JPS61114166A - ウイルス感染細胞固定プレ−ト - Google Patents
ウイルス感染細胞固定プレ−トInfo
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- JPS61114166A JPS61114166A JP23590984A JP23590984A JPS61114166A JP S61114166 A JPS61114166 A JP S61114166A JP 23590984 A JP23590984 A JP 23590984A JP 23590984 A JP23590984 A JP 23590984A JP S61114166 A JPS61114166 A JP S61114166A
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- virus
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- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、新規ウィルス感染細胞固定プレート、更に詳
しくはウィルスを感染させた組織培養細胞を蛋白質分解
酵素またはエチレンジアミン四酢酸（Ｅｔｈｙｌ＊ｎｅ
ｄｌａｍｌｎｅｔｅｔｒａａｃｅｔｌｃａｃｉｄ ＋以
下ＥＤ’ｉ’ムと記す）で処理した後、ガラスまたはシ
ラスチック上に塗布し、乾燥仮固定したスライドに関す
るものである。
しくはウィルスを感染させた組織培養細胞を蛋白質分解
酵素またはエチレンジアミン四酢酸（Ｅｔｈｙｌ＊ｎｅ
ｄｌａｍｌｎｅｔｅｔｒａａｃｅｔｌｃａｃｉｄ ＋以
下ＥＤ’ｉ’ムと記す）で処理した後、ガラスまたはシ
ラスチック上に塗布し、乾燥仮固定したスライドに関す
るものである。
従来、ウィルス病の崩清学的診断法としては、袖体結合
反応法、赤崩球凝集抑制反応法、中和試験法、螢光抗体
法が知られている（金井泉、金井正光編、臨床検査法提
要、２８版、ｐ、ｘｘ−３５、金属出版、１９７８年）
。
反応法、赤崩球凝集抑制反応法、中和試験法、螢光抗体
法が知られている（金井泉、金井正光編、臨床検査法提
要、２８版、ｐ、ｘｘ−３５、金属出版、１９７８年）
。
これらはいずれも患者崩清中の抗ウイルス抗体を検出ま
たは力価を測定する方法で、患者崩清中に抗ウイルス抗
体の上昇があれば、そのウィルスの感染があったことを
診断することができる。
たは力価を測定する方法で、患者崩清中に抗ウイルス抗
体の上昇があれば、そのウィルスの感染があったことを
診断することができる。
しかし々がら、補体結合反応法は、ウィルスの種類Ｋか
かわらず術式が同一であるという利点があるが、赤廁球
凝集抑制反応法より感度が鈍く、新鮮な赤柚球を必要と
する欠点がある。赤泊球凝集抑制反応法は、カオリン処
理や過ヨウ素酸処理などにより患者力漕中に含有される
赤崩球凝集抑制物質や自然凝集素を除去しなければなら
ないと共に、ガチョウ赤崩球やミドリザル赤崩球等の特
殊な赤柚球を必要とする欠点がある。捷た中和試験法は
、結果がわかるまでに日数がかかるという欠点がある。
かわらず術式が同一であるという利点があるが、赤廁球
凝集抑制反応法より感度が鈍く、新鮮な赤柚球を必要と
する欠点がある。赤泊球凝集抑制反応法は、カオリン処
理や過ヨウ素酸処理などにより患者力漕中に含有される
赤崩球凝集抑制物質や自然凝集素を除去しなければなら
ないと共に、ガチョウ赤崩球やミドリザル赤崩球等の特
殊な赤柚球を必要とする欠点がある。捷た中和試験法は
、結果がわかるまでに日数がかかるという欠点がある。
螢光抗体法は螢光標識抗体のａ類をかえることにより、
患者面清中のＩｇＭ、 ＩｇＧ。
患者面清中のＩｇＭ、 ＩｇＧ。
ＩｇＥ抗体を測定できる長所がある。しかし、従来の螢
光抗体法では、抗原としてカバースリツノ上に組織培養
細胞を付着させたうえでウィルスを感染させたウィルス
感染細胞付着カバーを使用しているが、このものは作製
する方法が煩雑で量産に適さず、また使用時においても
カバースリツノなので不便であった。
光抗体法では、抗原としてカバースリツノ上に組織培養
細胞を付着させたうえでウィルスを感染させたウィルス
感染細胞付着カバーを使用しているが、このものは作製
する方法が煩雑で量産に適さず、また使用時においても
カバースリツノなので不便であった。
本発明者は、この点を改良すべく鋭意研究をおこなった
結果、本発明を完成した。
結果、本発明を完成した。
すなわち、ウィルスを感染させた組織培養細胞を蛋白質
分解酵素またはエチレンジアミン四酢酸で処理した後、
ガラスまたはプラスチックプレート上に固定して得られ
る。ウィルス感染細胞固定プレートを提供するもの゛で
ある。
分解酵素またはエチレンジアミン四酢酸で処理した後、
ガラスまたはプラスチックプレート上に固定して得られ
る。ウィルス感染細胞固定プレートを提供するもの゛で
ある。
本発明のウィルス感染細胞固定プレートは量産可能で使
いやすく、螢光抗体法または酵素抗体法の抗原として有
利に使用できる。
いやすく、螢光抗体法または酵素抗体法の抗原として有
利に使用できる。
本発明のウィルス感染１ｌｆＵ胞固定ゾレートは次の如
くして製造される。ウィルスが感染する細胞、例えば、
ましんウィルスの場合はＰＬ細胞、ＨＥｐ−２細胞、Ｈ
ｅＬａ細胞、Ｖｓ ｒｏ細胞など；風疹ウィルスの場合
はＭｅｒｅ細胞、ＢＨＫ−２１細胞、ＲＫ −１３細胞
など；単純性ヘルペスウィルスの場合はＶｌｌ ｒｅ細
胞、ＨｅＬａ細胞、ＨＩＥｐ−２Ｍ胞、ＢＨＫ細胞、Ｇ
ＭＫ細胞など；サイトメガロウィルスの場合はＨＥＬ細
胞、ＨＥ１１胞など；アデノウィルスの場合はＨＢｐ
−２細胞、Ｈ＠Ｌａ細胞、ＫＢ細胞など；ワクチニアウ
ィルスの場合にはＢＨＫ −２１細胞、ＣＥＴＣ細胞な
ど；水痘。
くして製造される。ウィルスが感染する細胞、例えば、
ましんウィルスの場合はＰＬ細胞、ＨＥｐ−２細胞、Ｈ
ｅＬａ細胞、Ｖｓ ｒｏ細胞など；風疹ウィルスの場合
はＭｅｒｅ細胞、ＢＨＫ−２１細胞、ＲＫ −１３細胞
など；単純性ヘルペスウィルスの場合はＶｌｌ ｒｅ細
胞、ＨｅＬａ細胞、ＨＩＥｐ−２Ｍ胞、ＢＨＫ細胞、Ｇ
ＭＫ細胞など；サイトメガロウィルスの場合はＨＥＬ細
胞、ＨＥ１１胞など；アデノウィルスの場合はＨＢｐ
−２細胞、Ｈ＠Ｌａ細胞、ＫＢ細胞など；ワクチニアウ
ィルスの場合にはＢＨＫ −２１細胞、ＣＥＴＣ細胞な
ど；水痘。
帯状ヘルペスの場合はＨＥＬ細胞、ＨＥＦＭ胞々どを２
０万〜４０万個／１ｎｌで培養後、２４〜９６時間後に
ウィルスをＭＯＩｏ、０５〜０．２で感染きせる。さら
に６〜９６時間培養後、培地を捨て、細胞層を燐酸緩衝
生理液で洗浄後０．０５〜０．３％のトリジシン溶液ま
たはＥＤＴＡ溶液またはゾロナーゼ溶液で洗い、１〜２
０分室温ないし３７℃で放置し、細胞層をばらばらの細
胞にする。細胞を燐酸緩衝生理液（以下ＰＢＳ ）で遠
心洗浄後細胞数を１ｆｆｉ／ＰＢＳ当りｌＸｌ０’〜５
ｘ１ｏ’に調整する。
０万〜４０万個／１ｎｌで培養後、２４〜９６時間後に
ウィルスをＭＯＩｏ、０５〜０．２で感染きせる。さら
に６〜９６時間培養後、培地を捨て、細胞層を燐酸緩衝
生理液で洗浄後０．０５〜０．３％のトリジシン溶液ま
たはＥＤＴＡ溶液またはゾロナーゼ溶液で洗い、１〜２
０分室温ないし３７℃で放置し、細胞層をばらばらの細
胞にする。細胞を燐酸緩衝生理液（以下ＰＢＳ ）で遠
心洗浄後細胞数を１ｆｆｉ／ＰＢＳ当りｌＸｌ０’〜５
ｘ１ｏ’に調整する。
細胞浮遊液をスライドガラス土に数ケ所滴下する。この
時スライドガラスに限らず、組織培養用シラスチック性
９６穴ゾレートやテラサキゾレートを用いてもよい。望
ましくは特開昭５８−１６８０２８号公報記載の顕微鏡
用スライドグラスを使用するのが好ましい。滴下した細
胞を２〜２４時間風乾後アセトンまたはエタノールまた
は四塩化炭素で１０〜６゜分固定後さらに２〜２４時間
風乾し、−２０℃以下に保存する。
時スライドガラスに限らず、組織培養用シラスチック性
９６穴ゾレートやテラサキゾレートを用いてもよい。望
ましくは特開昭５８−１６８０２８号公報記載の顕微鏡
用スライドグラスを使用するのが好ましい。滴下した細
胞を２〜２４時間風乾後アセトンまたはエタノールまた
は四塩化炭素で１０〜６゜分固定後さらに２〜２４時間
風乾し、−２０℃以下に保存する。
次に実施例を挙げて本発明を説明するＯ実施例１
ましんウィルス持続感染Ｈａ Ｌ＆細胞を２０万〜２５
万／−で培養する。この時培地は１０％牛脂児崩清入り
ＭＥＭ培地を使う。細胞状態により２４〜７２時間培養
後培地を捨て、細胞層をＰＢＳで２回洗浄後０．２５％
ト１ノ。
万／−で培養する。この時培地は１０％牛脂児崩清入り
ＭＥＭ培地を使う。細胞状態により２４〜７２時間培養
後培地を捨て、細胞層をＰＢＳで２回洗浄後０．２５％
ト１ノ。
ゾシン溶液を細胞にかけ、ただちにトＩＪゾシン溶液を
捨てる。細胞がはがれてくるまで数分放置後ＰＢＳ ｉ
たは培地を加え細胞浮遊液にする。細胞をＰＢＳで２回
遠心洗浄後細胞数をＰＢＳ １ ｔｎｌ幽り２ Ｘ １
０’個に調整する。顕微鏡用スライドグラスの穴に細胞
浮遊液を滴下し２時間風乾板アセトンに６０分つけ細胞
を固定し、さらに２時間風乾後−２０℃に保存する。以
上のようにして作製したウィルス感染細胞固定プレート
を使用して螢光抗体法で測定した患者崩清中の抗ましん
ウィルス抗体力価と、既知の赤怖球凝集抑制反応法で測
定した同崩清中の抗体力価の結果を第１図に示す。両者
の測定結果はよく相関していた。
捨てる。細胞がはがれてくるまで数分放置後ＰＢＳ ｉ
たは培地を加え細胞浮遊液にする。細胞をＰＢＳで２回
遠心洗浄後細胞数をＰＢＳ １ ｔｎｌ幽り２ Ｘ １
０’個に調整する。顕微鏡用スライドグラスの穴に細胞
浮遊液を滴下し２時間風乾板アセトンに６０分つけ細胞
を固定し、さらに２時間風乾後−２０℃に保存する。以
上のようにして作製したウィルス感染細胞固定プレート
を使用して螢光抗体法で測定した患者崩清中の抗ましん
ウィルス抗体力価と、既知の赤怖球凝集抑制反応法で測
定した同崩清中の抗体力価の結果を第１図に示す。両者
の測定結果はよく相関していた。
実施例２
Ｖ＊ｒｏ細胞２〜２．５ Ｘ １０り禰を１０％牛脂児
崩清含有ＭＥＭ培地で７２時間培養後風疹ウィルスをＭ
ＯＩ Ｏ，１で感染きせる。さらに７２〜９６時間培
養後培地を捨て、細胞層をＰＢＳで２回洗浄後０．２５
％トリグシン溶液を細胞に１かけただちにトリジシン溶
液を捨でる。細胞がはがれてくるまで数分放置後ＰＢＳ
または培地を加え細胞浮遊液にする。細胞をＰＢＳで２
回遠心洗浄後細胞数をＰＢＳｌｊｌ！／轟り２ ｘ １
０’個に調整する。顕微鏡用スライドグラスの穴に細胞
浮遊液を滴下し４時間風乾後アセトンに６０分つけ細胞
を固定し、さらに−晩風乾後−２０℃に保存する。以上
のようにして作製したウィルス感染細胞固定プレートを
使用して螢光抗体法で測定した患者崩清中の抗風疹ウィ
ルス抗体力価と一既知の赤崩球凝集抑制反応法で測定し
た同崩清中の抗体力価の結果を第２図に示す。
崩清含有ＭＥＭ培地で７２時間培養後風疹ウィルスをＭ
ＯＩ Ｏ，１で感染きせる。さらに７２〜９６時間培
養後培地を捨て、細胞層をＰＢＳで２回洗浄後０．２５
％トリグシン溶液を細胞に１かけただちにトリジシン溶
液を捨でる。細胞がはがれてくるまで数分放置後ＰＢＳ
または培地を加え細胞浮遊液にする。細胞をＰＢＳで２
回遠心洗浄後細胞数をＰＢＳｌｊｌ！／轟り２ ｘ １
０’個に調整する。顕微鏡用スライドグラスの穴に細胞
浮遊液を滴下し４時間風乾後アセトンに６０分つけ細胞
を固定し、さらに−晩風乾後−２０℃に保存する。以上
のようにして作製したウィルス感染細胞固定プレートを
使用して螢光抗体法で測定した患者崩清中の抗風疹ウィ
ルス抗体力価と一既知の赤崩球凝集抑制反応法で測定し
た同崩清中の抗体力価の結果を第２図に示す。
実施例３
Ｖａｒｏ細胞２〜２５×１０Ｉ／１ｎｌをｌθ％牛脂児
怖清含有ＭＥＭ培地で７２時間培養後単純性ヘルペスウ
イルスをＭＯＴ ０．１で感染させる。
怖清含有ＭＥＭ培地で７２時間培養後単純性ヘルペスウ
イルスをＭＯＴ ０．１で感染させる。
てらに６〜８時間時間培養地培地て、細胞層をＰＢＳで
２回洗浄徒Ｑ、２５％トリゾシン溶液を細胞にかけただ
ちにトリジシン溶液を捨てる。細胞がはがれてくるまで
数分放置後ＰＢ８または培地を加え細胞浮遊液にする。
２回洗浄徒Ｑ、２５％トリゾシン溶液を細胞にかけただ
ちにトリジシン溶液を捨てる。細胞がはがれてくるまで
数分放置後ＰＢ８または培地を加え細胞浮遊液にする。
細胞をＰＢＳで２回遠心洗浄後細胞数（ｉ−ＰＢＳ１−
当り２ ｘ １ ｏ’個に調整する。顕微鏡用スライド
グラスの穴に細胞浮遊液を滴下し、−晩風乾彼アセトン
に６０分つけ細胞を固定し、さらに４時間風乾後−２０
℃に保存する。以上のようにして作製したウィルス感染
細胞固定プレートを使用して螢光抗体法で測定した患者
崩清中の抗単純性ヘルペスウィルス抗体力価と、既知の
補体結合反応法で測定した同泊清中の抗体力価の結果を
第３図に示す。
当り２ ｘ １ ｏ’個に調整する。顕微鏡用スライド
グラスの穴に細胞浮遊液を滴下し、−晩風乾彼アセトン
に６０分つけ細胞を固定し、さらに４時間風乾後−２０
℃に保存する。以上のようにして作製したウィルス感染
細胞固定プレートを使用して螢光抗体法で測定した患者
崩清中の抗単純性ヘルペスウィルス抗体力価と、既知の
補体結合反応法で測定した同泊清中の抗体力価の結果を
第３図に示す。
実施例４
ＨＥＬ細胞３Ｘ１０’／ゴを１０％牛脂児崩清含有ＭＥ
Ｍ培地で９６時間培養後、０．２５％５％トリジシン用
させて細胞をけらけらＫする。トリジシンを遠心洗浄後
細胞を培地に浮遊させ、サイトメガロウィルスをＭＯＩ
Ｑ、１で感染させ、さら［９６時間培養する。細胞層を
ＰＢＳで２回洗浄後０，２５％５％トリジシン用きせ細
胞をばらばらにする。細胞をＰＢＳで２回遠心洗浄後細
胞数をＰＢＳ１１１ｔ！当り２Ｘ１０’個に調整する。
Ｍ培地で９６時間培養後、０．２５％５％トリジシン用
させて細胞をけらけらＫする。トリジシンを遠心洗浄後
細胞を培地に浮遊させ、サイトメガロウィルスをＭＯＩ
Ｑ、１で感染させ、さら［９６時間培養する。細胞層を
ＰＢＳで２回洗浄後０，２５％５％トリジシン用きせ細
胞をばらばらにする。細胞をＰＢＳで２回遠心洗浄後細
胞数をＰＢＳ１１１ｔ！当り２Ｘ１０’個に調整する。
顕微鏡用スライドグラスの穴に細胞浮遊液を滴下し、−
晩風乾後アセトンに６０分つけ細胞を固定し、さらに２
時間風乾後−２０℃に保存する。以上のようにして作製
したウィルス感染細胞固定プレートを使用して螢光抗体
法で測定した患者力清中の抗サイトメガロウィルス抗体
力価と、既知の補体結合反応法で測定した同簡清中の抗
体力価の結果を第４図に示す。
晩風乾後アセトンに６０分つけ細胞を固定し、さらに２
時間風乾後−２０℃に保存する。以上のようにして作製
したウィルス感染細胞固定プレートを使用して螢光抗体
法で測定した患者力清中の抗サイトメガロウィルス抗体
力価と、既知の補体結合反応法で測定した同簡清中の抗
体力価の結果を第４図に示す。
第１図及び第２図は赤崩球凝集抑制反応法により測定し
た患者崩清中の抗体力価と本発明方法により測定したそ
れとの相関を示す図面である。 第３図及び第４図は補体結合反応法により測定した患者
抑清中の抗体力価と本発明方法により測定したそれとの
相関を示す図面である。 以上
た患者崩清中の抗体力価と本発明方法により測定したそ
れとの相関を示す図面である。 第３図及び第４図は補体結合反応法により測定した患者
抑清中の抗体力価と本発明方法により測定したそれとの
相関を示す図面である。 以上
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 ウィルスを感染させた組織培養細胞を蛋白 質分解酵素またはエチレンジアミン四酢酸で処理した後
、ガラスまたはプラスチックプレート上に固定したこと
を特徴とするウィルス感染細胞固定プレート。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23590984A JPS61114166A (ja) | 1984-11-08 | 1984-11-08 | ウイルス感染細胞固定プレ−ト |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23590984A JPS61114166A (ja) | 1984-11-08 | 1984-11-08 | ウイルス感染細胞固定プレ−ト |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61114166A true JPS61114166A (ja) | 1986-05-31 |
Family
ID=16993030
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP23590984A Pending JPS61114166A (ja) | 1984-11-08 | 1984-11-08 | ウイルス感染細胞固定プレ−ト |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61114166A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63121753A (ja) * | 1986-11-10 | 1988-05-25 | Kachiku Eisei Shikenjo | 抗体検出法 |
| EP0495465A2 (en) * | 1991-01-15 | 1992-07-22 | Coulston International Corporation | Immuno-enzymatic test for the detection of viral antibody |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5685285A (en) * | 1979-11-28 | 1981-07-11 | Wellcome Found | Fixed monolayer tissue culture cell |
-
1984
- 1984-11-08 JP JP23590984A patent/JPS61114166A/ja active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5685285A (en) * | 1979-11-28 | 1981-07-11 | Wellcome Found | Fixed monolayer tissue culture cell |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63121753A (ja) * | 1986-11-10 | 1988-05-25 | Kachiku Eisei Shikenjo | 抗体検出法 |
| EP0495465A2 (en) * | 1991-01-15 | 1992-07-22 | Coulston International Corporation | Immuno-enzymatic test for the detection of viral antibody |
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