JPH05188057A

JPH05188057A - Ｈｉｖ−１抗体の免疫酵素的検出法

Info

Publication number: JPH05188057A
Application number: JP2620092A
Authority: JP
Inventors: Yi Zeng; ゼンイー; Zhe Wang; ワンゼー; Frederick Coulston; コウルストンフレデリック
Original assignee: COULSTON INTERNATL CORP; KOURUSUTON INTERNATL CORP
Current assignee: COULSTON INTERNATL CORP; KOURUSUTON INTERNATL CORP
Priority date: 1991-01-15
Filing date: 1992-01-16
Publication date: 1993-07-27
Also published as: EP0495465A2; AU1022592A; EP0495465A3; AU659124B2; CA2059317A1

Abstract

(57)【要約】【構成】被験ウィルスに対する抗体の免疫酵素的検出
法、当該免疫酵素的検出法を行うための診断キット、当
該免疫酵素的検出法で使用する新規細胞株およびその調
製法、ならびに当該免疫酵素試験片およびキット。【効果】本発明の免疫酵素的検出法により、血液およ
び血液成分のウィルスの簡便迅速、高感度、かつ正確な
検出が可能となる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ウィルス抗体の免疫酵
素的検出法、特にヒト免疫不全症ウィルス抗体の免疫酵
素的検出法、その診断キット、当該検出法において使用
する新規細胞株、抗体検出に使用する当該細胞株の調製
法、ならびにその免疫酵素試験片およびキットに関す
る。

【０００２】

【従来技術・発明が解決しようとする課題】健康に重要
な関わりを持つかもしれないウィルスの検出法は、診断
や治療の目的だけでなく、疫学的に、また一定の集団内
におけるウィルスのさらなる感染を防止するためにも重
要である。ＡＩＤＳの発現によりウィルス検査が非常に
重大な意味をもつようになってきた。ＡＩＤＳウィルス
は感染性が高く、最終的には感染者を死に至らしめる。
現在のところＡＩＤＳの治療法がないため、ＡＩＤＳウ
ィルスに感染した感染者の検出は疫学的研究において重
要であり、ウィルスの蔓延を防止するために最優先で行
われるべきである。

【０００３】ウィルス感染は主に血液およびその生産物
を経路とする。このため、ウィルスに感染している血液
ドナーを発見することが重要である。そのための実用的
方法は唯一、ドナーをスクリーニングして抗体の有無を
調べる方法である。ウィルスを対象とする酵素結合免疫
吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）は特殊な設備や専門的知識を
要し、非常に費用がかかる上、偽陽性結果が有為に多
い。免疫蛍光試験（ＩＦ試験）はより安価で容易に行う
ことができる。しかし、ＩＦ試験には蛍光顕微鏡を使用
する必要がある。このため、安価で容易に行え、しかも
特殊な設備を必要としない、正確な検査方法の開発が望
まれている。そのような方法が開発されれば、公共保健
施設にいる麻薬中毒者や他の危険の高い者のスクリーニ
ング、ならびに診療所にいる患者の検査、研究室動物の
スクリーニング、および消費者による使用が可能にな
る。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明は、血液および血
液成分のような試料中の被験ウィルスに対する抗体の免
疫酵素的検出法、新規細胞株、特に前記免疫酵素的検出
法で使用するために調製された細胞株、ならびに前記免
疫酵素的検出法を行うための診断スライドキットおよび
試験片キット両方を提供する。

【０００５】本発明によれば、新規細胞株を試験すべき
ウィルスとインキュベートし、インキュベートの間に細
胞の細胞質内および細胞表面上でウィルスの蓄積を促進
する誘導物質により細胞が活性化される。また本発明に
よれば、活性化ウィルス感染細胞を支持体に固定化し、
血液または血液成分のような試料とインキュベートし、
洗浄し、次にウィルスに対する抗体に結合可能な結合体
とインキュベートし、洗浄し、さらに結合体に対する指
示薬とインキュベートし、洗浄し、光学顕微鏡で指示薬
の色の変化を観察して検査する。指示薬の色の変化は、
陽性、すなわち試料中に被験ウィルスに対する抗体が存
在することを示す。さらに本発明によれば、試料中のウ
ィルスに対する抗体の免疫酵素的検出のための試験スラ
イドキットが提供される。また本発明によれば、試料中
のウィルスに対する抗体の免疫酵素的検出のための試験
片が提供される。またさらに詳細には、本発明によっ
て、試料、特に血液または血液成分中のＨＩＶ−１抗体
の免疫酵素的検出のための、糖蛋白質ｇｐ４１が担持さ
れた試験片が提供される。

【０００６】概して、ウィルスに対する抗体の免疫酵素
的検出試験のための組成物および方法が提供される。本
発明によれば、血液または血液成分のような試料中のウ
ィルス抗体の免疫酵素的検出法が提供される。本発明に
おいては、目的とするウィルスを細胞株に接種し、細胞
内および細胞表面でのウィルス蓄積を促進する誘導物質
により活性化した細胞株を免疫酵素的検出法で使用し
て、試験ウィルスの抗体結合に対する有効性を高め、こ
れにより強い呈色反応が起こるようにする。このように
して試料中の目的ウィルスに対する抗体の検出が向上す
る。

【０００７】本発明の好適な実施態様では、在中国ヒト
Ｔ細胞白血病患者からＣｌｌ−８細胞が樹立された。Ｃ
ｌｌ−８細胞を培養し、在中国アメリカ人ＡＩＤＳ患者
から単離されたＨＩＶ−１Ａｃウィルスを感染させた。
他の実施態様では、中国の昏睡患者のＴ細胞から樹立さ
れたＣＭ−１細胞を培養し、同ウィルスで感染させた。
これとは別に、Ｃｌｌ−８細胞またはＣＭ−１細胞に感
染させるための大量のＨＩＶ−１Ａｃウィルスが、ＣＥ
Ｍ細胞（市販品）を当該ウィルスに感染させることによ
り得られた。尚、上記Ｃｌｌ−８細胞及びＣＭ−１細胞
は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（Ａ
ＴＣＣ）に１９９１年９月２４日に寄託され、寄託番号
はそれぞれＣＲＬ１０８７７及びＣＲＬ１０８７６
である。同様にＨＩＶ−１Ａｃウィルスも、寄託番号Ｖ
Ｒ２３３８にて寄託された。

【０００８】ＨＩＶ−１Ａｃウィルスに感染したＣｌｌ
−８細胞またはＣＭ−１細胞を、細胞中のウィルスが成
長するのに充分な時間インキュベートする。その後、感
染細胞を誘導物質で活性化する。ここで重要なのは、感
染後そして活性化前のインキュベーション時間が細胞中
でウィルスが成長するのに充分な時間でなければならな
い点である。しかしながら、インキュベーション時間
を、感染細胞が破壊されたり、細胞塗抹標本（ｓｍｅａ
ｒ）に不適となるまで長くしてはならない。ＨＩＶ−１
Ａｃ感染Ｃｌｌ−８細胞の活性化は５日間インキュベー
ト後に行うのが適当であることが判明した。

【０００９】充分な時間インキュベートした感染細胞を
誘導物質は活性化して、細胞内にウィルスを蓄積させ、
細胞表面に大量のウィルス抗原を発現させる。誘導物質
により促進された細胞内ウィルス蓄積は、自然に起こる
ものよりはるかに多い。好適な誘導物質は、組織培養培
地中にコルチゾン、１２−Ｏ−テトラデカノイル−ホル
ボール−１２−アセテート（ＴＰＡ）および酪酸を含有
する。誘導物質は、コルチゾン５ｎｇ／ｍｌ、ＴＰＡ
５〜２０ｎｇ／ｍｌ、酪酸１〜４ｍＭを含有するものが
よい。好適な実施態様では、組織培養培地中コルチゾン
５ｎｇ／ｍｌ、ＴＰＡ５ｎｇ／ｍｌ、酪酸２ｍＭから
なる誘導物質にて感染Ｃｌｌ−８細胞またはＣＭ−１細
胞を活性化した。好適な活性化時間は約２４時間であ
る。好適な誘導物質を使用することにより、最短時間内
に細胞内および細胞表面での大量のウィルス抗原蓄積が
起こった。誘導物質の各成分の相対濃度は活性化時間を
短縮するかまたは延長するかにより、増加または減少さ
せることができる。しかし、活性化時間は細胞が悪影響
を受けない時間にするべきである。

【００１０】当該誘導物質はすべてのＴ細胞白血病細胞
株、例えばＣＥＭ、ＭＴ−４、ＨＵＴ７８などでウィル
ス蓄積を誘導するのに使用できる。当該誘導物質は、ま
たＲａｊｉ細胞などのＢ細胞でウィルス蓄積を誘導する
のに使用できる。

【００１１】誘導されたＣｌｌ−８細胞またはＣＭ−１
細胞は細胞内でも細胞表面でもウィルス蓄積が相対的に
高いことから、特に免疫酵素試験での使用に適してい
る。このようにウィルス濃度が相対的に高いことによ
り、続けてこの細胞に行う処理や目的ウィルスに対する
抗体を含む試料の添加の結果、検出可能な呈色、すなわ
ち光学顕微鏡を通した観察によって明らかに検出でき
る。

【００１２】ウィルス感染、誘導Ｃｌｌ−８細胞または
ＣＭ−１細胞をそれぞれ正常Ｃｌｌ−８またはＣＭ−１
細胞と混合し、それぞれ免疫酵素法に供した。正常細胞
と感染細胞の混合により非特異的反応の測定ができる。
例えば、もし感染細胞と非感染細胞が共に着色した場
合、試料中の抗体は目的ウィルス以外のものとまたは当
該ウィルスに結合してさらに他のものと結合していると
推定される。従って、偽陽性試験を最少にするために正
常細胞と感染細胞を混合することが好ましい。非特異的
反応を測定できるように、このように細胞を混合するこ
とは重要であるが、これはまた着色反応の観察を容易に
するためでもある。この目的のために、正常細胞と感染
細胞を陽性率５〜８０％になるように混合する。しかし
好ましいのは３０〜５０％である。この方法を実施する
際には混合細胞を２回洗浄し、遠心分離し、濃度３×１
０⁵個／ｍｌとなるようにＲＰＭＩ−１６４０に再懸濁
して、偽陽性試験結果の原因となる試料中の成分を除去
する。

【００１３】再懸濁した細胞は次にスライドなどの支持
体上に載せ乾燥させる。乾燥後、例えばアセトンのよう
な固定化剤で細胞を固定化する。アセトンは細胞膜の脂
質を溶解するので、もし試料中にＨＩＶ−１特異抗体が
存在すれば細胞内および細胞膜上に存在するＨＩＶ−１
抗原と反応する。

【００１４】固定化細胞スライドを試料、例えば希釈血
液または血液成分などとインキュベートする。試料とイ
ンキュベート後、スライドを数回洗浄し、試料で検査中
のウィルスに結合可能な結合体とインキュベートする。
結合体はまた指示薬と反応して、指示薬の色を変化させ
るものでなければならない。光学顕微鏡で検出可能な色
の変化を生ずるものであれば、いかなる結合体と指示薬
の組合せを用いてもよい。例えば指示薬３−アミノ−９
−エチルカルバゾール（ＡＥＣ）と共に用いる結合体
は、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰＯ）
−ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓプロテインＡ（ＳＰ
Ａ）、ＨＲＰＯ−抗ヒトＩｇＧ抗体、アルカリホスファ
ターゼ−ＳＰＡ、およびアルカリホスファターゼ−抗ヒ
トＩｇＧ抗体などである。好適な実施態様では、結合体
はＨＲＰＯ−結合ＳＰＡである。ＨＲＰＯ−結合ＳＰＡ
は、目的ウィルスに結合した試料由来の抗体に結合す
る。そしてスライドを再度洗浄し、ＡＥＣ指示薬を添加
する。結合−ＳＰＡにより抗体に結合した活性ＨＲＰＯ
が存在すれば、ＡＥＣは無色から桃色／赤色に変化す
る。最後に洗浄した後、スライドを光学顕微鏡下で検査
する。細胞膜および細胞質の桃色着色はウィルス抗体の
存在を示す。

【００１５】また本発明によれば、免疫酵素試験キット
が提供される。キットは、誘導ウィルス感染Ｃｌｌ−８
またはＣＭ−１細胞を固定化したマルチウェル抗原スラ
イド、および上記の試験方法を行う際に必要な洗浄液、
指示薬、結合体の各アンプルからなる。当該試験キット
はＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＨＴＬＶ−１およびＳＩＶ
−III ウィルスに使用できる。試験キットは、試験ウィ
ルス、すなわち抗原スライド上に固定化したＣｌｌ−８
またはＣＭ−１細胞の感染に使用したウィルスのみが異
なる。代わりに、エプスタイン−バー−ウィルスを感染
させたＢ９５−８細胞またはＲａｊｉ細胞、またはエボ
ラウィルスを感染させたＶｅｒｏ細胞を、それぞれエプ
スタイン−バー−ウィルスまたはエボラウィルスの検出
用試験キットに用いてもよい。Ｒａｊｉ細胞は誘導物質
で活性化することが好ましい。

【００１６】他の実施態様では、本発明は試料中のＡＩ
ＤＳウィルス抗体の免疫酵素的検出に用いる試験片を提
供する。この実施態様においては、試験片は吸着材を付
着させた支持体からなる。吸着材にはＨＩＶ−１抗体の
検出のためにＨＩＶ−１抗原蛋白質、糖蛋白質ｇｐ４１
が吸着させられる。

【００１７】本発明の好適な実施態様においては、Chin
ese Academy of Traditional Medicine より得たｇｐ４
１糖蛋白質のＨＩＶ−１遺伝子を高発現性ベクターｐＢ
Ｖ２２１（ＡＴＣＣ７５１０６）にクローン化し、E.
coli の形質転換に使用した。方法は、当業者に公知の
方法（例えば Maniatis et al. 1982 Moleclular Cloni
ng: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Labora
toryを参照）に従った。部分的に図１に示す。培養した
形質転換E. coli を超音波で破砕し、不溶性部分（蛋白
質および破壊細菌を含む）を沈澱させた。沈澱物を８Ｍ
尿素に溶解し、不溶性部分を沈澱させ、生成した上清を
透析して尿素を除き、濃縮ゲルを使用して１５％ポリア
クリルアミドゲルで分画し、精製ｇｐ４１蛋白質を得た
（例えばLaemlli et al, J. Molec. Bio. 80:575, 1973
参照）。電気泳動後、該蛋白質をニトロセルロースに
移し、モノクローナル抗体および陽性ＨＩＶ−１血清の
両者によりｇｐ４１を含むバンドが同定された。いった
ん同定されたら、ｇｐ４１が吸着されたニトロセルロー
スの領域を、ｇｐ４１吸着の外端の内側で平滑断端す
る。このようにしてそれ以外の蛋白質を含まない高度に
精製されたｇｐ４１を試験片の検出手段として使用す
る。この高度精製ｇｐ４１を使用することにより高感度
で非常に正確な試験片が提供される。

【００１８】得られたｇｐ４１吸着ニトロセルロース片
を細断し、プラスチックのような適当な支持体に例えば
“ＤｏｕｂｌｅＳｗａｌｌｏｗ”接着剤（Beijing Li
angxiang製）で付着させる。

【００１９】ＨＩＶ−１抗原試験片もまた、ＡＩＤＳウ
ィルスそのものまたはウィルス感染したＣｌｌ−８また
はＣＭ−１細胞で調製できる。ウィルス、ウィルス感染
細胞またはｇｐ４１蛋白質のいずれを使用したかに係わ
らず、測定は比較的短時間に、例えばわずか約３０分で
行え、簡便に使用できる。測定は後記実施例で説明する
ように非常に正確でかつ感度が高い。

【００２０】また本発明によれば、免疫酵素試験片を含
むキットが提供される。当該キットは数枚の試験片（一
つは陽性コントロール用であり、また一つは陰性コント
ロール用であり、一つは試料用である）、および試験ス
ライドで説明した方法に従い免疫酵素試験を行う際に必
要な洗浄液、指示薬、結合体を含むバイアルからなる。
ｇｐ４１、ＡＩＤＳウィルスまたはウィルス感染したＣ
ｌｌ−８またはＣＭ−１細胞のいずれを試験片が担持す
るかに係わらず、試験の実施方法は、試料を試験片と接
触させ、感染試験片を結合体と接触させ、この後試験片
を指示薬と接触させ、色の変化の有無を測定する。もち
ろんｇｐ４１またはＡＩＤＳウィルスのいずれを担持す
る試験片もＡＩＤＳウィルスに対する抗体の検出に使用
できる。ウィルス感染Ｃｌｌ−８またはＣＭ−１細胞を
担持する試験片は、感染性ウィルスに対する抗体の検出
に使用できる。この試験片に用いるＣｌｌ−８またはＣ
Ｍ−１細胞を感染させるのに使用できるウィルスは、Ｈ
ＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＨＴＬＶ−１およびＳＩＶ−Ｉ
ＩＩなどである。エプスタイン−バー−ウィルスを感染
させたＢ９５−８およびＲａｊｉ細胞、およびエボラウ
ィルスを感染させたＶｅｒｏ細胞もまたそれぞれの感染
性ウィルスに対する抗体の検出試験片に使用できる。

【００２１】

【実施例】次に挙げる実施例は、本発明を詳細に説明す
るものであるが、本発明の範囲はこれらに何ら限定され
ない。実施例１Ｃｌｌ−８細胞の培養Ｃｌｌ−８細胞株系は在中国ヒトＴ細胞白血病患者から
作成した。細胞は９０％ＲＰＭＩ−１６４０（市販品）
と１０％ウシ胎児血清との懸濁状態で、５％ＣＯ₂、３
７℃下で細胞濃度が５×１０⁵細胞／ｍｌになるまで培
養した。細胞懸濁液は１週間に２回株分けした。

【００２２】Ｃｌｌ−８細胞は７０％ＲＰＭＩ−１６４
０、１０％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、及び２
０％ウシ胎児血清中で保存した。まず、細胞に保存用の
前処理を施した後、−７０℃にて一晩保存、のち−１９
６℃で保存した。

【００２３】使用前に、細胞の入った試験管を−１９６
℃から３７℃にすみやかに移し、それにＲＰＭＩ−１６
４０を５ｍｌ加え、1,000 rpm で１０分間遠心した。得
られた上清を除去し、沈澱した細胞に１０％ウシ胎児血
清を含むＲＰＭＩ−１６４０を５ｍｌ添加した。その
後、細胞を３７℃、５％ＣＯ₂下で培養した。

【００２４】実施例２ウィルスの培養ＨＩＶ−１Ａｃウィルスは在中国アメリカ人ＡＩＤＳ患
者から単離した。ＣＥＭ細胞をウィルスで感染させた。
ＣＥＭ細胞は、Ｔ細胞白血病患者由来であり、かつＨＩ
Ｖの感染を受けやすいため、Ｃｌｌ−８細胞と同様に培
養され、ＨＩＶ−１Ａｃウィルスの大量発現に用いられ
た。

【００２５】実施例３Ｃｌｌ−８細胞のウィルス感染実施例１で培養したＣｌｌ−８細胞を株分けし、２日間
培養した。培養２日後、細胞を遠心し集めた。沈澱した
細胞は、実施例２で培養したＨＩＶ−１Ａｃウィルスで
３７℃にて２時間感染させた。その後、１０％ウシ胎児
血清を含むＲＰＭＩ−１６４０を加えて３７℃、５％Ｃ
Ｏ₂下で培養を継続した。

【００２６】実施例４実施例３の感染Ｃｌｌ−８細胞
の誘導物質による活性化誘導物質を用いて実施例３の感染Ｃｌｌ−８細胞を活性
化し、その結果、細胞内にウィルスが蓄積し、細胞表面
にウィルス抗原が大量に認められた。その誘導物質は培
地中、５ｎｇ／ｍｌのコルチゾン、５ｎｇ／ｍｌのＴＰ
Ａ及び２ｍＭの酪酸から成るものである。

【００２７】誘導物質は感染後５日目にウィルス感染Ｃ
ｌｌ−８細胞に添加した。誘導物質を添加した約２４時
間後、細胞培地を2,000 rpm で２０分間遠心した。得ら
れた上清を除去し、誘導されたウィルス感染Ｃｌｌ−８
細胞を集菌した。

【００２８】誘導物質の有効率を表１に示す。感染後５
日目に活性化されたＨＩＶ−１感染Ｃｌｌ−８細胞の、
活性化前と後との両時における誘導物質の有効率を、非
感染型ＨＩＶ−１感染Ｃｌｌ−８細胞と比較した。

【００２９】

【表１】

【００３０】表１に示すように、誘導物質はＣｌｌ−８
細胞におけるウィルスの蓄積を促進する上で効果的であ
った。

【００３１】実施例５実施例４の活性化されたＨＩＶ
−１感染Ｃｌｌ−８細胞を用いた試験スライドの調製正常及び感染Ｃｌｌ−８細胞を集め、好適混合率である
陽性率30〜50％になるように混合した。混合した細胞
は、0.01ＭＰＢＳ（ｐＨ７．４）緩衝液で２回洗浄
し、2,000 rpm で１５分間遠心した。上清を除去し、得
られた細胞を再懸濁し、好適な濃度に調整した。再懸濁
細胞液５μl をスライド上の１２個の各ウェルに、細胞
が各ウェル内に単層を形成するように加えた。その後細
胞を乾燥し、冷アセトンで２０分間処理して細胞をウェ
ルに固定した。そして調製したスライドは乾燥剤と共に
密封し、４℃もしくは−２０℃で保存した。

【００３２】実施例６免疫酵素試験法に用いるＨＲＰ
Ｏ結合ＳＰＡの活性測定ホ−スラディッシュペルオキシダ−ゼ（ＨＲＰＯ、市販
品）は当業者に公知の方法に基づいて調製した。さらに
ＨＲＰＯを公知の方法に従ってStaphylococcusプロテイ
ンＡと結合した。

【００３３】ＨＲＰＯ結合ＳＰＡの使用濃度は、ＨＩＶ
−１ウィルスに特異的なＩｇＧ抗体と結合したＨＩＶ−
１感染細胞に反応したＨＲＰＯ結合ＳＰＡのうちの最大
に希釈された濃度を用いた。

【００３４】ＨＩＶ−１感染Ｃｌｌ−８細胞塗抹標品
は、ＨＩＶ−１陽性血清標準品をリン酸緩衝液（ＰＢ
Ｓ）で系列希釈した溶液と共に湿大気中で３７℃、４５
分間培養した。その後、細胞塗抹標品はＰＢＳで３回そ
れぞれ５分間ずつ洗浄した。洗浄後、ＨＲＰＯ結合ＳＰ
Ａを塗抹標品に加え、さらに４５分間、３７℃にて培養
し、その後ＰＢＳでさらに３回洗浄した。その上にＡＥ
Ｃ指示薬を添加した。ＳＰＡと結合することによって抗
体と結合した活性型ＨＲＰＯの下で、ＡＥＣは無色から
桃色／赤色に変化する。最終洗浄後、細胞塗抹標品スラ
イドをさらにＰＢＳで洗浄し、光学顕微鏡で検査した。
細胞膜と細胞質が桃色に呈色し、試料中にウィルス抗体
が存在していることが確認された。

【００３５】実施例７活性化ＨＩＶ−１感染Ｃｌｌ−
８細胞及びＨＲＰＯ結合ＳＰＡを用いた免疫酵素試験工
程ＰＢＳ（水で１：２５に希釈）で希釈した血漿（１：１
０）をスライド上のウェルに加えた。１つのウェルを陽
性コントロ−ル用に、もう１つのウェルを陰性コントロ
−ル用に使用した。試験スライドを37℃で40分間培養し
た後、ＰＢＳで５分間ずつ３回洗浄した。ＰＢＳ１mlに
溶かしたＨＲＰＯ結合ＳＰＡをスライドに加えて、再び
３７℃で約３０分間培養した。次いで、そのスライドを
ＰＢＳで３回洗浄し、その後、7.5 mlジメチルホルムア
ミド（ＤＭＦ）、0.35 M 酢酸ナトリウム緩衝液17.5 m
l 、及び30% 過酸化水素 250μl 中に30 mg ＡＥＣが溶
解した溶液中に３分間浸した。スライドを水中に浸漬し
て反応を終了させた。

【００３６】光学顕微鏡で検出されうる細胞膜及び細胞
質の呈色は陽性反応を示す。陽性反応は試料中にＨＩＶ
−１抗体が存在することを示す。

【００３７】実施例８ＩＥ試験キットの特異性表２に記したデ−タは、ＩＥ試験キットの特異性がＩＦ
試験で得られるものと同じであることを示す。偽陽性結
果は全く得られなかった。

【００３８】

【表２】

【００３９】実施例９ＨＲＰＯとＳＰＡとの結合の再
現性表３に記したデ−タは、ＨＲＰＯとＳＰＡとの結合が極
めて再現性が高いことを示す。再現性の高いＨＲＰＯ−
ＳＰＡ結合は、免疫酵素試験法での正確な再現性の高い
試験結果を保証するうえで重要である。この方法は、偽
陰性結果を防ぐ上でも有効である。

【００４０】

【表３】

【００４１】実施例１０ＩＥ試験スライドで得られた
結果の再現性表４に記したデ−タは、ＩＥ試験の別のスライド検体か
ら得られた結果と非常によく一致することを示すもので
ある。

【００４２】

【表４】

【００４３】実施例１１ＩＥ試験結果の再現性とＩＦ
試験の再現性との比較表５に記したデ−タは、ＩＥ試験はＩＦ試験と同様に再
現性があることを示す。

【００４４】

【表５】

【００４５】実施例１２ＩＥ試験の感度とＩＦ試験の
感度の比較表６に記したデ−タは、多くの場合、ＩＥ試験の感度は
ＩＦ試験より高いことを示す。

【００４６】

【表６】

【００４７】実施例１３ＩＥ試験スライドの安定性表７に記したデ−タは、ＩＥ試験スライドが、４℃もし
くは室温で１年間安定であることを示す。４℃または室
温で長期間にわたってＩＥ試験スライドを保存できるこ
とは、他の試験方法での保存必要条件、及び成分の安定
性に比べると有利である。

【００４８】

【表７】

【００４９】実施例１４ＩＥ試験結合体の安定性表８に記したデータは、ＩＥ試験から得られた結合体
が、１年間４℃または室温下で保存した際の安定性を見
たものである。ＩＥ試験結合体が極めて高い安定性を持
つことは、もし試験結果の確認が必要な場合は、試験ス
ライド結果が長期間にわたって保存可能であることを示
すものである。

【００５０】

【表８】

【００５１】実施例１５ＩＥ試験とウエスタンブロッ
ト法との比較ＩＥ試験とウエスタンブロット法とを比較した結果（表
９）、ＩＥ試験の感度は100%で特異性は98.1% であっ
た。陽性試験（ＰＰＶ）の予測値は96.9% で偽陽性結果
は1.9%であった。一方、陰性試験（ＮＰＶ）の予測値は
100%であった（虚偽陰性なし）。Youden Index、疫学的
因子は0.98であった。

【００５２】

【表９】

【００５３】実施例１６ＩＥ試験片と他の試験方法の
感度の比較ジョ−ジア州アトランタにあるセンターフォーディ
シーズ（ＣＤＣ）でＨＩＶ−１抗原試験片キットを Gen
etic Systems社、及び Organon-Tekneka社の試験法と比
較した。ＡＩＤＳ試験を評価するために最も厳しい試験
を使用した。

【００５４】ＡＩＤＳウィルスに感染した男性から得た
血液試料を集め、評価試験を行った。それら試料は、感
染日と思われる日に採取されたものに加えて、その後
二、三日おきに連続して採取された数試料を含んでい
る。表１０に比較試験結果をまとめた。

【００５５】

【表１０】

【００５６】ＨＩＶ−１抗原試験片は、感染後１１日目
の採血試料の２０倍希釈液においてＨＩＶ−１に対する
抗体を検出できた。一方、Organon-Technika社の試験法
では希釈しない原液試料中で抗体を検出した。しかし、
Genetic Systems 社の試験法ではその原液試料中の抗体
レベルが、検出できるぎりぎりの限界量であった。本発
明のＨＩＶ−１抗原試験片が２０倍希釈試料液中の抗体
を検出することができたという事実は、この試験片が高
い検出感度を有することを示すものである。かくの如く
高い検出感度を有するため、本試験片は感染後１１日目
以前に得られた原液、非希釈血液試料中の抗体も検出可
能であったであろうと思われる。また、確実な検出に基
づく、また最も高感度な市販の迅速検出試験にも匹敵す
る、より早期での抗体検出さえ可能になる。ゆえに本発
明は、ＡＩＤＳウィルスに対する非常に高感度の試験法
を提供するものである。

【００５７】ニュ−メキシコ州立大学で、ＨＩＶ−１抗
原試験片をＥＬＩＳＡ試験法と比較した。その比較結果
を表１１にまとめる。

【００５８】

【表１１】

【００５９】浸漬試験片で得られた結果は、ＡＩＤＳウ
ィルス、及び他のウィルスの検出に関して最も高感度な
試験法であるＥＬＩＳＡ法に匹敵する。本発明は、血液
及び血液成分中のウィルスの存在を検出する、簡便、迅
速かつ高感度で正確な試験法を提供するものである。

【図面の簡単な説明】

【図１】ｇｐ４１の遺伝子、ｐＢＶ２２１発現ベクタ
ー、及びｇｐ４１遺伝子を有する組換えｐＢＶ２２１発
現ベクターを示すマップである。

フロントページの続き (72)発明者ゼーワン中華人民共和国、ベイジン、ディアンモーネイストリートナンバー 41、ビルディング２−404 (72)発明者フレデリックコウルストンアメリカ合衆国、88310 ニューメキシコ州、アラモゴルド、クリスティナプレイス 2512

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】次の工程から成る、試料中の被験ウィル
スに対する抗体の免疫酵素的検出法：（ａ）試料を、Ｔ−細胞に接触させること。ただし、該
Ｔ−細胞は、該ウィルスにより感染され、ウィルスの細
胞内蓄積およびウィルス抗原の細胞表面発現を促進でき
る誘導物質で活性化され、また支持体に固定されてい
る。（ｂ）該Ｔ−細胞を、該抗体に結合でき、かつ指示薬の
色の変化を誘導できる結合体に接触させること。（ｃ）該結合体に接触させた該Ｔ−細胞を、該結合体に
対する指示薬と接触させること。（ｄ）被験ウィルスに対する抗体の該試料中における存
在を示す、無色から有色への該指示薬の色の変化を光学
顕微鏡を用いて検出すること。
【請求項２】該Ｔ−細胞が、Ｃｌｌ−８細胞及びＣＭ
−１細胞から成る群より選択される請求項１記載の免疫
酵素的検出法。
【請求項３】該Ｔ−細胞が、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−
２、ＨＴＬＶ−１、及びＳＩＶ−ＩＩＩから成る群より
選択されるウィルスで感染されている請求項１記載の免
疫酵素的検出法。
【請求項４】ＨＩＶ−１ウィルスがＨＩＶ−１Ａｃ単
離物由来である請求項３記載の免疫酵素的検出法。
【請求項５】該誘導物質が、培地中に５ｎｇ／ｍｌコ
ルチゾン、５−２０ｎｇ／ｍｌＴＰＡ、及び１−４ｍＭ
酪酸を加えたものである請求項１記載の免疫酵素的検出
法。
【請求項６】該誘導物質が、本質的に５ｎｇ／ｍｌコ
ルチゾン、５ｎｇ／ｍｌＴＰＡ、及び２ｍＭ酪酸を培地
中に加えたものである請求項５記載の免疫酵素的検出
法。
【請求項７】結合体がホースラディッシュペルオキシ
ダーゼ（ＨＲＰＯ）−Staphylococcus プロテインＡ
（ＳＰＡ）、ＨＲＰＯ−抗ウィルスＩｇＧ抗体、フォス
ファターゼ−ＳＰＡ、及びフォスファターゼ−抗ウィル
スＩｇＧ抗体から成る群より選択される請求項１記載の
免疫酵素的検出法。
【請求項８】ＨＲＰＯに対する指示薬が３−アミノ−
９−エチルカルバゾール（ＡＥＣ）である請求項７記載
の免疫酵素的検出法。
【請求項９】検出されるウィルス抗体が、ＨＩＶ−
１、ＨＩＶ−２、ＨＴＬＶ−１、及びＳＩＶ−ＩＩＩか
ら成る群より選択される請求項１記載の免疫酵素的検出
法。
【請求項１０】次の工程から成る、血液または血液成
分中のＨＩＶ−１抗体の免疫酵素的検出法：（ａ）血液または血液成分を、Ｃｌｌ−８細胞及びＣＭ
−１細胞から成る群より選択される細胞と接触させるこ
と。ただし、該細胞は、ＨＩＶ−１により感染され、培
地中に５ｎｇ／ｍｌＴＰＡ、５ｎｇ／ｍｌコルチゾン、
及び２ｍＭ酪酸を含んで成る誘導物質で活性化され、ま
た支持体に固定されている。（ｂ）該細胞を、ＨＲＰＯ−結合ＳＰＡと接触させるこ
と。（ｃ）工程（ｂ）の該細胞をＡＥＣと接触させること。（ｄ）被験ウィルスに対する抗体の該血液または血液成
分中における存在を示す、無色から桃色へのＡＥＣの色
の変化を光学顕微鏡を用いて検出すること。
【請求項１１】ＨＩＶ−１ウィルスがＨＩＶ−１Ａｃ
単離物由来である請求項１０記載の免疫酵素的検出法。
【請求項１２】次の工程から成る、試料中のエボラウ
ィルスに対する抗体の免疫酵素的検出法：（ａ）試料を、Ｖｅｒｏ細胞と接触させること。ただ
し、該Ｖｅｒｏ細胞は、該ウィルスにより感染され、ま
た支持体に固定されている。（ｂ）該Ｖｅｒｏ細胞を、該抗体に結合でき、かつ指示
薬の色の変化を誘導できる結合体に接触させること。（ｃ）該結合体に接触させた該Ｖｅｒｏ細胞を、該結合
体に対する指示薬と接触させること。（ｄ）エボラウィルスに対する抗体の該試料中における
存在を示す、無色から有色への該指示薬の色の変化を光
学顕微鏡を用いて検出すること。
【請求項１３】結合体がホースラディッシュペルオキ
シダーゼ（ＨＲＰＯ）−Staphylococcus プロテインＡ
（ＳＰＡ）、ＨＲＰＯ−抗ウィルスＩｇＧ抗体、フォス
ファターゼ−ＳＰＡ、及びフォスファターゼ−抗ウィル
スＩｇＧ抗体から成る群より選択される請求項１２記載
の免疫酵素的検出法。
【請求項１４】ＨＲＰＯに対する指示薬が３−アミノ
−９−エチルカルバゾール（ＡＥＣ）である請求項１３
記載の免疫酵素的検出法。
【請求項１５】次の工程から成る、試料中のエプスタ
イン−バー−ウィルスに対する抗体の免疫酵素的検出
法：（ａ）試料を、Ｂ−細胞と接触させること。ただし、該
Ｂ−細胞は、該ウィルスにより感染され、ウィルスの細
胞内蓄積およびウィルス抗原の細胞表面発現を促進でき
る誘導物質で活性化され、また支持体に固定されてい
る。（ｂ）該Ｂ−細胞を、該抗体に結合でき、かつ指示薬の
色の変化を誘導できる結合体に接触させること。（ｃ）該結合体に接触させた該Ｂ−細胞を、該結合体に
対する指示薬と接触させること。（ｄ）エプスタイン−バー−ウィルスに対する抗体の該
試料中における存在を示す、無色から有色への該指示薬
の色の変化を光学顕微鏡を用いて検出すること。
【請求項１６】該Ｂ細胞がＲａｊｉ細胞である請求項
１５記載の免疫酵素的検出法。
【請求項１７】該誘導物質が、培地中に５ｎｇ／ｍｌ
コルチゾン、５−２０ｎｇ／ｍｌＴＰＡ、及び１−４ｍ
Ｍ酪酸を加えたものである請求項１５記載の免疫酵素的
検出法。
【請求項１８】該誘導物質が、本質的に５ｎｇ／ｍｌ
コルチゾン、５ｎｇ／ｍｌＴＰＡ、及び２ｍＭ酪酸を培
地中に加えたものである請求項１７記載の免疫酵素的検
出法。
【請求項１９】結合体がホースラディッシュペルオキ
シダーゼ（ＨＲＰＯ）−Staphylococcus プロテインＡ
（ＳＰＡ）、ＨＲＰＯ−抗ウィルスＩｇＧ抗体、フォス
ファターゼ−ＳＰＡ、及びフォスファターゼ−抗ウィル
スＩｇＧ抗体から成る群より選択される請求項１５記載
の免疫酵素的検出法。
【請求項２０】ＨＲＰＯに対する指示薬が３−アミノ
−９−エチルカルバゾール（ＡＥＣ）である請求項１９
記載の免疫酵素的検出法。
【請求項２１】次の工程から成る、試料中のエプスタ
イン−バー−ウィルスに対する抗体の免疫酵素的検出
法：（ａ）試料を、Ｂ９５−８細胞と接触させること。ただ
し、該Ｂ９５−８細胞は、該ウィルスにより感染され、
また支持体に固定されている。（ｂ）該Ｂ９５−８細胞を、該抗体に結合でき、かつ指
示薬の色の変化を誘導できる結合体に接触させること。（ｃ）該結合体に接触させた該Ｂ９５−８細胞を、該結
合体に対する指示薬と接触させること。（ｄ）エプスタイン−バー−ウィルスに対する抗体の該
試料中における存在を示す、無色から有色への該指示薬
の色の変化を光学顕微鏡を用いて検出すること。
【請求項２２】結合体がホースラディッシュペルオキ
シダーゼ（ＨＲＰＯ）−Staphylococcus プロテインＡ
（ＳＰＡ）、ＨＲＰＯ−抗ウィルスＩｇＧ抗体、フォス
ファターゼ−ＳＰＡ、及びフォスファターゼ−抗ウィル
スＩｇＧ抗体から成る群より選択される請求項２１記載
の免疫酵素的検出法。
【請求項２３】ＨＲＰＯに対する指示薬が３−アミノ
−９−エチルカルバゾール（ＡＥＣ）である請求項２２
記載の免疫酵素的検出法。
【請求項２４】次の工程から成る、ある細胞株におい
て、ウィルスの高細胞内蓄積およびウィルス抗原の細胞
表面発現の増加を確立する方法：（ａ）細胞をウィルスにより感染させること。（ｂ）ウィルスの細胞内蓄積、及びウィルス抗原の細胞
表面発現を促進することのできる誘導物質で感染細胞を
活性化すること。
【請求項２５】細胞がＴ−細胞及びＢ−細胞から成る
群から選択される請求項２４記載の方法。
【請求項２６】Ｔ−細胞がＣｌｌ−８細胞及びＣＭ−
１細胞から成る群から選択される請求項２５記載の方
法。
【請求項２７】Ｂ−細胞がＲａｊｉ細胞である請求項
２５記載の方法。
【請求項２８】該細胞が、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、
ＨＴＬＶ−１、及びＳＩＶ−ＩＩＩから成る群より選択
されるウィルスにより感染されている請求項２６記載の
方法。
【請求項２９】ＨＩＶ−１ウィルスがＨＩＶ−１Ａｃ
単離物由来である請求項２８記載の方法。
【請求項３０】Ｒａｊｉ細胞がエプスタイン−バー−
ウィルスにより感染されている請求項２７記載の方法。
【請求項３１】該誘導物質が、培地中に５ｎｇ／ｍｌ
コルチゾン、５−２０ｎｇ／ｍｌＴＰＡ、及び１−４ｍ
Ｍ酪酸を加えたものである請求項２４記載の方法。
【請求項３２】該誘導物質が、本質的に５ｎｇ／ｍｌ
コルチゾン、５ｎｇ／ｍｌＴＰＡ、及び２ｍＭ酪酸を培
地中に加えたものであるから成る請求項３１記載の方
法。
【請求項３３】次の工程から成る、Ｃｌｌ−８細胞及
びＣＭ−１細胞から成る群から選択される細胞におい
て、ＨＩＶ−１ウィルスの高細胞内蓄積、およびＨＩＶ
−１ウィルス抗原の細胞表面発現の増加を確立する方
法：（ａ）細胞をＨＩＶにより感染させること。（ｂ）ＨＩＶ−１の細胞内蓄積、およびＨＩＶ−１ウィ
ルス抗原の細胞表面発現を促進するために、ＨＩＶ−１
感染細胞を、５ｎｇ／ｍｌＴＰＡ、５ｎｇ／ｍｌコルチ
ゾン、及び２ｍＭ酪酸から成る誘導物質で活性化するこ
と。
【請求項３４】ＨＩＶ−１ウィルスがＨＩＶ−１Ａｃ
単離物由来であるＨＩＶ−１ウィルスの高細胞内蓄積お
よびＨＩＶ−１ウィルス抗原の細胞表面発現の増加を確
立する請求項３３記載の方法。
【請求項３５】Ｔ−細胞白血病患者から確立された、
Ｃｌｌ−８と称する細胞株（ＡＴＣＣＣＲＬ１０８
７７）。
【請求項３６】昏睡状態の患者のＴ−細胞から確立さ
れた、ＣＭ−１と称する細胞株（ＡＴＣＣＣＲＬ１
０８７６）。
【請求項３７】在中国アメリカ人ＡＩＤＳ患者から得
られた、ＨＩＶ−１Ａｃと称するＨＩＶ−１ウィルス単
離物（ＡＴＣＣＶＲ２３３８）。
【請求項３８】培地中に、５ｎｇ／ｍｌコルチゾン、
５ｎｇ／ｍｌＴＰＡ、及び２ｍＭ酪酸を含んで成り、ウ
ィルスの細胞内蓄積、およびウィルス抗原の細胞表面発
現を促進することのできる誘導物質。
【請求項３９】次のものから構成される、試料中の被
験ウィルスに対する抗体の検出に用いる免疫酵素試験用
キット：（ａ）Ｔ細胞が固定されている支持体。ただし、該Ｔ細
胞は、少なくともその一部分が該ウィルスにより感染さ
れ、かつウィルスの細胞内蓄積およびウィルス抗原の細
胞表面発現を促進できる誘導物質で活性化されている。（ｂ）該抗体に結合でき、かつ指示薬の色の変化を誘導
できる結合体を有する第１容器。（ｃ）該結合体に対する指示薬を有する第２容器。
【請求項４０】Ｔ−細胞がＣｌｌ−８細胞及びＣＭ−
１細胞から成る群から選択される請求項３９記載の免疫
酵素試験用キット。
【請求項４１】該Ｔ−細胞の一部分が、ＨＩＶ−１、
ＨＩＶ−２、ＨＴＬＶ−１、及びＳＩＶ−ＩＩＩから成
る群より選択されるウィルスにより感染されている請求
項３９記載の免疫酵素試験用キット。
【請求項４２】ＨＩＶ−１ウィルスがＨＩＶ−１Ａｃ
単離物由来である請求項４１記載の免疫酵素試験用キッ
ト。
【請求項４３】結合体がＨＲＰＯ−ＳＰＡ、ＨＲＰＯ
−抗ウィルスＩｇＧ抗体、アルカリフォスファターゼ−
ＳＰＡ、及びアルカリフォスファターゼ−抗ウィルスＩ
ｇＧ抗体から成る群より選択される請求項３９記載の免
疫酵素試験用キット。
【請求項４４】ＨＲＰＯに対する指示薬がＡＥＣであ
る請求項４３記載の免疫酵素試験用キット。
【請求項４５】検出されるウィルス抗体が、本質的に
ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＨＴＬＶ−１、及びＳＩＶ−
ＩＩＩから成る群由来のものである請求項３９記載の免
疫酵素試験用キット。
【請求項４６】次のものから構成される、血液または
血液成分中のＨＩＶ−１抗体の検出に用いる免疫酵素試
験用キット：（ａ）Ｃｌｌ−８細胞及びＣＭ−１細胞から成る群より
選択される細胞が固定されている支持体。ただし、該細
胞は、ＨＩＶ−１により感染され、５ｎｇ／ｍｌコルチ
ゾン、５ｎｇ／ｍｌＴＰＡ、及び２ｍＭ酪酸から成る誘
導物質で活性化されている。（ｂ）該抗体に結合でき、かつ指示薬ＡＥＣ中の色の変
化を誘導できるＨＲＰＯ−ＳＰＡ結合体を有する第１容
器。（ｃ）ＨＲＰＯに対するＡＥＣ指示薬を有する第２容
器。
【請求項４７】ＨＩＶ−１ウィルスがＨＩＶ−１Ａｃ
単離物由来である請求項４６記載の免疫酵素試験用キッ
ト。
【請求項４８】次のものから構成される、試料中の被
験エボラウィルスに対する抗体の検出に用いる免疫酵素
試験用キット：（ａ）Ｖｅｒｏ細胞が固定されている支持体。ただし、
該Ｖｅｒｏ細胞は、少なくともその一部分が該ウィルス
により感染されている。（ｂ）該抗体に結合でき、かつ指示薬の色の変化を誘導
できる結合体を有する第１容器。（ｃ）該結合体に対する指示薬を有する第２容器。
【請求項４９】結合体がＨＲＰＯ−ＳＰＡ、ＨＲＰＯ
−抗ウィルスＩｇＧ抗体、フォスファターゼ−ＳＰＡ、
及びフォスファターゼ−抗ウィルスＩｇＧ抗体から成る
群より選択される請求項４８記載の免疫酵素試験用キッ
ト。
【請求項５０】ＨＲＰＯに対する指示薬がＡＥＣであ
る請求項４９記載の免疫酵素試験用キット。
【請求項５１】次のものから構成される、試料中の被
験エプスタイン−バー−ウィルスに対する抗体の検出に
用いる免疫酵素試験キット：（ａ）Ｂ−細胞が固定されている支持体。ただし、該Ｂ
−細胞は、少なくともその一部分が該ウィルスにより感
染され、かつウィルスの細胞内蓄積、およびウィルス抗
原の細胞表面発現を促進することのできる誘導物質で活
性化されている。（ｂ）該抗体に結合でき、かつ指示薬の色の変化を誘導
できる結合体を有する第１容器。（ｃ）該結合体に対する指示薬を有する第２容器。
【請求項５２】Ｂ−細胞がＲａｊｉ細胞である請求項
５１記載の免疫酵素試験用キット。
【請求項５３】結合体がＨＲＰＯ−ＳＰＡ、ＨＲＰＯ
−抗ウィルスＩｇＧ抗体、フォスファターゼ−ＳＰＡ、
及びフォスファターゼ−抗ウィルスＩｇＧ抗体から成る
群より選択される請求項５１記載の免疫酵素試験用キッ
ト。
【請求項５４】ＨＲＰＯに対する指示薬がＡＥＣであ
る請求項５３記載の免疫酵素試験用キット。
【請求項５５】次のものから構成される、試料中のエ
プスタイン−バー−ウィルスに対する抗体の検出に用い
る免疫酵素試験用キット：（ａ）Ｂ−細胞が固定されている支持体。ただし、該Ｂ
−細胞は少なくともその一部分が該ウィルスにより感染
されている。（ｂ）該抗体に結合でき、かつ指示薬の色の変化を誘導
できる結合体を有する第１容器。（ｃ）該結合体に対する指示薬を有する第２容器。
【請求項５６】Ｂ−細胞がＢ９５−８細胞である請求
項５５記載の免疫酵素試験用キット。
【請求項５７】結合体がＨＲＰＯ−ＳＰＡ、ＨＲＰＯ
−抗ウィルスＩｇＧ抗体、フォスファターゼ−ＳＰＡ、
及びフォスファターゼ−抗ウィルスＩｇＧ抗体から成る
群より選択される請求項５５記載の免疫酵素試験用キッ
ト。
【請求項５８】ＨＲＰＯに対する指示薬がＡＥＣであ
る請求項５７記載の免疫酵素試験用キット。
【請求項５９】ウィルスで感染され、かつウィルスの
細胞内蓄積およびウィルス抗原の細胞表面発現を促進で
きる誘導物質で活性化されたＴ細胞を担持した基質から
成る、ウィルスに対する抗体の検出に適した免疫酵素試
験片。
【請求項６０】Ｔ−細胞がＣｌｌ−８細胞及びＣＭ−
１細胞から成る群から選択される請求項５９記載の免疫
酵素試験片。
【請求項６１】感染ウィルスが、本質的にＨＩＶ−
１、ＨＩＶ−２、ＨＴＬＶ−１、及びＳＩＶ−ＩＩＩか
ら成る群由来である請求項５９記載の免疫酵素試験片。
【請求項６２】ＨＩＶ−１ウィルスがＨＩＶ−１Ａｃ
単離物由来である請求項６１記載の免疫酵素試験片。
【請求項６３】エボラウィルスで感染されたＶｅｒｏ
細胞を担持した基質から成る、エボラウィルスに対する
抗体の検出に適した免疫酵素試験片。
【請求項６４】エプスタイン−バー−ウィルスで感染
され、かつウィルスの細胞内蓄積およびウィルス抗原の
細胞表面発現を促進できる誘導物質で活性化されたＢ−
細胞を担持した基質から成る、エプスタイン−バー−ウ
ィルスに対する抗体の検出に適した免疫酵素試験片。
【請求項６５】Ｂ−細胞がＲａｊｉ細胞である請求項
６４記載の免疫酵素試験片。
【請求項６６】エプスタイン−バー−ウィルスで感染
されたＢ−細胞を担持した基質から成る、エプスタイン
−バー−ウィルスに対する抗体の検出に適した免疫酵素
試験片。
【請求項６７】Ｂ−細胞がＢ９５−８細胞である請求
項６６記載の免疫酵素試験片。
【請求項６８】被験ウィルスを担持した基質から成
る、ウィルスに対する抗体の検出に適した免疫酵素試験
片。
【請求項６９】被験ウィルスが、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ
−２、ＨＴＬＶ−１、ＳＩＶ−ＩＩＩ、エボラ、及びエ
プスタイン−バー−ウィルスから成る群由来のものであ
る請求項６８記載の免疫酵素試験片。
【請求項７０】ＨＩＶ−１ウィルスがＨＩＶ−１Ａｃ
単離物由来である請求項６９記載の免疫酵素試験片。
【請求項７１】被験ウィルス由来の抗原を担持した基
質から成る、ウィルスに対する抗体の検出に適した免疫
酵素試験片。
【請求項７２】被験ウィルス由来の抗原が、ＨＩＶ−
１、ＨＩＶ−２、ＨＴＬＶ−１、ＳＩＶ−ＩＩＩ、エボ
ラ、及びエプスタイン−バー−ウィルスから成る群由来
のものである請求項７１記載の免疫酵素試験片。
【請求項７３】被験ウィルスがＨＩＶ−１、およびＨ
ＩＶ−１由来の抗原がｇｐ４１である請求項７１記載の
免疫酵素試験片。
【請求項７４】以下のものから構成される、被験ウィ
ルスに対する抗体の検出に適した免疫酵素試験片キッ
ト：（ａ）被験ウィルス由来の抗原を担持した基質から成
る、ウィルスに対する抗体の検出に適した免疫酵素試験
片。（ｂ）該抗体に結合でき、かつ指示薬の色の変化を誘導
できる結合体を有する第１容器。（ｃ）該結合体に対する指示薬を有する第２容器。
【請求項７５】以下のものから構成される、ＨＩＶ−
１ウィルスに対する抗体の検出に適した免疫酵素試験片
キット：（ａ）その上に吸着したｇｐ４１を有する基質から成る
免疫酵素試験片。（ｂ）該抗体に結合できるＨＲＰＯ−ＳＰＡ結合体を有
する第１容器。（ｃ）ＨＲＰＯに対するＡＥＣ指示薬を有する第２容
器。
【請求項７６】ｇｐ４１に対するＨＩＶ−１遺伝子を
担持する組換えベクターｐＢＶ２２１（ＡＴＣＣ７５
１０６）。
【請求項７７】ｇｐ４１に対するＨＩＶ−１遺伝子を
担持する組換えベクターｐＢＶ２２１で形質転換された
Ｅ．ｃｏｌｉ細胞株。
【請求項７８】ｇｐ４１に対するＨＩＶ−１遺伝子を
担持する組換えベクターｐＢＶ２２１で形質転換された
Ｅ．ｃｏｌｉ細胞株によるｇｐ４１蛋白質の生産。