JPH04506971A - 人工生物膜 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 人工生物膜 本発明は、特に弾発性を有し強靭な蛋白質組成物を目的とし、またその製造およ び生物学的、生化学的および薬理学的な応用、特に人工生物膜の調製を目的とす る。

術語「人工生物膜」は、最も一般的な意義で、生物製品を原料とし、極めて広い 領域、たとえば外科、内科、薬剤科ばかりでなく、化学、繊維または製紙工業に おいて使用される膜を含む。

これらの応用に必要な性質は、何よりも弾発性を有し、機械的挙動が良好であり 、化学的抵抗性を有し、かつ多様な媒質に対して適合性を有することである。

このような膜を構成するものとして、エラスチンが、弾発性を有し、親水性およ び疎水性を同時に示すことを利用してこれを使用することが提案されている。

Ｉ　ｎ　ｓ　ｅ　ｒｒｎの８５年３月１日付フランス特許出願８５０３０５７は 、エラスチンと、可溶性フィブリンすなわちフィブリンモノマーとを特徴とする 特に生物物質および支持体、たとえば人工組織または細胞培養支持体として適す る製品を記載する。

本発明者は、特に狭い容器に着けるのに適する物質を研究しているうちに、支持 体として作用するポリマー物質の支持体に対する多様な生物製品の適合性を研究 するようになった。

研究の結果、エラスチンまたはエラスチン誘導体を、特定の条件で、結合組織の 他の蛋白質と反応させて、使用する支持体物質に強力に接着し、構造的蛋白の性 質を有し、生物膜に対する要求を特に満足させる蛋白質を得た。

本発明は、弾発性を有し、強靭な、場合によっては接着性を有し、多様な添加剤 とともにこれらの性質を保持できる、新規な蛋白質組成物を提供することを目的 とする。

また本発明は、この組成物を容易に得ることができる方法を提供することを目的 とする。

さらに本発明は、特に人工結合組織および細胞培養支持体として使用される生物 膜を提供することを目的とする。

本発明の蛋白質組成物は、Ｉ型および／または■型のコラーゲンの濃厚水溶液と 、エラスチンの可溶化によって得られた水溶性であって分子量が約ｉｏ、ｏｏｏ より大きいエラスチンペプチドと、またはエラスチンとを反応させて得られた組 成物で実質的にある。

以下の記載において、上記問題になっているエラスチンペプチドを、［可溶化さ れたエラスチンペプチド」と言い、略号ＰＳＥで示す。

この組成物は、弾発性を有し、構造的蛋白質に匹敵する機械的性質を示す。また 所望の生物的応用において使用するのに特に大切な接着性が優れている。

好ましい蛋白質組成物は、エラスチンと、Ｉ型および■型のコラーゲンとの反応 によって得られるもので実質的にある。

■型コラーゲン対Ｉ型コラーゲンの割合は、乾燥重量で、５０重量％より多く、 特に少なくとも７０重量％が有利である。市販の■型コラーゲンがこの量のＩ型 コラーゲンを含有することに留意するであろう。

エラスチンは、ヒト、または原生もしくは殖生の動物から得られたエラスチン、 また場合によってはそれらの誘導体である。一般に動物の組織から抽出したエラ スチンに関し、特にウシの頚の靭帯、またはブタ、ヒツジもしくはヒトの大動脈 から抽出したエラスチンに関する。

本発明の他の好ましい組成物は、可溶化されたエラスチンペプチドと■型コラー ゲンとの反応によって得られるもので実質的にある。

これらの組成物で使用するコラーゲンは、本発明の態様として、ヒトの胎盤から 抽出したコラーゲンである。

これらの組成物は、エラスチンとは対照的に、フィブリンモノマーと反応しない 。

本発明の好ましい態様として、エラスチンすなわちＰＳＥ対コラーゲンの重量比 は乾燥重量比で約１０〜１、好ましくは２．５程度である。

本発明の組成物は、その変形として、骨置換物質に、ＰＳＥとコラーゲンが固定 された複合体物質を含む。

骨置換物質は、オステオコンダクション、すなわち表面状態および多孔性によっ て骨の形成に適合した有機または生きている組織によって再びコロニーを形成す ることができる性質、およびオステオコンダクション、すなわち骨発生の端緒に 好ましい環境を創出すことができる性質を有し、かつ生物適合性を有する物質か ら選ぶことが有利である。

このような物質は、特にＣａ＋“、りん酸三カルシウム塩またはアパタイトを特 徴とする特に適切な物質はヒドロキシアパタイトからなる。

本発明は、ヒドロキシアパタイトと、ＰＳＥと■型および／またはｍ型のコラー ゲンとの反応によって得られる組成物である。

上記蛋白質組成物の調製方法の特徴は、■型および／または■型コラーゲンの濃 厚な水溶液と、分子量が少なくとも約１０．０００であり、第三ブチルアルコー ル−１Ｍ水酸化カリウムの５０１５０混合物水溶液に溶解することができるエラ スチンペプチドまたはエラスチンとを、ゲルを形成することができる条件で接触 させ、 生成したゲルを回収し、所望であればさらに処理を行う。

水溶液中のコラーゲンの濃度が少なくとも３ｍｇ／ｍｌ、特に３〜１０ｍｇ／ｍ ｌである。

本発明の好ましい実施態様によれば、上記接触は生理的条件、すなわち約３７℃ 、ｐＨ７〜７．５で行う。

エラスチンまたはＰＳＥは、それぞれｐＨ約７〜７．５、好ましくはｐｆ１７． ４の緩衝液に懸濁または溶解する。これらの構成要素は所望の反応にとって好ま しいか、または少なくとも全く妨げることがない。たとえばＮａ”、Ｃａ−およ び／またはＭｇ−の陽イオン、ＰＯ４″および／またはＣＩ−の陰イオンを含む 緩衝液が、この点で有利である。

上記イオンの組合せを含む、特に適切な緩衝液は、モル比が１ｍＭ　ＰＯ４，１ ５０ｍＭ　ＮａＣ１，２ｍＭ　Ｃａ”および１ｍＭ　Ｍｇ”の組成物に対応する 緩衝液ＰＢからなる。

特に指で押潰されないゲルは、緩衝液中のエラスチンまたはＰＳＥ、およびコラ ーゲンを約２．５の割合で使用して得られる。

この割合は、組成物の用途に応じて変えることができる。

エラスチンは、一般に動物の組織を原料とし、同伴する蛋白質を溶解して除去す ることによって得られる。

組織としては、ウシの頚の靭帯、またはブタもしくはヒツジなどの大動脈を使用 することが好ましい。

エラスチンペプチドは、エラスチンを、たとえば１Ｍ水酸化カリウムでアルカリ 処理するか、たとえばしゅう酸で酸処理するか、またはエラスターゼで酵素処理 することによる、たとえば水和によって得られる。

コラーゲンは、特にヒトの胎盤から得る。

次に所望の応用に使用できる膜を作製するために、ＰＳＥに、ゲルの性質を改良 して、所望の応用に有用な性質を与える添加剤を加え、次にコラーゲンを加える 。

単独または組合せて使用する有利な添加剤のうち、ゲルの凝集性を助長するフィ ブロネクチンおよびラミニン、接着性を改良する■型コラーゲン、生長ホルモン 、栄養素、ビタミン、プロテオグリカンたとえばヘバランサルフ、’Ｙ’Ｆ’お よびデルマタンサルフェート、酵素、防腐剤、触媒または酸化還元剤を挙げるこ とができる。これらの添加剤が本発明の蛋白質の構造を保存する。

の応用を考慮して適切な量で実施することができる。

生成した混合物を、次に３７℃程度の温度に保ってゲルをこの組成物に所定の形 状および寸法を与えることを望む場合は、本発明の組成物の調整可能な特徴を利 用して、適切な鋳型内で反応を行う。こうして、管状、フィラメント状または帯 状の生物物質として使用する組成物を得ることができる。

この組成物は型から取出し、場合によっては、乾燥して過剰の水を除去する。

保存は、防腐剤が存在する湿潤状態で、または真空乾燥状態で行う。この場合、 生成物を使用する前に、滅菌した生理的食塩水と接触させて、再び水和する。

複合物質から形成された組成物を得るには、骨置換物質をＰＳＥと反応させ、次 にコラーゲンと反応させることが有利である。温度およびｐＨの条件は、特に上 述のとおりである。

既に報告した通り、本発明の組成物は弾発性、水密性と同様に堅牢性、生物適合 性、および必要な場合には接着性の注目すべき性質を示す。

これらの性質は人工生物膜の形成に特に有利である。

また本発明は、上記のような蛋白質組成物を含むことを特徴とする膜を目的とす る。

これらの膜は、特に人工結合組織として有用である。

その構成は、基底膜の稠密層に極めて類似しており、特に■型コラーゲンを含む 場合は、動脈の下向皮細胞に類似する。

本発明の膜は、たとえば閉塞、支持および強化するための片として使用すること ができる。

これらは、組織の再生過程を開始し、次に誘導する一時的な支持片を構成するこ とができる。

これらは、生物適合性の接着剤を使用して接着するか、または縫合して固定する 。また変形として、接着性が強いので、他の手段によらずに、所定の場所に固定 することもできる。

本発明の重要な利益の面として、これらの膜は、生物物質の調製において、組織 の繊維として通常使用される支持ポリマー物質に強く接着する。

その他、これらは癒着を助長する。

有利なこさに、これらの膜はフィブリンなしで、かつフィブリンに固定せずに、 凝固現象を誘起しないことに留意すべきである。

火傷の処理において、特定の組織の損失を補償することができる。

また、細い口径の人工脈管を作製するのに極めて有利である。

一般に、本発明の膜は、外科、特に消化器科、循環器科、泌尿器科、産婦人科、 美容を含む形成外科、皮ふ科、胎児を含む小児科を含むすべての分野の外科また は獣医科で使用することができる。

１つまたは複数の特殊な添加剤を選択することによって、所望の応用に適した膜 を容易に作製することができる。

添加剤として、例えばプロテオグリカンを考慮すれば、ヘパランサルフェートを 使用して、動脈の下層内皮として使用する膜を作製することができ、さらにコン ドロイチンサルフェートで軟骨の置換膜を作製することができる。同様に、表皮 と真皮の界面を修復するために、本発明の組成物にケラタンサルフェートを加え ることが特に有利である。

本発明は、要求に適合した膜を実現する手段を当業者に供給する。

また本発明の膜は、特に細胞培養に使用する支持体を構成する。

多様な細胞培養は、これらの支持体を使用して通常の条件で操作を行うことがで きる。特に平滑筋の細胞、繊維胚芽、ケラチン細胞、上皮細胞、および内皮細胞 の培養を挙げることができる。得られる収率は高い。

またこれらの膜は、皮ふの片を修復する目的で上皮細胞を植付けるときに、皮ふ の基礎として使用することができる。

次にこの皮ふの片を受容者の組織に移植する。

上記複合体物質、特にヒドロキシアパタイトをＰＳＥおよびコラーゲンを含んだ 複合体から作製した膜は骨胚胞の培養支持体として使用することができる。

複合体物質を基礎とする膜はゲル状を呈する。遠心分離沈降物は生化学研究で使 用することができる。

また本発明は、組織の再生または細胞の培養を行うために必要な要素を含むセッ トに関する。

説明のために、次に示す例は、本発明の他の特徴および利益を明かにする。

この例において参照する図面は次のとおりである。

図１ａおよび１ｂは、本発明の蛋白質を走査電子顕微鏡により異なる倍率で撮影 した写真である。

図２は、ＰＳＥ　４０ｍｇにつき添加コラーゲンのｍｇ量の関数として示す、乾 燥生成物のｍｇｉのグラフである。

図３は、添加コラーゲン量および反応時間の関数として示す、本発明の組成物に 対応する洗浄した遠心分離沈降物の放射活性ｃｐｍ／ｍｇのグラフである。

これらの例で使用したエラスチンは、ウシの頚の靭帯から得たＳ　Ｉ　ＧＭＡ７ ２’市販のエラスチンである。

■十■型コラーゲンまたは■型コラーゲンおよびフィブロネクチンは、ヒトの胎 盤から得たＩｎ５ｔｉｔｕｔ　Ｍｇｒｉｅｕｘ７：市販の製品である。Ｉ＋ＩＩ Ｉ型コラーゲンは■型７３％およびＩ型２７％を含む。

例１：エラスチンーコラーゲンゲルの調製ｐＨ７，４の緩衝液ＰＢ　（Ｉｄ　Ｐ Ｏ，，１５０ｍＭ　ＮａＣ１，２ｍＭ　Ｃａ”、１ｍＭ　Ｍｇ”）１ｍｌ中の粉 砕し篩別したエラスチン４０ｍｇの懸濁液に、濃度３ｍｇ／ｍｌまたは６ｍｇ／ ＋＋＋１のＩ＋ＩＩＩ型コラーゲンのゲル１ｍｌを加えた。登録商標Ｖｏｒｔｅ ｘで５秒間均質化し、次に混合物を撹拌しないで、３７℃で型に注入し、１５分 間、■、２および１２時間保った。

生成物を回収し、洗浄し、乾燥した。

変形として、混合物を型に注入する代りに、受器内で一定温度に保ち、次に生成 物に３００Ｏｒｐｍの遠心分離を１０分間行って分離した。回収した生成物は均 質な単一の相であった。

構造の研究は走査電子顕微鏡によって行った。この技術により、エラスチンとコ ラーゲンとの間が極めて狭く結合されていることを直ちに解析できた。図１ａ（ 倍率５６００）および図１ｂ（倍率３３６００）参照。

エラスチン１ｇを使用した。エラスチンを粉砕し篩別した後に第三ブチルアルコ ール５０ｍ１に加えて懸濁液とした。ＩＭ水酸化カリウム水溶液５０ｍ１を加え 、十分に撹拌して乳濁状を保った。２５℃で４８時間の終りに、エラスチンは完 全に溶解した。

次に水５０ｍ１を加え、酢酸を加えて中和し、Ｐ）Ｉを７とした。

流水で約１４時間透析し、第三ブチルアルコール、塩および分子量約ｉｏ、ｏｏ ｏ以下のペプチドを除去した。

次にイオン交換水で約２時間２回透析した。

調製物は保存の目的で一４０℃に凍結し真空乾燥した。収率は６５〜８５％であ った。

生成したゲルの安定性の研究 ヨード１２５で標識したエラスチンを可溶化して得たペプチド５０ｍｇを、ＰＢ 　２ｍｌに溶解した。■型コラーゲン１０ｍｇ／　ｍ　１の水溶液２ｍｌを加え た。登録商標Ｖｏｒｔｅｘで５秒間均質化した。全体を温水浴で３７℃に５時間 保った。６０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。沈降物を水５ｍｌで１５分間 洗浄し、次に水５ｍｌで１時間洗浄した後、水５ｍｌで翌日まで洗浄した。各洗 浄の後に沈降物の放射活性を測定した。

次に生成物を７日間放置し、さらに水洗を行った。洗浄した生成物は２５℃の水 中に１８日間保ったが、外観に変化はなかった。遠心分離後、生成物を２５〜２ ９℃の空気で２日間乾燥した。

得られた物質は、洗浄中にかなり崩壊したにも拘らず、コンパクトでかつ強固で あった。水中で取上げると、一層可塑性のマトリックスを得た。これはＩ）Ｈ約 １の１／２酢酸の存在で可溶化されず、終いには最初のゲルによく似たゲルとな った。

ヨード＋２５で標識していないＰＳＥを使用し、ｐＨ７−４のＰＢ　１ｍｌ中の ＰＳＥの量を０．　５．　１０．　２０．　３０．　４０．６０および１００ｍ ｇと増加させて、３ｍｇ／ｌのＩ＋ＩＩＩ型コラーゲンゲル１ｍｌと３７℃で反 応させた。

ＰＳＥの量が増加するに伴なって、ゲルは一層急速に形成され、かつ一層コンパ クトな形となった。

５０００ｒｐｍの遠心分離を１０分間行い、１時間後にゲルを分離することがで きた。ＰＳＥの量が、５〜２０ｍｇではゲルは軟かく、３０〜１００ｍｇでは一 層固くなった。ＰＳＥ３０〜４０ｍｇでは指で押圧したときの強固さが最大であ った。

ゲルは空気中で乾燥して計量した。得られた重量はＰＳＥの重量の関数としてか なり比例していることを認めた。

第２の実験 上記のように、ｐｆ１７．　４のＰＢ　１＋ｍｌ中のＰＳＥの量を１０．２０． ３０．４０．６０および８０ｍｇと変えてＩ＋ＩＩＩ型コラーゲン１ｍｌと反応 させた。

ＰＳＥ　４０ｍｇでは、コラーゲン溶液１．２および３ｍｌを使用した。

第３の実験 ＰＳＥの量を４０ｍｇ／ｍｌに固定し、１０ｍｇ／ｍｌのＩ＋ＩＩＮ型コラーゲ ンの量を２．４，６，８．１０．１２．１４および２０１１１ｇと増加させたこ との他は上記と同様に操作した。ゲルは６１′ＩＩｇから急速に凝集し、１４お よび２０ｍｇの量は極めて不透明であった。傾斜分離するために、遠心分離の前 にＨ，０／ＥｔＯＨを加えた。得られたすべてのゲルを洗浄し、濾紙上で乾燥し た。ゲル乾燥後に得られた生成物の量と、コラーゲンの量の間にかなり良好な比 例関係が認められた（図２参ＰＳＥ−コラーゲンゲルを研究するために、ヨード ＋２５で標識したＰＳＥを使用し、沈殿に保持された放射活性の測定により生成 物の量をめた。

ＰＳＥ−１１２５の溶液を５ｍｇ／ｍｌ櫻≠看比、および４，６Ｑ　Ｏｃｐｍ　 ／ｍｇに調製し、最終容積が２ｍｌとなる量のｐｔ１７．４のＦＢ緩衝剤を加え た後に、コラーゲンの量を０．　５．　１゜２．４および６ｍｇと増加させて加 えた。

５５００ｒｐｍの遠心分離を３０〜４０分間行い、次に上澄液の放射活性を測定 した。沈降物は褐色であり、Ｈ，Ｏで２回水洗した。

この実験は、時間を１．２および４時間と変えて行った。

得られた結濃は図３に示す。これは洗浄した沈降物上の放射活性（ｃｐｍ　／ｍ ｇ）を、コラーゲンの重量の関係および実験時間の関数として示す。

記号■の曲線は１時間、記号○の曲線は２時間、記号ムの曲線は４時間の実験継 続時間に対応する。

例３：フィブロネクチン、ラミニンおよびＩ型コラーゲンを含むゲルの調製 標識したフィブロネクチンをｐＨ７，２のＯ，ＬＭ　ＰＯ，。

０．１５　ＮａＣ１緩衝液に溶解して１．　２ｍｇ／ｍｌおよび８・１０’ｃｍ ｐ／ｍｇとした溶液を使用した。

ＰＳＥ　１０ｍｇ／ｍｌ　ＰＢ　（７，４）を調製した。この溶液１ｍ１ｌ：フ イブ口ネクチン−Ｉ＋２５溶液１０．　２０．　５０．　１００および２００１ ｔｌを加えた。３７℃に３０分間加温し、■＋■型コラーゲン０．　４ｍｌ、お よび最終容積が２ｍｌになるようにＦＢ７．４の適当量を加えた。登録商標Ｖｏ 　ｒ　ｔ　ｅｘで５秒間均質化し、撹拌せずに３７℃に４時間保持した。５５０ ０　ｒｐｍの遠心分離を４０分間行い、上澄液と沈降物を分離した。

フィブロネクチンを添加するとゲル形成を促進することを認めた、すなわちフィ ブロネクチン２００ｉｔｔでは瞬間的に形成された。洗浄は、最知は水中で短時 間、次に２０℃の水中で約１４時間乾燥したが、ゲルに残留し、フィブロネクチ ンによって担持された放射活性は平均して１７％のみが減少したに過ぎなかった 。これはフィブロネクチンのゲルの成分に対する親和性が著しいことを示す。

Ｓｉｇｍａ＃Ｉ：のラミニンおよびＭｅｒｉｅｕｘｍの標識された■型コラーゲ ンを、フィブロネクチンの試験で使用した０−ＬＭ　ＰＯ，緩衝液に溶解して、 ラミニン５００．０００ｃｐｍ／ｍｌ、■型コラーゲン８５０．　０００ｃｐｍ 　／ｍｇとした溶液を使用した。

ＰＳＥはＦＢ　（７−４）中の１０ｍｇ／ｍｌとして調製した。こ間加温した。

ＰＢ　（７，４）の適量と■＋■型コラーゲン０゜４ｍｌを加えて２ｍｌとした 。登録商標Ｖｏｒｔｅｘで５秒間均質化し、撹拌せずに３７℃に４時間保った。

５５００ｒｐｍ遠心分離を４０分間行い、沈降物と上澄液を分離することができ た。

生成したゲルはラミニンまたは■型コラーゲンの量が多い程、コンパクトである ことを認めた。洗浄を反復または長時間行っても、沈降物の放射活性は減少しな かった。これはこれら２一つの蛋白質との親和力が大きいことを示す。

の補綴用試料を、ｐＨ７，４の緩衝液ＰＢ中で４時間加温した。

この間にＰＳＥ−コラーゲンゲルを次のように調製した。ＰＳＥ−Ｉ′２’の１ ０ｍｇ／ｍｌ溶液１ｍｌに、ｐｆ１７．４のＴＰＳＯ，６ｍｌと１０ｍｇ／ｍｌ の■型コラーゲン０．　４ｍｌを加え、これらの添加中に、注意深く均質化した 。３７℃に４時間放置した後、５０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、沈降物を ｐＨ６のイオン交換水２ｍｌで２回洗浄した。使用した試料の長さによって、こ のゲルの量を２倍使用する。

次に登録商標Ｄａｃｒｏｎの物質を伸ばしながら、その内部にゲルをへらで加え た後、空気中で約１４時間乾燥した。

や＼柔軟性の少ない試料を得たが、これは放射活性物質を保持していた。

次にこの試料を、極めて激しくは撹拌しないで、２ｍｌの水で５時間洗浄した。

この水は各測定の後に新しい水と交換した。６時間目に試料製、かなり激しく磁 気撹拌したビーカ中の水１００ｍ１に加えた。これらのすべての洗浄中に、試料 に保持された放射活性は２３時間目まで評価することができた。

得られた結果、ＰＳＥ−コラーゲンゲルは、強く固定されていなかったのに拘ら ず、登録商標Ｄａｃｒｏｎにがなり良好に保持されていたことを示した。またこ の実験により、接着性の他に、物質が水に不溶性であることも確めた。

以下ｈＡと呼ぶヒドロキシアパタイトを、まずＰＳＥ−Ｉ”’と、３７℃、ｐＨ ’ｌ　４で反応させた。放射活性２５〜３５％を有するｈＡ−ＰＳＥ−１”’生 成物を得た。

次にこの生成物をＩ＋ＩＩ［型コラーゲンき３７℃、ｐ）１７．　４で反応させ た。

得られた生成物はｈＡ−ＰＳＥ−コラーゲン型の複合体物質であり、ｈＡの周り にゲルを形成した状態を示し、このゲルは多数回の洗浄の後にも、固く付着して いた。

ＰＳＥは２０ｍｇ／ｍｌの比で使用することが有利である。ｈＡによって提供さ れる結合場所は３７℃に加温して１５分後に２Ｘ１ｍｌで飽和した。

ｈＡ−ＰＳＥとコラーゲンは、たとえばｈＡ−ＰＳＥ４ＱｍｇＸｐ）１７．　４ の緩衝液１．２ｍｌおよびＩ＋ＩＩＩ型コラーゲン０、　８ｍｌ　（８ｍｇ）で 反応させることができる。

ＦＩＧＵＲＥ　ｌａ ”　’　６　ｍｇｃｏｌｌａｇｊｎｅ 国際調査報告 国際調査報告

Claims (14)

【特許請求の範囲】
1. １．Ｉ型および／またはＩＩＩ型コラーゲンの濃厚な水溶液と、エラスチンの可 溶化によって得られた水溶性であって分子量が約１０，０００より大きいエラス チンペプチドまたはエラスチンとの反応によって得られたもので実質的にあるこ とを特徴とする蛋白質組成物。
2. ２．Ｉ型およびＩＩＩ型のコラーゲンとの反応によって得られたもので実質的に ある 請求項１に記載の組成物。
3. ３．ＩＩＩ型コラーゲンの割合が、乾燥重量比で５０重量％より多く、特に少な くとも７０重量％である請求項２に記載の組成物。
4. ４．可溶化されたエラスチンペプチドと、ＩＩＩ型コラーゲンとの反応によって 得られたもので実質的にある請求項１に記載の組成物。
5. ５．エラスチンまたは可溶化されたエラスチン／コラーゲンの乾燥重量比が、約 １０対１、好ましくは２．５程度である 請求項１〜４のいずれかに記載の組成物。
6. ６．また骨置換物質、特にＣａ＋＋をベースとする物質、りん酸三カルシウムま たはアパタイト、さらに特にヒドロキシアバタイトとの反応によって得られたも ので実質的にある請求項１〜５のいずれかに記載の組成物。
7. ７．請求項１〜５のいずれかに記載の組成物の調製方法であって、 Ｉ型および／またはＩＩＩ型コラーゲンの濃厚な水溶液と、分子量が、少なくと も約１０，０００のエラスチンペプチドまたはエラスチンとを、ゲルを形成する ことができる条件で、接触させ、このペプチドが、第三ブチルアルコール−１Ｍ 水酸化カリウムの５０−５０混合物水溶液に可溶である接触工程と、 形成されたゲルを回収し、所望であればさらに処理を行う工程とを含むことを特 徴とする方法。
8. ８．接触工程を生理的条件、すなわち約３７℃、ｐＨ７〜７．５程度で行う 請求項７に記載の方法。
9. ９．ｐＨが約７〜７．５、好ましくは７．４であって、Ｎａ＋，Ｃａ＋＋および ／またはＭｇ＋＋の陽イオンと、ＰＯ４■および／またはＣｌ−の陰イオンとを 含む緩衝剤、特に１ｍＭＰＯ４，１５０ｍＭＮａＣｌ，２ｍＭＣａ＋＋，１ｍＭ Ｍｇ＋＋の組成を有する緩衝剤ＰＢを使用する 請求項７または８に記載の方法。
10. １０．可溶化されたエラスチンペプチド（ＰＳＥ）に、ゲルの品質を改良して特 殊な性質を付与する添加剤を加え、次にコラーゲンを加え、この添加剤を特に、 フィブロネクチン、ラミニン、ＩＶ型コラーゲン、治療薬および殺菌剤から選ぶ 請求項７〜９のいずれかに記載の方法。
11. １１．請求項６に記載の組成物を得るために、骨置換物質を、可溶化されたエラ スチンペプチドと、Ｉ型および／またはＩＩＩ型コラーゲンと反応させる 請求項７〜１０のいずれかに記載の方法。
12. １２．請求項１〜６のいずれかに記載の蛋白質組成物の１つから出発して調製さ れたことを特徴とする、人工生物膜。
13. １３．請求項１２に記載の人工生物膜を人工結合組織として、使用する方法。
14. １４．請求項１２に記載の人工生物膜を、細胞培養の支持物質として使用する方 法。