JP2001513815A

JP2001513815A - 最低１種のレチノイドを含有する製薬学的もしくは化粧用組成物

Info

Publication number: JP2001513815A
Application number: JP53830998A
Authority: JP
Inventors: リース，ゲルト; カステリ，ドミニク
Original assignee: アールオーシー
Priority date: 1997-03-07
Filing date: 1998-03-05
Publication date: 2001-09-04
Also published as: AU6225698A; CO4980848A1; KR20000076021A; BR9808216B1; FR2760365A1; EP0967968B1; BR9808216A; EP0967968A1; AR011941A1; FR2760365B1; WO1998038980A1; CA2283151A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、それが、最低１種のレチノイドの、２から６個までの単糖残基を含みかつ非還元末端位置にガラクトースを有する最低１種のオリゴ糖もしくは疎水性残基で置換されたこうしたオリゴ糖の誘導体との組み合わせ剤、および製薬学的にもしくは化粧上許容できる賦形剤を含有することを特徴とする、製薬学的もしくは化粧用組成物に関する。本発明は、老化に関連する皮膚および外骨格の変化を予防および／もしくは治療するよう設計された組成物の製造のためのこうした組み合わせ剤の使用、ならびにこれらの組み合わせ剤を使用する化粧的治療方法にもまた関する。

Description

【発明の詳細な説明】最低１種のレチノイドを含有する製薬学的もしくは化粧用組成物本発明は、皮膚の外見を向上させかつ皮膚の老化の影響と戦うよう設計された製薬学的もしくは美容術上の組成物に関する。皮膚は３区画、すなわち、外側層および角質層を包含する表皮、真皮、ならびにより深部の皮下組織から構成される。交換が、これらの多様な真皮と表皮の区画との間に存在し、これは細胞の再生、密着および外側層の水分補給を確実にすることを意図される。老化は成長の期間の後に続く生理学的現象であることが既知である。それはとりわけ皮膚の薄化および弾性の喪失により表わされ、深いもしくは微細なしわの出現につながり；表面の乾燥もまた存在し、かつ、無秩序な色素沈着が観察されうる。全部のこれらの兆候は表皮、表皮接合部および真皮の変化を表わす。真皮は線維芽細胞の生合成作用から生じ、これは細胞外マトリックスの構成要素を発生させ；後者は、巨大分子の４種の大きな族、すなわちコラーゲン、エラスチン、構造糖タンパク質およびプロテオグリカンから形成される。コラーゲンは真皮の最も重要な構造タンパク質である。なぜならそれは真皮の乾燥重量の70％に相当するからである。異なった、遺伝子的に別個の型のコラーゲンが存在する。主要なコラーゲンのなかで、タイプＩコラーゲンは結合組織中で遭遇され、そして骨および象牙質中のコラーゲンの全部に相当し；タイプIII コラーゲンは大部分の結合組織中でタイプＩコラーゲンを伴うが、しかし骨もしくは鍵中では見出されない。従って、それは表皮下結合組織のマーカーである。多くの有効成分が、老化の影響を予防するかもしくは遅延させるために提案されている。レチノイド、およびとりわけレチノールが、皮膚の外見および状態を高めそして老化の兆候と戦うのに好都合な効果を有することが示されている。発明者は、今や、別の分類の化合物とのレチノイドの組み合わせ剤が、皮膚を良好な状態に維持しそしてその外見を向上させるという活性を強化することを可能にすることを見出した。従って、本発明の主題は、最低１種のレチノイドと、２から６個までの単糖残基を含みかつ非還元末端位置にガラクトースを有する最低１種のオリゴ糖もしくは疎水性残基で置換されたこうしたオリゴ糖の誘導体との組み合わせ剤を含有することを特徴とする製薬学的もしくは美容術上の組成物である。好ましくは、オリゴ糖は、メリビオース、乳糖および疎水性残基の付加により得られうるそれらの誘導体から成る群から選ばれる。疎水性置換基という用語は、とりわけ直鎖もしくは分枝状のＣ₁−Ｃ₁₈アルキル、Ｃ₁−Ｃ₁₈アルキルアミン、直鎖もしくは分枝状の場合によっては置換されるＣ₁−Ｃ₁₈カルボン酸、直鎖もしくは分枝状のＣ₁−Ｃ₁₈一級、二級もしくは三級アミド、およびＣ₁−Ｃ₁₈アリールアルキルを指すと理解される。本発明を実施するのに適するオリゴ糖誘導体は、とりわけ、上に挙げられた範疇の一に属することができ、ここでオリゴ糖は以下の一般式すなわちガラクトース−_n（αもしくはβ）−（Ｈｅｘ）_p ここで、ｎは位置１、２、３、４もしくは６を表わし、Ｈｅｘはα−もしくはβ−結合された五炭糖もしくは六炭糖を表わし、ｐは１と５との間の数であり；に対応し、ａ）−式すなわち・（Ｉ）オリゴ糖１−Ｏ−Ｒ、ここでＲは１ないし18個の炭素原子の直鎖もしくは分枝状のアルキル残基であり、・（II）オリゴ糖１−Ｏ−Ｒ−Ｏ−１−オリゴ糖、ここでＲ＝（ＣＨ₂）_m、ｍは２と10との間であり、に対応する配糖体、ｂ）−以下の式の一に従ったアシル化オシルアミンであって、ここでオリゴ糖は好ましくは乳糖、メリビオースもしくはスタキオースであり： −以下の式の一に対応するアシル化オシルアミン類：・（III）オリゴ糖１−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ、ここでＲは０、１もしくは２個の二重結合を含有する２ないし18個の炭素原子のアルキル残基であり、・（IV）オリゴ糖１−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ−ＣＯ−ＮＨ−１−オリゴ糖、ここでＲ＝（ＣＨ₂）_m、ｍは２と８との間であり、ｃ）−オリゴ糖の酸化により得られるアルドン酸でアシル化されたアルキルアミン・（Ｖ）オリゴ糖−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ、ここでＲは式（III）でと同一の意味を有し、・（VI）オリゴ糖ＣＯ−ＮＨ−Ｒ−ＮＨ−ＣＯ−オリゴ糖、ここでＲは式（III）でと同一の意味を有し、ｄ）−または、脂肪族モノもしくはジアミンとともにオリゴ糖により形成されかつ以下の式すなわち・（VII）Ｇａｌ−（Ｈｅｘ）_n−Ｘ−ＨＮ−Ｒ、・（VIII）Ｇａｌ−（Ｈｅｘ）_n−Ｘ−ＨＮ−Ｒ−ＮＨ−Ｘ−（ＨｅＸ）_n−Ｇａｌ、の一に対応するシッフ塩基の還元の生成物であって、ここで：Ｈｅｘは六炭糖もしくは五炭糖であり、ｎ＝０、１もしくは２、Ｘ＝１−ＮＨ₂−ヘキシトール、そしてＲは（III）でと同一の意味を有する。こうしたオリゴ糖は、とりわけ、エラスターゼの産生を改変することによる組織の老化の予防におけるそれらの使用についてＷＯ９５／０５１５５明細書に記述されている。本発明に関し、老化の影響と戦うための他の機構が強化されうることが示されている。とりわけ、線維芽細胞によるコラーゲンの合成がメリビオースにより増大されることが見出され；それはレチノールによってもまた増大され、そして、これらの活性の相乗効果が２種の分子の存在下で存在する。本発明の組成物中に入るレチノイドは、好ましくは、レチノイン酸もしくはトレチノイン、レチノール、レチンアルデヒド、それらの塩およびそれらのエステルから成る群から選ばれる。典型的な塩はアルカリ金属、アンモニウムおよびＣ₂ −Ｃ₃₀アンモニウム塩である。ナトリウム、カリウム、トリエタノールアンモニウムおよびアンモニウム塩がとりわけ好ましい。全部の上の化合物の組み合わせ剤が当該組成物中に存在してよい。加えて、「レチノール」および「レチノイン酸」という用語は、９−ｃｉｓ−レチノール、ジデヒドロレチノール、１３−ｃｉｓ−レチノイン酸、１３−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸およびジデヒドロレチノイン酸のような水素化および非水素化異性体を包含するとして理解されるべきである。本発明を実施するのにとりわけ適する組成物はレチノールおよびメリビオースの組み合わせ剤を包含する。それらはまた、外用の局所投与に適する賦形剤、とりわけ皮膚科的に許容できる賦形剤も含んで成る。本発明の別の態様に従えば、当該組成物は経口投与に適する賦形剤を含有する。当該処方に適する賦形剤は当業者に既知であり、そしてとりわけ増粘剤、乳化剤、保存剤、色素、香料などを含んで成る。当該組成物は、例えば、溶液、ゲル、ローション、クリーム、水中油、油中水もしくは多重乳濁液の形態、またはリポソームの形態にあってよい。当該組成物はまた、他の水分補給剤もしくは軟化剤も含有してよい。レチノイドおよびオリゴ糖、とりわけレチノールのメリビオースおよび／もしくは乳糖との組み合わせ剤の相乗的活性によって、本発明の組成物は、有効性および作用の速度に関して老化の主要な兆候に対する改良された効果を有する。第一の結果は当該組成物での治療の６週間後に得られることができ、そして深部で発揮される。これらの効果は、しわの数および／もしくは深さの減少、皮膚の引き締め(firming)ならびにより良好な水分補給を含んで成り；本発明の組成物はまた、肌色を一様にすることおよび／または年齢の痕(age marks)の出現を予防するもしくは減少させることもできる。本発明の組成物はしわおよび組織の緩み(slackening)と戦うのにとりわけ適することができる。それらは、皮膚を環境の攻撃、とりわけＵＶ、および汚染に対してもまた保護する。それらは一様にされた外見を与え、そして皮膚を他の化粧用およびメーキャップ製品を受容するよう準備する。本発明の組成物は、顔もしくは手で朝および／もしくはタ方に使用されるよう選ばれてよい。手の表皮では、それらは、色素沈着を改善しかつ加齢痕の出現と戦う、ならびにこの領域（年齢とともにたるんだようになる傾向を有する）の組織の硬さを増大させるのにとりわけ適切であることができる。本発明の組成物はまた、爪がもろくなることを予防することによりそれらが強化されることを可能にし、また、とりわけ条痕および／もしくは痕の出現と戦うことによりそれらの外見が向上されることを可能にする。本発明の組成物は目および唇の周囲の領域を治療するのにとりわけ適切である。この領域は非常に弱くかつしわおよび皮膚の緩みの出現を高度に受けやすい。本発明の組成物はこの敏感領域で非常に良好に耐えられ、ここでは、多様な成分の間の相乗効果によりそれらの抗老化活性が適用以降６週間から発揮されることができる。それらは目の下のしわの数および嚢(pocket)を目に見えて減少させることを可能にし；それらは目および口の周囲のとりわけ感受性の皮膚を引き締める。当該組成物はまた外骨格、およびとりわけ毛髪にも適用されてよい。有利には、レチノイド、とりわけレチノールの濃度は、当該組成物の総重量に関して約0.0001％より大きいもしくはこれと等しくかつ３％より小さい。それは、好ましくは0.001％と約１重量％との間、そしてなおより好ましくは約0.5％より小さいもしくはこれと等しい。メリビオースは約0.0001％と約５％との間の濃度で存在し；有利には、その濃度は、当該組成物の総重量に関して約0.001％より大きいもしくはこれと等しくかつ約２重量％より小さいもしくはこれと等しい、好ましくは約１％より小さいかもしくはこれと等しいことができる。別の局面によれば、本発明の主題は、皮膚の弾性を向上させ、そして／もしくは老化による皮膚の変化と戦うよう設計された組成物の製造のための、最低１種のレチノイドの、２から６個までの単糖残基を含みかつ非還元末端位置にガラクトースを眉する最低１種のオリゴ糖もしくは疎水性残基で置換されたこうしたオリゴ糖の誘導体との組み合わせ剤の使用である。より具体的には、本発明の皮膚化粧用組成物は、皮膚の粘弾性の特性を向上させそしてしわの形成を予防もしくは抑制するよう設計され、そして、これは、発明者が、レチノールが抗エラスターゼ活性（メリビオースの既知の効果を増強する）を保有することを立証したため、達成される。コラーゲン合成を刺激することにより、当該レチノール／メリビオース組み合わせ剤は、コラーゲン束(collagen bundle)のより良好な組織化を伴う当該束の稠密化(densification)に導く。真皮中への陥入による上皮の広がり(expansion)の形態での粘液性物質(mucous sabstance)の濃厚化もまた観察される。上述されたような組成物を適用することに存する、皮膚、粘膜もしくは外骨格、とりわけ顔および手の光老化および固有の老化の化粧的治療方法もまた本発明中に包含される。後に続く実施例は本発明のある局面を具体的に説明するよう設計される。実施例１：コラーゲンおよび線維芽細胞のｍＲＮＡの発現に対するレチノール、レチノイン酸、メリビオースもしくはレチノール−メリビオース組み合わせ剤の効果コラーゲン格子(collagen lattices)（真皮同等物）中で培養されたヒト真皮線維芽細胞の使用を基礎とするインビトロモデルを、レチノール、メリビオースおよびレチノール＋メリビオース組み合わせ剤の効果を評価するのに選択した。選択された検討レベルは、プロコラーゲンIII（下でコラーゲンIIIと称されるであろう）をコードするメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）のものであった。このｍＲＮＡを逆転写／熱感受性増幅の方法により検出した。この技術は、とりわけ、感受性およびこの効果の定量の可能性（半定量的）に関してＲＮＡを研究するための他の方法を上回る利点を有する。１−設備および方法試験系線維芽細胞培養培地（ＦＣＭ）は、ペニシリン（100IU/ml）、ストレプトマイシン（100μg/ml）、グルタミン（２mM）および炭酸水素ナトリウム（0.2％、ｖ／ｖ）を補充されたＭＥＭ／１９９（３／４、１／４；ｖ／ｖ）から構成した。試験系を洗浄するための溶液はリン酸緩衝生理的食塩水（ＰＢＳ）、すなわち８g/l塩化ナトリウム；1.15g/lリン酸水素ニナトリウム；0.2g/lリン酸水素−カリウム；0.2g/l塩化カリウム；0.1g/l塩化カルシウム；0.1g/l塩化マグネシウム；ｐＨ7.4であった。線維芽細胞を、34歳の女性で実施された乳房形成術から単離した。細胞は皮膚外植片を培養することにより得；それらを第７継代で使用した。線維芽細胞を、コラーゲンＩ（２mg/ml）、ＦＣＭ培地および５％（ｖ／ｖ）ＦＣＳを含有する溶液に懸濁した。懸濁液を６穴培養プレートのなかで分割し、そしてプレートを５％ＣＯ₂を含有する雰囲気中37℃においた。試験系は、96時間培養した後の線維芽細胞とともに収縮された(contracted)格子から成った。メリビオース（Ｍ）を0.01；0.1および１μg/ml（すなわち0.01、0.1および１ ppm）で試験した。レチノール（Ｒ）は10^-6、10^-5および10^-4％（すなわち0.01；0.1および１ppm ）で試験した。レチノイン酸（ＲＡ）は10^-6；10^-5および10^-4％（すなわち0.01；0.1および１ppm）で試験した。ＭおよびＲ生成物の組み合わせ剤をそれぞれ0.1ppm＋0.01ppmおよび0.1ppm＋0 .1ppmで試験した。メリビオースおよびレチノールをＭＣＦ培地に直接溶解した。レチノイン酸はＤＭＳＯに0.1％（ｗ／ｖ）で溶解し、そしてその後ＦＣＭ培地で希釈した。陽性対照として利用されるビタミンＣはＦＣＭ培地中１mMで試験した。コラーゲン格子を、５％ＣＯ₂を含有する雰囲気中37℃で試験生成物もしくは参照生成物とともに96時間インキュベーションした。全ＲＮＡを、インスタプール(Instapur)ＲＮＡキット（ユーロジェンテック(E urogentec)、バッチ１７）を使用して、コラーゲン格子中に包含された線維芽細胞から抽出かつ精製した。抽出されたＲＮＡの完全性および汚染するゲノムＤＮＡの非存在を、10μg/ml のＢＥＴを含有する１％（ｗ／ｖ）アガロースゲル上でのＲＮＡの分離により確かめた。ＲＮＡ調製物の濃度および純度をλ＝260nmおよび280nmでの分光側光法により測定した。ＯＤ260／ＯＤ280比は２より大きいことを必要とした。メッセンジャーＲＮＡを、500ngのランダムプライマー、0.5mMの各ｄＮＴＰ、 22Uのリボヌクレアーゼ阻害剤、酵素のための緩衝液および200UのＭｍＬＶ逆転写酵素（プロメガ(Promega)）を含有する全体積20μｌの反応混合物中での逆転写によりｃＤＮＡに転換した。この反応は42℃で１時間実施した。熱感受性増幅研究された各ｍＲＮＡについて、遺伝子をコードする配列に相補的な２種のオリゴヌクレオチド（いわゆる「プライマー」）を、以下の基準、すなわち −プライマーの大きさ、20ヌクレオチド、 −300と1000塩基対との間のプライマー間の距離、 −50％と80％との間の配列中の［グアニン＋シトシン］のパーセント、の関数(function)として選んだ。使用されたオリコヌクレオチドの特徴を以下の表に描写する。得られたｃＤＮＡの標的配列を、１mMのそれぞれのオリゴヌクレオチド（５’ →３’および３’→５’）、0.25mMの各ｎＮＴＰ、1.5mMの塩化マグネシウム、酵素のための緩衝液および0.1UのＴａｑポリメラーゼ（ユーロジェンテック(Eur ogentec)）を含有する20μｌの反応混合物中で増幅した。初期量のｃＤＮＡに比例する反応を可能にする周期の数を各ｃＤＮＡについて決定した。あるｃＤＮＡすなわちβ−アクチンのものを内部標準として各増幅に包含した。至適ハイブリダイゼーション温度および増幅された断片の大きさにより異なる２組のプライマーをβ−アクチンについて使用した。すなわち、これは、研究された多様な標的配列について正確な分離もしくは反応を可能にした。加えて、増幅を、各実験の連続(series)で、相補的対照として非逆転写物ＲＮＡおよびゲノムＤＮＡを用いて開始して同時に実施した。各増幅反応は全く同一に実施した。熱感受性増幅から得られた生成物（アンプリコン(amplicon)と称される）を、 10μg/mlのＢＥＴすなわちアンプリコンのための色素を含有する２％（ｗ／ｖ）アガロースゲル上での電気泳動により分離した。研究されたアンプリコンに対応するバンドの強度を、デンシラブ(Densylab)プログラムに結合された密度計スキャナーを使用して測定した。この結果を、バンド強度として、および標準品ｍＲＮＡから得られたアンプリコンのバンドの強度との間の比の形態でもまた表わした。２−結果標的ｍＲＮＡの発現を逆転写−熱感受性増幅の技術により研究した。いくつかの制御を、標的ｍＲＮＡの発現のレベルを比較しかつ（半）定量することが可能であるために各段階で実施した。これらの制御は、とりわけ以下、すなわち −抽出されたＲＮＡの質、 −ゲノムＤＮＡ汚染の非存在、 −プライマーの特異性、 −増幅反応の直線性、 −内部標準の包含であった。結果を標的ｍＲＮＡ／標準品ｍＲＮＡ比に関して表わした。係数1.5より大きな差異を有意とみなした。コラーゲンIII １mMで試験された、参照生成物（ビタミンＣ）の存在下で培養された線維芽細胞について観察された強度の比は、2.6という係数だけ対照のものより大きかった（表２）。 0.01ppmで試験された、メリビオース（Ｍ）の存在下で培養された線維芽細胞について観察された強度の比は、1.5という係数だけ対照のものより大きかった。他の試験濃度では、得られた強度比は対照のものと比較できた（表２）。 0.01および0.1ppmで試験された、レチノール（Ｒ）の存在下で培養された線維芽細胞について観察された強度比は、それぞれ1.5および1.9という係数だけ対照のものより大きかった（表２）。 0.01ppmで試験された、レチノイン酸（ＲＡ）の存在下で培養された線維芽細胞について観察された強度の比は、2.4という係数だけ対照のものより大きかった（表２）。 0.1ppm＋0.01ppmおよび0.1ppm＋0.1ppmで試験された、生成物Ｍ＋Ｒの存在下で培養された線維芽細胞について観察された強度比は、それぞれ3.4および2.7という係数だけ対照のものより大きかった（表２）。標的ｍＲＮＡ／標準品ｍＲＮＡの濃度測定の強度比の比較は、コラーゲン格子上で培養されたヒト真皮線維芽細胞によるコラーゲンIIIをコードするｍＲＮＡの発現に対するＭ、Ｒ、ＲＡおよびＭ＋Ｒ試験生成物の効果を立証する。当該試験生成物はコラーゲンIIIをコードするｍＲＮＡの発現を増大させる。この効果の強度は生成物に依存して変動した。最大の効果はＭ＋Ｒ生成物、次いでＲＡおよびＲ生成物で観察された。Ｍ、ＲＡおよびＭ＋Ｒ生成物は用量効果の関係を表わし；最も有意の効果は試験された最低濃度で観察された。実施例２：単独もしくはメリビオースと共同してのレチノールのヒト皮膚に対する効果正常ヒト皮膚に対する３種の化粧用クリームの効果を適用の28日後に分析する。これのため、器官培養により生存して保たれたヒト皮膚のモデルを使用する。１−設備および方法器官培養を以下の手順に従って実施する。第一段階で、皮膚断片（起源：形成手術）を、それら自身培養ウェル上に位置を定められる挿入物(inserts)中におく。３種の生成物を皮膚上に直接おく。培養培地（抗生物質、ＦＣＳ）をウェルの底部に添加し、１回の移動(passage)を多孔性メンブレン（0.45μm）を介する２区画間のゆっくりの拡散によりイ丁つ。この集成体(assembly)を28日間器官培養条件下で維持する。ウェル中の培養培地もまた週３回取り替える。３種のクリームを皮膚上で週３回取り替える。すなわち −クリーム１：レチノール −クリーム２：レチノール＋メリビオース −クリーム３：賦形剤未処理の皮膚を28日間生存して保つことが培養操作の対照を与える(allow)。１−１−上皮組織およびコラーゲンの研究ａ）上皮組織の分析 −ブアン(Bouin)液中での固定およびエオシン−ヘマルム(eosin-haem alum)を使用する染色を伴うパラフィン中への封入後の組織学的分析による。これは、 −粘液性物質中の層の数および角質層の厚さの算出を可能にする； −全サイトケラチンに対し生しられた抗体を使用する上皮分化の免疫組織化学的分析による。ｂ）コラーゲンの研究 −マッソン(Masson)緑色トリクローム染色で染色した後の組織学的分析による。 −タイプＩおよびIIIコラーゲンのゲル電気泳動分析。別の一連の皮膚を収集し、そしてコラーゲンをペプシンでの処理後に抽出する。β−メルカプトエタノールを使用する還元を伴うゲル電気泳動（7.5％アクリルアミドでのＳＤＳ−ＰＡＧＥ）が、他の皮膚タンパク質に関して、タイプＩおよびIIIの特定のコラーゲン鎖をそれらの分子量の機能として単離かつ定量することを可能にする（サイクス(Sykes)らの技術）。１−２−エクスビボで生存して保たれたヒト皮膚中での弾性線維の保護を研究することによる抗エラスターゼ活性の分析ヒト皮膚モデルを使用し、これに、多核白血球およびマクロファージからのエラスターゼによる弾性線維網状構造の破壊の実験手順を使用する。これのため、ヒト白血球エラスターゼ（ＨＬＥ）を週３回皮膚表面に添加し、抗エラスターゼの目的上有効成分を場合によっては含有するクリームを同時に週３回表皮上におく。 28日の培養の終了時に皮膚断片をブアン(Bouin)液中で固定し、そして弾性線維を（＋）−カテキンで染色することにより示す。弾性線維の保存を分析する。すなわち −組織学的に、 −弾性線維の表面の画像分析による定量により。２−結果２．１−組織学的および免疫組織化学的技術による上皮組織の研究ａ）上皮組織および角質層の厚さの組織学的分析 28日間エクスビボ培養した後の層の数を粘液性物質について、ならびに、角質層の厚さ（平均±ＳＤ）をヘマルム−エオシン(haemalum-eosin)（ＨＥ）で染色された組織学的薄片を使用して算出した。粘液性物質の層（真皮の広がり）の最小および最大数を計数した。ｂ）角質層に関する結果：クリーム１、２および３で処理された皮膚は角質層の厚さの有意の変化を示さない。粘液性物質に関する結果：クリーム１および２で処理された皮膚の場合には、クリーム３（賦形剤）に関しての上皮の広がりの形態の粘液性物質の濃厚化(thickening)の存在が示される。この広がりはクリーム番号２（レチノール＋メリビオース）についてより長い。ｃ）全サイトケラチンに対し生じられた抗体を使用する上皮分化の免疫組織化学的分析クリーム２で処理された皮膚で、本質的に同一の外見の標識の強度の増大（分化の改善を表わす）が８例のうち６個で観察される。２．２−コラーゲンの組織学的および生化学的分析ａ）組織学的分析（マッソン(Masson)トリクローム染色での染色）各クリームについて、コラーゲン束の標識の強度および組織化の光学顕微鏡による評価を比較上行う。以下が全例で観察される。すなわち −クリーム番号２＞クリーム番号１＞クリーム番号３。かように細胞間空隙を減少させるコラーゲン束の厚さおよびそれらの数の増大を伴う束の稠密化がクリーム番号２ではっきり観察され；この現象はとりわけ基底膜と接触する上部真皮(upper dermis)で見える。束の組織化でのこの改変(mod ification)がトリクローム染色での標識の強度の増大の原因である。束はまたより良好に組織化されるようでもある。ｂ）タイプＩおよびIIIコラーゲンのゲル電気泳動による分析ゲル電気泳動は、クリーム１および２で処理された皮膚についてのコラーゲンの合成の増大を立証することを可能にした。なぜなら、タイプＩおよびIIIコラーゲンに対応して示されるタンパク質バンドはクリーム３のものより大きな標識強度を有するからである。合成の増大はタイプIIIコラーゲンについてよりタイプＩコラーゲンについてより大きいようであることが注目されるべきである。クリーム３で処理された皮膚のコラーゲン（タイプＩおよびII）の量は正常皮膚のものと異ならない。２−３生存して保たれた皮膚でＨＬＥにより誘導される弾性線維の有害な変化の評価、および抗老化機能を有する３種のクリームでの処理後のそれらの保護の評価ａ）弾性線維の組織学的分析分析された６種の皮膚で、ＨＬＥを使用して弾性線維を破壊するという実験手順が、弾性線維網状構造の部分的分解が得られることを可能にした。この破壊は皮膚ごとに変動する。従って、弾性線維の保護パーセントの比較を、ＨＬＥで処理された生検とクリームで処理されたものとの間で実施することができる。２番目に、このパーセントの平均を６種の皮膚で得る。クリーム番号１で処理された皮膚については、半定量的に評価される保護は40 ％に等しい。クリーム番号２で処理された皮膚については、得られた保護は41.2 5％である。最後に、クリーム番号３で処理されたものについては、保護は０％であり；弾性線維の破壊はヒト白血球エラスターゼ単独で得られたものと同一である。ｂ）弾性線維の画像分析による定量真皮の弾性網状構造の定量分析を、４種の試験クリームの存在もしくは非存在下にＨＬＥ酵素で処理された皮膚上で実施した。（＋）−カテキンで染色される弾性線維により占有される真皮の面積のパーセントを測定した。分析された６例の平均で得られた結果は：である。クリーム１および２は、ヒト白血球エラスターゼによる破壊に対し真皮の弾性組織を保護することを可能にした。他方、保護はクリーム番号３で得られなかった。弾性線維の大きさの評価は、いくつかの領域で最長の（μm）弾性線維の平均を測定することを可能にする。クリーム１および２で処理された皮膚は、最長の線維について、対照皮膚に長さが類似の線維を有する。ＨＬＥでの処理後に、弾性線維について組織学的に観察された断片化された外見が画像分析により確認される。すなわち、弾性線維は36μmという最大長さを有し、この結果は対照皮膚のものと有意に異なる（ｐ＜0.05；スチューデント(S tudent)検定）。クリーム３で処理された皮膚は、弾性線維がヒト白血球エラスターゼにより誘導される断片化に対し保護されることを可能にしなかった。得られた長さは、実際、最長の線維についてせいぜい35μmである。実施例３：正常ヒト皮膚の薄片での抗エラスターゼ活性に対するレチノールおよびメリビオースの影響設備および方法８μm厚さの凍結薄片を形成手術で得られたサンプルから作成した。ヒト白血球エラスターゼ（10μg/mlのＨＬＥ）を、レチノールもしくはメリビオースとともにもしくは伴わずに室温かつ湿気の多い雰囲気中で皮膚薄片に２時間適用した。従って弾性線維は酵素の作用に直接さらされた。アセトン中での固定および70℃でのエタノール中での脱水後に、処理後に存続した弾性線維を（＋）−カテキンで染色した。弾性線維の半定量的評価を画像分析によっての定量により完了した。レチノールおよびメリビオースの抗エラスターゼ活性を、強力なエラスターゼ阻害剤ＰＭＳＦ（フッ化フェニルメチルスルホニル）のものと比較した。実験の結果を以下の表に突き合わせる。すなわちレチノールはかようにかなりの抗エラスターゼ活性を有する。この効果は用量依存性である。メリビオースもまた抗エラスターゼ活性を有するが、しかしこの効果は用量依存性でない。実施例４：本発明の組み合わせ剤を含有する組成物処方Ａ：Ｏ／Ｗ乳濁液％ −グリセロール 5 −ＥＤＴＡ二ナトリウム 0.2 −メチルパラベン／フェノキシエタノール／プロピルパラベン 1 −水 65.3 −ポリアクリルアミドおよびＣ_13-14イソパラフィンおよびラウレス(laureth)− ７ 2 −ジメチコン 2 −セテアリルアルコール 0.5 −シクロメチコン 1.5 −イソプロピルバルミテート 2 −ＢＨＦ 0.1 −トリＣ₁₄−Ｃ₁₅アルキルシトレート 4 −90°アルコール 6 −カフェイン 2 −メリビオース 0.5 −レチノール 0.3 −ブチレングリコール 2 −乳糖 4.5 −ステアリン酸 1.0 −水酸化ナトリウム 0.1 処方Ｂ：Ｏ／Ｗ乳濁液％ −水 67.473 −カーボマー 0.300 −グリセロール 5.000 −ＰＥＧ８ 2.000 −ＥＤＴＡ二ナトリウム 0.200 −水酸化ナトリウム 0.135 −水 1.000 −メリビオース 0.500 −乳糖 4.50 −フェノキシエタノール／メチルパラベン／プロピルパラベン 0.200 −グリセリルステアレート／ＰＥＧ１００ステアレート 5.000 −セテアリルオクタノエート／イソプロピルミリステート 3.000 −Ｃ_12-15アルキルベンゾエート 3.500 −グリセリルステアレート 3.000 −ステアリルアルコール 0.500 −セトステアリルアルコール 0.500 −セチルパルミテート 0.500 −タルク 0.200 −ＢＨＴ 0.100 −フェノキシエタノール／メチルパラベン／プロピルパラベン 0.800 −Ｃ_12-15アルキルベンゾエート 0.500 −レチノール 0.092 −ジメチコン 1.000 合計 100.- 処方Ｃ：Ｏ／Ｗ乳濁液％ −水 64.808 −カーボマー 0.100 −架橋アクリレート／架橋Ｃ₁₀−Ｃ₃₀アルキルアクリレートポリマー 0.500 −ポロキサマー(Poloxamer)４０７ 0.500 −グリセロール 5.000 −ポリグリセリルメタクリレート／水性プロピレングリコール 5.000 −ＥＤＴＡ二ナトリウム 0.200 −水酸化ナトリウム 0.200 −水 1.000 −メリビオース 0.500 −乳糖 4.50 −フェノキシエタノール／メチルパラベン／プロピルパラベン 0.200 −セテアリルオクタノエート／イソプロピルミリステート 5.000 −オクチルメトキシシンナメート 8.000 −ブチルメトキシジベンゾイルメタン 1.500 −タルク 1.000 −ＢＨＴ 0.100 −フェノキシエタノール／メチルパラベン／プロピルパラベン 0.800 −酢酸トコフェリル 0.500 −セテアリルオクタノエート／イソプロピルミリステート 0.500 −レチノール 0.092 合計 100.- 処方Ｄ：Ｏ／Ｗ乳濁液％ −キサンタンガム 0.100 −水 57.802 −グリセロール 3.000 −ＰＥＧ８ 5.000 −ＥＤＴＡ二ナトリウム 0.200 −乳糖 5.000 −ポリグリセリルメタクリレート／水性プロピレングリコール 5.000 −グリシン 0.200 −メリビオース 0.500 −尿素 2.000 −フェノキシエタノール／メチルパラベン／プロピルパラベン 0.200 −セテアリルアルコール、セテアリルグルコシド 5.000 −イソセチルステアレート 4.500 −トリオアクタノイン(trioactanoine) 2.000 −ジ（Ｃ₁₂−Ｃ₁₃）アルキルマレート 5.000 −ジメチコン 1.000 −シクロメチコン 2.000 −ＢＨＴ 0.100 −フェノキシエタノール／メチルパラベン／プロピルパラベン 0.800 −イソセチルステアレート 0.500 −レチノール 0.092 処方Ｅ：ゲル％ −グリセロール 5 −ＥＤＴＡ二ナトリウム 0.2 −メチルパラベン／フェノキシエタノール／プロピルパラベン 1 −水 66.4 −ポリアクリルアミドおよびＣ_13-14イソパラフィンおよびラウレス(laureth)− ７ 2 −ジメチコン 2 −セテアリルアルコール 0.5 −シクロメチコン 1.5 −イソプロピルバルミテート 2 −ＢＨＴ 0.1 −アルキルトリＣ₁₄−Ｃ₁₅シトレート 4 −90°アルコール 6 −カフェイン 2 −メリビオース 0.5 −レチノール 0.3 −ブチレングリコール 2 −乳糖 4.5 処方Ｆ：Ｏ／Ｗ乳濁液％ −グリセロール 5 −ＥＤＴＡ二ナトリウム 0.2 −メチルパラベン／フェノキシエタノール／プロピルパラベン 1 −水 65.4 −ポリアクリルアミドおよびＣ_13-14イソパラフィンおよびラウレス(laureth)− ７ 2 −ジメチコン 2 −セテアリルアルコール 0.5 −シクロメチコン 1.5 −イソプロピルバルミテート 2 −ＢＨＴ 0.1 −アルキルトリＣ₁₄−Ｃ₁₅シトレート 4 −90°アルコール 6 −カフェイン 2 −メリビオース 0.5 −レチノール 0.3 −ブチレングリコール 2 −乳糖 4.5 −ステアリン酸 1.0 −水酸化ナトリウム 0.1 −セテアリルアルコール／セテアリルグルコシド 1.0 処方Ｇ：Ｏ／Ｗ乳濁液％ −水 60.491 −カーボマー 0.300 −水 1.000 −水酸化ナトリウム 0.135 −コンドルスクリスプス(Chondrus crispus) 1.000 −ケイ酸アルミニウムマグネシウム 0.250 −ＥＤＴＡ二ナトリウム 0.200 −乳糖 4.000 −カオリン 1.000 −ＰＥＧ８ 1.000 −グリチルレチン酸 0.500 −メリビオース 1.00 −ソルビトール 2.000 −フェノキシエタノール／メチルパラベン／プロピルパラベン 0.200 −イソセチルステアレート 5.500 −セテアリルオクタノエート／イソプロピルミリステート 4.000 −ステアリン酸ソルビタン 4.080 −ＰＥＧ２０ステアレート 7.920 −セテアリルアルコール 2.000 −ＢＨＴ 0.100 −フェノキシエタノール／メチルパラベン／プロピルパラベン 0.800 −イソセチルステアレート 0.500 −レチノール 0.024 −アメリカマンサク(Hamamelis virginiana) 2.000

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ

Claims

【特許請求の範囲】１．最低１種のレチノイドと、２から６個までの単糖残基を含みかつ非還元末端位置にガラクトースを有する最低１種のオリゴ糖もしくは疎水性残基で置換されたこうしたオリゴ糖の誘導体との組み合わせ剤、および、製薬学的にもしくは美容術上許容できる賦形剤、を含有することを特徴とする、製薬学的もしくは美容術上の組成物。２．オリゴ糖が、以下の一般式すなわちガラクトース−_n（αもしくはβ）−（Ｈｅｘ）_p （Ａ）ここで、ｎは位置１、２、３、４もしくは６を表わし、Ｈｅｘはαもしくはβ結合にある五炭糖もしくは六炭糖を表わし、ｐは１と５との間の数であり、に対応すること、ならびに、オリゴ糖誘導体が、以下の範疇の化合物すなわちａ）−式すなわち・（Ｉ）オリゴ糖１−Ｏ−Ｒ、ここでＲは１ないし18個の炭素原子の直鎖もしくは分枝状のアルキル残基であり、・（II）オリゴ糖１−Ｏ−Ｒ−Ｏ−１−オリゴ糖、ここでＲ＝（ＣＨ₂）_m、ｍは２と10との間であり、に対応する配糖体、ｂ）−以下の式の一に従ったアシル化オシルアミンであって、ここでオリゴ糖は好ましくは乳糖、メリビオースもしくはスタキオースであり： −以下の式の一に対応するアシル化オシルアミン類：・（III）オリゴ糖１−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ、ここでＲは０、１もしくは２個の二重結合を含有する２ないし18個の炭素原子のアルキル残基であり、・（IV）オリゴ糖１−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ−ＣＯ−ＮＨ−１−オリゴ糖、ここでＲ＝（ＣＨ₂）_m、ｍは２と８との間であり、ｃ）−オリゴ糖の酸化により得られるアルドン酸でアシル化されたアルキルアミン・（Ｖ）オリゴ糖−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ、ここでＲは式（III）でと同一の意味を有し、・（VI）オリゴ糖ＣＯ−ＮＨ−Ｒ−ＮＨ−ＣＯ−オリゴ糖、ここでＲは式（II I）でと同一の意味を有し、ｄ）−脂肪族モノもしくはジアミンとともにオリゴ糖により形成されかつ以下の式すなわち・（VII）Ｇａｌ−（Ｈｅｘ）_n−Ｘ−ＨＮ−Ｒ、・（VIII）Ｇａｌ−（Ｈｅｘ）_n−Ｘ−ＨＮ−Ｒ−ＮＨ−Ｘ−（ＨｅＸ）_n−Ｇａｌ、の一に対応するシッフ塩基の還元生成物であって、ここで：Ｈｅｘは六炭糖もしくは五炭糖であり、ｎ＝０、１もしくは２、Ｘ＝１−ＮＨ₂−ヘキシトール、そしてＲは（III）でと同一の意味を有する、から成る群から選ばれ、ここでオリゴ糖が一般式（Ａ）に対応することを特徴とする、請求の範囲１に記載の製薬学的もしくは美容術上の組成物。３．オリゴ糖が、メリビオース、乳糖および疎水性残基の付加により得られうるそれらの誘導体から成る群から選ばれることを特徴とする、請求の範囲１もしくは２に記載の製薬学的もしくは美容術上の組成物。４．オリゴ糖が、メリビオース、乳糖およびそれらの混合物から成る群から選ばれることを特徴とする、請求の範囲１もしくは２に記載の製薬学的もしくは美容術上の組成物。５．オリゴ糖がメリビオースであることを特徴とする、請求の範囲１もしくは２に記載の製薬学的もしくは美容術上の組成物。６．レチノイドが、レチノール、レチノイン酸、それらの塩およびそれらのエステルから成る群から選ばれることを特徴とする、請求の範囲１ないし５の一に記載の製薬学的もしくは美容術上の組成物。７．それがレチノールおよびメリビオースの組み合わせ剤を含有することを特徴とする、請求の範囲１ないし６の一に記載の製薬学的もしくは美容術上の組成物。８．それが皮膚科的に許容できる賦形剤を含有することを特徴とする、請求の範囲１ないし７の一に記載の製薬学的組成物。９．それが経口投与に適する賦形剤もまた含有することを特徴とする、請求の範囲１ないし７の一に記載の製薬学的組成物。１０．レチノイドが、組成物の総重量に関して、0.0001と５重量％との間の濃度のメリビオースと共同して、0.0001と３重量％との間の濃度で存在することを特徴とする、請求の範囲１ないし９の一に記載の組成物。１１．レチノールが0.0001％と３％との間の濃度で存在すること、および、メリビオースが0.001％と２％との間の濃度で存在することを特徴とする、請求の範囲１ないし９の一に記載の組成物。１２．皮膚の弾性を向上させ、そして／もしくは老化による皮膚および外骨格の変化を予防もしくは治療するよう設計された組成物の製造のための、最低１種のレチノイドの、２から６個までの単糖残基を含みかつ非還元末端位置にガラクトースを有する最低１種のオリゴ糖もしくは疎水性残基で置換されたこうしたオリゴ糖の誘導体との組み合わせ剤の使用。１３．オリゴ糖が、以下の一般式すなわちガラクトース−_n（αもしくはβ）−（Ｈｅｘ）_p （Ａ）ここで、ｎは位置１、２、３、４もしくは６を表わし、Ｈｅｘはαもしくはβ結合にある五炭糖もしくは六炭糖を表わし、ｐは１と５との間の数であり、に対応すること、ならびに、オリゴ糖誘導体が、以下の範疇の化合物すなわちａ）−式すなわち・（Ｉ）オリゴ糖１−Ｏ−Ｒ、ここでＲは１ないし18個の炭素原子の直鎖もしくは分枝状のアルキル残基であり、・（II）オリゴ糖１−Ｏ−Ｒ−Ｏ−１−オリゴ糖、ここでＲ＝（ＣＨ₂）_m、ｍは２と10との間であり、に対応する配糖体、ｂ）−以下の式の一に従った１種のアシル化オシルアミンであって、ここでオリゴ糖は好ましくは乳糖、メリビオースもしくはスタキオースであり： −以下の式の一に対応するアシル化オシルアミン類：・（III）オリゴ糖１−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ、ここでＲは０、１もしくは２個の二重結合を含有する２ないし18個の炭素原子のアルキル残基であり、・（IV）オリゴ糖１−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ−ＣＯ−ＮＨ−１−オリゴ糖、ここでＲ＝（ＣＨ₂）_m、ｍは２と８との間であり、ｃ）−オリゴ糖の酸化により得られるアルドン酸でアシル化されたアルキルアミン・（Ｖ）オリゴ糖−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ、ここでＲは式（III）でと同一の意味を有し、・（VI）オリゴ糖ＣＯ−ＮＨ−Ｒ−ＮＨ−ＣＯ−オリゴ糖、ここでＲは式（II I）でと同一の意味を有し、ｄ）−脂肪族モノもしくはジアミンとともにオリゴ糖により形成されかつ以下の式すなわち・（VII）Ｇａｌ−（Ｈｅｘ）_n−Ｘ−ＨＮ−Ｒ、・(VII）Ｇａｌ−（Ｈｅｘ）_n−Ｘ−ＨＮ−Ｒ−ＮＨ−Ｘ−（ＨｅＸ）_n−Ｇａｌ、の一に対応するシッフ塩基の還元生成物であって、ここで：Ｈｅｘは六炭糖もしくは五炭糖であり、ｎ＝０、１もしくは２、Ｘ＝１−ＮＨ₂−ヘキシトール、そしてＲは（III）でと同一の意味を有する、から成る群から選ばれ、ここでオリゴ糖が一般式（Ａ）に対応することを特徴とする、請求の範囲１２に記載の使用。１４．レチノイドがレチノールでありかつオリゴ糖がメリビオースもしくは疎水性残基の付加により得られうるその誘導体であることを特徴とする、請求の範囲１２もしくは１３に記載の組み合わせ剤の使用。１５．オリゴ糖がメリビオースであることを特徴とする、請求の範囲１２ないし１４の一に記載の使用。１６．皮膚の粘弾性の特性を向上させ、そしてしわの形成を予防もしくは抑制するよう設計された皮膚化粧用組成物の製造のための、請求の範囲１２ないし１５の一に記載の使用。１７．結合組織中の弾性線維の分解と戦うことを可能にする組成物の製造のためのレチノイドの使用。１８．請求の範囲１ないし７、１０および１１の一に記載の組成物が皮膚および／もしくは外骨格に適用されることを特徴とする、皮膚および／もしくは外骨格の老化に関連する変化の化粧的治療方法。