JPH0354103B2

JPH0354103B2 -

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Publication number: JPH0354103B2
Application number: JP10596781A
Authority: JP
Priority date: 1981-07-07
Filing date: 1981-07-07
Publication date: 1991-08-19
Also published as: JPS5810572A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は新規なML−236B誘導体およびその製
造法に関する。更に詳しくは、本発明は式で示されるML−236B誘導体、あるいは式（式中、Ｒは水素原子または低級アルキル基を
示す。）で示されるML−236B誘導体またはその
薬理上許容しうる塩およびその製造法に関する。上記式中、Ｒが低級アルキル基である場合には、アルキル
エステルを形成し、Ｒとしては例えばメチル、エ
チル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブ
チルなどをあげることができる。Ｒが水素原子である場合には、薬理上許容しう
る塩を形成する。例えば金属塩（特開昭53−
56314参照）、アミノ酸塩（特開昭54−28828参照）
またはアミン塩（特開昭57−123140参照）であ
り、特にアルカリ金属塩、最適にはナトリウムま
たはカリウム塩である。ここに、以下前記式（）を有するML−236B
誘導体をＭ−4′ラクトン、前記式（）を有する
ML−236B誘導体のうち、Ｒが水素原子である化
合物をＭ−4′、Ｒが低級アルキル基である化合物
をＭ−4′アルキルエステル、Ｒが水素原子である
場合に形成される薬理上許容しうる塩をＭ−4′塩
と略称する。前記式（）で示されるML−236B誘導体、並
びに前記式（）で示されるML−236B誘導体お
よびその薬理上許容しうる塩は、コレステロール
の合成を阻害することにより血中の脂質を低下さ
せる作用を有し、例えば高脂血症治療剤、動脈硬
化予防薬として医薬に使用することができる。本発明の原料物質であるML−236B（ラクトン）
およびML−236Bカルボン酸は既知物質であり、
青カビの一種ペニシリウム・チトリヌムの代謝産
物より分離、精製される。その化学構造式は次式

【式】および

【式】で示される通りであり、実験動物から分離した酵
素系や培養細胞系においてコレステロールの生合
成をその律速酵素の３−ヒドロキシ−３−メチル
グルタリル・コエンザイムＡリダクターゼと競合
することにより阻害し、動物の個体レベルにおい
ても強力な血清コレステロールの低下作用を示す
ことが知られている（特開昭50−155690号、ジヤ
ーナル・オブ・アンチビオテイクス29巻1346〜
1348頁1976年）。同様にML−236Bカルボン酸アルキルエステル
は次式（式中、R¹はアルキル基を示す。）で示され（特開昭53−84954）、 ML−236Bカルボン酸の薬理上許容しうる塩と
しては金属塩（特開昭53−56314）、アミノ酸塩
（特開昭54−28828）、アミン塩（特願昭56−8696）
があげられ、これらもまたコレステロール阻害作
用を示すことが知られている。以下、ML−236B（ラクトン）、ML−236Bカル
ボン酸もしくはその薬理上許容しうる塩、または
ML−236Bカルボン酸アルキルエステルをML−
236B化合物と総称する。本発明者らは、ML−236B化合物の微生物変換
を研究中に、前記式（）で示されるML−236B
誘導体、あるいは前記式（）で示されるML−
236B誘導体またはその薬理上許容しうる塩が、
顕著なコレステロール阻害作用を有することを見
い出し、本発明を完成した。 ML−236B化合物を前記式（）で示される
ML−236B誘導体、あるいは前記式（）で示さ
れるML−236B誘導体またはその薬理上許容しう
る塩に変換せしめ得る微生物としては接合菌類に
属するシンセフアラストラム（Synce−
phalastrum）があげられる。これに属する微生物の中、特にシンセフアラストラム・ニグリカンス（Synce
−phalastrum nigricans）SANK 42172（微工研
菌寄第6041号）同 SANK 42272（微工研菌寄第6042号）同 SANK 42372（微工研菌寄第6043号）シンセフアラストラム・ラセモーサム（Synce
−phalastrum racemosum）IFO 4814 が好適である。これらの微生物の中、特にシンセフアラストラ
ム・ニグリカンス（Syncephalastrum
nigricans）およびシンセフアラストラム・ラセ
モーサム（Syncephalastrum racemosum）は
ML−236B化合物を優れた変換率で前記式（）
で示されるML−236B誘導体、あるいは前記式
（）で示されるML−236B誘導体またはその薬
理上許容しうる塩に変換する能力を有する。本発明において好適に用いられる微生物はいず
れも微工研に寄託されているか、もしくは公的な
保存機関（IFO）より入手可能である。 ML−236B化合物を前記式（）で示される
ML−236B誘導体、あるいは前記式（）で示さ
れるML−236B誘導体またはその薬理上許容しう
る塩に変換せしめるには、ML−236B化合物を含
む培地で微生物菌体（生菌または休止菌体系）を
培養するか、場合によつてはこれらの微生物の酵
素抽出液（無細胞抽出液）をML−236B化合物と
接触せしめることによつても達成される。この場合、微生物生菌培養では培養条件によつ
てＭ−4′、Ｍ−4′ラクトン、Ｍ−4′アルキルエス
テルまたはＭ−4′塩として生成する。また、休止
菌体系および酵素抽出液（無細胞抽出液）ではＭ
−4′塩として得られる。あるいは、ML−236B化合物から微生物変換に
よつて得られるＭ−4′をそのまま、またはＭ−
4′ラクトンに変換した後、所望により化学的常
法、例えばジアゾアルカンまたは塩を形成する物
質と処理することにより、これらをＭ−4′アルキ
ルエステルもしくはＭ−4′塩として得ることもで
きる。また、同様に例えばＭ−4′塩を所望により
化学的常法によつて処理することにより、Ｍ−
4′アルキルエステルに変換することもできる。上記菌株の培養菌体をML−236B（ラクトン）
に作用させて、生成するＭ−4′ラクトンの定量法
を以下に示す。Ｍ−4′ラクトンの定量法Ｍ−4′ラクトンの定量法は、高速液体クロマト
グラフイにより実施した。すなわち、担体とし
て、マイクロボンダ・パツクC₁₈（ウオーターズ
製）を用い、溶媒として62％メタノール水溶液、
液量１ml／min、検出方法としては、紫外部吸収
237nmで検出すると、Ｍ−4′ラクトンは保持／時
間8.3分にピークが見られ、これにより定量した。次に実施例を示す。実施例１下記組成の培地100mlを含有する500ml容三角フ
ラスコ20本にシンセフアラストラム・ニグリカン
ス SANK 42372を植菌し、26℃、220r.p.m.で
振盪培養し、３日後、ML−236B（ラクトン）を
最終濃度で0.05％になるように添加して更に６日
間、26℃、220r.p.m.で培養した。培地組成グルコース 1.0％ペプトン 0.2 肉エキス 0.1 酵母エキス 0.1 コーンスチープリカー 0.3 水道水残培養終了後、変換反応液を過し、液をトリ
フルオロ酢酸でPH３に調整した。次いで、１の
酢酸エチルで３回抽出するとＭ−4′を含む区分が
得られた。Ｍ−4′は薄層クロマトグラフイー
（TLC）（プレート；メルク社製シリカゲルArt
5715、溶媒；ベンゼン：アセトン：酢酸＝50：
50：３）によりR_f値0.46を示した。上記抽出液を
飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水後、
触媒量のトリフルオロ酢酸を添加してラクトン化
した。次いで、上記抽出液を５％炭酸水素ナトリ
ウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水後、
減圧乾固した。次いで、得られた残留物をローバ
ー・カラム（メルク社製、Si 60サイズＡ）を用
い、ベンゼン：アセトン＝７：３の系で精製し、
さらに酢酸エチルを用いて再結晶に付すとＭ−
4′ラクトン約180mgが得られた。Ｍ−4′ラクトンは次の物性値を有する。１） NMRスペクトル重クロロホルム中、内部標準にTMSを使用
して、100MHzで測定した。（CDCl₃，δ：
ppm） 4.25（1H、多重線） 4.60（1H、多重線） 5.50（1H、多重線） 5.75（1H、多重線） 5.90（1H、四重線） 6.01（1H、二重線）２）紫外線吸収スペクトル（メタノール溶液） λ_nax(on)：230、237、245 ３）赤外部吸収スペクトル（KBr法）cm^-1： 3500、1720 ４）マススペクトル m/e：406（M⁺）、304、286 ５）旋光度〔α〕_D：＋310.9゜（Ｃ＝0.66、メタノール）６）融点 141〜143℃ ７）元素分析値（％） C₂₃H₃₄O₆として理論値Ｃ，67.95；Ｈ，8.43 実験値Ｃ，68.05；Ｈ，8.37 ８） TLC TLCプレート；メルク社製シリカゲル Art 5715 溶媒；ベンゼン：アセトン（１：１） R_f値 0.64 実施例２実施例１と同様の操作で培養した変換反応液を
過し、液をトリフルオロ酢酸でPH３に調整し
た。次いで、１の酢酸エチルで３回抽出した。
上記抽出液を飽和食塩水で洗浄し、次いで直ちに
５％炭酸水素ナトリウム水溶液を用いて水層に転
溶することによりＭ−4′ナトリウム塩を含む区分
が得られた。この水層を0.1N塩酸でPH8.0に調整
し、次いでＭ−4′ナトリウム塩を含む区分を、ダ
イヤイオンHP−20カラム（三菱化成工業(株)製
品）に吸着させた。50％アセトンでＭ−4′ナトリ
ウム塩を含有する区分を溶出し、アセトンを留去
した後、凍結乾燥に付すとＭ−4′ナトリウム塩
141mgが得られた。Ｍ−4′ナトリウム塩は次の物性値を有する。１） NMRスペクトル重メタノール中、内部標準にTMSを使用し
て、60MHzで測定した。（CD₃OD，δ：ppm） 5.50（1H、ブロードの一重線） 5.70（1H、ブロードの一重線） 5.95（1H、四重線） 6.00（1H、二重線）２）紫外部吸収スペクトル（メタノール溶液） λ_nax(on)：230、238、246 ３）赤外部吸収スペクトル（KBr法）cm^-1： 3400、2900、1580 ４）元素分析値（％） C₂₃H₃₅O₇Naとして理論値Ｃ，61.88；Ｈ，7.85 実験値Ｃ，61.85；Ｈ，7.95 実施例３実施例１と同様の操作で培養した変換反応液を
過し、液をトリフルオロ酢酸でPH３に調整し
た。次いで、１の酢酸エチルで３回抽出した。
上記抽出液を飽和食塩水で洗浄し、次いでジアゾ
メタンのエーテル溶液を加えて30分間放置後、減
圧乾固した。次いで、得られた残留物をローバ
ー・カラム（メルク社製、Si60サイズＡ）を用
い、ベンゼン：アセトン＝１：１の系で精製する
とＭ−4′メチルエステルの精製品150mgが無色油
状物として得られた。なお、本操作におけるジア
ゾメタンに代えて、適当なジアゾアルカンを使用
すると、該当するＭ−4′のアルキルエステルが得
られる。Ｍ−4′メチルエステルは次の物性値を有する。１） NMRスペクトル重クロロホルム中、内部標準にTMSを使用
して、60MHzで測定した。（CDCl₃，δ：ppm） 3.70（3H、一重線） 5.50（1H、ブロードの一重線） 5.75（1H、ブロードの一重線） 5.90（1H、四重線） 6.01（1H、二重線）２）紫外部吸収スペクトル（メタノール溶液） λ_nax(on)：230、238、246 ３）赤外部吸収スペクトル（薄膜法）cm^-1： 3400、1730 ４）マススペクトルＮ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）トリフル
オロアセトアミドでシリル化した後、日本電子
製Ｄ−300型を用いて測定した。 m/e：654（M⁺）５）元素分析値（％） C₂₄H₃₈O₇として理論値Ｃ，65.73；Ｈ，8.73 実験値Ｃ，65.66；Ｈ，8.79 実施例４下記組成の培地100mlを含有する500ml容三角フ
ラスコ20本にシンセフアラストラム・ニグリカン
ス SANK 42372を植菌し、26℃、220r.p.m.で
振盪培養し、４日後、ML−236Bカルボン酸メチ
ルエステルを最終濃度で0.05％になるように添加
して更に５日間、26℃、220r.p.m.で培養した。培地組成グルコース 1.0％ペプトン 0.2％肉エキス 0.1％酵母エキス 0.1％コーンスチープリカー 0.3 水道水残（PH無修正）培養終了後、変換反応液を以下、実施例１の方
法に準じて処理するとＭ−4′ラクトン約420mgが
得られた。物性値は実施例１で得られたものと同じであつ
た。実施例５実施例４と同様の操作で培養した変換反応液を
以下、実施例２の方法に準じて処理するとＭ−
4′ナトリウム塩335mgが得られた。物性値は実施例２で得られたものと同じであつ
た。実施例６Ｍ−4′ラクトン１ｇを少量のアセトンに溶解
し、次いで0.2N水酸化ナトリウム水溶液13mlを
添加して40℃で１時間加水分解した。反応終了
後、反応混合物よりアセトンを留去し、次いでク
ロロホルム５mlで洗浄した。水層を0.1N塩酸で
PH8.0に調整し、次いでＭ−4′ナトリウム塩を含
む区分をダイヤイオンHP−20カラム（三菱化成
工業(株)製品）に吸着させた。50％アセトンでＭ−
4′ナトリウム塩を含有する区分を溶出し、アセト
ンを留去した後、凍結乾燥に付すとＭ−4′ナトリ
ウム塩1.05ｇが得られた。物性値は実施例２で得られたものと同じであつ
た。実施例７Ｍ−4′ナトリウム塩１ｇを少量のメタノールに
溶解し、次いで冷却下でトリフルオロ酢酸を加え
て酸性とした後、直ちにジアゾメタン溶液を加え
30分間放置した。反応終了後、反応混合物より溶
剤を留去した。得られた残留物をローバー・カラ
ム（メルク社製、RP−８サイズＢ）を用い、
メタノール：水＝6.4の系で精製するとＭ−4′メ
チルエステル700mgが無色油状物として得られた。物性値は実施例３で得られたものと同じであつ
た。試験例１コレステロール合成阻害作用前記式（）で示されるML−236B誘導体並び
に前記式（）で示されるML−236B誘導体およ
びその薬理上許容しうる塩は、コレステロール合
成経路上の律速酵素として知られる３−ヒドロキ
シ−３−メチルグルタリル・コエンザイムＡリダ
クターゼ（３−hydroxy−３−methyl−glutaryl
−CoA reductase）を特異的に阻害することが分
つた。これら化合物のコレステロール合成阻害作
用〔ジヤーナル・オブ・バイオロジカル・ケミス
トリー（J.Biol.Chem.）234巻、2835頁（1959年）
記載の方法で測定〕を第１表に示す。

【表】

Claims

【特許請求の範囲】１式で示されるML−236B誘導体、あるいは式（式中、Ｒは水素原子または低級アルキル基を
示す。）で示されるML−236B誘導体またはその
薬理上許容しうる塩。２ ML−236B（ラクトン）、ML−236Bカルボン
酸もしくはその薬理上許容しうる塩、またはML
−236Bカルボン酸アルキルエステル（以下、こ
れらをML−236B化合物と総称する。）を式で示されるML−236B誘導体、あるいは式（式中、Ｒは水素原子または低級アルキル基を
示す。）で示されるML−236B誘導体またはその
薬理上許容しうる塩に変換し得るシンセフアラス
トラム属に属する微生物を、ML−236B化合物を
含有する培地で培養するか、あるいはこれらの微
生物の酵素抽出液とML−236B化合物とを接触せ
しめてML−236B化合物を前記式（）で示され
るML−236B誘導体、あるいは前記式（）で示
されるML−236B誘導体またはその薬理上許容し
うる塩に変換せしめ、変換反応物を含む系より前
記式（）で示されるML−236B誘導体、あるい
は前記式（）で示されるML−236B誘導体また
はその薬理上許容しうる塩を採取することを特徴
とする前記式（）で示されるML−236B誘導
体、あるいは前記式（）で示されるML−236B
誘導体またはその薬理上許容しうる塩の製造法。