JPH04316500A - 膵リパーゼ測定試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、操作が簡便で、かつ精
度の高いドライケミストリー（乾燥系の反応）を利用し
た膵リパーゼ測定試薬に関する。

【０００２】

【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】膵リパ
ーゼは、トリグリセリドに作用してモノグリセリドを生
成せしめることが知られている（試験例１）。膵リパー
ゼは膵臓の腺房細胞から分泌され、膵管を通じて十二指
腸に送られ、脂肪を消化する酵素である。膵炎や膵癌等
の膵疾患が起こると、膵腺房細胞の破壊、膵管の狭窄、
閉塞等により膵リパーゼが血中に逸脱し、血清中のリパ
ーゼ活性値は上昇する。従って、血中の膵リパーゼ活性
の測定は、膵疾患の診断に有用である。

【０００３】リパーゼの活性測定法としては種々の方法
が知られているが、トリグリセリドを用いる方法として
は現在では乳化オリーブ油を基質として膵リパーゼの作
用により基質であるトリグリセリドがモノグリセリドへ
の酵素作用を受けることによる減少する基質の濁度を測
定する比濁法がよく用いられている。しかしながら、こ
の方法は吸光度の変化がわずかであるため、精度、正確
性に問題がある。

【０００４】また、近年において乾燥系の反応（以下「
ドライケミストリー」という）を用いる分析法が、操作
が簡便であることから注目されている。ドライケミスト
リーを用いる膵リパーゼ活性の測定方法としては、合成
基質として１−オレイル−２，３　−ジアセチルグリセ
ロールを用い、膵リパーゼにより生成した２，３　−ジ
アセチルグリセロールをエステラーゼで分解し、遊離し
たグリセリンを酵素学的に測定する方法が知られている
。しかしながら、ここで用いられる１−オレイル−２，
３−ジアセチルグリセロールは、合成基質であるため高
価であり、低級アシル基を含むため不安定であり、天然
のリパーゼ基質でないため得られた測定値が天然の基質
を用いた場合と異なるおそれがある等の欠点を有する。 従って、この様な欠点がなく、ドライケミストリーを用
いた簡便、かつ正確な膵リパーゼ測定試薬が望まれてい
た。

【０００５】

【課題を解決するための手段】かかる実状に鑑み、本発
明者らは鋭意研究を行なったところ、膵リパーゼは、天
然脂質及び天然脂質に近い合成脂質をほとんどモノグリ
セリドにまで分解するために比濁法であるウェットケミ
ストリー法をなし得るが、しかしながら生成物がモノグ
リセリドであることからドライケミストリー法では比濁
法を使用し得なかったもので、そのため好適なドライケ
ミストリー法を研究するに当り、基質としてトリグリセ
リドを用い、これとモノグリセリドリパーゼ及びグリセ
リン測定試薬とを組み合せ、フィルムに保持または含有
せしめてなるドライケミストリー用リパーゼ測定試薬が
、上記欠点がなく、容易に膵リパーゼ活性を測定でき、
しかも正確な測定値が得られることを見出し本発明を完
成した。

【０００６】すなわち本発明は（ａ）トリグリセリド、
（ｂ）モノグリセリドリパーゼ及び（ｃ）グリセリン測
定試薬を含有することを特徴とするドライケミストリー
用リパーゼ測定試薬を提供するものである。

【０００７】本発明に用いる（ａ）成分のトリグリセリ
ドとしては、例えば天然の動植物油又は３つの長鎖脂肪
酸の炭素数が１４〜２０である合成若しくは半合成長鎖
脂肪酸トリグリセリド等が挙げられるが、入手の容易性
より特にトリオレイン酸グリセリドが好ましい。

【０００８】（ｂ）成分のモノグリセリドリパーゼとし
ては、モノグリセリドに作用し、ジグリセリド及びトリ
グリセリドに実質的に作用しないものが好ましく、具体
的には、バチルスステアロサーモフィラスＨ−１６５（
微工研条寄第１６７３号）　が産生するモノグリセリド
リパーゼが好ましい。

【０００９】（ｃ）成分のグリセリン測定試薬としては
、生成されるグリセリンに作用する酵素とを発色試薬を
用いる公知のグリセリン測定系に使用される試薬が用い
られる。ここに用いられる酵素としては、グリセロキナ
ーゼとグリセロリン酸オキサダーゼとの組み合せ、グリ
セロキナーゼとグリセロリン酸デヒドロキナーゼとの組
合せ、グリセロールオキシダーゼ、及びグリセロールデ
ヒドロゲナーゼ等が挙げられる。

【００１０】このようなグリセリン測定試薬のうち、Ａ
ＴＰの存在下グリセロキナーゼを用いてグリセリンから
生成されるグリセロ−３−リン酸をグリセロリン酸オキ
シダーゼで酸化させるグリセロキナーゼ・グリセロリン
酸オキシダーゼ法を用いる系、またはグリセロールオキ
シダーゼ法を用いる系が好ましい試薬として挙げられる
。いずれの系を用いる場合も、グリセリン測定系におけ
る最終生成物である過酸化水素を測定、またはこれらの
系の反応によって生成されるジヒドロキシアセトンリン
酸、ジヒドロキシアセトンのいづれを測定してもよい。 例えば、グリセロキナーゼ・グリセロリン酸オキシダー
ゼ法を用いる場合、トリグリセリドから生成したグリセ
リンに、グリセロキナーゼ０．１　〜２０Ｕ／ｍｌ、グ
リセロリン酸オキシダーゼ３〜３０Ｕ／ｍｌ、ＡＴＰ１
〜１０ｍＭ、またグリセロキナーゼの酵素活性を高める
ための添加剤としてマグネシウムイオンを放出するイオ
ン放出性塩類、例えば塩化マグネシウム１〜１０ｍＭを
各々作用させることにより、酸素を消費して過酸化水素
およびジヒドロキシアセトンリン酸が生成される。従っ
て生成されるジヒドロキシアセトンリン酸を公知の方法
（Ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　Ａｎａｌ
ｙｓｉｓ，３巻，１３１４〜１３１９頁）　等に基づい
て測定してもよい。さらに、過酸化水素を測定する方法
としては、生成される過酸化水素にパーオキシダーゼお
よび４−アミノアンチピリンと下記一般式（１）　で表
されるフェノール性化合物、または下記一般式（２）　
で表されるアニリン誘導体の発色試薬を作用させ、生じ
た発色体を測定する方法を用いてもよい（特公昭６０−
３４８０号）。

【００１１】

【化１】

【００１２】

【化２】

【００１３】上記の発色試薬において、一般式（１）　
で表されるフェノール化合物としては、例えば、ｐ−ク
ロルフェノール、ｐ−ブロムフェノール、２，４　−ジ
クロルフェノール、２，４　−ジブロムフェノール、２
，４　−ジクロルフェノールスルホネート等が挙げられ
る。また、一般式（２）　で表されるアニリン誘導体と
しては、例えばジエチルアニリン、Ｎ，Ｎ−ジエチル−
ｍ−トルイジン、ｍ−メトキシ−Ｎ，Ｎ　−ジメチルア
ニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−（３−メチルフェニル）−Ｎ
−アセチルエチレンジアミン、ソジウム−Ｎ−エチル−
Ｎ−（３−スルホプロピル）メタトルイジン、ソジウム
−Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロ
ピル）−３，５−ジメトキシアニリン等が挙げられる。

【００１４】上記過酸化水素の測定方法は例示であり、
通常としては過酸化水素と反応して検出できる生成物に
変化する指示薬を用いて定量すればよく、この指示薬と
して、過酸化水素の存在下で色調変化を受ける１種また
は２種以上の呈色薬組成物、蛍光薬組成物または発光薬
組成物からなる組合せを使用すればよい。呈色薬組成物
としては、通常色調の変化を可視にて生ずるもので、パ
ーオキシダーゼ作用を有する物質と呈色前駆体との含有
物を用いる。このパーオキシダーゼ作用を有する物質と
しては、西洋ワサビ由来のパーオキシダーゼが通常よく
用いられ、呈色前駆体としては、４−アミノアンチピリ
ンと一般式（１）　で表されるフェノール系化合物の組
合せによる方法が通常よく用いられる。また、呈色前駆
体として、４−アミノアンチピリンと一般式（２）　で
表されるアニリン誘導体の組合せによる方法でもよく、
例えば４−アミノアンチピリンおよびパーオキシダーゼ
とＮ−エチル−Ｎ−（２−ハイドロキシ−３−スルホプ
ロピル）−メタ−トルイジン（ＴＯＯＳ）との反応によ
って、生成する発色体の量をその呈色の強さによって測
定する方法が挙げられる。さらに、ジエチルアニリンま
たはジメチルアニリンと３−メチル−２−ベンゾチアゾ
リノンヒドラゾンを作用させ生じた発色体を呈色の強さ
によって測定する方法もあり、また生成する過酸化水素
と反応して安定な赤色体を形成する４価チタン化合物と
キシレノールオレンジによって生成する発色体の量をそ
の呈色の強さによって測定する方法もあり、さらに２，
６　−ジクロルフェノールインドフェノールとパーオキ
シダーゼとの組合せ、グアヤク脂とパーオキシダーゼと
の組合せ等によるパーオキシダーゼを用いる種々の組成
、方法が挙げられる。さらにこれらの指示薬においては
溶液として予めその目的に応じて混合使用して調製して
もよい。使用量としては、例えばこのフェノール誘導体
またはアニリン誘導体、４−アミノアンチピリンおよび
バーオキシダーゼによる反応においては、フェノールあ
るいはＴＯＯＳは全液量に対し０．０１〜０．１　％程
度使用すればよく、４−アミノアンチピリンは全液量に
対して、０．０１〜０．０５％、好ましくは０．０３％
、さらにパーオキシダーゼは３〜３０Ｕ／ｍｌ、好まし
くは４〜６Ｕ／ｍｌ使用すればよい。さらに上記の呈色
薬組成物の代りに、紫外線照射により蛍光を発する蛍光
薬組成物としてホモバニリン酸などを用いて行ってもよ
く、さらに発色する発光薬組成物を用いて行う等、分光
光学的手段によりその変化を定量し得る組成物が用いら
れる。

【００１５】同様に、グリセロールオキシダーゼ法を用
いる系としては、上記の通り、トリグリセリドから生成
されたグリセリンにグリセロールオキシダーゼ１〜５０
Ｕ作用させることにより酸素を消費してジヒドロキシア
セトンおよび過酸化水素を生成するもので、生成される
ジヒドロキシアセトンまたは過酸化水素を測定する。好
ましくは生成された過酸化水素を測定するものであるが
、その場合はグリセロキナーゼ・グリセロリン酸オキシ
ダーゼ法における過酸化水素の定量試薬を同様にして用
いればよい。また生成されるジヒドロキシアセトンを公
知の方法（Ｍｅｔｈｏｄｏｆ　Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　Ａ
ｎａｌｙｓｉｓ，３巻，１４４２〜１４４５頁）等に基
づいて行えばよい。

【００１６】さらにグリセリンの測定手段としては上述
のグリセロリン酸オキシダーゼの代りにグリセロリン酸
デヒドロゲナーゼおよびＮＡＤを用いて生成する還元型
ＮＡＤを公知の定量試薬、例えばジアホラーゼとニトロ
テトラゾリウムブルーやテトラゾリウムブルー等のテト
ラゾリウム塩とをもちいるホルマザン色素形成用試薬を
用いて分析してもよく、さらに生成されるグリセロール
にＡＴＰおよびグリセロキナーゼを作用させた場合にお
いてＡＴＰから生成するＡＤＰを公知方法（Ｍｅｔｈｏ
ｄ　ｏｆ　Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　Ａｎａｌｙｓｉｓ，４
巻，２１２７〜２１２９頁）等に基づく試薬を用いて測
定してもよく、公知の種々のグリセリン定量系に用いら
れる試薬が使用可能である。

【００１７】本発明の測定試薬には、上記必須成分の他
に、他の成分を加えることができる。この成分としては
、カルシウム、コ・リパーゼ、デオキシコール酸ナトリ
ウム等の胆汁酸塩等の膵リパーゼ活性化剤、アラビアゴ
ム、ポリビニルアルコール等の乳化剤等が挙げられる。

【００１８】本発明の測定試薬への成分（ａ）及び（ｂ
）の配合量は、特に制限されないが、測定時にトリグリ
セリドが０．０５〜５ｍＭ、モノグリセリドリパーゼが
０．０５〜５Ｕ／ｍｌとなるようにするのが好ましい。 また、グリセリン測定試薬（ｃ）として、グリセロキナ
ーゼ−グリセロリン酸オキシダーゼ系を用いた場合の好
ましい配合量に関して、例えば特開昭６３−２４５６７
２　号公報、同５９−１４０９００　号公報（サイクリ
ング反応系）に記載の各酵素、試薬等の使用量を参考と
して調製、使用すればよい。各酵素、試薬の調製につい
て例示すれば（なお、カッコ内数値は使用比の好適例を
示す） 　　トリグリセリド（リパーゼ基質）　　　　０．０５
〜２０ｍＭ（１）　　モノグリセリドリパーゼ　　　　
　　　　　　　　１５〜５０Ｕ／ｍｌ（０．５　）　　
グリセロキナーゼ　　　　　　　　　　　　　　　　　
　５〜２０Ｕ／ｍｌ（０．５）　　グリセロリン酸オキ
シダーゼ　　　　　　　　５０〜２００Ｕ／ｍｌ（０．
５）　　グリセロリン酸デヒドロゲナーゼ　　　　１５
〜５０Ｕ／ｍｌ（１）　　ＮＡＤ　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　５〜２０ｍＭ（
１）　　ジアフォラーゼ　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　２０〜８０Ｕ／ｍｌ（０．５）　　コ・リ
パーゼ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
２００〜８００Ｕ／ｍｌ（０．５）　　デオキシコール
酸ナトリウム　　　　　　　　５０〜２００ｍＭ（１）
　　塩化カルシウム　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　５〜８０ｍＭ（０．５）　　塩化マグネシウム
　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０〜８０ｍＭ
（０．５）　　トリス−塩酸緩衝液　　　　　　　　　
　　　　　　　０．１〜０．５Ｍ（２）　　ＡＴＰ　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　２０〜８０ｍＭ（０．５）　　ペルオキシダーゼ　　
　　　　　　　　　　　　　　　　５０〜２００Ｕ／ｍ
ｌ（０．５）　　４−アミノアンチピリン　　　　　　
　　　　　　１０〜４０ｍＭ（１）　　フェノール　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０〜
４０ｍＭ（１）　　グリセロールオキシダーゼ　　　　
　　　　　　２００〜８００Ｕ／ｍｌ（１）　　ニトロ
テトラゾリウムブルー　　　　　　　　０．１〜０．５
％（１）の適宜な膵リパーゼ測定のための酵素、試薬の
調製液の１０〜１００　μｌを用いて、１テスト用のド
ライケミストリー用測定試薬となせばよい。

【００１９】また、本発明に用いるドライケミストリー
のために用いるフィルムは、必要な成分を保持または含
浸させることのできるフィルム状であれば合成フィルム
、半合成フィルム又は天然フィルムのいずれであっても
よく、好ましくは、濾紙、ナイロン、酢酸セルロース、
ポリエチレンテレフタレート、ポリスチレン等が具体例
として挙げられる。

【００２０】本発明の膵リパーゼ測定試薬を製造するに
は、トリグリセリド（ａ）をアラビアゴム等で乳化せし
めるか、ゼラチン、変性ゼラチン、ポリビニルアルコー
ルやポリビニルピロリドン等の親水性コロイドを媒体と
して用いてこれと他の必要な成分を混合し、フィルムに
保持または含浸せしめ、乾燥すればよく、前記した過酸
化水素を測定するための好ましい態様として、例えば特
開昭４９−５３８８８号公報、同５０−１３７１９２　
号公報、同５１−４０１９１号公報、同５５−９０８５
９号公報、同５５−１６４３６号公報、同５７−６６３
５９号公報、同５７−１２８８４６　号公報、同５７−
１２８８４９　号公報等に記載されているような水不透
過性光透過性のフィルム（またはシート）の支持体上に
、上記の酵素、試薬層や多孔性展開層等を適宜形成せし
めたドライケミストリー用としての多層一体型フィルム
状（またはシート状）のリパーゼ測定試薬となし得る。 このようにして得られるドライケミストリー用フィルム
、例えばグリセロキナーゼ−グリセロリン酸オキシダー
ゼ系を用いた場合、約１ｃｍ２　当りの各々の絶対量と
しては、好ましくはトリス−塩酸１２０　〜４００　μ
ｇ、トリオレイン１５〜５０μｇ、アラビアゴム０．２
　〜１ｍｇ、塩化カルシウム５〜４０μｇ、塩化マグネ
シウム５〜４０μｇ、ＡＴＰ３０〜１００　μｇ、デオ
キシコール酸ナトリウム１００　〜５００　μｇ、４−
アミノアンチピリン５〜５０μｇ、フェノール５〜５０
μｇ、グリセロキナーゼ０．０１〜０．０５Ｕ、グリセ
ロリン酸オキシダーゼ０．１　〜０．５　Ｕ、ペルオキ
シダーゼ０．１　〜０．５　Ｕ、モノグリセリドリパー
ゼ０．０３〜０．１５Ｕである。

【００２１】本発明の測定試薬を用いて膵リパーゼ活性
を測定するには、例えば本発明ドライケミストリー用フ
ィルム状測定試薬上に検体、例えば血清５〜２０μｌを
載せて反応させ、発色する色素等を肉眼又は分光光度計
を用いて測定すればよい。

【００２２】

【発明の効果】本発明の膵リパーゼ測定試験を用いれば
、精度良くリパーゼ活性が測定でき、しかも操作は簡単
である。

【００２３】

【実施例】以下、実施例を挙げて本発明を更に詳細に説
明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

【００２４】試験例１ トリグリセリドを基質にし、膵リパーゼを作用させたと
きの生成物はグリセリンでなく、モノグリセリドである
ことの試験：トリオレイン（１０ｍＭになるように１０
％アラビアゴム溶液で超音波処理したもの）０．１ｍｌ
　、０．２　Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．６）０．
２ｍｌ、４０ｍＭ塩化カルシウム０．０５ｍｌ、４０ｍ
Ｍ　ＡＴＰ０．０５ｍｌ、４０ｍＭ塩化マグネシウム０
．０５ｍｌ、０．１　Ｍデオキシコール酸ナトリウム０
．１　ｍｌ、コ・リパーゼ（４００Ｕ／ｍｌ）０．０５
ｍｌ、グリセロキナーゼ（１０Ｕ／ｍｌ）０．０５ｍｌ
、グリセロリン酸オキシダーゼ（１００Ｕ／ｍｌ）０．
０５ｍｌ、ペルオキシダーゼ（１００Ｕ／ｍｌ）０．０
５ｍｌ、２０ｍＭ４−アミノアンチピリン０．１ｍｌ　
、及び２０ｍＭフェノール０．１ｍｌ　にモノグリセリ
ドリパーゼ（３０Ｕ／ｍｌ）０．０５ｍｌを添加した反
応液（Ａ）、並びに（Ａ）のモノグリセリドリパーゼの
代りに精製水０．０５ｍｌを加えた反応液（Ｂ）を各々
ナイロン製膜にしみ込ませ、風乾した後、膵リパーゼ（
２５０Ｕ／Ｌ）２０μｌを加え３７℃で１０分間反応を
行ない２％ＳＤＳ２０μｌで反応を止め、５００ｎｍ　
の吸光度をスポットスキャナーＣＳ−９０００で測定し
た。表１にその結果を示す。

【００２５】

【表１】

【００２６】表１からわかるようにトリグリセリドに膵
リパーゼが作用しても遊離のグリセリンは殆んど検出さ
れなかったか、モノグリセリドリパーゼ添加ではじめて
発色がみられた。この結果から、トリグリセリド膵リパ
ーゼが作用した場合、その生成物のほとんどはモノグリ
セリドである。

【００２７】実施例１ トリオレイン（１０ｍＭになるように１０％アラビアゴ
ムで超音波処理したもの）０．１ｍｌ　、０．２　Ｍト
リス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．６）０．２ｍｌ、４０ｍＭ
塩化カルシウム０．０５ｍｌ、４０ｍＭ　ＡＴＰ０．０
５ｍｌ、４０ｍＭ塩化マグネシウム０．０５ｍｌ、０．
１　Ｍデオキシコール酸ナトリウム０．１　ｍｌ、コ・
リパーゼ（４００Ｕ／ｍｌ）０．０５ｍｌ、グリセロキ
ナーゼ（１０Ｕ／ｍｌ）０．０５ｍｌ、グリセロリン酸
オキシダーゼ（１００Ｕ／ｍｌ）０．０５ｍｌ、ペルオ
キシダーゼ（１００Ｕ／ｍｌ）０．０５ｍｌ、２０ｍＭ
４−アミノアンチピリン０．１ｍｌ　、２０ｍＭフェノ
ール０．１ｍｌ　及びモノグリセリドリパーゼ（３０Ｕ
／ｍｌ）０．０５ｍｌから構成される反応液２０μｌを
濾紙にしみ込ませた後、風乾した。このスポットした濾
紙の部分に２０μｌのヒト膵リパーゼ（２５０Ｕ／Ｌ）
を置き３７℃で１０分間反応を行ない、２％ＳＤＳ２０
μｌで反応を止めた後、スポットスキャナーＣＳ−９０
００で５００ｎｍ　における吸光度を測定した。結果を
表２に示した。

【００２８】実施例２ オリーブ油（１０ｍＭになるように１０％アラビアゴム
で超音波処理分散したもの）０．１ｍｌ　、０．２　Ｍ
トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．６）０．２ｍｌ　、４０
ｍＭ塩化カルシウム０．０５ｍｌ、４０ｍＭ　ＡＴＰ０
．０５ｍｌ、４０ｍＭ塩化マグネシウム０．０５ｍｌ、
０．１　Ｍデオキシコール酸ナトリウム０．１ｍｌ　、
コ・リパーゼ（４００Ｕ／ｍｌ）０．０５ｍｌ、グリセ
ロールオキシダーゼ（４００Ｕ／ｍｌ）０．１ｍｌ　、
ペルオキシダーゼ（１００Ｕ／ｍｌ）０．０５ｍｌ、２
０ｍＭ４−アミノアンチピリン０．１ｍｌ　、２０ｍＭ
フェノール０．１ｍｌ　、モノグリセリドリパーゼ（３
０Ｕ／ｍｌ）０．０５ｍｌ及び精製水０．０５ｍｌから
成る組成の反応液１００　μｌをナイロン製膜にスポッ
ト後、乾燥させた。この部分にリパーゼ活性の高い血清
検体（４２５Ｕ／Ｌ）２０μｌを置き、３７℃で１０分
間反応後２％ＳＤＳ２０μｌで反応を止めた後、吸光度
（５００ｎｍ）を測定した。結果を表２に示した。

【００２９】実施例３ トリオレイン（実施例１と同じ処理をしたもの）０．１
ｍｌ　、０．２　Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．６）
０．２ｍｌ、４０ｍＭ塩化カルシウム０．０５ｍｌ、４
０ｍＭ　ＡＴＰ０．０５ｍｌ、４０ｍＭ塩化マグネシウ
ム０．０５ｍｌ、０．１　Ｍデオキシコール酸ナトリウ
ム０．１　ｍｌ、コ・リパーゼ（４００Ｕ／ｍｌ）０．
０５ｍｌ、グリセロキナーゼ（１０Ｕ／ｍｌ）０．０５
ｍｌ、グリセロリン酸デヒドロゲナーゼ（３０Ｕ／ｍｌ
）０．１ｍｌ　、１０ｍＭ　ＮＡＤ０．１　ｍｌ、ジア
フォラーゼ（４０Ｕ／ｍｌ）０．０５ｍｌ及び０．２５
％ニトロテトラゾリウムブルー０．１ｍｌから成る組成
の反応液５０μｌを濾紙にしみ込ませた。乾燥後、実施
例２で用いたヒト血清２０μｌを置き、３７℃で１０分
間反応後２０％ＳＤＳ２０μｌで反応を止め５５０ｎｍ
　の吸光度を測定した。結果を表２に示した。

【００３０】

【表２】

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　（ａ）トリグリセリド、（ｂ）モノグ
   リセリドリパーゼ及び（ｃ）グリセリン測定試薬を含有
   することを特徴とするドライケミストリー用リパーゼ測
   定試薬。
2. 【請求項２】　　トリグリセリド（ａ）が、天然の動植
   物油又は炭素数１４〜２０の合成もしくは半合成長鎖脂
   肪酸トリグリセリドである請求項１記載の測定試薬。
3. 【請求項３】　　モノグリセリドリパーゼ（ｂ）が、バ
   チルス・ステアロサーモフィラスＨ−１６５　由来のモ
   ノグリセリドリパーゼである請求項１記載の測定試薬。
4. 【請求項４】　　グリセリン測定試薬（ｃ）が、グリセ
   ロキナーゼとグリセロリン酸オキシダーゼとの組み合せ
   、グリセロキナーゼとグリセロリン酸デヒドロキナーゼ
   との組み合せ、グリセロールオキシダーゼ及びグリセロ
   ールデヒドロゲナーゼより選ばれた酵素、並びに発色試
   薬より構成されるものである請求項１記載の測定試薬。
5. 【請求項５】　　フィルムが、ナイロンまたは濾紙であ
   る請求項１記載の測定試薬。