JPH05184389A - エナンチオマー純粋の開鎖状ｎ−アルキル−ｌまたはｄ−アミノ酸の製造方法およびそのようなエナンチオマー純粋の化合物 - Google Patents
エナンチオマー純粋の開鎖状ｎ−アルキル−ｌまたはｄ−アミノ酸の製造方法およびそのようなエナンチオマー純粋の化合物Info
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- JPH05184389A JPH05184389A JP4127042A JP12704292A JPH05184389A JP H05184389 A JPH05184389 A JP H05184389A JP 4127042 A JP4127042 A JP 4127042A JP 12704292 A JP12704292 A JP 12704292A JP H05184389 A JPH05184389 A JP H05184389A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 良好な収率で、かつ少なく安価な洗浄経費で
実施でき、工業製品としても適当であるエナンチオマー
純粋の開鎖状Ｎ−アルキル−ＬまたはＤ−アミノ酸を製
造する。 【構成】 エナンチオマー純粋のＮ−アシル−Ｎ−アル
キル−ＬまたはＤ−アミノ酸に調整された立体特異性ア
ミノアシラーゼを、ラセミ体の、開鎖状Ｎ−アシル−Ｎ
−アルキル−ＬまたはＤ−アミノ酸に作用させ、かつ得
られたエナンチオマー純粋の開鎖状Ｎ−アルキル−アミ
ノ酸または残留するエナンチオマー純粋のＮ−アシル−
Ｎ−アルキル−アミノ酸を分離する。
実施でき、工業製品としても適当であるエナンチオマー
純粋の開鎖状Ｎ−アルキル−ＬまたはＤ−アミノ酸を製
造する。 【構成】 エナンチオマー純粋のＮ−アシル−Ｎ−アル
キル−ＬまたはＤ−アミノ酸に調整された立体特異性ア
ミノアシラーゼを、ラセミ体の、開鎖状Ｎ−アシル−Ｎ
−アルキル−ＬまたはＤ−アミノ酸に作用させ、かつ得
られたエナンチオマー純粋の開鎖状Ｎ−アルキル−アミ
ノ酸または残留するエナンチオマー純粋のＮ−アシル−
Ｎ−アルキル−アミノ酸を分離する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、エナンチオマー純粋の
開鎖状Ｎ−アルキル−ＬまたはＤ−アミノ酸の製造方法
およびＮに遊離したＨまたはアシル基を有するエナンチ
オマー純粋のＮ−アルキル−アミノ酸に関する。
開鎖状Ｎ−アルキル−ＬまたはＤ−アミノ酸の製造方法
およびＮに遊離したＨまたはアシル基を有するエナンチ
オマー純粋のＮ−アルキル−アミノ酸に関する。
【０００２】
【従来の技術】そのような種類の化合物、特にＮ−メチ
ル−アミノ酸は、たとえばサイクロスポリンの成分であ
る。該化合物は、抗生物性および免疫抑制作用を示し、
かつこの理由から組織移植に頻繁に使用される環状ペプ
チドである。
ル−アミノ酸は、たとえばサイクロスポリンの成分であ
る。該化合物は、抗生物性および免疫抑制作用を示し、
かつこの理由から組織移植に頻繁に使用される環状ペプ
チドである。
【０００３】該化合物のラセミ体は、一般に、純粋化学
的方法で製造することができる。しかしながら該ラセミ
体の個々のエナンチオマーへの分離は、きわめて経費が
かかり、たとえば掌性（キラル）クロマトグラフィカラ
ムを介して実施しなければならない。これらのエナンチ
オマー純粋の化合物を製造するもう１つの方法は、遊離
したＬまたはＤ−アミノ酸を介して行い、引き続き該ア
ミノ酸をα−アミノ基でアルキル化し、かつ場合により
アシル化する。
的方法で製造することができる。しかしながら該ラセミ
体の個々のエナンチオマーへの分離は、きわめて経費が
かかり、たとえば掌性（キラル）クロマトグラフィカラ
ムを介して実施しなければならない。これらのエナンチ
オマー純粋の化合物を製造するもう１つの方法は、遊離
したＬまたはＤ−アミノ酸を介して行い、引き続き該ア
ミノ酸をα−アミノ基でアルキル化し、かつ場合により
アシル化する。
【０００４】しかしながらこの場合に、一方では収率を
著しく低下し、他方ではしばしば高い経費をかけてのみ
除去される多数の副生成物が生じる。
著しく低下し、他方ではしばしば高い経費をかけてのみ
除去される多数の副生成物が生じる。
【０００５】たとえばアシラーゼを用いたこれらの化合
物の酵素による製造は、使用されるアシラーゼの狭すぎ
る特異性において、従来絶えず失敗していた。アシラー
ゼＩは、たとえば Journal of the American Chemical
Society 75,918〜920(1953)および111,6354〜6364(198
9)に記載されているように、アシル化されたα−アミノ
酸がアシル化されたアミノ基に遊離した水素原子を有す
る限り、アシル化されたα−アミノ酸のラセミ体分割に
適している。この場合に、該分割はＬ−特異性に行われ
るので、Ｎ−アシル−Ｄ−アミノ酸が分割されずに残留
し、たとえばクロマトグラフィにより、または析出によ
り、生じたＬ−アミノ酸から分離することができる。た
とえば豚の腎臓またはアスペルギルスから単離できるア
シラーゼＩは、確かに広範な基質特異性を示すが、しか
しＮ−アシル−Ｎ−アルキル−Ｄ，Ｌ−アミノ酸におい
ては全く活性を示さない。最近、ペプチド内の末端のプ
ロリンとＮ−アシルプロリンに、およびプロリンから変
化した環状のＮ−アシル化されたアミノ酸に特異性を有
する別のアシラーゼが発見された。これらの新規アシラ
ーゼは、特公昭６２−２３２３８１号公報（１９８
７）、Biochimica et Biophysica Acta，744(1983) 180
〜188 および欧州特許公開第０４１６２８２号明細書
に記載されている。開鎖状Ｎ−アシル−Ｎ−アルキル−
アミノ酸における基質特異性は、これらのアシラーゼか
ら公知でない。
物の酵素による製造は、使用されるアシラーゼの狭すぎ
る特異性において、従来絶えず失敗していた。アシラー
ゼＩは、たとえば Journal of the American Chemical
Society 75,918〜920(1953)および111,6354〜6364(198
9)に記載されているように、アシル化されたα−アミノ
酸がアシル化されたアミノ基に遊離した水素原子を有す
る限り、アシル化されたα−アミノ酸のラセミ体分割に
適している。この場合に、該分割はＬ−特異性に行われ
るので、Ｎ−アシル−Ｄ−アミノ酸が分割されずに残留
し、たとえばクロマトグラフィにより、または析出によ
り、生じたＬ−アミノ酸から分離することができる。た
とえば豚の腎臓またはアスペルギルスから単離できるア
シラーゼＩは、確かに広範な基質特異性を示すが、しか
しＮ−アシル−Ｎ−アルキル−Ｄ，Ｌ−アミノ酸におい
ては全く活性を示さない。最近、ペプチド内の末端のプ
ロリンとＮ−アシルプロリンに、およびプロリンから変
化した環状のＮ−アシル化されたアミノ酸に特異性を有
する別のアシラーゼが発見された。これらの新規アシラ
ーゼは、特公昭６２−２３２３８１号公報（１９８
７）、Biochimica et Biophysica Acta，744(1983) 180
〜188 および欧州特許公開第０４１６２８２号明細書
に記載されている。開鎖状Ｎ−アシル−Ｎ−アルキル−
アミノ酸における基質特異性は、これらのアシラーゼか
ら公知でない。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、良好
な収率で、かつより少ないまたは安価な洗浄経費で実施
すべきであり、しかも工業製品として適当であるべき、
エナンチオマー純粋の開鎖状Ｎ−アルキル−ＬまたはＤ
−アミノ酸の製造方法を提供することであった。
な収率で、かつより少ないまたは安価な洗浄経費で実施
すべきであり、しかも工業製品として適当であるべき、
エナンチオマー純粋の開鎖状Ｎ−アルキル−ＬまたはＤ
−アミノ酸の製造方法を提供することであった。
【０００７】
【課題を解決するための手段】前記課題は、エナンチオ
マー純粋のＮ−アシル−Ｎ−アルキル−ＬまたはＤ−ア
ミノ酸に調整された立体特異性のアミノアシラーゼを、
ラセミ体の、開鎖状Ｎ−アシル−Ｎ−アルキル−アミノ
酸に作用させ、かつ得られたエナンチオマー純粋の開鎖
状Ｎ−アルキル−アミノ酸または残留するエナンチオマ
ー純粋のＮ−アシル−Ｎ−アルキル−アミノ酸を分離す
ることにより解決される。
マー純粋のＮ−アシル−Ｎ−アルキル−ＬまたはＤ−ア
ミノ酸に調整された立体特異性のアミノアシラーゼを、
ラセミ体の、開鎖状Ｎ−アシル−Ｎ−アルキル−アミノ
酸に作用させ、かつ得られたエナンチオマー純粋の開鎖
状Ｎ−アルキル−アミノ酸または残留するエナンチオマ
ー純粋のＮ−アシル−Ｎ−アルキル−アミノ酸を分離す
ることにより解決される。
【０００８】本発明は、エナンチオマー純粋の開鎖状Ｎ
−アルキル−アミノ酸を収得する全く新しい方法を提供
し、その際該アミノ酸は、所望の製品に応じてなおＮ−
アシル基を有することもできる。本発明においては、特
に好ましいエナンチオマー純粋のＮ−アルキル−アミノ
酸に菌株をスクリーニングする必要がなく、容易に入手
可能なＮ−アシル−Ｎ−アルキル−アミノ酸でスクリー
ニングできることが有利である。この場合に、たとえば
特にＮ−アシル化されたアミノ酸の場合に（プロリンを
除いて）スクリーニング基質がＮに遊離したＨ原子を全
く有しないことが重要である。この場合に、開鎖状化合
物のほかに、Ｎ−アルキル基が直接またはヘテロ原子を
介して、酸官能基を有するほかのＮ−アルキル基と結合
している複素環式化合物も適当である。特に該化合物に
おいては、そのような複素環のアミノ酸、有利にはプロ
リンでスクリーニングすることができ、かつ次いでその
ように得られた酵素を開鎖状Ｎ−アルキル−Ｌ，Ｄ−ア
ミノ酸の立体特異的脱アシル化に使用できる事情を利用
することができる。Ｎ−アシル化された、スクリーニン
グに有利であるエナンチオマー純粋のプロリンは、容易
に入手可能であり、かつ適当なスクリーニング基質であ
るので、本発明にもとづく方法は、全体として、立体特
異性の開鎖状Ｎ−アルキル−アミノ酸を製造する新規の
かつきわめて簡単な方法を可能にする。
−アルキル−アミノ酸を収得する全く新しい方法を提供
し、その際該アミノ酸は、所望の製品に応じてなおＮ−
アシル基を有することもできる。本発明においては、特
に好ましいエナンチオマー純粋のＮ−アルキル−アミノ
酸に菌株をスクリーニングする必要がなく、容易に入手
可能なＮ−アシル−Ｎ−アルキル−アミノ酸でスクリー
ニングできることが有利である。この場合に、たとえば
特にＮ−アシル化されたアミノ酸の場合に（プロリンを
除いて）スクリーニング基質がＮに遊離したＨ原子を全
く有しないことが重要である。この場合に、開鎖状化合
物のほかに、Ｎ−アルキル基が直接またはヘテロ原子を
介して、酸官能基を有するほかのＮ−アルキル基と結合
している複素環式化合物も適当である。特に該化合物に
おいては、そのような複素環のアミノ酸、有利にはプロ
リンでスクリーニングすることができ、かつ次いでその
ように得られた酵素を開鎖状Ｎ−アルキル−Ｌ，Ｄ−ア
ミノ酸の立体特異的脱アシル化に使用できる事情を利用
することができる。Ｎ−アシル化された、スクリーニン
グに有利であるエナンチオマー純粋のプロリンは、容易
に入手可能であり、かつ適当なスクリーニング基質であ
るので、本発明にもとづく方法は、全体として、立体特
異性の開鎖状Ｎ−アルキル−アミノ酸を製造する新規の
かつきわめて簡単な方法を可能にする。
【０００９】スクリーニングの際には、一般に、化合物
を専ら炭素源および／または窒素源として、酵素反応に
到達すべきである栄養媒体中で使用する。まず濃縮培地
を開始し、かつ提供された化合物を生長のために利用で
きる、微生物にスクリーニングする。一般的な微生物学
的技術による種々の微生物の分離および洗浄後、そのよ
うに得られた純粋培養体を再び培養し、細胞を洗浄し、
かつたとえばボールミルを使用した機械処理により、ま
たは超音波により砕開する。遠心分離による菌体残滓の
分離後、所望の酵素を含有すべきである粗ホモジネート
が得られる。
を専ら炭素源および／または窒素源として、酵素反応に
到達すべきである栄養媒体中で使用する。まず濃縮培地
を開始し、かつ提供された化合物を生長のために利用で
きる、微生物にスクリーニングする。一般的な微生物学
的技術による種々の微生物の分離および洗浄後、そのよ
うに得られた純粋培養体を再び培養し、細胞を洗浄し、
かつたとえばボールミルを使用した機械処理により、ま
たは超音波により砕開する。遠心分離による菌体残滓の
分離後、所望の酵素を含有すべきである粗ホモジネート
が得られる。
【００１０】この場合に、本発明にもとづく方法を実施
するために、欧州特許公開第０４１６２８２号明細書か
ら公知のＮ−アシル−Ｌ−プロリンアシラーゼを使用し
た。該プロリンアシラーゼは、コマモナス テストステ
ロニ（Comamonas testosteroni） ＤＳＭ ５４１６か
ら、たとえば欧州特許公開第０４１６２８２号明細書に
詳細に記載されているＮ−アセチル−Ｌ−プロリンを使
用したスクリーニングにより入手可能である。
するために、欧州特許公開第０４１６２８２号明細書か
ら公知のＮ−アシル−Ｌ−プロリンアシラーゼを使用し
た。該プロリンアシラーゼは、コマモナス テストステ
ロニ（Comamonas testosteroni） ＤＳＭ ５４１６か
ら、たとえば欧州特許公開第０４１６２８２号明細書に
詳細に記載されているＮ−アセチル−Ｌ−プロリンを使
用したスクリーニングにより入手可能である。
【００１１】ところで、この酵素が、本発明にもとづ
き、エナンチオマー純粋の開鎖状Ｎ−アルキル−アミノ
酸を製造するために使用することができ、従って該アミ
ノ酸はこの場合に、複素環の、Ｎ−アセチル化されたア
ミノ酸にスクリーニングするにもかかわらず、簡単な方
法で得られることが判明した。この場合に、アミノアシ
ラーゼは、スクリーニングの際に、相当する開鎖状Ｎ−
アシル−Ｎ−アルキル−アミノ酸に調整する必要がな
く、Ｎ−アシル−プロリンに調整することができ、その
際、基質特異性が更に、相当する開鎖状アミノ酸を排除
しないことが特に重要である。従って、本発明にもとづ
く方法のために、特に、公知のまたはスクリーニングに
より新たに発見されたプロリンアシラーゼを使用するこ
とができる。
き、エナンチオマー純粋の開鎖状Ｎ−アルキル−アミノ
酸を製造するために使用することができ、従って該アミ
ノ酸はこの場合に、複素環の、Ｎ−アセチル化されたア
ミノ酸にスクリーニングするにもかかわらず、簡単な方
法で得られることが判明した。この場合に、アミノアシ
ラーゼは、スクリーニングの際に、相当する開鎖状Ｎ−
アシル−Ｎ−アルキル−アミノ酸に調整する必要がな
く、Ｎ−アシル−プロリンに調整することができ、その
際、基質特異性が更に、相当する開鎖状アミノ酸を排除
しないことが特に重要である。従って、本発明にもとづ
く方法のために、特に、公知のまたはスクリーニングに
より新たに発見されたプロリンアシラーゼを使用するこ
とができる。
【００１２】他方、本発明にもとづく方法のために、一
般式：
般式：
【００１３】
【化４】
【００１４】［式中、Ｒ1は、ＣＯＣＨ3，ＣＯＣＨ2Ｃ
ｌを表し、Ｒ2は、ＣＨ3，Ｃ2Ｈ5，Ｃ3Ｈ7を表し、Ｒ3
は、Ｈ，ＣＨ3，ＣＨ3−ＣＨ−ＣＨ3，ＣＨ2−Ｃ（ＣＨ
3）Ｈ−ＣＨ3，ＣＨ3−ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ3，ＣＨ2−Ｏ
Ｈ，ＨＯ−ＣＨ−ＣＨ3，ＣＨ2−ＳＨ，ＣＨ2−ＣＨ2−
Ｓ−ＣＨ3，ＣＨ2−ＣＯＯＨ，ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＯＯ
Ｈ，ＣＨ2−ＣＯＮＨ2，ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＯＮＨ2，Ｃ
Ｈ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ2，
ｌを表し、Ｒ2は、ＣＨ3，Ｃ2Ｈ5，Ｃ3Ｈ7を表し、Ｒ3
は、Ｈ，ＣＨ3，ＣＨ3−ＣＨ−ＣＨ3，ＣＨ2−Ｃ（ＣＨ
3）Ｈ−ＣＨ3，ＣＨ3−ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ3，ＣＨ2−Ｏ
Ｈ，ＨＯ−ＣＨ−ＣＨ3，ＣＨ2−ＳＨ，ＣＨ2−ＣＨ2−
Ｓ−ＣＨ3，ＣＨ2−ＣＯＯＨ，ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＯＯ
Ｈ，ＣＨ2−ＣＯＮＨ2，ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＯＮＨ2，Ｃ
Ｈ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ2，
【００１５】
【化５】
【００１６】を表す］で示されるような、ほかの簡単な
分子を使用したスクリーニングにより得られる別のアシ
ラーゼを使用することもできる。
分子を使用したスクリーニングにより得られる別のアシ
ラーゼを使用することもできる。
【００１７】一般には、Ｌ−特異性のアシラーゼを、本
発明にもとづく方法を実施するために探求し、使用す
る、それというのも、該アシラーゼはたいていは容易に
入手可能であるからである。更に、相当するＮ−アルキ
ル−Ｄ−アミノ酸は、残留するエナンチオマー純粋のＮ
−アシル−Ｎ−アルキル−Ｄ−アミノ酸の化学的加水分
解（脱アシル化）により容易に入手可能である。脱アシ
ル化は、文献に公知の方法により化学的に酸またはアル
カリ媒体中で、形状を維持して実施し、相当するエナン
チオマー純粋のＮ−アルキル−アミノ酸を生成すること
ができる。
発明にもとづく方法を実施するために探求し、使用す
る、それというのも、該アシラーゼはたいていは容易に
入手可能であるからである。更に、相当するＮ−アルキ
ル−Ｄ−アミノ酸は、残留するエナンチオマー純粋のＮ
−アシル−Ｎ−アルキル−Ｄ−アミノ酸の化学的加水分
解（脱アシル化）により容易に入手可能である。脱アシ
ル化は、文献に公知の方法により化学的に酸またはアル
カリ媒体中で、形状を維持して実施し、相当するエナン
チオマー純粋のＮ−アルキル−アミノ酸を生成すること
ができる。
【００１８】
【実施例】本発明を以下の実施例により詳細に説明す
る。
る。
【００１９】例１（アシラーゼの活性測定）： Ｎ−クロロアセチル−Ｎ−メチル−Ｌ−アラニンの加水
分解、 ０．１Ｍトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．０中のＮ−クロロア
セチル−Ｎ−メチル−Ｌ−アラニン３０ｍＭ溶液１ｍｌ
を、３０℃に温度調節した反応容器に導入し、０．１Ｍ
トリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．０、１．９９ｍｌと混合し
た。反応を、コマモナス、テストステロニ ＤＳＭ ５
４１６から由来する、Ｎ−アシル−Ｌ−プロリン−アシ
ラーゼ０．０１ｍｌ（０．２３単位に相当）およびプロ
テイン０．２μｇを加えることにより開始した。１単位
は、Ｎ−アセチル−Ｌ−プロリン１マイクロモルが３０
℃およびｐＨ７．０で１分間に反応する酵素の量として
定義される。反応経過を把握するために、異なる時点で
試料を取り出し、２Ｎ ＨＣｌで１：２に混合し、引き
続きＲＰ−８型カラム（２５０×４ｍｍ）を使用してＨ
ＰＬＣにより分析した。流動速度２．２ｍｌ／分および
カラム温度４０℃で、０．０１Ｍヘプタンスルホン酸
（８５％のＨ3ＰＯ4でｐＨ２．２に調整した）中のアセ
トニトリル７％（ｖ／ｖ）での溶離後、Ｎ−クロロアセ
チル−Ｎ−メチル−Ｌ−アラニンの減少を２１０ｎｍで
のＵＶ吸収測定により検出した。反応時間６０分後、転
化率は１００％であった。
分解、 ０．１Ｍトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．０中のＮ−クロロア
セチル−Ｎ−メチル−Ｌ−アラニン３０ｍＭ溶液１ｍｌ
を、３０℃に温度調節した反応容器に導入し、０．１Ｍ
トリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．０、１．９９ｍｌと混合し
た。反応を、コマモナス、テストステロニ ＤＳＭ ５
４１６から由来する、Ｎ−アシル−Ｌ−プロリン−アシ
ラーゼ０．０１ｍｌ（０．２３単位に相当）およびプロ
テイン０．２μｇを加えることにより開始した。１単位
は、Ｎ−アセチル−Ｌ−プロリン１マイクロモルが３０
℃およびｐＨ７．０で１分間に反応する酵素の量として
定義される。反応経過を把握するために、異なる時点で
試料を取り出し、２Ｎ ＨＣｌで１：２に混合し、引き
続きＲＰ−８型カラム（２５０×４ｍｍ）を使用してＨ
ＰＬＣにより分析した。流動速度２．２ｍｌ／分および
カラム温度４０℃で、０．０１Ｍヘプタンスルホン酸
（８５％のＨ3ＰＯ4でｐＨ２．２に調整した）中のアセ
トニトリル７％（ｖ／ｖ）での溶離後、Ｎ−クロロアセ
チル−Ｎ−メチル−Ｌ−アラニンの減少を２１０ｎｍで
のＵＶ吸収測定により検出した。反応時間６０分後、転
化率は１００％であった。
【００２０】例２ Ｎ−クロロアセチル−Ｎ−メチル−Ｄ，Ｌ−アラニンの
加水分解、 例１に記載と同様の操作を繰り返した、ただし、反応混
合物は、０．１Ｍトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．０中のＮ−
クロロアセチル−Ｎ−メチル−Ｄ，Ｌ−アラニン６０ｍ
Ｍ溶液１ｍｌ、０．１Ｍトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．０、
１．９８ｍｌおよび酵素０．０２ｍｌ（０．４６単位に
相当）、およびプロテイン０．４μｇを含有していた。
反応時間６０分後転化率は４２％であり、１２０分後、
転化率は４３％であった。Ｎ−メチル−Ｌ−アラニンの
エナンチオマー純度は、Ｎ−トリフルオロアセチルメチ
ルエステル誘導体に誘導体化後、８９％（ｅｅ）以上で
あることが測定された。
加水分解、 例１に記載と同様の操作を繰り返した、ただし、反応混
合物は、０．１Ｍトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．０中のＮ−
クロロアセチル−Ｎ−メチル−Ｄ，Ｌ−アラニン６０ｍ
Ｍ溶液１ｍｌ、０．１Ｍトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．０、
１．９８ｍｌおよび酵素０．０２ｍｌ（０．４６単位に
相当）、およびプロテイン０．４μｇを含有していた。
反応時間６０分後転化率は４２％であり、１２０分後、
転化率は４３％であった。Ｎ−メチル−Ｌ−アラニンの
エナンチオマー純度は、Ｎ−トリフルオロアセチルメチ
ルエステル誘導体に誘導体化後、８９％（ｅｅ）以上で
あることが測定された。
【００２１】例３ Ｎ−クロロアセチル−Ｎ−メチル−Ｄ，Ｌ−２−アミノ
酪酸の加水分解、 例１に記載と同様の操作を繰り返した、ただし、反応混
合物は、０．１Ｍトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．０中のＮ−
クロロアセチル−Ｎ−メチル−Ｄ，Ｌ−２−アミノ酪酸
６０ｍＭ溶液１ｍｌ、０．１Ｍトリス−ＨＣｌ、ｐＨ
７．０、１．９０ｍｌおよび酵素０．１０ｍｌ（２．３
単位に相当）、およびプロテイン２μｇを含有してい
た。反応時間６０分後、転化率は４６％であり、１２０
分後、転化率は４９％であった。
酪酸の加水分解、 例１に記載と同様の操作を繰り返した、ただし、反応混
合物は、０．１Ｍトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．０中のＮ−
クロロアセチル−Ｎ−メチル−Ｄ，Ｌ−２−アミノ酪酸
６０ｍＭ溶液１ｍｌ、０．１Ｍトリス−ＨＣｌ、ｐＨ
７．０、１．９０ｍｌおよび酵素０．１０ｍｌ（２．３
単位に相当）、およびプロテイン２μｇを含有してい
た。反応時間６０分後、転化率は４６％であり、１２０
分後、転化率は４９％であった。
【００２２】例４ 種々のＮ−アシル−Ｎ−アルキル−Ｄ，Ｌ−アミノ酸に
対するＮ−アシル−Ｌ−プロリン−アシラーゼの基質特
異性、 例２および３に記載と同様の操作を繰返し、種々のＮ−
アシル−Ｎ−アルキル−Ｄ，Ｌ−アミノ酸に対する酵素
の相対活性を測定した。結果を第１表に示す。
対するＮ−アシル−Ｌ−プロリン−アシラーゼの基質特
異性、 例２および３に記載と同様の操作を繰返し、種々のＮ−
アシル−Ｎ−アルキル−Ｄ，Ｌ−アミノ酸に対する酵素
の相対活性を測定した。結果を第１表に示す。
【００２３】 第１表 基質（２０ミリモル） 活性（％） Ｎ−ＣｌＡｃ−Ｎ−メチル−Ｄ，Ｌ−アラニン １００ Ｎ−ＣｌＡｃ−Ｎ−エチル−Ｄ，Ｌ−アラニン ７１ Ｎ−ＣｌＡｃ−Ｎ−プロピル−Ｄ，Ｌ−アラニン ２３ Ｎ−ＣｌＡｃ−Ｎ−メチル−Ｄ，Ｌ−２−アミノ酪酸 ９ Ｎ−ＣｌＡｃ−Ｎ−エチル−Ｄ，Ｌ−２−アミノ酪酸 ２
Claims (10)
- 【請求項１】 エナンチオマー純粋の開鎖状Ｎ−アルキ
ル−ＬまたはＤ−アミノ酸の製造方法において、エナン
チオマー純粋のＮ−アシル−Ｎ−アルキル−ＬまたはＤ
−アミノ酸に調整された立体特異性のアミノアシラーゼ
を、ラセミ体の、開鎖状Ｎ−アシル−Ｎ−アルキル−ア
ミノ酸に作用させ、かつ得られたエナンチオマー純粋の
開鎖状Ｎ−アルキル−アミノ酸または残留するエナンチ
オマー純粋のＮ−アシル−Ｎ−アルキル−アミノ酸を分
離することを特徴とする、エナンチオマー純粋の開鎖状
Ｎ−アルキル−ＬまたはＤ−アミノ酸の製造方法。 - 【請求項２】 Ｎ−アシル−Ｎ−アルキル−アミノ酸を
用いた微生物のスクリーニングにより得られたアミノア
シラーゼを使用する請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 一般式： 【化１】 ［式中、 Ｒ1は、ＣＯＣＨ3，ＣＯＣＨ2Ｃｌを表し、 Ｒ2は、ＣＨ3，Ｃ2Ｈ5，Ｃ3Ｈ7を表し、 Ｒ3は、Ｈ，ＣＨ3，ＣＨ3−ＣＨ−ＣＨ3，ＣＨ2−Ｃ
（ＣＨ3）Ｈ−ＣＨ3，ＣＨ3−ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ3，Ｃ
Ｈ2−ＯＨ，ＨＯ−ＣＨ−ＣＨ3，ＣＨ2−ＳＨ，ＣＨ2−
ＣＨ2−Ｓ−ＣＨ3，ＣＨ2−ＣＯＯＨ，ＣＨ2−ＣＨ2−
ＣＯＯＨ，ＣＨ2−ＣＯＮＨ2，ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＯＮＨ
2，ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ2， 【化２】 を表すかまたはＲ2とＲ3はいっしょにＣＨ2−ＣＨ2−Ｃ
Ｈ2を表す］で示されるような簡単な分子を用いたスク
リーニングにより得られたアミノアシラーゼを使用する
請求項２記載の方法。 - 【請求項４】 エナンチオマー純粋のＮ−アシル−Ｎ−
アルキル−アミノ酸を用いた微生物のスクリーニングに
より得られたアミノアシラーゼを使用する請求項２また
は３に記載の方法。 - 【請求項５】 立体特異性のＮ−アシル−プロリンアシ
ラーゼを使用する請求項１から４までのいずれか１項記
載の方法。 - 【請求項６】 Ｌ−特異性のアシラーゼを使用する請求
項１から５までのいずれか１項記載の方法。 - 【請求項７】 コマモナス テストステロニ ＤＳＭ
５４１６からなるＬ−特異性のＮ−アシル−プロリンア
シラーゼを使用する請求項５または６に記載の方法。 - 【請求項８】 残留するエナンチオマー純粋のＮ−アシ
ル−Ｎ−アルキル−アミノ酸を脱アシル化する請求項１
から７までのいずれか１項記載の方法。 - 【請求項９】 請求項１から８までのいずれか１項記載
の方法により製造された、Ｎに遊離したＨまたはアシル
基を有するエナンチオマー純粋のＮ−アルキル−Ｌまた
はＤ−アミノ酸。 - 【請求項１０】 一般式： 【化３】 ［式中、 Ｒ1は、Ｈ，ＣＯＣＨ3，ＣＯＣＨ2Ｃｌを表し、 Ｒ2は、ＣＨ3，Ｃ2Ｈ5，Ｃ3Ｈ7を表し、 Ｒ3は、天然のアミノ酸の基を表す］で示される請求項
９記載のエナンチオマー純粋の化合物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4116980A DE4116980A1 (de) | 1991-05-24 | 1991-05-24 | Verfahren zur herstellung enantiomerenreiner offenkettiger n-alkyl-l oder d-aminosaeuren |
| DE4116980.8 | 1991-05-24 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05184389A true JPH05184389A (ja) | 1993-07-27 |
Family
ID=6432342
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4127042A Pending JPH05184389A (ja) | 1991-05-24 | 1992-05-20 | エナンチオマー純粋の開鎖状ｎ−アルキル−ｌまたはｄ−アミノ酸の製造方法およびそのようなエナンチオマー純粋の化合物 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5348882A (ja) |
| EP (1) | EP0514780A2 (ja) |
| JP (1) | JPH05184389A (ja) |
| CS (1) | CS152792A3 (ja) |
| DE (1) | DE4116980A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1213400A (zh) * | 1996-03-13 | 1999-04-07 | 隆萨股份公司 | N－保护d－脯氨酸衍生物的制备方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5417030B2 (ja) * | 1972-12-06 | 1979-06-27 | ||
| JPS59203494A (ja) * | 1983-05-04 | 1984-11-17 | Sawao Murao | Ｎα−カルボベンゾキシアミノ酸アミドヒドロラ−ゼおよびその製法 |
| JPH0783712B2 (ja) * | 1987-09-18 | 1995-09-13 | ダイセル化学工業株式会社 | 新規なプロリンアシラーゼ及びその製造法 |
| DE3929570A1 (de) * | 1989-09-06 | 1991-03-07 | Degussa | Mikrobiologisch hergestellte n-acyl-l-prolin-acylase, verfahren zu ihrer gewinnung und ihre verwendung |
| US5219741A (en) * | 1989-09-06 | 1993-06-15 | Degussa Ag | Method of making L-proline using an N-acyl-L-protine acylase |
-
1991
- 1991-05-24 DE DE4116980A patent/DE4116980A1/de not_active Withdrawn
-
1992
- 1992-05-15 EP EP92108190A patent/EP0514780A2/de not_active Withdrawn
- 1992-05-20 US US07/885,878 patent/US5348882A/en not_active Expired - Fee Related
- 1992-05-20 JP JP4127042A patent/JPH05184389A/ja active Pending
- 1992-05-21 CS CS921527A patent/CS152792A3/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0514780A2 (de) | 1992-11-25 |
| CS152792A3 (en) | 1992-12-16 |
| DE4116980A1 (de) | 1992-11-26 |
| US5348882A (en) | 1994-09-20 |
| EP0514780A3 (ja) | 1994-04-20 |
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