JPH0521558B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、一般式 （式中R₁はアルキル基、アラルキル基又はア
リール基、R₂はアルキル基、ｎは１又は２を示
す）で表わされる光学活性カルボン酸の製造法に
関する。 式のカルボン酸は光学活性を有する種々の生
理活性物質を合成するための原料として利用され
ている。従来、式の光学活性カルボン酸の製造
法としては、あらかじめ有機合成的にラセミ体の
カルボン酸を合成したのち、光学分割剤を用いて
分割する方法、すなわち物理化学的に一方の光学
活性体とその対掌体とに分別する方法が知られて
いる（特開昭55−118455号、同56−81557号、同
57−188563号、ヨーロツパ特許公開第79200477号
各明細書参照）。しかしこれらの方法では、高価
な分割剤が多量に必要とされること、この分割剤
が不純物として製品中に混入しやすいこと、分割
工程が複雑であることなどの欠点があり、工業的
な製法としては必ずしも満足できるものではな
い。 本発明者らは、この種のカルボン酸エステルを
不斉加水分解する方法に関して鋭意研究を行つた
結果、アスペルギルス属、バチルス属、トルロプ
シス属等の微生物を用いることにより、式の光
学活性カルボン酸を効率よく製造できることを見
い出した。 本発明は、一般式 （式中R₃はアルキル基を示し、R₁、R₂及びｎ
は前記の意味を有する）で表わされるエステル
に、エステル結合を不斉加水分解する能力を有る
トルロプシス属、バシルス属、アスペルギルス
属、キヤンデダ属又はケトミウム属に属する微生
物の培養液、菌体又は菌体処理物を作用させるこ
とを特徴とする一般式 （式中R₁、R₂及びｎは前記の意味を有する） で表わされる光学活性カルボン酸の製造法であ
る。 式及び式の化合物の置換基R₁のためのア
ルキル基としては例えばメチル基、エチル基な
ど、アラルキル基としては例えばベンジル基、ア
リール基としては例えばフエニル基が挙げられ
る。 本発明に用いられるエステル（）としては、
例えばＳ−アセチル−β−メルカプトイソ酪酸メ
チル、Ｓ−アセチル−γ−メルカプト−α−メチ
ル−ｎ−酪酸メチル、Ｓ−ベンゾイル−β−メル
カプトイソ酪酸メチル、Ｓ−フエニルアセチル−
β−メルカプトイソ酪酸メチルなどが挙げられ
る。 本発明に用いられる微生物は、前記の化合物の
エステル結合を不斉加水分解する能力を有する微
生物であつて、トルロプシス属（Torulopsis）、
バシルス属（Bacillus）、アスペルギルス属
（Aspergillus）、キヤンデイダ属（Candida）及
びケトミウム属（Chaetomium）から選ばれる微
生物である。これらの微生物はこれを含む培養
液、分離した菌体又は菌体処理物として用いられ
る。 これらの微生物の培養は、通常は液体培養で行
われるが固体培養によつても行うことができる。
培地としては、微生物が通常資化しうる炭素源、
窒素源、ビタミン、ミネラルなどの成分を適宜配
合したものが用いられる。微生物の加水分解能を
向上させるため、培地にエステルを少量添加する
ことが好ましい。培養は微生物が生育可能である
温度及びPH範囲で行われるが、通常、温度は10〜
50℃、PHは２〜11の範囲で行われるのが好まし
い。微生物の生育を促進させるために通気撹拌を
行つてもよい。 加水分解反応を行うに際しては、培養の開始時
又は途中で培地にエステル（）を添加してもよ
く、あらかじめ微生物を培養したのち培養液にエ
ステル（）を添加してもよい。また増殖した微
生物の菌体を遠心分離等により採取し、これをエ
ステルを含む反応媒体に加えてもよい。この場合
菌体は取り扱い上の便宜から、乾燥菌体例えば凍
結乾燥菌体、噴霧乾燥菌体又は有機溶媒例えばア
セトン、トルエン等で処理した菌体、あるいは菌
体破壊物、菌体抽出物等の菌体処理物を用いるこ
ともできる。反応媒体としては例えばイオン交換
水又は緩衝液が用いられる。反応媒体又は培養液
中のエステルの濃度は0.01〜50重量％が好まし
い。エステルは水に懸濁した状態で加えることも
できる。メタノール、アセトンなどの有機溶媒を
反応液に加えてエステルの溶解性を向上させるこ
ともできる。反応液のPHは２〜11、好ましくは５
〜８の範囲である。反応が進行するに伴い生成し
たカルボン酸により反応液のPHが低下してくる
が、この場合は適当な中和剤で最適PHに維持する
ことが好ましい。反応温度は５〜50℃である。 反応液又は培養液からの生成物の分離精製は、
通常の方法例えば抽出、再結晶、カラムクロマト
グラフイ等により行うことができる。 下記実施例中の％は重量％を意味する。 実施例 １ トルロプシス・グロペンギエセリIFO0659
（Torulopsis gropengiesseri）をグルコース1.0
％、マルトエキス0.3％、酵母エキス0.3％及びペ
プトン0.5％から成る液体培地（PH6.0）100mlに
植菌し、30℃２日間振盪培養を行つた。培養終了
後、培養液を遠心分離し、得られた菌体（乾燥物
として0.4g）をイオン交換水で洗浄したのち、
Ｍ／10燐酸緩衝液（PH7.0）50mlに懸濁した。こ
の菌体懸濁液に（±）−Ｓ−アセチル−β−メル
カプトイソ酪酸メチル1.0mlを加え、30℃で24時
間振盪して反応させた。 反応液をPH7.0に調整し、未反応のＳ−アセチ
ル−β−メルカプトイソ酪酸メチルを酢酸エチル
で抽出除去した。次いで水層のPHを硫酸で2.0に
下げたのち、水層中のＳ−アセチル−β−メルカ
プトイソ酪酸を酢酸エチルで抽出した。抽出液に
無水硫酸ナトリウムを加えて脱水処理したのち、
溶媒を蒸発除去して油状物0.25gが得られた。こ
の油状物をベンゼンで調整したシリカゲルカラム
に負荷し、ベンゼン／アセトン（10：１）混液で
溶出した。Ｓ−アセチル−β−メルカプトイソ酪
酸溶出区分を分画し、減圧下で溶媒を除去する
と、精製Ｓ−アセチル−β−メルカプトイソ酪酸
が0.19g得られた。この精製物の旋光度を測定し
たところ、〔α〕²⁵ _D＝−45.0゜（Ｃ＝1.1酢酸エチル）
であつた。 実施例 ２ バチルス・ズブチリス・バール・ニガー
IFO3108（Bacillus subtilis var niger）を肉エキ
ス1.0％、ペプトン1.0％及びNaCl0.5％からなる
液体培地（PH7.0）100mlに植菌し、30℃で１日間
振盪培養を行つた。以下実施例１と同様に、洗浄
菌体（0.3g）を調製し、同様に反応を行い、酢酸
エチルで抽出を行い、最後にカラムクロマトグラ
フイを行つたところ、〔α〕²⁵ _D＝＋42.8゜（Ｃ＝1.4酢
酸エチル）のＳ−アセチル−β−メルカプトイソ
酪酸0.16gが得られた。 実施例 ３〜７ 下記表に示す菌株を実施例１と同一組成の液体
培地100mlに植菌し、30℃で２〜３日間振盪培養
を行つた。この培養液から菌体を分離し、イオン
交換水で充分洗浄したのち、（±）−β−アセチル
チオイソ酪酸メチル1.0mlを含むＭ／10燐酸緩衝
液50ml中に懸濁した。反応は30℃で24時間行つ
た。反応液のPHを7.0に調整したのち、等容量の
酢酸エチルでＳ−アセチル−β−メルカプトイソ
酪酸メチルを抽出除去した（中性抽出区分）。次
いで、抽出残液の水層のPHを2.0以下にしたのち、
等容量の酢酸エチルでＳ−アセチル−β−メルカ
プトイソ酪酸を抽出した（酸性抽出区分）。 中性及び酸性抽出区分の旋光性を旋光度計（ユ
ニオン技研社製デジタル自動旋光度計PM101型）
で測定したところ下記表の結果が得られた。これ
から、表に示す菌株は、旋光性が（＋）又は
（−）のいずれか一方の光学活性Ｓ−アセチル−
β−メルカプトイソ酪酸と、その対掌体のエステ
ルすなわちＳ−アセチル−β−メルカプトイソ酪
酸メチルを生成していると判定された。 【表】

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 一般式 （式中R₁はアルキル基、アラルキル基又はア
   リール基、R₂及びR₃はアルキル基、ｎは１又は
   ２を示す）で表されるエステルに、エステル結合
   を不斉加水分解する能力を有するトルロプシス
   属、バシルス属、アスペルギルス属、キヤンデイ
   ダ属又はケトミウム属に属する微生物の培養液、
   菌体又は菌体処理物を作用させることを特徴とす
   る、一般式 （式中、R₁，R₂及びｎは前記の意味を有する） で表される光学活性カルボン酸の製造法。