JPH0416465B2

JPH0416465B2 -

Info

Publication number: JPH0416465B2
Application number: JP58068850A
Authority: JP
Inventors: Yasushi Arano; Yasuhiro Magata; Akira Yokoyama
Original assignee: Nihon Medi Physics Co Ltd
Current assignee: Nihon Medi Physics Co Ltd
Priority date: 1983-04-19
Filing date: 1983-04-19
Publication date: 1992-03-24
Also published as: JPS59193870A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、一般式（式中ｎは０〜４の整数、Ｒは炭素数１〜３の
アルキル基を表す）で表される、分子中にキレー
ト形成基とカルボン酸を有する新規な二官能配位
子化合物に関し、また該化合物の製造方法に関す
るものである。本発明の化合物は文献未載の新規化合物であ
り、したがつてその製造方法に関しても全く報告
を見ないものである。また、本発明に係る新規な
化合物はその用途の面から特定臓器の描出、特定
疾患の検出および生理活性化合物を動態検査など
を目的とした核医学的用途に有用な、安定な放射
性金属標識つき放射性診断剤の製造に有用な化合
物である。特定臓器の描出、特定疾患の検出および動態検
査などを目的とした非侵襲的核医学診断のため
に、従来、ヨード−131で標識された生理活性化
合物が汎用されて来た。例えば、血液循環系の描
出および動態検査に用いられるヨード−131標識
人血清アルブミン、血栓の検出を目的としたヨー
ド−131標識フイブリノーゲンなどが挙げられる。
しかしながら、ヨード−131は、半減期が約８日
と長く、かつ、核医学診断に有用なガンマ線の他
にベータ線を放出するため、被検車に多量の放射
線被曝を与える欠点があることが指摘されてい
る。核医学診断に、より適した物理的特性を有する
放射性金属を、他の方法により生理活性化合物に
導入し、有用な放射性診断剤を得ようとする試み
が続けられている。すなわち、キレート結合の形
成を期待して、生理活性化合物に直接、放射性金
属塩を作用させておこなう標識法である。例え
ば、人血清アルブミンに適当な還元剤の存在下
に、過テクネチウム酸塩の形でテクネチウム−99
ｍを含む水溶液を作用させて、テクネチウム−99
ｍ標識人血清アルブミンを得る方法、ブレオマイ
シンに塩化インジウムの形でインジウム−111を
含む水溶液を作用させて、インジウム−111標識
ブレオマイシンを得る方法などがこれにあたる。
しかしながら、これら、標識されるべき生理活性
化合物のキレート形成性は、必ずしも大きくな
く、前記のテクネチウム−99ｍ標識人血清アルブ
ミン、インジウム−111標識ブレオマイシンの場
合においても、体内投与後の安定性が低く、放射
能の体内挙動が、生理活性化合物の挙動と一致せ
ず、核医学診断を目的とする用途において、満足
するべきものではないことが指摘されてきた。ここで言う生理活性化合物とは、特定臓器また
は特性疾患部位に特異な集積性を示し、または、
生体内における生理的な諸状態に対応した特異な
動態をとるような化合物を指すものでり、その体
内挙動を追跡することにより、各種の診断に有用
な情報を提供することが期待されるような化合物
である。例示すると、人血清アルブミン、ウロキ
ナーゼの如きタンパク、ブレオマイシン、カナマ
イシンの如き抗生物質、ホルモン類、糖類、脂肪
酸およびそれらの誘導体が挙げられる。このよう
な生理活性化合物に、優れた物理的特性を有する
放射性金属を安定に、しかも該生理活性化合物の
生理活性をそこなうことなく導入することができ
れば、核医学診断において、極めて有用な用途が
期待され、核医学界においてそのような放射性診
断剤の出現が強く要望されているところである。本発明者らは、上記の要望に応えるべく、分子
中に、１核医学診断に適した物理的特性を有する放射
性金属と安定なキレートを形成するキレート形
成基，２各種生理活性化合物と、その活性を失うこと
なく温和な条件下で簡便に、より安定な結合を
形成するカルボキシル基，を有する化合物に着目し、鋭意研究を進め、３−
オキソブチラールビス（Ｎ−メチルチオセミカル
バゾン）カルボン酸が上記の２項を満足する化合
物であることを見い出した（特開昭56−34664）。今回、発明者らは以下の観点からさらに研究を
進めた。１二官能配位子化合物を導入される生理活性化
合物と二官能配位子化合物の配位部位との相互
作用を可能な限りおさえ、該生理活性化合物の
活性を保持する。２より簡便な方法により得られる二官能配位子
化合物の追求。その結果、本発明の一連の化合物が上記の２項
を満足する化合物であり、さらに本発明の化合物
を用い、各種生理活性化合物に放射性金属を標識
した放射性診断剤が、前述の核医学診断剤として
の要望をも満足するものであることを見い出し
た。１例として、以下に本発明の新規化合物を用い
て得られたテクネチウム−99ｍ標識人血清アルブ
ミン誘導体の有用性を示す。本発明の化合物のうちｎ＝２，Ｒ＝メチルの化
合物を、タンパクの化学修飾法として通常用いら
れるアジド法で人血清アルブミンと作用させて得
られた人血清アルブミン誘導体は、第一スズ塩の
存在下に過テクネチウム酸塩−Tc−99ｍ水溶液
を接触させるという非常に簡便な方法により、極
めて安定なテクネチウム−99ｍ標識人血清アルブ
ミン誘導体を与え、しかも、この標識誘導体の電
気泳動上の挙動は、人血清アルブミンの挙動と全
く同じであつた。このテクネチウム−99mm標識人
血清アルブミン誘導体をマウスの尾静脈内に投与
し、その血中濃度の経時変化を、従来法で得られ
るテクネチウム−99ｍ標識人血清アルブミンおよ
びヨード−131標識人血清アルブミンのそれと比
較した。本発明の化合物を用いて得られたテクネ
チウム−99ｍ標識人血清アルブミン誘導体は従来
法で得られるテクネチウム−99ｍ標識人血清アル
ブミンに比して高い初期血中濃度を示し、かつ、
この血中濃度は長時間にわたつて維持されること
を確認した。また、ヨード−131標識人血清アル
ブミンと同様の血中濃度及び長時間の血中保持率
を示すことを確認した。表１及び図１にマウスに
おける血中濃度の推移を示す。

【表】

【表】以上の結果より、本発明の化合物を用いて得ら
れたテクネチウム−99ｍ標識人血清アルブミン誘
導体の高い体内安定性が証明されると共に、血液
循環系の描出、動態検査および定量的測定を目的
とする核医学診断の用途に極めて適したものであ
ることが示された。次に本発明の化合物の製造法について述べる。本発明の化合物は下記の反応式で示すように、
ｐ−アセチルフエニルカルボン酸誘導体をセレン
酸化することによつて得られたｐ−グリオキサル
フエニルアルキルカルボン酸誘導体を単離するこ
となく、その誘導体にチオセミカルバジドもしく
はそのＮ−アルキル誘導体の酸性触媒下で縮合さ
せることにより実質的に一段階の反応で簡便に得
ることができる。（式中のｎは０〜４の整数、Ｒは炭素数１〜３
のアルキル基を表す）以下に実施例を示し、本発明を更に具体的に説
明する。実施例１ｐ−グリオキサルフエニル酢酸ビス（Ｎ−メチ
ルチオセミカルバゾン）の製造ｐ−アセチルフエニル酢酸1.78ｇをジオキサン
30mlに溶解し、二酸化セレン1.22ｇを加え７時間
還流した。反応終了後ジオキサンを留去した後、
残渣をエタノール25mlに溶解し、活性炭を加え脱
色した後、濾過し、二酸化セレンを除去した。この瀘液を、別に60℃に加熱したＮ−メチルチ
オセミカルバジド2.1ｇを含む1N塩酸15ml中に滴
下することにより、生成する結晶を濾取した。こ
の粗成品を活性炭を含む60％エタノールより再結
晶することにより目的とするｐ−グリオキサルフ
エニル酢酸ビス（Ｎ−メチルチオセミカルバゾ
ン）1.10ｇを得た。融点：223〜224℃ 元素分析：C₁₄H₁₈N₆O₂S₂（MW＝366.45）ＣＨＮ実測値 45.78 5.37 22.11 計算値 45.89 4.95 22.93 薄層クロマトグラフイー保持層：シリカゲル溶媒：クロロホルム：アセトン：酢酸＝90：10：
１ Rf：0.34 実施例２ｐ−グリオキサルフエニルプロピオン酸ビス
（Ｎ−メチルチオセミカルバゾン）の製造ｐ−アセチルフエニルプロピオン酸1.92ｇをジ
オキサン30mlに溶解し二酸化セレン1.22ｇを加
え、６時間還流後、一夜室温で放置した。反応終
了後ジオキサンを留去した後残渣をエタノール20
mlに溶解し、活性炭を加えた後濾過し二酸化セレ
ンを除去した。この濾液を、別に60℃に加熱したＮ−メチルチ
オセミカルバジド2.1ｇを含む1N塩酸15mlに滴下
し、生成する結晶を濾別した。この粗結晶を活性
炭を含む60％エタノールより再結晶することによ
り目的とするｐ−グリオキサルフエニルプロピオ
ン酸ビス（Ｎ−メチルチオセミカルバゾン）1.14
ｇを得た。融点：216〜217℃ 元素分析：C₁₅H₂₀N₆O₂S₂（MW＝380.49）ＣＨＮ実測値 47.30 5.48 22.27 計算値 47.35 5.30 22.09 薄層クロマトグラフイー保持層：シリカゲル溶媒：クロロホルム：アセトン：酢酸＝90：10：
１ Rf：0.36 実施例３ｐ−グリオキサルフエニル酪酸ビス（Ｎ−メチ
ルチオセミカルバゾン）の製造ｐ−アセチルフエニル酪酸2.06ｇをジオキサン
30mlに溶解し、二酸化セレン1.22ｇを加え５時間
還流した。反応終了後ジオキサンを留去した後残
渣をエタノール20mlに溶解し、活性炭を加えた後
濾過し二酸化セレンを除去した。この濾液を、別に60℃に加熱したＮ−メチルチ
オセミカルバジド2.31ｇを含む1N塩酸15mlに滴
下し、生成する結晶を濾別した。この粗結晶を活
性炭を含む60％エタノールより再結晶することに
より目的とするｐ−グリオキサルフエニル酪酸ビ
ス（Ｎ−メチルチオセミカルバゾン）を1.20ｇを
得た。融点：208〜209℃ 元素分析：C₁₆H₂₂N₆O₂S₂（MW＝394.52）ＣＨＮ実測値 48.70 5.56 21.22 計算値 48.71 5.62 21.30 薄層クロマトグラフイー保持層：シリカゲル溶媒：クロロホルム：アセトン：酢酸＝90：10：
１ Rf：0.45 実施例４ｐ−グリオキサルフエニル吉草酸ビス（Ｎ−メ
チルチオセミカルバゾン）の製造ｐ−アセチルフエニル吉草酸3.3ｇをジオキサ
ン50mlに溶解し、二酸化セレン1.83ｇを加えた
後、3.0時間還流した。反応終了後、二酸化セレ
ンを濾別し、瀘液を減圧濃縮した。残渣をメタノ
ールに溶解し活性炭を加え脱色した。濾過後、この濾液を、別に60℃に加熱したＮ−
メチルチオセミカルバジド2.1ｇを含む1N塩酸15
mlに滴下し、生成する結晶を濾別した。この粗結
晶を活性炭を含む60％エタノールより再結晶する
ことにより目的とするｐ−グリオキサルフエニル
吉草酸ビス（Ｎ−メチルチオセミカルバゾン）
1.84ｇを得た。融点：195〜197℃ 元素分析：C₁₇H₂₄N₆O₂S₂（MW＝408.54）ＣＨＮ実測値 49.83 5.76 20.42 計算値 49.98 5.92 20.57 薄層クロマトグラフイー保持層：シリカゲル溶媒：クロロホルム：アセトン：酢酸＝90：10：
１ Rf：0.45 実施例５ｐ−グリオキサルフエニルプロピオン酸ビス
（Ｎ−メチルチオセミカルバゾン）を人血清ア
ルブミンに結合させて形成する化合物を含む非
放射性組成物の製造氷浴上、人血清アルブミン（凍結乾燥品）170
mgをPH9.5の0.01Mホウ酸緩衝液10mlに溶解する。
この溶液をＡ液とする。別に、氷浴上、ｐ−グリ
オキサルフエニルプロピオン酸ビス（Ｎ−メチル
チオセミカルバゾン）19.0mgをジメチルホルムア
ミド0.5mlに溶解する。この溶液にトリエチルア
ミン7μ，ジフエニルリン酸アジド11.86μを順
次加え、氷浴上、約１時間撹拌した。この溶液を
Ｂ液とする。氷浴上、Ａ液にＢ液の全量を加え、
約１時間撹拌反応した。この反応混合物を通常の
透析チユーブに入れ、PH5.0，イオン強度0.025の
酢酸緩衝液に対して約24時間透析した後、遠心分
離により（10000rpm、30分間）固型成分を沈澱
させた。この遠心上清をDEAEセフアロースカム
ラ（5φ×30cmカムラ）に添加し、PH5.0、イオン
強度0.025の酢酸緩衝液でカラムを洗浄した。こ
の後、PH4.65、イオン強度0.025の酢酸緩衝液を
カラムに流し、その溶出液を人血清アルブミンと
して10mg／mlになるように液量を調整し、１mlず
つ内部を窒素置換したバイアルに充填し、凍結乾
燥して目的とする非放射性組成物を得た。以上の
操作はすべて無菌的に行つた。本実施例により得られた非放射性組成物は、白
色の綿状の結晶であり、水を加えて溶解すると
き、ごく薄い淡黄色の澄明な液を与える。実施例６テクネチウム−99ｍ標識つき放射性診断剤の製
造実施例５の方法によつて得た非放射性組成物を
PH3.4の酢酸緩衝液１mlに溶解し、これに塩化第
一スズとして7μｇに相当する第一スズイオンを
吸着した陽イオン交換樹脂（３mg）を加え、つい
で過テクネチウム酸ナトリウムの形でテクネチウ
ム−99ｍ1.0ｍCiを含む生理食塩水溶液1.0mlを加
え、15分間撹拌した。この溶液を室温で３時間以
上放置した後、孔径0.22μｍのメンブレンフイル
ターを通すことにより、目的とするテクネチウム
−99ｍ標識つき放射性診断剤を得た。本実施例で得られたテクネチウム−99ｍ標識つ
き放射性診断剤は、ごく薄い淡黄色の澄明な液で
あり、PHは約3.4である。実施例７テクネチウム−99ｍ標識つき放射性診断剤の性
質実施例６の方法で製造されたテクネチウム−99
ｍ標識つき放射性診断剤の標識率を調べるため、
シリカゲルを保持層とし、ｎ−ブタノール：酢
酸：水＝４：１：１の混合溶媒を展開溶媒とする
薄層クロマトグラフイーを行い、ラジオクロマト
スキヤナーで走査した。この時、放射能は原点に
単一なピークとして描出され、遊離の過テクネチ
ウム酸イオンに相当する放射能ピーク（Rf＝0.8）
など放射性夾雑物の存在を認めなかつた。次いで、ベロナール緩衝液（PH8.6，イオン強
度0.07）を展開液とし、セルロースアセテートを
泳動膜（膜巾２cm）とする電気泳動（500V，15
分）を行つた後、ラジオクロマトスキヤナーで走
査した。放射能の位置は、原線から正側に0.8cm
の位置に単一ピークとして認め、かつ、この放射
能ピークの位置は、ポンソー3Rによる人血清ア
ルブミンの発色バンドと一致した。上記の結果から、本発明の方法で製造されたテ
クネチウム−99ｍ標識つき放射性診断剤の標識率
は、ほぼ100％であり、かつ、その電荷状態につ
いても人血清アルブミンと差異を認めなかつた。実施例８テクネチウム−99ｍ標識つき放射性診断剤の動
物体内分布実施例６の方法で製造されたテクネチウム−99
ｍ標識つき放射性診断剤の各々0.05mlずつをと
り、複数のDDY系雄マウスの尾静脈に投与し、
血中濃度および体内分布の経時変化を調べた。結
果を表１に示す。また、実施例６で得られた放射性診断剤に関す
る血中濃度と胃中放射能の経時変化を図１に、他
法によつて得られた結果と比較して示した。

【表】以上の結果より、本発明の化合物を用いて得ら
れたテクネチウム−99ｍ標識人血清アルブミン誘
導体の高い体内安定性が証明されると共に、血液
循環系の描出、動態検査および定量的測定を目的
とする核医学診断の用途に極めて適したものであ
ることが示された。以上の実施例を示して本発明を説明してきた
が、当業者は、これらの実施例が本発明を例示す
るために意図されたものであり、その範囲をなん
ら制限するものでないことを理解すべきである。

【図面の簡単な説明】

第１図は、実施例６で得られたテクネチウム−
99ｍ標識人血清アルブミン、テクネチウム−99ｍ
で直接的に標識されたテクネチウム−99ｍ標識人
血清アルブミン（市販の調製用キツトを使用）及
びヨード−131で標識されたヨード−131標識人血
清アルブミン（市販品を使用）についてのマウス
における血中濃度と胃中放射能の経時変化を示す
グラフである。横軸：投与後の経過時間（分）たて軸：投与総放射能に対する単位重量当りの分
布率（％／ｇ） ○：本発明の化合物を用いて得られたテクネチウ
ム−99ｍ標識人血清アルブミンのマウス血中濃
度（％／ｇ）。 △：テクネチウム−99ｍで直接的に標識されたテ
クネチウム−99ｍ標識人血清アルブミン（市販
の調製用キツトを使用）のマウス血中濃度
（％／ｇ）。 □：ヨード−131で標識されたヨード−131標識人
血清アルブミン（市販品を使用）のマウス血中
濃度（％／ｇ）。 ●：本発明の化合物を用いて得られたテクネチウ
ム−99ｍ標識人血清アルブミンのマウス胃中放
射能濃度（％／ｇ）。 ▲：テクネチウム−99ｍで直接的に標識されたテ
クネチウム−99ｍ標識人血清アルブミン（市販
の調製用キツトを使用）のマウス胃中放射能濃
度（％／ｇ）。 ■：ヨード−131で標識されたヨード−131標識人
血清アルブミン（市販品を使用）のマウス胃中
放射能濃度（％／ｇ）。

Claims

【特許請求の範囲】１一般式（式中ｎは０〜４の整数、Ｒは炭素数１〜３の
アルキル基を表す。）で示されるｐ−グリオキサ
ルフエニルアルキルカルボン酸ビス（チオセミカ
ルバゾン）誘導体。