JPH0423987A - 安定化された制限酵素ＳｆｉＩ組成物 - Google Patents
安定化された制限酵素ＳｆｉＩ組成物Info
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- JPH0423987A JPH0423987A JP2127391A JP12739190A JPH0423987A JP H0423987 A JPH0423987 A JP H0423987A JP 2127391 A JP2127391 A JP 2127391A JP 12739190 A JP12739190 A JP 12739190A JP H0423987 A JPH0423987 A JP H0423987A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明はストレプトマイセス フィムプライアタス（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｆｌｍｂｒｌａｔｕｓ ）
（ＡＴＣＣ１５０５１）の生産する制限酵素ＳｆＨの安
定化された組成物に関するものである。
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｆｌｍｂｒｌａｔｕｓ ）
（ＡＴＣＣ１５０５１）の生産する制限酵素ＳｆＨの安
定化された組成物に関するものである。
（従来の技術）
制限酵素５ｆＩＩは二本鎖ＤＮＡのＧＧＣＣＮＮＮΦ
ＮＮＧＧＣＣという塩基配列を認識し、矢印の部位で切
断する酵素である。（Ｎｕｃｌｅｌｃ Ａｃ１ｄ Ｒｅ
ｓ、。
断する酵素である。（Ｎｕｃｌｅｌｃ Ａｃ１ｄ Ｒｅ
ｓ、。
１２、４５０７（１９８４））。８塩基認識の制限酵素
は現在ＮｏｔｌとＳｆ目しか見つかっていないため、注
目されている。
は現在ＮｏｔｌとＳｆ目しか見つかっていないため、注
目されている。
（発明が解決しようとする課題）
ところがＳｆ目は濃度にかかわらず不安定であり、希釈
時及び−２０℃存在中に、５ｆｌｒ活性は相当低下する
。従って、５ｆ１１の濃度調整や長時間の一定品質の維
持は大変困難である。
時及び−２０℃存在中に、５ｆｌｒ活性は相当低下する
。従って、５ｆ１１の濃度調整や長時間の一定品質の維
持は大変困難である。
（課題を解決するための手段）
本発明者等はこのような欠点を有しない安定なＳ目１含
有組成物を得るべく種々鋭意検討した結果、安定化剤と
して、塩化マグネシウム（ＭｇＣＩ２）を使用すると目
的を達成することを見い出し、本発明に到達した。すな
わち本発明は塩化マグネシウムを含有することを特徴と
する安定化された５ｆ１１組成物である。
有組成物を得るべく種々鋭意検討した結果、安定化剤と
して、塩化マグネシウム（ＭｇＣＩ２）を使用すると目
的を達成することを見い出し、本発明に到達した。すな
わち本発明は塩化マグネシウムを含有することを特徴と
する安定化された５ｆ１１組成物である。
本−発明の制限酵素Ｓｆｌ＋の起源は、ストレプトマイ
セス フィムプライアタス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
ｆｌｎ＋ｂｒｉａｔｕｓ）（ＡＴＣＣ１５０５１）で
あり、５ｆ１１の性質の一例を示すと次のとおりである
。
セス フィムプライアタス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
ｆｌｎ＋ｂｒｉａｔｕｓ）（ＡＴＣＣ１５０５１）で
あり、５ｆ１１の性質の一例を示すと次のとおりである
。
反応温度＝５０°Ｃ
至適塩濃度：４０〜８０ｍＭ ＫＣ７４０〜８０ｍＭ
ＮａＣｆ 至 適ｐＨ： ８．３ 失活条件＝６５°Ｃ＞１５ｍＩｎ 本発明は、好ましくは塩化マグネシウムと制限酵素５ｆ
ｌｌを含有するグリセロール溶液を含む組成物である。
ＮａＣｆ 至 適ｐＨ： ８．３ 失活条件＝６５°Ｃ＞１５ｍＩｎ 本発明は、好ましくは塩化マグネシウムと制限酵素５ｆ
ｌｌを含有するグリセロール溶液を含む組成物である。
本発明の組成物において、Ｓｆ目の濃度は特に限定され
ないが、通常２〜２００Ｕ／μノの範囲である。塩化マ
グネシウムの濃度は、通常１〜２０ｍ Ｍ ％好ましく
は５〜２０ｍＭである。グリセロール溶液の濃度は、組
成物が一２０℃で保存中に凍結しない範囲であれば良く
、通常４０〜６０％、好ましくは５０％である。
ないが、通常２〜２００Ｕ／μノの範囲である。塩化マ
グネシウムの濃度は、通常１〜２０ｍ Ｍ ％好ましく
は５〜２０ｍＭである。グリセロール溶液の濃度は、組
成物が一２０℃で保存中に凍結しない範囲であれば良く
、通常４０〜６０％、好ましくは５０％である。
本発明の組成物において、緩衝剤としては、通常のもの
が使用され、該組成物のｐｎを７〜８とするものが好ま
しい。例えば、トリス塩酸緩衝液、トリスリン酸緩衝液
等が使用される。
が使用され、該組成物のｐｎを７〜８とするものが好ま
しい。例えば、トリス塩酸緩衝液、トリスリン酸緩衝液
等が使用される。
前記組成物には必要により、他の成分を添加してもよい
。他の成分としては、塩化ナトリウム、塩化カリウム、
エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジチオトレイト
ール、牛血清アルブミン等を例示することができる。
。他の成分としては、塩化ナトリウム、塩化カリウム、
エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジチオトレイト
ール、牛血清アルブミン等を例示することができる。
組成物を調整する場合、各物質の添加順序は特に制限さ
れない。
れない。
次に本発明を実施例により説明する。
なお、５ｆ１１の酵素活性の測定は次の方法に従った。
１０＋ｇＮ ）リス塩酸緩衝液、７ｍＭ ＭｇＣｌ２．
５０ｍＭ ＮａＣ１，７ｍＭ ２−メルカプトエタノー
ル、１００μｇ／−牛血清アルブミンを含む５０Ｉ１１
の反応液中で、ｌｌ１ｇのアデノウィルスＤＮＡと酵素
液を５０℃、６０分間反応させる。反応後、アガロース
電気泳動を行い、アデノウィルスＤＮＡＩμｇを完全に
分解している酵素量を検出した。このとき、本発明によ
り安定化された５ｆＩＩはＭｇＣｌ。を含む希釈液によ
り希釈されている。
５０ｍＭ ＮａＣ１，７ｍＭ ２−メルカプトエタノー
ル、１００μｇ／−牛血清アルブミンを含む５０Ｉ１１
の反応液中で、ｌｌ１ｇのアデノウィルスＤＮＡと酵素
液を５０℃、６０分間反応させる。反応後、アガロース
電気泳動を行い、アデノウィルスＤＮＡＩμｇを完全に
分解している酵素量を検出した。このとき、本発明によ
り安定化された５ｆＩＩはＭｇＣｌ。を含む希釈液によ
り希釈されている。
（実施例）
実施例 １
濃度２ Ｕ＃Ｉノ５ｆｉｌヲ５ｆｌｌ＜７）従来の組成
（１０ｍＭトリス塩酸緩衝液、５０ ｍＭＮａｃｌ、０
．１ｍＭＥＤＴＡ、１ｍＭジチオトレイトール、５０％
グリセロール）に、下記第１表の添加物を加え一２０″
Ｃで保存し、１゜日後の活性を比較した。その結果を第
１表に示す。
（１０ｍＭトリス塩酸緩衝液、５０ ｍＭＮａｃｌ、０
．１ｍＭＥＤＴＡ、１ｍＭジチオトレイトール、５０％
グリセロール）に、下記第１表の添加物を加え一２０″
Ｃで保存し、１゜日後の活性を比較した。その結果を第
１表に示す。
保存前の酵素活性を１００％とした。
第 １ 表
末フェニルメタンスルホニルフルオリド上記表のごと＜
、ＭｇＣｌ２を加えたもののみ、Ｓｆ目活性を完全に
保持している。
、ＭｇＣｌ２を加えたもののみ、Ｓｆ目活性を完全に
保持している。
実施例 ２
ＭｇＣ１２を加えた標品と従来の組成の（Ｓｆｌｒの濃
度はいずれも４０ Ｕ／ｍｌ）との、８１口活性の経時
変化を第１図に示す。このときＭｇＣｌ２の濃度を５．
１０．２０ＩＩＭの３種類検討したが、同じ結果を得た
。
度はいずれも４０ Ｕ／ｍｌ）との、８１口活性の経時
変化を第１図に示す。このときＭｇＣｌ２の濃度を５．
１０．２０ＩＩＭの３種類検討したが、同じ結果を得た
。
第１図のごと＜、ＭｇＣｌ２を加えたものは無添加に比
べ著しぐ安定化された。
べ著しぐ安定化された。
実施例 ３
１ｇ０１２１０ｍＭを加えた標品の長期安定性を調べた
。
。
その結果を第２図に示す。
第２図のごと＜、ＭｇｃＩ□の効果は５ｆ１１の濃度に
関わらず、長期にわたるものである。
関わらず、長期にわたるものである。
（発明の効果）
本発明では、上記安定化剤を使用することにより、濃度
にかかわらず５ｆｉｌ活性の低下が見られない。さらに
安定化効果は長期間に亘って持続する。
にかかわらず５ｆｉｌ活性の低下が見られない。さらに
安定化効果は長期間に亘って持続する。
・第１図は、ＭｇＣｌ２を添加した場合と添加しなかっ
た場合の活性の差を示す図である。 第２図は、Ｓｆ目の濃度が異なる場合におけるＭｇＣ１
□を添加した場合の安定性を示す図である。
た場合の活性の差を示す図である。 第２図は、Ｓｆ目の濃度が異なる場合におけるＭｇＣ１
□を添加した場合の安定性を示す図である。
Claims (2)
- （１）塩化マグネシウムを含有することを特徴とする安
定化された制限酵素Ｓｆｉ I 組成物。 - （２）塩化マグネシウムと制限酵素Ｓｆｉ I を含有す
るグリセロール溶液を含む請求項１記載の組成物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2127391A JP2730266B2 (ja) | 1990-05-16 | 1990-05-16 | 安定化された制限酵素ＳｆｉＩ組成物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2127391A JP2730266B2 (ja) | 1990-05-16 | 1990-05-16 | 安定化された制限酵素ＳｆｉＩ組成物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0423987A true JPH0423987A (ja) | 1992-01-28 |
| JP2730266B2 JP2730266B2 (ja) | 1998-03-25 |
Family
ID=14958834
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2127391A Expired - Fee Related JP2730266B2 (ja) | 1990-05-16 | 1990-05-16 | 安定化された制限酵素ＳｆｉＩ組成物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2730266B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SG80513A1 (en) * | 1992-11-30 | 2001-05-22 | Buckman Lab Int Inc | Stabilized liquid enzymatic compositions |
| WO2008136263A1 (ja) * | 2007-04-27 | 2008-11-13 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | 凍結しないｄｎａリガーゼ反応組成物 |
| KR100880186B1 (ko) * | 2007-01-16 | 2009-01-28 | (주)바이오니아 | 건조 제한효소 조성물 및 이의 제조방법 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01218599A (ja) * | 1987-02-17 | 1989-08-31 | Univ Kingston | Ａｃｖシンテターゼ |
| JPH0223866A (ja) * | 1988-07-11 | 1990-01-26 | Kikkoman Corp | シュークロースホスホリラーゼの安定化法 |
-
1990
- 1990-05-16 JP JP2127391A patent/JP2730266B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01218599A (ja) * | 1987-02-17 | 1989-08-31 | Univ Kingston | Ａｃｖシンテターゼ |
| JPH0223866A (ja) * | 1988-07-11 | 1990-01-26 | Kikkoman Corp | シュークロースホスホリラーゼの安定化法 |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SG80513A1 (en) * | 1992-11-30 | 2001-05-22 | Buckman Lab Int Inc | Stabilized liquid enzymatic compositions |
| KR100880186B1 (ko) * | 2007-01-16 | 2009-01-28 | (주)바이오니아 | 건조 제한효소 조성물 및 이의 제조방법 |
| WO2008136263A1 (ja) * | 2007-04-27 | 2008-11-13 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | 凍結しないｄｎａリガーゼ反応組成物 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2730266B2 (ja) | 1998-03-25 |
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