JPH04273899A - 新規含硫ペプタイド系化合物ｍｓｏｇ−１ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は新規含硫ペプタイド系化
合物ＭＳＯＧ−１物質に関し、詳細には蛋白質合成阻害
作用をもつ一部の抗生物質に対しその作用を弱める、あ
るいは被検菌に耐性を付与させる抗生物質耐性付与新規
含硫ペプタイド系化合物ＭＳＯＧ−１に関する。

【０００２】

【従来の技術、発明が解決しようとする課題、及びそれ
を解決するための手段】現在、抗生物質は医・農薬に広
く使用されているが、これら抗生物質の耐性菌の出現が
問題となっており、この耐性菌に有効な新たな抗生物質
を探す必要がある。しかしながら、新たな抗生物質をス
クリーニングする際、従来の抗生物質のスクリーニング
に使用した培地で抗菌活性を測定する方法では、耐性菌
の存在する既存の抗生物質をスクリーニングすることが
多く、効率よく新たな抗生物質を見い出すことができな
かった。

【０００３】本発明者らは、現在使用されている抗生物
質の作用を抑制する活性を有する物質を含む培地でスク
リーニングすれば、効率よく新たな抗生物質を見い出す
ことができると考え、蛋白質合成阻害剤として用いられ
ているエリスロマイシン、クロラムフェニコール、ミカ
マイシンＡＢ、チオペプチンおよびノシヘプタイドの作
用を阻害する物質をスクリーニングした。その結果、こ
れらの蛋白質合成阻害剤の作用を抑制する活性を有する
化合物をストレプトマイセス・アクツオススの変異株Ｎ
Ｐ−１株の培養菌体および培養上清中より見出し、この
物質を使用した抗生物質のスクリーニング系によって、
効率よく新規な抗生物質のスクリーニングを行うことが
できることを知得し、本発明を完成するに至った。

【０００４】即ち本発明の要旨は、下記の理化学的性質
を有する新規含硫ペプタイド系化合物ＭＳＯＧ−１物質
に存する。 ａ）物質の性状：無色の粉末状物質 ｂ）分子量：１０７４ ｃ）紫外線吸収スペクトル：メタノール溶液中での測定
で下記の吸収を示す。 λＭａｘ　　　　　２３８，３２５（ｎｍ）ｄ）赤外線
吸収スペクトル：液膜法で測定した赤外吸収スペクトル
は次の主な吸収を示す。 ３４００−３２００，２９５０，２９２０，１６６０，
１５３０，１４８０，１２４０，１１６０，７５０（ｃ
ｍ−１） ｅ）　１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：重水素化ジメチル
スルホキシド中、内部標準にテトラメチルシランを使用
して測定したとき、次のような主なケミカルシフトを示
す。（５００ＭＨｚ　） １．１，１．２，１．３，１．８，２．２−２．５，２
．７，３．２−３．６，３．７，４．０，４．２，４．
３，４．６，５．３，５．４，５．６，６．８，７．１
，７．３，７．５，７．６，７．７，８．０，８．２，
８．５，９．０，９．２，９．７，１０．８（ｐｐｍ　
） ｆ）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：重水素化ジメチル
スルホキシド中、内部標準にテトラメチルシランを使用
して測定したとき、次のような主なケミカルシフトを示
す。（５００ＭＨｚ　） １２．５，１３．２，１７．０，１７．２，１９．２，
２０．６，２７．２，２８．０，２８．９，２９．４，
３０．９，３１．５，５０．５，５０．８，５８．１，
６５．７，６６．８，７４．５，９５．３，１１８．５
，１２５．１，１２８．５，１２９．８，１３１．１，
１４８．８，１４９．０，１４９．８，１６０．２，１
６７．５，１７０．９，１８２．２（ｐｐｍ　）ｇ）溶
解性：メタノール、エタノール、テトラヒドロフランに
可溶 水に難溶または不溶 ｈ）呈色反応：アンスロン−硫酸に陽性以下、本発明に
つき詳細に説明する。

【０００５】本発明の新規含硫ペプタイド系化合物（以
下、「ＭＳＯＧ−１物質と略記する）は、前記のような
理化学的性質を有するものであり、例えば、ＭＳＯＧ−
１物質を生産する能力を有するストレプトマイセス属に
属する微生物の培養物中から採取する事ができる。かか
る菌株の例としては、ストレプトマイセス・アクツオス
スの変異株ＮＰ−１株（以下「本菌株」又は「ＮＰ−１
菌株」と略記することがある。）が挙げられる。本菌株
は微工研菌寄第１２０４６号として微工研に寄託されて
いる。ＮＰ−１菌株の微生物学的性状は以下の通りであ
る。 １）形態学的特徴 酵母−麦芽寒天、オートミール寒天、無機塩・スターチ
培地及びグリセロール−アスパラギン培地上で、コロニ
ーははじめ白色、後に灰色となる。基生菌糸及び気中菌
糸はよく発達し分岐する。気中菌糸上に分節型の長い胞
子連鎖部を形成する。胞子鎖は１０−５０程の胞子から
成る。胞子鎖は直立し、先端部で波状となる。ラセン状
に巻くことはない。胞子表面は平滑。 ２）各種倍地上における特徴 ２７℃、１４日間培養後の特徴 （イ）ベネット寒天培地上；生育良好、菌糸は豊富、胞
子形成旺盛、可溶性色素褐色の色素を産生する。 （ロ）グルコース・アスパラギン寒天培地上；生育は中
程度、気菌糸中程度、胞子形成旺盛、可溶性色素わずか
に産生する。 （ハ）グリセロール−アスパラギン寒天地上；生育中程
度、気菌糸中程度、胞子形成旺盛、可溶性色素わずかに
産生する。 （ニ）デンプン・無機塩寒天培地上；生育中程度、気菌
糸中程度、胞子形成旺盛、可溶性色素黄土色の式を産生
する。 （ホ）普通寒天培地上；生育旺盛、気菌糸は形成せず。 可溶性色素褐色の色素を産生する。 （ヘ）チロシン含有寒天培地上；生育中程度、気菌糸は
形成せず。可溶性色素褐色の色素を産生する。 （ト）リンゴ酸Ｃａ含有培地上；生育中程度、気菌糸は
形成せず。可溶性色素産生せず。 ３）生理学的性質 （イ）ゼラチンの液化；液化は遅く不完全（ロ）デンプ
ンの加水分解；加水分解は遅い。 （ハ）硝酸塩の還元；陽性 （ニ）脱脂乳の凝固；陰性 脱脂乳のペプトン化；遅い （ホ）メラニン色素の生成；陽性 （ヘ）炭素源の資化性； Ｄ−グルコース　　　　：＋，Ｄ−マンニトール：＋，
Ｌ−アラビノース：＋，Ｄ−フラクトース：＋，シュー
クロース　　：＋，ラムノース：＋，Ｄ−キシロース　
　：＋，ラフィノース　　　　：＋，ｉ−イノシトール
：＋４）分類学的考察 本菌株ＮＰ−１株は１）コロニー色調は灰色、２）胞子
形成様式はＲｅｃｔｉｆｌｅｘｉｂｉｌｅ、３）胞子表
面は平滑、４）メラニン色素を産生する特徴を有し、本
菌株の親株であるストレプトマイセス・アクツオススＮ
ＲＲＬ２９５４の特徴によく一致する。また各種生理的
性状、炭素源の資化性においても上記菌株の性状によく
一致した。従って、本変異株ＮＰ−１株は、ストレプト
マイセス・アクツオススと同定した。

【０００６】本発明において、目的とする蛋白質合成阻
害剤の作用を抑制する活性を有する物質は、前記の菌を
通常の微生物が利用し得る栄養物を含有する培地で、通
常、２４〜３０℃、１２０〜２４０時間培養することに
よって主に菌体内に蓄積される。炭素源としてはグルコ
ース、水飴、デキストリン、シュークロース、デンプン
、糖蜜、動・植物油等を使用できる。また窒素源として
は大豆粉、コーンスティープリカー、魚粕、酵母エキス
、肉エキス、ペプトンその他無機窒素源たとえばアンモ
ニウム塩等が用いられる。また一般に菌の生育または抗
生物質の生産を促進するために必要な無機塩として重金
属イオンやその他の微量促進物質を添加しても良い。

【０００７】本発明のＭＳＯＧ−１物質は上記のように
して培養した培養、通常、菌体物中から常法に従い、メ
タノール、アセトン、テトラヒドロフラン等の溶媒抽出
、順相、逆相等のカラムクロマトグラフィー等により処
理して単離精製することができるが、本発明のＭＳＯＧ
−１物質を得るためには、少なくとも高速液体クロマト
グラフィーの精製工程を経ること、好ましくは、最終精
製行程に高速液体クロマトグラフィーにかけて分取する
事が必要である。尚、各精製行程において活性画分は、
スタフィロコッカス・アウレウス２０９Ｐを被検菌とし
てノシヘプタイド１０ｐｐｍ　と各試験画分との混合液
を用いてアガー・ホール法により阻止円の減少すること
を指標として測定することができる。

【０００８】

【実施例】以下に本発明を実施例によってさらに詳細に
説明するが、本発明はその要旨を越えない限り以下の実
施例によって限定されるものではない。 （実施例１） １）培養 グルコース２．０％、大豆粉２．０％を含有する培地（
ｐＨ６．０）を８０ｍｌずつ５００ｍｌ三角フラスコ２
５本に分注し、１２１℃において２０分間高圧減菌する
。これにストレプトマイセス・アクツオススＮＰ−１株
を１白金耳ずつ植菌する。これを２７℃において７日間
、２１０回転にて振とう培養する。得られた培養物を遠
心分離して培養菌体および培養上清を得た。ＮＰ−１株
により生産される物質は、培養菌体および培養上清中に
生産されるが、その含有量は著しく培養菌体中に多いた
め、精製は培養菌体のみを用いた。 ２）単離精製 上記１）で得られた培養菌体にメタノール２リットルを
添加し、攪拌した後、遠心分離して菌体メタノール抽出
液を得た。この抽出液を純水にて充填させたダイヤイオ
ンＨＰ−２０（三菱化成社製）３００ｍｌに吸着させ１
．２リットルのアセトンで溶出させた。減圧下濃縮しア
セトン留去後、ｐＨ２で水と酢酸エチルで分液した。酢
酸エチルを減圧下濃縮し活性成分４．０ｇを得た。得ら
れた物質をＯＤＳ−ＡＱ　　１２０−Ｓ５０（山村化学
社製）にまぶし、一夜減圧下乾燥後、５００ｍｌの同樹
脂の塔の上にのせ、メタノール：アセトニトリル：純水
混液（４０：１５：４５、ｐＨ４酢酸にて調整）、次い
でメタノール：アセトニトリル：純水混液（５０：１５
：３５、ｐＨ４酢酸にて調整）に展開するクロマトグラ
フィーをおこなった。活性画分を集め、減圧下濃縮乾固
し０．２ｇの淡黄色の粉末を得た。この活性成分の紫外
線吸収スペクトルを図５に示す。この粉末を、メタノー
ル：アセトニトリル：純水混液（５０：１５：３５、ｐ
Ｈ４酢酸にて調整）を展開溶液とする高速液体クロマト
グラフィーＤ−ＯＤＳ−５カラム（山村化学社製、２０
Ｘ２５０ｍｍ）に付し、流速９．０ｍｌ／分で分取クロ
マトグラフィーをおこない、保持時間１９分のところに
展開してくる画分を得、これを減圧乾固させて無色の粉
末状物質約７０ｍｇを得た。この粉末状物質は、高速液
体クロマトグラフィーにかける前の淡黄色の粉末とは、
紫外線吸収スペクトルの２７０〜３００ｎｍ付近の吸収
パターンが異なっている。かくし得られた本発明のＭＳ
ＯＧ−１物質の理化学的性質は前述のとおりであった。 尚、各精製行程において活性画分は、スタフィロコッカ
ス・アウレウス２０９Ｐを被検菌としてノシヘプタイド
１０ｐｐｍ　と各試験画分との混合液をもちいてアガー
・ホール法により阻止円の減少することを指標として測
定した。

【０００９】（試験例）スタフィロコッカス・アウレウ
ス２０９Ｐを被検菌としたエリスロマイシン、クロラム
フェニコール、ミカマイシンＡＢ、チオペプチン、チオ
ストレプトン、ノシヘプタイド、ネオマイシンのＭＳＯ
Ｇ−１物質による活性阻害効果エリスロマイシン、クロ
ラムフェニコール、ミカマイシンＡＢ、チオペプチン、
ノシヘプタイド、ネオマイシンの一定量を、テトラヒド
ロフランと純水の混液（１：１）に溶かしたものと、一
方上記薬剤を同じ濃度になるように同様に溶かして、そ
れにＭＳＯＧ−１物質を５０μｇ／ｍｌとなるように各
薬剤にまぜたものとを用意し、スタフィロコッカス・ア
ウレウス２０９Ｐを被検菌として４℃で２時間拡散させ
た後、３７℃で１８時間好気培養した。その後ＭＳＯＧ
−１物質を加えなかったものと加えたものとの生育阻害
円径を測定し、被検菌に対する阻止円形成阻害の度合い
を調べた。

【００１０】その結果を下記の表に示した。 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　生育阻止
円径　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　ＭＳＯＧ−１（５
０μｇ／ｍｌ）　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　───────────
─────────　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　ＭＳＯＧ−１　　　　ＭＳＯＧ−１　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　無添加　　　　　　　
　　　添　　加　　　　　　薬　　　　剤　　　　　　
　　　　　　　　濃　　　　度　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　（５０μｇ／ｍｌ）────
─────────────────────────
───────　　エリスロマイシン　　　　　　　　
１０μｇ／ｍｌ　　　　　　１４．４０ｍｍ　　１１．
４５ｍｍ　　クロラムフェニコール　　１００μｇ／ｍ
ｌ　　　　　　１０．３０ｍｍ　　　　８．９０ｍｍ　
　ミカマイシンＡＢ　　　　　　　　１０μｇ／ｍｌ　
　　　　　１８．８０ｍｍ　　１６．４５ｍｍ　　チオ
ペプチン　　　　　　　　　　３．３μｇ／ｍｌ　　　
　　　１６．３５ｍｍ　　１４．６５ｍｍ　　ノシヘプ
タイド　　　　　　　　０．１μｇ／ｍｌ　　　　　　
１６．２３ｍｍ　　１２．３５ｍｍ　　ネオマイシン　
　　　　　　　　　１００μｇ／ｍｌ　　　　　　１５
．５０ｍｍ　　１５．５０ｍｍ上表よりＭＳＯＧ−１物
質は、蛋白質合成阻害作用を示す一部の抗生物質の作用
を弱める働き、あるいは被検菌をその薬剤に対して耐性
化させる働きを持つ。

【００１１】

【発明の効果】本発明のＭＳＯＧ−１物質を使用するこ
とによって新しい作用機構を持つ新規蛋白質合成阻害剤
をスクリーニングすることができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＭＳＯＧ−１物質の、メタノール中濃度２０μ
ｇ／ｍｌでの紫外部吸収スペクトルである。

【図２】ＭＳＯＧ−１物質の、液膜法で測定した赤外吸
収スペクトルである。

【図３】ＭＳＯＧ−１物質の、重水素化ジメチルスルホ
キシド溶液中での水素核核磁気共鳴スペクトル図である
。

【図４】ＭＳＯＧ−１物質の、重水素化ジメチルスルホ
キシド溶液中炭素核核磁気共鳴スペクトル図である。

【図５】ＭＳＯＧ−１物質前駆体の、メタノール中での
紫外部吸収スペクトル図である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　下記の理化学的性質を有する新規含硫
   ペプタイド系化合物ＭＳＯＧ−１ ａ）物質の性状：無色の粉末状物質 ｂ）分子量：１０７４ ｃ）紫外線吸収スペクトル：メタノール溶液中での測定
   で下記の吸収を示す。 λＭａｘ　　　　　２３８，３２５（ｎｍ）ｄ）赤外線
   吸収スペクトル：液膜法で測定した赤外吸収スペクトル
   は次の主な吸収を示す。 ３４００−３２００，２９５０，２９２０，１６６０，
   １５３０，１４８０，１２４０，１１６０，７５０（ｃ
   ｍ−１） ｅ）　１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：重水素化ジメチル
   スルホキシド中、内部標準にテトラメチルシランを使用
   して測定したとき、次のような主なケミカルシフトを示
   す。（５００ＭＨｚ　） １．１，１．２，１．３，１．８，２．２−２．５，２
   ．７，３．２−３．６，３．７，４．０，４．２，４．
   ３，４．６，５．３，５．４，５．６，６．８，７．１
   ，７．３，７．５，７．６，７．７，８．０，８．２，
   ８．５，９．０，９．２，９．７，１０．８（ｐｐｍ　
   ） ｆ）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：重水素化ジメチル
   スルホキシド中、内部標準にテトラメチルシランを使用
   して測定したとき、次のような主なケミカルシフトを示
   す。（５００ＭＨｚ　） １２．５，１３．２，１７．０，１７．２，１９．２，
   ２０．６，２７．２，２８．０，２８．９，２９．４，
   ３０．９，３１．５，５０．５，５０．８，５８．１，
   ６５．７，６６．８，７４．５，９５．３，１１８．５
   ，１２５．１，１２８．５，１２９．８，１３１．１，
   １４８．８，１４９．０，１４９．８，１６０．２，１
   ６７．５，１７０．９，１８２．２（ｐｐｍ　）ｇ）溶
   解性：メタノール、エタノール、テトラヒドロフランに
   可溶 水に難溶または不溶 ｈ）呈色反応：アンスロン−硫酸に陽性