸引濾過器上に集めかつ真空中で乾燥した。
ポリアクリルアミド電気泳動でドデシル硫酸ナトリウム
のの存在下に５つのバンドを有し、その電気泳動移動度
から相対分子量３０００〜３００００ｇ／ｍｏｌである
ことが推論された蛋白分画が得られた。得られた蛋白分
画は、それぞれ蛋白含量に対して、全窒素の含量１４．
９％及びアミノ窒素の含量１．３％を有し、水及び電解
質水溶液中で可溶性であり、エタノール及びアセトン中
で不溶性であり、水溶液中でトリクロル酢酸、スルホサ
リシル酸、ピクリン酸又は塩化ベンゼトニウムを添加し
た後に強度の析出を呈し、かつトリプセンで測定してＩ
50値＝５μｇ（乾燥物質に対して）／ｍｌ試験混合物、
ＰＭＮエラスターゼで測定して、Ｉ50値＝８９μｇ（乾
燥物質に対して）／ｍｌを示した。得られた蛋白分画
を、１．５％の濃度で化粧用ローションに加工し、ヒト
のプロバンドの皮膚に適用し、水和、鎮痒、炎症抑制、
及び皮膚弾性を高める作用を及ぼした。
れ３００ｍｌと一緒にそれぞれ３時間撹拌し、吸引濾過
器を通して濾過し、徹底的に絞り出しかつこのようにし
て脱脂した材料を真空下で乾燥した。乾燥した材料を脱
塩したかつ静菌剤フェノニップ（Phenonip(R)）０．５
％を含有する水１．３５ｌ中に懸濁させ、該懸濁液のｐ
Ｈ値を塩酸で２．５〜３に調整し、該混合物を２０℃で
２時間撹拌し、引き続き遠心分離した。乳光を発する上
澄みをｐＨ５．２に調整し、真空中で４０〜５０℃で２
００ｍｌに濃縮し、硫酸アンモニウム飽和溶液４００ｍ
ｌを加えかつ室温で１５時間放置した。蛋白析出物を遠
心分離により分離し、フェノニップ水溶液（０．５％）
１００ｍｌ中に懸濁させ、一晩フェノニップ水２ｌに対
して透析し、アスベスト不含の濾過層を通して濾過する
ことにより析出した物質を除去し、最後に凍結乾燥し
た。ポリアクリルアミド電気泳動でドデシル硫酸ナトリ
ウムの存在下に４つのバンドを有し、その電気泳動移動
度から相対分子量３０００〜３００００ｇ／ｍｏｌであ
ることが推論された蛋白分画が得られた。得られた蛋白
分画は、それぞれ蛋白含量に対して、全窒素の含量１
５．２％及びアミノ窒素の含量１４％を有し、水及び電
解質水溶液中で可溶性であり、エタノール及びアセトン
中で不溶性であり、水溶液中でトリクロル酢酸、スルホ
サリシル酸、ピクリン酸又は塩化ベンゼトニウムを添加
した後に強度の析出を呈し、かつトリプセンで測定して
Ｉ50値＝３μｇ（乾燥物質に対して）／ｍｌ試験混合
物、ＰＭＮ−エラスターゼで測定して、Ｉ50値＝６８μ
ｇ（乾燥物質に対して）／ｍｌを示した。得られた蛋白
分画を、０．７５％の濃度で化粧用ローションに加工
し、ヒトのプロバンドの皮膚に適用し、水和、鎮痒、炎
症抑制、及び皮膚弾性を高める作用を及ぼした 例２リママメからの消炎性蛋白分画の製造 乾燥したリママメ(Phaseolus lunatus)１００ｇを粉砕
し、エタノール（９５％）５００ｍｌと一緒に１時間撹
拌し、吸引濾過し、湿潤した残留物を２回酢酸（１Ｎ）
それぞれ５００ｍｌと一緒にそれぞれ１時間撹拌し、か
つ新たに吸引濾過した。合した酢酸抽出物を真空中で１
００ｍｌに濃縮し、エタノール５０容量％を加え、析出
したポリサッカリドを濾過により除去し、濾液から活性
蛋白をエタノール濃度を８０％に上昇させることにより
析出させ、吸引濾過器上に集めかつ真空中で乾燥した。
ポリアクリルアミド電気泳動でドデシル硫酸ナトリウム
のの存在下に５つのバンドを有し、その電気泳動移動度
から相対分子量３０００〜３００００ｇ／ｍｏｌである
ことが推論された蛋白分画が得られた。得られた蛋白分
画は、それぞれ蛋白含量に対して、全窒素の含量１４．
９％及びアミノ窒素の含量１．３％を有し、水及び電解
質水溶液中で可溶性であり、エタノール及びアセトン中
で不溶性であり、水溶液中でトリクロル酢酸、スルホサ
リシル酸、ピクリン酸又は塩化ベンゼトニウムを添加し
た後に強度の析出を呈し、かつトリプセンで測定してＩ
50値＝５μｇ（乾燥物質に対して）／ｍｌ試験混合物、
ＰＭＮエラスターゼで測定して、Ｉ50値＝８９μｇ（乾
燥物質に対して）／ｍｌを示した。得られた蛋白分画
を、１．５％の濃度で化粧用ローションに加工し、ヒト
のプロバンドの皮膚に適用し、水和、鎮痒、炎症抑制、
及び皮膚弾性を高める作用を及ぼした。
【００１８】例３安定な有効物質濃縮物の製造 プロピレングリコール２０ｇ、ツイーン(Tween)80 ２ｇ
及びメチル−ｐ−オキシベンゾエート０．２ｇを蒸留水
６０ｍｌ中に７０℃で溶かした。３０℃に冷却した後
に、この溶液に例１に基づき製造した蛋白分画７．５ｇ
を溶かし、ｐＨ値を７に調整しかつ容量を蒸留水で１０
０ｍｌに補充した。
及びメチル−ｐ−オキシベンゾエート０．２ｇを蒸留水
６０ｍｌ中に７０℃で溶かした。３０℃に冷却した後
に、この溶液に例１に基づき製造した蛋白分画７．５ｇ
を溶かし、ｐＨ値を７に調整しかつ容量を蒸留水で１０
０ｍｌに補充した。
【００１９】例４ダイズ蛋白分画の消炎作用の測定 市販のスキンケヤ用の、有効物質不含の乳液“Excipial
U Lotio”(Spirig AG, Egerkingen, CH）９容量部に、
蒸留水(プラシーボー)並びに例１に基づき製造した、蒸
留水１００ｍｌ当たり７５ｍｇの濃度で予め溶解した試
料それぞれ１容量部を加えかつ均質化した。２人のプロ
バンドで、前腕の４カ所にパッチテスト−フラスターに
施したそれぞれ１５０μｇで刺激した。その後、刺激し
た皮膚領域のそれぞれ２カ所をプラシーボー乳液及び試
料で処理した。皮膚赤度合いをクロマメータを用いて総
計９０分間で、それぞれ５分間測定した。測定しかつ確
認した吸光度の曲線は、第１表に示されており、かつ試
料に関してプラシーボーに比較して著しく低い発赤度を
示し、該発赤はまた急速に再び正常に鎮静する。
U Lotio”(Spirig AG, Egerkingen, CH）９容量部に、
蒸留水(プラシーボー)並びに例１に基づき製造した、蒸
留水１００ｍｌ当たり７５ｍｇの濃度で予め溶解した試
料それぞれ１容量部を加えかつ均質化した。２人のプロ
バンドで、前腕の４カ所にパッチテスト−フラスターに
施したそれぞれ１５０μｇで刺激した。その後、刺激し
た皮膚領域のそれぞれ２カ所をプラシーボー乳液及び試
料で処理した。皮膚赤度合いをクロマメータを用いて総
計９０分間で、それぞれ５分間測定した。測定しかつ確
認した吸光度の曲線は、第１表に示されており、かつ試
料に関してプラシーボーに比較して著しく低い発赤度を
示し、該発赤はまた急速に再び正常に鎮静する。
【００２０】 第１表 時間 吸光度 吸光度 偏差（ｍｉｎ） プラシーボー 試 料 ５ ７．２０ ６．９０ ０．３０ １０ ６．９８ ６．８２ ０．１６ １５ ７．０４ ６．９３ ０．１１ ２０ ７．０６ ６．４７ ０．５９ ２５ ６．５５ ５．７１ ０．８４ ３０ ６．０３ ５．３９ ０．６４ ３５ ４．９１ ４．５６ ０．３５ ４０ ４．５８ ３．９９ ０．５６ ４５ ３．６５ ３．１０ ０．５５ ５０ ３．８２ ２．４７ ０．８１ ５５ ２．８５ ２．２２ ０．６３ ６０ ２．３８ １．８３ ０．５５ ６５ １．９６ １．４０ ０．５６ ７０ ２．１５ １．２９ ０．８６ ７５ １．７４ １．００ ０．７４ ８０ １．２５ ０．９３ ０．３２ ９０ １．２９ １．２９ ０ 例５リママメ蛋白分画のエラスターゼ抑制活性の測定 アルビミン含有緩衝液（ｐＨ値７．５）中のＭｅＯＳｕ
ｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−ｐＮＡの１ｍＭ
溶液５００μｌに、例２に基づき製造した蛋白分画の水
性希釈列の試料それぞれ１０μｌ及び蒸留水（対照）１
０μｌを加え、かつ３７℃で１５分間保温した、それぞ
れの試験バッチに、エラスターゼ（１００ｎＭ）それぞ
れ１００μｌを加え、記録するフォトメータでｐ−ニト
ロアニリン発生を４０５ｎｍで１０分間記録し、それか
ら１分間当たりの吸光度差（ＤＡ／ｍｉｎ）を求め、最
後に以下の方程式に基づきエラスターゼ抑制率（％）を
計算した：
ｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−ｐＮＡの１ｍＭ
溶液５００μｌに、例２に基づき製造した蛋白分画の水
性希釈列の試料それぞれ１０μｌ及び蒸留水（対照）１
０μｌを加え、かつ３７℃で１５分間保温した、それぞ
れの試験バッチに、エラスターゼ（１００ｎＭ）それぞ
れ１００μｌを加え、記録するフォトメータでｐ−ニト
ロアニリン発生を４０５ｎｍで１０分間記録し、それか
ら１分間当たりの吸光度差（ＤＡ／ｍｉｎ）を求め、最
後に以下の方程式に基づきエラスターゼ抑制率（％）を
計算した：
【００２１】
【数１】
【００２２】グラフにした用量作用曲線から、該蛋白分
画についてＩ50値（ＰＭＮエラスターゼ）＝８９ｍｇ／
ｌが得られた。
画についてＩ50値（ＰＭＮエラスターゼ）＝８９ｍｇ／
ｌが得られた。
【００２３】例６ダイズからの消炎性蛋白分画のトリプシン抑制活性の測
定 トリプシン溶液（３０Ｅ／ｍｌ）０．１００ｍｌに、例
１に基づき製造した蛋白分画の水性希釈列からの試料そ
れぞれ１０μｌ及び蒸留水（対照）０．１００ｍｌを加
え、室温で１分間放置した。それぞれの試験バッチに、
３７℃でトリス−イミダゾ−ル緩衝液（ｐＨ８．４）
１．７ｍｌ及びＢｚ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ｐＮＡ
の４ｍＭ溶液０．１００ｍｌを添加し、記録フォトメー
タでｐ−ニトロアニリン発生を４０５ｎｍで１０分間記
録し、それから１分間当たりの吸光度差（ＤＡ／ｍｉ
ｎ）を求め、最後に以下の方程式に基づきトリプシン抑
制率（％）を計算した：
定 トリプシン溶液（３０Ｅ／ｍｌ）０．１００ｍｌに、例
１に基づき製造した蛋白分画の水性希釈列からの試料そ
れぞれ１０μｌ及び蒸留水（対照）０．１００ｍｌを加
え、室温で１分間放置した。それぞれの試験バッチに、
３７℃でトリス−イミダゾ−ル緩衝液（ｐＨ８．４）
１．７ｍｌ及びＢｚ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ｐＮＡ
の４ｍＭ溶液０．１００ｍｌを添加し、記録フォトメー
タでｐ−ニトロアニリン発生を４０５ｎｍで１０分間記
録し、それから１分間当たりの吸光度差（ＤＡ／ｍｉ
ｎ）を求め、最後に以下の方程式に基づきトリプシン抑
制率（％）を計算した：
【００２４】
【数２】
【００２５】グラフにした用量作用曲線から、該蛋白分
画についてＩ50値（ＰＭＮエラスターゼ）＝３ｍｇ／ｌ
が得られた。
画についてＩ50値（ＰＭＮエラスターゼ）＝３ｍｇ／ｌ
が得られた。
【００２６】例７ダイズからの消炎性蛋白分画のトリプシン抑制活性の測
定 種々の容量部の例３に基づき製造した安定な有効物質製
剤を含有するトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．６）１０００μ
ｌに緩衝液中に溶かしたヘパリン（ｃ＝１０ｍｇ／ｍ
ｌ）１２５μｌ並びにＴｏｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ
−ｐＮＡ（１．５ｍＭ）１２５μｌをピペットで加え
た。それぞれの試験物質に、肺からのヒトのトリプター
ゼ（ｃ＝２８Ｕ／ｍｌ）１２５μｌを加えかつ２５℃で
記録フォトメータでｐ−ニトロアニリン発生を３分間４
０５ｎｍで記録し、それから１分間当たりの吸光度差
（ＤＡ／ｍｉｎ）を求めかつ最後に以下の方程式に基づ
きトリプシン抑制率（％）を計算した：
定 種々の容量部の例３に基づき製造した安定な有効物質製
剤を含有するトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．６）１０００μ
ｌに緩衝液中に溶かしたヘパリン（ｃ＝１０ｍｇ／ｍ
ｌ）１２５μｌ並びにＴｏｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ
−ｐＮＡ（１．５ｍＭ）１２５μｌをピペットで加え
た。それぞれの試験物質に、肺からのヒトのトリプター
ゼ（ｃ＝２８Ｕ／ｍｌ）１２５μｌを加えかつ２５℃で
記録フォトメータでｐ−ニトロアニリン発生を３分間４
０５ｎｍで記録し、それから１分間当たりの吸光度差
（ＤＡ／ｍｉｎ）を求めかつ最後に以下の方程式に基づ
きトリプシン抑制率（％）を計算した：
【００２７】
【数３】
【００２８】グラフにした用量作用曲線から、有効物質
濃縮物についてＩ50値（ＰＭＮエラスターゼ）＝１６０
ｍｇ／ｌが得られた。
濃縮物についてＩ50値（ＰＭＮエラスターゼ）＝１６０
ｍｇ／ｌが得られた。
【００２９】例８生体外試験系での消炎性蛋白分画の作用 種族ＮＭＲＩのハツカネズミの尾から単離した腱を、室
温でチローデ溶液０．５ｍｌを含有する器官浴内にｐＨ
７．４で固定した。該腱を糸でレバーアームに結び付け
た。該レバーアームは、腱の長さを電気信号に変え、該
信号を増幅しかつポテンシオメータ記録器で記録する。
２０分間の前保温後に、チローデ溶液を、一方ではＰＭ
Ｎエラスターゼ３８μｇ（対照溶液）、他方ではＰＭＮ
−エラスターゼ３８μｇ並びに例３に基づき製造した有
効物質溶液１００μｌ／ｍｌ（試験溶液）を含有する適
当な容量のチローデ溶液と交換した。対照溶液の場合に
は、腱の連続的伸張が記録され、該腱は引き続き１３２
分後に引き裂けた。それに対して、試験溶液では腱長さ
の伸張は観察されなかった。
温でチローデ溶液０．５ｍｌを含有する器官浴内にｐＨ
７．４で固定した。該腱を糸でレバーアームに結び付け
た。該レバーアームは、腱の長さを電気信号に変え、該
信号を増幅しかつポテンシオメータ記録器で記録する。
２０分間の前保温後に、チローデ溶液を、一方ではＰＭ
Ｎエラスターゼ３８μｇ（対照溶液）、他方ではＰＭＮ
−エラスターゼ３８μｇ並びに例３に基づき製造した有
効物質溶液１００μｌ／ｍｌ（試験溶液）を含有する適
当な容量のチローデ溶液と交換した。対照溶液の場合に
は、腱の連続的伸張が記録され、該腱は引き続き１３２
分後に引き裂けた。それに対して、試験溶液では腱長さ
の伸張は観察されなかった。
【００３０】例９線維芽細胞培養における消炎性蛋白分画のエラスターゼ
抑制作用の測定 １７５ｃｍ2当たり細胞１０8を有するスイス３Ｔ３マウ
ス線維芽細胞を、トリトンＸ−１００ １％を含有する
５０ｍＭトリス−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）１０ｍｌで４℃
で３０分間溶解した。細胞壁を遠心分離機を用いて５０
００Ｇ及び０℃で分離した。リゼイト５００μｌに、例
３に基づき製造した種々の濃度の有効物質濃縮物５００
μｌ及びＭｅＯＳｕｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｖａ
ｌ−ｐＮＡの溶液３４μｌを加えかつｐ−ニトロアニリ
ン発生を記録フォトメータで４０５ｎｍで２時間記録
し、それから１分間当たりの吸光度差（ＤＡ／ｍｉｎ）
を求め、最後に以下の方程式に基づきトリプシン抑制率
（％）を計算した：
抑制作用の測定 １７５ｃｍ2当たり細胞１０8を有するスイス３Ｔ３マウ
ス線維芽細胞を、トリトンＸ−１００ １％を含有する
５０ｍＭトリス−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）１０ｍｌで４℃
で３０分間溶解した。細胞壁を遠心分離機を用いて５０
００Ｇ及び０℃で分離した。リゼイト５００μｌに、例
３に基づき製造した種々の濃度の有効物質濃縮物５００
μｌ及びＭｅＯＳｕｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｖａ
ｌ−ｐＮＡの溶液３４μｌを加えかつｐ−ニトロアニリ
ン発生を記録フォトメータで４０５ｎｍで２時間記録
し、それから１分間当たりの吸光度差（ＤＡ／ｍｉｎ）
を求め、最後に以下の方程式に基づきトリプシン抑制率
（％）を計算した：
【００３１】
【数４】
【００３２】グラフにした用量作用曲線から、該有効物
質濃縮物に関してＩ50値（線維芽細胞−エラスターゼ）
＝２８０ｍｇ／ｌが得られた。
質濃縮物に関してＩ50値（線維芽細胞−エラスターゼ）
＝２８０ｍｇ／ｌが得られた。
【００３３】例１０ 化粧クリーム（水中油型乳液）の製造 例３に基づく有効物質濃縮物 １０．０ｇ、 ポリソルバート６０ ３．０ｇ、 ステアリン酸ソルビタン ２．０ｇ、 セチルアルコール ３．０ｇ、 ステアリン酸 ６．０ｇ、 イソプロピルミリステート １０．０ｇ、 カプリル−カプリン酸−トリグリセリド ５．０ｇ、 フェノニップ（Phenonip(R)） ０．５ｇ、 脱イオン水 ５６．２ｇ、 プロピレングリコール ４．０ｇ、 イミダゾリニジル尿素 ０．３ｇ。
【００３４】有効物質濃縮物以外の全ての成分を、７０
℃で激しく混合しながら混合し、冷却し、その後有効物
質濃縮物を配合した。
℃で激しく混合しながら混合し、冷却し、その後有効物
質濃縮物を配合した。
【００３５】例１１ 炎症性皮膚病を治療するためのローションの製造 例３に基づく有効物質濃縮物 ５．０ｇ， ステアリルアルコール １．０ｇ、 セテアレート６ １．０ｇ、 セテアリルアルコール ７．０ｇ、 鉱油 ８．０ｇ、 セチルアルコール １．０ｇ、 グリセリルステアレート ２．５ｇ、 フェノニップ(R) ０．３ｇ、 脱イオン水 ７２．０ｇ、 プロピレングリコール ２．０ｇ、 イミダゾリニジル尿素 ０．２ｇ。
【００３６】有効物質濃縮物以外の全ての成分を、７０
℃で激しく撹拌しながら混合し、冷却し、その後有効物
質濃縮物を配合した。
℃で激しく撹拌しながら混合し、冷却し、その後有効物
質濃縮物を配合した。
【００３７】例１２ スキンケヤゲルの製造 例３に基づく有効物質濃縮物 ５．０ｇ， 脱イオン水 ８８．５ｇ、 フェノニップ(R) ０．３ｇ、 イミダゾリニジル尿素 ０．２ｇ、 プロピレングリコール ５．０ｇ、 セルロースゴム １．０ｇ， 全ての成分を脱イオン水中に４０℃で撹拌下に溶解し
た。
た。
【００３８】例１３ダイズ蛋白分画の皮膚の水分含量に対する作用 ５人のプロバンドで、７日間の試験期間中５日間、例３
に基づく有効物質濃縮物それぞれ６０μｌを左の前腕の
内側の２０ｃｍ2の皮膚に塗った。それぞれ処理しなか
った右腕を対照として利用した。適用して２時間後に皮
膚の水分（コルネオ（Corneo）単位（ＣＵ）で表す）で
測定し、かつ測定データから皮膚の水分含量の上昇率を
出発値に対するパーセントで計算した。結果は第２表に
５人のプロバンドの平均値として示す。
に基づく有効物質濃縮物それぞれ６０μｌを左の前腕の
内側の２０ｃｍ2の皮膚に塗った。それぞれ処理しなか
った右腕を対照として利用した。適用して２時間後に皮
膚の水分（コルネオ（Corneo）単位（ＣＵ）で表す）で
測定し、かつ測定データから皮膚の水分含量の上昇率を
出発値に対するパーセントで計算した。結果は第２表に
５人のプロバンドの平均値として示す。
【００３９】 第２表 日 コルネオ単位 上昇率（％） 試料 対照 試料 対照 １ ６１．４ ５９．３３ ０ ０ ３ ８２．４ ６３．６ ３４．２ ７．２ ４ ８８．８ ６７ ４４．６ １２．９ ５ ８９．２ ６４．８ ４５．３ ９．２ ６ ８８ ６０．２ ４３．３ １．５ ７ ８５ ６２．４ ３８．４ ５．２ 例１４ダイズ蛋白分画の皮膚の弾性に対する作用 ５人のプロバンドに１日２回例３に基づく有効物質濃縮
物６０μｌを左の目尻に塗った。処理しなかった右の目
尻をそれぞれ対照として利用した。開始前と、処理して
１４日後に、負圧下にある有溝ゾンデ内への皮膚の侵入
深さ並びに常圧可での皮膚の復元を測定することによ
り、皮膚の弾性を判定した。５回連続して負荷しかつ再
び放圧した皮膚の侵入深さの差（＝ｄｓ）が、該皮膚の
弾性の尺度である。差が小さければ小さいほど、ますま
す弾性は大きい。結果は第２表に５人のプロバンドの平
均値として示す。
物６０μｌを左の目尻に塗った。処理しなかった右の目
尻をそれぞれ対照として利用した。開始前と、処理して
１４日後に、負圧下にある有溝ゾンデ内への皮膚の侵入
深さ並びに常圧可での皮膚の復元を測定することによ
り、皮膚の弾性を判定した。５回連続して負荷しかつ再
び放圧した皮膚の侵入深さの差（＝ｄｓ）が、該皮膚の
弾性の尺度である。差が小さければ小さいほど、ますま
す弾性は大きい。結果は第２表に５人のプロバンドの平
均値として示す。
【００４０】 第３表 左ｄｓ 右ｄｓ （試料） （対照） 処理前 ０．０６７ｍｍ ０．０５７ｍｍ 処理後 ０．０４２ｍｍ ０．０５８ｍｍ
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＤＡ 8314−4Ｃ Ｃ０７Ｋ 3/02 7731−4Ｈ 3/24 7731−4Ｈ
Claims (7)
- 【請求項１】 少なくとも１種の蛋白を含有する蛋白分
画において、 ａ）マメ科植物の種子から単離され、 ｂ）ドデシル硫酸ナトリムを有するポリアクリルアミド
ゲル電気泳動で少なくとも１つのバンド、 ｃ）分子量３０００〜３００００ｇ／ｍｏｌ、 ｄ）蛋白含量に対する、全窒素の含量１４％〜２０％及
びアミノ窒素の含量１％〜２％を有し、 ｅ）水及び電解質水溶液中で可溶性、及びエタノール及
びアセトン中で不溶性であり、 ｆ）トリクロル酢酸、スルホサルシル酸、ピクリン酸又
は塩化ベンゼトニウムの添加後に水溶液中で激しく析出
し、かつ ｇ）プロテイナーゼを抑制することを特徴とする蛋白分
画。 - 【請求項２】 マメ科植物の種子がダイズ又はリママメ
である、請求項１記載の蛋白分画。 - 【請求項３】 請求項１又は２記載の蛋白分画を単離す
る方法において、 ａ）乾燥した種子を粉砕し、 ｂ）得られた粉を有機溶剤又は溶剤混合物で抽出するこ
とにより脱脂し、 ｃ）該粉を水及び電解質水溶液でｐＨ２〜１０で抽出
し、 ｄ）抽出物をｐＨ５〜７で濃縮しかつ該濃縮物を濾過又
は遠心分離し、 ｅ）該分離液中に存在する蛋白を沈殿により分離し、か
つ ｆ）濾過又は遠心分離し、引き続き乾燥又は凍結乾燥す
ることを特徴とする、蛋白分画の単離法。 - 【請求項４】 請求項１又は２記載の蛋白分画、有効物
質濃縮物の重量に対して１〜１５重量％及び少なくとも
１種の水溶性防腐剤及び／又は少なくとも１種の多価ア
ルコール及び／又は非イオン性又は両性界面活性剤を含
有することを特徴とする、安定な水性有効物質濃縮物。 - 【請求項５】 水溶性防腐剤としてメチル−ｐ−オキシ
ベンゾエート、多価アルコールとしてプロピレングリコ
ール及び界面活性剤としてポリソルバート８０及び／又
はオクトキシノール及び／又はココアンポグリシネート
を含有する請求項４記載の有効物質濃縮物。 - 【請求項６】 請求項１又は２記載の蛋白分画を、製剤
の全重量に対して０．０１〜５重量％の量で含有する、
皮膚手入れ及び／又は炎症性皮膚病の治療用製剤。 - 【請求項７】 請求項１又は２記載の蛋白分画を、９０
重量％以下の量で含有する、皮膚浸透性適用のためのプ
ラスターに施された製剤。
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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| CH270591 | 1991-09-13 | ||
| CH02705/91-7 | 1991-09-13 |
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- 1992-09-11 JP JP24322692A patent/JP3333243B2/ja not_active Expired - Lifetime
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