JPH05130883A - トランス−ｌ−ヒドロキシプロリンの製造法 - Google Patents
トランス−ｌ−ヒドロキシプロリンの製造法Info
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- JPH05130883A JPH05130883A JP3296944A JP29694491A JPH05130883A JP H05130883 A JPH05130883 A JP H05130883A JP 3296944 A JP3296944 A JP 3296944A JP 29694491 A JP29694491 A JP 29694491A JP H05130883 A JPH05130883 A JP H05130883A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンの製造法
を提供する。 【構成】 トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンを実質的
に分解せず、他のアミノ酸を分解する能力を有する微生
物をコラーゲン加水分解物を含有する培地で培養し、培
養物からトランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンを採取する
ことからなるトランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンの製造
法。
を提供する。 【構成】 トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンを実質的
に分解せず、他のアミノ酸を分解する能力を有する微生
物をコラーゲン加水分解物を含有する培地で培養し、培
養物からトランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンを採取する
ことからなるトランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンの製造
法。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、医薬合成原料として有
用な、トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンの製造法に関
する。
用な、トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンの製造法に関
する。
【０００２】
【従来の技術】ヒドロキシプロリンの製造法としては、
コラーゲンなどの蛋白質から抽出する方法と化学合成法
とが知られている。化学合成法としては、アリルブロマ
イドとジエチルアセトアミドマロン酸とから合成する方
法〔ブリテン ケミカル ソサイエティー ジャパン(B
ull. Chem. Soc. Japan)，46, 2924(1973)〕、Ｄ−グル
タミン酸から合成する方法〔ブリテン ケミカル ソサ
イエティー ジャパン(Bull. Chem. Soc. Japan), 47，
1704(1974)〕およびグリオキサールとオキサロ酢酸とか
ら合成する方法〔ジャーナル オブ オーガニック ケ
ミストリー(J.Org. Chem.),42, 3440(1977)〕が知られ
ている。
コラーゲンなどの蛋白質から抽出する方法と化学合成法
とが知られている。化学合成法としては、アリルブロマ
イドとジエチルアセトアミドマロン酸とから合成する方
法〔ブリテン ケミカル ソサイエティー ジャパン(B
ull. Chem. Soc. Japan)，46, 2924(1973)〕、Ｄ−グル
タミン酸から合成する方法〔ブリテン ケミカル ソサ
イエティー ジャパン(Bull. Chem. Soc. Japan), 47，
1704(1974)〕およびグリオキサールとオキサロ酢酸とか
ら合成する方法〔ジャーナル オブ オーガニック ケ
ミストリー(J.Org. Chem.),42, 3440(1977)〕が知られ
ている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】これらの化学的合成法
はいずれも収率が低く、しかも生成物が４種異性体の混
合物であるため、工業的に製造するのには適さない。そ
れゆえトランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンは動物組織に
由来するコラーゲン、エラスチンなどのトランス−Ｌ−
ヒドロキシプロリンを多く含むタンパク質を加水分解し
た後、抽出、単離することによって製造されているが、
この加水分解液中にはアミノ酸としてトランス−Ｌ−ヒ
ドロキシプロリンの他に、グリシン、Ｌ−プロリン、Ｌ
−アラニン、Ｌ−セリンなど種々の中性アミノ酸が含ま
れており、これら中性アミノ酸とトランス−Ｌ−ヒドロ
キシプロリンとの分離に多段の精製工程を要する。
はいずれも収率が低く、しかも生成物が４種異性体の混
合物であるため、工業的に製造するのには適さない。そ
れゆえトランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンは動物組織に
由来するコラーゲン、エラスチンなどのトランス−Ｌ−
ヒドロキシプロリンを多く含むタンパク質を加水分解し
た後、抽出、単離することによって製造されているが、
この加水分解液中にはアミノ酸としてトランス−Ｌ−ヒ
ドロキシプロリンの他に、グリシン、Ｌ−プロリン、Ｌ
−アラニン、Ｌ−セリンなど種々の中性アミノ酸が含ま
れており、これら中性アミノ酸とトランス−Ｌ−ヒドロ
キシプロリンとの分離に多段の精製工程を要する。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、鋭意検討
した結果、コラーゲン加水分解物を含有する培地で微生
物を培養することにより、他の夾雑アミノ酸を分解せし
め、トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンを容易に精製、
単離できる方法を確立し、本発明を完成するに至った。
した結果、コラーゲン加水分解物を含有する培地で微生
物を培養することにより、他の夾雑アミノ酸を分解せし
め、トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンを容易に精製、
単離できる方法を確立し、本発明を完成するに至った。
【０００５】本発明は、トランス−Ｌ−ヒドロキシプロ
リンを実質的に分解せず、他のアミノ酸を分解する能力
を有する微生物をコラーゲン加水分解物を含有する培地
で培養し、培養物からトランス−Ｌ−ヒドロキシプロリ
ンを採取することからなるトランス−Ｌ−ヒドロキシプ
ロリンの製造法を提供する。本発明におけるアミノ酸の
分解は、菌体内で代謝、資化、他の化合物への分解を含
む。本発明で用いる微生物としては、トランス−Ｌ−ヒ
ドロキシプロリンを実質的に分解せず、他のアミノ酸を
分解する能力を有する微生物であればいずれの微生物も
使用できる。例えば、プロテウス属、プロビデンシア
属、デレヤ属およびプラノコッカス属に属する微生物が
あげられる。
リンを実質的に分解せず、他のアミノ酸を分解する能力
を有する微生物をコラーゲン加水分解物を含有する培地
で培養し、培養物からトランス−Ｌ−ヒドロキシプロリ
ンを採取することからなるトランス−Ｌ−ヒドロキシプ
ロリンの製造法を提供する。本発明におけるアミノ酸の
分解は、菌体内で代謝、資化、他の化合物への分解を含
む。本発明で用いる微生物としては、トランス−Ｌ−ヒ
ドロキシプロリンを実質的に分解せず、他のアミノ酸を
分解する能力を有する微生物であればいずれの微生物も
使用できる。例えば、プロテウス属、プロビデンシア
属、デレヤ属およびプラノコッカス属に属する微生物が
あげられる。
【０００６】好適な微生物としては、プロテウス・ミラ
ビリス(Proteus mirabilis) 、プロビデンシア・アルカ
リファシエンス(Providensia alcalifaciens) 、デレヤ
・ヴェヌスタ（Deleya venusta) 、プラノコッカス・シ
トレウス(Planococcus citreus) などがあげられる。具
体的な菌株としては、プロテウス・ミラビリスＩＦＯ38
49、プロビデンシア・アルカリファシエンスＡＴＣＣ98
86、デレヤ・ヴァヌスタＡＴＣＣ27125 、プラノコッカ
ス・シトレウスＡＴＣＣ14404 があげられる。
ビリス(Proteus mirabilis) 、プロビデンシア・アルカ
リファシエンス(Providensia alcalifaciens) 、デレヤ
・ヴェヌスタ（Deleya venusta) 、プラノコッカス・シ
トレウス(Planococcus citreus) などがあげられる。具
体的な菌株としては、プロテウス・ミラビリスＩＦＯ38
49、プロビデンシア・アルカリファシエンスＡＴＣＣ98
86、デレヤ・ヴァヌスタＡＴＣＣ27125 、プラノコッカ
ス・シトレウスＡＴＣＣ14404 があげられる。
【０００７】他のアミノ酸としては、アスパラギン酸、
スレオニン、セリン、アスパラギン、グルタミン酸、プ
ロリン、グリシン、アラニン、バリン、システイン、メ
チオニン、ロイシン、イソロイシン、チロシン、フェニ
ルアラニン、ヒスチジン、リジン、アルギニン、ヒドロ
キシリジンおよびα−アミノ酪酸があげられる。本発明
で用いる培地は、単一の炭素源、窒素源としてコラーゲ
ン加水分解物のみを含む培地、あるいはさらに用いる微
生物が資化し得る通常用いられる炭素源、窒素源、ビタ
ミンなどを含有し、トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリン
を実質的に分解せず、他のアミノ酸を分解する能力を有
する微生物の培養を効率的に行なえる培地であれば、天
然培地、合成培地のいずれでも良い。
スレオニン、セリン、アスパラギン、グルタミン酸、プ
ロリン、グリシン、アラニン、バリン、システイン、メ
チオニン、ロイシン、イソロイシン、チロシン、フェニ
ルアラニン、ヒスチジン、リジン、アルギニン、ヒドロ
キシリジンおよびα−アミノ酪酸があげられる。本発明
で用いる培地は、単一の炭素源、窒素源としてコラーゲ
ン加水分解物のみを含む培地、あるいはさらに用いる微
生物が資化し得る通常用いられる炭素源、窒素源、ビタ
ミンなどを含有し、トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリン
を実質的に分解せず、他のアミノ酸を分解する能力を有
する微生物の培養を効率的に行なえる培地であれば、天
然培地、合成培地のいずれでも良い。
【０００８】培地中のコラーゲン加水分解物は、総アミ
ノ酸濃度が１０〜３００ｇ／ｌ（トランス−Ｌ−ヒドロ
キシプロリン 1.5〜45ｇ／ｌ）、好ましくは40〜 200ｇ
／ｌ（トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリン６〜３０ｇ／
ｌ）となるように調整する。また、培養の際、コラーゲ
ン加水分解物を添加することもできる。培養は、使用す
る微生物に適した方法で行えばよいが、通常、通気攪拌
培養によって実施することができる。培養温度は25〜45
℃、特に30〜40℃が好適である。培養中、ｐＨは 7.5〜
8.0 に保持する。ｐＨの調整は塩酸、硫酸などの無機酸
あるいは酢酸などの有機酸を用いて行う。
ノ酸濃度が１０〜３００ｇ／ｌ（トランス−Ｌ−ヒドロ
キシプロリン 1.5〜45ｇ／ｌ）、好ましくは40〜 200ｇ
／ｌ（トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリン６〜３０ｇ／
ｌ）となるように調整する。また、培養の際、コラーゲ
ン加水分解物を添加することもできる。培養は、使用す
る微生物に適した方法で行えばよいが、通常、通気攪拌
培養によって実施することができる。培養温度は25〜45
℃、特に30〜40℃が好適である。培養中、ｐＨは 7.5〜
8.0 に保持する。ｐＨの調整は塩酸、硫酸などの無機酸
あるいは酢酸などの有機酸を用いて行う。
【０００９】培養は、トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリ
ン以外のアミノ酸が分解した時点で終了する。培養時間
は通常30〜80時間である。かくして得られた培養液から
遠心分離により菌体を除去した後、イオン交換樹脂など
を用いるカラムクロマトグラフィーあるいは晶出法など
一般に知られている精製法を用いて、培養ろ液からトラ
ンス−Ｌ−ヒドロキシプロリンを分離、回収する。
ン以外のアミノ酸が分解した時点で終了する。培養時間
は通常30〜80時間である。かくして得られた培養液から
遠心分離により菌体を除去した後、イオン交換樹脂など
を用いるカラムクロマトグラフィーあるいは晶出法など
一般に知られている精製法を用いて、培養ろ液からトラ
ンス−Ｌ−ヒドロキシプロリンを分離、回収する。
【００１０】以下、実施例により本発明を説明する。実
施例において用いるコラーゲン加水分解液は以下の通り
調製した。牛皮２kgに12規定硫酸5.1lを加え、120 ℃、
12時間加水分解反応を行った。反応後、反応液に水酸化
カルシウム１kgと水8lを加え、その懸濁液をろ過した。
このろ液についてアミノ酸アナライザーを用いてアミノ
酸の分析を行ったところ、このろ液中にはアミノ酸が 6
30ｇ／ｌ含まれ、そのうちトランス−Ｌ−ヒドロキシプ
ロリンは93ｇ／ｌ、グリシンは 158ｇ／ｌ、Ｌ−プロリ
ンは98ｇ／ｌであった。このろ液をコラーゲン加水分解
液として用いた。
施例において用いるコラーゲン加水分解液は以下の通り
調製した。牛皮２kgに12規定硫酸5.1lを加え、120 ℃、
12時間加水分解反応を行った。反応後、反応液に水酸化
カルシウム１kgと水8lを加え、その懸濁液をろ過した。
このろ液についてアミノ酸アナライザーを用いてアミノ
酸の分析を行ったところ、このろ液中にはアミノ酸が 6
30ｇ／ｌ含まれ、そのうちトランス−Ｌ−ヒドロキシプ
ロリンは93ｇ／ｌ、グリシンは 158ｇ／ｌ、Ｌ−プロリ
ンは98ｇ／ｌであった。このろ液をコラーゲン加水分解
液として用いた。
【００１１】
【実施例】 実施例１ Ａ培地〔ペプトン10ｇ／ｌ、肉エキス７ｇ／ｌ、塩化ナ
トリウム３ｇ／ｌ、酵母エキス５ｇ／ｌ（pH7.0)〕５ml
を試験管に分注し、120 ℃、20分間オートクレーブにか
けて加圧滅菌し、種培養培地とした。この培地に第１表
に示す微生物を１白金耳植菌し、30℃、１日間振盪培養
し、種培養液として用いた。
トリウム３ｇ／ｌ、酵母エキス５ｇ／ｌ（pH7.0)〕５ml
を試験管に分注し、120 ℃、20分間オートクレーブにか
けて加圧滅菌し、種培養培地とした。この培地に第１表
に示す微生物を１白金耳植菌し、30℃、１日間振盪培養
し、種培養液として用いた。
【００１２】コーンスティープリカー40ｇ／ｌおよびコ
ラーゲン加水分解物 150ml／ｌを含む培地（pH7.5)５ml
を試験管に分注し、120 ℃、20分間オートクレーブにか
けて加圧滅菌し、主培養培地とした。この培地に種培養
液0.5ml を無菌的に接種し、30℃で48時間振盪培養し
た。この主培養液５mlを遠心分離（1,000rpm, 10分間）
して菌体を除いた後、その上清についてアミノ酸アナラ
イザーを用いて残存アミノ酸の分析を行った。
ラーゲン加水分解物 150ml／ｌを含む培地（pH7.5)５ml
を試験管に分注し、120 ℃、20分間オートクレーブにか
けて加圧滅菌し、主培養培地とした。この培地に種培養
液0.5ml を無菌的に接種し、30℃で48時間振盪培養し
た。この主培養液５mlを遠心分離（1,000rpm, 10分間）
して菌体を除いた後、その上清についてアミノ酸アナラ
イザーを用いて残存アミノ酸の分析を行った。
【００１３】第１表に培養液中の総アミノ酸に対するト
ランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンの含有率と、トランス
−Ｌ−ヒドロキシプロリンの残存率を示す。
ランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンの含有率と、トランス
−Ｌ−ヒドロキシプロリンの残存率を示す。
【００１４】
【表１】
【００１５】実施例２ Ａ培地（実施例１と同じ組成）50mlを1l容三角フラスコ
に分注し、120 ℃、15分間オートクレーブにかけて加圧
滅菌して、種培養培地とした。この培地にプロテウス・
ミラビリス IFO3849 を１白金耳植菌し、30℃で１日間
振盪培養し、種培養液として用いた。
に分注し、120 ℃、15分間オートクレーブにかけて加圧
滅菌して、種培養培地とした。この培地にプロテウス・
ミラビリス IFO3849 を１白金耳植菌し、30℃で１日間
振盪培養し、種培養液として用いた。
【００１６】一方、コーンスティープリカー30ｇおよび
コラーゲン加水分解物160ml を含む培地(pH7.5) 750ml
を2l容量のミニジャーファーメンターに分注し、120
℃、30分間オートクレーブにかけて加圧滅菌し、主培養
培地とした。この培地に種培養液50mlを無菌的に接種
し、37℃で30時間通気攪拌培養（回転数1000rpm,通気量
1vvm) した。なお、培養中、５規定硫酸により培地のpH
を 8.0に調整した。このときのトランス−Ｌ−ヒドロキ
シプロリンの残存率は94％、培養液中の総アミノ酸に対
するトランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンの含有率は94％
であった。
コラーゲン加水分解物160ml を含む培地(pH7.5) 750ml
を2l容量のミニジャーファーメンターに分注し、120
℃、30分間オートクレーブにかけて加圧滅菌し、主培養
培地とした。この培地に種培養液50mlを無菌的に接種
し、37℃で30時間通気攪拌培養（回転数1000rpm,通気量
1vvm) した。なお、培養中、５規定硫酸により培地のpH
を 8.0に調整した。このときのトランス−Ｌ−ヒドロキ
シプロリンの残存率は94％、培養液中の総アミノ酸に対
するトランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンの含有率は94％
であった。
【００１７】この主培養液 800mlを遠心分離（10,000rp
m,10分間）して菌体を除いた後、その上清をイオン交換
樹脂ダイヤイオンＳＫ−１Ｂ（Ｈ+ 型）（三菱化成社
製） 200mlに通塔してアミノ酸を吸着させた。該樹脂を
水で洗浄後、0.2 規定アンモニア水溶液でトランス−Ｌ
−ヒドロキシプロリンを含む画分を溶出した。このとき
のトランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンの残存率は90％、
総アミノ酸に対するトランス−Ｌ−ヒドロキシプロリン
の含有率は96％であった。
m,10分間）して菌体を除いた後、その上清をイオン交換
樹脂ダイヤイオンＳＫ−１Ｂ（Ｈ+ 型）（三菱化成社
製） 200mlに通塔してアミノ酸を吸着させた。該樹脂を
水で洗浄後、0.2 規定アンモニア水溶液でトランス−Ｌ
−ヒドロキシプロリンを含む画分を溶出した。このとき
のトランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンの残存率は90％、
総アミノ酸に対するトランス−Ｌ−ヒドロキシプロリン
の含有率は96％であった。
【００１８】溶出液を減圧濃縮後、メタノールで晶析
し、さらに水で再結晶して、トランス−Ｌ−ヒドロキシ
プロリン10.5ｇ（純度99.9％）を得た。 実施例３ 実施例２と同じ種培養液および主培養培地を用い、この
培地に、種培養液50mlを無菌的に接種し、37℃で実施例
２と同様に通気攪拌培養した。培養を開始して20時間後
にコラーゲン加水分解物 160mlを添加し、60時間後に培
養を終了した。このときのトランス−Ｌ−ヒドロキシプ
ロリンの残存率は93％、培養液中の総アミノ酸に対する
トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンの含有率は90％であ
った。
し、さらに水で再結晶して、トランス−Ｌ−ヒドロキシ
プロリン10.5ｇ（純度99.9％）を得た。 実施例３ 実施例２と同じ種培養液および主培養培地を用い、この
培地に、種培養液50mlを無菌的に接種し、37℃で実施例
２と同様に通気攪拌培養した。培養を開始して20時間後
にコラーゲン加水分解物 160mlを添加し、60時間後に培
養を終了した。このときのトランス−Ｌ−ヒドロキシプ
ロリンの残存率は93％、培養液中の総アミノ酸に対する
トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンの含有率は90％であ
った。
【００１９】この主培養液を以下実施例２と同様に精製
を行い、トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリン20.8ｇ（純
度99.0％）を得た。 参考例 コラーゲン加水分解物 200mlを５倍希釈し、イオン交換
樹脂ダイヤイオンSK−1B（Ｈ+ 型）（三菱化成社製）20
0ml に通塔して、該樹脂を水で洗浄後、0.2 規定アンモ
ニア水溶液でトランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンを含む
画分を溶出した。このときのトランス−Ｌ−ヒドロキシ
プロリンの残存率は76％で、総アミノ酸に対するトラン
ス−Ｌ−ヒドロキシプロリンの含有率は30％であった。
を行い、トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリン20.8ｇ（純
度99.0％）を得た。 参考例 コラーゲン加水分解物 200mlを５倍希釈し、イオン交換
樹脂ダイヤイオンSK−1B（Ｈ+ 型）（三菱化成社製）20
0ml に通塔して、該樹脂を水で洗浄後、0.2 規定アンモ
ニア水溶液でトランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンを含む
画分を溶出した。このときのトランス−Ｌ−ヒドロキシ
プロリンの残存率は76％で、総アミノ酸に対するトラン
ス−Ｌ−ヒドロキシプロリンの含有率は30％であった。
【００２０】溶出液を、強塩基性イオン交換樹脂PA-412
（OH- 型）（三菱化成社製）200mlに通塔して、該樹脂
を水で洗浄後、0.075 規定塩酸でトランス−Ｌ−ヒドロ
キシプロリンを含む画分を溶出した。このときのトラン
ス−Ｌ−ヒドロキシプロリンの残存率は74％で、総アミ
ノ酸に対するトランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンの含有
率は、61％であった。さらにこの溶出液をイオン交換樹
脂ダイヤイオンＳＫ−１Ｂ（Ｈ+ 型）200ml に通塔し、
該樹脂を水で洗浄後、 0.2規定アンモニア水溶液でトラ
ンス−Ｌ−ヒドロキシプロリンを含む画分を溶出した。
このときのトランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンの残存率
は77％で、総アミノ酸に対するトランス−Ｌ−ヒドロキ
シプロリンの含有率は、82％であった。
（OH- 型）（三菱化成社製）200mlに通塔して、該樹脂
を水で洗浄後、0.075 規定塩酸でトランス−Ｌ−ヒドロ
キシプロリンを含む画分を溶出した。このときのトラン
ス−Ｌ−ヒドロキシプロリンの残存率は74％で、総アミ
ノ酸に対するトランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンの含有
率は、61％であった。さらにこの溶出液をイオン交換樹
脂ダイヤイオンＳＫ−１Ｂ（Ｈ+ 型）200ml に通塔し、
該樹脂を水で洗浄後、 0.2規定アンモニア水溶液でトラ
ンス−Ｌ−ヒドロキシプロリンを含む画分を溶出した。
このときのトランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンの残存率
は77％で、総アミノ酸に対するトランス−Ｌ−ヒドロキ
シプロリンの含有率は、82％であった。
【００２１】以上３回のクロマトグラフィーによるトラ
ンス−Ｌ−ヒドロキシプロリンの通算収率は43％で、総
アミノ酸に対するトランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンの
含有率は82％であった。
ンス−Ｌ−ヒドロキシプロリンの通算収率は43％で、総
アミノ酸に対するトランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンの
含有率は82％であった。
【００２２】
【発明の効果】本発明によりコラーゲン加水分解物中の
総アミノ酸に対するトランス−Ｌ−ヒドロキシプロリン
の含有率を上昇させることができ、これにより医薬合成
原料として有用なトランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンを
効率よく製造することができる。
総アミノ酸に対するトランス−Ｌ−ヒドロキシプロリン
の含有率を上昇させることができ、これにより医薬合成
原料として有用なトランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンを
効率よく製造することができる。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成３年１１月２６日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正内容】
【００１０】以下、実施例により本発明を説明する。実
施例において用いるコラーゲン加水分解液は以下の通り
調製した。牛皮２kgに12規定硫酸5.1lを加え、120 ℃、
12時間加水分解反応を行った。反応後、反応液に水酸化
カルシウム１kgと水8lを加え、その懸濁液をろ過した。
このろ液を濃縮し、アミノ酸アナライザーを用いてアミ
ノ酸の分析を行ったところ、この濃縮液中にはアミノ酸
が 630ｇ／ｌ含まれ、そのうちトランス−Ｌ−ヒドロキ
シプロリンは93ｇ／ｌ、グリシンは 158ｇ／ｌ、Ｌ−プ
ロリンは98ｇ／ｌであった。この濃縮液をコラーゲン加
水分解液として用いた。
施例において用いるコラーゲン加水分解液は以下の通り
調製した。牛皮２kgに12規定硫酸5.1lを加え、120 ℃、
12時間加水分解反応を行った。反応後、反応液に水酸化
カルシウム１kgと水8lを加え、その懸濁液をろ過した。
このろ液を濃縮し、アミノ酸アナライザーを用いてアミ
ノ酸の分析を行ったところ、この濃縮液中にはアミノ酸
が 630ｇ／ｌ含まれ、そのうちトランス−Ｌ−ヒドロキ
シプロリンは93ｇ／ｌ、グリシンは 158ｇ／ｌ、Ｌ−プ
ロリンは98ｇ／ｌであった。この濃縮液をコラーゲン加
水分解液として用いた。
Claims (3)
- 【請求項１】 トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンを実
質的に分解せず、他のアミノ酸を分解する能力を有する
微生物をコラーゲン加水分解物を含有する培地で培養
し、培養物からトランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンを採
取することからなるトランス−Ｌ−ヒドロキシプロリン
の製造法。 - 【請求項２】 微生物がプロテウス属、プロビデンシア
属、デレヤ属またはプラノコッカス属に属することを特
徴とする請求項１記載の製造法。 - 【請求項３】 他のアミノ酸が、アスパラギン酸、スレ
オニン、セリン、アスパラギン、グルタミン酸、プロリ
ン、グリシン、アラニン、バリン、システイン、メチオ
ニン、ロイシン、イソロイシン、チロシン、フェニルア
ラニン、ヒスチジン、リジン、アルギニン、ヒドロキシ
リジンまたはα−アミノ酪酸である請求項１記載の製造
法。
Priority Applications (8)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3296944A JPH05130883A (ja) | 1991-11-13 | 1991-11-13 | トランス−ｌ−ヒドロキシプロリンの製造法 |
| KR1019920018837A KR930010184A (ko) | 1991-11-13 | 1992-10-13 | 트랜스-l(엘)-히드록시 프롤린의 제조방법 |
| CN92111645A CN1033651C (zh) | 1991-11-13 | 1992-10-21 | 反式-2-羟基脯氨酸的制备方法 |
| US07/972,824 US5364775A (en) | 1991-11-13 | 1992-11-06 | Process for producing trans-L-hydroxyproline |
| TW081108925A TW209246B (ja) | 1991-11-13 | 1992-11-07 | |
| DE69220326T DE69220326T2 (de) | 1991-11-13 | 1992-11-11 | Verfahren zur Herstellung von Trans-L-Hydroxy-Prolin |
| AT92119274T ATE154393T1 (de) | 1991-11-13 | 1992-11-11 | Verfahren zur herstellung von trans-l-hydroxy- prolin |
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Applications Claiming Priority (1)
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|---|---|
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Family
ID=17840206
Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
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Country Status (8)
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|---|---|
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| KR (1) | KR930010184A (ja) |
| CN (1) | CN1033651C (ja) |
| AT (1) | ATE154393T1 (ja) |
| DE (1) | DE69220326T2 (ja) |
| TW (1) | TW209246B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2017195873A1 (ja) * | 2016-05-12 | 2017-11-16 | サントリーホールディングス株式会社 | Ｌ－ヒドロキシプロリンを含有する酵母ヤロウィア・リポリティカの菌体もしくは菌体培養物又はこれらの抽出物及びその用途並びにｌ－ヒドロキシプロリンの製造方法 |
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| ATE219671T1 (de) * | 1996-04-16 | 2002-07-15 | Chephasaar Chem Pharm Fabrik G | Verwendung von hydroxyprolinen zur herstellung eines arzneimittels zur hemmung der leukozyteninvasion in gewebe |
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| AU2020417293A1 (en) | 2020-01-03 | 2022-09-01 | Berg Llc | Polycyclic amides as UBE2K modulators for treating cancer |
-
1991
- 1991-11-13 JP JP3296944A patent/JPH05130883A/ja not_active Withdrawn
-
1992
- 1992-10-13 KR KR1019920018837A patent/KR930010184A/ko not_active Application Discontinuation
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- 1992-11-06 US US07/972,824 patent/US5364775A/en not_active Expired - Fee Related
- 1992-11-07 TW TW081108925A patent/TW209246B/zh active
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- 1992-11-11 EP EP92119274A patent/EP0542222B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-11-11 AT AT92119274T patent/ATE154393T1/de active
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2017195873A1 (ja) * | 2016-05-12 | 2017-11-16 | サントリーホールディングス株式会社 | Ｌ－ヒドロキシプロリンを含有する酵母ヤロウィア・リポリティカの菌体もしくは菌体培養物又はこれらの抽出物及びその用途並びにｌ－ヒドロキシプロリンの製造方法 |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE69220326T2 (de) | 1997-11-20 |
| DE69220326D1 (de) | 1997-07-17 |
| CN1072211A (zh) | 1993-05-19 |
| CN1033651C (zh) | 1996-12-25 |
| EP0542222A2 (en) | 1993-05-19 |
| US5364775A (en) | 1994-11-15 |
| ATE154393T1 (de) | 1997-06-15 |
| TW209246B (ja) | 1993-07-11 |
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| EP0542222A3 (en) | 1994-08-10 |
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