JPH03505739A - 束縛された蛍光体へのエネルギー移動によつて増強された１，２―ジオキセタンからの化学発光 - Google Patents

束縛された蛍光体へのエネルギー移動によつて増強された１，２―ジオキセタンからの化学発光

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JPH03505739A
JPH03505739A JP2502424A JP50242490A JPH03505739A JP H03505739 A JPH03505739 A JP H03505739A JP 2502424 A JP2502424 A JP 2502424A JP 50242490 A JP50242490 A JP 50242490A JP H03505739 A JPH03505739 A JP H03505739A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 束縛された蛍光体へのエネルギー移動によって増強された１、２−ジオキセタン からの化学発光この発明は熱的に安定であり、有機溶媒或は水溶液中で化学試薬 または酵素により誘発されて化学発光を行なうジオキセタンに、関するものであ る。ジオキセタン分子に結合或は「束縛された（　ｔｅｔｈｅｒｅｄ）　ｊ蛍光 性基への分子内エネルギー移動を含むところの化学発光効率を顕著に向上させる 方法が、発見された。当該化合物は生体分子用の化学的に誘発可能な直接的標識 としてはもとより、酵素免疫測定及び酵素結合ＤＮＡプローブを含む各種の化学 発光測定法において用いるごてエネルギーを放出する。実質上全ての場合におい て本エネルギーは、振動励起または熱の形で放出される。
しかしながら若干の化学反応過程では熱の代わりに光、つまり化学発光が生せし められる。光発生の機序には、高エネルギー物質（１，２−ジオキセタンのよう な有機過酸化物である場合が多い。）の熱分解或は接触分解により三重項または 一重項電子励起状態の反応生成物が生ぜしめられる過程が含まれる。−重積励起 状態の反応生成物からの蛍光は、いわゆる直接発光である。
この化学発光の量子収率は、−重項化学励起の量子収率と発光の量子収率との積 である。これらの量は効率でもって表現される場合が多く、ここに効率（％）＝ ΦＸ１００である。三重項または一重項励起状態の生成物から蛍光受容体へのエ ネルギー移動は、間接化学発光を生じさせるために利用できる。間接化学発光の 量子収率は、三重項または一重項化学励起の量子収率とエネルギー移動の量子収 率とエネルギー受容体の発光の量子収率との積である。
直　　　接　　　　　　　間　　　接 化学発光　　　　　化学発光 ２、生物発光におけるジオキセタン中間体・・・・・・１９６８年にマツクカプ ラ（ＭｃＣａｐｒａ）は、１，２−ジオキセタン類が蛍の系統を含む種々の生物 発光反応において重要な高エネルギー中間体であろうと提唱した。
（Ｆ、　ＭｃＣａｐｒａ　：　Ｃｈｅｍ、　Ｃｏｍｍｕｎ、、　１５５（１９６ ８））。
この中間体は全く不安定であって単離もされておらず分光学的に観測されてもい ないが、生物発光反応における本中間体の明白な証拠が酸素１８標識実験によっ て与えられている　（０，Ｓｈｉｍｏｍｕｒａ　ａｎｄ　Ｆ、　Ｈ，Ｊｏｈｎｓ ｏｎ：Ｘ＝Ｏ−（生物発光） 高エネルギーの ジオキセタン中間体 ド（Ｍｕｍｆｏｒｄ）は、β−ブロムヒドロペルオキシドの塩基触媒環化による ジオキセタン（３，３，４−トリメチル−１，２−ジオキセタン）の最初の合成 について報告した（Ｋ、　ＲｏＫｏｐｅｃｋｙ　ａｎｄ　Ｃ，Ｍｕｍｆｏｒｄ　 二Ｃａｎ、　Ｊ。
Ｃｈｅｍ、４７，７０９　（１９６９））。マツクカプラ（ＭｃＣａｐｒａ）に よって予測されたようにこのジオキセタンは実際に、５０℃に加熱するとアセン トン及びアセトアルデヒドに分解しつつ化学発光を生じた。しかしこの過酸化物 は比較的不安定であり、常温（２５°Ｃ）で保存すると急速に分解してしまう。
また化学発光の効率が非常に低い（０，１％以下）。
バートレット（Ｂａｒｔｌｅｔｔ）及びシャープ（５ｃｈａａｐ）とマツアー（ Ｍとｕｒ）及びフッテ（Ｆｏｏｔｅ）は各独自に、１．２−ジオキセタン類のよ り容易な別の合成法を開発した。分子酸素を感光色素との存在下で正当に置換さ れたアルケン類を光酸化することによって、ジオキセタン類が高収率で生成され る（Ｐ、　Ｄ、　Ｂａｒｔｌｅｔｔ　ａｎｄ　Ａ。
Ｐ、　　５ｃｈａａｐ　：　Ｊ、　　Ａｍｅｒ、　　Ｃｈｅｍ、　　Ｓｏｃ、　 　９２　、　３２２３（１９７０）及びＳ、　Ｍａｚｕｒ　ａｎｄ　Ｃ，Ｓ、　 Ｆｏｏｔｅ　：　Ｊ、　Ａｍｅｒ。
Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、９２．　３２５５　　（１９７０）　）　。この反応の機 序には、アルケンと２＋２環化付加を行なってジオキセタンを生成する一重項酸 素として知られている準安定化合物の光化学的発生が含まれる。研究の結果、こ の反応を用いて各種のジオキセタン類を製造できることが示されている（Ａ、　 Ｐ、　Ｓｃｈ、ａａｐ、　Ｐ、　Ａ、　Ｂｕｒｎｓ、　ａｎｄ　ＫＡ、　　Ｚａ ｋｌｉｋａ　：　Ｊ、　　Ａｍｅｒ、　　Ｃｈｅｍ、　　Ｓｏｃ、　　９９　、 　１２７０（１９７７）　、Ｋ、　Ａ、　　Ｚａｋｌｉｋａ、　Ａ、　Ｌ、　Ｔ ｈａｙｅｒ、　ａｎｄ　Ａ、　Ｐ。
５ｃｈａａｐ：Ｊ、　　Ａｍｅｒ、　　Ｃｈｅｍ、　　Ｓｏｃ、１００．　　３ 　１８（１９７８）、Ｋ、Ａ、　Ｚａｋｌｉｋａ、　Ｔ、　Ｋ１５ｓｅｌ、　Ａ 、Ｌ、　Ｔｈａｙｅｒ、　Ｐ、Ａ、　　Ｂｕｒｎｓ、　ａｎｄＡ、Ｐ、　５ｃｈ ａａｐ　：　Ｊ、　Ａｍｅｒ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、１００　、　４９１６（ １９７８）　、Ｋ、　Ａ、　Ｚａｋｌｉｋａ、　Ｔ、　Ｋ１５ｓｅｌ、　Ａ、　 Ｌ、　Ｔｈａｙｅｒ、　Ｐ。
Ａ、Ｂｕｒｎｓ、　ａｎｄ　Ａ、Ｐ、　５ｃｈａａｐ　：　Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ 、Ｐｈｏｔｏｂｉｌｏ、　　３０　。
３５（１９７９）、及びＡ、Ｐ、　５ｃｈａａｐ、　Ａ、Ｌ、　Ｔｈａｙｅｒ。
ａｎｄ　Ｋ、　Ｋｅｅｓ　：　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ　 ５ｙｎｔｈｅｓｉｓ　　ＩＩ　、　　４９（１９７６）　）。この研究の過程で 、光酸化用のポリマー結合増感剤が開発された（Ａ、　Ｐ、　５ｃｈａａｐ、　 Ａ、　Ｌ。
Ｔｈａｙｅｒ、　Ｅ、　Ｃ，Ｂｌｏｓｓｅｙ、　ａｎｄ　Ｄ、　Ｃ，Ｎｅｃｋｅ ｒｓ　：　Ｊ、Ａｍｅｒ。
Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　９７　、　３７４１．　　（１９７５）　、及びＡ、、 　Ｐ。
５ｃｈａａｐ、　Ａ、　Ｌ、　Ｔｈａｙｅｒ、　Ｋ、　Ａ、Ｚａｌｉｋａ、　ａ ｎｄ　Ｐ、　Ｃ，Ｖａｌｅｎｔｉ　：　Ｊ。
ｒ　５ＥＮＳＩＴＯＸＪで販売されている（１９８２年２月１６日発行の米国特 許Ｎα４，３１５，９９８、及び１９７９年１２月１９日発行のカナダ特許Ｎα １，０４４，６３９　）。この製品の使用についての報告が、５０を越える文献 でなされている。
ダマンチリデンアダマンクンのような立体障害のアルケン類の光酸化によって極 めて安定なジオキセタン類が提供されることを発見した（Ｊ、Ｈ，Ｗｉｅｒｉｎ ｇａ、　Ｊ。
Ｓｔｒａｔｉｎｇ、　Ｈ，Ｗｙｎｂｅｒｇ、　ａｎｄ　Ｗ、　Ａｄａｍ、　　Ｔ ｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ。
１６９　　（１９７２））。ター口（Ｔｕｒｒｏ）及びシャープ（５ｃｈａａｐ ）による共同研究によりこのジオキセタンについて、分解のための活性化エネル ギーが３７　ｋｃａ１１モルであり常温（２５℃）での半減期が２０年を越える ことが示された（Ｎ、Ｊ、　Ｔｕｒｒｏ、　Ｇ、　５ｃｈｕ、５ｔｅｒ、　Ｈ， Ｃ。
Ｓｔｅｉｎｍｅｔｚｅｒ、　Ｇ、　Ｒ，Ｆａｌｅｒ、　ａｎｄ　Ａ、　Ｐ、　　 ５ｃｈａａｐ　：　Ｊ、　　Ａｍｅｒ。
Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　９７　、　７１１０　　（１９７５）　）　。実際上、 これが今まで文献で報告された最も安定なジオキセタンである。アダム（Ａｄａ ｍ）とウィンバーブ（Ｗｉｎｂｅｒｇ）は最近、官能化されたアダマンチリデン アダマンタン１．２−ジオキセタン類が生物医学上の用途に対し有用であろうこ とを示唆している　（Ｗ、　　Ａｄａｍ、　Ｃ。
Ｂａｂａｔｓｉｋｏｓ、　ａｎｄ　Ｇ、　Ｃ１１ｅｎｔｏ　：　Ｚ、　Ｎａｔｕ ｒｆｏｒｓｃｈ、　３９　ｂ　、　６７９（１９８４）　、Ｉｎ　Ｂｉｏｌｕｍ ｉｎｅｓｃｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ、　Ｍ。
Ａ、　　ＤｅＬｕｃａ　ａｎｄ　Ｗ、Ｄ、　　ＭｃＥｌｒｏｙ編、　　Ａｃａｄ ｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、　ＮｅｗＹｏｒｋ、　１９８１年発行、第６８７頁、及 びＪ、　Ｃ。
Ｈｕｍｍｅｌｅｎ、　Ｔ、　Ｍ、　Ｌｕ１ｄｅｒ、　ａｎｄ　Ｈ，Ｗｙｎｂｅｒ ｇ　：　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ　１３３Ｂ、　　５３１　 　（１９８６）　）　。しかしこの異常に安定な過酸化物を化学発光性標識とし て使用したとすると、１５０−２５０℃の検出温度が必要となる。これらの条件 は明らかに、水性媒体中での生物学的被分析物の検出に対し不適当である。マツ クカプラ（ＭｃＣａｐｒａ）、アダム（Ａｄａｍ）　、及びフーテ（Ｆｏｏｔｅ ）は、スピロ結合の環式或は多環式のアルキル基をジオキセタンと組合せると、 この立体的にかさばった基が存在しないとすれば比較的不安定であるジオキセタ ンを安定化するのに役立つことを、見出した　（Ｆ。
ＭｃＣａｐｒａ、　１．　Ｂｅｈｅｓｈｔｉ、　Ａ、　Ｂｕｒｆｏｒｄ、　Ｒ， Ａ、　Ｈａｎｎ、　ａｎｄ　Ｋ、　Ａ。
Ｚａｋｌｉｋａ　：　Ｊ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　、　Ｃｈｅｍ、　Ｃｏｍｍ ｕｎ、　、　９４４　（１９７７）、Ｗ、　　Ａｄａｍ、　Ｌ、　Ａ、　Ａ、　 　Ｅｎｃａｒｎａｃｉｏｎ、　ａｎｄ　Ｋ、Ｚｉｎｎｅｒ　：　Ｃｈｅｍ。
Ｂｅｒ、　　１１６．８３９　（１９８３）　、Ｇ、Ｇ、　Ｇｅ１ｌｅｒ、Ｃ， Ｓ。
Ｆｏｏｔｅ、　ａｎｄ　Ｄ、　Ｂ、　　Ｐｅｃｈｍａｎ　：　Ｔｅｔｒａｈｅｄ ｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、６７３（１９８３）　、Ｐ、　　Ｌｅｃｈｔｋｅｎ　：　Ｃ ｈｅｍ、　　Ｂｅｒ、　　１０９　、　２８６２（１９７６）、及びＰ、　Ｄ、 　Ｂａｒｔｅｔｔ　ａｎｄ　Ｍ、　Ｓ、　Ｈｏ　：　Ｊ。
Ａｍｅｒ、　　Ｃｈｅｍ、　　Ｓｏｃ、　　　９６．　　６２７　　（１９７４ ）　　）　　。
ジオキセタン類の安定性と化学発光効率は、特定の置換基をペルオキシド環に付 加することによって変更することができる（Ｋ、　Ａ、　Ｚａｋｌｉｋａ、　Ｔ 、　Ｋ１５ｓｅｌ、　Ａ、　Ｌ、　Ｔｈａｙｅｒ。
Ｐ、　Ａ、　　Ｂｕｒｎｓ、　ａｎｄ　Ａ、　Ｐ、　　５ｃｈａａｐ　：　Ｐｈ ｏｔｏｃｈｅｍ、　　Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ。
３０、　３５　　（１９７９）　、Ａ、Ｐ、　５ｃｈａａｐａｎｄＳ、　Ｇａｇ ｎｏｎ：Ｊ、　Ａｍｅｒ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　　１０４．　３５０４　（ １９８２）、Ａ、　Ｐ、　５ｃｈａａｐ、　Ｓ＋Ｇａｇｎｏｎ、　ａｎｄ　Ｋ、 　Ａ、　Ｚａｋｌｉｋａ　：　ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ、、２９４３　 （１９８２）、及びＲ，Ｓ、Ｈａｎｄｌｅｙ、　Ａ、　Ｊ。
５ｔｅｒｎ、　ａｎｄ　Ａ、Ｐ、５ｃｈａａｐ　：　　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ 　Ｌｅｔｔ、　、　３１８３（１９８５））。次に示す二環式系についての結果 は、ジオキセタン類の特性に対する種々の官能基の有意義な効果を例証している 。すなわち２．３−ジアリール−１，４−ジオキセタンから誘導されたヒドロキ シ置換ジオキセタン（Ｘ＝ＯＨ）は、常温（２５℃）での分解による半減期が５ ７時間であり、加熱による昇温下で非常に低いレベルの蛍光を発生する。しかし 対照的に、このジオキセタンを一３０℃で塩基と反応させると暗所で視認できる 青い光の閃光を発生する。動力学的な研究によって脱プロトン化したジオキセタ ン（Ｘ＝Ｏわが２５℃におき、プロトン付加型（Ｘ＝ＯＨ）よりも５．７Ｘ１０ ’倍も速く分解することが示されている。
Ｘ＝０−（化学発光性） Ｘ＝ＯＨ（非化学発光性） これらの２つのジオキセタンの特性の差異は、分解についての２つの拮抗する機 序に由来する　（Ｋ、Ａ。
Ｚａｋｌｉｋａ、　Ｔ、　Ｋ１５ｓｅｌ、　Ａ、　Ｌ、　Ｔｈａｙｅｒ、　Ｐ、 　Ａ、Ｂｕｒｎｓ、　ａｎｄ　Ａ、Ｐ。
５ｃｈａａｐ　：　Ｐｂｏｔｏｃｈｅｍ、　　Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ、　　３０　 、　３５　　（１９７９）、Ａ、　Ｐ、　　５ｃｈａａｐ、　Ｓ、　　Ｇａｇｎ ｏｎ、　ａｎｄ　Ｋ、　Ａ、　　Ｚａｋｌｉｋａ　：　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ　、　２９４３　　（１９８２）　、及びＲｏＳ、　Ｈａｎｄｌｅｙ、 　Ａ、　Ｊ。
５ｔｅｒｎ、　ａｎｄ　Ａ、　Ｐ、　　５ｃｈａａｐ、　　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒ ｏｎ　　Ｌｅｔｔ、、　　３　１　８３（１９８５））。たいていのジオキセタ ンは、Ｏ−０結合のホモリシス及びビラジカルの形成を含む過程によって開裂す る。開裂に関する別の機序は、０−のように低い酸化電位を有する置換基を持つ ジオキセタンについてのものである。すなわち開裂は、置換基からペルオキシド 結合の反結合軌道への分子内電子移動によって開始せしめられる。
６、安定な１，２−ジオキセタン類の化学的な誘発・・・発明者らは最近、熱的 に安定なジオキセタン類を必要に応じ化学的及び酵素的な方法で誘発できること を発見した（１９８６年７月１５日付のＡ、Ｐ、５ｃｈａａｐによる米国特許出 願Ｎα８８７，１３９、Ａ、　Ｐ、　５ｃｈａａｐ、　Ｒ、Ｓ、　Ｈａｎｄｌｅ ｙ。
ａｎｄ　Ｂ、　Ｐ、　Ｇｉｒｉ　：　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、　９ ３５　　（１９８７）、Ａ、Ｐ、　５ｃｈａａｐ、　Ｔ、　Ｓ、　Ｃｈｅｎ、　 Ｒ，Ｓ、Ｈａｎｄｌｅｙ、　Ｒ，ＤｅＳｉｌｖａ、　ａｎｄＢ、Ｐ、　　Ｇｉｒ ｉ　　：　　　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　　Ｌｅｔｔ　、　　１　１　５　５　 　　（１９８７）　　、及びＡ、　Ｐ、　５ｃｈａａｐ、　Ｍ、　Ｄ、　５ａｎ ｄｉｓｏｎ、　ａｎｄ　Ｒ，Ｓ、　Ｈａｎｄｌｅｙ　：Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ 　Ｌｅｔｔ、　　１１５９　　（１，９８７）　）　ｏこれを行なわせるため発 明者らは、次のような鍵となる特徴をもつジオキセタン類を製造するための新規 な合成法を開発した：（１）スピロ結合アダマンチル基の安定化作用を、常温で 数年間の「貯蔵寿命（ｓｈｅｌｆ　１ｉｆｅ）Ｊをもつジオキセタン類を提供す るのに利用した。（２）安定化されたジオキセタンの化学発光分解を誘発するた めの新しい方法を提供した。
必要なアルケン類はＴＨＦ　　（テトラヒドロフラン）中で三塩化チタン／ＬＡ 、Ｈ（水素化アルミニウムリチウム）を用い、２−アダマンタノンを芳香族エス テル類またはケトン類と反応させることによって製造される（Ａ、Ｐ、５ｃｈａ ａｐによる１９８６年７月１７日付の米国特許出願Ｎα８８７，１３９）。これ は、マクマリ−（ＭｃＭｕｒｒｙ）法を用いてジビニルエーテル類を生成するた めのケトン類とエステル類の分子間縮合についての最初の報告である。マクマリ −はかつてケトンとエステルの官能基の分子内反応について研究したが、この方 法によっては環式ケトン類が製造されジビニルエーテル類は製造されていない（ Ｊ、　Ｅ、　ＭｃＭｕｒｒｙ　ａｎｄ　Ｄ、　Ｄ。
これらのジビニルエーテル類を光酸化すると、所望の熱安定性をもち取扱いが容 易であるジオキセタン類が提供される。例えば次に掲げるジオキセタンは、活性 化エネルギーが２８　、４　ｋｃａ１１モルで２５°Ｃでの半減期が３．８年で ある。０−キシレン中での本ジオキセタン試料は研究室のベンチの上に放置して おいて数か月間、検出可能な分解を示さないままに残された。
しかしながらこのジオキセタンの化学発光分解を都合良く常温で、シリル基保護 マスクをフッ化物イオンを用いて除去し不安定なアリールオキシドを生成させる ことにより誘発でき、生成されたアリールオキシドは開裂して強い青色光を生じ る。アリールオキシド置換ジオキセタンの半減期は、２５°Ｃで５秒である。Ｄ ＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）中での化学発光からのスペクトルは４７０ｎｍ で極大を示したが、これは本条件下でのエステル開裂生成物（３−ヒドロキシル 安息香酸メチル）の化学発光及び費消ジオキサン溶液の発光と一致する。アダマ ンタノン発光に由来する化学発光は、何ら生ぜしめられないようである。フッ化 物で誘発した分解の化学発光量子収率をルミノール対照標準と対比して測定し、 ０．２５を得た（化学発光効率でいうと２５％）。本条件下でのエステルの発光 量子収率（Φ、＝０．４４）を用い補正して、−重項励起のエステルの生成効率 が５７％と求められた。この値は、研究室で調製されたジオキセタンについてこ れ迄報告されたものの中で最も高い一重項化学励起効率である。
一重項励起 １．２−ジオキセタン類の酵素的誘発 酵素を包含する免疫測定及びＤＮＡプローブ等の生物学的アセ−は、酵素と反応 すると色を形成する（クロモゲン性）か或は蛍光を発生する（蛍光性）様々な基 質を利用する。誘発法に関する発明者らの研究の一部として、発明者らは化学発 光性の酵素基質として機能しつる最初のジオキセタン類を開発した（Ａ、Ｐ。
５ｃｈａａｐ　：米国特許出願ｔＪα８８７．１３９、Ａ、　Ｐ、　５ｃｈａａ ｐ、　Ｒ，Ｓ。
Ｈａｎｄｌｅｙ、　ａｎｄ　Ｂ、　Ｐ、　Ｇｉｒｉ　：　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏ ｎ　Ｌｅｔｔ、　、　９３５（１９８７）、Ａ、　Ｐ、　５ｃｈａａｐ、　Ｔ、 　Ｓ、　Ｃｈｅｎ、　Ｒ，Ｓ、　Ｈａｎｄｌｅｙ、　Ｒ，ＤｅＳｉｌｖａ、　ａ ｎｄＢ、　Ｐ、　Ｇｉｒｉ　：　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ　、　１１ ５５　　（１９８７）、及びＡ、　Ｐ、　５ｃｈａａｐ、　Ｍ、　Ｄ、　５ａｎ ｄｉｓｏｎ、　ａｎｄ　Ｒ，Ｓ、　Ｈａｎｄｌｅｙ　：ｎ膿地知占山曲、１１５ ９　　（１９８７）。生物学的な組成中でこれらの過酸化物を使用するためには 、酵素反応の温度で熱的に安定であり水性緩衝液中で迅速に自発分解しないジオ キサン類が必要となる。先に述べたスピロ結合アダマンチルジオキサン類は、か かる要求を満たす。そこで発明者らは、酵素的に修正されてアリールオキシド形 を生成しつる官能基をもつ１，２−ジオキセタン類を作製した。この不安定な中 間体の分解によって蛍光が発生する。アリールニスラーゼ、アセチルコリンエス テラーゼ及びアルカリホスファターゼを含む種々の酵素によって分解反応を誘発 できるジオキセタン類を合成した。ホスファターゼ試料は、この酵素が酵素結合 免疫測定において広く用いられていることからして特に有意義である。
安定 例えば、アルカリホスファターゼによる酵素的な分解誘発が、３−ヒドロキシ− ９Ｈ−キサンチン−９−オンと２−アダマンタノンとから誘導したリン酸塩置換 １，２−ジオキセタンについて認められた。このジオキセタンは熱的に安定であ り、３０．７ｋｃａ１１モルの活性化エネルギーと２５°Ｃでの１２年間の半減 期を有する。本ジオキセタンは有機溶媒中で安定であるだけではなく、水性緩衝 液中で極（ゆっくりとした自発分解しか行なわない。
ウシの腸粘膜［３，２Ｍの（ＮＨ４）２　ＳＯ２中に１　ｍｌあたり５　、３　 ｍｇのタンパク質（１１００単位／　ｍｇタンパク質）の懸濁液〕とリン酸塩保 護のジオキセタンを用い、０．７５Ｍの２−アミノ−２−メチル−１−プロパツ ール緩衝液中においてｐＨ１０，３で誘発実験を実施した。リン酸塩−ジオキセ タン貯蔵溶液の５０μβ画分（０，０１３μｍｏｌ）を３７℃で３　ｍｌの緩衝 液に加えて、ジオキセタンの最終濃度を４．２　Ｘ　１０−’Ｍとした。この溶 液にアルカリホスファターゼｔｍｌ（タンパク質の最終濃度＝１．８μｇ／ｍｌ ）を注入すると、化学発光が突発し３分間で減衰した。この期間中、緩衝液中の ジオキセタンのゆっくりとした非酵素的加水分解に基づく発光によるバックグラ ンドは、酵素的過程で生ぜしめられる発光の僅かに０．２％量であった。合計の 光放出量は、ジオキセタンの濃度に直線的に依存することが認められた。光放出 の減衰速度は酵素濃度の関数であり、他方、合計の光放出量は酵素濃度に無関係 である。ホスファターゼによる触媒分解についての化学発光スペクトルを、緩衝 溶液中において常温で試験して測定した。この化学発光スペクトルを費消反応混 合物の蛍光スペクトル及び緩衝液中のヒドロキシキサンタノン開裂生成物の蛍光 スペクトルと比較して、光放出がジオキセタン中のリン酸基の酵素的開裂によっ て誘発されて不安定なアリールオキシドジオキセタンが産成され、それがヒドロ キシセタノンの一重項励起アニオンを生じさせることが示された。
初の例は前述した雑文（Ａ、　Ｐ、　５ｃｈａａｐ　ａｎｄ　Ｓ、　Ｇａｇｎｏ ｎ　：Ｊ、　Ａｍｅｒ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　　１０４．　３５０４　　（ １９８２））に記載されている。しかしヒドロキシ置換ジオキセタン及びジアリ ール−１，４−ジオキセタンから誘導された他のどのようなジオキセタンも、あ まりに不安定すぎて如何なる用途にも使用できない。これらのジオキセタンは２ ５°Ｃで只の数時間の半減期をもつに過ぎない。ジオキセタンだけでなくその前 駆体アルケーンも、誘導体を生成するのに必要な条件をのり切れない。
さらにこれらの非安定化ジオキセタン類は少量のアミン（Ｔ、　Ｗｉｌｓｏｎ、 　Ｉｎｔ、Ｒｅｖ、　Ｓｃｉ、　：　Ｃｈｅｍ、　、　Ｓｅｒ、Ｔｗｏ、　９　 。
２６５　　（１９７６））及び金属イオン（Ｔ、　Ｗｉｌｓｏｎ、　Ｍ。
Ｅ、Ｌａｎｄｉｓ、　Ａ、　Ｌ、　Ｂａｕｍｓｔａｒｋ、　ａｎｄ　Ｐ、　Ｄ、 　Ｂａｒｔｌｅｔｔ　：　Ｊ、Ａｍｅｒ。
Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　　９５　、　４７６５　　（１９７３）　、及びＰ、　 Ｄ。
Ｂａｒｔｌｅｔｔ、　Ａ、　Ｌ、　Ｂａｕｍｓｔａｒｋ、　ａｎｄ　Ｍ、　Ｅ、 　　Ｌａｎｄｉｓ　：　Ｊ、　Ａｍｅｒ。
Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、９６．５５５７　　（１９７４））により破壊され、酵素に よる誘発のために必要な水性緩衝液中で用いえなかった。
安定化ジオキセタン類についての化学的な誘発に関する唯一の例は前述特許出願 （Ａ、Ｐ、５ｃｈａａｐ　：米国特許出願Ｎａ　８８７，１３９）　、及び−雑 文（Ａ、　Ｐ、　５ｃｈａａｐ、　Ｔ、　Ｓ。
Ｃｈｅｎ、　Ｒ，Ｓ、　Ｈａｎｄｌｅｙ、　Ｒ，ＤｅＳｉｌｖａ、　ａｎｄ　Ｂ 、　Ｐ、　Ｇｉｒｉ、　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎし隻、１１５５　（１９８７） ）において報告されている。これらのジオキセタン類は数年間の熱的半減期を有 するが、必要に応じ有効な化学発光を生じさせるように誘発可能である。
（ｂ）　　ジオキセタン類の酵素的な誘発ニジオキセタン類の酵素的な誘発例は 前述特許出願（Ａ、Ｐ、　５ｃｈａａｐ　：米国特許出願Ｎ（Ｌ　８８７，１３ ９）　、及び雑文（Ａ、　Ｐ、　５ｃｈａａｐ。
Ｒ，Ｓ、　Ｈａｎｄｌｅｙ、　ａｎｄ　Ｂ、　Ｐ、　Ｇｉｒｉ　：　Ｔｅｔｒａ ｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、　、　　９３５（１９８７）　、及びＡ、　Ｐ、　５ ｃｈａａｐ、　Ｍ、　Ｄ、　５ａｎｄｉｓｏｎ、　ａｎｄ　Ｒ８，Ｈａｎｄｌｅ ｙ、　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、　、　１１５９　　（１９８７）　 ）に記載されている。
（Ｃ）　　均質溶液中でのジオキセタン類を包含するエネルギー移動化学発光： ジオキセタン類を包含するエネルギー移動化学発光に関する最初の例は、ウィル ソン（Ｗｉｌｓｏｎ　）及びシャープ（５ｃｈａａｐ　）によって報告された（ Ｔ、　Ｗｉｌｓｏｎ　ａｎｄ　Ａ、Ｐ、　５ｃｈａａｐ　：　Ｊ、　　Ａｍｅｒ 、　　Ｃｂｅｍ、　　Ｓｏｃ。
９３．４１２６　　（１９７１））。極めて不安定なジオキセタン（シス−ジェ トキシジオキセタン）を熱分解することにより、−重項励起及び三重項励起の両 者のギ酸エチルが生じた。９，１ｏ−ジフェニルアントラセンと９，１０−ジブ ロモアントラセンを付加することによって、−重項一一重項エネルギー移動及び −重項一三重項エネルギー移、動によりそれぞれ増強された化学発光が生じた。
本技術は次いで数多くの他の研究者らにより、各種のジオキセタン類の熱分解に よって生ぜしめられる化学励起生成物の収率を測定するのに利用すｔＬ　タ（例 エバＷ、Ａｄａｍ、　Ｉｎ　Ｑ県可堡し凹土工色回ホ辺。
Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｅｘｃｉｔｅｄ　５ｔａｔｅｓ、　Ｗ、　Ａｄａ ｍ　ａｎｄ　Ｇ、　Ｃ１１ｅｎｔｏ、編。
Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　１９８２年発行、第４ 章参照）。
１９８７年７月２７日に出願されたエイ、　　ポールシャープ（Ａ、　Ｐａｕｌ 　５ｃｈａａｐ）の米国特許出願Ｎ（Ｌ２２４，６８１は蛍光体を、誘発可能な ジオキセタン類と共に用いることについて述べている。
しかしながら均質溶液中でのエネルギー移動は、電子的な励起状態にあるジオキ セタンの半減期が短いことからして高濃度のエネルギー受容体を必要とする。
かかる高濃度はセルツクエンチング（自己消光）と再吸収といった問題を生じさ せる。この発明はこの問題点を、ジオキセタンの誘発により生じる励起生成物に 対し化学的に結合或は束縛された蛍光体を用い、これによって基体溶液中に高濃 度の蛍光体を用いる必要性を無くすことで、解決するものである。
セタンに対し化学的に結合或は束縛された蛍光性のエネルギー受容体について述 べている文献は、見当らない。分子内エネルギー移動を利用した化学発光増強の 唯一の例は、ルミノール系に関するホワイト（Ｗｈｉｔｅ）の業績において見出 すことができる（Ｍ、　Ａ、Ｒｉｂｉ、　Ｃ，Ｃ。
Ｗｅｉ、　ａｎｄ　Ｅ、Ｈ，Ｗｈｉｔｅ　：　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　２８． 　４８１（１９７２）及びそれに挙手の参考文献参照）。化学発光は、フタル酸 ヒドラジドの化学酸化により電子的に励起したフタラードイオンが生成され、次 いで付着の蛍光性基へのエネルギー移動が生じることにより生じしめられる。
これらの過程にはジオキセタン類は含まれていない。
の化学発光収率を、６−ヒドロキシベンゾチアゾール誘導体またはパラ置換フェ ノールの添加によって高める方法がある　（Ｇ、Ｈ，Ｇ、　Ｔｈｏｒｐｅ、　Ｌ 、　Ｊ、　　Ｋｒ１ｃｋａ、　Ｓ、　Ｂ。
Ｍｏ５ｅｌｅｙ、　Ｔ、　Ｐ、　Ｗｈｉｔｅｈｅａｄ　：　Ｃ１１ｎ、　Ｃｈｅ ｍ、　　３１　、　１３５５（１９８５）　、Ｇ、　Ｈ，Ｇ、　　Ｔｈｏｒｐｅ 、　ａｎｄ　Ｌ、　　Ｊ、　　Ｋｒ１ｃｋａ　：Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚ ｙｍｏｌｏｇｙ　１３３　、　３３１　　（１９８６）、及びり、　Ｊ、　Ｋｒ １ｃｋａ、　Ｇ、　Ｈ，Ｇ、　Ｔｈｏｒｐｅ、　ａｎｄ　Ｒ，Ａ、　Ｗ、　５ｔ ｏｔｔ　：Ｐｕｒｅ＆Ａｐｐ１．Ｃｈｅｍ、５９．６５１　（１９８７）　）　 。収率向上の機序は知られていないが、化学的に付加した蛍光体に関連する分子 内エネルギー移動を伴なうようなものではない。
発明課題 したがってこの発明の目的とするところは、束縛された蛍光体分子への分子内エ ネルギー移動を生じさせる新規なジオキセタン類を提供するにある。この発明は また、かかる新規なジオキセタン類の製造方法を提供することも目的とする。こ れら及び他の目的は、以下に述べる説明と図面を参照することによって極く関東 １−６図はそれぞれ、横軸に波長（ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ）をとって表した発光 スペクトルを示すグラフであり、このうち第１図のグラフにおいて曲線Ａ（破線 ）はＤＭＳＯ中でフッ化物を用いジオキセタン２ｂを化学的に誘発して得られた 直接化学発光のスペクトル（λｍａＸ”４７０　ｎｍ）を示し、曲線Ｂ（破線） はＤＭＳＯ中でフッ化物を用い束縛ジオキセタン４ｂを化学的に誘発して得られ たエネルギー移動化学発光のスペクトル（λｍａｘ＝　５０８　ｎｍ）を示して いる。
第２図において曲線Ａ（実線）はＤＭＳＯ中でフッ化物を用い束縛ジオキセタン ４ｂを化学的に誘発して得られた化学発光スペクトル（λｍａｘ＝　５０８　ｎ ｍ）を示し、曲線Ｂ（破線）は同様の条件下での開裂生成物の蛍光スペクトルを 示している。
第３図において曲線Ａ（破線）は水中でＮａＯＨを用いジオキセタン２ｂを化学 的に誘発して得られた化学発光のスペクトル（λｍａｘ＝　４７０　ｎｍ）を示 し、曲線Ｂ（実線）は水中でＮａＯＨを用い束縛ジオキセタン４ｂを化学的に誘 発して得られたエネルギー移動化学発光のスペクトル（λｍａｘ＝　５５０　ｎ ｍ）を示している。
第４図において曲線Ａ（破線）は２２１緩衝液（ｐＨ＝　９．２　）中でアリー ルエステラーゼを用いジオキセタン２ｂを酵素的に誘発して得られた直線化学発 光のスペクトル（λｍａｘ＝　４７０　ｎｍ）を示し、曲線Ｂ（実線）は２２１ 緩衝、液（ｐＨ＝９．２）中でアリールエステラーゼを用い束縛ジオキセタン４ ｂを酵素的に誘発して得られたエネルギー移動化学発光のスペクトル（λｍａｘ ＝　５１９　ｎｍ）を示している。
第５図において曲線Ａ（実線）は２２１緩衝液（ｐＨ＝９．２）中でアリールエ ステラーゼを用い束縛ジオキセタン４ｂを酵素的に誘発して得られた化学発光ス ペクトル（λｍａｘ＝　５１９　ｎｍ）を示し、曲線Ｂ（破線）は同様の条件下 での開裂生成物の蛍光スペクトルを示している。
第６図において曲線Ａ（実線）はリン酸塩緩衝液（ｐＨ＝７．２）中で束縛ジオ キセタン８をβ−ガラクトシダーゼを用い酵素的に誘発し、次いでルミネッセン スを誘起するように１０　Ｎ　　ＮａＯＨを添加して得られた化学発光のスペク トルを示し、曲線Ｂ（破線）は同様の条件下での開裂生成物の蛍光スペクトルを 示してこの発明は次のようなジオキセタン化合物、すなわち一般式 〔式中ＲＩ、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ炭素を含み、且つ、光の生成を許容する酸 素、チッ素或は硫黄を含んでいてもよい基であり、Ｒ，、Ｒ２及びＲ３のうちの １つの基は約４００−９００ナノメートルの間の蛍光を発生する束縛された蛍光 体分子を含み、Ｒ５とＲ２とは互に結合していてもよ（、Ｒ３とＡｒ０Ｘとは互 に結合していてもよく、Ｘは易除去性の基である。〕で表され、基Ｘを除去する 活性化剤と反応させると分解して一般式 で表されるアリールオキシドを形成し、このアリールオキシドが自発的に分解し て一般式 で表される化合物を形成し、また上記した蛍光体分子含有基中の蛍光体分子がア リールオキシドの分解時に活性化されて光を生成するものであるジオキセタン化 合物に係る。
またこの発明は次のようなジオキセタン化合物、すなわち一般式 〔式中Ｐｏ１ｙは６−３０個の炭素原子を含み、且つ、酸素及びチッ素を含んで いてもよいスピロ結合多環式アルキレン基であり、Ｆは４００−９００ナノメー トルの間の蛍光を発生する蛍光体分子を含む基であり、ｙは１−１４の間の整数 であり、Ｘは易除去性の基である。〕 で表され、活性化剤により基Ｘを除去するとジオキセタン化合物のオキシド中間 体を形成し、この中間体が自発的に分解して基Ｆに由来する光と一般式で表され るカルボニル含有分子とを形成するジオキセタン化合物に係る。
特にこの発明はＯＸ基がアセトキシ基、ヒドロキシル基、○−ガラクトピラノシ ド基、またはリン酸塩である化合物に係る。
蛍光体分子は蛍光染料と、ベンゼン誘導体、ナフタレン誘導体、アントラセン誘 導体、ピレン類或はビフェニル類を含む芳香族化合物と、アクリジン、クマリン 類、キサンチン類、フタロシアニン類、スチルベン類、フラン類、オキサゾール 類、ベンゾチアゾール類、フルオレセイン類、ローダミン類、エオシン類、レゾ ルシン類、及びキノリン類から成る群から選択する　ことができる。蛍光体分子 は、約４００−９００ナノメートルの範囲内の蛍光が附与されるように選択する 。
一般式 〔式中Ｒ，Ｒ，は光の生成を許容し、且つ、互に結合していてもよい基であり、 ｙは１−１４の間の整数であり、Ｆは蛍光体分子基であり、Ｘは易除去性の基で ある。〕 で表され、活性化剤により基Ｘを除去するとジオキセタン化合物のオキシド中間 体を生成し、その中間体が自発的に分解して基Ｆに由来、する光を発生するジオ キセタン化合物を製造する方法において、好ましいの〔式中Ｚは反応性の基であ る。〕 で表される化合物（ｎ）を有機溶媒中で、式ＦＡ〔式中ＡはＺと反応性の基であ る。〕で表される化合物と反応させて一般式 〔式中Ｂは基Ｘまたは基Ｘに転換できる基で、光酸化反応性を有しないものであ る。〕 で表される化合物（ＩＩＩ）を形成し、（ｂ）　　この化合物（ＩＩＩ）と酸素 を反応させて一般式で表されるジオキセタンを形成するといった方法である。Ｒ とＲ１は互に結合して６−３０個の炭素原子を含む多環基を形成しているのが好 ましい。ＯＢ　（またはＯＸ）基はアセトキシまたは他のアルキル或はアリール エステル基、リン酸或は他の無機オキシ酸の塩、アルキル或はアリールシリルオ キシ基、ヒドロキシル基、β−ガラクトピラノシル等のようなピラノシド酸素で １．２−ジオキセタン化合物の合成の概要を以下に機器分析 核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルは特に断っていない限り、内標準としてのテト ラメチルシランを有するＣＤ　ＣＬ中の溶液としてＮ１ｃｏｌｅｔ　Ｎ　Ｔ　３ ００　　（商標名）またはＧｅｎｅｒａｌ　Ｅｌｅｃｔｒｉｃ　Ｑ　Ｅ　３００ 　（商標名）を用いて得た。赤外線（Ｉ　Ｒ）スペクトルはＮ１ｃｏｌｅｔ　（ 商標名）またはＢｅｃｋｍａｎ　Ａｃｃｕｌａｂ　８　（商標名）分光計を用い て得た。質量スペクトルはＫｒａｔｏｓ　（商標名）またはＡＥＩＭＳ−９０（ 商標名）分光計を用いて得た。紫外線及び可視光線の吸収スペクトルは、Ｖａｒ ｉａｎ　Ｃａｒｙ　２１９（商標名）分光光度計を用いて得た。蛍光スペクトル は５ｐｅｘ　Ｆｌｕｏｒｏｌｏｇ　　（商標名）蛍光分光光度計で記録した。化 学発光スペクトルは５ｐｅｘ　Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｅｒ（商標名）を用いて測定 した。化学発光の動力学的な測定及び量子収率の測定は、研究室で組立てた蛍光 光度計を用いて行なった。本装置は、−７８℃に冷却されたＲＣＡＡ−３１０３ ４Ａヒ化ガリウム増倍型光電管と０ｒｔｅａ光子計数用電子計数器を備え、Ａｐ ｐｌｅ−Ｉ　Ｉｅ　（商標名）及びＭａｃｉｎｔｏｓｈ　（商標名）コンピュー タに結び付ける。
元素分析はアメリカ合衆国、インディアナポリスのＭｉｄｗｅｓｔ　Ｍｉｃｒｏ ｌａｂｓが行なった。融点はＴｈｏｍａｓ　Ｈｏｏｖｅｒ（商標名）毛管溶融装 置で測定し、補正していない。
精密質量は、Ｃａｈｎ　ｍｏｄｅｌ　４７００　　（商標名）電子天秤を用いて 測定した。
材　　　料 ０−キシレンはＢｕｒｄｉｃｋ　ａｎｄ　Ｊａｃｋｓｏｎ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒ ｉｅｓから入手し、入手した状態のままで動力学的及び分光学的測定のために使 用した。無水のＤＭＦ及びＤＭＳＯは、水素化カルシウムから真空蒸留により得 た。酸化シュウチリウム、１，４−ジオキサン−ｄｏ、クロロホルム−ｄｌ及び 他の化学試薬は、Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、から購入した。ア リールエステラーゼの試料は、ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、から購入し た。シリカ、アルミナ及び他の固体担体は種々の市販源から入手し、さらに精製 することなく使用した。
米国特許出願Ｎα２２４，６８１に記載したのと同様に合成した。５００　ｍｌ のフラスコに還流冷却器、１２５ｍ１の滴下漏斗、及び窒素供給管を取付けた。
装置を熱風吹付は及び窒素による駆除で乾燥させた。乾燥ＴＨＦ（４０ｍｌ）を 加え、フラスコを水浴中で冷却した。
ＴｉＣ１ｓ（１、５ｇ、　　１０ミリモル）を迅速に加え、次いでＬＡＨ（０， １９ｇ、　　５　ミリモル）を撹拌しながら滴下した。冷却浴を取去り、黒色の 混合物を室温にまで放置して暖まらせた。次にトリエチルアミン（０，７ミリ。
５ミリモル）を撹拌した懸濁液に加えて、１５分間遠流した。その後に乾燥ＴＨ Ｆ２０ｍｌ中の３−ヒドロキシ安息香酸メチル（１５２ｍｇ、　　１　ミリモル ）及び２−アダマンタノン（３００ｍｇ、　　２ミリモル）の溶液を還流中の混 合物に対し、１５分間をかけて１滴ずつ加えた。還流をさらに１５分間継続し、 その後で反応物を室温にまで冷却して１００ｍ１の蒸留水で希釈した。
この水溶液を、３　Ｘ　５０　ｍ１部の酢酸エチルで抽出処理した。有機性層を 水で清浄し、Ｍｇ５Ｏ，上で乾燥させ、濃縮した。１５％の酢酸エチル／ヘキサ ンを用いるシリカ上でのクロマトグラフィーにより、２４０ｍｇ（８９％）のヒ ドロキシアルケン１ａを白色の固体として得た。融点１３３−４℃。’ＨＮＭＲ （ＣＤＣＩり６１．６４−１．９６　　（ｍ、１２Ｈ）　、２ｔ６５　　（Ｓ。
ＩＨ）　、３．２４　　（Ｓ、ＩＨ）　、３．３２　　（Ｓ、３Ｈ）、５．２５ 　　（ｓ、　　Ｉ　Ｈ，Ｄ２０でＯＨ交換）、６．７０−７、３０　（ｍ、　　 ４　Ｈ）　、　＋３Ｃ１’？ＭＲ（ＣＤＣ１３）δ２８．４５．３０．３６．３ ２．３６．３７．３０．３９．１８．３９．３３．５７．８２．１１４．６０． １１６，１６．１２２、１９．１２９．２４．１３７，２４．１５５．６２゜Ｍ Ｓｍ／ｅ（相対強度）２７１　　（２０，Ｍ＋）、２７０（１，００，Ｍ）、２ ５３　　（７，３）、２１３（３５，１）、１２１　　（４１，７）　、９３　 　（９，４）。精密質量：計算値２７０．１６１９、実測値２７０．１６１６゜ たように合成した。ヒドロキシアルケン１ａ（０，７５ｇ、２．８ミリモル）を 、Ｎ２雰囲気中で１０ｍ１のＣＨ、Ｃ１２及びピリジン（５，２ｇ、６５．８ミ リモル）中に溶解した。溶液を水浴中で冷却し、１　ｍｌのＣＨ２Ｃｌ、中の塩 化アセチル（２，６ｇ、３３ミリモル）溶液を注射器で１滴ずつ加えた。０℃で ５分間たった後で、２０％酢酸エチル／ヘキサンを用いるシリカ上でのＴＬＣ（ 薄層クロマトグラフィー）により、１ａの完全なアセチル化が示された。溶媒を 除去した後、固体残分を３０ｍ１のエーテルで洗浄した。エーテルを３　Ｘ　２ ５　ｍｌの水で洗浄し、Ｍｇ５Ｏ，上で乾燥させ、蒸発乾固した。製品をシリカ 上で２０％の酢酸エチル／ヘキサンを用いてクロマトグラフィー処理し、０．４ ５ｇの１ｂを油状物として得た。　□ＨＮＭＲ（ＣＤＣＩ、）δ１．７９−１． ９６（ｍ、　　１２Ｈ）、２．２７　（Ｓ、　　３Ｈ）、２．２６　（Ｓ。
ＩＨ）、３．２６　（ｓ、ＩＨ）、３．２９（ｓ、３Ｈ）、６．６９−７．３６ 　　（ｍ、４Ｈ）、”ＣＮＭＲ（ＣＤＣ１３）δ２０，９０、２８．１３、３０ ．０７、３１．９９．３６．９９、３８，８９、３９．０１、５７，５９．１２ ０．３４．１２２．１４．１２６．５５．１２８．６６．１３２．１９．１３６ ．９０．１４２，５９．１５０．４２．１６９．０４゜ＭＳｍ／ｅ、（相対強度 ）３１２（１００゜Ｍ）、２７０　　（２５）、２５５　　（１９，３）、２１ ３（２０，７）　、１６３　　（１２，２）　、１２１（３０，７）、４３（３ ０）。ＩＲ３００６，２９２５，２８５６，１７２５，１６００，１４３８，１ ３６２，１２１８，１０００ｃｍ−’。Ｃ，ＨｕＯ，の分析：計算値Ｃ７６，９ ２、Ｈ７，６９、実測値Ｃ７６，９６、Ｈ７，８５゜［（３−（β−Ｄ−ガラク トピラノシル）フェニル）メトキシメチレン〕アダマンタン（ＩＣ）〔（３−ヒ ドロキシフェニル）メトキシメチレン〕アダマンタン（ｌａ）（０，４６２ｇ、 １．１２ミリモル）を、少量の１０モルＫＯＨを含む極小量のアセトン中に溶解 した。溶液を１５分間撹拌した後でこのアルケン溶液に、臭化２，３，４．６− テトラ−０−アセチルーβ−Ｄ−ガラクトピラノシルのアセトン溶液を混合した 。室温で１晩放置して反応を進行させた。
次にアセトンを蒸発させ、液状スラリー分を水で洗浄し酢酸エチルを用い抽出処 理した。酢酸エチル留分をまとめて水で抽出処理し、Ｍｇ５Ｏ，を用いて乾燥さ せ、次いで蒸発乾固した。固体生成物をメチレン／ヘキサン混合物から再結晶さ せ、０．１０３ｇ（０，２３８ミリモル、６２％）の淡黄色固体を得た。’ＨＮ ＭＲ（ジオキサン−ｄＳ）６１．７５−１．９５（ｍ、１２Ｈ）、２．６０　　 （Ｓ、　　ＩＨ）　、２．７９　（Ｓ、ＩＨ）　、３．２６（Ｓ、　　３Ｈ）　 、３．６２−３．８１　（ｍ、　　４Ｈ）　、４．０６（ｄ、ＩＨ）　、４．３ ７　　（ｄ、ＩＨ）　、４．８６　　（ｄ。
ＩＨ）、６．９３−７．２７　　（ｍ、４Ｈ）、”ＣＮＭＲ（ジオキサン−ａｍ ）δ１３．５９．２２．４８．２８．４５．３０，１９．３１．４７．３２．３ １．３７．１３．３８．９３．３９．０８．５６．９１．６１．４２．６８．９ ２．７１．３９．７３．９４．７５．８４．１００．８７．１１５．２８．１１ ７．１１．１２３．０１．１２８．９３．１３１，０３．１３６．９８．１４３ ．７４．１５７，５６゜Ｍ　Ｓ　ｍ／　ｅ　（相対強度）４３２　（１５）、２ ７０　（１００）、２１３（１０）、１０１　　（１７）、８３　（１３）、５ ９　　（４７）、４３（９６）。
無水塩酸ピリジニウム（３４，０ｇ、　０．２９４モル）と２−シアノ−６−メ ドキシーベンゾチアゾール（Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、製、３ ．０ｇ、　０．０１６モル）を、油浴中で１００℃に予熱した５　００　ｍｌの 丸底フラスコ中に加えた。浴温を１９０℃まで上昇させ、この温度で反応混合物 を２時間還流した。反応の完結後に室温まで冷却して黄色の固体を得、それをメ タノールに溶解した。この溶液にシリカを加えて蒸発乾固した。次にそれを３０ ％の酢酸エチル／ヘキサンを用いてクロマトグラフィー処理し、製品を２．７ｇ の白色の固体として得た（９５％）。融点１２０℃。’ＨＮＭＲ（ＣＤ、ＣＤ） ６５．６８　　（ｂＳ、　　ＩＨ）　、８．００２−８ｙ８２（、３Ｈ）　。’ ＣＮＭＲ（ＣＤ３０Ｄ）δ１０６．９６．１１４．２６．１１９．５９．１２６ ．５３．１３３．８３．１３８．９３．１４７．２５．１６０．２３゜ＭＳｍ／ ｅ（相対強度）１７６　　（１００）　、１５１　　（３）、１２４　　（５） 、９６　　（１５）、８５　　（４）、６９（７）、５７（５）。精密質量二計 算値１７６．００４４、実測値１７６．００４７゜ 無水のメタノール（３０ｍｌ）をＨＣＩで、乾燥ＨＣＩを１０分間通すことによ って飽和させた。この溶液に２−シアノ−６−ヒドロキシベンゾチアゾール（０ ，４７５ｇ、０．００２３モル）を加えた。結果する黄色溶液を室温で４日間撹 拌した。この期間の経過後に生成物を、吸引濾過により得た黄色固体として溶液 から析出させ、水で洗浄し、乾燥して白色固体の製品（０，５６５ｇ。
１００％）を取得した：融点２００℃。’ＨＮＭＲ（ＣＤ３０Ｄ）δ３．９２　 　（Ｓ、３Ｈ）　、７．０２−７，８６（ｍ、　　３Ｈ）　、　”ＣＮＭＲ（Ｃ Ｄ！ＯＤ）δ５２，３８．１０５．８８．１１７，６６．１２４，９８．１３８ ．４３．１４６．１８．１５４．３４．１５８．１２．１６０．１２゜Ｍ　Ｓ　 ｍ／　ｅ　（相対強度）２０９　　（８２）、１７８（２５）、１５１　　（１ ００）、１２３　　（６）、１０６（９）、９５　　（１２）、８５　　（５） 、６９　　（１０）　　、５９　（１０）、５１　　（６）、４５　（１１）。
精密質量：計算値２０９，０１４６、実測値２０９，０１４９゜メチル６−ヒド ロキシ−２−ベンゾチアゾアート（１，５ｇ、０．００７モル）と塩化ｔｅｒｔ −ブチルジメチルシリル（０，７ｇ、　　０．０１１モル）の無水ＤＭＦ　５ｍ ｌ溶液に対し、イミダゾール（０，９８０ｇ、　　０．０１４モル）を徐々に加 えた。次にこの溶液を１晩撹拌した。
ＴＬＣ分析（シリカゲル、２０％酢酸エチル／ヘキサン）によって新しい物質へ の明白な変換が示された。
溶液を２５ｍ１の水中に注ぎ、３　Ｘ　２５　ｍｌのエーテルで抽出した。それ ぞれのエーテル溶液をまとめたものを無水ＭｇＳＯ４上で乾燥した。溶媒の蒸発 により油状物が得られ、これをシリカ上で１０％の酢酸エチル／ヘキサンを用い てクロマトグラフィー処理し２，２ｇ（９６％）の製品を無色の液体として得た 。ＩＨＮＭＲ（ＣＤＣＩ、）δ０．２５５　　（Ｓ、６Ｈ）、１．０１（Ｓ。
９Ｈ）　、４．０６　　（Ｓ、３Ｈ）　、７．０４−８．０７（ｍ、　　３Ｈ） 　、　”ＣＮＭＲ（ＣＤＣ１３）　　δ５．０７．１７．５３．２４．９５．５ ２．６４．１１０，７７．１２０．９５．１２５．４５．１３７．７７．１４７ ．６１．１５４．９８．１５５，１５．１６０．３５゜３−ヒドロキシ安息香酸 （ｉ　５．Ｏｇ、　　Ｏ，ｉ　ｉモル）を２−りｏｏエタノール（７０ｍｌ、１ ．０モル）と１ｍｌの濃硫酸に溶かした溶液を、１晩還流した。ＴＬＣ分析（シ リカゲル、２０％酢酸エチル／ヘキサン）により新しい物質への明白な変換が示 された。過剰のクロロエタノールを蒸発により除去して褐色の溶液を得、この溶 液を酢酸エチルに溶かし水で洗浄した。有機物層をＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮して 、２１．Ｏｇの製品を白色の固体として得た：融点５０°Ｃ，’ＨＮＭＲ（ＣＤ Ｃ１，）δ３，８　１　　（ｔ、　　２Ｈ，Ｊ＝５．９ＭＨｚ）　　、　４．５ 　７（ｔ、　　２Ｈ，Ｊ”５．９ＭＨｚ）　　、４，７７　　（Ｓ、　　ＬＨ） 　　、７．０６　　７，６６　　（ｍ、　　４　Ｈ）　。”ＣＮＭＲ（ＣＤＣ１ ３）δ４１．５２．６４，７５．１１６．４３．１２０，７７．１２１．９８． １２９．８０．１３０．７１．１５６，０４．１６６．５７゜ＭＳ　ｍ／ｅ　　 （相対強度）２００（２６）、１３８（５９）、１２１　　（１００）、９３　 　（３１）　　、６５　　（２１）　、３９　　（１２）。精密質量二計算値２ ００．０２４０、実測値２００．０２４２゜３−ヒドロキシ安息香酸２−クロロ エチル（４，０ｇ、０．０２モル）と塩化ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（４ ，５ｇ、０．０２９モル）を無水のＤＭＦ５ｍｌに溶かした溶液に、イミダゾー ル（，９２，７ｇ、　　０．０４モル）を徐々に加えた。この溶液を１晩撹拌し た。ＴＬＣ分析（シリカゲル、２０％酢酸エチル／ヘキサンにより新しい物質へ の明白な変換が示された。溶液を２５ｍ１の水中に注ぎ、３Ｘ２５ｍｌのエーテ ル抽出を行なった。
エーテル溶液をまとめたものを無水ＭｇＳＯ４上で乾燥した。溶媒を蒸発させて 油状物を得、それを１０％酢酸エチル／ヘキサンを用いてシリカ上でクロマトグ ラフィー処理し、製品を無色の液体として定量的に得た：ｌＨＮＭＲ（ＣＤＣＩ ３）６０，２１８　　（Ｓ、６Ｈ）、０．９９４　　（Ｓ、９Ｈ）　、３．８１ 　　（ｔ、２Ｈ，Ｊ＝５．７Ｍｚ）　、４．５６　　（ｔ、２Ｈ，Ｊ＝５．７Ｍ Ｈｚ）、７．０５　７．６５　（ｍ、　　４’Ｈ）　。”ＣＮＭＲ（ＣＤＣ１３ ）δ４，９７．１７，６６．２５．１２．４１，０６．６３．９１．１２０，６ １．１２２．１９．１２４，６０．１２８．９５．１３０．５３．１５５．３１ ．１６５．３５゜Ｍ　Ｓ　ｍ／　ｅ　（相対強度）３１４　（１４）、２５７（ ９）、２３５　　（９）、２１３　　（１００）、１８５　　（６）、１４９　 　（７）、１３５　（１０）、１２０　（６）、９３（１３）、８３　（６）、 ６９　（９）　、５５　（９）。精密質量：計算値３１４．１１０４、実測値３ １４．１１１０）。
［（３ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシルフエ還流凝縮器に１００ｍ１の ３首フラスコを取付け、熱風ガンとチッ素流を用いて乾燥させた。これに無水の ＴＨＦ２００ｍｌを装填し、水浴中で冷却した。トリ塩化チタン（２４，５ｇ、 ０．１６モル）を加え、次に水素化アルミニウムリチウム（３，Ｏｇ、　　０． ０８モル）を強（撹拌しながら少量ずつ加えた。冷却浴を除去し、黒色の混合物 を放置して室温まであたたまらせた。トリエチルアミン（１５ｍ１．）を１滴ず つ加え、反応混合物を１時間還流した。３−　（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリ ルオキシ）安息香酸２−クロロエチル（５，０ｇ。
０．０１５モル）と２−アダマンタノン（７，１ｇ。
０．０５モル）の溶液を還流混合物に対し、１滴ずつ１時間かけて加えた。１時 間の還流後のＴＬＣ分析（シリカゲル、１０％酢酸エチル／ヘキサン）により新 たな物質への転換が示された。反応混合物を冷却し、ヘキサンを用いて抽出した 。溶媒を蒸発させた後、粗生成物を３％酢酸エチル／ヘキサンを用いクロマトグ ラフィー処理し５．０ｇ（７４％）の製品を白色の油状物として得た：’ＨＮＭ Ｒ（ＣＤＣＩり６０，１９４（Ｓ。
６Ｈ）　、０．９８２　（Ｓ、９Ｈ）　、１．７８−１．９８（ｍ、　　１２Ｈ ）　、２．６５　　（Ｓ、　　ＩＨ）　、３．３４　（ｓ。
ＩＨ）　、３．３５（ｔ、２Ｈ，Ｊ＝５．７ＭＨｚ）、３．３６（ｔ、　　２Ｈ ，Ｊ＝５．７ＭＨｚ）　、６．８５−７．２９　　（ｍ。
４Ｈ）　　。”ＣＮＭＲ（ＣＤＣ１３）δ４．４６、１８．２１．２５．６６、 ２８．２８、３０．２０　、３２．３９．３８．９４　、３９．２０　、４２． ６１　、６８．９５．１１９．６２．１２１．０４．１２２．５０．１２９．０ ９．１３２．７８．１３６．４０．１４４，１１．１５５，４９゜ＭＳｍ／ｅ（ 相対強度）４３２　　（１００）、３３１（２２）、２３５　　（１３）、１９ ９　　（１０）、１５１（１９）　　、　１０５　　（１７）　　、　７３　　 （４４）　　、　５７（１４）。精密質量二計算値４３２．２２５１、実測値４ ３２．２２４７゜ 上に示したｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル保護アルケン（２，Ｏｇ、０．００ ４モル）を５　ｍｌのＴＨＦに溶かした溶液を撹拌しつつ、それにテトラブチル アンモニウムフルオリド三水和物（１，４ｇ、０．００４モル）を加え、結果す る溶液を１０分間撹拌した。ＴＬＣ分析（シリカゲル、２０％酢酸エチル／ヘキ サン）により新たな物質への転換が示された。溶媒を蒸発した後で粗製品を水で 洗浄し、エーテル中に抽出した。有機物層をＭｇ５Ｏ，上で乾燥し、次いで蒸発 乾固した。油状物質を２０％酢酸エチル／ヘキサンを用いシリカゲル上でクロマ トグラフィー処理し、１．３ｇ（１００％）の製品を得た：’ＨＮＭＲ（ＣＤＣ １，）　　δ１．８１−１．９６　　（ｍ、１２Ｈ）　、２．６７　　（Ｓ、Ｉ Ｈ）、３．３４　（Ｓ、　　ＩＨ）　、３．５５　（ｔ、　　２Ｈ，Ｊ＝５．６ ＭＨｚ）、３．６９　（ｔ、　　２Ｈ，Ｊ＝５．６ＭＨｚ）、６．７７−７　、 １９　（ｍ、　４　Ｈ）　ｏ　＋３ＣＮＭＲ（ＣＤＣＩＪδ２８．２１．３０． ２４．３２．３５．３７，０８．３８．９２．３９．１９．４２．５５．６９． ０５．１１４，７６．１１６．０５．１２１．９２．１２９，３１．１３３．４ １．１３６．６２．１４０．７７．１５５，６４゜ＭＳｍ／ｅ（相対強度）３１ ８　　（１００）、２２７　　（１９）、２１３　　（２４）、１２１　　（９ ２）、１０７　　（２９）、９３　　（３７）、６９　　（２１）、５５　　（ ３６）、４１（４０）。精密質量：計算値３１８．１３８６、実測値３１８．１ ３８３゜ ヨウ化ナトリウム（１４，０ｇ、０．０９モル）と〔（２−クロロエトキシ）（ ３−ヒドロキシフェニル）メチレン〕アダマンタン（３，０ｇ、０．００９モル ）を、無水のアセトン中に溶解して６日間還流した。反応の進行をＴＬＣ分析（ シリカゲル、１０％酢酸エチル／ヘキサン）で見守り、反応の完結後に溶媒を蒸 発させて白色の固体を得た。この固体を塩化メチレンで数回洗浄し、有機物層を まとめて水で再び洗浄した。有機物層をＭｇ５ＯＪ上で乾燥し、濃縮して３．８ ｇ（１００％）の製品を油状物質として得た：ＨＮＭＲ（ＣＤＣ１３）６１．７ ８−１．９７　（ｍ、　　１２Ｈ）、２．６４　（ｂＳ。
Ｉ　Ｈ）　、３．１９　（ｔ、　　２Ｈ，Ｊ＝　７．１ＭＨｚ）、３．３５（ｂ 　Ｓ、　　ＩＨ）　、３．６９　（ｔ、　　２Ｈ，Ｊ＝７．ＩＭＨｚ）、６．７ ５−７．２１　　（ｍ、　　４Ｈ）　。＋３ＣＮＭＲ（ＣＤＣＬ）δ２．４０， ２８，１３．３０．４１．３２．３３、３６．９９、３８，８６、３９．０９、 ６９，７４．１１４．８６．１１６，００．１２１．７９．１２９，２８．１３ ３．３７．１３６，４２．１４０．５１．１５５，６６゜ＭＳ　ｍ／ｅ　　（相 対強度）４１０　　（４２）　、２５６（１９）、２２７　　（７５）、１５５ 　　（１８）、１２１（１００）　　、　１０７　　（３）　　、　９３　　（ ２８）　　、　７９（１４）、６５　（１６）。精密質量：計算値４１０．０７ ４４、実測値４１０．０７４４゜ 〔（３−ヒドロキシフェニル）（２−ヨードエトキシ）メチレンツアダマンタン （３，０ｇ、　　０．０１モル）を極小量のＴＨＦに溶かした溶液を、ドライア イス中に保持した密封管中の液体アンモニア１０ｍ１に加えた。
管を密封後、油浴中で１７時間、４０℃で加熱した。
反応混合物を冷却させ、溶媒を蒸発して白色の固体を得た。この物質を塩化メチ レンを用いて抽出した。有機物層をまめで水で洗浄し、Ｍｇ５Ｏ＋上で乾燥し、 濃縮して２．０ｇ（９０％）の製品を白色の固体として得た：融点５５°Ｃ，’ ＨＮＭＲ（ＣＤＣ１３）δ１．７７−１．９６（ｍ、１２Ｈ）　、２．６８　　 （ｂＳ、　　ＩＨ）　、２．８５（ｔ、２Ｈ，Ｊ＝４．８Ｍ士）、３．２３　　 （ｂＳ、ＬＨ）、３．４８　　（ｔ、２Ｈ，Ｊ＝４．８ＭＨｚ）、４．４６　　 （ｂＳ。
２Ｈ）　、６．７０−７．１７　　（ｍ、４Ｈ）、’ＣＮＭＲ（ＣＤＣＩ、）　 　δ２８，１６．３０．２８．３２．１９．３６．９９．３Ｂ、８８．３９．０ ４．４１，３３．７０．４５．１１４．９７．１１６．１７．１２０，６３．１ ２９．０２．１３１，８９．１３６．６９．１４１，７９．１５６．８６゜ＭＳ 　ｍ／ｅ　　（相対強度）２９９（１０）、２５６　　（１００）、２３９　　 （５）　、１９９　　（６）、１３５　　（１２）、１２１　　（２７）、９３ 　　（１２）、７７（５）。精密質量：計算値２９９．１８８５、実測値２９９ ．１８９１゜ ダマンタン メチル６−　ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−２−ベンゾチアゾアート （１，２ｇ、０．００４モル）と〔（２−アミノエトキシ）（３−ヒドロキシフ ェニル）メチレンツアダマンタン（３，３ｇ、０．０１１ｍモル）を無水のメタ ノール中に溶解し、痕跡量のＮａＨＣＯ３と共におだやかに還流させた。４日後 に反応の完結を、ＮＭＲにより確認した。溶媒を蒸発させた後で粗製品を、シリ カゲルと２０％酢酸エチル／ヘキサンを用いクロマトグラフィー処理し、６０ｍ ｇ（８８％）の製品を白色の固体として得た：融点１０５℃、’ＨＮＭＲ（ＣＤ Ｃｌ　り６０．１５８　　（Ｓ、６Ｈ）　、０．９４５　　（Ｓ。
９Ｈ）　、１．７９−１．９７　　（ｍ、　　１２Ｈ）　、２．６５（ｂＳ、Ｉ Ｈ）、３．３２　　（ｂＳ、ＬＨ）　、３．６４（ｍ、　　４Ｈ）　、６．７３ −７．３８　（ｍ、　　７Ｈ）　、７．７６（ｂＳ、ＬＨ）、７．９５　　（ｔ 、ＬＨ）。＋３ＣＮＭＲ（ＣＤＣ１３）δ４．５９．１５．０２．２５．５１． ２８，１６．３０．３４．３２．２６．３７．００．３８．３９．３９．０３． ３９．８９．６７．４２．１０６．９１．１１７．３４．１１９，５４．１２０ ．９６．１２２．３２．１２４．９６．１２９．１３．１３６．２９．１３８． ７７．１４１．５４．１４６．９４．１５５，３９．１５６．４６．１５９．５ ９．１’６０，３４．１６０．４９゜カルボニル）アミノ）エトキシ〕メチレン ）アダマンタン 上述の対応するヒドロキシアルケン　（６０ｍｇ。
０．０１モル）を、チッ素雰囲気下で１　ｍｌの塩化メチレンと３００μｌのピ リジン中に溶解した。この溶液を水浴中で冷却し、３６μβの塩化アセチル（３ ９ｍｇ。
０．５ｍモル）を注射器で１滴ずつ加えた。この溶液を０°Ｃで１時間撹拌した 後、ＴＬＣ（シリカゲル、２０％酢酸エチル／ヘキサン）によって反応の完結が 示された。真空中で溶媒を除去した後、固体残分をエーテル中に溶解し水で洗浄 した。エーテル層をＭｇ５Ｏ，上で乾燥させ、濃縮して油状物質を得た。この物 質を１５％の酢酸エチル及びヘキサンを用いてシリカ上でクロマトグラフィー処 理し、ＮＨデアルンとＮ−アセチル化アルケンとの分離不能な混合物（９：１） を得た。ＮＨデアルンのスペクトルデータ：ｌ）（ＮＭＲ（ＣＤＣｌ　りδ０． １６５　　（Ｓ、　　６Ｈ）、０．９５　　（Ｓ、　　９Ｈ）　、１．８−１． ９７　　（ｍ、　　１２Ｈ）　、２．１７　（Ｓ。
３Ｈ）、２．３６　　（ｂＳ、ＩＨ）、２．６５　　（ｂｓ、ＬＨ）、３．３４ 　　（ｂＳ、ＩＨ）、３．６５（ｍ、４Ｈ）、６．７３−８．０７　　（ｍ、７ Ｈ）　、７．７９　　（ｂｓ、ＩＨ）。”ＣＮＭＲ（ＣＤＣＩりδ４．４８．１ ８．１６．２１．０５．２５，６３．２８，３０．３０．４５．３２．４４．３ ７，１２．３９，０２．３９．１６．３９．９３．６７．５６．１１５，０１． １１９．６１．１２１．０６．１２１，５２．１２２．４１．１２４．９２．１ ２９．１９．１３２．１９．１３６．４８．１３７．８６．１５９．６４．１６ ４．１２．１６９，２１゜十Ｎ−アセチル誘導体 （［２−（Ｎ−アセチル−Ｎ−（６−ヒトロキシベンゾチアゾールー２−カルボ ニル）アミノ）エトキシ〕〔３−ヒドロキシフェニル〕メチレン）アダマンタン カルボニル）アミノ）エトキシ〕メチレン）アダマンタン（３ｂ） 上述の混合物（１００ｍｇ、０．１６ｍモル）を１　ｍｌのＴＨＦに溶かした冷 溶液に、テトラブチルアンモニウムフルオリド三水和物（４９ｍｇ、　　０．１ ６　ｍモル）を０　、５　ｍｌのＴＨＦに溶かした溶液を注射器で加えた。
添加後のＴＬＣ分析（シリカゲル、１：１酢酸エチル／ヘキサン）により３種の 生成物が示された。溶媒を蒸発させた後、粗生成物を水で洗浄し、ＭｇＳＯ３上 で乾燥し、濃縮した。粗油状物を酢酸エチル及びヘキサンを用いてシリカ上でク ロマトグラフィー処理し、３種の生成物を得た。第１の生成物を２５％酢酸エチ ル／ヘキサンを用いて取得し、アルケン（３ｂ）であることを確認した：’ＨＮ ＭＲ（ＣＤＣ１３）　　６１．８１−１．９８　　（ｍ、　　１２Ｈ）　　、　 ２．１８　　（Ｓ、　　３Ｈ）　　、２．３７　　（Ｓ、　　３Ｈ）　　、　２ ．６８　　（ｂＳ、　　ＩＨ）　　、３．３４　　（ｂｓ、　　ＩＨ）　　、　 ３．６５　　（ｍ、　　４Ｈ）　　、６．９７−８．７９　　（ｍ、　　７Ｈ） 　　、７．７７’（ｂＳ、　　ＩＨ）。”ＣＮＭＲ（ＣＤＣ１３）　　δ２０． ９６．２１．０４．２８．２３、３０．５５、３２．３４、３７．０７．３９． ０３、３９，１６、３９．９４、６７．８１．１０４．９、１１５，０３．１２ ０，７７．１２１．５４．１２２．３６．１２４．８８．１２６，６５．１２９ ．０８．１３１．３４．１３３．４３．１３３．５３．１６９，６９．１４１． ０４．１４９，３１．１５０．６８．１５９．６０．１６９．２１゜ 第２の生成物を３５％酢酸エチル／ヘキサンを用いて取得し、　（［２−（Ｎ− アセチル−Ｎ−（６−ヒトロキシベンゾチアゾールー２−カルボニル）アミノ） エトキシ〕　〔３−ヒドロキシフェニル〕メチレン）アダマンタン（３ａ）であ ることを見出した・’ＨＮＭＲ（ＣＤＣＩ３）δ１，８０−１．９６　　（ｍ、 　　１２Ｈ）、２．１８　　（Ｓ、３Ｈ）　、２，６７　　（ｂｓ、ＩＨ）、３ ．３３　　（ｂｓ、ＩＨ）　、３．６５　　（ｍ、４Ｈ）、６．７４　　（ｂＳ 、ＬＨ）、６．９６−７．９２　　（ｍ、７Ｈ）　、７．７９　　（ｂｓ、　　 ＩＨ）。”ＣＮＭＲ（ＣＤＣＩ３）δ２０．９７．２８，２２．３０．５３．３ ２．３５．３７．０７．３９゜０１．３９，１４．３９，９７．６７．７９．１ ０７，０９．１１７．１６．１２０，７５．１２２．３５．１２５，１３．１２ ６．７１．１２９，１０．１３３．５０．１３６，７２．１３８．８６．１４０ ．９８．１４７．３９．１５０゜６５．１５５．７２．１６０．３４．１６０． ４３、１６９．３６゜ 第３の生成物は（Ｃ２−（Ｎ−（６−ヒトロキシベンゾチアゾールー２−カルボ ニル）アミノ）エトキシ〕〔３−ヒドロキシフェニル〕メチレン）アダマンタン であることを確認した。
（ｂ）　Ｘ　−Ａｃ 対応するヒドロキシアルケン（Ｉｇ、３．１３ｍモル）を、Ｎ２雰囲気下で１５ ｍ１の塩化メチレンとピリジン（５ｍｌ、６３ｍモル）に溶解した。この溶液を 水浴中で冷却し、それに塩化アセチル（０，２５ｇ、３．１３ｍモル）を１　ｍ ｌの塩化メチレンに溶かした溶液を注射器で１滴ずつ加えた。白色の沈澱物が生 じた。０−５０Ｃで２時装置いた後に、１０％酢酸エチル／ヘキサンを用いるＴ ＬＣにより完全なアセチル化が示された。
真空中で溶媒を除去した後、固体残分を１００ｍ１のヘキサンで洗浄した。ヘキ サンを２　Ｘ　５０　ｍｌの水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、次いで蒸発乾 固した。油状物質を１０％酢酸エチル／ヘキサンを用いシリカ上でクロマトグラ フィー処理し、製品（Ｏｙ９１ｇ、　　２．５２ｍモル、８０％）を得た：’Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ１３）６１．７０−２．００　　（ｍ、１２Ｈ）　、２．３０　 　（Ｓ、３Ｈ）、２．６７　　（！”、ＬＨ）、３．５０　　（Ｓ、ＩＨ）、３ ．５４−３．５８　　（ｔ、２Ｈ）、３．６７−３．６９（ｔ、　　２Ｈ）　、 ７．００−７．４０　　（ｍ、　　４Ｈ）　。１３ＣＮ　Ｍ　Ｒ（ＣＤＣ１３） δ２１．１１．２８，１９．３０，２７．３２．２８．３７．０７．３８．９２ ．３９，１７．４２．６２．６９．２２．１２０．７６．１２２，３２．１２６ ．７０．１２９，０２．１３３．９３．１３６，６４．１４０．４０．１５０， ５９．１６９．２８゜対応するクロロアルケン（０，４ｇ、２．４９ｍモル）を １．’Ｏｍｌの無水のアセトンに溶かした溶液に、無水ヨウ化ナトリウムをゆっ くりと加えた。１０％酢酸エチル／ヘキサンを用いるシリカ上でのＴＬＣ分析に よって新たな、より極性が小さい物質への明白な変換が示された。溶媒を蒸発さ せて白色の固体を得、この固体をヘキサンで洗浄した。ヘキサン溶液を蒸発させ 、製品を無色の油状物（１，、１１ｇ、　　２．４５ｍモル、９８％）として得 た＋１）（ＮＭＲ（ＣＤＣ１，）　δ１，７０−２．００　　（ｍ、１２Ｈ）　 、２．３０　　（Ｓ、３’Ｈ）、２．６５　（ｓ、　　ＩＨ）　、３．１７−３ ．２１（ｔ　、　　２Ｈ）、３．３６　（ｓ、　　ＩＨ）　、３．６６−３．７ ０（ｔ、　　２Ｈ）、６．９９−７．４　　（ｍ、　　４Ｈ）　。”ＣＮＭＲ（ ＣＤＣＩｓ）δ２１．１４．２８，２１．３０．５１．３２，３３．３７．１０ ．３８，９６．３９．１８．６９，９４．１１６．３２．１２０．７９．１２２ ．３４．１２６．７２．１２９．０４．１３３，９３．１３６．６３．１４０， ３９．１５０．６０、１６９．２８゜ 対応するヨードアルケン（Ｉｇ、２．２１ｍモル）、フルオレセイン（１，４７ ｇ、４．４２ｍモル）及び酸化銀（５ｇ、２１．６ｍモル）を、無水のベンゼン ２０ｍ１を含む５０ｍ１の丸底フラスコ中に入れた。結果する黄色の懸濁液を暗 闇中で２４時間、還流した。冷却後に固体の酸化銀とヨウ化銀を濾別し、濾液を 真空下で蒸発させ乾燥した。黄色固体を２０％酢酸エチル／ベンゼンを用いシリ カ上でクロマトグラフィー処理し、純粋な製品を黄色の固体（１，０９ｇ、１． ６６ｍモル。
７５％）として得た：’ＨＮＭＲ（１）−ジオキサン−ａｓ）６１．６９−１． ９５　　（ｍ、１２Ｈ）　、２．２２（Ｓ、３Ｈ）、２．６４（Ｓ、ＩＨ）、３ ．３３（Ｓ、ＩＨ）、３．７−３．７９（Ｓ、２Ｈ）、４．００−４．１（ｓ、 ２Ｈ）、６．４０−８．２０（ｍ、１４Ｈ）。１３ＣＮＭＲ（ｐ−ジオキサン− δ８）２０．６３．２８．４８．３０．８５、３３．０６、３７．６４、３９． ３７．３９．６８、６７．９４、６７．６７、８２，７６．１０１．９５．１． ０３．１２．１１２．５６．１１２．７３．１１２．９２．１２１．４４．１２ ３．１７．１２４，３９．１２５．４０．１２７．２１．１２７，７３．１２８ ，９３．１２９．５２．１２９．７２、ｉ２９．９７．１３３，４９．１３５． ２０．１３７，５３．１４１，８１．１５１，７４．１５２．９１．１５３，０ １．１５４．４８．１５９，５９．１　６　１．２９．１　６９．４　０゜〔（ ２−アミノエトキシ）（３−β−Ｄ−ガラクトアセトブロモーα−Ｄ−ガラクト ース（５ｇ、１．２ｍモル）を、〔（３−ヒドロキシフェニル）（２−ヨードエ トキシ）メチレン〕アダマンタン（Ｉｇ、０．２４ｍモル）を１＝１の５Ｎ　　 ＫＯＨ及びアセトン（５ｍｌ）に溶かした溶液中にゆつ（りと加えた。ＴＬＣ分 析（シリカゲル、５０％酢酸エチル／ヘキサン）により、部分脱アセチルに基づ く５個の新たな化合物の形成が示された。溶媒を蒸発させた後、粗生成物を水で 洗浄し、次いで蒸発乾固した。それを極小量のＴＨＦに溶解し、管中の２０ｍ１ の液体アンモニア中に加えた。管を密封した後、この溶液を油浴中で１７時間、 ４０°Ｃで加熱した。反応混合物を冷却させ、溶媒を蒸発させて白色の固体を得 、それを酢酸エチルを用いて抽出処理した。有機物層をまとめたものを水で洗浄 し、ＭｇＳ○、上で乾燥し、濃縮して８００ｍｇ（７３％）の生成物を白色の固 体として得た。本生成物はさらに精製することなく次の工程を実施するために用 いた。
メチル６−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−２−ペンゾチアザート（３ ６３ｍｇ、　　０．１７ｍモル）と上述の反応から得られた生成物（８００ｍｇ 、　　０．１７　ｍモル）を無水のメタノールに溶解し、痕跡量のＮａＨＣＯｓ を加えておだやかに還流した。溶媒を蒸発させた後、粗生成物を水で洗浄し、酢 酸エチル中に抽出した。この溶液を濃縮して白色の固体を得、シリカゲル及び１ ００％アセトンを用いクロマトグラフィー処理し８００ｍｇ（８０％）の製品７ を白色の固体として得た：融点６５℃。’ＨＮＭＲ（アセトン−ｄ６）６１．６ ５−１．８８　　（ｍ、　　１２Ｈ）　　、２．６　　（Ｓ、　　ＩＨ）、３． ３（Ｓ、　　ＩＨ）　、３．６−４．０１　　（ｍ、　　１０Ｈ）　、４．９４ （ｄ、　　ＩＨ）　、６．５　　（ｂＳ、　　ＩＨ）、６．９１−７．８９（ｍ 、　　７Ｈ）　　、８．１９　　（Ｓ、　　ＩＨ）　。１３ＣＮＭＲ（アセトン −ａ、）　δ２８．１９．２８．９０．３０．１６．３０．２２、３２，２４、 ３２．４９、３６．８３．３８．６５、３８．８２、３９．５３、６１．２５． ６７．３５、６８．８２、７１．１６　、７３，７３．７５．２７、１０１．１ １、１０６，７９、１１５．７９．１　１　７．０　６．１　１　７．１　４、 １２２，８２．１２４．９１．１２９．０３．１３１．４９．１３６，４９．１ ３８，４９．１４１．９６．１４６．７７．１５７．１０，１５７，６０．１５ ９．９６、１６０．４５゜ 〔（３−ホスファートフェニル）（２−（０−フルオレセイン）エトキシ）メチ レン〕アダマンタン（９）及び（［２−（Ｎ−（６−ヒトロキシベンゾチアゾア ートー２−カルボニル）アミノ）エトキシ〕　〔３−ホス特許出願Ｎα２２４， ６８１に記載のリン酸化法を用いて対応するヒドロキシ置換化合物から合成した 。
１．２−ジオキセタン類の製造 光酸化法：典型的には５−１０　ｍｇのアルケン試料を、光酸化管中で５　ｍｌ の塩化メチレンに溶解した。約４０ｍｇのローズベンガル（５ｅｎｓｉｔｏｘ　 　１−登録商標）（このタイプの増感剤についてはＡ、　Ｐ、　　５ｃｈａａｐ 、　Ａ、　Ｌ。
Ｔｈａｙｅｒ、　Ｅ、　Ｃ，Ｂｌｏｓｓｅｙ、　ａｎｄ　Ｄ、　Ｃ，Ｎｅｃｋｅ ｒｓ　：　Ｊ、　Ａｍｅｒ、　Ｃｈｅｍ。
Ｓｏｃ、９７．３７４１　　（１９７５）を参照）を加え、酸素噴射器に接続し た。溶液に酸素を５分間ゆっくりと通し、装置をドライアイス／２−プロパツー ルを含む片面銀メッキのジュワーびんに浸漬した。連続して酸素を吹込みながら 試料を、１０００Ｗの高圧ナトリウムランプ（Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｅｌｅｃｔｒｉ ｃ社のＬｕｃａｌｏｘ　）及び紫外線除去フィルタを用いて照射した。反応の進 行を、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）により鑑視した。普通、極めて安定な ジオキセタン類を示すはん点が検出でき、そのＲｆはアルケンについての値より 僅かに小さかった。アダマンチル置換ジオキセタン類を常温で濾過し、回転蒸発 器で蒸発させ、適当な溶媒を用いて再結晶さヒドロキシアルケンｌ　ａ　　（１ ００ｍｇ）を５ｅｎｓｉｔｏｘの存在下で一７８℃において、８ｍｌの塩化メチ レン中で１０００Ｗのナトリウムランプにより照射した。アルケンとジオキセタ ンを２０％酢酸エチル／ヘキサンを用いるＴＬＣにかけると、同一のＲｆ値を示 す。そこで開裂生成物の痕跡が現れ始めたときに反応を停止した。濾過して増感 剤を除去し、溶媒を蒸発させた。出発物質が全て酸化されたことをみるためには 、′ＨＮＭＲを利用した。ジオキセタン２ａをペンタン／ベンゼンを用いて再結 晶させ、白色の固体を得た。融点１３５℃。’ＨＮＭＲ（ＣＤＣ１３）６１．０ ４−２．１０（ｍ、１２Ｈ）、２．２１　　（Ｓ、　　ＬＨ）　、３．０４（Ｓ 、ＩＨ）、３．２４　　（Ｓ、　　３Ｈ）、６．４８　　（Ｓ、　　ＩＨ，Ｄ２ ０でＯＨを置換）　、６．９３−７．３　ｏ（ｍ、　　４Ｈ）。”ＣＮＭＲ（Ｃ ＤＣ１，）　δ２５．８１．２５．９５．３１．４７．３１．５７．３２゜２７ ．３２．８６．３３．０７．３４．５８．３６．３０．４９．８３．９５．８８ ．１１２，０８．１１６．４６．１２９，３４．１３６．１．１５６．２１゜ ４−　（３−アセトキシフェニル）−４−メトキシスアルケン１　ｂ　　（１４ ０ｍｇ、　　０．４５ｍモル）を−７８℃で３０ｍ１の塩化メチレン中において 、４００ｍｇの５ｅｎｓｉｔｏｘを用い１００ＯＷのナトリウムランプにより照 射した。２０％酢酸エチル／ヘキサンを用いるシリカゲル上でのＴＬＣ分析によ って２．５時間でより極性な物質への完全な変換が示された。濾過及び溶媒の除 去によって製品２ｂが、油状物として得られた。’ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ２）δ０ ．９０−１．９０　　（ｍ。
１２Ｈ）　、２．１５（Ｓ、ＩＨ）、２．３１　　（Ｓ、　　３Ｈ）、３．０３ （Ｓ、　　ＩＨ）、３．２３（Ｓ、３Ｈ）、３．６１−７．４５（ｍ、４Ｈ）。
”ＣＮＭＲ（ＣＤＣＩｇ）δ２１，００．２５．８２ζ２５，９７．３１．５０ ．３１．６５．３２．２１．３２．８０．３３．０９．３４．７　Ｃ３６，３’ ２．４９．９２．９５．３４．１１１．５０．１２２．５８．１２９，１６．１ ３６．４２．１５０，７２．１６９，１１゜４−（３−β−Ｄ−ガラクトピラノ シルフェニル）アルケンＩ　Ｃ（０，０１８ｇ、　　０．０４２ｍモル）を３　 ｍｌのジオキサン−ｄｓ中で０℃において、５ｅｎｓｉｔｏｘを用いて光酸化し た。１０００Ｗのナトリウムランプを用いる照射を２０分間行なって反応を完結 させた。２Ｃのスペクトルデータ：’ＨＮＭＲ（ジオキサン−ａ、）６１，５９ ３−１，８２０　（ｍ、、１２Ｈ）、２，０９１（Ｓ、　　ＬＨ）　、２．５１ ．７　（ｓ、　　ＩＨ）、３．１６０（Ｓ。
３Ｈ）、３．６７０−３．８５４　（ｍ、４Ｈ）、４．１４７（ｄ、ＩＨ）、４ ，４２２（ｄ、ＩＨ）、４．８４６（ｄ。
ＩＨ）、７．０７８−７．３６９（ｍ、　　４Ｈ）。”ＣＮＭＲ（ジオキセタン −ｄＳ）δ２６．２０９．２６．１１５．３１．４５９．３１，７５３．３２． ８９０，３３．３００．３４．６４３．３６．３３２．４９．２２７．６１．２ ７７．６８．８０３．７１．４０９．７３，８５６．７５，７６８、？５．８０ ６．９４．５５８．１０１．０９９．１０１．３３１．１１１゜４５７．１１７ ．０６６．１２９．２４６．１３６．７３６．１５４．６８２゜アルケン３　ａ 　（２５ｍｇ、　　０．０４５ｍモル）を４　ｍｌの塩化メチレン／アセトン（ １：　１）中で一７８°Ｃにおいて、７５ｍｇの５ｅｎｓｉｔｏｘを用い１００ ＯＷのナトリウムランプで照射して光酸化した。ＴＬＣ分析（シリカゲル、５０ ％酢酸エチル／ヘキサン）により、９０分間でより極性の物質への完全な変換が 示された。溶媒を濾過及び除去し製品（４ａ）として白色の固体を得た。’ＨＮ ＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．５６−１．８６　　（ｍ。
１２Ｈ）　、２．２’３　　（ｂｓ、ＩＨ）　、２．３６　　（Ｓ、３Ｈ）　、 ３．１１　　（ｂＳ、ＩＨ）　、３．５８−３．７９（ｍ、４Ｈ）　、７．１５ −８．０８　　（ｍ、７Ｈ）。
アルケン３　ｂ　（２５ｍｇ、　　０．０４２ｍモル）を４　ｍｌの塩化メチレ ン中で一７８℃において、７５ｍｇの５ｅｎｓｉｔｏｘを用い１００ＯＷのナト リウムランプで照射して光酸化したＴＬＣ分析（シリカゲル、５０％酢酸エチル ／ヘキサン）により、５０分間でより極性の物質への完全な変換が示された。溶 媒を濾過及び除去して製品（４ｂ）を白色の固体として得た。’ＨＮＭＲ（ＣＤ Ｃｌ　ｇ　）δｉ、５９−１．８６　　（ｍ、　　１２Ｈ）、２．１６　　（ｂ Ｓ、ＩＨ）　、２．２１　　（Ｓ、３Ｈ）、３．１２　（ｂＳ、ＩＨ）、３．５ ６−３．８０　　（ｍ、４Ｈ）　、７．０９−７．９１　　（ｍ、　　７Ｈ）　 。”ＣＮＭＲ（ＣＤＣｈ）δ２０．９５．２５，８９．２６．０５．３１．６６ ．３２．００．３２，２３．３２，８９．３３．１６．３４，８５．３６．３８ 、３９，７８、６１．４３、９５．８２．１０７．０５．１１１．４６．１１７ ．１９．１２２．８４．１２５．１９．１２９．３９．１３６．５２．１３８． ８６．１４７．３１．１５０．８４．１５５．９６．１６０．３６．１６０．５ １．１６９．２４゜ 〔（３−アセトフェニル）（２−（０−フルオレセイン）エトキシ）メチレンツ アダマンタン　（５）（３５ｍｇ、　　０．０５　ｍモル）を、ＮＭＲ管中で１ 　ｍｌの１゜４−ジオキサン−δ８中に溶解した。５ｅｎｓｉｔｏｘ　（２０ｍ ｇ）を加え、酸素噴射器を接続した。この溶液に酸素をゆっくりと５分間通し、 装置を氷／水を含む片面銀メッキのジュワーびんに浸漬した。連続して酸素を吹 込みながら試料を、１００ＯＷナトリウムランプ及び紫外線除去フィルタを用い て照射した。４５分間の光酸化の後で’Ｈ及び＋３ＣＮＭＨによってアルケンの 対応するジオキセタン（３６，７ｍｇ、　　０．０５　ｍモル、１００％）への 完全な変換が示された。
アルケン７　（５０ｍｇ、　　０．０７５ｍモル）を塩化メチレンとアセトンの １＝１混合物中で一７８°Ｃにおいて、１００　ｍｇの５ｅｎｓｉｔｏｘを用い １００ＯＷの高圧ナトリウムランプで照射して光酸化した。１時間後に反応を停 止させ、溶媒を濾過及び除去して製品８を白色の固体として得た。’ＨＮＭＲδ １．５７−１．９　　（ｍ。
１２Ｈ）　、２．２　　（Ｓ、ＩＨ）　、３．０８（Ｓ、ＩＨ）、３．３７　　 （ｔ、　　ＩＨ）　、３．５５−３．９９（ｍ、　　９Ｈ）、４．９７（ｍ、Ｌ Ｈ）、６．３５（ｂＳ、４Ｈ）、３．８９−７．９　　（ｍ、８Ｈ）　、８．４ １　　（ｂｓ、ＩＨ）　、９．５１（Ｓ、ＩＨ）。”ＣＮＭＲδ２６，４７．２ ６．６６．３２．０４．３２．３９．３２．５０．　３３゜２９．３３．７３． ３５．０７．３６．６９、３９，９７．６１．５６、６　１．９　１、６９．４ ４、１　１，７７．７４．３３．７６．０９．９５．４９、１０１．８３．１０ ２．１５．１０’７−、３３．１１１．８８．１’１７．７０゜１２３．３４． １２’５．４７．１２９．８６．１３７．０８．１３９．１７．１４７．４６． １５７．７６．１５８．４２．１６０．６６．１６１．３２゜ ホスファートフェニル）スピロ〔１，２−ジオキセタのと同様の光酸化法によっ てアルケン９及び１１からそれぞれ製造した。
化学発光量子収率の測定 ジオキセタン類の分解についての化学発光量子収率（Φ。Ｌ）は、分解されたジ オキセタンのモル数に対する放出化学発光のアインスタイン値の割合と定義され る。この値はしばしば効率として表され、ここに化学発光効率（％）＝Φ。１で ある。反応中に反応エンタルピー（△ＨＲ）及びアレニウス活性化エネルギー（ Ｅａ）からして、カルボニル開裂生成物の１個を一重項励起状態にもたらすのに 十分なエネルギーが放出される。
したがって最大量子収率は１．０である。関係ある他のパラメターは化学励起量 子収率（Φ。６）であり、これは分解されたジオキセタンに対する形成励起状態 の割合と定義される。化学励起量子収率は化学発光量子収率と、ジオキセタン開 裂物の発光量子収率（ΦＦ）を介し、つまり方程式Φ。、＝ΦＣ８×Φ１で表さ れる関係で関連する。
発光減衰の動力学的測定に用いたのと同じ方法を化学発光量子収率を求めるのに 、以下の修正を加えて用いた。既知濃度のジオキセタン貯蔵溶液の精密に秤量し た一定量を、予め恒温に保つようにした有機溶媒または水性緩衝液の３　ｍｌに 加えた。次に適当した化学試薬または酵素を加えることにより反応を誘発した。
合計の光強度（積分光強度）を、−７８°Ｃに冷却したＲＣＡ　　Ａ−３１０３ ４Ａヒ化ガリウム増倍型光電管を用い光子計数用蛍光光度計により加算して求め た。曝気ＤＭＳＯ中での塩基によるルミノールの化学発光反応について正確に知 られている量子収率に基づく検定因数（ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ ）を用いて、光強度を光量子数に換算した。ルミノール反応は、０．０１１（１ ，１％）の化学発光量子収率をもつと測定されている　（Ｊ。
Ｌｅｅ　ａｎｄ　Ｈ，Ｈ，Ｓｅｌｉｇｅｒ　’：　Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ、　Ｐｈ ｏｔｏｂｉｏＬ　　１５　、２２７（１９７２）　、Ｐ、　Ｒ，Ｍｉｃｈａｅｌ 　ａｎｄ　Ｌ、Ｒ，Ｆａｕｌｋｎｅｒ　：　Ａｎａｌ、化学的または酵素的に誘 発したジオキセタン類の化学発光スペクトルを、５ｐｅｘ　Ｆｌｕｏｒｏｌｏｇ 蛍光分光光度計の試料室で１ｃｍ平方の石英製キュベツト中において常温で反応 を行なわせることにより得た。波長走査中の化学発光の減衰に対する補正は比率 モードでスペクトルを蓄積することで行なうこととし、合計の信号を時間の関数 として測定する補助検出器（ＥＭＩ　　９７８１Ｂ）からの信号で観測されるス ペクトルを割った。モノクロメータ−の波長帯域、典型的には１８ｎｍであった 。弱い光放出を行なう試料については同一の走査を数回繰返えし、信号対ノイズ 比を改善するように加え合せた。
ジオキセタン類の誘発 ジ置換ジオキセタン２ｂのＤＭＳＯ及び水溶液中でのＤＭＳＯ中のジオキセタン ２ａ及び２　ｂ　ノ１．０−’Ｍ温溶液常温（２５°Ｃ）で過剰量のテトラ−ｎ −ブチルアンモニウムヒドロキシドまたはテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフル リドにより処理することによって、強い青色の化学発光が生じ数分間で減衰した 。この化学発光の極大波長は４７０ｎｍであった。開裂生成物（３−ヒドロキシ 安息香酸メチル、ＭＨＢ）のアニオンの蛍光は、化学発光スペクトルに一致する 。これらの結果から化学発光過程が、（ａ）塩基による誘発に基づ（不安定なア リールオキシド型のジオキセタンの形成、（ｂ）次いでの本ジオキセタンの開裂 による一重項励起状態のＭＨＢの生成、（Ｃ）　Ｍ　ＨＢの蛍光に基づく全体と しての効率２５％もに達しうる発光産生を、包含するものであることが示される 。これらの結果は、対応するシリルオキシ置換ジオキセタンのフッ化物誘発化学 発光について以前に報告されている結果（Ａ、　Ｐ、　５ｃｈａａｐの１９８６ 年７月１５日付の米国特許出願、及びＡ、Ｐ。
５ｃｈａａｐ、　Ｔ、　Ｓ、　Ｃｈｅｎ、　Ｒ，Ｓ、　Ｈａｄｌｅｙ、　ＲｏＤ ｅＳｉｌｖａ、　ａｎｄ　Ｂ、Ｐ。
Ｇｉｒｉ　：　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、、　１１５５　　（１９８ ７）　）に匹敵する。
対照的に２ａ及び２ｂを水溶液中でＮａＯＨを含む種々の塩基で化学的に誘発す ると、著しく低いレベルの発光しか生じない（化学発光効率０．０００８％）。
この低い値は、エステルＭＨＢが水性環境下で本質的に非蛍光性であるといった 事実によるものである。
安定：Ｘ＝ＨまたはＡＣ不安定アリールオキシド型−重項励起エステル（ＭＨＢ ） ２、ジオキセタン４及び６の化学発光の化学的誘発：今や、誘発可能なジオキセ タンからの化学発光の効率を、ジオキセタンの励起開裂生成物に対し化学的に附 加或は束縛された蛍光性基への分子内エネルギー移動によって劇的に向上させう ることが、発見された。
これらの新しい化合物において、アリールオキシド置換ジオキセタンは「エネル ギー発生」作用のために利用され、「光放出コ過程は励起開裂生成物に束縛され た効果的に蛍光性である基によって行なわれる。
前述の２ａ及び２ｂのようなジオキセタンは通常、化学試薬または酵素により保 護基Ｘを除去されると不安定型のジオキセタンを生成し、この不安定型ジオキセ タンが開裂して一重項励起のエステルを生成する。
このエステルからの光放出は直接化学発光である。しかしながらジオキセタン４ 及び６におけるように一連の連結原子（ｃｏｎｎｅｃｔｉｎｇ　ａｔｏｍｓ）を 介して励起生成物に束縛されている比較的低エネルギーの蛍光体が存在すると、 分子内エネルギー移動によって蛍光体の励起状態が生成せしめられつる（例えば 後掲の図解１を参照）。
この部分からの光放出はエネルギー移動化学発光を提供するものとなる。エネル ギー移動に関係する有利なエネルギー論的状態（ｅｎｅｒｇｅｔｉｃｓ）と束縛 長さに関係する最適個数の原子とが存在すると、エネルギー移動の効率（Φ４） は単一の値へと近づきうる。また蛍光体としてエネルギー供与体よりも高いΦ、 をもつものを選択したとすると、全体としての化学発光を増強できる。さらに発 光の色を、適当した束縛蛍光体を用いて青から赤まで選択可能である。
ジオキセタン４及び６を用いる化学的誘発実験により、これらの新規なジオキセ タンによって達成可能である化学発光効率の顕著な増大が実証される（第１表参 照）。例えばジオキセタン４ｂをＤＭＳＯ中でフッ化物により誘発する反応では 強い青−緑色光の放出が４９％の効率でもって生じ、この効率は同一条件下での ジオキセタン２ｂの効率の２倍である。同様の結果は、ヒドロキシ置換ジオキセ タン４ａを塩基及びフッ化物で誘発しても得られる。より大きな効率増大が水溶 液中で行なう反応において観察され、束縛ジオキセタン４及び６に関しジオキセ タン２ａ及び２ｂと比較して４５０倍にものぼる増大がみられる（第１表）。
第１，３及び４図のスペクトルによって示されるように、４７０ｎｍでの通常の 光放出は消滅せしめられて束縛された蛍光体からの光放出と置き換えられており 、これらの新規な化合物中での分子内エネルギー移動の効率が極めて高いことが 示されている。これらの図はまた、束縛蛍光体をもつジオキセタンの化学的誘発 及び酵素的誘発の両者において達成される化学発光効率の増大を明らかにしてい る。
第１表　アセトキシ置換ジオキセ タン類の化学発光効率 ３、ジオキセタン４ｂ及び６の化学発光の酵素的誘ブタの肝臓から得られたアリ ールエステラーゼ（カルボキシルエステラーゼ）をＳｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａ ｌ　Ｃｏ、から、３．２Ｍの（ＮＨ，）、ＳＣ２中の懸濁物として入手した。典 型的な実験においては、２２１緩衝液中のジオキセタン２，５６Ｘ１０−”Ｍ貯 蔵溶液の５０４を３　ｍｌの２２１緩衝液（０，７５Ｍ、　ｐＨ９，２）に加え て、ジオキセタンの最終濃度を４．３　Ｘ　１０−’Ｍとした。３７℃でこの溶 液に希釈酵素の１０μβ部を注入すると、化学発光が生じた。ジオキセタン４ｂ 及び６の酵素による誘発からする化学発光効率はそれぞれ、０．２９及び０．３ ９％であることを見出した。これらの値は、同一条件下でのジオキセタン２ｂの 反応から得られる直接発光の場合と比較してそれぞれ、２４０倍及び３２５倍の 増大を表している。
第４図の化学発光スペクトルはアリールエステラーゼで誘発する場合について、 ジオキセタン２ｂの通常の弱い光放出（曲線Ａ、λ＝４７０ｎｍ）とジオキセタ ン４ｂから生ぜしめられるエネルギー移動化学発光（曲線Ｂ、λ＝５１９ｎｍ） とを示している。ジオキセタン４ｂの酵素的誘発からする化学発光スペクトルを 同一条件下での開裂生成物からの蛍光スペクトルと比較すると、光放出が実際に 束縛蛍光体から生じることが判る（第５図）。ジオキセタン４ｂ及び６の反応の 動力学的観察からして、束縛蛍光体が基質の酵素的転換を実質的に妨げないこと が示される。また酵素が分子内エネルギー移動に対し干渉するとは思われない。
β−ガラクトシダーゼ（Ｓｉｇｍａ社）を、ガラクトピラノシル置換ジオキセタ ン２Ｃ及び８の各溶液と反応させた。典型的な実験においては、１００μβの酵 素溶液を３７℃で、リン酸塩緩衝液（ｐＨ７，２）中のジオキセタン溶液（０， ００２８ｍモル）３ｍｌに加えた。
溶液を５分間養生し、その時間経過後にＮａ、ＯＨを加えて溶液のｐＨを高め脱 保護ジオキセタン（ヒドロキシ型）の発光を誘発した。ジオキセタン８について の化学発光強度はジオキセタン２Ｃと比較して、２００倍を越えて増強された。
これらの結果も、束縛された蛍光体への分子内エネルギー移動の利用によって光 取量の顕著な増大を得ることができることを、示している。
ジオキセタン８の酵素的誘発による化学発光スペクトルを同一条件下での開裂生 成物の蛍光スペクトルと比較すると、光放出が実際に束縛蛍光体から生じること が判る（第６図）。
同様の分光学的な結論は、ジオキセタン２ｂと対比してのホスファート置換ジオ キセタン１０及び１２に関する増強された化学発光強度からも導かれる。
−重項励起エステル −重項励起エステル 一重項励起蛍光体 メタ異性体中でアリール環上にＯＸ基をもつ前述の特定のアルケン類及びジオキ セタン類に加えて、対応するバラ及びオルト異性体も類似の方法で製造可能であ る。そのような化合物を下に例示する。
ジオキセタン類： ４−（４−ヒドロキシフェニル’）−４−（メトキシスピロ（１，２−ジオキセ タン−３，２′−アダマンタン〕。
４−（４−アセトキシフェニル）−４−メトキシスピロ〔１，２−ジオキセタン −３，２′−アダマンタン〕。
４−（４−ホスファートフェニル）−４−メトキシスピロ〔１，２−ジオキセタ ン−３，２′−アダマンタン〕、塩。
４−（４−β−Ｄ−ガラクトピラノシルフェニル）−４−メトキシスピロ〔１， ２−ジオキセタン−３゜２′−アダマンタン〕。
４−（２−（Ｎ−アセチル−Ｎ−（６−ヒトロキジベンゾチアゾールー２−カル ボニル）アミノ）エトキシ）−４−（４−ヒドロキシフェニル）スピロ　〔１゜ ２−ジオキセタン−３，２−アダマンタン〕。
４−（４−アセトキシフェニル’）　−４−（２−（Ｎ　−アセチル−Ｎ−（６ −ヒトロキシベンゾチアゾールー２−カルボニル）アミノ）エトキシ）スピロ［ １，２−ジオキセタン−３，２′−アダマンタン〕。
４−（４−アセトキシフェニル）　−４−（２−（０−フルオレセイン）エトキ シ）スピロ　〔１，２−ジオキセタン−３，２′−アダマンタン〕。
４−　（２−（Ｎ　−（６−ヒトロキシベンゾチアゾールー２−カルボニル）ア ミノ）エトキシ）−４−（４−β−Ｄ−ガラクトピラノシルフェニル）スピロ　 〔１゜２−ジオキセタン−３，２′−アダマンタン〕。
４−（４−ホスファートフェニル）−４−（２−（０−フルオレセイン）エトキ シ）スピロ　［１，２−ジオキセタン−３，２′−アダマンタン］、塩。
４−　（２−（Ｎ　−（６−ヒトロキシベンゾチアゾールー２−カルボニル）ア ミノ）エトキシ）−４−（４−ホスファートフェニル）スピロ〔１，２−ジオキ セタン−３，２′−アダマンタン〕、塩。
アルケン類 〔（４−ヒドロキシフェニル）メトキシメチレンツアダマンタン。
〔（４−アセトキシフェニル）メトキシメチレンツアダマンタン。
〔（４−ホースフアートフェニル）メトキシメチレンツアダマンタン、塩。
〔（４−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）フェニル）メトキシメチレンツアダマン タン。
（［２−（Ｎ　−（６−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシベンゾチアゾー ル−２−カルボニル）アミノ）エトキシ〕　〔４−ヒドロキシフェニル〕メチレ ン）アダマンタン。
（［２−（Ｎ−アセチル−Ｎ−（６−ヒトロキシベンゾチアゾールー２−カルボ ニル）アミノ）エトキシ〕〔４−ヒドロキシフェニル〕メチレン）アダマンタン 。
（〔４−アセトキシフェニル）（２−（Ｎ−アセチル−Ｎ−（６−ヒドロキシベ ニ／ジチアゾール−２−カルボニル）アミノ）エトキシ〕メチレン）アダマンタ ン。
〔（４−アセトキシフェニル）［２−（０−フルオレセイン）エトキシ）メチレ ン〕アダマンタン。
（（２−（Ｎ−（６−ヒトロキシベンゾチアゾールー２−カルボニル）アミノ） エトキシ〕　〔４−β−Ｄ−ガラクトピラノシルフェニル〕メチレン）アダマン タン。
〔（４−ホスファートフェニル］（２−（０−フルオレセイン）エトキシ）メチ レン〕アダマンタン。
塩。
（［２−（Ｎ−（６−ヒトロキシベンゾチアゾールー２−カルボニル）アミノ） エトキシ〕　〔４−ホスファートフェニル〕メチレン）アダマンタン、塩。
これまで述べて来た特定の具体例に加えて数多くの種類の標準的な文献上の方法 を、アルケンまたはジオキセタンに対し蛍光体を結合（ｃｏｕｐｌｉｎｇ）する のに用いることができる。これらの反応は、それに限定されるわけではないが次 のものを含む：求核置換、求電子置換、アルケン及びカルボニル化合物への付加 、カルボン酸誘導体への求核付加、イソチオシアナート及びイソシアナートへの 付加。
以上の記述は単に本発明を例示的に説明するためのものであり、本発明は以下に 掲げる請求の範囲によってのみ制限されるべきである。
ＦＩＧ、　　１ ＦＩＧ、　２ ＦＩＧ、３ ＦＩＧ、　６ 国際調査報告 ＩｎｌｌｌｆｉｌｌｌｌｌｆｉＭｌム−’＝Ｉｌ’ＯＮ’ＰＣ＋Ｔ／ＵＳ８９１ ０５７４＋

Claims (74)

    【特許請求の範囲】
  1. １．一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）〔式中Ｒ１，Ｒ２及びＲ３はそれぞれ 炭素を含み、且つ、光の生成を許容する酸素、チツ素或は硫黄を含んでいてもよ い基であり、Ｒ１，Ｒ２及びＲ３のうちの１つの基は約４００−９００ナノメー トルの間の蛍光を発生する束縛された蛍光体分子を含み、Ｒ１とＲ２とは互に結 合していてもよく、Ｒ３とＡｒＯＸとは互に結合していてもよく、Ｘは易除去性 の基である。〕で表され、基Ｘを除去する活性化剤と反応させると分解して一般 式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ＩＩ）で表されるアリールオキシドを形成 し、このアリールオキシドが自発的に分解して一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ＩＩＩ）および▲数式、化学式、表等があ ります▼（ＩＶ）で表される化合物を形成し、また上記した蛍光体分子含有基中 の蛍光体分子がアリールオキシドの分解時に活性化されて光を生成するものであ るジオキセタン化合物。
  2. ２．一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中Ｐｏｌｙは６−３０個の炭素原子を含み、且つ、酸素及びチツ素を含んで いてもよいスピロ結合多環式アルキレン基であり、Ｆは４００−９００ナノメー トルの間の蛍光を発生する蛍光体分子を含む基であり、ｙは１−１４の間の整数 であり、Ｘは易除去性の基である。〕 で表され、活性化剤により基Ｘを除去するジオキセタン化合物のオキシド中間体 を形成し、この中間体が自発的に分解して基Ｆに由来する光と一般式Ｐｏｌｙ＝ Ｏ および▲数式、化学式、表等があります▼で表されるカルボニル含有分子とを形 成するジオキセタン化合物。
  3. ３．基Ｆが式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表されるフルオレセインである請求項３のジオキセタン化合物。
  4. ４．基Ｆが式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中Ａｃはアセチル基である。〕 で表されるベンゾチアゾールである請求項２のジオキセタン化合物。
  5. ５．基Ｆが式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表されるベンゾチアゾールである請求項２のジオキセタン化合物。
  6. ６．基Ｘがヒドロキシル基、アルキルまたはアリールカルボキシルエステル、無 機オキシ酸塩、アルキルまたはアリールシリルオキシ基、及びピラノシド酸素か ら成る群から選択されたものである請求項２のジオキセタン化合物。
  7. ７．基Ｆが蛍光染料、ベンゼン誘導体、ナフタレン誘導体、アントラセン誘導体 、ピレン類或はビフェニル類を含む芳香族化合物、アクリジン、クマリン類、キ サンチン類、フタロシアニン類、スチルベン類、フラン類、オキサゾール類、ベ ンゾチアゾール類、フルオレセイン類、ローダミン類、エオシン類、レゾルシン 類、及びキノリン類から成る群から選択されたものである請求項２のジオキセタ ン化合物。
  8. ８．基Ｐｏｌｙがアダマンチル基である請求項２のジオキセタン化合物。
  9. ９．一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中Ｘは易除去性の基であり、ＦはＮ−アセチル−Ｎ−（６−ヒドロキシベン ゾチアゾール−２−カルボニル）アミノまたはＮ−（６−ヒドロキシベンゾチア ゾール−２−カルボニル）アミノである。〕である化合物。
  10. １０．基Ｘが水素である請求項９の化合物。
  11. １１．基Ｘがアセチル基である請求項９の化合物。
  12. １２．基Ｘがかラクトピラノシル基である請求項９の化合物。
  13. １３．基Ｘがリン酸基である請求項９の化合物。
  14. １４．一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中Ｘは易除去性の基であり、ＦはＯ−フルオレセインである。〕 で表される化合物。
  15. １５．基Ｘが水素である請求項１４の化合物。
  16. １６．基Ｘがアセチル基である請求項１４の化合物。
  17. １７．基Ｘがかラクトピラノシルである請求項１４の化合物。
  18. １８．基Ｘがリン酸基である請求項１４の化合物。
  19. １９．〔（３−（β−Ｄ−ガラクトピラノシル）フェニル）メトキシメチレン〕 アダマンタン。
  20. ２０．〔（３−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシルフエニル）（２−クロ ロエチル）メチレン〕アダマンタン。
  21. ２１．〔（２−クロロエトキシ）（３−ヒドロキシフエニル）メチレン〕アダマ ンタン。
  22. ２２．〔（３−ヒドロキシフエニル）（２−ヨードエトキシ）メチレン〕アダマ ンタン。
  23. ２３．〔（２−アミノエトキシ）（３−ヒドロキシフエニル）メチレン〕アダマ ンタン。
  24. ２４．｛〔２−（Ｎ−（６−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−ベンゾチ アゾール−２−カルボニル）アミノ）エトキシ〕〔３−ヒドロキシフエニル〕メ チレン｝アダマンタン。
  25. ２５．｛〔２−（Ｎ−アセチル−Ｎ−（６−ヒドロキシベンゾチアゾール−２− カルボニル）アミノ）エトキシ〕〔３−ヒドロキシフエニル〕メチレン｝アダマ ンタン。
  26. ２６．｛〔３−アセトキシフェニル〕〔２−（Ｎ−アセチル−Ｎ−（６−ヒドロ キシベンゾチアゾール−２−カルボニル）アミノ）エトキシ〕メチレン｝アダマ ンタン。
  27. ２７．〔（３−アセトキシフェニル（２−（Ｏ−フルオレセイン）エトキシ）メ チレン〕アダマンタン。
  28. ２８．〔（２−アミノエトキシ）（３−β−Ｄ−ガラクトピラノシルフエニル） メチレン〕アダマンタン。
  29. ２９．｛〔２−（Ｎ−（６−ヒドロキシベンゾチアゾアート−２−カルボニル） アミノ）エトキシ〕〔３−β−Ｄ−ガラクトピラノシルフエニル〕メチレン｝ア ダマンタン。
  30. ３０．〔（３−ホスフアートフエニル）（２−（Ｏ−フルオレセイン）エトキシ ）メチレン〕アダマンタン。
  31. ３１．｛〔２−（Ｎ−（６−ヒドロキシベンゾチアゾアート−２−カルボニル） アミノ）エトキシ〕〔３−ホスフアートフエニル〕メチレン｝アダマンタン。
  32. ３２．４−（３−β−Ｄ−ガラクトピラノシルフエニル）−４−メトキシスピロ 〔１，２−ジオキセタン−３，２′−アダマンタン〕。
  33. ３３．４−（２−（Ｎ−アセチル−Ｎ−（６−ヒドロキシベンゾチアゾール−２ −カルボニル）アミノ）エトキシ）−４−（３−ヒドロキシフエニル）スピロ〔 １，２−ジオキセタン−３，２−アダマンタン〕。
  34. ３４．４−（３−アセトキシフェニル）−４−（２−（Ｎ−アセチル−Ｎ−（６ −ヒドロキシベンゾチアゾール−２−カルボニル）アミノ）エトキシ）スピロ〔 １，２−ジオキセタン−３，２′−アダマンタン〕。
  35. ３５．４−（３−アセトキシフェニル）−４−（２−（Ｏ−フルオレセイン）エ トキシ）スピロ〔１，２−ジオキセタン−３，２′−アダマンタン〕。
  36. ３６．４−（２−（Ｎ−（６−ヒドロキシベンゾチアゾアート−２−カルボニル ）アミノ）エトキシ）−４−（３−β−Ｄ−ガラクトピラノシルフエニル）スピ ロ〔１，２−ジオキセタン−３，２′−アダマンタン〕。
  37. ３７．４−（３−ホスフアートフエニル）−４−（２−（Ｏ−フルオレセイン） エトキシ）スピロ〔１，２−ジオキセタン−３，２′−アダマンタン〕。
  38. ３８．４−（２−（Ｎ−（６−ヒドロキシベンゾチアゾアート−２−カルボニル ）アミノ）エトキシ）−４−（３−ホスフアートフエニル）スピロ〔１，２−ジ オキセタン−３，２′−アダマンタン〕。
  39. ３９．−般式 ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）〔式中Ｐｏｌｙはスピロ結合多環式ア ルキレン基であり、ｙは１−１４の間の整数であり、Ｆは蛍光体分子基であり、 Ｘは易反応性の基である。〕 で表され、活性化剤により基Ｘを除去するとジオキセタン化合物のオキシド中間 体を生成し、その中間体が自発的に分解して基Ｆに由来する光を発生するジオキ セタン化合物を製造する方法において、（ａ）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ＩＩ）〔式中Ｚは反応性の基である。〕 で表される化合物（ＩＩ）を有機溶媒中で、式ＦＡ〔式中ＡはＺと反応性である 。〕で表される化合物と反応させて一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ＩＩＩ）で表される化合物（ＩＩＩ）を形 成し、（ｂ）この化合物（ＩＩＩ）を塩化アセチルと反応させて▲数式、化学式 、表等があります▼（ＩＶ）一般式 〔式中Ａｃはアセチル基である。〕 で表される化合物（ＩＶ）を形成し、 （ｃ）この化合物（ＩＶ）と酸素を反応させて一般式▲数式、化学式、表等があ ります▼ で表されるジオキセタン化合物を形成する方法。
  40. ４０．Ｚ及びＡがそれぞれ、互に反応してカルボニルアミノ基を生成するアミン 基及びカルボニル基である請求項３９の方法。
  41. ４１．整数ｙが２であり、基Ｚがヨード基であり、化合物ＦＡがフルオレセイン である請求項３９の方法。
  42. ４２．整数ｙが２であり、基Ｚがアミノ基であり、化合物ＦＡが６−ｔｅｒｔ− ブチルジメチルシリルオキシ−２−ベンゾチアゾアートである請求項３９の方法 。
  43. ４３．有機溶媒がベンゼンである請求項３９の方法。
  44. ４４．ジオキセタン化合物が式 ▲数式、化学式、表等があります▼ をもつものである請求項３９の方法。
  45. ４５．ジオキセタン化合物が式 ▲数式、化学式、表等があります▼ をもつものである請求項３９の方法。
  46. ４６．ジオキセタン化合物が式 ▲数式、化学式、表等があります▼ をもつものである請求項３９の方法。
  47. ４７．ジオキセタン化合物が式 ▲数式、化学式、表等があります▼ をもつものである請求項３９の方法。
  48. ４８．ジオキセタン化合物が式 ▲数式、化学式、表等があります▼ をもつものである請求項３９の方法。
  49. ４９．ジオキセタン化合物が式 ▲数式、化学式、表等があります▼ をもつものである請求項３９の方法。
  50. ５０．一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）〔式中Ｒ，Ｒ１は光の生成を許容し、 且つ、互に結合していてもよい基であり、ｙは１−１４の間の整数であり、Ｆは 蛍光体分子基であり、Ｘは易除去性の基である。〕 で表され、活性化剤により基Ｘを除去するとジオキセタン化合物のオキシド中間 体を生成し、その中間体が自発的に分解して基Ｆに由来する光を発生するジオキ セタン化合物を製造する方法において、（ａ）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ＩＩ）〔式中Ｚは反応性の基である。〕 で表される化合物（ＩＩ）を有機溶媒中で、式ＦＡ〔式中ＡはＺと反応性の基で ある。〕で表される化合物と反応させて一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ＩＩＩ）〔式中Ｂは基Ｘまたは基Ｘに転換 できる基で、光酸化反応性を有しないものである。〕 で表される化合物（ＩＩＩ）を形成し、（ｂ）この化合物（ＩＩＩ）と酸素を反 応させて一般式▲数式、化学式、表等があります▼ で表されるジオキセタンを形成する方法。
  51. ５１．Ｚ及びＡがそれぞれ、互に反応してカルボニルアミノ基を生成するアミン 基及びカルボニル基である請求項５０の方法。
  52. ５２．整数ｙが２であり、基Ｚがヨード基であり、化合物ＦＡがフルオレセイン であり、基Ｘがアセチル基または水素である請求項５０の方法。
  53. ５３．整数ｙが２であり、基Ｚがアミノ基であり、化合物ＦＡが６−ｔｅｒｔ− ブチルジメチルシリルオキシ−２−ベンゾチアゾアートであり、基Ｘがアセチル 基または水素である請求項５０の方法。
  54. ５４．有機溶媒がベンゼンである請求項５０の方法。
  55. ５５．基Ｂがβ−ガラクトピラノシルである請求項５０の方法。
  56. ５６．基Ｂがリン酸基である請求項５０の方法。
  57. ５７．一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）〔式中Ｒ１，Ｒ２及びＲ３はそれぞれ 炭素を含み、且つ、光の生成を許容する酸素、チツ素或は硫黄を含んでいてもよ い基であり、Ｒ１，Ｒ２及びＲ３のうちの１つの基は約４００−９００ナノメー トルの間の蛍光を発生する束縛された蛍光体分子を含み、Ｒ１とＲ２とは互に結 合していてもよく、Ｒ３とＡｒＯＸとは互に結合していてもよく、Ｘは易除去性 の基である。〕で表されるアルケン化合物であつて、一般式▲数式、化学式、表 等があります▼（ＩＩ）で表されるジオキセタン化合物へと酸化でき、このジオ キセタン化合物（ＩＩ）が基Ｘを除去する活性化剤と反応せしめられると分解し て一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ＩＩＩ）で表されるアリールオキシドに分 解し、このアリールオキシド（ＩＩＩ）が自発的に分解して一般式▲数式、化学 式、表等があります▼（ＩＶ）および▲数式、化学式、表等があります▼（Ｖ） で表される化合物を形成し、また上記した蛍光体分子含有基中の蛍光体分子がア リールオキシド（ＩＩＩ）の分解時に活性化されて光を生成するものであるアル ケン化合物。
  58. ５８．一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中Ｐｏｌｙは６−３０個の炭素原子を含み、且つ、酸素及びチツ素を含んで いてもよいスピロ結合多環式アルキレン基であり、Ｆは４００−９００ナノメー トルの間の蛍光を発生する蛍光体分子を含む基であり、ｙは１−１４の間の整数 であり、Ｘは易除去性の基である。〕 で表されるアルケン化合物であって、一般式▲数式、化学式、表等があります▼ で表されるジオキセタン化合物へと酸化でき、このジオキセタン化合物が活性化 剤により基Ｘを除去されると該ジオキセタン化合物のオキシド中間体を形成し、 このオキシド中間体が自発的に分解して基Ｆに由来する光と一般式 Ｐｏｌｙ＝Ｏ および▲数式、化学式、表等があります▼で表されるカルボニル含有分子とを形 成するものであるアルケン化合物。
  59. ５９．基Ｆが式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表されるフルオレセインである請求項５８の化合物。
  60. ６０．基Ｆが式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中Ａｃはアセチル基である。〕 で表されるベンゾチアゾールである請求項５８の化合物。
  61. ６１．基Ｆが式 ▲数式、化学式、表等があります▼、 で表されるベンゾチアゾールである請求項５８の化合物。
  62. ６２．基Ｘがヒドロキシル基、アルキルまたはアリールカルボキシルエステル、 無機オキシ酸塩、アルキルまたはアリールシリルオキシ基、及びピラノシド酸素 から成る群から選択されたものである請求項５８の化合物。
  63. ６３．基Ｆが蛍光染料、ベンゼン誘導体、ナフタレン誘導体、アントラセン誘導 体、ピレン類或はビフェニル類を含む芳香族化合物、アクリジン、クマリン類、 キサンチン類、フタロシアニン類、スチルベン類、フラン類、オキサゾール類、 ベンゾチアゾール類、フルオレセイン類、ローダミン類、エオシン類、レゾルシ ン類、及びキノリン類から成る群から選択されたものである請求項５８の化合物 。
  64. ６４．基Ｐｏｌｙがアダマンチル基である請求項５８の化合物。
  65. ６５．一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中Ｘは易除去性の基であり、ＦはＮ−アセチル−Ｎ−（６−ヒドロキシベン ゾチアゾール−２−カルボニル）アミノまたはＮ−（６−ヒドロキシベンゾチア ゾール−カルボニル）アミノである。〕で表されるアルケン化合物であって、一 般式▲数式、化学式、表等があります▼ で表されるジオキセタン化合物へと酸化可能なアルケン化合物。
  66. ６６．基Ｘが水素である請求項６５の化合物。
  67. ６７．基Ｘがアセチル基である請求項６５の化合物。
  68. ６８．基Ｘがかラクトピラノシルである請求項６５の化合物。
  69. ６９．基Ｘがリン酸基である請求項６５の化合物。
  70. ７０．一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中Ｘは易除去性の基であり、ＦはＯ−フルオレセインである。〕 で表されるアルケン化合物であって、一般式▲数式、化学式、表等があります▼ で表される化合物へと酸化可能なアルケン化合物。
  71. ７１．基Ｘが水素である請求項７０の化合物。
  72. ７２．基Ｘがアセチル基である請求項７０の化合物。
  73. ７３．基Ｘがかラクトピラノシルである請求項７０の化合物。
  74. ７４．基Ｘがリン酸基である請求項７０の化合物。
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