JP3381930B2 - 超音波造影剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明はガスとポリアミノ−ジカ
ルボン酸−コ−イミドの誘導体を含有する微小粒子、そ
の製造法および診断剤と治療剤としての用途からなる超
音波造影剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】超音波造影剤は実施するのに複雑さもな
く直接的に実施できるために医療において大変広く使用
されてきた。超音波は組織の異なったタイプの境界面で
反射される。それによって生じたエコー信号は電子的に
増幅され、ディスプレーされる。

【０００３】超音波による血管および内部器官の視覚化
は、一般にそこにある血流の視覚化までは可能ではな
い。液体、特に血液は周囲と関連して濃度の差異がある
時のみ超音波造影剤を与える。医療の超音波診断に使用
される造影剤としては、例えばガスまたはガスを発生す
る物質がある。これはガスと周囲の血液の間のインピー
ダンスの差が液体または固体と血液の間より相当大きい
ものであるためである（Levine R.A., J. Am. Coll Car
diol ３：２８，１９８９；Machi I. J CU 11：３，１
９８３）。

【０００４】ガスバルブを調製し安定化するための幾つ
かの方法は文献に開示されている。米国特許第４,２７
６,８８５号はガスバルブの合体化を防ぐゼラチンケー
シングにより閉じ込められている限定されたサイズの小
さいガスバルブの調製を記載している。調製された小さ
いガスバルブは凍結状態においてのみ貯蔵することがで
き、小さいガスバルブは使用に当って体温に戻さなけれ
ばならない。

【０００５】ＥＰ−Ａ２ ０,１２３,２３５および０,１
２２,６２４は、ガスを含有し液体ビヒクル中の固体と
界面活性剤の混合物からなっている超音波造影剤を記載
している。超音波造影剤はエアージェットミルによる入
念な微粉砕工程によってつくられる。このようにして調
製された粒子は閉じ込められたガスを急速に失うため短
い使用持続期間しか有しない。

【０００６】ＥＰ−Ａ２ ０,２２４,９３４はガスを充
したゼラチンまたはアルブミン中空体の形態での超音波
造影剤を記載している。しかしながら、不利な点はそこ
でアレルギーの危険性と関係があるところの外因性のま
たは変性をした内因性の蛋白質を使用することである。

【０００７】ＥＰ−Ａ１ ０,３２７,４９０はアミロー
スまたは合成、生分解性のポリマーとガスおよび／また
は６０℃以下の沸点を有する液体からなる微小粒子を記
載している。これらポリマーの不利益は水または血液中
における粘着性の粘度、不十分な生分解性、毒性または
毒性の分解性生成物の産出である。

【０００８】活性物質の制御された放出性の生分解性貯
蔵型の医薬製剤としてポリアミノ−ジカルボン酸−コ−
イミド誘導体を使用することは既に提案されていた（ド
イツ特許出願Ｐ ４０ ０２ ７３６.８）。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、微小
粒子に基づいた超音波造影剤を開発することであり、こ
の造影剤は非常に小さくて安定でガスの相当な損失もな
く実質的に定量的に到達しうるので周囲の組織とは確然
としたコントラストを与え、静脈内投与後心臓の左半分
は潜在性のアレルギーを生ずることなく良く許容され、
水または血液中で塊りを形成することもなく、すみやか
で簡単に調製することができる。

【００１０】驚くべきことに、著しく超音波造影剤とし
て好適である微小粒子がポリアミノ−ジカルボン酸−コ
−イミド誘導体（ポリジカルボン酸−コ−ＡＨＡＤＡ誘
導体）から調製された。特に、水中に懸濁するように調
製された微小粒子の順応性は著しいもので明らかに未開
環のイミド環（ＡＨＡＤＡ環）の取り込みの故である。
微小粒子は、水含有の液体中で粘着性で脂様の粘稠性を
有せず、ほとんど塊を形成しない。ポリマーはガスが閉
じ込められている薬理学的に不活性なマトリックスを形
成する。生体内でこれらのポリマーは無毒、非アレルギ
ー性で非免疫性の化合物に代謝され、排泄される。動物
実験で微小粒子は実質的にかなりのガスを損失すること
もなく肺を通過し、心臓の両半分で等しい濃度の超音波
造影を生じることを示すことができた。そこで記録され
た超音波心臓検査図は、造影剤の投与後持続期間および
６０分まででも壁面−運動に妨害を示さなかった。さら
に、６チャンネルの心電図においてもまたはチップマノ
メーターを用いて測定した収縮性においてさえも何れも
何らの変化を見出すことができなかった。

【００１１】

【課題を解決するための手段】本発明による超音波造影
剤は心筋層におけるエコー源性で改善された増加をもた
らし、心内膜の改良された視覚化を可能にする。さら
に、例えば次のパラメーターをよりよく評価することが
可能となる。すなわち、室のサイズ（ventriclesiz
e）、壁面−運動撹乱、ストロークボリューム、排出画
分（gjuction fraction）または内部の空洞の物質例え
ば血栓または腫瘍である。さらに本発明による超音波造
影剤は、心臓の左と右半分の心臓弁膜の能力不足、心室
内の短絡の場合における血流パターンおよび先天的奇形
の場合における巨大血管の改善された視覚化を評価する
ことを可能にしている。また、ドップラー信号の大規模
の増強が観察された。

【００１２】

【本発明の詳述】従って本発明は、次の式（Ｉ）

【化２】 を有するポリアミノ−ジカルボン酸−コ−イミド誘導体
とガスを含有する微小粒子からなる超音波造影剤に関す
る。

【００１３】（ここで式中、ｎは１または２であり、ｘ
は１〜５００であり、ｙは１〜５００であり、そしてｘ
＋ｙは２〜１０００であり、ＲはＯ−Ｒ¹またはＮＨ−
Ｒ²であり、ここでＲ²は水素、(ＣＨ₂)_m−ＯＲ¹、(ＣＨ
₂)_m−Ｏ−Ｃ(Ｏ)−Ｒ¹または(ＣＨ₂)_m−Ｏ−Ｃ(Ｏ)−Ｏ
Ｒ¹、ｍは２〜６であり、そしてＲ¹は水素、アリール、
アラルキル、アリールアルケニル、アルキルまたはＣ₃
〜Ｃ₈−シクロアルキルまたは生物学的に不活性なステ
ロイドアルコールまたはアミノ酸であり、ここでアリー
ルは置換されていないかまたはＣ₁〜Ｃ₄−アルキル、Ｃ
₂〜Ｃ₄−アルケニル、Ｃ₁〜Ｃ₄−アルキルカルボニルオ
キシ、Ｃ₁〜Ｃ₄−アルコキシ−カルボニル、Ｃ₁〜Ｃ₄−
アルコキシまたはヒドロキシルで置換されているものと
し、ここでＲ¹として明示されたアルキル基は１〜２２
個の炭素原子を有し、アルケニル基は中断されないかま
たはカルボニルオキシまたはオキシカルボニル基により
中断された２〜２２個の炭素原子を有し、ここで角括弧
内の反復単位はポリマー中にランダムに分布しているか
またはブロックとして存在しており、ｘで示された反復
単位とｙで示された反復単位との両者は同一であるかま
たは異なったものであり、そしてアミノ酸はα−および
／またはβ−結合のものである）。

【００１４】アリールとは芳香族炭化水素、例えばフェ
ニルとナフチル、特にフェニルを意味する。置換アリー
ルと示されている場合は、一つから全ての置換しうる水
素原子は同一または異なった置換基で置換される。アリ
ール基はモノ置換またジ置換が好ましい。該アルキルお
よびアルケニル基は両方とも直鎖または分岐鎖でありう
る。生物学的に不活性なステロイドアルコールはそのＯ
Ｈ基を介して結合しているのが好ましい。好ましいステ
ロイドアルコールはコレステロールである。Ｒ¹として
示されたアミノ酸の場合には、天然に存在するアミノ
酸、例えばチロシン、アラニン、セリンまたはシステイ
ンが好ましく、特にチロシンとアラニンが好ましい。こ
れらはそのＮＨ₂基を介し、またはそのＣＯＯＨ基を介
しての両方で結合することができる。

【００１５】また、本発明は上述のポリマーからなるか
またはこれらを包含するガス含有の微小粒子の製造法お
よびそれらの用途に関し、また診断または治療上の処置
のために他の生適合性および／または生分解性のポリマ
ーまたは生理学的に許容しうる補助剤と混合されるもの
である。

【００１６】さらに本発明は、請求項１〜４の一つまた
はそれ以上の請求項に記載の少なくとも一つの超音波造
影剤または請求項５の方法によって調製された少なくと
も一つの超音波造影剤からなる診断剤または治療剤に関
する。

【００１７】その上、本発明は上記の生理学的なビヒク
ルを有する超音波造影剤およびここで適切にはその上の
添加剤および／または補助剤を適当な投与形態に変換す
ることからなる診断剤または治療剤の製法に関する。

【００１８】本発明は下記に詳細に記載される。アスパ
ラギン酸および／またはグルタミン酸は重縮合反応して
対応するポリイミド（ポリアンヒドロ−アミノ−ジカル
ボン酸、式II）を生成するアミノジカルボン酸として使
用される。

【００１９】式IIIおよび／またはIVおよび／またはＮ
Ｈ₃の一つまたはそれ以上との部分的反応は、ＨＯ−Ｒ¹
（III）、Ｈ₂Ｎ−(ＣＨ₂)_m−ＯＨ（IV）、（式中、ｍと
Ｒ¹は式Ｉのために上で定義した通りである）式VIIIの
β−ポリ−Ｄ,Ｌ−アミノ酸エステル−コ−イミドを生
成する。

【００２０】

【化３】

【００２１】この反応においてポリアンヒドロ−アミノ
−ジカルボン酸（II）を単に部分的に開鎖した誘導体に
変換することは非常に重要である。未開鎖のアンヒドロ
−アミノ−ジカルボン酸単位の割合は０.１〜９９.９
％、好ましくは１０〜９０％である（パーセントは全ポ
リマー中の反復単位の全数をさしている）。イミド環が
上記の反応で開環する側がどちらにあるかによってα−
結合またはβ−結合アミノ酸が得られる。好ましく使用
される式IIIとIVの化合物は、２−アミノエタノール、
３−アミノプロパノール、２−アミノプロパノール、１
〜１８個の炭素原子を有するアルコール、特にメタノー
ル、エタノール、イソアミルアルコールおよびイソプロ
ピルアルコールである。

【００２２】α,β−ポリ−（２−ヒドロキシ−エチ
ル）−Ｄ,Ｌ−アスパルチミド（ＰＨＥＡ）（式Ｉ；ｙ
＝０；Ｒ＝ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＯＨ）の製法は、P. N
eri, G.Antoni, F. Benvenuti, F. Cocola, G. Gazzei
らのJ. Med. Chem. Vol.１６, ８９３（１９７３）に記
載されている。ＰＨＥＡの製法の一般的方法はP. Neri,
G. Antoni, Macromol. Syn. Vol. ８, ２５に見出され
る筈である。ここで、この示された引用文献に言及して
おく。反応は高収率で行なわれ、高純度の生成物を生ず
る。同様な方法でＮＨ₃および／または式IIIおよび／ま
たはIVの化合物の理論量より少ない用量で式VIII（ｎ＝
１）に類似したポリ−アスパラギン酸誘導体−コ−サク
シイミド化合物をつくることも可能である。

【００２３】米国特許第４,３５６,１６６号に記載され
ているように別のより精巧である方法が純ポリ（ヒドロ
キシアルキル）−Ｌ−グルタミンを調製するのに使用さ
れている。これは最初にＬ−グルタミン酸のγ−ＣＯＯ
Ｈ基をベンジルアルコールでエステル化して保護するこ
とを必要とする。このγ−ベンジルグルタメートは引き
続いてホスゲンと反応してＮ−カルボン酸無水物を生
じ、ついで不活性溶媒中でトリエチルアミンの添加後重
合しポリ−γ−（ベンジル）−Ｌ−グルタメートを生成
する。保護基はＨＣｌ／ＨＢｒ混合物を添加して遊離の
ポリ−α−Ｌ−グルタミン酸を生じさせるかまたはでな
ければヒドロキシアルキルアミンの存在で類似のポリ−
α−（ヒドロキシアルキル）−Ｌ−グルタミンを生じさ
せるかのいずれかで除去される。ポリ−α−（ヒドロキ
シプロピル）−Ｌ−グルタミン調製のための一般的方法
は、この時点で明示された引用文献として言及された米
国特許第４,３５６,１６６号に見出される。また、同様
な方法でＮＨ₃および／または式IIIおよび／またはIVの
化合物を用いて式VIII（ｎ＝２）の類似化合物を調製す
ることも可能である。

【００２４】純粋なポリ−グルタミン酸およびその誘導
体の精巧な調製法と比べて、燐酸を用いてグルタミン酸
を高い比率にまでアスパラギン酸の単純な縮合に組み入
れてポリアンヒドロアスパラギン酸−コ−グルタミン酸
を生成させることが可能である。

【００２５】式VIII（Ｒ′＝ＨＮ−(ＣＨ₂)_m−ＯＨ）の
ポリアミノ−アミド−コ−イミドは、必要ならば次の反
応段階で式Ｖおよび／またはVIおよび／またはVIIの一
つまたはそれ以上の異なった生物学的に不活性な化合物
と Ｘ−Ｒ¹ (Ｖ) Ｘ−ＣＯ−Ｒ¹ (VI) Ｘ−ＣＯ−ＯＲ¹ (VII) 反応させてさらにポリアミノ−ジカルボン酸−コ−ＡＨ
ＡＤＡ誘導体を生成させることができる。この場合、Ｘ
はポリマーのアルコール基を温和なエステル化でエステ
ルとする離脱基である。塩素、臭素、沃素、イミダゾリ
ド、酸無水物またはヒドロキシル、特に塩素が好まし
い。

【００２６】式Ｖ、VIまたはVIIタイプの化合物との反
応はこのタイプの単一の化合物とで行なわれるかまたは
これらの化合物の所望する任意の組み合わせでの酸で行
なわれるかまたはそうでなければ異なった基Ｒ¹、例え
ばそれらの分岐の性質において違った、特にその鎖長の
異なる化合物と行なうことができる。

【００２７】最後に述べたポリマーへのアルキル化また
はアシル化は有機化学の既知の方法で行なわれる。ヒド
ロキシル基（式VIII、Ｒ′＝ＨＮ−(ＣＨ₂)_m−ＯＨ）に
選択的に行なわれると最初のポリマー上の他の基を攻撃
することなくエーテル、エステルまたは炭酸エステルを
生成する。特に好適なのはピリジン存在下におけるScho
tten-Baumannのアシル化法のEinhorn変法である。この
場合、誘導体化の非常に高いレベル（７０％より大）が
温和な条件で達成される。このポリマーの分子量は２０
０〜１００,０００、好ましくは３,０００〜７０,００
０である。

【００２８】式Ｖタイプの化合物は購入するかさもなく
ば、文献よりの既知の方法で簡単な仕方で合成すること
ができる。

【００２９】クロロギ酸エステル(式VII）はホスゲンを
適切な生物学的に不活性な、生理学的に許容しうる芳香
族、アリール脂肪族、脂肪族または脂環族の、特に未分
岐アルコールと反応させて得られる。特に好ましく使用
されるアルコールは偶数の炭素原子を有するアルコール
である。またクロロフォルミル化したステロイドもこの
方法で得られる。従って原則として反応性のヒドロキシ
ル基を有する生物学的に不活性なステロイドを得ること
ができる。ここで言及しうる例としては、コレステロー
ル、コレスタノール、コプロスタノール、エルゴステロ
ール、シトステロールまたはスチグマステロールがあ
る。

【００３０】同様に使用しうる酸塩化物は、例えば対応
する酸から三塩化リン、五塩化リン、シュウ酸クロリド
またはチオニルクロリドとの反応で得られる。

【００３１】アルキル鎖がオキシカルボニルまたはカル
ボニルオキシ基で中断されている式Ｖ、VIまたはVIIタ
イプの化合物は、例えば環状ジカルボン酸無水物とアル
コールと反応によって調製される。次いでこのようにし
て得られたジカルボン酸モノエステルは、上記のカルボ
ン酸と類似したように、例えばシュウ酸クロリドと反応
して対応する酸クロリドを生成する。

【００３２】超音波造影剤の製造の有利な方法は、式Ｉ
のポリアミノ−ジカルボン酸−コ−イミド誘導体の一つ
またはそれ以上を高い融点を有する溶媒または溶媒混合
物に溶解すること、またはこれらの誘導体を一つまたは
それ以上の他のポリマーおよび／または生理学的に許容
しうる補助剤と混合すること、および高い融点を有する
溶媒または溶媒混合物に溶解すること、および冷却ガ
ス、例えば液体窒素を滴下して加えることからなる。こ
の結果、Leidenfrost現象（液体中の物体が蒸気膜で包
まれる）のために全く丸い粒子を生成する。使用しうる
溶媒の例としては、アルコール、ジメチルホルムアミ
ド、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン、メチ
レンクロリド、ジオキサン、アセトニトリルまたはアル
コールとの混合物がある。高い融点で水と混和しうる溶
媒は、次第に溶析させ、例えば微小粒子を水に移行さ
せ、ポリマーは微小粒子の球状を保持しながら沈殿して
くる。

【００３３】もし使用される溶媒が単に高い融点のみな
らず低い沸点を有するならば、この滴下して添加する方
法は溶媒を除去しうる可能性、例えば第３ブタノールの
ように直接に凍結乾燥による温和な条件下、除去されて
より簡単化される。

【００３４】超音波造影剤を製造するもう一つの方法
は、溶媒または溶媒混合物に式Ｉのポリアミノ−ジカル
ボン酸−コ−イミド誘導体の一つまたはそれ以上を溶解
し、ここで適切には別の溶媒および／または一つまたは
それ以上の他のポリマーを加えた後、水中に沈殿させる
かまたは分散させることからなる。好適である他のポリ
マーの例としてはポリビニルアルコール（^RMowiol ２８
−９９）またはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピ
レン（^RPluronic Ｆ１２７）がある。その上の溶媒とし
て、例えばエーテルがある。０.５〜１５μmの直径を有
する微小粒子は烈しい撹拌、例えばミキサー（２５,０
００rpm）で得られる。引き続いて溶媒は例えば凍結乾
燥で除去される。

【００３５】特に有利な方法、噴霧乾燥により微小粒子
を得ることからなっている。このために式Ｉのポリアミ
ノ−ジカルボン酸−コ−イミド誘導体の一つまたはそれ
以上を溶解するかまたはこれらの誘導体を一つまたはそ
れ以上のポリマーおよび／または生理学的にに許容しう
る補助剤と混合し、溶解させる。好適な溶媒または溶媒
混合物の例はアルコール、ジメチルホルムアミド、ジメ
チルスルホキシド、テトラヒドロフラン、メチレンクロ
リド、ジオキサンまたはアセトニトリルである。ついで
溶液をスプレードライヤーで噴霧乾燥すると微小粒子を
生成する。

【００３６】式Ｉのポリマーは既に述べた方法で単独ま
たはさもなければ式Ｉの種々のポリマーの混合物として
使用することができる。また、これらのポリマーは他の
生分解性および／または生適合性のポリマー（例えば^RP
luronic Ｆ６８、ＰＨＥＡ、デキストラン、ポリエチレ
ングリコール、ヒドロキシエチルスターチおよび分解可
能または排泄可能な多糖類）または生理学的に許容しう
る補助剤（例えばポリマー可塑剤）と混合物として使用
することができる。

【００３７】微小粒子は、ガス、例えば空気、窒素、貴
ガス、例えばヘリウム、ネオン、アルゴンまたはクリプ
トン、水素、二酸化炭素、酸素またはそれらの混合物を
含有している。微小粒子はガスで満たされ、例えば微小
粒子は凍結乾燥後または噴霧乾燥では適切なガス雰囲気
中に貯えられ、直接に好適なガス雰囲気で調製して得ら
れる。

【００３８】本発明による超音波造影剤は、投与する前
に一つまたはそれ以上の生理学的に許容しうるビヒクル
およびここで必要によってはさらに添加物および／また
は補助剤の添加によって適当な診断上または治療上の投
与形態に変換される。超音波造影剤は、例えば投与の前
に水を加えて懸濁させたり、混合されたりされる。

【００３９】粒子懸濁液の生理学的等張性は滲透圧活性
を有する物質、例えば塩化ナトリウム、ガラクトース、
グルコースまたはフラクトースの添加により組み立てら
れる。

【００４０】本発明による超音波造影剤調製のために記
載された方法では、粒子の９０％が０.１μmと１５μm
の間にある粒度を生ずる。噴霧乾燥方法を使用すると、
粒子の９０％が３μmより小さい粒度分布を得ることが
可能である。より大きい粒子は篩分け、例えば１５μm
篩用布および／または３μm篩用布によって除去するこ
とができる。これらの微小粒子が心臓血管疾患の診断の
ための超音波造影剤として使用される時、０.１μm〜７
μmの粒度が好適であると分ってきて、０.１μm〜３μm
の粒度が好ましく使用される。超音波造影剤は、例えば
注射され、血液循環される。微小粒子の０.１mg〜１０
００mg、好ましくは１mg〜１００mgが注射により、使用
される。

【００４１】上述した超音波造影剤は、診断上および治
療上の両方の処置として使用できる。本発明による超音
波造影剤の使用は、静脈投与後血液循環の右心室部にお
ける血流の視覚化のみに限定されない。超音波造影剤は
心臓の左側面と心筋層の研究にすぐれた成功を収めるこ
とができる。さらに血液供給の他の器官、例えば肝臓、
脾臓、子宮または脳をこれらの造影剤を使用して視覚化
することも可能である。

【００４２】しかしながら、本発明による超音波造影剤
は、また人間、動物または植物の内部にある空洞、例え
ば膀胱、尿管、子宮または膣の視覚化に対して好適であ
る。

【００４３】

【実施例】本発明を次の実施例で詳細に説明する。別記
しない限りパーセントは重量に関してである。

【００４４】〔実施例１〕ポリスクシンイミド−コ−
α,β−（ヒドロキシエチル）−Ｄ,Ｌ−アスパルタミド
の製造 ポリアンヒドロアスパラギン酸の１０ｇ（１０３mmol）
をＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）の約４０m1
に、もし必要ならば静かに温めながら溶解させる。この
溶液に新しく蒸留した２−アミノエタノールの１.８３
ｇ（３０mmol）を滴下して加え、室温で一晩撹拌する。
反応混合物をブタノールで沈殿させ、乾燥アセトンで数
回洗浄する。乾燥は真空で高温において行なわれる。白
色の水溶性の生成物がほぼ１００％の収率で得られ、Ｄ
ＭＦとブタノールの残留物についてはＮＭＲ分光分析法
によって測定される。使用されたアミノエタノールに対
するポリアンヒドロアスパルギン酸のモル比はほぼコポ
リマー組成物に対応している。

【００４５】〔実施例２〕ｎ−ブチル４−クロロ−４−
オキソブチレートの製造 過剰のチオニルクロリドとＤＭＦの１滴をモノブチルサ
クシネートに加える。反応がガスを発生して行なわれ
る。混合物を一夜水分を排除して撹拌状態にしておき、
続いて過剰のチオニルクロリドは大気圧下蒸留により除
去される。残留の粗製の生成物は０.０５mbar下分留さ
れ、約７０℃で純粋な生成物が得られる。ＩＲ分光分析
法による特性吸収は１８００cm^-1（酸クロリド）と１７
４０cm^-1（エステル）に等しい強度の吸収バンドを示し
ている。

【００４６】〔実施例３〕ポリスクシンイミド−コ−
α,β−（ブチロキシカルボニル−プロピオニロキシエ
チル）−Ｄ,Ｌ−アスパルタミド（７０：３０）の製造 実施例１において記載されたように調製されたポリスク
シンイミド−コ−α,β−（ヒドロキシエチル）−Ｄ,Ｌ
−アスパルタミドの６ｇ（＝ヒドロキシエチル基の１６
mmol）は乾燥Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）
の１００m1に溶解される。ピリジン４ｇ（５０mmol）を
添加し、続いて冷却して０℃にし、ｎ−ブチル４−クロ
ロ−４−オキソブチレート（実施例２参照）の４.８ｇ
（２５mmol）を１５分間にわたって撹拌しながら加え
る。混合物を一夜撹拌、エーテル０.５ｌで沈殿させ
る。沈殿をサクションで濾過し、エーテル、アセトン、
水、アセトンおよびエーテルで洗浄する。その結果、ほ
ぼ１００％程度に置換した白色のポリマー約８ｇ（ＮＭ
Ｒ分光分析法でチェックできる）を得る。得られたポリ
マーは、例えば微量のジメチルスルオキシド（ＤＭＳ
Ｏ）を有するアセトニトリル、ＤＭＳＯまたはＤＭＦに
可溶である。

【００４７】〔実施例４〕ポリスクシンイミド−コ−
α,β−（ノニルカルボニロキシ−エチル）−Ｄ,Ｌ−ア
スパルタミド（５０：５０）の製造 ポリアンヒドロアスパラギン酸（ＭＷ＝１４０００）と
２−アミノエタノール（モル比２：１）から実施例１に
類似した方法で調製されたポリスクシンイミド−コ−
α,β−（ヒドロキシエチル）−Ｄ,Ｌ−アスパルタミド
（５０：５０）（＝ヒドロキシル基の２４mmol）の６ｇ
を乾燥ＤＭＦの１００m1に溶解し、乾燥ピリジンの８ｇ
（１００m1）を加え、０℃に冷却する。蒸留したデカノ
イルクロリドの９.６ｇを徐々に滴下して加え、さらに
実施例３に類似した方法で操作を行なう。白色の完全に
置換したポリマー（ＮＭＲでチェック）の約８ｇが得ら
れ、これは可溶性であり、例えばジクロロメタンとＴＨ
Ｆに、いすれの場合も少量のＤＭＳＯ₃と一緒の場合に
またはメタノール／ジクロロメタン混合物に可溶性であ
る。

【００４８】〔実施例５〕いくつかのコポリマー組成と
種々の分子量を有するポリスクシンイミド−コ−α,β
−（ノニルカルボニロキシ−エチル）−Ｄ,Ｌ−アスパ
ルタミドの製造 実施例１と類似の方法で、種々のポリスクシンイミド−
コ−α,β−（ヒドロキシエチル）−Ｄ,Ｌ−アスパルタ
ミド、とりわけ組成７０：３０、５０：５０および３
０：７０が種々の分子量のポリアンヒドロアスパラギン
酸（ＭＷ＝７０００、約１３０００、３００００）から
調製され、実施例４に記載したようにデカノイルクロリ
ドと反応して対応するポリスクシンイミド−コ−α,β
−（ノニルカルボニロキシエチル）−Ｄ,Ｌ−アスパル
タミドを生成させる。

【００４９】ａ） ポリアンヒドロアスパラギン酸（Ｍ
Ｗ＝７０００）からポリスクシンイミド−コ−α,β−
（ノニルカルボニロキシエチル）−Ｄ,Ｌ−アスパルタ
ミド（７０：３０）；ＮＭＲにより特性決定 ｂ） ポリアンヒドロアスパラギン酸（ＭＷ＝１４００
０）からポリスクシンイミド−コ−α,β−（ノニルカ
ルボニロキシエチル）−Ｄ,Ｌ−アスパルタミド（７
０：３０）；ＮＭＲにより特性決定 ｃ） ポリアンヒドロアスパラギン酸（ＭＷ＝３０００
０）からポリスクシンイミド−コ−α,β−（ノニルカ
ルボニロキシエチル）−Ｄ,Ｌ−アスパルタミド（７
０：３０）；ＮＭＲで特性決定 ｄ） ポリアンヒドロアスパラギン酸（ＭＷ＝１２００
０）からポリスクシンイミド−コ−α,β−（ノニルカ
ルボニロキシエチル）−Ｄ,Ｌ−アスパルタミド（３
０：７０）；ＮＭＲで特性決定

【００５０】〔実施例６〕ポリスクシンイミド−コ−
α,β−（オクチロキシカルボニル−オキシエチル）−
Ｄ,Ｌ−アスパルタミド（７０：３０）の製造 実施例１に記載したようにポリアンヒドロアスパラギン
酸（ＭＷ＝３７０００）とアミノエタノールから調製さ
れたポリスクシンイミド−コ−α,β−（ヒドロキシエ
チル）−Ｄ,Ｌ−アスパルタミド（７０：３０）の６ｇ
（＝ヒドロキシエチル基の１６mmol）は実施例３に類似
した方法でオクチルクロロホルメートの４.８ｇ（２５m
mol）と反応させ、対応するように進めた。白色の完全
に置換したポリマーの約８ｇが得られ、これはＴＨＦま
たはメタノール／ジクロルメタン中に可溶性である。

【００５１】〔実施例７〕ポリスクシンイミド−コ−
α,β−（ノニルカルボニロキシ−エチル）−コ−α,β
−（ヒドロキシエチル）−Ｄ,Ｌ−アスパルタミド（６
０：２０：２０）の製造 実施例１に類似した方法でポリアンヒドロアスパラギン
酸と２−アミノエタノール（モル比６：４）から調製し
たポリスクシンイミド−コ−α,β−（ヒドロキシエチ
ル）−Ｄ,Ｌ−アスパルタミド（６０：４０）（＝ヒド
ロキシエチル基の２０mmol）の６ｇを実施例３と類似の
方法でデカノイルクロリドの２.３ｇ（＝１２mmol）と
反応させる。反応は不十分にしか進まなかったので（酸
クロリドの相対的に僅かの過剰）遊離のＯＨ基の僅か半
分がエステル化された。その結果約７ｇの白色ポリマー
が得られた。この微小粒子は水中でしっかりした稠度を
示し、容易に懸濁しうる。

【００５２】〔実施例８〕ポリスクシンイミド−コ−
α,β−（オレイロキシエチル）−Ｄ,Ｌ−アスパルタミ
ド（１０：９０）の製造 実施例１に類似した方法でポリアンヒドロアスパラギン
酸の２−アミノエタノールに対する１：９モル比で調製
されたポリスクシンイミド−コ−α,β−（ヒドロキシ
エチル）−Ｄ,Ｌ−アスパルタミド（１０：９０）（＝
ヒドロキシエチル基の４０mmol）の６ｇを実施例３に類
似の方法で蒸留したオレイルクロリドの２０ｇと反応さ
せる。不均一の反応混合物はジクロロメタンの添加で均
一となる。−２０℃に冷却されているメタノール中で２
度沈殿する。黄色に着色したポリマーは熱可塑性であ
る。

【００５３】〔実施例９〕 ａ） 微小粒子の調製 実施例４からのポリスクシンイミド−コ−α,β−（ノ
ニルカルボニロキシエチル）−Ｄ,Ｌ−アスパルタミド
（５０：５０）の４０mgを１m1のメチレンクロリド／メ
タノール（容積で５０／１の比率）に溶解する。この溶
液を撹拌しながら（８００rpm）０.１重量％の水性ポリ
ビニルアルコール溶液（Mowiol ２８〜９９）(これはメ
チレンクロリド／メタノール（５０／１）の０.３m1で
飽和されている）６０m1を含有するビーカー中に導入す
る。同時に、溶液をミキサー（２５,０００rpm）で細か
く分散する。５分後、内容物を水の２００m1を含有する
ビーカー中に注ぎ、３０分（２００rpm）撹拌する。上
澄水を傾瀉し去り、微小粒子は凍結乾燥される（凍結乾
燥後の直径は０.５〜１５μm）。

【００５４】〔実施例１０〕微小粒子の調製 実施例６からのポリスクシンイミド−コ−α,β−（オ
クチルカルボニロキシエチル）−Ｄ,Ｌ−アスパルタミ
ド（７０：３０）８０mgを５０℃で１m1のジメチルスル
ホキシドに溶解し、ヒドロキシプロピルセルローズ（Kl
ucel Ｍ）２０mgを加えた。この２つのポリマー溶液を
あらかじめ導入してあった液体窒素（１００m1）に注射
器の針（針の外径０.６mmの使い捨て注射器）を使用し
て滴下して加える。得られた微小粒子は２００m1の水中
に移し、２時間で残留溶媒から抽出される。過剰な水を
傾瀉し去り、微小粒子は凍結乾燥される（凍結乾燥後の
直径は１〜２μm）。

【００５５】〔実施例１１〕微小粒子の調製 ポリスクシンイミド−コ−α,β−（オクチロキシカル
ボニロキシエチル）−Ｄ,Ｌ−アスパルタミド(Ａ)（実
施例６）とポリスクシンイミド−コ−α,β−（ノニル
カルボニロキシエチル）−Ｄ,Ｌ−アスパルタミド(Ｂ)
（実施例５ｄ）の各々４ｇを表１に示した溶媒中の２％
溶液とされた。続いてポリマーは噴霧乾燥機中で噴霧さ
れて微小粒子が生成された（Buechi社、西ドイツによっ
て供給されたBuechi １９０ミニスプレードライヤ
ー）。

【００５６】

【表１】

【００５７】微小粒子の大きさの分布はCilas ７１５粒
度計で測定された。

【００５８】各々の場合において上記の如く調製された
微小粒子の３０mg部分が１.５m1の懸濁助剤中に分散さ
れた。懸濁助剤はデキストラン４０（Roth社、西ドイツ
から供給）１５０mg、ポリソルベート７.５mgおよび塩
化ナトリウム１３.５mgを蒸留水１.５m1中に溶解したも
のからなっている。懸濁液はスクリーン布を用いて濾過
され、続いて凍結乾燥される。投与する前に、微小粒子
は水中に懸濁される。

【００５９】〔実施例１２〕犬の超音波心臓検査 微小粒子の３０mg（実施例１１、物質Ｂで調製、ジクロ
メタン／メタノール２：３（容積）の溶液）はガラス棒
を用いて１.５m1の蒸留水中に再び懸濁化される。この
懸濁液は注射器を用いて静脈内に注射される。超音波装
置のエミッター（東芝、ＦＳＨ １６０ａ）は右および
左の心臓を通過する典型的な横断面図が得られるように
実験動物の胸部の上に保持される。超音波造影剤が心臓
の右半分に到達するとすぐに超音波装置の監視装置上に
造影剤によりラベルされた血液がどのようにして右心
房、ついで右心室に到達し、肺動脈を経由してまた心臓
を通り過ぎるかを見ることが可能である。肺を通過した
後、心臓の左半分は造影剤のおかげで見ることができ
る。超音波の造影（コントラスト）は肺通過の前後で同
じ強度であるので、ポリマー中の空気は要するに完全に
保持され、本質的に損失することなく微小粒子が心臓の
左半分に移送されていると仮定することができる。

フロントページの続き (72)発明者 フオルカー・クローネ ドイツ連邦共和国デー−6093フレールス ハイム．フリードリヒ−エ−ベルト−シ ユトラ−セ26 (72)発明者 ミヒヤエル・マーガーシユテト ドイツ連邦共和国デー−6238ホフハイ ム・アム・タウヌス．ラインガウシユト ラーセ19 (72)発明者 アクセル・ヴアルヒ ドイツ連邦共和国デー−6000フランクフ ルト・アム・マイン．ハンス−ザクス− シユトラーセ５ (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) A61K 49/00 A61K 31/785 A61P 9/00 ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ) ＣＡＰＬＵＳ（ＳＴＮ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ) ＥＭＢＡＳＥ（ＳＴＮ)

Claims (5)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 次の式（Ｉ） 【化１】 を有するポリアミノ−ジカルボン酸−コ−イミド誘導体
   とガスを含有する微小粒子からなる超音波造影剤。 （なお式中、ｎは１または２であり、ｘは１〜５００で
   あり、ｙは１〜５００であり、そしてｘ＋ｙは２〜１０
   ００であり、ＲはＯ−Ｒ¹またはＮＨ−Ｒ²であり、ここ
   でＲ²は水素、(ＣＨ₂)_m−ＯＲ¹、(ＣＨ₂)_m−Ｏ−Ｃ(Ｏ)
   −Ｒ¹または(ＣＨ₂)_m−Ｏ−Ｃ(Ｏ)−ＯＲ¹、ｍは２〜６
   であり、そしてＲ¹は水素、アリール、アラルキル、ア
   リールアルケニル、アルキルまたはＣ₃〜Ｃ₈−シクロア
   ルキルまたは生物学的に不活性なステロイドアルコール
   またはアミノ酸、ここでアリールは置換されていないか
   またはＣ₁〜Ｃ₄−アルキル、Ｃ₂〜Ｃ₄−アルケニル、Ｃ
   ₁〜Ｃ₄−アルキルカルボニルオキシ、Ｃ₁〜Ｃ₄−アルコ
   キシ−カルボニル、Ｃ₁〜Ｃ₄−アルコキシまたはヒドロ
   キシルで置換されているものとし、ここでＲ¹として明
   示されているアルキル基は１〜２２個の炭素原子を有
   し、アルケニル基は中断されていないかまたはカルボニ
   ルオキシまたはオキシカルボニル基により中断された２
   〜２２個の炭素原子を有し、ここで角括弧内の反復単位
   はポリマー中にランダムに分布しているかまたはブロッ
   クとして存在しており、ｘで示された反復単位とｙで示
   された反復単位との両者は同一であるかまたは異なった
   ものであり、そしてアミノ酸はα−および／またはβ−
   結合のものである）。
2. 【請求項２】 式ＩにおいてＲはＮＨ−Ｒ²であり、ｍ
   は２であり、Ｒ¹は水素、アリール、アラルキル、アル
   キルまたはＣ₅〜Ｃ₆−シクロアルキルであり、ここでア
   ルキル基は１〜２２個の炭素原子を有するものである請
   求項１記載の超音波造影剤。
3. 【請求項３】 式ＩにおいてＲはＯ−Ｒ¹であり、Ｒ¹は
   アリール、アラルキル、アルキルまたはＣ₅〜Ｃ₆−シク
   ロアルキルであり、ここでアルキル基が１〜２２個の炭
   素原子を有するものである請求項１記載の超音波造影
   剤。
4. 【請求項４】 微小粒子は空気、窒素、貴ガス、水素、
   二酸化炭素、酸素またはこれらのガスの混合物をガスと
   して含有する請求項１〜３のいずれかの項に記載の超音
   波造影剤。
5. 【請求項５】 ａ） 式Ｉのポリアミノ−ジカルボン酸
   −コ−イミド誘導体の一つまたはそれ以上の溶液、また
   はこの誘導体またはこれらの誘導体の溶液であって追加
   的に一つまたはそれ以上の他のポリマーを含有するも
   の、および／または生理学的に許容しうる補助剤を含有
   するもの、を噴霧乾燥するか、またはｂ） 高い融点を
   有する一つの溶媒または溶媒混合物中に溶解される式Ｉ
   の一つまたはそれ以上のポリアミノ−ジカルボン酸−コ
   −イミド誘導体、またはこれらの誘導体が一つまたそれ
   以上の他のポリマーおよび／または生理学的に許容しう
   る補助剤と混合され、そして高い融点を有する溶剤混合
   物に溶解され、ついで凝縮した冷ガスに滴下して加え、
   次いで溶媒は除去されるか、またはｃ） 式Ｉの一つま
   たはそれ以上のポリアミノ−ジカルボン酸−コ−イミド
   誘導体が溶媒または溶媒混合物中に溶解され次いで、必
   要な場合に別の溶媒および／または一つまたはそれ以上
   の他のポリマーを添加し、水中に沈殿または分散され、
   得られた懸濁液は溶媒を含まないものとされることから
   なる請求項１記載の超音波造影剤の製造法。