JPH04338911A - 走査型顕微鏡 - Google Patents

走査型顕微鏡

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JPH04338911A
JPH04338911A JP4016991A JP4016991A JPH04338911A JP H04338911 A JPH04338911 A JP H04338911A JP 4016991 A JP4016991 A JP 4016991A JP 4016991 A JP4016991 A JP 4016991A JP H04338911 A JPH04338911 A JP H04338911A
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JP
Japan
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light
tuning fork
sample
optical system
illumination light
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Withdrawn
Application number
JP4016991A
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English (en)
Inventor
Kazuo Hakamata
袴田和男
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Fujifilm Holdings Corp
Original Assignee
Fuji Photo Film Co Ltd
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Publication date
Application filed by Fuji Photo Film Co Ltd filed Critical Fuji Photo Film Co Ltd
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Publication of JPH04338911A publication Critical patent/JPH04338911A/ja
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】
【0001】
【産業上の利用分野】本発明は光学式の走査型顕微鏡に
関し、特に詳細には、照明光を試料に照射する光学系を
音叉に保持し、この音叉を振動させて、照明光を試料上
において走査させるようにした走査型顕微鏡に関するも
のである。
【0002】
【従来の技術】従来より、照明光を微小な光点に収束さ
せ、この光点を試料上において2次元的に走査させ、そ
の際該試料を透過した光あるいはそこで反射した光、さ
らには試料から生じた蛍光を光検出器で検出して、試料
の拡大像を担持する電気信号を得るようにした光学式走
査型顕微鏡が公知となっている。なお特開昭62−21
7218号公報には、この走査型顕微鏡の一例が示され
ている。
【0003】従来の光学式走査型顕微鏡においては、上
記走査機構として、照明光ビームを光偏向器によって2
次元的に偏向させる機構が多く用いられていた。
【0004】しかしこの機構においては、ガルバノメー
タミラーやAOD(音響光学光偏向器)等の高価な光偏
向器が必要であるという難点が有る。またこの機構にお
いては、照明光ビームを光偏向器で振るようにしている
から、送光光学系の対物レンズにはこの光ビームが刻々
異なる角度で入射することになり、それによる収差を補
正するために対物レンズの設計が困難になるという問題
も認められている。特にAODを使用した場合には、対
物レンズ以外にもAODから射出した光束に非点収差が
生ずるため特殊な補正レンズが必要となり、光学系をよ
り複雑なものとしている。
【0005】上記の点に鑑み従来より、照明光ビームは
偏向させないで照明光光点の走査を行なうことが考えら
れている。例えば、本出願人による特願平1−2469
46号明細書には、送光光学系を試料台に対して相対的
に移動させることにより、照明光光点の走査を行なうこ
とが示されている。
【0006】そして、このように光学系と試料台とを相
対的に移動させる具体的な機構の1つとして、本出願人
による特願平2−198550号明細書に示されるよう
に、光学系を先端部に保持する音叉と、この音叉に強さ
が周期的に変化する磁界を作用させて該音叉を振動させ
る電磁石とから構成されたものが提案されている。この
ような移動機構は、例えばピエゾ素子や超音波振動子等
を利用した移動機構に比べれば、光学系の相対移動幅す
なわち照明光走査幅(これは音叉の振幅によって定まる
)を大きく取れるので、走査型顕微鏡の撮像範囲をより
大きく確保する上で有利となっている。
【0007】
【発明が解決しようとする課題】ところで従来の走査型
顕微鏡の多くは、試料からの光を検出する光検出器の連
続出力を信号処理手段に入力し、そこでこの出力をサン
プリング、量子化して、1主走査ライン毎のデジタル画
像データを得るようにしている。
【0008】しかしそのようにする場合、先に述べた音
叉と電磁石の組合せによる照明光走査機構を用いると、
例えば顕微鏡撮影像時にズーミング等のために音叉振幅
を変化させた際に、画像が全体的に照明光主走査方向に
ずれることがある。すなわち、上記電磁石に印加する駆
動電圧の位相と音叉の位相とは必ずしも一致するとは限
らず、音叉振幅を変えるために電磁石の駆動条件、つま
り電圧値やデューティ比等を変化させると音叉の位相が
変化してしまう。そこで、上述のように1主走査ライン
単位の画像データのサンプリング開始タイミングを、従
来なされているように電磁石の駆動電圧の位相に基づい
て規定している場合は、このサンプリング開始タイミン
グが電磁石の駆動条件に応じて変化して、画像が主走査
方向にずれてしまうのである。
【0009】以上、音叉と電磁石との組合せからなる照
明光走査機構を用いる場合の問題について説明したが、
このような問題は、音叉に貼着した圧電素子等、電磁石
以外の加振手段を用いる場合でも、加振手段を駆動する
信号の位相と音叉の位相とがずれやすくなっていると、
同様に起こり得るものである。
【0010】そこで本発明は、振動する音叉によって光
学系を移動させる走査機構を用いた場合に、上述したよ
うな画像の主走査方向へのずれが生じることのない走査
型顕微鏡を提供することを目的とするものである。
【0011】
【課題を解決するための手段】本発明による走査型顕微
鏡は、上述したように光学系を一方の先端部に保持する
音叉と、この音叉に強さが周期的に変化する力を作用さ
せて該音叉を共振させる加振手段とから構成された光学
系移動機構を用いて、光学系を試料台に対して移動させ
ることにより、この照明光を試料上において主、副走査
させ、この照明光走査を受けた試料の部分からの光を光
検出器により検出して試料像を撮像する走査型顕微鏡に
おいて、◆前述したように光検出器の連続出力をサンプ
リングして、1主走査ライン毎のデジタル画像データを
得る信号処理手段を備えた上で、◆音叉の他方の先端部
に近接させて、複数の光反射部材または光遮断部材が該
先端部の振動方向に並設されてなるグリッドパターンが
設けられ、◆音叉の他方の先端部に、上記グリッドパタ
ーンに光を照射する投光器が取り付けられ、◆このグリ
ッドパターンで反射またはそこを透過した光を検出する
受光器が設けられるとともに、◆この受光器が出力した
光検出信号に基づいて、上記サンプリングのタイミング
および周期を規定するサンプリングクロックを作成する
手段が設けられたことを特徴とするものである。
【0012】
【作用】図5に、前述した音叉と電磁石とからなる照明
光走査機構における、電磁石の駆動電圧と音叉の位相等
の関係の一例を示す。同図の(a)に示すのが駆動電圧
Vd、(b)に示すのが光学系を保持した音叉先端部の
位相x、そして(c)に示すのは、音叉の他方の先端部
に取り付けられた受光器の出力信号Smである。音叉が
振動すると、照明光が試料上を主走査するとともに、上
記投光器から発せられた光もグリッドパターン上を走査
する。受光器にはこのグリッドパターンを介して上記の
光が入射するので、信号Smは、音叉の振動に伴なって
、このグリッドパターンに対応して変化を繰り返すもの
となる。そこでこの信号Smを波形整形してパルス信号
としてからn倍のパルスを補間する等の処理を行なえば
、照明光が試料上を一定距離動く毎に発するサンプリン
グクロックを作成することができる。
【0013】そして、音叉の2つの先端部は互いに位相
が整合して振動するので、上記の信号Smの位相は、照
明光照射用光学系の変位と必ず対応するものとなる。そ
こでこの信号Smに基づいてサンプリングクロックを作
成すれば、1主走査期間毎のサンプリングクロックは、
光学系が所定の変位を取ったところで出力開始すること
になる。なお図5の(d)に、同図(c)の信号Smに
基づいて作成されるサンプリングクロックCの例を示す
【0014】このようなサンプリングクロックを用いれ
ば、電磁石の駆動電圧の位相と音叉の位相がどのように
ずれていても、1主走査ライン毎の画像データのサンプ
リングは必ず、照明光が所定の主走査位置に来た時点で
開始されるようになる。
【0015】
【発明の効果】こうしておけば、従来装置のように駆動
電圧Vdの位相に基づいて画像データのサンプリング開
始タイミングを規定する場合と異なって、この駆動電圧
Vdの位相と音叉の位相との関係が変動しても、前述し
たような画像のずれが起こることがない。
【0016】
【実施例】以下、図面に示す実施例に基づいて本発明を
詳細に説明する。
【0017】図2は、本発明の一実施例によるモノクロ
反射型の共焦点走査型顕微鏡を示すものであり、また図
1は、その走査機構の平面形状を詳しく示している。図
2に示されるように単色光レーザ10からは、単一波長
の照明光11が射出される。直線偏光したこの照明光1
1は、P偏光状態で偏光ビームスプリッタ25の膜面2
5aに入射し、そこを透過する。偏光ビームスプリッタ
25を通過した照明光11は、偏波面調整用のλ/2板
12を通過し、入射用レンズ13で集光されて、偏波面
保存光ファイバー14内に入射せしめられる。
【0018】この偏波面保存光ファイバー14としては
、図4に断面形状を示すように、クラッド14a内にコ
ア14bが配され、このコア14bの両側に応力付与部
14c、14cが形成されてなる、いわゆるPANDA
型のものが用いられている。そして直線偏光した照明光
11は、λ/2板12を適宜回転させることにより、偏
波面の向きが応力付与部14c、14cの並び方向、あ
るいはそれに直交する方向と揃う状態にして(本実施例
では後者の方向、すなわち図4の矢印U方向)、該光フ
ァイバー14内に入射せしめられる。
【0019】この光ファイバー14の一端はプローブ1
5に固定されており、該光ファイバー14内を伝搬した
照明光11はこの一端から出射する。この際光ファイバ
ー14の一端は、点光源状に照明光11を発することに
なる。プローブ15には、コリメーターレンズ16およ
び対物レンズ17からなる送光光学系(受光光学系を兼
ねる)18が固定されている。なお、コリメーターレン
ズ16と対物レンズ17との間には、λ/4板19が配
設されている。
【0020】上記の照明光11はコリメーターレンズ1
6によって平行光とされ、λ/4板19を通過して円偏
光とされ、次に対物レンズ17によって集光されて、試
料台22に載置された試料23上で(表面あるいはその
内部で)微小な光点Pに結像する。試料23で反射した
反射光11”は旋回方向が逆向きの円偏光となり、λ/
4板19を通過して、偏波面の向きが照明光11のそれ
と直交する直線偏光とされる。この反射光11”の光束
は、コリメーターレンズ16によって集光されて、偏波
面保存光ファイバー14内に入射せしめられる。このと
きの反射光11”の偏波面の向きは、図4の矢印V方向
となる。光ファイバー14を伝搬した反射光11”はそ
の一端から出射し、レンズ13によって平行光とされる
【0021】この反射光11”はλ/2板12を通過後
、S偏光状態で偏光ビームスプリッタ25の膜面25a
に入射し、そこで反射する。この反射光11”は、集光
レンズ26で集光され、アパーチャピンホール27を通
して光検出器28によって検出される。この光検出器2
8は例えばフォトマルチプライヤ(光電子増倍管)等か
らなり、そこからは、試料23の照明光照射部の明るさ
を示す連続信号Sが出力される。
【0022】上述のように、λ/4板19と偏光ビーム
スプリッタ25とから構成される光アイソレータを設け
たことにより、反射光11”がレーザ10側に戻ること
がなくなり、より大光量の反射光11”が光検出器28
に導かれるようになる。また、入射用レンズ13や光フ
ァイバー14の端面等で反射した照明光11が、光検出
器28に入射することも防止され、S/Nの高い信号S
が得られるようになる。
【0023】次に、照明光11の光点Pの2次元走査に
ついて、図1を参照して説明する。プローブ15は、水
平に配された音叉30の一方の先端部に、光学系18の
光軸が垂直となる状態で固定されている。この音叉30
は、その基部30aが架台32に固定されて、所定の固
有振動数で振動可能となっている。そして音叉30の内
側には、その両先端部とそれぞれ若干の間隔をおいて、
電磁石31が配設されている。この電磁石31は、取付
部材34を介して架台32に固定されている。
【0024】上記電磁石31には、駆動回路33から、
音叉30の固有振動数と等しい周波数の矩形パルス電圧
Vdが印加される。こうして音叉30の両端部に断続的
に磁界が作用することにより、音叉30はその固有振動
数で共振する。そこで、この音叉30に固定されている
プローブ15は、図1、図2中のX方向(水平方向)に
高速で往復移動し、光点Pの主走査がなされる。
【0025】また試料台22は架台32に対して、Z方
向(光学系18の光軸方向)に往復移動可能なZ移動ス
テージ24Z、およびX、Z両方向に対して直角なY方
向に往復移動可能なY移動ステージ24Yを介して取り
付けられている。そこで、上記のようにして光点Pの主
走査を行なうとき、同時にY移動ステージ24Yを往復
駆動させると、光点Pの副走査がなされる。
【0026】そして、光点Pの2次元走査を行なう毎に
、Z移動ステージ24Zを移動させることにより、試料
23をZ方向に移動させた範囲内で、全ての面に焦点が
合った画像を担う信号Sを得ることが可能となる。
【0027】なお本実施例では図1に示す通り、音叉3
0の他方の先端部には、プローブ15と同じ構成のダミ
ープローブ15’が取り付けられている。それにより、
音叉30の一端部、他端部の機械的バランスを良好に保
ち、理想に近い共振系を構成できるようになる。
【0028】ダミープローブ15’は上述のように作用
する他、後述するサンプリングクロックを作成する作用
も果たす。すなわちこのダミープローブ15’には、プ
ローブ15の送光光学系18と同様にコリメーターレン
ズ16’、対物レンズ17’およびλ/4板19’から
なる投光用光学系18’(図6参照)が搭載されている
。そしてこの光学系18’には、図2に示されるように
、偏波面保存光ファイバー14’を介して入射用レンズ
13’、λ/2板12’、単色光レーザ10’、そして
膜面25a’を有する偏光ビームスプリッタ25’、集
光レンズ26’、アパーチャピンホール27’、光検出
器28’が光学的に結合されている。以上の要素10’
、12’、13’、14’、25’、25a’、26’
、27’、28’はそれぞれ、前述した照明光用の各要
素10、12、13、14、25、25a、26、27
、28と同様のものである。
【0029】また図1および図6に示されるように、ダ
ミープローブ15’を保持した音叉30の先端部の下方
には、それに近接させてグリッドパターン60が配され
ている。このグリッドパターン60は、比較的光吸収率
の高い材料からなる基板61上に、複数の所定幅の線状
光反射部材62が互いに所定間隔を置いて並設されてな
るものである。このグリッドパターン60は、取付部材
63を介して架台32に固定されている。光反射部材6
2は、例えばアルミニウムやその他の金属、あるいは化
合物の膜からなり、照射された光を高反射率で反射させ
る。またこれらの光反射部材62は、音叉30の先端部
の振動方向(X方向)に並設されている。
【0030】なお本実施例では、音叉30の内側に電磁
石31を配して、音叉30の両端部にそれぞれ磁界を作
用させるようにしているので、電磁石を音叉30の1つ
の端部の外側にのみ配する場合に比べれば、音叉30に
作用する磁束密度、つまりは作用する力を、より大きく
することができる。
【0031】次に図3を参照して、電気的な構成につい
て説明する。前述した光検出器28が出力する連続的な
アナログ信号Sは、アンプ40で増幅されてからA/D
変換器41に入力され、そこでサンプリングクロックC
に基づいて周期およびタイミングが規定された上でサン
プリングされ、そして量子化されて、デジタルの画像信
号Sdに変換される。この画像信号Sdは、画像処理装
置42において例えば階調処理等の画像処理を受けた後
、CRT表示装置等の画像再生装置43に入力される。 この画像再生装置43においては、画像信号Sdが担持
する画像、すなわち試料23の顕微鏡像が再生される。
【0032】上記画像再生装置43には、例えばパーソ
ナルコンピュータ等のコンピュータ44が画像処理装置
42を介して接続され、画像処理の指令や、走査型顕微
鏡の基本的操作指令、つまり視野探し用画像の撮像指令
や観察用画像の撮像指令等は、すべてこのコンピュータ
44のキーボード等の入力操作部を用いて与えられる。
【0033】ここで画像再生装置43としては一般的な
ラスタ走査方式のものが用いられるので、上記の画像信
号Sdは、アナログ信号Sのサンプリング開始タイミン
グを主走査と同期を取って適正に設定して、1主走査ラ
イン毎のものとしなければならない。このサンプリング
開始タイミングは、サンプリングクロックCに基づいて
規定される。以下、その点について詳しく説明する。
【0034】顕微鏡像を撮像する際には、前述したレー
ザ10’および光検出器28’も作動状態に設定される
。このレーザ10’から射出されたレーザ光65は、偏
波面保存光ファイバー14’を伝搬して、ダミープロー
ブ15’の光学系18’により、グリッドパターン60
上で小さな光点P’に収束する。そしてこの光点P’は
、音叉30が振動することにより、グリッドパターン6
0上を主走査方向(X方向)と同方向に往復走査する。 そこでこの光点P’は、複数の光反射部材62と、それ
らの間の低反射率の基板61の部分とを交互に照射する
【0035】光反射部材62で反射した反射光65”は
、試料23からの反射光11”が光検出器28によって
検出されるのと同様にして、光検出器28’によって検
出される。一方光点P’が基板61の部分を照射してい
るときは、その反射光量が著しく低下する。そのため光
検出器28’の出力信号Smは、図5の(c)に示す通
り、音叉30の移動にともなって周期的に変動する。な
お本実施例では、複数の光反射部材62が、音叉30の
振幅よりも短い所定範囲に亘って並設されている。その
ため、音叉位相の最大点あるいは最小点近傍では、光点
P’が光反射部材62を照射することがなく、よって上
記信号Smの周期的変動は無くなる。
【0036】この信号Smはアンプ70で増幅されてか
ら、サンプリングクロック発生回路71に入力される。 サンプリングクロック発生回路71は、この信号Smを
波形整形してパルス信号としてからn倍のパルスを補間
する等により、光点P’が一定距離動く毎に発するサン
プリングクロックCを発生する。なお音叉30の2つの
先端部は互いに位相が整合して振動するので、結局サン
プリングクロックCは照明光光点Pが試料23上を一定
距離動く毎に1パルスずつ発せられ、そして照明光光点
Pが試料23上の所定の2つの主走査位置の一方に来た
ときに出力開始し、他方に来たときに出力停止するもの
となる。
【0037】A/D変換器41において、このようなサ
ンプリングクロックCに基づいてアナログ信号Sをサン
プリングすれば、1回の主走査毎のサンプリングは必ず
、照明光光点Pが上記2つの主走査位置(これらが有効
主走査端位置となる)の一方に来たときに開始され、他
方に来たときに終了することになる。こうなっていれば
、先に述べた通り、矩形パルス電圧Vdの位相と音叉3
0の位相との関係がいかに変化しても、画像再生装置4
3で再生される顕微鏡像が主走査方向にずれてしまうこ
とはない。
【0038】なお本実施例において、アンプ70で増幅
された後の信号Smは水平同期信号発生回路72にも入
力される。水平同期信号発生回路72はこの信号Smに
基づいて、1主走査毎の最初のサンプリングクロックC
が発せられるのと同じタイミングで、水平同期信号Hs
を発生させる。この水平同期信号Hsは画像処理装置4
2に入力される。
【0039】また前述したY移動ステージ24Yは、発
振器45から所定周波数の信号を受けるドライバ46に
より、該周波数で往復移動するように駆動される。また
Z移動ステージ24Zは、画像処理装置42から出力さ
れてD/A変換器47によりアナログ化されたZ軸コン
トロール信号Fsに基づいて、所定のZ位置上に来るよ
うにドライバ48により駆動される。そして発振器45
、D/A変換器47は各々、画像処理装置42から発せ
られる垂直同期信号Vs、フォーカス方向信号Fsに基
づいて作動制御され、ステージ24Y、24Zの移動の
同期が取られる。
【0040】一方電磁石用駆動回路33は、パルス発生
器49と、その後段のドライバ50とから構成されてい
る。ドライバ50は、オープンコレクタバッファ51、
フォトカプラ52、パワーMOS−FET53、ダイオ
ード54、コンデンサ55等からなり、上記パルス発生
器49から入力される周波数信号Sfと同じ周波数の矩
形パルス電圧Vdを電磁石31に印加する。またパルス
発生器49は上記の水平同期信号Hsに基づいて作動制
御され、ステージ24Yおよび24Zの移動と、プロー
ブ15の往復移動との同期が取られる。
【0041】なお、複数の光反射部材62を音叉30の
振幅以上の長さ範囲に亘って並設しておいても、ダミー
プローブ15’が折り返す時点近傍では信号Smの変動
の周期が間延びするので、この間延びを検出して、その
検出時にサンプリングクロックCを出力、停止させるよ
うにしてもよい。さらには、上記のように複数の光反射
部材62を音叉30の振幅以上の長さ範囲に亘って並設
するとともに、有効主走査幅を規定することになる2つ
の光反射部材62は他のものよりも高反射率あるいは低
反射率となるように形成しておき、光点P’がそれら2
つの光反射部材62照射した際の信号Smの増大あるい
は低下を検出して、その検出時にサンプリングクロック
Cを出力、停止させるようにしてもよい。
【0042】また、複数の光反射部材62が並設されて
なるグリッドパターン60の代りに、光透過性の基板上
に複数の光遮断部材が並設されてなるグリッドパターン
を用い、そのグリッドパターンを通過した光を受光器で
検出し、その光検出信号に基づいてサンプリングクロッ
クを作成するようにしてもよい。
【0043】以上、音叉30を電磁石31により振動さ
せる走査型顕微鏡に適用された実施例について説明した
が、本発明はその他の加振手段、例えば音叉30に貼着
した圧電素子等により音叉30を振動させる場合にも適
用可能であり、そして前述したような画像のずれを防止
する効果を同様に奏するものである。
【0044】また、以上説明した実施例の走査型顕微鏡
はモノクロ反射型のものであるが、本発明はその他、カ
ラー画像を撮像する走査型顕微鏡や、透過型の走査型顕
微鏡、さらには走査型蛍光顕微鏡等にも適用可能である
【図面の簡単な説明】
【図1】本発明の一実施例による走査型顕微鏡に用いら
れた照明光走査機構の平面図
【図2】上記実施例の走査型顕微鏡を示す一部破断正面
【図3】上記実施例の走査型顕微鏡の電気回路図
【図4
】上記実施例の走査型顕微鏡に用いられた偏波面保存光
ファイバーの断面図
【図5】上記実施例の走査型顕微鏡における各種信号の
波形と、音叉の位相との関係を示すグラフ
【図6】上記
実施例の走査型顕微鏡の要部を示す一部破断斜視図
【符号の説明】
10、10’    単色光レーザ 11    照明光 11”、65”    反射光 14、14’    偏波面保存光ファイバー15  
  プローブ 15’    ダミープローブ 16、16’    コリメーターレンズ17、17’
    対物レンズ 18    送光光学系 18’    投光用光学系 22    試料台 23    試料 26、26’    集光レンズ 27、27’    アパーチャピンホール28、28
’    光検出器 30    音叉 31    電磁石 32    架台 33    駆動回路 41    A/D変換器 60    グリッドパターン 61    基板 62    光反射部材 71    サンプリングクロック発生回路72   
 水平同期信号発生回路

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】  試料が載置される試料台に対して、照
    明光を試料上に照射する光学系を相対的に移動させるこ
    とにより、この照明光を試料上において主、副走査させ
    、この照明光走査を受けた試料の部分からの光を光検出
    器により検出して試料像を撮像する走査型顕微鏡におい
    て、前記光検出器の連続出力をサンプリングして、1主
    走査ライン毎のデジタル画像データを得る信号処理手段
    を備え、前記光学系を移動させる移動機構が、この光学
    系を一方の先端部に保持する音叉と、この音叉に強さが
    周期的に変化する力を作用させて該音叉を共振させる加
    振手段とから構成された上で、前記音叉の他方の先端部
    に近接配置された、複数の光反射部材または光遮断部材
    が該先端部の振動方向に並設されてなるグリッドパター
    ンと、前記音叉の他方の先端部に取り付けられて、前記
    グリッドパターンに光を照射する投光器と、このグリッ
    ドパターンで反射またはそこを透過した光を検出する受
    光器と、この受光器が出力した光検出信号に基づいて、
    前記サンプリングのタイミングおよび周期を規定するサ
    ンプリングクロックを作成する手段とが設けられたこと
    を特徴とする走査型顕微鏡。
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