JPH0369341B2 - - Google Patents

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JPH0369341B2
JPH0369341B2 JP62253904A JP25390487A JPH0369341B2 JP H0369341 B2 JPH0369341 B2 JP H0369341B2 JP 62253904 A JP62253904 A JP 62253904A JP 25390487 A JP25390487 A JP 25390487A JP H0369341 B2 JPH0369341 B2 JP H0369341B2
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D295/22—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with hetero atoms directly attached to ring nitrogen atoms
    • C07D295/26—Sulfur atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/64—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and sulfur atoms, not being part of thio groups, bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/66—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and sulfur atoms, not being part of thio groups, bound to the same carbon skeleton containing sulfur atoms of sulfo, esterified sulfo or halosulfonyl groups, bound to the carbon skeleton
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    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/64—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and sulfur atoms, not being part of thio groups, bound to the same carbon skeleton
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    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
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    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/18—Sulfur containing
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  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
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Description

【発明の詳細な説明】
発明の分野 本発明は、系中に存在する、もしくは、検出反
応により前の段階で形成されるチオール基の検出
のための指示薬及び薬剤に関する。指示薬の製造
方法もまた記載されている。チオール基は、例え
ば、ジスルフイド類の還元もしくは生化学反応の
ような化学反応によつて形成することができる。
チオール基の形成に導く好適な生化学反応は 次式： によつて示される。 発明の背景 チオール基を含有する化合物を検出するための
数多くの方法が知られている。特に頻繁に言及さ
れる方法は、Arch.Biochem.Biophys.、82巻、70
〜77頁（1959年）において、G.H.E11manによつ
て記載されたものであり、これは、チオールと、
３，3′−ジチオ−ビス−６−ニトロ安息香酸
（Ellman試薬）との反応によつて形成される、３
−メルカプト−６−ニトロ安息香酸の黄色のアニ
オンの形成に基づいている。 この反応は、感度が強く迅速である。しかしな
がら、Ellman試薬のアニオンは酸化に対して非
常に感度が強く、したがつて、得られる発色は不
安定である。更に、Ellman試薬は、例えば水の
ような極性溶媒にごくわずかしか溶解しないの
で、したがつて、ある種のチオール溶液、特に、
水性系において生化学的に製造されるものについ
ては、限られた程度しか用いることができない。 発明の概要 一般式： ［式中、Ｘは水素もしくは−SO2R1を表し；Ｙは
水素もしくは−NO2を表し；R1は−Ｏ−R2もし
くは
【式】を表し；また またR2及びR3は互いに独立して、水素（ただ
し、R2及びR3が共に水素である場合を除く）、ア
リール、もしくはC1〜C4アルキル（ハロゲン、−
COOH、シアノ、−C1〜C4アルコキシ、ヒドロキ
シル、−OSO3H、−SO3H又はアミノによつて置
換されていてもよい）を表し、アミノ基は、場合
によりハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、−
OSO3Hもしくは−SO3Hによつて置換されたC1
〜C4アルキル、あるいはフエニルもしくはベン
ジル基によつて順番に置換されたアミノ基を表
し；あるいは、 R2及びR3はＮ原子と共に、C1〜C4アルキルも
しくはフエニルによつて置換されていてもよい）
を表す］ の本発明による化合物はこれらの欠点を有さな
い。 特に好適な化合物は一般式： （式中、Ｘ、Ｙ及びR1は上記記載の意味を有す
る） のものである。 特に重要な化合物は一般式： （式中、Ｘ、Ｙ及びR1は上記記載の意味を有す
る） のものである。 極めて好適な化合物は一般式： （式中、R1は上記記載の意味を有する） のものである。 R1が−Ｏ−R2もしくは
【式】を示し、R2は 水素以外のものであるが、R2及びR3はそれ以外
は上記記載と同様の意味を有する場合は、該化合
物はそれ自体新規なものである。 極めて重要な化合物は一般式： （式中、R2及びR3は式の場合において与えら
れた意味を有する） のものである。 特に好適な化合物は、一般式： （式中、R2及びR3は式の場合において記載さ
れた意味を有する） のものである。 化合物は、個々の段階が公知のプロセスによ
つて製造される。特に、式の化合物は、次式： のクロロ−ニトロ−ベンゼンスルホニルクロリド
を、式：Ｈ−R1（式中、R1は上記記載の意味を有
する）のアミンもしくはアルコラートによつて、
対応するクロロ−ニトロ−ベンゼンスルホン酸誘
導体に転化させ、次にクロリド／スルフイド交換
反応をNa2Sの存在下で行ない、続いて酸化を行
ない対称なジスルフイドを得るプロセスによつて
製造される。式の非対称ジスルフイドは、クロ
リド／スルフイド交換反応によつて得られた次
式： （式中、R1は上記記載の意味を有する） のメルカプト−ニトロ−ベンゼン−スルホン酸誘
導体を、次式： （式中、Ｘ及びＹは上記記載の意味を有する） の置換された塩化フエニルスルフエニルと反応さ
せるプロセスによつて得られる。 次の反応式はいずれも合成径路を示す。 (a) 対称ジスルフイド： (b) 非対称ジスルフイド： 一般式の化合物は、例えばリポ酸アミド、グ
ルタチオンもしくはコエンチームＡのようなチオ
ール類もしくはチオール前駆物質用の試験薬にお
ける指示薬として用いるのに特に好適である。 本発明に関する試験薬もしくは試験機構はセル
中で測定し得るものであると理解されるべきであ
る。一般式（）の化合物に加えて、試験薬は、
酵素、、基質、補酵素、作動体、抗原、抗体など
のような特定の分析物質の試験に必要なすべての
試薬を含有する。これら試験薬は更に、例えば緩
衝液、湿潤剤及び安定化剤のような非反応物質を
も含有することができる。チオール基を形成し、
例として挙げることのできる酵素は、チオグリコ
シダーゼ類、チオエーテルヒドラーゼ類、同様
に、例えばコリンエステラーゼのようなエステラ
ーゼ類である。補酵素としてのNADH及び
NADPHの補助によつてチオール基を形成する、
リポ酸アミドデヒドロゲナーゼ及びグルタチオン
レダクターゼのような例として挙げられる酵素も
ある。最後に記した酵素は、NADHもしくは
NADPHが形成される試験機構において用いる
ことができる。このような反応は公知の、基質の
デヒドロゲナーゼ接触酸化である。上記の試薬及
び基質から、溶液もしくは粉末として混合され
る、あるいは錠剤もしくは凍結乾燥剤である試薬
配合物を製造することができる。試薬配合物は
（すでに溶液として存在していない場合は）、水も
しくは他の好適な溶媒中に溶解され、試薬溶液が
調製される。試薬配合物が個々の成分からなる場
合は、これらは互いに混合される。試料（例え
ば、基質溶液、酵素溶液、血液、血清、血漿もし
くは尿）と、試薬混合物の分別部分とを混合した
後、得られた呈色を光度計で測定し、特定物質の
濃度もしくは基質の濃度をモル吸光係数、並び
に、試薬及び加えた試料の体積から計算する。動
的測定も終点測定も可能である。 一般式（）の化合物は、特定のパラメーター
検出に必要な１もしくは複数の試薬あるいは他の
酵素と共に、適当な界面活性剤及び活性化剤と同
様に他の補助剤が溶解している場合は緩衝系を含
浸することもできる。吸収性もしくは膨潤性の担
体、好ましくは紙、あるいは吸収性の不織ガラ
スもしくはプラスチツクは、これらの溶液を含浸
する、もしくは噴霧される。系を次に乾燥する。
このようにして調製された試薬担体は、液体（例
えば、血液、尿もしくは唾液中、あるいは、例え
ば果実ジユース、牛乳などの食料品中）の内容物
を直接測定するための迅速な診断薬としても用い
ることができる。これによつて、該液体が試薬担
体に直接施されるか、あるいは該担体が液体中に
短時間浸漬される。得られた色を比較色と照合す
ることにより半定量測定が可能である。定量は反
射光度計によつて行なうことができる。 一般式（）の化合物を、注型溶液から製造さ
れる担体マトリツクス中に導入されることもまた
可能である。セルロース、セルロース誘導体、ゼ
ラチン、ゼラチン誘導体もしくは、ポリウレタン
類及びアクリルアミドのようなプラスチツクも、
ここで例として挙げることができる。一般式
（）の化合物、及び適当な場合は必要とされる
他の試薬を注型溶液中に直接加えることが有利で
あり、これにより、担体及び試薬からなる試験具
を一つの操作で製造することが可能である。 それによつて基質もしくは酵素を、上記記載の
ように分光計のセル内で測定できる試薬溶液は、
吸収性の担体から上記記載の試薬を水もしくは緩
衝剤もしくは血清で溶出せしめることにより得ら
れる。 記載された試験薬に好適な緩衝剤は、リン酸
塩、クエン酸塩、硼酸塩及びアルカリ金属もしく
はアンモニウム対イオンによる緩衝剤である。し
かしながら、他の系を用いることができる。PH値
は６〜10、特に6.5〜7.5でなければならない。 湿潤剤は、特に、本発明の化合物によつてイオ
ン性の相互作用を受けるアニオン性及びカチオン
性の湿潤剤である。しかしながら、酵素を活性化
する非イオン性湿潤剤もまた用いることができ
る。ラウリル硫酸ナトリウム、ジオクチルスルホ
スクシン酸ナトリウム及びアルキル−アリルポリ
エーテル−アルコール類が好適である。 用いるべき作動体は、特定の酵素反応に関する
公知のものである。 用いることのできる他の補助剤は、一般の増粘
剤、可溶化剤、乳化剤、光学的光沢剤、対照剤な
どや、他の色原体による対応する試験において公
知であるようなものである。 実施例 １ ２−クロロ−５−ニトロベンゼンスルホン酸の
ナトリウム塩130ｇを、水750ml中の硫化ナトリウ
ム９水和物120ｇの溶液に加えた。混合物を室温
で10時間撹拌し、溶液を酸性にした。形成された
硫化水素を窒素の補助によつて除去した。次に、
水酸化ナトリウム溶液を用いてPH値を10にし、ヨ
ウ素125ｇによつて酸化を行ない、ジスルフイド
を得た。ヨウ素の添加中は、PH値を水酸化ナトリ
ウム溶液で連続的に調節しなければならなかつ
た。酸化が終了すると、PH値は7.5となり、次
式： の化合物が、20％の塩化ナトリウムによつて塩析
された。 実施例 ２ ３，４−ジニトロ−クロロベンゼン101ｇを、
水500ml及び亜硫酸ナトリウム126ｇの溶液中で30
時間、還流下で加熱した。混合物を冷却し、次
式： の黄色の沈殿物が水から再結晶させることによつ
て分離された。 ３−クロロ−６−ニトロ−ベンゼンスルホン酸
ナトリウム25.9ｇを、室温において、水250ml中
の硫化ナトリウム９水和物25.0ｇの溶液に加え
た。５時間の反応時間（薄層クロマトグラフイー
により制御した）の後、溶液を酸性化し、形成さ
れた硫化水素を窒素で除去し、次に溶液を活性炭
で浄化した。次式： の構造のメルカプト化合物を含有する黄色の液
を、水酸化ナトリウム溶液を用いてPH10にし、ヨ
ウ素25ｇで酸化した。酸化中は、PH値を水酸化ナ
トリウム溶液を加えることにより保持した。形成
したジスルフイドを塩化ナトリウムで塩析し、水
から再結晶させた。以下の13C−NMRスペクト
ルによつて特徴づけられた。13CはDMSO−D6中
でシフトした。 Ｃ原子 δ［ppm］ Ｃ−１／Ｃ−1′ 138.300 Ｃ−２／Ｃ−2′ 126.478 Ｃ−３／Ｃ−3′ 140.481 Ｃ−４／Ｃ−4′ 127.248 Ｃ−５／Ｃ−5′ 123.948 Ｃ−６／Ｃ−6′ 146.616 実施例 ３ Ｎ−メチル−ピペラジン50.0ｇをクロロホルム
300ml中に溶解した。トリエチルアミン69mlを加
えた後、２−クロロ−５−ニトロベンゼン−スル
ホニルクロリドを室温で導入した。５時間後、混
合物を氷上に注ぎ、次式： の、形成したスルホンアミドをクロロホルムで抽
出した。 エタノール250ml中の硫化ナトリウム９水和物
48.0ｇとイオウから新たに調製された２硫化ナト
リウム溶液を、エタノール300ml中の、上記で調
製された窒素化合物63.9ｇ溶液に摘加した。混合
物を還流凝集器の存在下で２時間沸騰させ、次に
氷水１中に注いだ。沈殿した淡黄色の生成物を
吸引過により別し、エタノールから結晶化さ
れると、融点は205℃であつた。 実施例 ４ 80℃において３−クロロ−６−ニトロ−ベンゼ
ンスルホン酸のナトリウム塩25.9ｇを、オキシ塩
化リン50ml及び５塩化リン25ｇの混合物に少しず
つ加えた。２時間後、HClの発生がおさまつた。
溶液をロータリーエバポレーターで濃縮し、残査
をトルエン中に溶解し、トルエン相を氷中で洗浄
し、抽出物を乾燥し、再度ロータリーエバポレー
ターで蒸発させた。次式： のスルホクロリドが淡色の結晶物質として残留し
た。 クロロホルム100ml中に溶解した３−クロロ−
６−ニトロベンゼンスルホニルクロリド25.6ｇ
を、Ｎ−メチルピペラジン10.0ｇとトルエチルア
ミン11mlとの混合物を含有するクロロホルム250
mlに、室温で滴加した。反応が終了したら、混合
物を氷上に注ぎ、クロロホルムで抽出することに
より次式： のスルホンアミドが単離された。 上記で調製されたスルホンアミド31.95ｇを、
次に、ジメチルホルムアミド100ml中の硫化ナト
リウム９水和物25.0ｇの分散液に室温で加えた。
１時間後、クロリド／スルフイド交換反応が終了
した。反応混合物を氷上に注ぎ、酸性にし、吸収
過により別した。次式： のメルカプト化合物27.3ｇが得られた。 上記で調製されたメルカプト化合物15.85ｇを、
エタノール200ml及びトルエチルアミン50mlの混
合物中に溶解し、次にヨウ素12.5ｇを少しずつ加
えた。反応の終了は、赤茶色から黄色への色の変
化によつて示された。反応生成物を氷上に注ぎ、
淡黄色の沈殿を吸引過により別した。クロロ
ホルム／エタノールから再結晶された、次式： の構造のジスルフイドは173℃から融解（分解）
した。 実施例 ５ ナトリウムフエノラート58.0ｇを水300ml中に
溶解した。４−クロロ−５−ニトロベンゼンスル
ホニルクロリド128ｇを室温で少しずつ加えた。
混合物を一晩撹拌し、沈殿した次式： の生成物を吸収過により別した。 硫化ナトリウム９水和物25.0ｇジメチルホルム
アミド100ml中に分散させ、次に、４−クロロ−
５−ニトロ−ベンゼンスルホン酸フエニル91.3ｇ
を室温で加えた。１時間後、混合物を氷上に注
ぎ、酸性にし、メルカプト化合物を吸収過によ
り別した。 上記で調製されたメルカプト化合物15.55ｇを、
エタノール200ml及びトリエチルアミン50ml中に
溶解した。ヨウ素12.0ｇを加えることにより、メ
ルカプト化合をジスルフイドに変換した。次式： の化合物は148〜151℃で融解した。 実施例 ６ ０℃において、クロロホルム200ml中の４−ニ
トロベンゼンスルフエニルクロリド19.0ｇの溶液
を、クロロホルム500ml中の４−メルカプト−５
−ニトロベンゼンスルホン酸フエニル27.9ｇの溶
液に滴加した。形成したHClガスの除去は窒素の
乾燥流によつて行なわれた。反応が終了したら、
混合物をロータリーエバポレーターで蒸発させ、
残査をエタノールから再結晶させた。次式： のジスルフイド39.8ｇが得られた。 実施例 ７ 実施例４によつて調製された３−メルカプト−
６−ニトロベンゼンスルホン酸モルホリド3.04ｇ
を塩化メチレン50ml中に溶解した。氷で冷却しな
がら、塩化メチレ30ml中の４−ニトロベンゼンス
ルフエニルクロリド2.0ｇの溶液を滴加した。形
成したHClガスを窒素流によつて除去した。反応
が終了したら、塩化メチレンを減圧下で除去し、
残査をアセトニトリルから再結晶させた。次式： の化合物4.5ｇが得られた。 以下のジスルフイドを実施例１〜７に記載の方
法によつて調製した。
【表】 ＼
＼
C２H５

C２H５
CH３

CH３
／
／
15 H SO２N
NO２ H
SO２N NO２
＼
＼
C２H４SO３H

C２H４SO３H
C２H５
C２H５
／
／
16 SO２N H
NO２ SO２N
H NO２
＼
＼
C２H５
C２H５
CH３
CH３
／
／
17 SO２N H
NO２ SO２N
H NO２
＼
＼
CH２CH２SO３H
CH２CH２SO３H
【表】 ／
／
25 H SO２N
NO２ H
SO２N NO２
＼
＼
C２H５

C２H５
C２H４OSO３H

C２H４OSO３H
／
／
26 H SO２N
NO２ H
SO２N NO２
＼
＼
C２H４OSO３H

C２H４OSO３H
27 H SO２NHC２H４SO３H
NO２ H
SO２NHC２H４SO３H NO２
28 H SO２NHC２H４SO３H
NO２ NO２
H NO２
29 H H
NO２ H
SO２NHC２H４SO３H NO２
【表】 ＼

＼
CH３

CH３


34 H N
O２ H
NO２

35 SO２N(C４H９)２ H
NO２ SO２N(C４H９)２
H NO２
36 NO２ H
SO２N(C２H５)２ NO２
H SO２N(C２H５)２
実施例 37 （実施例２の化合物） 実施例２の化合物を、既述の試験機構における
NADHの指示薬として試験するために、該化合
物を水に溶解し20mM溶液を与えた。次の試薬構
成分：緩衝剤（0.1M／トリアミン緩衝剤、PH
７）1810μ；実施例２の化合物（20ミリモル／
水溶液）100μ；リポ酸アミド（50ミリモ
ル／）50μ；及びリポ酸アミドデヒドロゲナ
ーゼ（1200kU／）20μを共にセル中にピペツ
トで注入した。 試薬のブランク値の測定後、NADH20μを加
えることにより反応を開始させた。動的分析によ
り、わずか１分間の反応時間後に安定な終了点
（20分以内の吸光度の変化が１％未満である）が
示された。 機能性及び線型性を試験するために、１〜10ミ
リモル／の範囲のNADH濃度について試験混
合物中で測定した。400nｍにおいて測定した吸
光度の相違を表１に示す。
【表】 表２は、アスコルビン酸による影響に関する試
験結果を示している。この試験に関して、
NADH溶液（５ミリモル／）20μと、１ミリ
モル／のアスコルビン酸溶液20μも上記混合
物に加え、得られた吸光度を測定した。
【表】 アスコルビン酸の不存在下において測定された
値はアスコルビン酸の存在下で測定した値よりも
平均で0.7％大きかつた。本試験はアスコルビン
酸によつて影響をうけない。 実施例 38 実施例１の化合物を試験した。実施例37と同様
の反応条件を選択した。しかしながら、より速い
反応（終了点が１分以内）が、PH７よりもPH９に
おいて、この基質によつて達成されるので、緩衝
剤として0.1Mのトリス緩衝液、PH９を選択した。 最大の吸収は425nｍにおいて測定された。色
調は測定時間（20分）の範囲内では安定であつ
た。 アスコルビン酸の影響に関する試験を、実施例
37と同様に行なつた。表３に結果を示す。
【表】 アスコルビン酸の存在下では、値は平均して
0.2％大きかつた。アルコルビン酸は本試験に影
響を及ぼさない。 表４は、１〜10ミリモル／の範囲の濃度の
NADHを加えた後の機能及び線型試験を示す。
【表】 実施例 39 最大吸光を測定するために、更なる化合物をジ
メチルホルムアミド中に溶解し、おのおのの場合
において、0.1M／トリス緩衝液（PH９）２ml
及びメルカプトエタノール10μを溶液50μに
加えた。最大吸光を表５に示す。 表 ５ 最大吸光 実施例34 420nｍ 実施例36 434nｍ 実施例35 464nｍ 実施例16 445nｍ 明らかに、上記したような本発明の、他の多く
の修正及び変更は本発明の精神及び範囲を逸脱す
ることなしに行なうことができる。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １ 一般式： （式中、Ｘは水素もしくは−SO2R1を表し； Ｙは水素もしくは−NO2を表し； R1は−Ｏ−R2もしくは【式】を表し； また、 R2及びR3は互いに独立して、水素（ただし、
    R2及びR3が共に水素である場合を除く）、アリー
    ル、あるいは、C1〜C4アルキル、あるいは、ハ
    ロゲン、−COOH、シアノ、C1〜C4アルコキシ、
    ヒドロキシル、−OSO3H、−SO3Hもしくはアミ
    ノによつて置換されたC1〜C4アルキル、あるい
    は、C1〜C4アルキル、又はハロゲン、ヒドロキ
    シル、シアノ、−OSO3Hもしくは−SO3Hによつ
    て置換されたC1〜C4アルキル、又はフエニルも
    しくはベンジル基によつて置換されたアミノ基を
    表し；あるいは、 R2及びR3はＮ原子と共に、C1〜C4アルキルも
    しくはフエニルによつて置換されてもよいピロリ
    ジン、ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジンもし
    くはモルホリン環を表す） の化合物をチオール基の指示薬として含有するチ
    オール基検知用試験薬。 ２ 一般式： （式中、Ｘ、Ｙ及びR1は式で定義した意味を
    有する）の化合物を含有する特許請求の範囲第１
    項記載の薬剤。 ３ 一般式： （式中、Ｘ、Ｙ及びR1は式で定義した意味を
    有する）の化合物を含有する特許請求の範囲第２
    項記載の薬剤。 ４ 一般式： （式中、Ｘ、Ｙ及びR1は式で定義した意味を
    有する）の化合物を含有する特許請求の範囲第１
    項記載の薬剤。 ５ 一般式： （式中、Ｘ、Ｙ及びR1は式で定義した意味を
    有する）の化合物を含有する特許請求の範囲第１
    項記載の薬剤。 ６ 一般式： （式中、Ｘ、Ｙ及びR1は式で定義した意味を
    有する）の化合物を含有する特許請求の範囲第５
    項記載の薬剤。 ７ 酵素、基質、補酵素、作動体、抗原、抗体、
    緩衝剤、潤滑剤及び安定化剤からなる群より選択
    される１以上の物質を更に含有する特許請求の範
    囲第１項記載の薬剤。 ８ 一般式： 〔式中、Ｘは水素もしくは−SO2R1を表し； Ｙは水素もしくは−NO2を表し； R1は−Ｏ−R2もしくは【式】を表し； R3及びR2は、互いに独立して水素（ただし、
    R2及びR3が共に水素である場合を除く）、アリー
    ル、あるいは、C1〜C4アルキル、あるいは、ハ
    ロゲン、−COOH、シアノ、C1〜C4アルコキシ、
    ヒドロキシル、−OSO3H、−SO3H又はアミノに
    よつて置換されたC1〜C4アルキル、あるいは、
    C1〜C4アルキル、又は、ハロゲン、ヒドロキシ
    ル、シアノ、−OSO3Hもしくは−SO3Hによつて
    置換されたC1〜C4アルキル、又はフエニルもし
    くはベンジル基によつて置換されたアミノであ
    り；あるいは、 R2及びR3はＮ原子と共に、C1〜C4アルキルも
    しくはフエニルによつて置換されてもよいピロリ
    ジン、ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、又
    はモルホリン環を表す〕 の化合物。 ９ 一般式： （式中、Ｘ、Ｙ及びR1は式で定義した意味を
    有する）の特許請求の範囲第８項記載の化合物。 １０ 一般式： （式中、Ｘ、Ｙ及びR1は式で定義した意味を
    有する）の特許請求の範囲第８項記載の化合物。 １１ 一般式： （式中、R1は式で定義した意味を有する）の
    特許請求の範囲第８項記載の化合物。 １２ 一般式： 〔式中R2及びR3は、互いに独立して水素（ただ
    し、R2及びR3が共に水素である場合を除く）、ア
    リール、あるいは、C1〜C4アルキル、あるいは、
    ハロゲン、−COOH、シアノ、C1〜C4アルコキ
    シ、ヒドロキシル、−OSO3H、−SO3H又はアミ
    ノによつて置換されたC1〜C4アルキル、あるい
    は、C1〜C4アルキル、又は、ハロゲン、ヒドロ
    キシル、シアノ、−OSO3Hもしくは−SO3Hによ
    つて置換されたC1〜C4アルキル、又はフエニル
    もしくはベンジル基によつて置換されたアミノで
    あり；あるいは、 R2及びR3はＮ原子と共に、C1〜C4アルキルも
    しくはフエニルによつて置換されてもよいピロリ
    ジン、ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、又
    はモルホリン環を表す） の特許請求の範囲第８項記載の化合物。 １３ 一般式： 〔式中R2及びR3は、互いに独立して水素（ただ
    し、R2及びR3が共に水素である場合を除く）、ア
    リール、あるいは、C1〜C4アルキル、あるいは、
    ハロゲン、−COOH、シアノ、C1〜C4アルコキ
    シ、ヒドロキシル、−OSO3H、−SO3H又はアミ
    ノによつて置換されたC1〜C4アルキル、あるい
    は、C1〜C4アルキル、又は、ハロゲン、ヒドロ
    キシル、シアノ、−OSO3Hもしくは−SO3Hによ
    つて置換されたC1〜C4アルキル、又はフエニル
    もしくはベンジル基によつて置換されたアミノで
    あり；あるいは、 R2及びR3はＮ原子と共に、C1〜C4アルキルも
    しくはフエニルによつて置換されてもよいピロリ
    ジン、ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、又
    はモルホリン環を表す） の特許請求の範囲第１２項記載の化合物。 １４ 一般式： （式中、Ｘは水素もしくは−SO3R1を表し； Ｙは水素もしくは−NO2を表し； R1は−Ｏ−R2もしくは【式】を表し； R2及びR3は、互いに独立して水素（ただし、
    R2及びR3が共に水素である場合を除く）、アリー
    ル、あるいは、C1〜C4アルキル、あるいは、ハ
    ロゲン、−COOH、シアノ、C1〜C4アルコキシ、
    ヒドロキシル、−OSO3H、−SO3H又はアミノに
    よつて置換されたC1〜C4アルキル、あるいはC1
    〜C4アルキル、又は、ハロゲン、ヒドロキシル、
    シアノ、−OSO3Hもしくは−SO3Hによつて置換
    されたC1〜C4アルキル、又はフエニルもしくは
    ベンジル基によつて置換されたアミノであり；あ
    るいは R2及びR3はＮ原子と共に、C1〜C4アルキルも
    しくはフエニルによつて置換されてもよいピロリ
    ジン、ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、又
    はモルホリン環を表す） の化合物の製造方法であつて、次式： のクロロ−ニトロ−ベンゼンスルホニルクロリド
    を、式：Ｈ−R1（式中、R1は上記のものを表す）
    のアミンもしくはアルコラートによつて、対応す
    るクロロ−ニトロースルホン酸誘導体に変換し、
    次に、クロリド／スルフイド交換反応をNa2Sの
    存在下で行ない、続いて酸化を行なつた対称型の
    ジスルフイドを得るか、あるいは、クロリド／ス
    ルフイド交換反応によつて得られた次式： （式中、R1は上記に記載した意味を有する）の
    メルカプト−ニトロ−ベンゼンスルホン酸誘導体
    を、 次式： （式中、Ｘ及びＹは上記に記載した意味を有す
    る）の、置換された塩化フエニルスルフエニルと
    反応させ、それによつて非対称ジスルフイドを得
    ることを特徴とする方法。
JP62253904A 1986-10-10 1987-10-09 チオール基検出用試験薬、新規ジスルフィド化合物及びその製造方法 Granted JPS63101359A (ja)

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