JPH04273900A

JPH04273900A - 新規含硫ペプタイド系化合物ｍｓｏｇ−２およびその製造法

Info

Publication number: JPH04273900A
Application number: JP3461791A
Authority: JP
Inventors: Kiyoyuki Miyasaka; 宮坂　清幸; Hironori Morimoto; 森本　裕紀; Haruyuki Ogishi; 大岸　治行; Yasuko Asami; 浅見　泰子
Original assignee: Mitsubishi Kasei Corp
Current assignee: Mitsubishi Kasei Corp
Priority date: 1991-02-28
Filing date: 1991-02-28
Publication date: 1992-09-30

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は新規含硫ペプタイド系化
合物ＭＳＯＧ−２物質およびその製造方法に関し、詳細
には蛋白質合成阻害作用をもつ一部の抗生物質に対しそ
の作用を弱める、あるいは被検菌に耐性を付与させる抗
生物質耐性付与新規含硫ペプタイド系化合物ＭＳＯＧ−
２およびその製造法に関する。

【０００２】

【従来の技術、発明が解決しようとする課題、及びそれ
を解決するための手段】現在、抗生物質は医農薬に広く
使用されているが、これら抗生物質の耐性菌の出現が問
題となっており、この耐性菌に有効な新たな抗生物質を
探す必要がある。しかしながら、新たな抗生物質をスク
リーニングする際、従来の抗生物質のスクリーニングに
使用した培地で抗菌活性を測定する方法では、耐性菌の
存在する既存の抗生物質をスクリーニングすることが多
く、効率よく新たな抗生物質を見い出すことができなか
った。

【０００３】本発明者らは、現在使用されている抗生物
質の作用を抑制する活性を有する物質を含む培地でスク
リーニングすれば、効率よく新たな抗生物質を見い出す
ことができると考え、蛋白質合成阻害剤として用いられ
ているエリスロマイシン、クロラムフェニコール、ミカ
マイシンＡＢ、チオペプチンおよびノシヘプタイドの作
用を阻害する物質をスクリーニングした。その結果、こ
れらの蛋白質合成阻害剤の作用を抑制する活性を有する
化合物をストレプトマイセス・アクツオススの変異株Ｎ
Ｐ−１株の培養菌体および培養上清中より見出し、この
物質を使用した抗生物質のスクリーニング系によって、
効率よく新規な抗生物質のスクリーニングを行うことが
できることを知得し、本発明を完成するに至った。

【０００４】即ち本発明の要旨は、下記の理化学的性質
を有する新規含硫ペプタイド系化合物ＭＳＯＧ−２物質
およびその製造法に存する。ａ）物質の性状：白色の粉末状物質ｂ）分子量：１３１９ｃ）紫外線吸収スペクトル：メタノール溶液中での測定
で下記の吸収を示す。 λＭａｘ　　　２３８，３２５（ｎｍ）ｄ）赤外線吸収
スペクトル：液膜法で測定した赤外吸収スペクトルは、
次の主な吸収を示す。３４００−３２００，２９２０，１７２０，１６６０，
１５２０，１４８０，１２４０，１２２０，１１６０，
１０５０，１０２０，７５０（ｃｍ−１）ｅ）　１Ｈ−
核磁気共鳴スペクトル：重水素化ジメチルスルホキシド
中、内部標準にテトラメチルシランを使用して測定した
とき、次のような主なケミカルシフトを示す。（５００
ＭＨｚ）１．３，１．８，２．１−２．６，２．７，４．０，４
．６，５．３，５．４，５．６，５．７，５．８，６．
０，６．４，６．５，６．８，７．１，７．２，７．５
，８．２，８．３，８．４，８．５，８．７，９．０，
９．７，９．９，１０．２，１１．８（ｐｐｍ）ｆ）１
３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：重水素化ジメチルスルホ
キシド中、内部標準にテトラメチルシランを使用して測
定したとき、次のような主なケミカルシフトを示す。（
５００ＭＨｚ）１２．５，１３．２，１３．８，２０．６，２２．０，
２５．７，２８．６，２８．９，２９．２，３１．２，
３１．５，５０．４，５１．０，５８．７，６５．７，
６６．８，９５．３，１０５．０，１１４．０，１１８
．６，１２３．０，１２４．０，１２４．８，１２５．
１，１２６．０，１２６．２，１２６．７，１２８．７
，１２９．８，１３１．０，１３３．６，１３４．７，
１３７．８，１４８．９，１５０．８，１６０．０，１
６０．５，１６０．７，１６６．４，１６７．５，１６
９．３，１７１．０，１７２．７，１８２．２，１９１
．０（ｐｐｍ）ｇ）溶解性：メタノール、エタノール、テトラヒドロフ
ランに可溶水に難溶または不溶ｈ）呈色反応：アンスロン−硫酸に陽性以下、本発明に
つき詳細に説明する。

【０００５】本発明の新規含硫ペプタイド系化合物（以
下、「ＭＳＯＧ−２物質」と略記する。）は、前記のよ
うな理化学的性質を有するものであり、例えば、ＭＳＯ
Ｇ−２物質を生産する能力を有するストレプトマイセス
に属する微生物の培養物中から採取する事ができる。か
かる菌株の例としては、ストレプトマイセス・アクツオ
ススの変異株ＮＰ−１株（以下「本菌株」又は「ＮＰ−
１菌株」と略記することがある。）が挙げられる。本菌
株は微工研菌寄第１２０４６号として微工研に寄託され
ている。ＮＰ−１菌株の微生物学的性状は以下の通りで
ある。

【０００６】１）形態学的特徴酵母−麦芽寒天、オートミール寒天、無機塩・スターチ
培地及びグリセロール−アスパラギン培地上で、コロニ
ーははじめ白色、後に灰色となる。基生菌糸及び気中菌
糸はよく発達し分枝する。気中菌糸上に分節型の長い胞
子連鎖部を形成する。胞子鎖は１０−５０程の胞子から
成る。胞子鎖は直立し、先端部で波状となる。ラセン状
に巻くことはない。胞子表面は平滑。

【０００７】２）各種培地上における特徴２７℃、１４
日間培養後の特徴（イ）ベネット寒天培地上；生育良好、菌糸は豊富、胞
子形成旺盛、可溶性色素褐色の色素を産生する。（ロ）グルコース・アスパラギン寒天培地上；生育は中
程度、気菌糸中程度、胞子形成旺盛、可溶性色素無し。（ハ）グリセロール−アスパラギン寒天培地上；生育中
程度、気菌糸中程度、胞子形成旺盛、可溶性色素わずか
に産生する。

【０００８】（ニ）デンプン・無機塩寒天培地上；生育
中程度、気菌糸中程度、胞子形成旺盛、可溶性色素黄土
色の色素を産生する。（ホ）普通寒天培地上；生育旺盛、気菌糸は形成せず。可溶性色素褐色の色素を産生する。（ヘ）チロシン含有寒天培地上；生育中程度、気菌糸は
形成せず。可溶性色素褐色の色素を産生する。（ト）リンゴ酸Ｃａ含有培地上；生育中程度、気菌糸は
形成せず。可溶性色素産生せず。３）生理学的性質（イ）ゼラチンの液化；液化は遅く不完全（ロ）デンプ
ンの加水分解；加水分解は遅い。（ハ）硝酸塩の還元；陽性（ニ）脱脂乳の凝固；陰性脱脂乳のペプトン化；遅い（ホ）メラニン色素の生成；陽性（ヘ）炭素源の資化性；Ｄ−グルコース　　：＋　　　　　　Ｄ−マンニトール
：＋Ｌ−アラビノース：＋　　　　　　Ｄ−フラクトー
ス：＋シュークロース　　：＋　　　　　　ラムノース
　　　　　　：＋Ｄ−キシロース　　：＋　　　　　　
ラフィノース　　　　：＋ｉ−イノシトール：＋４）分類学的考察本菌株ＮＰ−１株は１）コロニー色調は灰色、２）胞子
形成様式はＲｅｃｔｉｆｌｅｘｉｂｉｌｅ、３）胞子表
面は平滑、４）メラニン色素を産生する特徴を有し、本
菌株の親株であるストレプトマイセス・アクツオススＮ
ＲＲＬ２９５４の特徴によく一致する。また各種生理的
性状、炭素源の資化性においても上記菌株の性状によく
一致した。従って、本変異株ＮＰ−１株は、ストレプト
マイセス・アクツオススと同定した。

【０００９】本発明のＭＳＯＧ−２物質は、前記の菌を
通常の微生物が利用し得る栄養物を含有する培地で、通
常、２４〜３０℃、１２０〜２４０時間培養することに
よって主に菌体内に蓄積される。炭素源としてはグルコ
ース、水飴、デキストリン、シュークロース、デンプン
、糖蜜、動・植物油等を使用できる。また窒素源として
は大豆粉、コーンスティープリカー、魚粕、酵母エキス
、肉エキス、ペプトンその他無機窒素源たとえばアンモ
ニウム塩等が用いられる。

【００１０】また一般に菌の生育または抗生物質の生産
を促進するために必要な無機塩として重金属イオンやそ
の他の微量促進物質を添加しても良い。本発明のＭＳＯ
Ｇ−２物質は、前記ＮＰ−１菌株の培養物、通常、菌体
中から常法に従い、メタノール、アセトン、テトラヒド
ロフラン等の溶媒抽出、順相、逆相等のカラムクロマト
グラフィー等により処理して単離精製することができる
。尚、各精製行程において活性画分は、スタフィロコッ
カス・アウレウス２０９Ｐを被検菌としてノシヘプタイ
ド１０ｐｐｍ　と各試験画分との混合液をもちいてアガ
ー・ホール法により阻止円の減少することを指標として
測定することができる。

【００１１】

【実施例】以下に本発明を実施例によってさらに詳細に
説明するが、本発明はその要旨を越えない限り以下の実
施例によって限定されるものではない。

【００１２】（実施例１）１）培養グルコース２．０％、大豆粉２．０％を含有する培地（
ｐＨ６．０）を８０ｍｌずつ５００ｍｌ三角フラスコ２
５本に分注し、１２１℃において２０分間高圧滅菌する
。これにＭＳＯＧ−２物質生産菌ストレプトマイセス・ア
クツオススＮＰ−１株を１白金耳ずつ植菌する。これを
２７℃において７日間、２１０回転にて振とう培養する
。得られた培養物を遠心分離して培養菌体および培養上
清を得た。ＭＳＯＧ−２物質は培養菌体および培養上清
中に生産されるが、その含有量は著しく培養菌体中に多
いため、精製は培養菌体のみを用いた。

【００１３】２）単離精製上記１）で得られた培養菌体にメタノール２リットルを
添加、攪拌した後、遠心分離して菌体メタノール抽出液
を得た。この抽出液を純水にて充填させたダイヤイオン
ＨＰ−２０（三菱化成社製）３００ｍｌに吸着させ１．
２１のアセトンで溶出させた。減圧下濃縮しアセトン留
去後、ｐＨ２で水と酢酸エチルで分液した。酢酸エチル
を減圧下濃縮し活性成分４．０ｇを得た。得られた物質
をシリカゲル　　Ｋｉｅｓｅｉｇｅｌ１００（メルク社
製）にまぶし、一夜減圧下乾燥後、５００ｍｌの同樹脂
の塔の上にのせ、クロロホルム：メタノール純水混液（
９：１）、次いでクロロホルム：メタノール純水混液（
８：２）に展開するクロマトグラフィーをおこなった。活性画分を集め、減圧下濃縮乾固し０．３ｇの淡黄色の
粉末を得た。得られた物質をＯＤＳ−ＡＱ　　１２０−
Ｓ５０（山村化学社製）にまぶし、一夜減圧下乾燥後、
３００ｍｌの同樹脂の塔の上にのせ、メタノール：アセ
トニトリル：純水混液（５０：１５：３５、ｐＨ４酢酸
にて調整）、次いでメタノール：アセトニトリル：純水
混液（６０：２０：２０、ｐＨ４酢酸にて調整）に展開
するクロマトグラフィーをおこなった。画分を集め、減
圧下濃縮乾固し２７ｍｇの白色の粉末ＭＳＯＧ−２物質
を得た。本物質の理化学的性質は前述のとおりであった
。尚、各精製行程において活性画分は、スタフィロコッカ
ス・アウレウス２０９Ｐを被検菌としてノシヘプタイド
１０ｐｐｍ　と各試験画分との混合液をもちいてアガー
・ホール法により阻止円の減少することを指標として測
定した。

【００１４】（試験例）スタフィロコッカス・アウレウ
ス２０９Ｐを被検菌としたエリスロマイシン、クロラム
フェニコール、ミカマイシンＡＢ、チオペプチン、チオ
ストレプトン、ノシヘプタイド、ネオマイシンのＭＳＯ
Ｇ−２物質による活性阻害効果エリスロマイシン、クロラムフェニコール、ミカマイシ
ンＡＢ、チオペプチン、ノシヘプタイド、ネオマイシン
の一定量を、テトラヒドロフランと純水の混液（１：１
）に溶かしたもの、一方上記薬剤を同じ濃度になるよう
に同様に溶かして、それにＭＳＯＧ−２物質を５０μｇ
／ｍｌとなるように各薬剤にまぜたものを用意し、これ
らにスタフィロコッカス・アウレウス２０９Ｐを被検菌
として４℃で２時間拡散させた後、３７℃で１８時間好
気培養した。その後ＭＳＯＧ−２物質を加えなかったも
のと加えたものの生育阻止円径を測定し、被検菌に対す
る阻止円形成阻害の度合いを調べた。その結果を下記の
表に示した。

【００１５】

【表１】

【００１６】上表よりＭＳＯＧ−２物質は、蛋白質合成
阻害作用を示す一部の抗生物質の作用を弱める働き、あ
るいは被検菌をその薬剤に対して耐性化させる働きを持
つ。

【００１７】

【発明の効果】本発明のＭＳＯＧ−２物質を使用するこ
とによって新しい作用機構を持つ新規蛋白質合成阻害剤
をスクリーニングすることができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＭＳＯＧ−２物質の、メタノール中濃度２０μ
ｇ／ｍｌでの紫外部吸収スペクトル図である。

【図２】ＭＳＯＧ−２物質の、液膜法で測定した赤外吸
収スペクトル図である。

【図３】ＭＳＯＧ−２物質の、重水素化ジメチルスルホ
キシド溶液中での水素核核磁気共鳴スペクトル図である
。

【図４】ＭＳＯＧ−２物質の、重水素化ジメチルスルホ
キシド溶液中炭素核核磁気共鳴スペクトル図である。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】　　下記の理化学的性質を有する新規含硫
ペプタイド系化合物ＭＳＯＧ−２ａ）物質の性状：白色の粉末状物質ｂ）分子量：１３１９ｃ）紫外線吸収スペクトル：メタノール溶液中での測定
で下記の吸収を示す。 λＭａｘ　　　２３８，３２５（ｎｍ）ｄ）赤外線吸収
スペクトル：液膜法で測定した赤外吸収スペクトルは、
次の主な吸収を示す。３４００−３２００，２９２０，１７２０，１６６０，
１５２０，１４８０，１２４０，１２２０，１１６０，
１０５０，１０２０，７５０（ｃｍ−１）ｅ）　１Ｈ−
核磁気共鳴スペクトル：重水素化ジメチルスルホキシド
中、内部標準にテトラメチルシランを使用して測定した
とき、次のような主なケミカルシフトを示す。（５００
ＭＨｚ）１．３，１．８，２．１−２．６，２．７，４．０，４
．６，５．３，５．４，５．６，５．７，５．８，６．
０，６．４，６．５，６．８，７．１，７．２，７．５
，８．２，８．３，８．４，８．５，８．７，９．０，
９．７，９．９，１０．２，１１．８（ｐｐｍ）ｆ）１
３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：重水素化ジメチルスルホ
キシド中、内部標準にテトラメチルシランを使用して測
定したとき、次のような主なケミカルシフトを示す。（
５００ＭＨｚ）１２．５，１３．２，１３．８，２０．６，２２．０，
２５．７，２８．６，２８．９，２９．２，３１．２，
３１．５，５０．４，５１．０，５８．７，６５．７，
６６．８，９５．３，１０５．０，１１４．０，１１８
．６，１２３．０，１２４．０，１２４．８，１２５．
１，１２６．０，１２６．２，１２６．７，１２８．７
，１２９．８，１３１．０，１３３．６，１３４．７，
１３７．８，１４８．９，１５０．８，１６０．０，１
６０．５，１６０．７，１６６．４，１６７．５，１６
９．３，１７１．０，１７２．７，１８２．２，１９１
．０（ｐｐｍ）ｇ）溶解性：メタノール、エタノール、テトラヒドロフ
ランに可溶水に難溶または不溶ｈ）呈色反応：アンスロン−硫酸に陽性
【請求項２】　
　ストレプトマイセス属に属する請求項１記載の新規含
硫ペプタイド系化合物ＭＳＯＧ−２物質を生産する菌株
を培養し、その培養物からＭＳＯＧ−２物質を採取する
ことを特徴とする新規含硫ペプタイド系化合物ＭＳＯＧ
−２物質の製造法。