JPH0388802A - ヒアルロン酸のｎ―アシル尿素及びｏ―アシルイソ尿素誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〈産業上の利用分野〉 本発明は、ヒアルロン酸又はその塩のＮ−アシル尿素及
び０−アシルイソ尿素誘導体に関する。

〈従来の技術〉 Ｎ−アシル尿素及び０−アシルイソ尿素は、カルボン酸
とカルボジイミドとの反応によって製造することができ
る化合物の公知のクラスである；たとえばテトラヘドロ
ンリポートＲＩＯ１，テトラヘドロン第３７巻、　第２
４８−２８２頁（ペルガモンプレス社。

１９８１年）。

Ｂｉｏｃｈｉｓｉｃａ　ｅｔ、　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ
　Ａｃｔａ、　５７Ｂ＋第２８１−２８９頁（１９７９
）中でチンプラト（Ｔｅｎｇｂｌａｄ）は１部分的に消
化されるヒアルロン酸ナトリウム（分子量５２．０００
）を臭化シアンで活性化されたアガロースにカルボジイ
ミドを用いてカップリングして、前もって混合された反
応成分のカップリングを行うと報告した。固定化ヒアル
ロン酸トをアフィニティークロマトグラフィー表面とし
て使用する。

シルバー（Ｓｉｌｖｅｒ）等による米国特許第４．７０
３．１０８号明細書には、可溶性又は不溶性コラーゲン
をカルボジイミドで、　“ヒアルロナート”□これはそ
れ以上記載されていない−の存在下に架橋することが開
示されている。その生成物は、化合物（ヒアルロナート
）で含浸されたコラーゲンマトリックスとして記載され
ている。この文献から。

ヒアルロナートとカルボシイごドとの反応は示唆されな
い、というのはヒアルロナートは、コラーゲンマトリッ
クスから脱離するために自由な状態のままであるからで
ある。しかしヤナス（Ｙａｎｎａｓ）等による米国特許
第４，２８０．９５４号明細書には、カルボジイミドが
特にコラーゲンをヒアルロン酸に架橋結合するカップリ
ング剤として提案されている。生じる不溶性複合体は、
＠乳類に内移植するための補綴器具として有用であると
述べられている。そこには実施例がなく、生成物及びそ
の製造方法について推測するしかない。

〈発明が解決しようとする課題〉 本発明のＮ−アシル尿素及び０−アシルイソ尿素は。

制御された状態で薬学的に有効な薬剤を放出する。

薬学的に有効な医薬品又は薬剤組成物の製造に有用な中
間体である。

治療用医薬品は、適切な薬学的に妥当な担体との混合物
の形でほとんど専ら哺乳類に投与され。

治療上の処置を受ける哺乳類の腸管、皮下、関節内及び
（又は）血流中に放出する。予定された投薬量を、工夫
された時間表に従って投与し、薬剤の最小血中又は組織
濃度を維持する。投与のこの処置の欠点は、薬剤濃度レ
ベルが最初の投与後高く、最初の投与のしばらく後は低
いということである。結果として薬剤濃度のいわゆる“
頂点と谷”側面が生じる。これはたとえばインスリンの
皮下投与でしばしば望まれない。

薬剤投与の上記方法に関する他の問題は、＠乳類組織に
くまなく薬剤が体系的に分散することである。理想とし
ては、薬剤がこれを特徴とする特異的部位を、たとえば
関節内を、たとえば胃内顔中で体系的に現われるＭｉ織
濃度なしに、標的にすることである。

治療用薬剤の通常の投与に関係する上記欠点を取り除く
ために、治療用薬剤の放出を導く及び調節する別の方法
が捜し求められていた。種々の方法９組成、及び適用域
を用いる薬剤の調節された放出に関してポリマー製剤を
使用することに努力が払われていた；たとえば″調節さ
れた放出ポリマー製剤”、　　Ｄ、Ｒ，ボール（Ｐａｕ
ｌ）及びＦ、Ｗ、ハリス（Ｈａｒｒｉｓ）　ｍ集、アメ
リカ化学協会、ワシントン。

Ｄ、Ｃ，１０７６年参照。

薬剤のポリマー担体を、その薬学的容認性に関して選ば
ねばならない、すなわち使用される量°で非−毒性でな
ければならず、治療用薬剤と適合して運ばれ、生物侵食
によっては又は異化作用によって除去されねばならない
。生物侵食性担体又はポリマーは、一般に治療用薬剤を
放出する。というのはポリマー担体は、物理的処理を経
たその場の環境、たとえば溶解によって又は化学的処理
。

たとえばポリマー骨格又は架橋の加水分解によって又は
酵素分解によって侵食除去されるからである。この様な
ポリマーを、医薬適用内で薬理学的に有効な薬剤の供給
に使用する場合、ポリマーそれ自体は非毒性である及び
ポリマーが体液によって侵食されるので、ポリマーは非
毒性分解生成物に分解されることが必要である。しかし
多くの合成生物侵食可能なポリマーは、生体内で侵食さ
れてオリゴマー及び七ツマ−を生じ、これはしばしば周
囲のｍ織と有害に接触する（Ｄ、Ｆ、ウィリアムス（Ｗ
ｉｌｌｉａｎ＋ｓ）、　Ｊ、マーク−（Ｍａ　ｔｅｒ）
。

Ｓｃｉ、１７　：　１２３３（１９８２））　、完全な
ポリマー担体及びその分解生成物の毒性を最小にするた
めに、ポリマーは自然に生じる物質代謝に基づいて考え
られている。恐らくこの様なポリマーの最も広く研究さ
れた例は、乳酸又はグリコール酸から導かれたポリエス
テルである（Ｈ，ラウフマン（Ｌａｕｆｍａｎ）等。

Ｓｕｒｇ、　Ｇｙｎｅｃｏｌ、　０ｂｓｔｅｔ、　１４
５　：　５９７（１９７７）；　Ｄ、Ｌ。

ワイズ（Ｗｉｓｅ）等、“生物学及び医学に於ける薬剤
を具体”　（Ｇ、　Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ）出版）。

アカデミツクプレス、ロンドン、　１９７９年、第２３
７−２７０頁〕及びアミノ酸から導かれたポリアミドで
あるＣＤ、Ａ、ウッド（Ｗｏｏｄ）、　Ｉｎｔ、　Ｊ、
　Ｐｈｏｒｍ、　７　：　１　（１９８０）；　Ｓ、ヨ
ールス（Ｙｏｌｌｅｓ）等、“調節された放出工学：方
法。

理論、及び適用”、　Ａ、Ｆ、キドニー（Ｋｙｄｏｎ　
１ｅｓ）　。

Ｃ，Ｒ，Ｃ，プレス出版、ボカラートン（Ｂｏｃａ　Ｒ
ａｔｏｎ）。

ブロリダ、　１９８０．第１頁−第６頁〕、不幸にも多
くのこれらの生物侵食可能なポリマーは均一に侵食され
（塊状侵食）、これは結果として好ましくない放出速度
によって治療用薬剤の未調節の及び予測されない放出を
生じる。放出速度は、一般にポリマー担体が雑多に、す
なわち塊状分解よりむしろ表面侵食によって、侵食され
るのに十分に疎水性である場合にしか改良されない、〔
Ｊ、ヘラ−（Ｈｅｌ　Ｉｅｒ）　＋　　“調節された放
出の医学通用”（Ｒ，Ｓ、ランガー（Ｌａｎｇｅｒ）及
びり、Ｌ、ワイズ（Ｗｉｓｅ））、　Ｃ，Ｒ，Ｃ。

プレス出版、ボカラートン、フロリダ、　１９８５年〕
。

不幸なことに次の様な疎水性ポリマー組成物を製造する
のは困難である：その組成物は表面侵食によって分解し
、それ自体アレルギー又は毒性を有さす所望の放出速度
を提供するか又は分解してアレルギー性又は毒性分解生
成物になる。この様な疎水性ポリマーは、求められる目
的を残したままである。

く課題を解決するための手段〉 本発明のＮ−アシル尿素及びＯ−アシルイソ尿素化合物
及び組成物の特定の実施態様は、親水性、水溶性ヒアル
ロン酸分子の変性を示す。その変性は。

分子全体の疎水性水不溶性物質への変化なしにヒアルロ
ン酸分子に疎水性領域を入れることからなる。この方法
で水溶性は保たれるが、上記疎水性の利点が得られる。

ヒアルロン酸の低い加水分解安定性を、疎水性領域のポ
リマー鎖への添加によって増加する。使用に際して疎水
性変性された領域は９弱い非−結合の相互作用によって
親油性薬剤を結合する。それによって水溶性の、変性さ
れたヒアルロン酸−薬剤組合せの投与部位から薬剤の拡
散が遅れる。変性されたヒアルロン酸は、投与の部位に
残り、拡散及び通常の酵素処理による分解によって安全
にかつ毒性又は所望されない残留物を生ずることなく徐
々に除去される。

本発明の他の具体的化合物及び組成物に於て。

ヒアルロン酸の隣接分子を架橋結合して、生成物の水溶
性を低下させる。低溶解性組成物は一部有用である。と
いうのは、以下に更に十分に議論する様にこれらが雑多
に“侵食”する傾向があるからである。この特徴は、上
記治療剤の非調節の及び予想されない放出を、薬剤供給
に対する従来の手段に関して少なくとも一部解決するこ
とである。

ヒアルロン酸分子の種々の変性は２分子を共有結合する
方法を治療用薬剤に提供することができるか又はこの水
溶性分子とアニオン性、カチオン性又は疎水性薬剤との
間の非共有結合又は相互作用を増大することができる。

本発明は、ヒアルロン酸又はその塩のＮ−アシル尿素及
びＯ−アシルイソ尿素誘導体並びにこれを治療用薬剤混
合物及び組成物の製造に於ける中間体組成物として使用
することから成る。

本発明の特定の具体的組成物は、生体材料として、すな
わちガラス体代用品、関節クツション。

傷癒合の補助剤及び類似器具として有用である。

他の具体的組成物は、バイオメゾカルリサーチの分野で
、たとえばヒアルロン酸のラジオ−及びフルオレラセン
−標識に有用である。

ヒアルロン酸はよく知られており、グルクロン酸とＮ−
アセチルゲルコサくンのくり返しジサッカライド単位か
ら成る水溶性ポリサッカライドを天然に生じる。ヒアル
ロン酸又はその塩のジサッカライド単位を下記式によっ
て表わす： （式中Ａｃはアセタートを示し、Ｒは水素（酸の場合）
又は塩のカチオン（塩の場合）を示す。）。

カチオンはアルカリ金属カチオンが好ましく、最も好ま
しくはナトリウムイオンである。便宜上及び略して、上
記式（１）を以下に同等の式ＯＯＲ 一一−Ｂ−トー−ｃ　ｎ　＞ （式中Ｒは上述の意味を有し、Ｂの意味は明らかである
。） によって時々表わす。ポリマーは親水性である。

市販のヒアルロン酸及びその塩（特に生理学的に妥当な
塩、たとえばナトリウム塩）の製造方法は、よく知られ
ている。

本発明の０−アシル尿素及びＯ−アシルイソ尿素化合物
の製造に使用するにあたり、任意の公知のヒアルロン酸
組威物又はその塩及びオリゴサツカライド又はヒアルロ
ン酸の物理的、化学的又は酵素処理によって得られる生
成物を使用する。これらの出発ポリマーは一般に式（Ｉ
Ｉ）の単位“ｎ”個を有するので、ポリマーは約１００
，０００〜約１２．０００，０００ダルトンの重量平均
分子量に（Ｍｗ）を有する（ラウレント（Ｌａｕｒｅｎ
　ｔ）等＋　Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａｅｔ　Ｂｉｏｐｌｒ
ｙｓｉｃｓ　Ａｃｔａ、、　４２　：　４７６−４８５
　（１９６０）の方程式を用いて固有粘度数から算出し
て決定）。

本発明のＮ−アシル尿素及び０−アシル尿素化合物を、
有効なプロトンの存在下にヒアルロン酸又はその塩とカ
ルボジイミド又はビスカルボシイ【ドとの反応によって
製造する。この反応条件は、よく知られており　（上記
テトラヘドロンリポートＲ１０１参照）かつ第一段階で
カルボシイ旦ド又はビスカルボジイミドのプロトン化か
ら成る。酸アニオンは、形成されたカチオンの炭素原子
を攻撃し。

０−アシルイソ尿素中間体の形成をもたらす。この中間
体中のアシル基は、酸素原子から窒素原子に移動し、ヒ
アルロン酸又はその塩のＮ−アシル尿素誘導体が得られ
る。一般に０．、、、Ｎ移動は不完全であり、Ｎ−アシ
ル尿素と０−アシルイソ尿素の反応生成物混合物を生じ
る。混合された生成物を別々に又は−緒に使用して２本
発明の薬学的に有効な薬剤組成物を製造する。

反応を、極めて簡単な式によって図式化して示す： ＯＯＲ ＩＮ　−Ｒ’ ＨＮ　−Ｒ” →Ｂ＋−一 及び（又は） →Ｂ＋ 一一−Ｂ　→−−− 一一二Ｂ→−一 アシル尿素 （Ｖｌ） Ｎ−アシル尿素 （■） （式中Ｒ 及びＢ は。

上述の意味を有する。） 化合物（Ｉ［［）は、カルボジイミド化合物の代表的な
ものであり　Ｒ１及びＲ２は相互に独立して水素。

ヒドロカルビル、置換されたヒドロカルビル、アルコキ
シ、アリールオキシ、アルカリールオキシ等から成る群
より選ばれる。

ここで使用される“ヒドロカルビル”なる言葉は、親の
炭化水素から水素原子を除去して得られる一価の部分を
意味する。ヒドロカルビルの代表例はＣ−原子数１〜２
５のアルキル、たとえばメチル。

エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル。

ヘプチル８オクチル、ノニル、ウンデシル、デシル、ド
デシル、オクタデシル、ツノデシル、アイニシル、ヘネ
イコシル、トコシル、トリツクル。

テトラコシル、ベンタコシル及びその異性体形；Ｃ−原
子数６〜２５のアリール、たとえばフェニル。

トリル、キシリル、ナフチルビフェニル、テトラフェニ
ル等；Ｃ−原子数７〜２５のアラルキル、たとえばベン
ジル、フェネチル、フェンプロピル、フェンブチル、フ
ェンヘキシル、ナフトオクチル等々；Ｃ−原子数３〜８
のシクロアルキル、たとえばシクロプロピル、シクロブ
チル、シクロペンチル。

シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル等；
Ｃ−原子数２〜２５のアルケニル、たとえばビニル、ア
リル、フチニル、ペンテニル、ヘキセニル、オクテニル
、ノネニル、デセニル、ウンデセニル、ドデセニル、ト
リデセニル、ペンタデセニル、オクタデセニル、ペンタ
コシニル及びその異性体である。ヒドロカルビルは、Ｃ
−原子数６〜１４を有するのが好ましい。

ここで使用される“置換されたヒドロカルピノ１なる言
葉は、前述のヒドロカルビル部分を示し。

これ中で水素原子１又は数個が生成物誘導体の所望の製
造に不都合な影響を及ぼさない化学基と置き換えられて
いる。この様な基の代表例は、ア旦ノーホスホノー１第
四級窒素（アンモニウム）。

第四級リン（ホスホニウム）、ヒドロキシル、アミド、
アルコキシ、メルカプト、ニトロ、アルキル、ハロ、ス
ルホン、スルホキシド、ホスファートホスファイト、カ
ルボキシラード、カルバマート等々である。好ましい置
換された基は、アミノ、アミド、エステル及びアンモニ
ウムである。

本発明のＮ−アシル尿素及びＯ−アシルイソ尿素は。

Ｒ１及び（又は）Ｒ″がアミノ基で置換されたヒドロカ
ルビルであるものである。

ここで使用される“アルコキシ”なる言葉は。

式 ％式％ （式中アルキル基は、Ｃ−原子数４〜１２を有する。）
なる−価の基を意味する。

ここで使用される“アリールオキシ”なる言葉は９式 ％式％ （式中アリールは、Ｃ−原子数６〜１０を有し、上述の
様に置換されていてよい。） なる−価の基を意味する。

ここで使用される“アルカリールオキシ”なる言葉は１
式 ％式％ なる−価の基、たとえばオキシベンジル等を意味する。

本発明のＮ−アシル尿素及び０−アシルイソ尿素の製造
を示す上記図式は、ビスカルボジイミドを式（Ｉ［［）
なる化合物の代りに使用した場合の反応又は生成物を表
わしてはいないが、その反応式は当業者に予想される。

本発明のＮ−アシル尿素及び０−アシルイソ尿ｚを製造
するのに使用されるカルボジイミド及びビスカルボジイ
ミドは、よく知られた化合物であり。

これらは上記式（Ｉ［［）によって表わされる。Ｒ１及
び（又は）Ｒ２がより特異的にアルキル、シクロアルキ
ル、了り−ル又はその置換された形である式（ＩＩＩ）
のカルボジイミドが好ましい。式（ＩＩＩ）の−官能性
力ルポジイミドの好ましいクラスの代表例は。

Ｎ−メチル−Ｎ’−ｔ−ブチルカルボジイミドＮ、　Ｎ
’−ジイソプロピルカルボジイミドＮ、　Ｎ’−ジシク
ロへキシルカルボシイ旦ドＮ、Ｎ’−ジーｔ−ブチルカ
ルボジイミドＮ−シクロへキシル−Ｎ’−ｔ−ブチルカ
ルボジイミドＮ、　Ｎ’−ジブチルカルボジイミド Ｎ、Ｎ’−ジイソブチルカルボジイミドＮ−アリル−Ｎ
ｏ−プロピルカルボジイミドＮ、　Ｎ’−ジアリルカル
ボジイミド Ｎ、アリル−Ｎ”−シクロへキシルカルボシイくドＮ−
クロチル＝Ｎ’−シクロヘキシルカルボジイミドＮ−ア
リル；−Ｎ’−（β−ヒドロキシエチル）カルボジイミ
ド Ｎ−メチル−Ｎｏ−プロピルカルボジイミドＮ−プロピ
ル−Ｎ’−ｔ−ブチルカルボシイ藁ドＮ−イソプロピル
−Ｎ’−ｔ−ブチルカルボジイミドＮ−（α−ジメチル
アミノプロピル）−Ｎ’−ｔ−ブチルカルボジイミド Ｎ−（β−ブロモアリル）−Ｎ’−プロピルカルボジイ
ミド Ｎ−（β−ブロモアリル）−Ｎｏ−イソプロピルカルボ
ジイミド Ｎ−（β−ブロモアリル）−Ｎ’−ｔ−ブチルカルボジ
イミド Ｎ−（α−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ”−（β−ブ
ロモアリル）カルボシイごド １−エチル−３−（６−ペンジルオキジカルボニルアξ
）へキシル）カルボジイミド １−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−（６−ベン
ゾイルアミノヘキシル）−カルボジイミド等である。

ビスカルボジイミドは２式 ％式％（） （式中）７１及びＲ２は上述の意味を有し　Ｒ３は）７
１と同一の意味を有する。） これらの二官能性化合物によって表わされる。

式（Ｉ［Ｉ）のカルボジイミド及び式（■）のビスカル
ボジイミドを製造する方法は、よく知られており、ここ
で詳細に説明する必要はない：たとえば米国特許第２．
９４６．８１９号、第３．２３１．６１０号、第３．５
０２，７２２号、第３．６４４．４５６号、第３．９７
２．９３３号。

第４，０１４，９３５号、第４，０６６．６２９号、第
４，０８５．１４０号、第４．０９６，３３４号及び第
４．１３７，３８６号明細書中に記載された方法。この
方法のすべては、上記特許明細書中に含まれる。

特別なカルボジイミド又はビスカルボジイミド又はこの
様な化合物のクラスの適切な選択によって９本発明のＮ
−アシル尿素及びＯ−アシルイソ尿素化合物の物理的性
質を、特別な適用に於て有利な使用に合わせる。たとえ
ば疎水性及び（又は）カチオン性“側−技”をヒアルロ
ンポリマーに結合し、−官能性力ルポジイミドを選択し
て治療用薬剤のための有用なポリマー担体を製造する。

したがってまた親油性側−枝を　Ｒ１及びＲ２部分の選
択によってヒアルロン酸ポリマーに結合する。

更に重要なことに、カルボジイミドに由来する側−技を
、Ｎ−アシル尿素又は０−アシルイソ尿素側−技として
ヒアルロン酸ポリマー鎖に共有的に結合する。側−技中
の遊離官能基（アξン、アミド。

エステル）を、更に反応性治療用薬剤分子と通常かつ公
知の反応条件下反応させて結合し、治療用薬剤の供給の
ための媒体が得られる。

本発明のＮ−アシル尿素及びＯ−アシルイソ尿素化合物
の製造を実施する場合、カルボジイミドの十分な量をヒ
アルロン酸又はその塩との反応させ。

上記式（１）のくり返しポリマー鎖単位を有するポリマ
ー鎖が得られ、これは垂れ下ったＮ−アシル尿素又はＯ
−アシルイソ尿素側−技を有するヒアルロン酸分子につ
き少なくとも１個のジサッカライド単位、たとえば上記
式（■）、　（Ｖ）、　（Ｖｌ）又は（■）の鎖単位に
よって中断されている。本発明の好ましい組成に於て２
式（１）の本来の鎖単位約０．５〜約３０％を１式（Ｉ
Ｖ）、　（Ｖ）、　（Ｖｌ）又は（■）の鎖単位の様な
鎖単位に変える。一般にカルボジイミドの過剰の化学量
論量は、所望の反応を促進するのに有利である。

本発明のＮ−アシル尿素及びＯ−アシルイソ尿素を製造
するためにビスカルボシ４ξ１反応戒分を使用すること
は、隣接したヒアルロン酸分子との間に架橋を生じる。

というのはビスカルボシイ亀ドが三官能であるからであ
る。この場合上記の“垂れ下った側−技”を、ヒアルロ
ン酸の２個の分子によって共有する。この架橋された材
料は、生体材料として及び比較的不溶性の、薬剤供給マ
トリックスとして特に有用である。というのはビスカル
ボジイミド架橋されたヒアルロン酸は、生体相容性を妨
げない架橋上に新しい結合範囲を有するからである。

ビスカルボシイごド架橋されたヒアルロン酸は。

ヒドロゲルであることが分った。ここで、　“ヒドロゲ
ル”なる言葉は、水又は生物学的液体中で膨潤された架
橋した高分子網目を意味すると定義する。ゲル化の度合
は、当然達成される架橋の度合による。

ヒアルロン酸をビスカルボジイミドで架橋するための反
応条件は、ヒアルロン酸−モノカルボジイミドカップリ
ング反応に使用される条件と同様である。架橋反応を。

（１）反応混合物中のヒアルロン酸濃度の増加によって
、及び（２）添加溶液中のビスカルボジイミド濃度の減
少によって有利に実施する。これは分子外架橋が分子内
架橋かに好都合な条件を創造する。

上記反応は、Ｎ−アシル尿素誘導体の形成を容易にする
ことに関する：すなわち水性塩基でｐＨを増加して又は
アミン塩基を変化する量で添加して式（Ｖｌ）又は（■
）の化合物を形成する。アミン塩基の代表例は、第一、
第二及び第三アミン及びジアミン、たとえばメチルアミ
ン、エチルアミン。

１．６−ジアミツヘキサン等々である。アミンで促進さ
れるＯ　→Ｎ移動は、ミコラヤツク（Ｍｉｋｏｌａｊｃ
ｚｙｋ）等によってテトラヘドロン３７．第２５１頁（
１９８１年）中に記載されている。

調製反応を、不活性溶剤、すなわちとけこまないが又は
反応の望しい経過に不都合な影響を与えない溶剤の存在
下に実施する。この様な溶剤の代表例は、水、アルカノ
ール、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド等
である。調製反応を実施するためのプロトンの起源は、
希鉱酸、たとえば塩酸を包む。

反応は、広い範囲の温度にわたって、たとえば２０℃〜
８０℃、好ましくは室温で申し分なく進行する。

上記反応の進行を、　ｐＨ−測定によって追跡する。

ｐＨが安定した時２反応は実質的に終了する。反応の終
結で、所望のＮ−アシル尿素及びＯ−アシルイソ尿素誘
導体を２反応混合物から常法で、たとえば沈殿、洗滌及
び再沈殿によって分離する。反応の完了、生成物の性質
及び化学変性の程度は、プロトンＮＭＲによって希Ｎａ
０Ｄ中に溶解された変性ヒアルロン酸の溶液に介して減
少する粘度で測定することができる。

次の使用の方法を示し９本発明者によって本発明の実施
が予想される最良の方法を示すが２本発明はこれによっ
て限定されない。例中に記載される値は１次のテストを
実施したものである。

璽直監皮旦秋よ 固有粘度を、キャノン−ウベローデセミ−マイクロ希釈
粘度計（サイズ７５）を用いて３７℃で測定し、ミリリ
フドル／グラム　（ｍ１／ｇ）で記載する。

動！０む【Ω力三− 動的粘度を、ブックフィールドデジタル粘度計。

モデルＲＶＴＯＣＰ　（スピンドルＮｏ、５２）によっ
て測定し。

１０ｍｇ／ｍｌの濃度で、剪断速度１．０利でセンチボ
イズ（Ｃｐｓ）で記載する。

公ｊヨ４翅史ごユ 重量平均分子量（Ｍｗ）を、固有粘度数から、上記ラウ
レント等の方程式を用いて算出する。

盟遺土 ＣＪｓ−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−ＣＪＬ　ｚ−ＮＨ−ＣＯ−０−Ｃ
Ｈｚ−ＣＪｉｌ−エチル−３〜（６−ペンジルオキジカ
ルボニルアミンヘキシル）カルボジイミド 酸化第二水ＩＪｉ？（１００ｍｇ）を乾燥アセトン１５
−□これに乾燥アセトン５−中に溶解された１−エチル
−３−（６−ベンジルオキジルーカルボニルアミノヘキ
シル）２−チオ尿素（７７Ｂ）を加える□中で懸濁する
。反応混合物を還流し、油浴を８０℃で保つ、　２０分
後１反応混合物は黒色に変り、還流を３時間続ける。形
成された黒色の硫化水銀は２反応フラスコに付着し、溶
液は澄明である０次いで溶液をセライトに通して濾過し
、硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発して、純度９３％（
ＧＣ）を有する１−エチル−３−（６−ベンジルオキジ
カルボニルアミノヘキシル）カルボジイミドロ０ｍｇが
得られる。

圭１１４ １−（３−ジメチル７ξノプロピル）　−３−（６−ベ
ンジルオキジカルボニルアミノヘキシル）カルボジイミ
ド 上記製造■と同一の処理を行うが、粗生成物を硫酸マグ
ネシウムで乾燥し、シリカゲル（クロロホルム、トリエ
チルアミン）上でクロマトグラフィー分離する他は、ア
セトン中で酸化第二水銀の存在下に１−（３−ジメチル
アミノプロピル）−３−（６ベンジルオキシカルボニル
アξノヘキシル）−２−チオ尿素の還流を行う。かくし
てチオ尿素７７ｍｇは１（３−ジメチルアミノプロピル
）−３−（６−ベンジルオキシカルボニル−アミノヘキ
シル）−カルボジイミド１５ｍｇを生じる。

鼾 過剰アミンの存在下にヒアルロン酸ナトリウムと１−（
３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイ
ミドとの反応によって形成されたＮ−アシル尿水（４，
７５に調整されたｐＨ）中に溶解されたｌ、６−ジアξ
ノへキサン１７．８２ｍｇ＜０．３０７ｍモル当量）と
ヒアルロン酸ナトリウム（２４６Ｂ、　０．６１５ｍモ
ル当りを、水中に溶解された１−（３−ジメチルアミノ
プロピル）−３−エチルカルボジイミド（１１，７８ａ
＋ｇ、　０．０６２ａ＋モル）と混合する。混合物のｐ
Ｈを、　０．ＩＮ塩酸で４．７５に調整し、そのｐＨで
反応の経過する間０．　ＩＮ塩酸で維持する。混合物を
、室温で２時間攪拌する。

その時間の終りに、塩化ナトリウムを加え、５％（ｗ／
ｖ）の濃度にする。反応混合物３容量に相当するエタノ
ールを加え、白色の粘性沈殿を生じる。

沈殿を分離し、乾燥し、第二沈殿のために希釈される水
中に再溶解する。沈殿と再溶解の順を３回くり返す。Ｎ
−アシル尿素生成物の最終溶液は澄明かつ粘性である。

０−アシルイソ尿素は、全く認められない。

拠」 ヒアルロン酸ナトリウムと１−エチル−３−（６−ベン
ジルオキジカルボニルアミノヘキシル）カルボジイミド
との　　によって　　されたシアル上記例１の通常の処
理をくり返すが、１．６−ジアミツヘキサンの不在で、
ヒアルロン酸ナトリウム９０．６＋ｗｇ（０，２２５ａ
＋当量）と１−エチル−３−（６−ベンジルオキジカル
ボニルアミノヘキシル）−カルボジイミド１８ａ＋ｇ（
０，０４８ｍモル）との反応を行う　（上記製造ｌ）、
生成物Ｎ−アシル尿素が得られる（ａ油化された生成物
１０！５ｍｇ）、出発ヒアルロン酸ナトリウムと比較し
て、生成物は次の物理的性質によっである程度特徴づけ
られる： 生成物　　　　出発ヒアルロン Ｌヱ之土里皇敢去上ユ皇去− 固有粘度（ｍ／ｇ）　　２７３４　　　　　　２３５４
動的粘度（ｃｐｓ）　　　２４３３２　　　　　２３１
９９セイセイ物はヒアルロン酸ナトリウムを示し上記式
（Ｉ）のポリマー鎖単位１６．９８％を式（ＩＩ）（Ｒ
はカルボジイミドの反応残基である〉に変える。

奥」 上記例１の通常の処理をくり返すが、１．６−ジアミノ
ヘキサンを除き、そこで使用される１−（３−ジメチル
アミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドを、上記
製造２に従って製造された同量の１−（３ジメチルアミ
ノプロピル）−３−（６−ペンジルオキジカルボニルア
ミノヘキシル）−カルボジイミドに替える。上記式（ｎ
）（Ｒはカルボジイミドの反応残基である）の鎖単位を
有する対応するＮ−アシル尿素が得られる。

奥」 ヒアルロン酸ナトリウムと１−エチル−３−トリデシル
−カルボジイミドとの反応によって形成されたアシル 上記例３の通常の処理をくり返すが、ヒアルロン酸ナト
リウム４０１ｎ＋ｇ（１，０ｍ当量）と１−エチル−３
−トリデシル−カルボジイミド２５．２ｍｇ（０，１０
ｍ＋モル）を反応させ、上記式（■）（式中Ｒはカルボ
ジイミドの反応残基である）の鎖単位を有する親油化さ
れたアシル尿素（■・２５９１）　３８６ｍｇが得られ
る。

班」 ヒアルロン酸ナトリウムと１−エチル−３−オクチルカ
ルボジイミドとの反応によって形成されたＮアシル　素 上記例３の処理を繰り返すが、そこで使用されるｌ−エ
チル−３−トリデシルカルボジイミドを１−エチル−３
−オクチルカルボジイミド４５．６ｎ＋ｇ（０，２３８
ｍモル）に替え、ヒアルロン酸）　４７７ｍｇ（１，１
１９ｍ当量〉ヲ用いて、上記式（■）（式中Ｒは、カル
ボジイミドの反応残基である〉の鎖単位を有する親油化
されたアシル尿素生成物４６５ｎ＋ｇが得られる。

生成物はＩＶ２５３４　ｍｌ　／　ｇ　ヲ示ｔ。

孤」 ヒアルロン酸ナトリウムとｐ−フェニレン−ビス（エチ
ル）カルボシイくドとの反応によって形成れるＮ−アシ
ル尿　　び０−アシルイソ上記例１の通常の処理を行う
が、１．６−ジアミツヘキサンの付加的な存在なしに、
ヒアルロン酸ナトリウム４０４ｍｇ（１，０１ｍ当量）
とｐ−フェニレンビス（アシル）−カルボジイミド１０
．７ａｇ（０，０５ｍモル）を反応させて１式： ％式％ なるＮ−アシル尿素で親油化された生成物及び式：Ｃｔ
Ｈｓ　　　　　　　　　　ＣＪｓ なるＯ−アシルイソ尿素で親油化された生成物３９３ｍ
ｇが得られる。上記式中Ｂは上述の意味を有する。

Ｎ−アシル尿素と０−アシルイソ尿素の割合は、約１：
２．３である。

架橋の度合を、ヒアルロナートのカルボキシル基につい
て添加されたカルボジイミド基の百分率割合から算出す
る。１０％架橋したヒアルロン酸のＩＶは、コントｏ　
−ルＩＶ２３５４ｍ／ｇ４：：比して３０７：Ｍ／ｇで
ある。　１８％架橋した生成物は水に不溶であるが。

膨潤して室温で水に安定であるゲルとなる。

奥ユ ヒアルロン酸ナトリウムと１，６−ヘキジレンビス（エ
チル）カルボジイミドとの反応によって形成されたＮ−
アシル尿素 上記例６の処理をくり返すが、そこで使用されるｐ−フ
ェニレンビス（エチル）カルボジイミドをｐ−フェニレ
ンビス（エチル〉カルボジイミド１１ｍ１ｇ（０，０５
ｍモル）に替え、ヒアルロナート４１６ｍｇ（１，Ｏｈ
＋当量）を用いて５式 （式中Ｂは上述の意味を有する。） なるＮ−アシル尿素４００＋＋＋ｇが得られる。生成物
は。

ＩＶ　２５５４　ｙｍｌ／ｇを有する。架橋の度合は算
出すると１０％である。水中に入れると粘性溶液を生じ
る。

０−アシルイソ尿素は、全く認められない。

奥」 ヒアルロン酸ナトリウムのＮ−アシル尿素とＯ−アシル
イソ尿素及び１−エチル−３−（ロートリフルオロアセ
トアミド）へキシル−カルボジイミド 上記例６の通常の処理を行うが、ヒアルロン酸ナトリウ
ム４００ｍｇ（１，０＋＋当量）及びイソプロパツール
５−中に溶解された１−エチル−３−（トリーフルオロ
アセトアミド）へキシル−カルボジイミド６０ｎ＋ｇ（
０，２２ｎ＋当量〉を反応させて１式：ＣＯ ＣＯ− Ｈ ＣＪ＋ｚ Ｈ ０ ＣＦ。

２Ｈ３ なるＮ−アシル尿素及び式： ％式％ なる０−アシルイソ尿素３９２ａ＋ｇ　（理論値の８５
．２％）が得られる。上記式中８は前述の意味を有する
。Ｎ−アシル尿素と０−アシルイソ尿素の割合は、約８
５：１５である。塩基性加水分解でトリフルオロアセチ
ル基を除去し、遊離アミン基が治療用薬剤との反応のた
めに、好ましくは共有結合によって生じる。

たとえばアミン基は、治療用薬剤ナブロレンに関連する
。カルボキシル基と共有結合を形成する。

ナフロン及び他の薬剤も９本発明のＮ−アシル尿素及び
Ｏ−アシルイソ尿素に結合し、これは二次的メカニズム
によって疎水性範囲、すなわち疎水性相互作用を有する
。

〈発明の効果〉 上記例から、カルボジイミド又はビスカルボシイミドと
の反応によるヒアルロン酸の変性は、不都合にポリマー
を分解しないことが分る。粘弾性の性質は保たれる。固
有粘度が誘導体化合物中で増加することは予想されなか
ったことである。これは高い粘性が治療用薬剤を内移植
するのに望まれるいくつかの場合に有利である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）化学的に結合されたコラーゲンがない、ヒアルロン
   酸又はその塩のＮ−アシル尿素及びＯ−アシルイソ尿素
   誘導体から成る群より選ばれた化合物。 ２）ヒアルロン酸は、固有粘度数からの算出によって決
   定された約１００，０００〜約１２，０００，０００ダ
   ルトンの重量平均分子量を有する、請求項１記載の化合
   物。 ３）ヒアルロン酸又はその塩と、カルボジイミド及びビ
   スカルボジイミドから成る群から選ばれた構成員を反応
   させることによって製造された請求項１記載の化合物。 ４）構成員は、式： Ｒ＾１−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−Ｒ＾２ （式中Ｒ＾１及びＲ＾２は相互に独立して水素、ヒドロ
   カルビル、置換されたヒドロカルビル、アルコキシ、ア
   リールオキシ及びアルカリールオキシから成る群より選
   ばれる。） の化合物から選ばれたカルボジイミドである請求項３記
   載の化合物。 ５）Ｒ＾１及びＲ＾２の少なくとも１つは、アミノ−置
   換されたヒドロカルビルである請求項４記載の化合物。 ６）構成員は、１−エチル−３−（６−ベンジルオキシ
   カルボニルアミノヘキシル）−カルボジイミドである請
   求項４記載の化合物。 ７）構成員は、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−
   ３−（６−ベンジイオキシ−カルボニルアミノヘキシル
   ）カルボジイミドである請求項５記載の化合物。 ８）構成員は、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−
   ３−エチルカルボジイミドである請求項５記載の化合物
   。 ９）１−エチル−３−トリデシル−カルボジイミドとヒ
   アルロン酸又はその塩との反応生成物である請求項１記
   載の化合物。 １０）１−エチル−３−オクチルカルボジイミドとヒア
   ルロン酸又はその塩との反応生成物である請求項１記載
   の化合物。 １１）構成員は、式： Ｒ＾１−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−Ｒ＾２−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−Ｒ＾３（式
   中Ｒ＾１及びＲ＾２は請求項４に記載した意味を有し、
   Ｒ＾３はＲ＾１と同一の意味を有する。）の化合物から
   選ばれたビスカルボジイミドである請求項３記載の化合
   物。 １２）構成員は、ｐ−フェニレンビス（エチル）カルボ
   ジイミドである請求項１１記載の化合物。 １３）構成員は、１，６−ヘキシレンビス（エチル）カ
   ルボジイミドである請求項１１記載の化合物。 １４）請求項１記載のＮ−アシル尿素。 １５）請求項１記載のＯ−アシルイソ尿素。 １６）ヒアルロン酸の水不溶性Ｎ−アシル尿素又はＯ−
   アシルイソ尿素誘導体とビスカルボジイミドから成る器
   具。 １７）ヒアルロン酸の水溶性Ｎ−アシル尿素又はＯ−ア
   シルイソ尿素誘導体及びカルボジイミド。