JPH05176761A - 細胞処理剤 - Google Patents
細胞処理剤Info
- Publication number
- JPH05176761A JPH05176761A JP3155924A JP15592491A JPH05176761A JP H05176761 A JPH05176761 A JP H05176761A JP 3155924 A JP3155924 A JP 3155924A JP 15592491 A JP15592491 A JP 15592491A JP H05176761 A JPH05176761 A JP H05176761A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cell
- treating agent
- cells
- insoluble carrier
- cytokine
- Prior art date
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- Pending
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- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 不溶性担体の表面に２個のアミノ基を持つ塩
基性環状ペプチドを固定化して成る細胞処理剤、及び血
管内皮細胞等を当該細胞処理剤と接触させることを特徴
とするサイトカインの製造方法。 【効果】 組織系細胞に作用させて各種サイトカイン等
の有用物質を高濃度で産生させることが可能であり、細
胞培養用成形品、人工血管等の形で利用できる。
基性環状ペプチドを固定化して成る細胞処理剤、及び血
管内皮細胞等を当該細胞処理剤と接触させることを特徴
とするサイトカインの製造方法。 【効果】 組織系細胞に作用させて各種サイトカイン等
の有用物質を高濃度で産生させることが可能であり、細
胞培養用成形品、人工血管等の形で利用できる。
Description
【産業上の利用分野】本発明は、血管内皮細胞等の組織
系細胞に作用してサイトカイン等の有用物質を産生させ
得る細胞培養用成型品等の細胞処理剤に関する。
系細胞に作用してサイトカイン等の有用物質を産生させ
得る細胞培養用成型品等の細胞処理剤に関する。
【従来の技術】生理活性物質を不溶性担体に固定化した
ものはアフイニテイークロマトグラフ用吸着剤、治療用
血液処理剤、細胞培養用機材、抗菌性材料、その他、分
析用試薬などとして広く利用されており、今後、さらに
幅広い応用が機体される重要な分野である。線維芽細
胞、血管内皮細胞、皮膚ケラチン細胞等で代表される組
織系細胞はインターフエロン、インターロイキン−１
（ＩＬ−１）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）等の
有用なサイトカインを産生することで知られている。特
に、血管内皮細胞は血液接触部に存在する細胞である
が、組織プラスミノーゲンアクチベーター、プロスタサ
イクリン、アンジオテンシンＩＩ、レニン、ＩＬ−１、
ＩＬ−６等の有用物質を産生することが知られており、
生体外での血管内皮細胞の培養は、人工血管の製造のほ
か、これら有用物質の生産を可能にする意味で、近年、
とりわけ注目されている。ヒトの臍帯静脈や皮膚毛細血
管をマトリゲル添加コラーゲンゲル上で培養すると、管
形成の起きることが知られている｛ヤスオ クボタほ
か、ジヤーナル オブ セル バイオロジー，１０７
１５８９（１９８８）｝。また、体外での血管内皮細胞
の培養液に、ＩＬ−１｛マリナ シロニほか、ザ ジヤ
ーナル オブイミユノロジー，１４２，５４９（１９８
９）｝やリポポリササツカライド｛フランク Ｒ．ジリ
クほか、ザ ジヤーナル オブイミユノロジー，１４
２，１４４（１９８９）｝を加えることによつて、ＩＬ
−６の産生が促進されることが知られている。しかし、
これらには、添加するものが高価な蛋白質であつたり、
あるいは、構造の複雑な有毒物質であつたりする等の各
種問題点がある。
ものはアフイニテイークロマトグラフ用吸着剤、治療用
血液処理剤、細胞培養用機材、抗菌性材料、その他、分
析用試薬などとして広く利用されており、今後、さらに
幅広い応用が機体される重要な分野である。線維芽細
胞、血管内皮細胞、皮膚ケラチン細胞等で代表される組
織系細胞はインターフエロン、インターロイキン−１
（ＩＬ−１）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）等の
有用なサイトカインを産生することで知られている。特
に、血管内皮細胞は血液接触部に存在する細胞である
が、組織プラスミノーゲンアクチベーター、プロスタサ
イクリン、アンジオテンシンＩＩ、レニン、ＩＬ−１、
ＩＬ−６等の有用物質を産生することが知られており、
生体外での血管内皮細胞の培養は、人工血管の製造のほ
か、これら有用物質の生産を可能にする意味で、近年、
とりわけ注目されている。ヒトの臍帯静脈や皮膚毛細血
管をマトリゲル添加コラーゲンゲル上で培養すると、管
形成の起きることが知られている｛ヤスオ クボタほ
か、ジヤーナル オブ セル バイオロジー，１０７
１５８９（１９８８）｝。また、体外での血管内皮細胞
の培養液に、ＩＬ−１｛マリナ シロニほか、ザ ジヤ
ーナル オブイミユノロジー，１４２，５４９（１９８
９）｝やリポポリササツカライド｛フランク Ｒ．ジリ
クほか、ザ ジヤーナル オブイミユノロジー，１４
２，１４４（１９８９）｝を加えることによつて、ＩＬ
−６の産生が促進されることが知られている。しかし、
これらには、添加するものが高価な蛋白質であつたり、
あるいは、構造の複雑な有毒物質であつたりする等の各
種問題点がある。
【発明が解決しようとする課題】本発明者等は、かかる
従来技術の問題点に鑑み、生理活性物質をビニル重合体
成型品表面に固定化し、これを動物細胞の培養用容器と
して使用できないか、また、有用なサイトカイン等の産
生誘導剤として使用できないか種々検討した結果、塩基
性環状ペプチドのグラミシジンＳ等を固定化したものが
血管内皮細胞にインターロイキン−６等の有用な生理活
性物質を産生させ得ることを見出だし、本発明に到達し
た。
従来技術の問題点に鑑み、生理活性物質をビニル重合体
成型品表面に固定化し、これを動物細胞の培養用容器と
して使用できないか、また、有用なサイトカイン等の産
生誘導剤として使用できないか種々検討した結果、塩基
性環状ペプチドのグラミシジンＳ等を固定化したものが
血管内皮細胞にインターロイキン−６等の有用な生理活
性物質を産生させ得ることを見出だし、本発明に到達し
た。
【課題を解決するための手段】本発明は以下の（１）〜
（６）の技術的手段から構成される。 （１）不溶性担体の表面に２個のアミノ基を持つ塩基性
環状ペプチドを固定化して成る細胞処理剤。 （２）不溶性担体の形状が、シヤーレ、瓶、膜、繊維、
中空糸、粒状物またはこれ等を用いた組み立て品である
ことを特徴とする前記（１）記載の細胞処理剤。 （３）細胞を前記（１）記載の細胞処理剤と接触させる
ことを特徴とするサイトカインの製造方法。 （４）細胞が血管内皮細胞であることを特徴とする前記
（３）記載のサイトカインの製造方法。 （５）サイトカインがインターロイキン−６であること
を特徴とする前記（３）記載のサイトカインの製造方
法。 （６）不溶性担体がスチレンまたはα−メチルスチレン
を主体とするビニル重合体成型品の表面に活性ハロゲン
基を導入したものであることを特徴とする前記（１）記
載の細胞処理剤。 本発明でいう２個のアミノ基を持つ塩基性環状ペプチド
としては、４個以上のアミノ酸残基からなる環状ペプチ
ドで２個のアミノ基を持つ塩基性環状ペプチドが使用さ
れる。これらの塩基性環状ペプチドであれば、なんでも
良く、特に、制限はないが、製造の容易さや効果からア
ミノ酸の配列に対称心があり、かつ、４〜１０個のアミ
ノ酸から成るものが好ましい。その代表例として塩基性
環状デカペプチドであるグラミシジンＳが上げられる
が、そのアミノ酸残基の一部を他のアミノ酸で置換した
もの、およびアミノ酸を増減させたもの等も使用し得
る。これらは生物に作らせることもできるが、化学的に
も容易に合成することができる。本発明でいう不溶性担
体とは、実質上不溶性でその表面にアミノ基と反応し得
る活性ハロゲン基またはカルボキシル基を有する担体を
意味する。ここでいう活性ハロゲン基とはα−クロルア
セトアミドメチル基、α−クロルプロピオンアミドメチ
ル基、α−クロルブチルアミドメチル基、α−ヨードア
セトアミドメチル基等で代表されるα−ハロアシルアミ
ドメチル基またはクロルメチル基を意味する。該不溶性
担体の形状はシヤーレ、瓶、管、膜、繊維、中空糸、粒
状物またはこれらを用いた組み立て品のいずれでも良い
が、とりわけ、これ等に光透過性があると細胞の管理が
しやすいので好ましい。本発明でいう不溶性担体の具体
例を挙げると、スチレンまたはα−メチルスチレンの
単独重合体もしくはこれ等を主成分とする芳香族ビニル
系共重合体にクロルメチル基を導入したもの、スチレ
ン／エチレン・ブチレンのＡＢＡブロツクコポリマの膜
にα−ハロアセトアミドメチル基を導入したもの、ク
ロルメチルスチレン・スチレン共重合体、ポリプロピ
レン補強ポリスチレン繊維にα−ハロアセトアミドメチ
ル基を導入したもの、無水マレイン酸・スチレン共重
合体等が挙げられるが、これ等に限定されるものではな
い。本発明の細胞処理剤の製造は、活性ハロゲン基を持
つ不溶性担体を２個のアミノ基を持つ塩基性環状ペプチ
ドの溶液中に塩基性条件下で浸漬するか、カルボキシル
基を持つ不溶性担体を２個のアミノ基を持つ塩基性環状
ペプチドとカルボジイミドとの混合溶液に加えることに
より容易に達成される。この反応において、溶液のｐＨ
が１２．５以上であると、ペプチドが急激に加水分解
し、また、逆にｐＨが低すぎると、反応が進まないの
で、溶液のｐＨ９以上、１２以下であることが必要であ
る。本発明でいうサイトカインとは組織プラスミノーゲ
ンアクチベータ、プロスタサイクリン、アンギオテンシ
ンＩＩ、レニン、ＩＬ−１、ＩＬ−６、コロニー刺激因
子などを意味する。とりわけ、ＩＬ−６は種々の細胞に
作用して、細胞の分化や増殖を誘導すること、特に、造
血幹細胞に対する作用のあることで最近注目されている
｛実験医学 ７ （１５）（増刊）９０−９５（１９８
９）｝。血管内皮細胞を本発明の細胞処理剤と接触させ
ながら培養することにより、細胞は活性化されて、実施
例に示すような高濃度のＩＬ−６が産生されるほか、同
様にして組織プラスミノーゲンアクチベータ、プロスタ
サイクリン、アンギオテンシンＩＩ、レニン、ＩＬ−
１、コロニー刺激因子などのサイトカインが産生される
ことが確認された。さらに、２個のアミノ基を持つ他の
塩基性環状ペプチドを使用した場合についても同様に各
種サイトカインが産生されることが確認された。産生さ
れたサイトカインのうち、例えば、ＩＬ−６はin vivo
およびin vitoroでの白血球増加剤等として利用でき
る。また、本発明の細胞処理剤の利用としては細胞培養
用器具等の成型品、人工血管等への利用が挙げられる。
（６）の技術的手段から構成される。 （１）不溶性担体の表面に２個のアミノ基を持つ塩基性
環状ペプチドを固定化して成る細胞処理剤。 （２）不溶性担体の形状が、シヤーレ、瓶、膜、繊維、
中空糸、粒状物またはこれ等を用いた組み立て品である
ことを特徴とする前記（１）記載の細胞処理剤。 （３）細胞を前記（１）記載の細胞処理剤と接触させる
ことを特徴とするサイトカインの製造方法。 （４）細胞が血管内皮細胞であることを特徴とする前記
（３）記載のサイトカインの製造方法。 （５）サイトカインがインターロイキン−６であること
を特徴とする前記（３）記載のサイトカインの製造方
法。 （６）不溶性担体がスチレンまたはα−メチルスチレン
を主体とするビニル重合体成型品の表面に活性ハロゲン
基を導入したものであることを特徴とする前記（１）記
載の細胞処理剤。 本発明でいう２個のアミノ基を持つ塩基性環状ペプチド
としては、４個以上のアミノ酸残基からなる環状ペプチ
ドで２個のアミノ基を持つ塩基性環状ペプチドが使用さ
れる。これらの塩基性環状ペプチドであれば、なんでも
良く、特に、制限はないが、製造の容易さや効果からア
ミノ酸の配列に対称心があり、かつ、４〜１０個のアミ
ノ酸から成るものが好ましい。その代表例として塩基性
環状デカペプチドであるグラミシジンＳが上げられる
が、そのアミノ酸残基の一部を他のアミノ酸で置換した
もの、およびアミノ酸を増減させたもの等も使用し得
る。これらは生物に作らせることもできるが、化学的に
も容易に合成することができる。本発明でいう不溶性担
体とは、実質上不溶性でその表面にアミノ基と反応し得
る活性ハロゲン基またはカルボキシル基を有する担体を
意味する。ここでいう活性ハロゲン基とはα−クロルア
セトアミドメチル基、α−クロルプロピオンアミドメチ
ル基、α−クロルブチルアミドメチル基、α−ヨードア
セトアミドメチル基等で代表されるα−ハロアシルアミ
ドメチル基またはクロルメチル基を意味する。該不溶性
担体の形状はシヤーレ、瓶、管、膜、繊維、中空糸、粒
状物またはこれらを用いた組み立て品のいずれでも良い
が、とりわけ、これ等に光透過性があると細胞の管理が
しやすいので好ましい。本発明でいう不溶性担体の具体
例を挙げると、スチレンまたはα−メチルスチレンの
単独重合体もしくはこれ等を主成分とする芳香族ビニル
系共重合体にクロルメチル基を導入したもの、スチレ
ン／エチレン・ブチレンのＡＢＡブロツクコポリマの膜
にα−ハロアセトアミドメチル基を導入したもの、ク
ロルメチルスチレン・スチレン共重合体、ポリプロピ
レン補強ポリスチレン繊維にα−ハロアセトアミドメチ
ル基を導入したもの、無水マレイン酸・スチレン共重
合体等が挙げられるが、これ等に限定されるものではな
い。本発明の細胞処理剤の製造は、活性ハロゲン基を持
つ不溶性担体を２個のアミノ基を持つ塩基性環状ペプチ
ドの溶液中に塩基性条件下で浸漬するか、カルボキシル
基を持つ不溶性担体を２個のアミノ基を持つ塩基性環状
ペプチドとカルボジイミドとの混合溶液に加えることに
より容易に達成される。この反応において、溶液のｐＨ
が１２．５以上であると、ペプチドが急激に加水分解
し、また、逆にｐＨが低すぎると、反応が進まないの
で、溶液のｐＨ９以上、１２以下であることが必要であ
る。本発明でいうサイトカインとは組織プラスミノーゲ
ンアクチベータ、プロスタサイクリン、アンギオテンシ
ンＩＩ、レニン、ＩＬ−１、ＩＬ−６、コロニー刺激因
子などを意味する。とりわけ、ＩＬ−６は種々の細胞に
作用して、細胞の分化や増殖を誘導すること、特に、造
血幹細胞に対する作用のあることで最近注目されている
｛実験医学 ７ （１５）（増刊）９０−９５（１９８
９）｝。血管内皮細胞を本発明の細胞処理剤と接触させ
ながら培養することにより、細胞は活性化されて、実施
例に示すような高濃度のＩＬ−６が産生されるほか、同
様にして組織プラスミノーゲンアクチベータ、プロスタ
サイクリン、アンギオテンシンＩＩ、レニン、ＩＬ−
１、コロニー刺激因子などのサイトカインが産生される
ことが確認された。さらに、２個のアミノ基を持つ他の
塩基性環状ペプチドを使用した場合についても同様に各
種サイトカインが産生されることが確認された。産生さ
れたサイトカインのうち、例えば、ＩＬ−６はin vivo
およびin vitoroでの白血球増加剤等として利用でき
る。また、本発明の細胞処理剤の利用としては細胞培養
用器具等の成型品、人工血管等への利用が挙げられる。
【発明の効果】本発明の細胞処理剤は血管内皮細胞等を
活性化する作用を有しており、細胞を当該細胞処理剤と
接触させながら培養することにより、ＩＬ−６、組織プ
ラスミノーゲンアクチベータ、プロスタサイクリン、ア
ンギオテンシンＩＩ、レニン、ＩＬ−１、コロニー刺激
因子等の各種サイトカインを高濃度で産生されることが
できる。産生されたサイトカインのうち、例えば、ＩＬ
−６は、in vivo およびin vitoro での白血球増加剤等
として有用なものである。さらに、本発明の細胞処理剤
は、細胞培養容器等の細胞培養用成型品、人工血管等の
形で利用できる長所がある。以下、実施例により本発明
をさらに具体的に説明する。なお、実施例中の評価方法
は、以下に従つた。 １．ビニル系重合体成型品の化学的解析 成型品を塩化メチレンでソツクスレー抽出すると不溶性
の膜状物が得られるので、これを真空乾燥し、重量を計
り、赤外線吸収スペクトル測定等を行つた。 ２．赤外線吸収スペクトル 島津フーリエ変換赤外分光光度計ＦＴＩＲ−４３００を
用い、ＫＢｒ錠剤法で測定した。 ３．成型品の光透過性の測定 島津分光光度計ＵＶ２１００を用い、５００ナノメータ
ーで板状成型品に垂直方向の吸光度を測定した。対照と
して同じ厚さのポリスチレン板状成型品の吸光度を測定
し、両者の差をＡ500 とした。従つて、その値が小さい
ほど成型品の光透過性が高いことになる。 ４．ペプチドの定量 固定化成型品を６Ｎ−ＨＣ１で加水分解した後、日立自
動アミノ酸分析計（特殊アミノ酸分析法／ニンヒドリン
発色）で分析した。アミノ酸の組成から固定化量を求め
た。 ５．サイトカインの定量 ヒトＩＬ−６はＲアンドＤシステムズ社（ミネアポリ
ス、ＵＳＡ）のクウオンテイカイン・ヒトＩＬ−６・Ｅ
ＬＩＳＡキツトにより定量した。
活性化する作用を有しており、細胞を当該細胞処理剤と
接触させながら培養することにより、ＩＬ−６、組織プ
ラスミノーゲンアクチベータ、プロスタサイクリン、ア
ンギオテンシンＩＩ、レニン、ＩＬ−１、コロニー刺激
因子等の各種サイトカインを高濃度で産生されることが
できる。産生されたサイトカインのうち、例えば、ＩＬ
−６は、in vivo およびin vitoro での白血球増加剤等
として有用なものである。さらに、本発明の細胞処理剤
は、細胞培養容器等の細胞培養用成型品、人工血管等の
形で利用できる長所がある。以下、実施例により本発明
をさらに具体的に説明する。なお、実施例中の評価方法
は、以下に従つた。 １．ビニル系重合体成型品の化学的解析 成型品を塩化メチレンでソツクスレー抽出すると不溶性
の膜状物が得られるので、これを真空乾燥し、重量を計
り、赤外線吸収スペクトル測定等を行つた。 ２．赤外線吸収スペクトル 島津フーリエ変換赤外分光光度計ＦＴＩＲ−４３００を
用い、ＫＢｒ錠剤法で測定した。 ３．成型品の光透過性の測定 島津分光光度計ＵＶ２１００を用い、５００ナノメータ
ーで板状成型品に垂直方向の吸光度を測定した。対照と
して同じ厚さのポリスチレン板状成型品の吸光度を測定
し、両者の差をＡ500 とした。従つて、その値が小さい
ほど成型品の光透過性が高いことになる。 ４．ペプチドの定量 固定化成型品を６Ｎ−ＨＣ１で加水分解した後、日立自
動アミノ酸分析計（特殊アミノ酸分析法／ニンヒドリン
発色）で分析した。アミノ酸の組成から固定化量を求め
た。 ５．サイトカインの定量 ヒトＩＬ−６はＲアンドＤシステムズ社（ミネアポリ
ス、ＵＳＡ）のクウオンテイカイン・ヒトＩＬ−６・Ｅ
ＬＩＳＡキツトにより定量した。
【実施例１】１−ニトロプロパン５００ｍｌと硫酸２７
２ｍｌの混合溶液を０℃に冷却し、２０．４ｇのＮ−メ
チロール−α−クロルアセトアミドを加え、０〜１０℃
で溶解した。この溶液を１０℃に昇温した後、３．５ｃ
ｍφ×１．０ｃｍＨのポリスチレン製培養皿（厚み１ｍ
ｍ）７０個に７ｍｌずつ入れ、室温で１ｈｒ反応させ
た。次に、反応液を捨て、培養皿を零下２０℃のメタノ
ールに浸し、さらにメタノールおよび水で洗つた後、真
空乾燥して、内部の表面だけクロルアセトアミドメチル
化された成型品Ａを得た。この成型品のＡ500 は０．０
３０であつた。上記で得た成型品Ａ１個を、塩化メチレ
ンでソツクスレー抽出したところ、薄膜状の不溶物３．
２ｍｇが得られた。培養皿の反応面の表面積は１７．６
ｃｍ2 であるので、反応部の厚みは大体１．８μと考え
られる。また、この不溶物の赤外線吸収スペクトルで
は、１６５９ｃｍ-1（アミド−Ｉ）、１５２９ｃｍ
-1（アミド−ＩＩ）および３２９７ｃｍ-1（Ｎ−Ｈ）に
アミド基の強い吸収が認められたことからその構造を確
認した。この溶液５ｍｌずつを２０個の成型品Ａに入
れ、室温で５日間静置した。溶液を捨て、成型品をエタ
ノールで５回、水で２回、ｐＨ３の希塩酸で１回、水で
５回洗浄して、グラミシジンＳを固定化した本発明細胞
処理剤である成型品Ｉを得た。成型品Ｉには１１９μの
グラミシジンＳが固定化されていることが、アミノ酸分
析の結果、わかつた。また、オルニチンの回収率が４５
％であつたことから、グラミシジンＳ分子は２個の塩基
性アミノ基のうちの一個で成型品（クロルアセチル基と
反応）と結合していることがわかつた。また、ＸＰＳ分
析の結果、元素組成から表面に存在する芳香核の６％が
グラミシジンＳとの結合に関与していることがわかつ
た。
２ｍｌの混合溶液を０℃に冷却し、２０．４ｇのＮ−メ
チロール−α−クロルアセトアミドを加え、０〜１０℃
で溶解した。この溶液を１０℃に昇温した後、３．５ｃ
ｍφ×１．０ｃｍＨのポリスチレン製培養皿（厚み１ｍ
ｍ）７０個に７ｍｌずつ入れ、室温で１ｈｒ反応させ
た。次に、反応液を捨て、培養皿を零下２０℃のメタノ
ールに浸し、さらにメタノールおよび水で洗つた後、真
空乾燥して、内部の表面だけクロルアセトアミドメチル
化された成型品Ａを得た。この成型品のＡ500 は０．０
３０であつた。上記で得た成型品Ａ１個を、塩化メチレ
ンでソツクスレー抽出したところ、薄膜状の不溶物３．
２ｍｇが得られた。培養皿の反応面の表面積は１７．６
ｃｍ2 であるので、反応部の厚みは大体１．８μと考え
られる。また、この不溶物の赤外線吸収スペクトルで
は、１６５９ｃｍ-1（アミド−Ｉ）、１５２９ｃｍ
-1（アミド−ＩＩ）および３２９７ｃｍ-1（Ｎ−Ｈ）に
アミド基の強い吸収が認められたことからその構造を確
認した。この溶液５ｍｌずつを２０個の成型品Ａに入
れ、室温で５日間静置した。溶液を捨て、成型品をエタ
ノールで５回、水で２回、ｐＨ３の希塩酸で１回、水で
５回洗浄して、グラミシジンＳを固定化した本発明細胞
処理剤である成型品Ｉを得た。成型品Ｉには１１９μの
グラミシジンＳが固定化されていることが、アミノ酸分
析の結果、わかつた。また、オルニチンの回収率が４５
％であつたことから、グラミシジンＳ分子は２個の塩基
性アミノ基のうちの一個で成型品（クロルアセチル基と
反応）と結合していることがわかつた。また、ＸＰＳ分
析の結果、元素組成から表面に存在する芳香核の６％が
グラミシジンＳとの結合に関与していることがわかつ
た。
【実施例２】ウシ脳抽出液含有低血清血管内皮細胞増殖
培地（ＥＧＭ−ＵＶ：倉敷紡績（株））中に正常ヒト臍
帯血管内皮細胞（倉敷紡績（株））を４．４×１０4 個
／ｍｌの濃度で含む細胞液２ｍｌを、実施例１で得た成
型品Ｉ（紫外線照射滅菌）に入れて、インキユベーター
中（３７℃、５％ＣＯ2）で４８ｈｒ培養した。比較と
して、実施例１で得た成型品ＡおよびＡにポリミキシン
Ｂを固定したもの（固定化量：１１０μｇ／皿、紫外線
照射滅菌）および市販の細胞培養皿ＭＳ−１０３５０
（住友ベークライト（株））で同様に培養した。各培養
上清を取つてその中のＩＬ−６を調べたところ、グラミ
シジンＳを固定化した本発明の皿では８５ｐｇ／ｍｌで
あつたのに対し、成型品Ａでは８ｐｇ／ｍｌ、ポリミキ
シンＢを固定化した皿では３７ｐｇ／ｍｌ、ＭＳ−１０
３５０では３７ｐｇ／ｍｌであつた。この結果から、Ｉ
Ｌ−６産生誘導能は本発明の成型品が著しく優れている
ことがわかつた。
培地（ＥＧＭ−ＵＶ：倉敷紡績（株））中に正常ヒト臍
帯血管内皮細胞（倉敷紡績（株））を４．４×１０4 個
／ｍｌの濃度で含む細胞液２ｍｌを、実施例１で得た成
型品Ｉ（紫外線照射滅菌）に入れて、インキユベーター
中（３７℃、５％ＣＯ2）で４８ｈｒ培養した。比較と
して、実施例１で得た成型品ＡおよびＡにポリミキシン
Ｂを固定したもの（固定化量：１１０μｇ／皿、紫外線
照射滅菌）および市販の細胞培養皿ＭＳ−１０３５０
（住友ベークライト（株））で同様に培養した。各培養
上清を取つてその中のＩＬ−６を調べたところ、グラミ
シジンＳを固定化した本発明の皿では８５ｐｇ／ｍｌで
あつたのに対し、成型品Ａでは８ｐｇ／ｍｌ、ポリミキ
シンＢを固定化した皿では３７ｐｇ／ｍｌ、ＭＳ−１０
３５０では３７ｐｇ／ｍｌであつた。この結果から、Ｉ
Ｌ−６産生誘導能は本発明の成型品が著しく優れている
ことがわかつた。
【実施例３】実施例２と同様に、ＥＧＭ−ＵＶ培地中に
正常ヒト臍帯血管内皮細胞を１３×１０4 個／ｍｌの濃
度で含む細胞液２ｍｌを、実施例１で得た成型品Ｉ（紫
外線照射滅菌）に入れて、インキユベーター中（３７
℃、５％ＣＯ2 ）で２４ｈｒおよび４８ｈｒ培養した。
比較として、実施例１で得た成型品Ａおよび市販の細胞
培養用皿ＭＳ−１０３５０（住友ベークライト（株））
で同様に培養した。各培養上清を取つてその中のＩＬ−
６を調べたところ、グラミシジンＳを固定化した本発明
の皿では２４ｈｒ培養で２９０ｐｇ／ｍｌ、４８ｈｒ培
養で４３０ｐｇ／ｍｌであつたのに対し、成型品Ａでは
４８ｈｒ培養で８６ｐｇ／ｍｌ、ＭＳ−１０３５０では
２４ｈｒ培養で１００ｐｇ／ｍｌ、４０ｈｒ培養で１３
５ｐｇ／ｍｌであつた。この結果から、ＩＬ−６産生誘
導能は本発明の成型品が著しく優れていることがわつ
た。
正常ヒト臍帯血管内皮細胞を１３×１０4 個／ｍｌの濃
度で含む細胞液２ｍｌを、実施例１で得た成型品Ｉ（紫
外線照射滅菌）に入れて、インキユベーター中（３７
℃、５％ＣＯ2 ）で２４ｈｒおよび４８ｈｒ培養した。
比較として、実施例１で得た成型品Ａおよび市販の細胞
培養用皿ＭＳ−１０３５０（住友ベークライト（株））
で同様に培養した。各培養上清を取つてその中のＩＬ−
６を調べたところ、グラミシジンＳを固定化した本発明
の皿では２４ｈｒ培養で２９０ｐｇ／ｍｌ、４８ｈｒ培
養で４３０ｐｇ／ｍｌであつたのに対し、成型品Ａでは
４８ｈｒ培養で８６ｐｇ／ｍｌ、ＭＳ−１０３５０では
２４ｈｒ培養で１００ｐｇ／ｍｌ、４０ｈｒ培養で１３
５ｐｇ／ｍｌであつた。この結果から、ＩＬ−６産生誘
導能は本発明の成型品が著しく優れていることがわつ
た。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 //(Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91） Ｃ０７Ｋ 99:00 8318−4Ｈ (72)発明者 須藤 哲央 神奈川県横浜市栄区田谷町１番地 株式会 社バイオマテリアル研究所内 (72)発明者 佐野 恵海子 神奈川県横浜市旭区中希望ケ丘212−21 株式会社バイオマテリアル研究所内
Claims (6)
- 【請求項１】 不溶性担体の表面に２個のアミノ基を持
つ塩基性環状ペプチドを固定化して成る細胞処理剤。 - 【請求項２】 不溶性担体の形状が、シヤーレ、瓶、
膜、繊維、中空糸、粒状物またはこれ等を用いた組み立
て品であることを特徴とする請求項１記載の細胞処理
剤。 - 【請求項３】 細胞を請求項１記載の細胞処理剤と接触
させることを特徴とするサイトカインの製造方法。 - 【請求項４】 細胞が血管内皮細胞であることを特徴と
する請求項３記載のサイトカインの製造方法。 - 【請求項５】 サイトカインがインターロイキン−６で
あることを特徴とする請求項３記載のサイトカインの製
造方法。 - 【請求項６】 不溶性担体がスチレンまたはα−メチル
スチレンを主体とするビニル重合体成型品の表面に活性
ハロゲン基を導入したものであることを特徴とする請求
項１記載の細胞処理剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3155924A JPH05176761A (ja) | 1991-05-31 | 1991-05-31 | 細胞処理剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3155924A JPH05176761A (ja) | 1991-05-31 | 1991-05-31 | 細胞処理剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05176761A true JPH05176761A (ja) | 1993-07-20 |
Family
ID=15616489
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3155924A Pending JPH05176761A (ja) | 1991-05-31 | 1991-05-31 | 細胞処理剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH05176761A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004085606A1 (ja) * | 2003-03-24 | 2004-10-07 | National Institute For Environmental Studies | 細胞培養基質および細胞接着蛋白質またはペプチドの固相化標品 |
-
1991
- 1991-05-31 JP JP3155924A patent/JPH05176761A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004085606A1 (ja) * | 2003-03-24 | 2004-10-07 | National Institute For Environmental Studies | 細胞培養基質および細胞接着蛋白質またはペプチドの固相化標品 |
| US8304238B2 (en) | 2003-03-24 | 2012-11-06 | Nat'l Institute for Environmental Studies | Cell culture medium and immobilized preparation of cell adhesion protein or peptide |
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