JPH04225926A - 超音波造影剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明はガスとポリアミノ−ジカ
ルボン酸−コ−イミドの誘導体を含有する微小粒子、そ
の製造法および診断剤と治療剤としての用途からなる超
音波造影剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】超音波造影剤は実施するのに複雑さもな
く直接的に実施できるために医療において大変広く使用
されてきた。超音波は組織の異なったタイプの境界面で
反射される。それによって生じたエコー信号は電子的に
増幅され、ディスプレーされる。

【０００３】超音波による血管および内部器官の視覚化
は、一般にそこにある血流の視覚化までは可能ではない
。液体、特に血液は周囲と関連して濃度の差異がある時
のみ超音波造影剤を与える。医療の超音波診断に使用さ
れる造影剤としては、例えばガスまたはガスを発生する
物質がある。これはガスと周囲の血液の間のインピーダ
ンスの差が液体または固体と血液の間より相当大きいも
のであるためである（Ｌｅｖｉｎｅ　Ｒ．Ａ．，　Ｊ．
　Ａｍ．　Ｃｏｌｌ　Ｃａｒｄｉｏｌ　３：２８，１９
８９；Ｍａｃｈｉ　Ｉ．　Ｊ　ＣＵ　１１：３，１９８
３）。

【０００４】ガスバルブを調製し安定化するための幾つ
かの方法は文献に開示されている。米国特許第４，２７
６，８８５号はガスバルブの合体化を防ぐゼラチンケー
シングにより閉じ込められている限定されたサイズの小
さいガスバルブの調製を記載している。調製された小さ
いガスバルブは凍結状態においてのみ貯蔵することがで
き、小さいガスバルブは使用に当って体温に戻さなけれ
ばならない。

【０００５】ＥＰ−Ａ２　０，１２３，２３５および０
，１２２，６２４は、ガスを含有し液体ビヒクル中の固
体と界面活性剤の混合物からなっている超音波造影剤を
記載している。超音波造影剤はエアージェットミルによ
る入念な微粉砕工程によってつくられる。このようにし
て調製された粒子は閉じ込められたガスを急速に失うた
め短い使用持続期間しか有しない。

【０００６】ＥＰ−Ａ２　０，２２４，９３４はガスを
充したゼラチンまたはアルブミン中空体の形態での超音
波造影剤を記載している。しかしながら、不利な点はそ
こでアレルギーの危険性と関係があるところの外因性の
または変性をした内因性の蛋白質を使用することである
。

【０００７】ＥＰ−Ａ１　０，３２７，４９０はアミロ
ースまたは合成、生分解性のポリマーとガスおよび／ま
たは６０℃以下の沸点を有する液体からなる微小粒子を
記載している。これらポリマーの不利益は水または血液
中における粘着性の粘度、不十分な生分解性、毒性また
は毒性の分解性生成物の産出である。

【０００８】活性物質の制御された放出性の生分解性貯
蔵型の医薬製剤としてポリアミノ−ジカルボン酸−コ−
イミド誘導体を使用することは既に提案されていた（ド
イツ特許出願Ｐ　４０　０２　７３６．８）。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、微小
粒子に基づいた超音波造影剤を開発することであり、こ
の造影剤は非常に小さくて安定でガスの相当な損失もな
く実質的に定量的に到達しうるので周囲の組織とは確然
としたコントラストを与え、静脈内投与後心臓の左半分
は潜在性のアレルギーを生ずることなく良く許容され、
水または血液中で塊りを形成することもなく、すみやか
で簡単に調製することができる。

【００１０】驚くべきことに、著しく超音波造影剤とし
て好適である微小粒子がポリアミノ−ジカルボン酸−コ
−イミド誘導体（ポリジカルボン酸−コ−ＡＨＡＤＡ誘
導体）から調製された。特に、水中に懸濁するように調
製された微小粒子の順応性は著しいもので明らかに未開
環のイミド環（ＡＨＡＤＡ環）の取り込みの故である。 微小粒子は、水含有の液体中で粘着性で脂様の粘稠性を
有せず、ほとんど塊を形成しない。ポリマーはガスが閉
じ込められている薬理学的に不活性なマトリックスを形
成する。生体内でこれらのポリマーは無毒、非アレルギ
ー性で非免疫性の化合物に代謝され、排泄される。動物
実験で微小粒子は実質的にかなりのガスを損失すること
もなく肺を通過し、心臓の両半分で等しい濃度の超音波
造影を生じることを示すことができた。そこで記録され
た超音波心臓検査図は、造影剤の投与後持続期間および
６０分まででも壁面−運動に妨害を示さなかった。さら
に、６チャンネルの心電図においてもまたはチップマノ
メーターを用いて測定した収縮性においてさえも何れも
何らの変化を見出すことができなかった。

【００１１】

【課題を解決するための手段】本発明による超音波造影
剤は心筋層におけるエコー源性で改善された増加をもた
らし、心内膜の改良された視覚化を可能にする。さらに
、例えば次のパラメーターをよりよく評価することが可
能となる。すなわち、室のサイズ（ｖｅｎｔｒｉｃｌｅ
ｓｉｚｅ）、壁面−運動撹乱、ストロークボリューム、
排出画分（ｇｊｕｃｔｉｏｎ　ｆｒａｃｔｉｏｎ）また
は内部の空洞の物質例えば血栓または腫瘍である。さら
に本発明による超音波造影剤は、心臓の左と右半分の心
臓弁膜の能力不足、心室内の短絡の場合における血流パ
ターンおよび先天的奇形の場合における巨大血管の改善
された視覚化を評価することを可能にしている。また、
ドップラー信号の大規模の増強が観察された。

【００１２】

【本発明の詳述】従って本発明は、次の式（Ｉ）

【化２
】 を有するポリアミノ−ジカルボン酸−コ−イミド誘導体
とガスを含有する微小粒子からなる超音波造影剤に関す
る。

【００１３】（ここで式中、ｎは１または２であり、ｘ
は１〜５００であり、ｙは１〜５００であり、そしてｘ
＋ｙは２〜１０００であり、ＲはＯ−Ｒ１またはＮＨ−
Ｒ２であり、ここでＲ２は水素、（ＣＨ２）ｍ−ＯＲ１
、（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ１または（ＣＨ２）
ｍ−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ１、ｍは２〜６であり、そして
Ｒ１は水素、アリール、アラルキル、アリールアルケニ
ル、アルキルまたはＣ３〜Ｃ８−シクロアルキルまたは
生物学的に不活性なステロイドアルコールまたはアミノ
酸であり、ここでアリールは置換されていないかまたは
Ｃ１〜Ｃ４−アルキル、Ｃ２〜Ｃ４−アルケニル、Ｃ１
〜Ｃ４−アルキルカルボニルオキシ、Ｃ１〜Ｃ４−アル
コキシ−カルボニル、Ｃ１〜Ｃ４−アルコキシまたはヒ
ドロキシルで置換されているものとし、ここでＲ１とし
て明示されたアルキル基は１〜２２個の炭素原子を有し
、アルケニル基は中断されないかまたはカルボニルオキ
シまたはオキシカルボニル基により中断された２〜２２
個の炭素原子を有し、ここで角括弧内の反復単位はポリ
マー中にランダムに分布しているかまたはブロックとし
て存在しており、ｘで示された反復単位とｙで示された
反復単位との両者は同一であるかまたは異なったもので
あり、そしてアミノ酸はα−および／またはβ−結合の
ものである）。

【００１４】アリールとは芳香族炭化水素、例えばフェ
ニルとナフチル、特にフェニルを意味する。置換アリー
ルと示されている場合は、一つから全ての置換しうる水
素原子は同一または異なった置換基で置換される。アリ
ール基はモノ置換またジ置換が好ましい。該アルキルお
よびアルケニル基は両方とも直鎖または分岐鎖でありう
る。生物学的に不活性なステロイドアルコールはそのＯ
Ｈ基を介して結合しているのが好ましい。好ましいステ
ロイドアルコールはコレステロールである。Ｒ１として
示されたアミノ酸の場合には、天然に存在するアミノ酸
、例えばチロシン、アラニン、セリンまたはシステイン
が好ましく、特にチロシンとアラニンが好ましい。これ
らはそのＮＨ２基を介し、またはそのＣＯＯＨ基を介し
ての両方で結合することができる。

【００１５】また、本発明は上述のポリマーからなるか
またはこれらを包含するガス含有の微小粒子の製造法お
よびそれらの用途に関し、また診断または治療上の処置
のために他の生適合性および／または生分解性のポリマ
ーまたは生理学的に許容しうる補助剤と混合されるもの
である。

【００１６】さらに本発明は、請求項１〜４の一つまた
はそれ以上の請求項に記載の少なくとも一つの超音波造
影剤または請求項５の方法によって調製された少なくと
も一つの超音波造影剤からなる診断剤または治療剤に関
する。

【００１７】その上、本発明は上記の生理学的なビヒク
ルを有する超音波造影剤およびここで適切にはその上の
添加剤および／または補助剤を適当な投与形態に変換す
ることからなる診断剤または治療剤の製法に関する。

【００１８】本発明は下記に詳細に記載される。アスパ
ラギン酸および／またはグルタミン酸は重縮合反応して
対応するポリイミド（ポリアンヒドロ−アミノ−ジカル
ボン酸、式ＩＩ）を生成するアミノジカルボン酸として
使用される。

【００１９】式ＩＩＩおよび／またはＩＶおよび／また
はＮＨ３の一つまたはそれ以上との部分的反応は、ＨＯ
−Ｒ１（ＩＩＩ）、Ｈ２Ｎ−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ（ＩＶ
）、（式中、ｍとＲ１は式Ｉのために上で定義した通り
である）式ＶＩＩＩのβ−ポリ−Ｄ，Ｌ−アミノ酸エス
テル−コ−イミドを生成する。

【００２０】

【化３】

【００２１】この反応においてポリアンヒドロ−アミノ
−ジカルボン酸（ＩＩ）を単に部分的に開鎖した誘導体
に変換することは非常に重要である。未開鎖のアンヒド
ロ−アミノ−ジカルボン酸単位の割合は０．１〜９９．
９％、好ましくは１０〜９０％である（パーセントは全
ポリマー中の反復単位の全数をさしている）。イミド環
が上記の反応で開環する側がどちらにあるかによってα
−結合またはβ−結合アミノ酸が得られる。好ましく使
用される式ＩＩＩとＩＶの化合物は、２−アミノエタノ
ール、３−アミノプロパノール、２−アミノプロパノー
ル、１〜１８個の炭素原子を有するアルコール、特にメ
タノール、エタノール、イソアミルアルコールおよびイ
ソプロピルアルコールである。

【００２２】α，β−ポリ−（２−ヒドロキシ−エチル
）−Ｄ，Ｌ−アスパルチミド（ＰＨＥＡ）（式Ｉ；ｙ＝
０；Ｒ＝ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨ）の製法は、Ｐ．
　Ｎｅｒｉ，　Ｇ．Ａｎｔｏｎｉ，　Ｆ．　Ｂｅｎｖｅ
ｎｕｔｉ，　Ｆ．　Ｃｏｃｏｌａ，　Ｇ．　Ｇａｚｚｅ
ｉらのＪ．　Ｍｅｄ．　Ｃｈｅｍ．　Ｖｏｌ．１６，　
８９３（１９７３）に記載されている。ＰＨＥＡの製法
の一般的方法はＰ．　Ｎｅｒｉ，　Ｇ．　Ａｎｔｏｎｉ
，　Ｍａｃｒｏｍｏｌ．　Ｓｙｎ．　Ｖｏｌ．　８，　
２５に見出される筈である。ここで、この示された引用
文献に言及しておく。反応は高収率で行なわれ、高純度
の生成物を生ずる。同様な方法でＮＨ３および／または
式ＩＩＩおよび／またはＩＶの化合物の理論量より少な
い用量で式ＶＩＩＩ（ｎ＝１）に類似したポリ−アスパ
ラギン酸誘導体−コ−サクシイミド化合物をつくること
も可能である。

【００２３】米国特許第４，３５６，１６６号に記載さ
れているように別のより精巧である方法が純ポリ（ヒド
ロキシアルキル）−Ｌ−グルタミンを調製するのに使用
されている。これは最初にＬ−グルタミン酸のγ−ＣＯ
ＯＨ基をベンジルアルコールでエステル化して保護する
ことを必要とする。このγ−ベンジルグルタメートは引
き続いてホスゲンと反応してＮ−カルボン酸無水物を生
じ、ついで不活性溶媒中でトリエチルアミンの添加後重
合しポリ−γ−（ベンジル）−Ｌ−グルタメートを生成
する。保護基はＨＣｌ／ＨＢｒ混合物を添加して遊離の
ポリ−α−Ｌ−グルタミン酸を生じさせるかまたはでな
ければヒドロキシアルキルアミンの存在で類似のポリ−
α−（ヒドロキシアルキル）−Ｌ−グルタミンを生じさ
せるかのいずれかで除去される。ポリ−α−（ヒドロキ
シプロピル）−Ｌ−グルタミン調製のための一般的方法
は、この時点で明示された引用文献として言及された米
国特許第４，３５６，１６６号に見出される。また、同
様な方法でＮＨ３および／または式ＩＩＩおよび／また
はＩＶの化合物を用いて式ＶＩＩＩ（ｎ＝２）の類似化
合物を調製することも可能である。

【００２４】純粋なポリ−グルタミン酸およびその誘導
体の精巧な調製法と比べて、燐酸を用いてグルタミン酸
を高い比率にまでアスパラギン酸の単純な縮合に組み入
れてポリアンヒドロアスパラギン酸−コ−グルタミン酸
を生成させることが可能である。

【００２５】式ＶＩＩＩ（Ｒ′＝ＨＮ−（ＣＨ２）ｍ−
ＯＨ）のポリアミノ−アミド−コ−イミドは、必要なら
ば次の反応段階で式Ｖおよび／またはＶＩおよび／また
はＶＩＩの一つまたはそれ以上の異なった生物学的に不
活性な化合物と 　　　　　　Ｘ−Ｒ１　（Ｖ）　　　　Ｘ−ＣＯ−Ｒ１
　（ＶＩ）　　　　Ｘ−ＣＯ−ＯＲ１　（ＶＩＩ）反応
させてさらにポリアミノ−ジカルボン酸−コ−ＡＨＡＤ
Ａ誘導体を生成させることができる。この場合、Ｘはポ
リマーのアルコール基を温和なエステル化でエステルと
する離脱基である。塩素、臭素、沃素、イミダゾリド、
酸無水物またはヒドロキシル、特に塩素が好ましい。

【００２６】式Ｖ、ＶＩまたはＶＩＩタイプの化合物と
の反応はこのタイプの単一の化合物とで行なわれるかま
たはこれらの化合物の所望する任意の組み合わせでの酸
で行なわれるかまたはそうでなければ異なった基Ｒ１、
例えばそれらの分岐の性質において違った、特にその鎖
長の異なる化合物と行なうことができる。

【００２７】最後に述べたポリマーへのアルキル化また
はアシル化は有機化学の既知の方法で行なわれる。ヒド
ロキシル基（式ＶＩＩＩ、Ｒ′＝ＨＮ−（ＣＨ２）ｍ−
ＯＨ）に選択的に行なわれると最初のポリマー上の他の
基を攻撃することなくエーテル、エステルまたは炭酸エ
ステルを生成する。特に好適なのはピリジン存在下にお
けるＳｃｈｏｔｔｅｎ−Ｂａｕｍａｎｎのアシル化法の
Ｅｉｎｈｏｒｎ変法である。この場合、誘導体化の非常
に高いレベル（７０％より大）が温和な条件で達成され
る。このポリマーの分子量は２００〜１００，０００、
好ましくは３，０００〜７０，０００である。

【００２８】式Ｖタイプの化合物は購入するかさもなく
ば、文献よりの既知の方法で簡単な仕方で合成すること
ができる。

【００２９】クロロギ酸エステル（式ＶＩＩ）はホスゲ
ンを適切な生物学的に不活性な、生理学的に許容しうる
芳香族、アリール脂肪族、脂肪族または脂環族の、特に
未分岐アルコールと反応させて得られる。特に好ましく
使用されるアルコールは偶数の炭素原子を有するアルコ
ールである。またクロロフォルミル化したステロイドも
この方法で得られる。従って原則として反応性のヒドロ
キシル基を有する生物学的に不活性なステロイドを得る
ことができる。ここで言及しうる例としては、コレステ
ロール、コレスタノール、コプロスタノール、エルゴス
テロール、シトステロールまたはスチグマステロールが
ある。

【００３０】同様に使用しうる酸塩化物は、例えば対応
する酸から三塩化リン、五塩化リン、シュウ酸クロリド
またはチオニルクロリドとの反応で得られる。

【００３１】アルキル鎖がオキシカルボニルまたはカル
ボニルオキシ基で中断されている式Ｖ、ＶＩまたはＶＩ
Ｉタイプの化合物は、例えば環状ジカルボン酸無水物と
アルコールと反応によって調製される。次いでこのよう
にして得られたジカルボン酸モノエステルは、上記のカ
ルボン酸と類似したように、例えばシュウ酸クロリドと
反応して対応する酸クロリドを生成する。

【００３２】超音波造影剤の製造の有利な方法は、式Ｉ
のポリアミノ−ジカルボン酸−コ−イミド誘導体の一つ
またはそれ以上を高い融点を有する溶媒または溶媒混合
物に溶解すること、またはこれらの誘導体を一つまたは
それ以上の他のポリマーおよび／または生理学的に許容
しうる補助剤と混合すること、および高い融点を有する
溶媒または溶媒混合物に溶解すること、および冷却ガス
、例えば液体窒素を滴下して加えることからなる。この
結果、Ｌｅｉｄｅｎｆｒｏｓｔ現象（液体中の物体が蒸
気膜で包まれる）のために全く丸い粒子を生成する。使
用しうる溶媒の例としては、アルコール、ジメチルホル
ムアミド、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン
、メチレンクロリド、ジオキサン、アセトニトリルまた
はアルコールとの混合物がある。高い融点で水と混和し
うる溶媒は、次第に溶析させ、例えば微小粒子を水に移
行させ、ポリマーは微小粒子の球状を保持しながら沈殿
してくる。

【００３３】もし使用される溶媒が単に高い融点のみな
らず低い沸点を有するならば、この滴下して添加する方
法は溶媒を除去しうる可能性、例えば第３ブタノールの
ように直接に凍結乾燥による温和な条件下、除去されて
より簡単化される。

【００３４】超音波造影剤を製造するもう一つの方法は
、溶媒または溶媒混合物に式Ｉのポリアミノ−ジカルボ
ン酸−コ−イミド誘導体の一つまたはそれ以上を溶解し
、ここで適切には別の溶媒および／または一つまたはそ
れ以上の他のポリマーを加えた後、水中に沈殿させるか
または分散させることからなる。好適である他のポリマ
ーの例としてはポリビニルアルコール（ＲＭｏｗｉｏｌ
　２８−９９）またはポリオキシエチレン−ポリオキシ
プロピレン（ＲＰｌｕｒｏｎｉｃ　Ｆ１２７）がある。 その上の溶媒として、例えばエーテルがある。０．５〜
１５μｍの直径を有する微小粒子は烈しい撹拌、例えば
ミキサー（２５，０００ｒｐｍ）で得られる。引き続い
て溶媒は例えば凍結乾燥で除去される。

【００３５】特に有利な方法、噴霧乾燥により微小粒子
を得ることからなっている。このために式Ｉのポリアミ
ノ−ジカルボン酸−コ−イミド誘導体の一つまたはそれ
以上を溶解するかまたはこれらの誘導体を一つまたはそ
れ以上のポリマーおよび／または生理学的にに許容しう
る補助剤と混合し、溶解させる。好適な溶媒または溶媒
混合物の例はアルコール、ジメチルホルムアミド、ジメ
チルスルホキシド、テトラヒドロフラン、メチレンクロ
リド、ジオキサンまたはアセトニトリルである。ついで
溶液をスプレードライヤーで噴霧乾燥すると微小粒子を
生成する。

【００３６】式Ｉのポリマーは既に述べた方法で単独ま
たはさもなければ式Ｉの種々のポリマーの混合物として
使用することができる。また、これらのポリマーは他の
生分解性および／または生適合性のポリマー（例えばＲ
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ　Ｆ６８、ＰＨＥＡ、デキストラン、
ポリエチレングリコール、ヒドロキシエチルスターチお
よび分解可能または排泄可能な多糖類）または生理学的
に許容しうる補助剤（例えばポリマー可塑剤）と混合物
として使用することができる。

【００３７】微小粒子は、ガス、例えば空気、窒素、貴
ガス、例えばヘリウム、ネオン、アルゴンまたはクリプ
トン、水素、二酸化炭素、酸素またはそれらの混合物を
含有している。微小粒子はガスで満たされ、例えば微小
粒子は凍結乾燥後または噴霧乾燥では適切なガス雰囲気
中に貯えられ、直接に好適なガス雰囲気で調製して得ら
れる。

【００３８】本発明による超音波造影剤は、投与する前
に一つまたはそれ以上の生理学的に許容しうるビヒクル
およびここで必要によってはさらに添加物および／また
は補助剤の添加によって適当な診断上または治療上の投
与形態に変換される。超音波造影剤は、例えば投与の前
に水を加えて懸濁させたり、混合されたりされる。

【００３９】粒子懸濁液の生理学的等張性は滲透圧活性
を有する物質、例えば塩化ナトリウム、ガラクトース、
グルコースまたはフラクトースの添加により組み立てら
れる。

【００４０】本発明による超音波造影剤調製のために記
載された方法では、粒子の９０％が０．１μｍと１５μ
ｍの間にある粒度を生ずる。噴霧乾燥方法を使用すると
、粒子の９０％が３μｍより小さい粒度分布を得ること
が可能である。より大きい粒子は篩分け、例えば１５μ
ｍ篩用布および／または３μｍ篩用布によって除去する
ことができる。これらの微小粒子が心臓血管疾患の診断
のための超音波造影剤として使用される時、０．１μｍ
〜７μｍの粒度が好適であると分ってきて、０．１μｍ
〜３μｍの粒度が好ましく使用される。超音波造影剤は
、例えば注射され、血液循環される。微小粒子の０．１
ｍｇ〜１０００ｍｇ、好ましくは１ｍｇ〜１００ｍｇが
注射により、使用される。

【００４１】上述した超音波造影剤は、診断上および治
療上の両方の処置として使用できる。本発明による超音
波造影剤の使用は、静脈投与後血液循環の右心室部にお
ける血流の視覚化のみに限定されない。超音波造影剤は
心臓の左側面と心筋層の研究にすぐれた成功を収めるこ
とができる。さらに血液供給の他の器官、例えば肝臓、
脾臓、子宮または脳をこれらの造影剤を使用して視覚化
することも可能である。

【００４２】しかしながら、本発明による超音波造影剤
は、また人間、動物または植物の内部にある空洞、例え
ば膀胱、尿管、子宮または膣の視覚化に対して好適であ
る。

【００４３】

【実施例】本発明を次の実施例で詳細に説明する。別記
しない限りパーセントは重量に関してである。

【００４４】〔実施例１〕ポリスクシンイミド−コ−α
，β−（ヒドロキシエチル）−Ｄ，Ｌ−アスパルタミド
の製造 ポリアンヒドロアスパラギン酸の１０ｇ（１０３ｍｍｏ
ｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）の約４
０ｍ１に、もし必要ならば静かに温めながら溶解させる
。この溶液に新しく蒸留した２−アミノエタノールの１
．８３ｇ（３０ｍｍｏｌ）を滴下して加え、室温で一晩
撹拌する。 反応混合物をブタノールで沈殿させ、乾燥アセトンで数
回洗浄する。乾燥は真空で高温において行なわれる。白
色の水溶性の生成物がほぼ１００％の収率で得られ、Ｄ
ＭＦとブタノールの残留物についてはＮＭＲ分光分析法
によって測定される。使用されたアミノエタノールに対
するポリアンヒドロアスパルギン酸のモル比はほぼコポ
リマー組成物に対応している。

【００４５】〔実施例２〕ｎ−ブチル４−クロロ−４−
オキソブチレートの製造 過剰のチオニルクロリドとＤＭＦの１滴をモノブチルサ
クシネートに加える。反応がガスを発生して行なわれる
。混合物を一夜水分を排除して撹拌状態にしておき、続
いて過剰のチオニルクロリドは大気圧下蒸留により除去
される。残留の粗製の生成物は０．０５ｍｂａｒ下分留
され、約７０℃で純粋な生成物が得られる。ＩＲ分光分
析法による特性吸収は１８００ｃｍ−１（酸クロリド）
と１７４０ｃｍ−１（エステル）に等しい強度の吸収バ
ンドを示している。

【００４６】〔実施例３〕ポリスクシンイミド−コ−α
，β−（ブチロキシカルボニル−プロピオニロキシエチ
ル）−Ｄ，Ｌ−アスパルタミド（７０：３０）の製造実
施例１において記載されたように調製されたポリスクシ
ンイミド−コ−α，β−（ヒドロキシエチル）−Ｄ，Ｌ
−アスパルタミドの６ｇ（＝ヒドロキシエチル基の１６
ｍｍｏｌ）は乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭ
Ｆ）の１００ｍ１に溶解される。ピリジン４ｇ（５０ｍ
ｍｏｌ）を添加し、続いて冷却して０℃にし、ｎ−ブチ
ル４−クロロ−４−オキソブチレート（実施例２参照）
の４．８ｇ（２５ｍｍｏｌ）を１５分間にわたって撹拌
しながら加える。混合物を一夜撹拌、エーテル０．５ｌ
で沈殿させる。沈殿をサクションで濾過し、エーテル、
アセトン、水、アセトンおよびエーテルで洗浄する。そ
の結果、ほぼ１００％程度に置換した白色のポリマー約
８ｇ（ＮＭＲ分光分析法でチェックできる）を得る。得
られたポリマーは、例えば微量のジメチルスルオキシド
（ＤＭＳＯ）を有するアセトニトリル、ＤＭＳＯまたは
ＤＭＦに可溶である。

【００４７】〔実施例４〕ポリスクシンイミド−コ−α
，β−（ノニルカルボニロキシ−エチル）−Ｄ，Ｌ−ア
スパルタミド（５０：５０）の製造 ポリアンヒドロアスパラギン酸（ＭＷ＝１４０００）と
２−アミノエタノール（モル比２：１）から実施例１に
類似した方法で調製されたポリスクシンイミド−コ−α
，β−（ヒドロキシエチル）−Ｄ，Ｌ−アスパルタミド
（５０：５０）（＝ヒドロキシル基の２４ｍｍｏｌ）の
６ｇを乾燥ＤＭＦの１００ｍ１に溶解し、乾燥ピリジン
の８ｇ（１００ｍ１）を加え、０℃に冷却する。蒸留し
たデカノイルクロリドの９．６ｇを徐々に滴下して加え
、さらに実施例３に類似した方法で操作を行なう。白色
の完全に置換したポリマー（ＮＭＲでチェック）の約８
ｇが得られ、これは可溶性であり、例えばジクロロメタ
ンとＴＨＦに、いすれの場合も少量のＤＭＳＯ３と一緒
の場合にまたはメタノール／ジクロロメタン混合物に可
溶性である。

【００４８】〔実施例５〕いくつかのコポリマー組成と
種々の分子量を有するポリスクシンイミド−コ−α，β
−（ノニルカルボニロキシ−エチル）−Ｄ，Ｌ−アスパ
ルタミドの製造 実施例１と類似の方法で、種々のポリスクシンイミド−
コ−α，β−（ヒドロキシエチル）−Ｄ，Ｌ−アスパル
タミド、とりわけ組成７０：３０、５０：５０および３
０：７０が種々の分子量のポリアンヒドロアスパラギン
酸（ＭＷ＝７０００、約１３０００、３００００）から
調製され、実施例４に記載したようにデカノイルクロリ
ドと反応して対応するポリスクシンイミド−コ−α，β
−（ノニルカルボニロキシエチル）−Ｄ，Ｌ−アスパル
タミドを生成させる。

【００４９】ａ）　　ポリアンヒドロアスパラギン酸（
ＭＷ＝７０００）からポリスクシンイミド−コ−α，β
−（ノニルカルボニロキシエチル）−Ｄ，Ｌ−アスパル
タミド（７０：３０）；ＮＭＲにより特性決定ｂ）　　
ポリアンヒドロアスパラギン酸（ＭＷ＝１４０００）か
らポリスクシンイミド−コ−α，β−（ノニルカルボニ
ロキシエチル）−Ｄ，Ｌ−アスパルタミド（７０：３０
）；ＮＭＲにより特性決定 ｃ）　　ポリアンヒドロアスパラギン酸（ＭＷ＝３００
００）からポリスクシンイミド−コ−α，β−（ノニル
カルボニロキシエチル）−Ｄ，Ｌ−アスパルタミド（７
０：３０）；ＮＭＲで特性決定 ｄ）　　ポリアンヒドロアスパラギン酸（ＭＷ＝１２０
００）からポリスクシンイミド−コ−α，β−（ノニル
カルボニロキシエチル）−Ｄ，Ｌ−アスパルタミド（３
０：７０）；ＮＭＲで特性決定

【００５０】〔実施例６〕ポリスクシンイミド−コ−α
，β−（オクチロキシカルボニル−オキシエチル）−Ｄ
，Ｌ−アスパルタミド（７０：３０）の製造実施例１に
記載したようにポリアンヒドロアスパラギン酸（ＭＷ＝
３７０００）とアミノエタノールから調製されたポリス
クシンイミド−コ−α，β−（ヒドロキシエチル）−Ｄ
，Ｌ−アスパルタミド（７０：３０）の６ｇ（＝ヒドロ
キシエチル基の１６ｍｍｏｌ）は実施例３に類似した方
法でオクチルクロロホルメートの４．８ｇ（２５ｍｍｏ
ｌ）と反応させ、対応するように進めた。白色の完全に
置換したポリマーの約８ｇが得られ、これはＴＨＦまた
はメタノール／ジクロルメタン中に可溶性である。

【００５１】〔実施例７〕ポリスクシンイミド−コ−α
，β−（ノニルカルボニロキシ−エチル）−コ−α，β
−（ヒドロキシエチル）−Ｄ，Ｌ−アスパルタミド（６
０：２０：２０）の製造 実施例１に類似した方法でポリアンヒドロアスパラギン
酸と２−アミノエタノール（モル比６：４）から調製し
たポリスクシンイミド−コ−α，β−（ヒドロキシエチ
ル）−Ｄ，Ｌ−アスパルタミド（６０：４０）（＝ヒド
ロキシエチル基の２０ｍｍｏｌ）の６ｇを実施例３と類
似の方法でデカノイルクロリドの２．３ｇ（＝１２ｍｍ
ｏｌ）と反応させる。反応は不十分にしか進まなかった
ので（酸クロリドの相対的に僅かの過剰）遊離のＯＨ基
の僅か半分がエステル化された。その結果約７ｇの白色
ポリマーが得られた。この微小粒子は水中でしっかりし
た稠度を示し、容易に懸濁しうる。

【００５２】〔実施例８〕ポリスクシンイミド−コ−α
，β−（オレイロキシエチル）−Ｄ，Ｌ−アスパルタミ
ド（１０：９０）の製造 実施例１に類似した方法でポリアンヒドロアスパラギン
酸の２−アミノエタノールに対する１：９モル比で調製
されたポリスクシンイミド−コ−α，β−（ヒドロキシ
エチル）−Ｄ，Ｌ−アスパルタミド（１０：９０）（＝
ヒドロキシエチル基の４０ｍｍｏｌ）の６ｇを実施例３
に類似の方法で蒸留したオレイルクロリドの２０ｇと反
応させる。不均一の反応混合物はジクロロメタンの添加
で均一となる。−２０℃に冷却されているメタノール中
で２度沈殿する。黄色に着色したポリマーは熱可塑性で
ある。

【００５３】〔実施例９〕 ａ）　　微小粒子の調製 実施例４からのポリスクシンイミド−コ−α，β−（ノ
ニルカルボニロキシエチル）−Ｄ，Ｌ−アスパルタミド
（５０：５０）の４０ｍｇを１ｍ１のメチレンクロリド
／メタノール（容積で５０／１の比率）に溶解する。こ
の溶液を撹拌しながら（８００ｒｐｍ）０．１重量％の
水性ポリビニルアルコール溶液（Ｍｏｗｉｏｌ　２８〜
９９）（これはメチレンクロリド／メタノール（５０／
１）の０．３ｍ１で飽和されている）６０ｍ１を含有す
るビーカー中に導入する。同時に、溶液をミキサー（２
５，０００ｒｐｍ）で細かく分散する。５分後、内容物
を水の２００ｍ１を含有するビーカー中に注ぎ、３０分
（２００ｒｐｍ）撹拌する。上澄水を傾瀉し去り、微小
粒子は凍結乾燥される（凍結乾燥後の直径は０．５〜１
５μｍ）。

【００５４】〔実施例１０〕微小粒子の調製実施例６か
らのポリスクシンイミド−コ−α，β−（オクチルカル
ボニロキシエチル）−Ｄ，Ｌ−アスパルタミド（７０：
３０）８０ｍｇを５０℃で１ｍ１のジメチルスルホキシ
ドに溶解し、ヒドロキシプロピルセルローズ（Ｋｌｕｃ
ｅｌ　Ｍ）２０ｍｇを加えた。この２つのポリマー溶液
をあらかじめ導入してあった液体窒素（１００ｍ１）に
注射器の針（針の外径０．６ｍｍの使い捨て注射器）を
使用して滴下して加える。得られた微小粒子は２００ｍ
１の水中に移し、２時間で残留溶媒から抽出される。過
剰な水を傾瀉し去り、微小粒子は凍結乾燥される（凍結
乾燥後の直径は１〜２μｍ）。

【００５５】〔実施例１１〕微小粒子の調製ポリスクシ
ンイミド−コ−α，β−（オクチロキシカルボニロキシ
エチル）−Ｄ，Ｌ−アスパルタミド（Ａ）（実施例６）
とポリスクシンイミド−コ−α，β−（ノニルカルボニ
ロキシエチル）−Ｄ，Ｌ−アスパルタミド（Ｂ）（実施
例５ｄ）の各々４ｇを表１に示した溶媒中の２％溶液と
された。続いてポリマーは噴霧乾燥機中で噴霧されて微
小粒子が生成された（Ｂｕｅｃｈｉ社、西ドイツによっ
て供給されたＢｕｅｃｈｉ　１９０ミニスプレードライ
ヤー）。

【００５６】

【表１】

【００５７】微小粒子の大きさの分布はＣｉｌａｓ　７
１５粒度計で測定された。

【００５８】各々の場合において上記の如く調製された
微小粒子の３０ｍｇ部分が１．５ｍ１の懸濁助剤中に分
散された。懸濁助剤はデキストラン４０（Ｒｏｔｈ社、
西ドイツから供給）１５０ｍｇ、ポリソルベート７．５
ｍｇおよび塩化ナトリウム１３．５ｍｇを蒸留水１．５
ｍ１中に溶解したものからなっている。懸濁液はスクリ
ーン布を用いて濾過され、続いて凍結乾燥される。投与
する前に、微小粒子は水中に懸濁される。

【００５９】〔実施例１２〕犬の超音波心臓検査微小粒
子の３０ｍｇ（実施例１１、物質Ｂで調製、ジクロメタ
ン／メタノール２：３（容積）の溶液）はガラス棒を用
いて１．５ｍ１の蒸留水中に再び懸濁化される。この懸
濁液は注射器を用いて静脈内に注射される。超音波装置
のエミッター（東芝、ＦＳＨ　１６０ａ）は右および左
の心臓を通過する典型的な横断面図が得られるように実
験動物の胸部の上に保持される。超音波造影剤が心臓の
右半分に到達するとすぐに超音波装置の監視装置上に造
影剤によりラベルされた血液がどのようにして右心房、
ついで右心室に到達し、肺動脈を経由してまた心臓を通
り過ぎるかを見ることが可能である。肺を通過した後、
心臓の左半分は造影剤のおかげで見ることができる。超
音波の造影（コントラスト）は肺通過の前後で同じ強度
であるので、ポリマー中の空気は要するに完全に保持さ
れ、本質的に損失することなく微小粒子が心臓の左半分
に移送されていると仮定することができる。

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　次の式（Ｉ） 【化１】 を有するポリアミノ−ジカルボン酸−コ−イミド誘導体
   とガスを含有する微小粒子からなる超音波造影剤。（な
   お式中、ｎは１または２であり、ｘは１〜５００であり
   、ｙは１〜５００であり、そしてｘ＋ｙは２〜１０００
   であり、ＲはＯ−Ｒ１またはＮＨ−Ｒ２であり、ここで
   Ｒ２は水素、（ＣＨ２）ｍ−ＯＲ１、（ＣＨ２）ｍ−Ｏ
   −Ｃ（Ｏ）−Ｒ１または（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−
   ＯＲ１、ｍは２〜６であり、そしてＲ１は水素、アリー
   ル、アラルキル、アリールアルケニル、アルキルまたは
   Ｃ３〜Ｃ８−シクロアルキルまたは生物学的に不活性な
   ステロイドアルコールまたはアミノ酸、ここでアリール
   は置換されていないかまたはＣ１〜Ｃ４−アルキル、Ｃ
   ２〜Ｃ４−アルケニル、Ｃ１〜Ｃ４−アルキルカルボニ
   ルオキシ、Ｃ１〜Ｃ４−アルコキシ−カルボニル、Ｃ１
   〜Ｃ４−アルコキシまたはヒドロキシルで置換されてい
   るものとし、ここでＲ１として明示されているアルキル
   基は１〜２２個の炭素原子を有し、アルケニル基は中断
   されていないかまたはカルボニルオキシまたはオキシカ
   ルボニル基により中断された２〜２２個の炭素原子を有
   し、ここで角括弧内の反復単位はポリマー中にランダム
   に分布しているかまたはブロックとして存在しており、
   ｘで示された反復単位とｙで示された反復単位との両者
   は同一であるかまたは異なったものであり、そしてアミ
   ノ酸はα−および／またはβ−結合のものである）。
2. 【請求項２】　　式ＩにおいてＲはＮＨ−Ｒ２であり、
   ｍは２であり、Ｒ１は水素、アリール、アラルキル、ア
   ルキルまたはＣ５〜Ｃ６−シクロアルキルであり、ここ
   でアルキル基は１〜２２個の炭素原子を有するものであ
   る請求項１記載の超音波造影剤。
3. 【請求項３】　　式ＩにおいてＲはＯ−Ｒ１であり、Ｒ
   １はアリール、アラルキル、アルキルまたはＣ５〜Ｃ６
   −シクロアルキルであり、ここでアルキル基が１〜２２
   個の炭素原子を有するものである請求項１記載の超音波
   造影剤。
4. 【請求項４】　　微小粒子は空気、窒素、貴ガス、水素
   、二酸化炭素、酸素またはこれらの混合物をガスとして
   含有する請求項１〜３の一つまたはそれ以上の請求項１
   記載の超音波造影剤。
5. 【請求項５】　　ａ）　　式Ｉのポリアミノ−ジカルボ
   ン酸−コ−イミド誘導体の一つまたはそれ以上の溶液、
   またはこの誘導体またはこれらの誘導体の溶液であって
   追加的に一つまたはそれ以上の他のポリマーを含有する
   もの、および／または生理学的に許容しうる補助剤を含
   有するもの、を噴霧乾燥するか、または ｂ）　　高い融点を有する一つの溶媒または溶媒混合物
   中に溶解される式Ｉの一つまたはそれ以上のポリアミノ
   −ジカルボン酸−コ−イミド誘導体、またはこれらの誘
   導体が一つまたそれ以上の他のポリマーおよび／または
   生理学的に許容しうる補助剤と混合され、そして高い融
   点を有する溶剤混合物に溶解され、ついで凝縮した冷ガ
   スに滴下して加え、次いで溶媒は除去されるか、または
   ｃ）　　式Ｉの一つまたはそれ以上のポリアミノ−ジカ
   ルボン酸−コ−イミド誘導体が溶媒または溶媒混合物中
   に溶解され次いで、必要な場合に別の溶媒および／また
   は一つまたはそれ以上の他のポリマーを添加し、水中に
   沈殿または分散され、得られた懸濁液は溶媒を含まない
   ものとされることからなる請求項１記載の超音波造影剤
   の製造法。
6. 【請求項６】　　診断剤または治療剤を調製するための
   請求項１〜４の１つまたそれ以上の請求項に記載の超音
   波造影剤の用途。
7. 【請求項７】　　人間、動物または植物中のキャビティ
   の研究のための請求項１〜４の一つまたはそれ以上の請
   求項記載の超音波造影剤の用途。
8. 【請求項８】　　心臓血管疾患を診断するための請求項
   １〜４の一つまたはそれ以上の請求項記載の超音波造影
   剤の用途。
9. 【請求項９】　　請求項１〜４の一つまたはそれ以上の
   請求項記載の少なくとも一つの超音波造影剤または方法
   ５によって調製された少なくとも一つの超音波造影剤か
   らなる診断剤または治療剤。
10. 【請求項１０】　　生理学的ビヒクルと共に請求項１〜
    ４の一つまたはそれ以上の請求項記載の少なくとも一つ
    の超音波造影剤を、必要な場合にはさらに添加物および
    ／または補助剤と共に適当な投与形態に変換することか
    らなる請求項９記載の診断剤または治療剤の製造法。