JPH0381258A - 新規なドーパ誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン（ド
ーパともいう）含有ペプチドの化学的合成を可能とする
新規なドーパ誘導体に関する。

〔従来の技術〕

イ貝、フジッボ等の貝類の分泌する接着性タンパク質は
ポリテトラフルオロエチレン等の低エネルギー表面に対
して強い接着力をもっている。この接着性タンパク質に
豊富に含まれている構成アミノ酸の一つはドーパで、ド
ーパが接着機構に深く関与していると言われている。

また、ドーパは高等動物ではアドレナリンやノルアドレ
ナリンの前鹿体で、すでに単量体としてパーキンソン氏
病の有効な治療薬であることはよく知られている。その
ため、ドーパを含有するペプチドは医薬品への応用も期
待されるところである。

このように、ドーパを含むペプチドを通常のアミノ酸を
含むペプチドと同様に化学的に合成する技術は新しい接
着剤や医薬品を開発する上で強く望まれていた。

アミノ酸を原料として化学合成法でペプチドを合成する
場合、脱水縮合反応に関与するアミノ酸の主鎖のアミノ
基及びカルボキシル基以外の側鎖アミノ基、カルボキシ
ル基、ヒドロキシ基等の官能基を種々の保護基を用いて
保護し、必要に応じて中間生成物から保護基を外して（
脱保護）、その後の反応に関与させるようにすることが
必要である。

主鎖のアミノ基を保護する方法としてはベンジルオキシ
カルボニル基による方法、ｔ−ブチルオキシカルボニル
基による方法、９−フルオレニルメトキシカルボニル基
（Ｆ＋＋＋ｏｃ基）による方法等があるが、温和な塩基
性条件で脱保護でき、固相法によるペプチドの化学的合
成が可能なＦｍｏｃ基による方法が最近では注目されて
いる。

通常のアミノ酸のＦｍｏｃ基によるアミン基の保護はカ
ルピノ（Ｌ、Ａ、Ｃａｒρ１ｎＯ）らによって開発され
（Ｊ、Ｏｒｇ、　Ｃｈｅｗ、、　１９７２．３７．３４
０４−３４０９）　、マイエンホーファー（Ｊ、阿ｅｉ
ｅｎｈｏｆｅｒ　）らにより同相に適用された（Ｉｎｔ
、　Ｊ、　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｒｅｓ、、　１９７９．１
３゜３５−４２）　、その後、チャン（Ｃ，Ｃｈａｎｇ
）ら（Ｉｎｔ。

Ｊ、　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｒａｓ、、　１９８０．１５．
５９−６６）、シエーン（１，Ｓｃｈ’６ｎ）　ら（Ｓ
ｙｎｔｈｅｓｉｓ、　１９８６．４．３０３−３０５）
、ミルトン（Ｒ，Ｃ，Ｍｉｌｔｏｎ）ら（Ｉｎｔ、　Ｊ
、　ＰｒｏｔｅｉｎＲｅｓ、、　１９８７．３０．４３
１−４３２）により、種々の改良がなされている。これ
らによれば、アミノ酸のアミノ基にＦｍｏｃ基を導入す
る場合、アミノ酸を炭酸ナトリウムの存在下で９−フル
オレニルメトキシカルボニルクロライドと反応させ、あ
るいはアミノ酸を炭酸水素ナトリウム存在下で９−フル
オレニルペンタフルオロフェニルカーボネートと反応さ
せ、あるいはアミノ酸をトリエチルアミン存在下で９−
フルオレニルメチル−Ｎ−スクシンイミデイルカーボネ
ートと反応させている。

側鎖にヒドロキシル基、アミノ基、カルボニル基などの
官能基をもつアミノ酸のアミノ基をＦｍｏｃ基で保護す
る場合は、あらかじめ側鎖の官能基をｔ−ブチル基、ｔ
−ブチルオキシカルボニル基。

ベンジル基又はｐ−トルエンスルホニル基等で保護して
おくほうがよい。例えばチロシンはジクロロベンジル基
で側鎖のヒドロキシ基を保護しておくと、Ｆｍｏｃ基で
保護されたアミノ酸の収率は８５％で、保護していない
場合の収率７０％より優れていることが、上記のミルト
ン（Ｒ，Ｃ，Ｍｉｌｔｏｎ）らの文献に記載されている
。

一方、ドーパは水性溶液中、ホウ酸又はホウ酸塩と反応
させホウ酸コンプレックスを生成せしめると中性ないし
アルカリ性でも安定性が極めて高くなることは知られて
いる（特開昭４８−２６７４５号公報）。

〔発明が解決しようとする課題〕

アミノ酸がドーパである場合は、炭酸ナトリウムや炭酸
水素ナトリウムなどによる塩基性条件の影響のため、従
来のいずれの方法によってもアミノ基をＦｍｏｃ基で保
護したドーパを製造することができなかった。したがっ
て、分子内にドーパを含有するペプチドもまた製造する
ことができなかった。

本発明はドーパ含有ペプチドの化学的合成を可能とする
、アミノ基をＦｍｏｃ基で保護したドーパ誘導体を提供
するものである。

以下余白 〔課題を解決するための手段〕 本発明は、式（Ｉ） Ｈ で表されるＮ−（９−フルオレニルメトキシカルボニル
）−３，４−ジヒドロキシフェニルアラニンである。

本発明の式（Ｉ）で表される化合物は式ＣＩＩ）ＣＨ。

以ト−余Ｅ１ で表される化合物に、ホウ酸塩又はリン酸塩を反応させ
たのち、一般式（ｍ） ハロゲン原子を表す、） で表される化合物を反応させることによって製造するこ
とができる。

式（ｎ）で表される化合物はＬ体、Ｄ体及びＤＬ体のい
ずれを用いてもよく、試薬グレードの市販品を容易に入
手することができる。

また一般式（Ｉ［［］で表される化合物も、試薬グレー
ドの市販品が容易に入手できる。

上記の反応は溶媒中で行われ、その溶媒としては、例え
ば水とアセトニトリル、ジエチルエーテル、ジオキサン
、アセ−トン等から選ばれる１種類以上の有機溶媒の混
合溶媒を用いることができる。

本発明で用いるホウ酸塩としては四ホウ酸塩、メタホウ
酸塩等があり、特にナトリウム塩、カリウム塩が用いや
すい。また、リン酸塩としてはリン酸三ナトリウム、リ
ン酸二ナトリウム、リン酸−ナトリウム及びこれらのナ
トリウム塩をカリウム塩に置き換えたもの等が挙げられ
る。本発明においてはこれらの化合物の少なくとも一種
が使用される。ホウ酸塩又はリン酸塩の量は、式［１１
］で表される化合物とホウ素又はリンがキレート化合物
を生成するのに十分な量とする。

式（ｎ）で表される化合物とホウ酸塩又はリン酸塩の反
応温度及び反応時間は、上記のキレート化合物が生成す
る条件を選ぶように設定すればよく１例えば０〜１００
℃で３分〜２４時間撹拌して行う。

式〔■〕で表される化合物にホウ酸塩又はリン酸塩を反
応させたのち、一般式〔■〕で表される化合物を反応さ
せるときの反応温度及び反応時間は、Ｆｍｏｃ化反応が
起こるように条件を適宜選べばよく１例えば０〜１００
℃で１〜６時間撹拌して行う、この際、反応液のｐＨを
８〜１２に調整して更に１〜１０分間撹拌すればＦｍｏ
ｃ化反応を十分に行わせることができる。ｐＨ調整剤と
してはｐＨが急激に変化しない炭酸ナトリウムや炭酸水
素ナトリウムが好ましい。

上記反応の雰囲気は大気中であっても構わないが、副反
応をできる限り抑えるためには、窒素やアルゴン等の不
活性ガス雰囲気下で行う方が好ましい。

このようにして得られた式ＣＩ）で表される化合物は、
反応液を塩酸や硫酸等の酸で酸性（例えばｐＨ１〜６）
にしたのち、エーテル、酢酸エチル、テトラヒドロフラ
ン、ジクロルメタン、クロロホルム等の有機溶媒で抽出
し、減圧濃縮等の適当な方法で有機溶媒を除去し、ジク
ロルメタン／ヘキサン、メタノール／エーテル等の混合
溶媒から再結晶するか、必要ならばカラムクロマトグラ
フィーなどの精製操作を行って精製品とする。

本発明で得られた式ＣＩＥで表される化合物は、カルボ
キシル基及び／又は側鎖の水酸基を適当な保護基で保護
したのち、これとアミノ基及び／又はカルボキシル基及
び／又は側鎖の官能基を適当な保護基で保護した通常の
アミノ酸とを原料として、配列中にドーパを含有するペ
プチドを化学的に合成する。

〔実施例〕

３．４−ジヒドロキシフェニル−Ｌ−アラニン（シグマ
社製）５９３■（３ミリモル）にアセトニトリル２０ｍ
Ｑとアセトン１０ｍ１ｌｌの混合溶液を加え、さらに０
．ＯＩＭ　四ホウ酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９，１８）
３０ｍＱを加え、室温で１５分間撹拌したのち、９−フ
ルオレニルメチルＮ−スクシンイミダイルカ−ボネート
（ケンブリッジ・リサーチ・バイオケミカルズ社製）１
０１５■（３ミリモル）を加えて室温で１２時間攪拌し
た。

反応混合溶液に炭酸ナトリウム７８８■（７，４ミリモ
ル）を少量ずつ加え、５分間さらに攪拌し、未反応の原
料をエーテル１５ｍＱで３回抽出し、水層に濃塩酸を加
え、ｐＨ２とした。この水層から反応生成物を酢酸エチ
ル２０ｍＱで３回抽出し、酢酸エチル層を０．１規定塩
酸水溶液２０ｍＱで１回洗浄した。無水硫酸マグネシウ
ムで酢酸エチル溶液を乾燥後、酢酸エチルを留去し、残
留物をジクロロメタン／ヘキサンから再結晶し、反応生
成物２７１ｍｇ　（収率６７％）を得た。

この反応生成物の分析結果は次のとおり。

融点：１５９℃ １Ｈ核磁気共鳴スペクトル；第１表 １３Ｃ核磁気共鳴スペクトル：第２表 高速液体クロマトグラフム：第１図 赤外線吸収スペクトル：第２図 第１図において反応生成物は保持時間３．４分に表れて
いる。同じ分析条件では原料の３，４−ジヒドロキンフ
ェニル−Ｌ−アラニンは保持時間１．２分に、また他の
原料の９−フルオレニルメチルＮ−スクシンイミディル
カーボネートは保持時間８．９分に表れることを別に確
かめている。

以上の結果から、反応生成物は式（Ｉ）で表される化合
物であることが確認された。

なお、融点は示差走査熱量計（パーキンエルマ社製、Ｄ
ＳＣ−７型）を用い、昇温速度１０℃／ｍｉｎ。

試料量１．８ｍｇで測定し、１Ｈ及び１３ｃ核磁気共鳴
スペクトルは核磁気共鳴装置（プルカー社製。

ＡＣ−２５０型）により測定し、高速液体クロマトグラ
フィー（本体；ウォーターズ社製、６００シリーズ）は
カラムにマイクロボンダスフェア（ｐＢｏｎｄａｓｐｈ
ｅｒｅ）　５　μＣ１８−１００λ（３，９１１ｎＸ１
５３．ウォーターズ社製）を用い、展開溶媒は０．１％
　トリプルオロ酢酸−水と０．１％トリプルオロ酢酸−
アセトニトリルの５０　：　５０混液。

流量１−　Ｏｍ　ｎ　／　ｍｘｎ　を検出波長２２０ｎ
ｍで行い、赤外吸収スペクトルは赤外分析装置（日立具
２７０−５０型）を用いＫＢｒ錠剤法で測定した。

以下余白 第 表 Ｈ １Ｈ核磁気共鳴スペクトル （２５０ＭＨｚ、アセトン−ｄ　ｓ　ｔ　δ値ｙＰＰＩ
ｌ）７．８４　　（ｄｄ、２Ｈ）、７．６６　　（ｂｒ
ｄ。

７．３９　　（ｄｄｄ、２Ｈ）、７．３１（ｄｄ、６．
８２　　（ｄ、ＬＨ）、６．７６　　（ｄ。

６．６４　　（ｄｄ、ＩＨ）、’６．６４　　（ｂｒｄ
。

４．４６　　（ｍ、ＬＨ）、４．３３〜４．１３Ｈ）、
３．１１　　（ｄｄ、ＬＨ）、２．９ｄ、２Ｈ）。

ｄ、２Ｈ） ＩＨ）。

ＩＨ）。

７　（ｍ。

１（ｄｄ。

以下余白 第 表 Ｈ ”ｃ核磁気共鳴スペクトル （６２，８９ＭＨｚ、アセトン−ａＳＳ　δ値＋　ｐｐ
ｍ）１７１４．１５６．７，１４５．８，１４５．０゜
１４４．７，１４２．０，１２９．８，１２８．４１２
７．９，１２０．７，１２６．２，１２１．５゜１１７
．１，１１６．０．　６７．２．　５６．４゜４７．９
．　３７．６ 〔発明の効果〕 本発明は、アミノ基がＦｍｏｃ基で保護された新規なド
ーパ誘導体を提供するもので、これまでできなかったド
ーパ含有ペプチドの化学的合成を可能にするものである
。

【図面の簡単な説明】

第工図は本発明の化合物の高速液体クロマトグラム、第
２図は本発明の化合物の赤外線吸収スペクトルである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式〔 I 〕 ▲数式、化学式、表等があります▼〔 I 〕 で表されるＮ−（９−フルオレニルメトキシカルボニル
   ）−３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン。