JPH03502102A - 活性セリンを有するプロテアーゼに関して選択的インヒビターとして使用できるシクロペプチド誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 活性セリンを有するプロテアーゼに関して選択的インヒビターとして使用できる シクロベブチト誘導体本願発明はプロテアーゼインヒビターとして使用できる新 規なシクロペブチド誘導体に関するものである。

本発明は更に詳細には、血液凝固囚子ＩＸａ，Ｘａ，Ｘｌａ、ＸＩＩａおよび■ ａ，｝ロンビン、血漿カリクレイン、活性タンパク質Ｃ、補体中の活性化因子Ｃ ｌｒ　ｓ　Ｃｌｓ　，ＤおよびＢ，Ｃ３コンベルターゼ、トリプシン、キモトリ ブシン、エラスターゼ、エンテロキナーゼ、プラスミン、ブラスミノーゲンアク チベーター（ウロキナーゼ、ｔｐＡ）、アクロシン、カテブシンＧ１チマーゼ、 トリプターゼ並びにＡＴＰ依存性プロテアーゼのような活性システインまたはセ リンを有するプロテアーゼに適用される．更に詳細には、本発明は所定のプロテ アーゼのインヒビターとして選択的に作用する新規なシクロペブチド誘導体に関 するものである。

活性システインまたはセリンブロテアーゼは多数の生物学的過程に関与している ことが知られている。プロテアーゼと天然の巨大分子インヒビター間に平衡がな いときに病的状態が生じる。この非一平衡を除去するために合成インヒビターが 使用可能であり、そしてその結果、例えば以下の病変の治療に非常な利点を有し ている： 一肺気腫、リウマチ性関節炎、皮膚老化および炎症、これらの場合活性プロテア ーゼは白血球エラスターゼであり、カテブシンＧも関係している； −ブラスミノーゲンアクチベーターまたはプラスミンのようなプロテアーゼの存 在と関連した腫瘍浸潤および転移；−抗血栓症作用並びに脳梗塞および冠梗塞の 防止、これらの場合原因のプロテアーゼはトロンビンである；−ブラスミノーゲ ンアクチベーターおよびプラスミンと関係がある血栓崩壊および繁殖の制御； −成る種のウィルスが活性システィンプロテアーゼを生じさせるので、寄生中お よびウィルスの制御。

プロテアーゼの不可逆的インヒビターを合成するために数年間研究が行われてき た。それらの中では、３．４−ジヒドロ−３，４−ジブロモ−６−ブロモメチル クマリンのようなりマリン誘導体形態の合成インヒビターが特に知られている。

このものはシスティンおよびセリンプロテアーゼの非常に有効な、不可逆的な不 活性化因子またはインヒビターであるが、残念乍ら選択性を欠いている。これら クマリン誘導体は、Ａ、Ｊ、パレット　（Ｂａｒｒｅｌｌ）およびＧ３ザルベセ ン（Ｓａｌνｅｓｅｎ）による単行本「ブロティナーゼインヒビター」、エルセ ヴイア（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）、１９８６年、１１９〜］、、２１頁に詳細に記載 されている。

所定のプロテアーゼに関して特異性であり、そして類似するプロテアーゼに対し ては作用することなく、所定のプロテアーゼの不活性化を可能にする他のプロテ アーゼインヒビターを合成することも非常に重要であろう。

本願発明は、上記の結果を達成できるようにする新規なシクロペプチド誘導体に 特に関するものである。

本発明によれば、シクロペプチド誘導体は次式に対応する：Ｒ＋は、塩素、フッ 素、臭素およびヨウ素原子並びに基０５０２Ｒ’、ＵＰ（０）Ｒ’ｚ、　ＱＣ（ ０）Ｒ’およびＳ”Ｒ’Ｊ’、、　（Ｒ’はアルキル、パーフルオロアルキルま たは了り−ル基を表わし、その際Ｒ４は異なることができそしてχ−はＶ価の陰 イオンを表わす）から選択され； ＲＺは水素原子、アルキル基、ハロゲン原子、Ｎｏｗ、　Ｃ０ＯＲ’。

ＣＦ、　、ＣＮまたはＳＯ，！？’　（Ｒ’はアルキル基またはアリール基を表 わす）であり： Ｒ３は酸素原子、イオウ原子または−ＮＨ−を表わし；−Ｚはアミノ酸または同 −若しくは異なる類似体のペプチド配列Ｚ１および末端が芳香族分子に結合した −（ＣＨｚ）−１−Ｏ（Ｃ１，）ｎ−またはＣ０−（ｎは１から８までの整数で ある）の中から選択される基からなり； （式中、Ｒ６は−Ｎ−または−Ｃ）Ｉ−を表わし、Ｒ７はＨｌ−ｃｎｓ、ＣＨ２ ＣＬ　　Ｃ０ＯＨ，ＣＨｚ　　ＣＨｚ　　ＣＯＮＨｚ、（ＣＬ）ｎ　　ＮＨｚ、 ＣＨ２ＣＪｓ、　　ＣＨｚ　　ＣＪ−ＯＨ，（ＣＨ２）３ＮＩＣ（＝ＮＨ）　　 ＮＨｔ　。

−Ｃ）ｌ□−ＣＯＯ）Ｉ、−Ｃ）１０）［−ＣＨｆｆ　　、および−ＣＨ（ＣＨ ３）ｚの中から選択される基を表わす）し、Ｒ９は基−（Ｃ）１２）３−または −ＣＬ　　ＣＨＯＨＣＨＩを表わす）のアミノ酸またはアミノ酸類似体に由来す る基である。

本発明はまた、シクロペプチド誘導体の製薬的に受容可能な酸の付加塩にも関係 する。例えば、Ｒ？がアミノ基ＮＨ２からなるとき、上記の塩を使用することが できる。製薬的に受容可能な酸は、例えばＨＣｌ、、ＨＲｒ　、　ＰＯａＨｚ　 、Ｒ’Ｃ００）Ｉ、　５ＯａＨｚ　、Ｒ’５Ｏ３Ｈ（１？’は上記で示された意 味を有する）であることができる。

上記式中２．使用されるアルキル基は一般に１から５個の炭素原子を有しそして 直鎖または分枝であることができる。アリール基は６から２４個の炭素原子を有 することができる。このような基の例は、メチル、エチル、フェニルおよびナフ チル基である。

本発明によるシクロペプチド誘導体においては、ＣＬＲ’基がプロテアーゼの不 活性化を可能にし、そしてペプチド配列Ｚ、並びにアミノ酸Ｃ（０）−ＡＡの選 択によって所定のプロテアーゼに関して所望の選択性をもたらすことが可能にな る。好ましくは、ペプチド配列Ｚ、は、同一または異なることができる、２〜８ 個のアミノ酸またはアミノ酸類似体からなる。

使用可能なアミノ酸およびアミン類似体は、例えば式する）を充足するものであ る。

好ましくは、本発明においては、Ｒ３はＺに対してオルトまたはメタ位にあり、 Ｒ’）１．ｃに対してオルトまたはパラ位にある。

かくして、この配位によって、プロテアーゼを不活性化するＣＨ，Ｒ’基の能力 および不活性化されるプロテアーゼに選択的に適合すべきシクロペプチド鎖の能 力に関して最良の結果を得ることが可能になる。

不活性化メカニズムは第１にはＲ３とアミノ酸Ｃ（０）−ＡＡとの間のシクロペ プチドを開裂させ、基Ｃ（Ｃｏ）−ＡＡによってプロテアーゼの活性セリンにシ クロペプチドを固定させ、その結果アシル酵素を形成させることによる。このシ クロペプチド開裂は、Ｒ３がＮＨを意味するとき、メチレンキノンイミンタイプ の中間誘導体の形成によって高い可動性をＲ１に与え、そして該誘導体はメチレ ンアニリンに変換され、その際このものはメチレン基によって酵素の活性部位に 固定化され、その結果酵素の不活性化が確実にもたらされる。

好ましくはＲ１はＣＩ、Ｂｒ、０５Ｏ２Ｒ’または好ましくは５４Ｒ４２ｘ′： ／ｖである。Ｘ〜は製薬的に受容可能な酸から誘導される陰イオン、例えばｃｒ 、ＣＩＣｈ−１Ｂｒ＼ＢＰ、＼ＰＦ６＼Ｒ’ＣＯＯ−１ｌｌ’ＳＯ，（Ｒ’は上 記の意味を有する、例えばＣｈＣＯＯ−、）であることができる。

ｓ’Ｒ’２Ｘ−において、２つのＲ４は同一または異なることができそして好ま しくはアルキル基または了り−ル基である。

本発明によるシクロペプチドにおいて、ＺおよびＡＡＣ（０）は不活性化すべき プロテアーゼの相関的要素とし選択される。

−ＡＡ−Ｃ（０）−は標的プロテアーゼクラスの第一の特異性に相当するアミノ 酸から誘導される。

キモトリプシンタイプのプロテアーゼの不活性化を希望する場合には、−ＡＡ− Ｃ（０）−は、好ましくはフェニルアラニン、チロシン、トリプトファンまたは メチオニンから誘導され、そして式 （式中、Ｒ″はＣ）ＩでありそしてＲ７はＣＨ，−Ｃ，Ｒ５、ＣＨ，−Ｃ，Ｈ， ＯＢ。

に相当する。阻害すべきプロテアーゼがトリプシン群に属する場合、−ＡＡ−Ｃ （０）−は、好ましくはリジンまたはアルギニンから誘導されそして式 ％式％ （式中、Ｒ６はＣＩ（でありそしてＲ７は−（ＣＨｚ）　ａＮＨｚまたは（ＣＨ ｚ）３ＮＨＣ（・ＮＨ）　−ＮＨ，である）に相当する。

不活性化すべきプロテアーゼがエラスターゼタイプに属する場合、−ＡＡ　−Ｃ （０）−は、好ましくはアラニンまたはバリンから誘導されそして式 ％式％ （式中、Ｒ６はＣＨでありそしてＲ７は−ＣＨ２または−ＣＨ（ＣＨｚ）ｚであ る）に相当する。

本発明によれば、共有結合鎖Ｚもまた不活性化すべきプロテアーゼの相関的要素 として選択される。この鎖によって不活性化すべきプロテアーゼの天然基質の固 定化サブサイトの親和性が考慮される。かくして、プロテアーゼは広範な活性中 心を有しており、そして固定化サブユニットの特異性条件を満たす共有結合鎖Ｚ を選択することによってインヒビターの有効性および特異性を高めることができ る。

プロテアーゼがトリプシン、キモトリプシンまたはエラスターゼタイプである場 合、Ｚが式 （式中、ｍは４．５または６であり、そしてＲ６およびＲ１は上記の意味を有す る）を充足することによって上記特異性条件を満たすことができる。

本発明によるシクロペプチドでは、シクロペプチドの１部を形成するベンゼン核 は、基ＣＨ２によるプロテアーゼの不活性化メカニズムを変更しない置換基Ｒ１ を有することもできる。この置換基のＲ２は水素原子、ハロゲン原子または上述 したような種々の基であることができる。

本願発明はまた、所定のプロテアーゼを阻害する特性を有する薬剤組成物にも関 するものであり、これには本発明によるシクロペプチド誘導体の製薬的に受容可 能な量が含まれる。

これらの薬剤組成物は非毒性の支持体、アジュバントおよび賦形剤を含有する投 与形態の溶液、懸濁液、粉末または溶解可能な顆粒、シロップまたはエリキシル 剤、耳、　鼻若しくは目の滴下液、錠剤、ゼラチンカプセル、エアゾール、オイ ントメント、外皮適用剤または坐剤の形態が可能である。注射剤は、例えば静脈 内、筋肉内、皮下、皮肉、胸骨内、関節内のタイプが可能であり、また潅流また は点滴注入法（例えば気管内）を使用することができる。

経口投与用の製剤は１つまたはそれ以上の甘味剤、矯味剤または保存剤を含有す ることができる。錠剤は非毒性で製薬的に受容可能な賦形剤と混合したシクロペ プチド誘導体の活性分子を含有する。賦形剤としては、例えば不活性稀釈剤、例 えば炭酸カルシウム若しくは炭酸ナトリウム、りん酸カルシウム若しくはりん酸 ナトリウムおよび乳糖；顆粒化および崩壊を可能にする剤、例えばコーンスター チ、固定化剤、例えばゼラチンおよび澱粉；滑沢剤、例えばタルクまたはステア リン酸マグネシウム等を挙げることができる。錠剤は崩壊および吸収を遅らすた めに（例えばジステアリン酸またはモノステアリン酸グリセリンで）被覆するこ とができまたは被覆しなくても良い。

ゼラチンカプセルは不活性固体（カオリン、炭酸カルシウム）と混合した活性分 子を含有する硬カプセルはシクロペプチド誘導体と水または脂肪物質（例えば流 動パラフィン）を混合した軟カプセルの形態が可能である。

シクロペプチド誘導体および適当な賦形剤を、任意の１つまたはそれ以上の保存 剤（例えばＰ−ヒドロキシ安息香酸エチル）、着色剤、甘味剤および矯味剤と共 に含有する水性懸濁液を製造することができる。賦形剤としては、懸濁化剤（例 えばメチルセルロースおよびアカシアゴム）、分散または湿潤化剤、例えば天然 ホスファチド（例えばレシチン）または脂肪酸または脂肪族アルコールの種々の 部分エステルとエチレンオキシドとを縮合化する製品を挙げることができる。活 性分子の油性懸濁剤は、任意に、上記したような甘味剤および矯味剤、並びに保 存剤（特に抗酸化剤）の存在下、植物油（例えはオリーブ油）またはＫｈＩ油（ 例えば流動パラフィン）を使用して製造することができる。

シロップおよびエリキシル剤は甘味剤（例えば蔗糖およびソルビトール）、１つ またはそれ以上の保存剤および矯味剤を含有することができる。水中に懸濁でき る顆粒または粉末はシクロペプチド誘導体を湿潤化剤または分散化剤、１つまた はそれ以上の保存剤および種々の賦形剤と混合して得ることができる。

シクロペプチド誘導体の水中エマルジョンは鉱物油または植物油および種々の乳 化剤、例えば天然ゴム、天然ホスファチドおよび種々のエステル化脂肪酸を使用 して製造することができる。

シクロペプチド誘導体はまた、上記した懸濁化剤または湿潤化剤を使用した水性 または油性の滅菌注入可能懸濁剤の形態で存在することも可能である。溶媒、稀 釈剤または賦形剤は、例えば１．３−ブタンジオール、等張塩化ナトリウム溶液 、水等であることができる。活性本体を含有する坐剤は、ポリエチレングリコー ルまたはココナンツバターのような、この分野で慣用の賦形剤を用いて調製する ことができる。局部用途には活性本体を含有するオイントメント、クリーム、ゲ ル、懸濁液、溶液等を調製することができる。

所定の患者の投与量は、例えば問題のシクロペプチド誘導体の効力、年令、体重 、投与方法、食餌、薬誘発性の相互作用および病気の危険性のような一定数のフ ァクターに依存していることを考慮に入れて、体重１ｋｇおよび１日当たり０． １から４０■の投与量を提案できる。

これらの組成物は上記した病変に使用することができる。本発明によるシクロペ プチド誘導体は慣用の方法によって製造することができる。

かくして、Ｒ３がＮＨを表わすシクロペプチド誘導体は式（Ｉｔ）の誘導体から 次の連続的な工程を実施することによって製造することが可能である： ａ）式（ＩＴ）の化合物をＨ７’０ＣＪｓと反応させて下記式（ＩＩＩ）の化合 物を得る： ｂ）　式（Ｉ［［）の化合物を水素と反応させて下記式（ＩＶ）の化合物を得る ： Ｃ）　式（ＩＶ）の化合物を、例えば下記式によるＡＡ−Ｃ（０）に相当する保 護されたアミノ酸と反応させる：（式中、Ｂｏｃはｔ−ブチロキシカルボニル保 護基を表わす）。

この反応はジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を使用して実施すること ができそして下記式（Ｖ）の化合物に至る：ｄ）式Ｖの化合物をメタノールのよ うな溶媒中でヒドラジンヒトラードと反応させて式（Ｖｌ）の化合物を得る：ｅ ）　式（Ｖｌ）の化合物をトリフルオロ酢酸と反応させて下記式（■）の化合物 を得る： ｆ）式（■）の化合物を亜硝酸または亜硝酸アルキルと反応させて下記式（■） の化合物を得る： ｇ）　式（■）の化合物をジイソプロピルエチルアミンのような第３級アミンと 反応させ゛ζ下記式（ＩＸ）のシクロペプチド誘導体を得る： ＋１１ ＯＲ’ 弐（■）の化合物から、使用される基「の性質の相関的要素として選択される適 当な試１．！と反応させることに５よって式（Ｉ）の化合物を得ることができる 。

Ｒ１がＢｒである場合には、式（ＩＸ）の化合物は臭化水素酸および酢酸と反応 させ、これにより下記式（Ｘ）の化合物を得ることができる； 式（１）でＲ１が塩素を表わすシクロペプチド誘導体の取得を希望する場合には 、式（Ｘ）の臭素誘導体をジメチルホルトアミド（ＤＭＦ）中で酢酸ナトリウム と反応させて下記式（ＸＩ）の誘導体： を生しさせ、次いでこれをメタノールおよびトリエチルアミンとの反応によって 下記式（Ｘ　ｎ　）の誘導体に変換する：Ｉ　１ ＯＲ’ 次いで、式（ＸＩ［）の誘導体を塩化チオニルと反応させて、下記式（Ｘｌｎ） の塩素誘導体を得る：式（１）でＲ１がｏｓｏｚＲ’を表わすシクロペプチド誘 導体の取得を所望するときには、式（Ｘ）の臭素誘導体をスルホン酸Ｒ’５Ｏ３ Ｈの銀塩と反応させて下記式（ＸｒＶ）の誘導体を得ることができる： 同様にして、りん化水素酸の銀塩によって、Ｒ’　＝ＯＰ（０）［１’□（式Ｉ ）である誘導体が生じる。臭素誘導体とジアルキルスルフィドとの反応によって 対応するスルホニウム塩（１；Ｒ’＝Ｓ″Ｒ４□）が生じる。

しかし乍ら、Ｒ１がＳ″Ｒ４□Ｘ−を表わすシクロペプチド誘導体は、式（ＩＸ ）の対応する誘導体とＳＲ’□および式ｘＨｖの酸を反応させることによって下 記反応式に従って式（ＩＸ）の対応する誘導体から有利に製造される： 例えば、ＳＲ’□はチオアニソールＣ）Ｉ３ＳＣＪｓまたはジメチルスルフィド Ｃ）１．５ｃ１１．を表わすことができる。

式（ＩＩ）の出発物質は対応するメチル化ニトロ安息香酸から、酸機能のエステ ル化に続いて、弐（ＸＶ）：の誘導体を形成させるためにＮ−ブロモコハク酸イ ミドと反応させ、次いでこれを下記反応式に従ってナトリウムフェノラート、次 いでカリウム、次いでジメチルホルムアミドの存在下５ＯＣ１Ｎと反応させて式 （ＩＩ）の化合物を形成させて得ることが本発明は、説明的で且つ非限定的態様 で示される以下の実施例を研究することによって一層良く理解されよう。

ｔｆＬＬ 下記式のシクロペプチド誘導体の製造：この式は式（Ｉ）のシクロペプチド誘導 体に相当し、その際Ｒ１は臭素を表わし、Ｒｔは水素原子を表わし、ＺはＣｏ（ ＧＩｙ）４を表わし、Ｒ４はＮ）Ｉを表わしそしてＣ（０）−ＡＡはリジンから 誘導される。

１）　式（ｎ）のＲ”＝　Ｈ；　Ｃ０ＣＺがＮＯ□に対してメタ位であり、Ｃ６ ８５０ＣＩ’＋２がＮＯ７に対してバラ位である化合物の製造：ＨｚＯ／ＣＨｚ ＣＺｚ ３−ニトロ−６−メチル安息香酸１１．７ｇ　（６３，６ミリモル）は還流下メ タノール中過剰の塩化アセチルによって対応するメチルエステルにエステル化す る。得られたエステルはＣＣｌ４１５０ｄ中に溶解させＮ−ブロモコハク酸イミ ド（ＮＢＳ）　１２．５ｇ　（７０ミリモル）および過酸化ベンゾイル０．１１ ｇで還流下２４時間処理する。

反応混合物はフリットで濾過し、濾液は減圧上蒸発乾固させる。

得られた式（ＢｒＣＨｔ）　（ＮＯｘ）ＣＪｓ−ＣＯＯＣＨ：＋の粗生成物は、 前原って精製することなく　、ＣＨｚ（Ｊｚ　２５０ｄ中フ工ノール１２ｇ（１ ２７ミリモル）および１部量のトリカプリルメチルアンモニウムクロライド２． ５０　ｇ　（６，２ミリモル）にベレット状のソーダ５．０８　ｇ　（１２７ミ リモル）を水２５０ｍに溶解して加えたもので直接処理する。反応混合物は周囲 温度で５時間激しく攪拌する。次いで、有機相を分離し、水４００−で洗浄し、 Ｍｇ５Ｏａで乾燥し、濾過して約１５０ｄに濃縮した後、シリカゲルカラム（Ｍ ｅｒｃｋシリカゲル６０）上でクロマトグラフィーに付し、塩化メチレン（ＣＨ ｚ（Ｊｚ）で溶出させる。約６００　ｄのフラクションを集め、蒸発乾固する。

得られた残渣はＣＨｚ（Ｊｚ　１５０−に溶解させる。約２００−〇メタノール をを加えて還流する。ＣＨ２（Ｊ、が全て蒸発したときに、沸とう溶液中で結晶 化が観察される。混合物は１５０戚に濃縮し、周囲温度で一夜放置する。白色結 晶はブフナーフィルターで濾過し、メタノールで十分に洗浄して風乾させる。こ れによって誘導体（Ｃ６Ｈ５ＯＣＨ２）　（ＮＯｔ）Ｃ６Ｈｉ−ＣＯＯＣＨｚに 相当する結晶１１．１ｇが得られる。収量は出発酸（ＣＨ３）　（Ｎｏｔ）Ｃ６ Ｈ５−ＣＯＯＨに基づいて６０％である。

融点：１１４°Ｃ，ＮＭＲ’Ｈスペクトル（ＣＤＣＺ　３／ＴＭＳ）　：８．９ ３、ｄ　（Ｊ＝２Ｈｚ）、ＩＨ（ＡｒＨ＋）；　８．４５．　ｄｄ（Ｊ　＝２Ｈ ｚおよび８Ｈｚ）、　ＬＨ（ＡｒＨｚ）；　８．０？、　ｄ（Ｊ＝８Ｈｚ）、　 　ＩＨ（八ｒ’ｄｓ”）７　６．８〜７．５．＊＋５Ｈ（ＣＪｓＯ）；　　５． ５８．ｓ、２Ｈ（ＡｒＣＨｚＯ）；４．００．ｓ、３）１（ＣＯＯＣＨｓ）　　 。

元」じ辷Ｌ　　　　　　　　　　　旦　　　　且　　　Ｎ計算値（Ｃｉ　５８１ ３ＮＯ５として）　　６２．７１　　４．５６　　４．８８実測値　　　　　　 　　　６２．９２　　４．３１　　４．９８前記エステル３．５９ｇ　（１２， ５ミリモル）はメタノール１００ｄ中４Ｎ水性ＫＯ８２５ｄ（１００ミリモル） でけん化する。混合物は周囲温度で４時間攪拌する。水１５０−を加え、そして メタノールを減圧下３５°Ｃで蒸発させる。水性溶液はＣＨ，Ｃ１２で抽出し、 次いで過剰の濃塩酸で酸性にする。得られた沈殿物はＣＨｔＣＺｚ４００１ｄに 溶解する６有機相を分離し、水２００ｄで洗浄し、Ｍｇ５Ｏａで乾燥し、濾過し そして蒸発乾固して、淡黄色結晶形態の式（ＣＪｓＯＣＨｚ）（Ｎｏ□）ＣＪ＊ −ＣＯＯＨの酸２．７９ｇが得られる。収量は８２％である。融点＝１７０°Ｃ ，ＮＭＲ’Ｈスペクトル（アセトンｄａ）：　８．９３．　ｄ（Ｊ＝２Ｈｚ）。

ＬＨ（ＡｒＨ＋）；　８．５５．　ｄｄ（Ｊ＝２ｔＬｚおよび８Ｈｚ）、　１Ｂ （ＡｒＨｚ）；　８．１５．ｄ（Ｊ＝８Ｈｚ）、ＬＨ（ＡｒＬ）；　６．８〜７ ．７．　ｍ、　５Ｈ（ＣＪｓＯ−）；５．７１．ｓ、　２）１（ＡｒＣＨ２Ｏ） 　。

立粟分扼　　　　　　　　　　、ＣＨＮ。

計算値（ＣｚＨｚＮＯｓとして＞　　６１．５４　　４．０６　　５．１２実測 値　　　　　　　　　６１．９Ｂ　　　３．８４　　５．１２前記の酸２．７９ ｇ　（１０，２ミリモル）は５ＯＣ１ｚ　５０ｄ、およびジメチルホルムアミド （ＤＩＩＦ）　１０滴で処理する。得られた澄明な溶液は周囲温度で２時間攪拌 し、次いで減圧下４０°Ｃで蒸発乾固させる。

得られた残渣は式（ｎ　）　　”　（Ｃｂ）ＩｓＯＣ）ｔｚ）　（Ｎｏ□）Ｃｔ ｈ）ｌｚ−Ｃｏ−Ｃｆの酸クロライドに相当し、そして精製することなく次の工 程（２）で直接使用する。

２）　下記式（Ｘ■）の化合物の製造：化合物Ｈ−Ｇｌ）Ｉｎ−ＯＣＪｓ　ＨＢ ｒ　３．５７ｇ　（１０ミリモル）およびＤＭＦ５０ｉｄを攪拌して０゛Ｃに冷 却する。トリエチルアミン３ｊ１１！（２１ミリモル）を加える。混合物は１０ 分間攪拌し、次いで（１）で得られた、Ｒ”＝Ｈ，ＣＯＣ，ｌカＮｏ、　ニ対し ”’Ｃ）　夕位Ｔニア’）ソｌ、ＣＣｂＨｓＯ−ＣＩ（、がＮＯ２に対してバラ 位である酸クロライド（ＩＩ）１０．２ミリモルのＤＭＦ　４０ｄ溶液を０°Ｃ で約３０分間で滴下して加える。添加後、周囲温度で一夜攪拌し続ける。混合物 を減圧下５０℃で蒸発乾固する。得られた残渣は水２０〇−中で粉砕し、そして 得られた沈殿物はブフナーフィルターで濾過し、Ｈｚｏ　２００ＩＩＩｉ、０． ５Ｎ　ＨＣｌ２００Ｉｊｄｌ、Ｈｚｏ　１００ｍ、５％ＮａＨＣＯｘ　２００− およびＨｚｏ　２００ｍで連続的に洗浄し、風乾し、次いでメタノール５０ｄ中 で粉砕し、ブフナーフィルターで濾過し、メタノール、次いで水で洗浄し、風乾 し、そして化合物（Ｘ■）３．８３ｇ（収量７２％）を得る。このものの融点は １９７から２００”Ｃで、そのまま次の工程（３）で使用する。

分析用試料は前記試料５２■をＤＭＦｌｄに溶解した後水性メタノ−・ルを添加 して再結晶させて調製する。結晶３４■が得られ、１９９から２０３°Ｃの融点 を有する。　ＮＭＲ’Ｈによる分析で次の結果が得られる：　（ＤＭＳＯ−ｄｉ ）：　９．０９．　ｔ（Ｊ＝５．６Ｈｚ）、ＩＨ（ＮＨＧＩｙ）；　８．４２゜ ｄ（Ｊ＝２Ｈｚ）、　ＩＨ（ＡｒＨ）；　８．３６．　ｄｄ（Ｊ＝２）１ｚおよ び８．６Ｈｚ）、　ＩＨ（ＡｒＨｚ）；Ｌ３４．　ｔ（陰画された＞、　１）１ （Ｎ）ｌＧｌｙ）；　８．２Ｂ、　ｔ（Ｊ＝５．８Ｈｚ）。

１Ｎ（ＮＨＧｌｙ）；　８．２３．ｔ（Ｊ＝５．８Ｈｚ）、　　ＬＨ（ＮＨＧｌ ｙ）；　７．８８．　　ｄ（Ｊ＝８．６１（ｚ）。

１）１（八ｒＨｔ）；　　７．３．　　Ｌ　　２Ｈ（Ｃ６１１ＳＯ−）；　　７ ．０．　　ｍ、　　３Ｈ（Ｃ６）ｔｓ−０−）：　　５．３X゜ ｓ、２Ｂ（Ｃｉ、ＨｓＯ−ＣＬＡｒ）；　４．０６．ｑ（Ｊ＝７．１ｔ４ｚ）、 　　２Ｈ（０−ＣＨｚＣＨｉ）；　３．９６゜ｃｌ（Ｊ＝５．５）１ｚ）、　　 ２Ｈ（ＣＨｚＧＩｙ）；　３．８１．　　ｄ（Ｊ＝５．５Ｈｚ）、　　４８（２ Ｃ）ＩｚＧｌｙ）；３．７５．　　ｄ（Ｊ＝５．６Ｈｚ）、　　２Ｈ（ＣＨｚＧ Ｉｙ）；　　１．１？、　　ｔ（Ｊ＝７．１Ｈｚ）、　　３８（ＯＣＨｚＣｌ（ ：ｌ）。

又棗先梶　　　　　　　　　　　　　　　　−Ｃ−且　　　Ｎ計算値（Ｃ，、！ （□ＪｓＯ＊　０，５ＬＯとして）　５３．５２　５．２４　１３．００実測値 　　　　　　　　　　　　　　５３．４Ｂ　　５．０９　１２．５０３）　αＮ Ｈ，基がｔ−ブチロキシカルボニル基Ｂｏｃで保護されそしてεＮＨ，基がベン ジロキシカルボニル基ＣＢＺで保護されているリジンを有する下記式ｃｘｉｘ） の化合物の製造：（Ｒｏｃ＝　（ＣＨ３）　３Ｃ−０−ＣＯ−）（ＣＲＺ−Ｃ， ）！５−ＣＨｚ−０−ＣＯ−）最初に、式（Ｘ■）のべ１千ド１．．０６ｇ（２ ミリモル）を温ＤＭＦ　２５ａ＋ｆに溶解させる。次いでこれにメタノ・−ルア ５ｄおよびＰｔＯ２１！５ｏ■（０，７ミリモル）を加える。混合物はバール（ Ｐａｒｒ）装置を使用し２て３気圧下周囲温度で２時間水素化する。触媒を濾過 し、溶媒を残圧上留去シ２．て下記式（Ｘ■）の化合物が得られこのもののクロ マトグラフィー分析で０．４６のＲｆが示される（支持体ニジリカ、展開溶媒Ｃ ）ｌｚ（Ｊｚ　８５％−ＭｅＯＨ１５％）、芳香族アミン官能が存在するとクロ マトグラフィースポット９３６６ｎｍでの蛍光紫外線吸収が得られる。この化合 物は溶液中ではそれ程安定でないので、更に精製することなく、製造後直ちに化 合物（ＸｉＸ）の合成に使用される。

かくして、先に得られた式（Ｘ■）の芳香族アミンをＤＭＦ　１−に溶解し、Ｃ ＴｏＣＺｚ　２５ＩＲＩｌを加えそして溶液は一５℃に冷却する。次いで、これ にＮ　ｃｘ−Ｂｏａ−Ｎ　ｔ−ＣＢＺ−Ｌ−リジン０．９Ｌ２　ｇ　（２，４ミ リモル）を加え、次いでＣＨｚＪ　２５ｄに入れたジシクロへキシルカルボジイ ミド（ＤＣＣ）　０．４９５ｇ（２，４ミリモル）を加える。混合物は一５°Ｃ で２０時間、次いで周囲温度で一夜攪拌する。次いで、形成されたジシクロヘキ シル尿素沈殿物を濾過しそして溶媒を留去する。残渣を酢酸エチル４００ｄに溶 解し、有機相を５％ＮａＨＣＯｓ　２００ｍ１！、　ＨｚＯ２００ｄ、０．５％ ＨＣＩ　２００ｒｄ、ＨｚＯ２００ｄで連続的に抽出し、Ｍｇ５Ｏａで乾燥し、 濾過しそして蒸発乾固させる。

得られたペプチドは、溶出液として１０％＝９０％の割合のメタノールとＣＨｚ Ｃｌｚの混合物を使用してシリカゲルカラム（シリカゲル６０）で精製する。

上記によって式（ＸＩＸ）の誘導体が７１％の収量で得られる。

シリカゲルによるクロマトグラフィー分析で０．７０のＲｆ　（展開溶媒コメタ ノール１５％−ＣＬＣＪｚ　８５％）または０．２９のＲｆ（展開溶媒：メタノ ール１０％−ＧＨｚＣｌｚ　９０％）が示される。融点は７２から７６°Ｃであ る。旋光度は（α）　：承、＝　　９．１＠（ｃ　Ｏ，５；　１１ｅＯＨ）であ る。

ＮＭＲ’Ｈによる分析は次の結果を示している：　（ＣＤＪＤ）：　８．０７゜ ｓ、　ＩＨ（ＡｒＨ＋）；　７．８１．　ｄ（Ｊ＝８．３Ｈｚ）、　１Ｂ（Ａｒ Ｈｚ）；　７．７１．　ｄ（Ｊ＝８．３１（ｚ）。

１．８（八ｒＨ３）；　　７．５１．ｍ、５Ｈ’（ＣＢＺ　　のＡｒＨ）：　　 ７．４４．ｒｎ、２Ｈ（ＣｂＨｓＯ−）：　　７．１３゜ｍ、　３）＋（Ｃ６Ｉ ＳＯ−）；　５．４２．ｓ、２Ｈ（ＣＪｓＯ−ＣＨｚ−Ａｒ）；　５．２３．ｓ 、２Ｈ（ＣＢＺのＣＨｚ）；　４．３５．＋ｗ、１８（ＣＨαＬｙｓ）；　４． ２９．ｑ（Ｊ＝７．１Ｈｚ）、　２Ｈ（ＯＥｔのＣＪ）：４．２４．ｓ、２８（ ＣＨｚＧＩｙ）；４．０９．ｓ、２１（（ＣＨｔＧＩｙ）；　４．０８．ｓ、２ Ｈ（ＣＦＩｔＧｌｙ）；４．０７．ｓ、２）１（ＣＨｚＧｌｙ）；　３．３１． ｍ、２Ｈ（ＣＨｌｇ　Ｌｙｓ）；　１．９１．ｍ、２Ｂ（ＣＨｌｇＬｙｓ）；　 １．７０．ｍ、４Ｈ（ＬｙｓのｃｏｚＴおよびＣＩ！δ）；　１．６３．ｓ、９ ）１（Ｂｏｃの３ＣＨｓ）；　１．．４０．ｔ（Ｊ＝７．１Ｈｚ）、　３Ｈ（Ｏ ＥｔのＣＬ）。

元素豆梶　　　　　　　　　　　　旦　　　且　　　五計算値ＣＣａ５ＨＳｓＮ ｒＯ＋　ｚとして）　　５９．９２　　６．４３　　１１．３８実測値　　　　 　　　　　　５９．７７　　６．５５　　１．１．２１４）下記式（ＸＸ）の誘 導体の製造 Ｈ−ＣＢＺ 弐（ＸＩＸ）のエステル３．２ｇ（３，７ミリモル）のメタノール１５０ｍ１’ Ｒ液はヒドラジンヒトラードＨ２ＮＮＨｔ−Ｈｚｏ　５．２５ｄ（１０８ミリモ ル）の存在下周囲温度で１２時間攪拌する。溶液は減圧下４０°Ｃで蒸発させる 。残渣はメタノールを用いて数回取り出し、そしてヒドラジンが完全に除去され るまで蒸発乾固させる。固体残渣をエーテル中で粉砕し、上澄液を除去する。乾 燥後、誘導体（Ｘ　Ｘ　）　３．１０９ｇが白色粉末の形態で得られる。収量は ９８％である。融点は１００から１１０°Ｃである。シリカゲル支持体上のクロ マトグラフィー分析によって０．４６のＲｆが示される（展開溶媒：メタノール ２０％−［：）［ｚ（Ｊｚ　８部％）。旋光度は〔α）：＝−８，４＠（ｃ　Ｏ ，６；　ＭｅＯＨ）である。

ＮＭＲ’Ｈ分析によって次の結果が示される：　（ＣＤｓＯＤ／ＴＭＳ）ニア、 ８８゜ｄ（Ｊ＝１．８Ｈｚ）、ＩＩ（（八ｒＨ＋）：　７．６２．　ｄｄ（Ｊ＝ １．８Ｈｚおよび８．４１１ｚ＞、　ＩＨ（ＡｒＨｚ）；　７．５３．　ｄ（Ｊ ＝８．４Ｈｚ）、　１．Ｈ（ＡｒＨｘ）；　７．３０．ｍ、５Ｈ（ＣＢＺのＡｒ Ｈ）　；７．２４１１１．２ＨＣＣ６）１５０−）；　６．９４．ｍ、３Ｈ（Ｃ ＪｓＯ−）ｉ　５．２２．Ｓ、２Ｈ（ＣＪｓＯＣＨｚ４ｒ）；　５．０４．ｓ、 ２Ｈ（ＣＢＺのＣｕｔ）：　４．１５．ｍ、ＩＨ（Ｌｙｓ　０）ＣＨ（ｒ＞：　 ４．０６．　ｓ。

２Ｈ（ＧｌｙのＣＨｚ）：３．８８．ｓ、２Ｂ（ＧｌｙのＣＨｚ）；　３．８７ ．ｓ、２Ｂ（ＧｌｙのＣＨｚ）；３．８４．ｓ、２Ｈ（ＧｌｙのＣＨｚ）；　３ ．１２．ｍ、２Ｈ（ＬｙｓのＣＨｚ　ａ　）；　１．７５．＋ｍ、２８（Ｌｙｓ のＣ）１２β）；　１．５１．ｍ、４Ｈ（１、ｙｓのＣＨｌｇおよびＣ１１ｔδ ）；　１．４３゜ｓ　、　９Ｈ（Ｂｏｃの３ＣＨ３）。

土足　　　　　　　　　　　　　　　−ｑ−且　　　凡計算値（Ｃ４＋）ＩｓＪ Ｊ＋　Ｉ’　０．５）＋２０として）　５７．４６　６．３５　１４．．７１実 測値　　　　　　　　　　　　　　５７．３６　６．３７　１４．４６５）　下 記式（ＸＸＩ）の誘導体の製造：弐（ＸＸ）の化合物３．１０９ｇ　（３，７ミ リモル）を氷酢酸８０ｄに溶解し、そして２Ｍの塩化水素酸溶液２０ｍを加える 。３０分間攪拌した後、エチルエーテル１５０ｄを加える。沈殿物を沈ませて、 上澄液を除去する。残渣をエチルエーテルで３回洗い、毎回沈殿させた後上澄液 を除去する。残渣沈殿物をメタノール１００ｍに溶解し、そして溶液は減圧下４ ０℃で蒸発乾固させる。この操作を２回繰り返す。残渣は均質な白色粉末が得ら れるまでエチルエーテル中で粉砕する。エーテル上澄液を除き、残渣固形物を真 空下で乾燥する。これにより弐（ＸＸＩ）の誘導体２．９４”１ｇが白色粉末の 形態で得られる。

収量は９８％であり、融点は８４から８８°Ｃ（分解）である、シリカゲル支持 体上でのクロマトグラフィー分析によって０．０７のＲｆ（展開溶媒：　ＭｅＯ Ｈ２０％−ＧＨｚＣｌｚ　８０％）または０．６２のｌ？ｆ　（展開溶媒：ｌ： ｌ：ｌ：ｌの割合の酢酸エチル／ｎ−ブタノール／酢酸／水）が示される。

旋光度はＣα）　：＝＋２３．０（ｃ　Ｏ，５；　ＭｅＯＨ）である。

ＮＭＩ？　’）Ｉによる分析は次の結果を示している：（ＣＤ３０Ｄ／ＴＭＳ） ニア、９３．ｄ（Ｊ＝２．１．Ｈｚ）、　ＩＨ（ＡｒＬ）；　７．７１．　ｄｄ （Ｊ＝２．１１（ｚおよび８．４Ｈｚ）、ＩＨ（ＡｒＨｔ）；　７．５６、ｄ（ Ｊ＝８．４Ｈｚ）、　１）１（ＡｒＨｓ）；　７．３１゜ｍ、５Ｈ（ＣＢＺのＡ ｒ）り；　７．２５．ｍ、２Ｈ（Ｃ６Ｈ１Ｏ−）；　６．９４．　ｍ、３Ｂ（Ｃ ＪｓＯ−）；５．２４．ｓ、２Ｈ（ＣｂＨｓＯ−ＣＨｔ−Ａｒ）：　５．０！、 　ｓ、　２Ｈ（ＣＢＺのＣＨｚ）；　４．０７．ｓ。

２Ｈ（Ｇ　Ｉ　ｙのＣＨｚ）；　４．０３．＋ｍ、ＬＨ（ＬｙｓのＣＨｃｒ）； 　３．９５．ｓ、２Ｈ（ＧｌｙのＣ）ｌｚ）；３．９１．、　ｓ、　２Ｈ（Ｇｌ ｙのＣＨｚ）；　３．８９．　ｓ、２Ｈ（ＧｌｙのＣＨｚ）；　３．１４．　ｖ ｇ。

２１（（ＬｙｓのＣＨｔ　ｅ　）：　１．９７．　ｍ、　２）ｔ（Ｌｙｓｌ１７ ）ＣＨｌｇ）；　１．５３．１１．４Ｈ（ＬｙｓのＣＨ，７およびＣＨ，δ）。

６）下記式（ＸＸｎ）のシクロペプチドの製造：式（ＸＸＩ）の化合物０．８２ ０ｇ　（１ミリモル）を約−３０から一４０°ＣでＤ？ＩＦ　２０ｄに加えて溶 液とする。次いで、５．５Ｍの塩化水素酸テトラヒドロフラン（Ｔ）ＩＦ）溶液 １．４５ａｅ（８ミリモル）を加えて酸性化し、次いで硝酸イソアミル０．２０ ０〆（１，５ミリモル）を加える。溶液は約−３５°Ｃで３０分間攪拌し、次い で冷ＤＭＦ２００ｍを加えて稀釈する。溶液はジイソプロピルエチルアミン２． １ｃｄ（１２ミリモル）を加えてｐｌ＋８から９のアルカリ性にし、−３５°Ｃ で１０分間攪拌し、次いで冷蔵庫（＋４”Ｃ）中で２４時間放置する。

これらの操作は全部で３．１３ｇ　（３，８２ミリモル）の式（Ｘ）１）の化合 物を処理するために、数回繰り返す。

次いで反応混合物を合わせ、そして５％に、Ｃ６水性溶液２０〇−を加える。ジ イソプロピルエチルアミン、水およびＤＭＦの１部を除去するために、減圧下４ ０°Ｃで約１５０−に濃縮する。次いで、混合物をフリットで濾過して不溶の鉱 物塩を除去し、そして濾液を減圧下４０℃で蒸発乾固する。残渣は結晶化する油 である。メタノール５０ｍを加えると、白色結晶が得られる、これをブフナーフ ィルターで濾過し、メタノールで洗い、そして乾燥する（得られた重量１．７９ ８ｇ）。濾液を蒸発乾固し、残渣をシリカゲルカラム（シリカゲル６０）のクロ マトグラフィーに付し、溶出液として１５％＝８５％の割合のメタノール／　Ｇ Ｈｚ　Ｃ１ｚの溶液を使用する。生成物を含有するフラクシッンを合わせ、溶媒 を留去する。残渣は上記のようにしてメタノール中で結晶化させる。

かくして、０．０７６ｇの結晶を得る。即ち、全部で１．８７４ｇの式ｃｘｘｎ ）のシクロペプチドを得る。

収量は６８％でそして融点は２７０から２８０°Ｃ（分解）である。

シリカゲル支持体上のクロマトグラフィー分析によって０．５５のＲｆ　（展開 溶媒：　Ｍｅｎ）１２０％−ＧＨｚＣｌｔ　８０％）または０．７８のＲｆ　（ 展開溶媒：ＥｔＯＡｃ：ｎＢｕＯＨ：Ａｃ０）１：ＨｚＯ＝　１　：　１　：　 １　：　１　）が示される。相当するスポットはニンヒドリン陰性である。旋光 度は〔α：＋Ｈ＝−４ｏ、ｓ″’　（ｃ　Ｏ，５；　ＤＭＦ）　Ｔ：ある。

ＮＭＲ’Ｈによる分析は次の結果を示している：（ＤＭＳＯｄ６）：　９．０３ ．ｓ、ＬＨ（ＡｒＮｌ（ＣＯ）；　８．８９．　ｔ（Ｊ＝５．７）１ｚ）、ＬＨ （ＮＨＧｌｙ）噌８．７５．　ｔ、（Ｊ＝４．７Ｈｚ）、　１８（ＮＨＧａｙ） ；　８．５８．ｄ（Ｊ＝７．４Ｈｚ）、　１ｔ（（ＮＨＬｙｓ）；　８．２０． 　ｄｄ（Ｊ＝１．６）１ｚおよび８．４Ｈｚ）、　ＬＨ（Ａｒ）Ｉｚ）；　８． １６゜ｔ（Ｊ＝６．０Ｈｚ）、　ＬＨ（Ｎ）Ｉ　Ｇｌｙ）；　７．７５．　ｔ（ Ｊ＝５．６Ｈｚ）、　ＩＨ（ＮＯＧｌｙ）；７．７１．、　Ｄ（Ｊ＝２．０Ｈｚ ）、　１）１（ＡｒＨ，）：　７．５０．　ｄ（Ｊ＝８．５Ｈｚ）、　ＬＨ（Ａ ｒＨｓ）；１．３４．　ｅａ、　５Ｂ（ＣＢＺのＡｒＨ）；　７．２９．　ｍ、 　２Ｈ（Ｃ６ＨｓＯ−）；　６．９４．　ｍ、　３Ｈ（Ｃ６Ｈ５Ｏ）；　５．２ １．　Ｓ、　２Ｈ（ＣＪｓＯＣＨｚ−Ａｒ）；　５．００．　Ｓ、　２Ｈ（ＣＢ ＺのＣＨ，）；４．２０．　ｔｓ、　１．Ｈ（ＬｙｓのＣＨｃｒ）；　４．１０ 〜３．６０．　ｍ、　８１１（Ｇｌｙの４Ｃ）ＩＺ）　；３．００．　ｍ、　２ ｔ＋（ＬｙｓのＣ）１２　ｔ　）　；　１．９３＋　Ｌｌおよび１．６７、　ｍ 、　ＩＨ（ＬｙｓのＣＨ，β）；　１．４１．　ｔａ、　４Ｈ（ＬｙｓのＣ）１ ．ＴおよびＣＨ，δ）。

元皇盆捉　　　　　　　　　　　　旦　　　且　　　凡計算値（Ｃ３６Ｈ４１Ｎ ７０９として）　　６０．４１　　５．７７　　１３．７０実測値　　　　　　 　　　　　６０．４０　　５．７０　　１３．４３？）　　式（ＸＶＩ）のシク ロペプチドの製造：式（ＸＸ１１）のシクロペプチドＯ，１４５ｇ（０，２ミリ モル）と酢酸２０．４ｄの混合物を澄明な溶液が得られるまで加熱し、その後周 囲温度に冷却する。次いで、これに３３％のＨＢｒ酢酸溶液３．６Ｃ１！を加え る。この混合物を周囲温度で１時間攪拌する。次いで、エチルエーテル２５Ｃ１ ！を加え、臭化シクロペプチドの沈殿が得られる。沈殿させた後上澄液を除去す る。次いで沈殿物をエーテル中で攪拌し、その後遠心し、次いで上澄液を除去す る。全ての酸を媒体から除去するために上記操作を数回繰り返す。次いで沈殿物 を真空下で乾燥する。これにより式（ＸＶＩ）のシクロペプチド０．１３１ｇが 白色粉末の形態で得られる。収量は９９％で、融点は１９０から２００°Ｃ（分 解）である。

シリカゲル支持体上でのクロマトグラフィー分析により０．４３のＲｆが示され る（展開溶媒：　ＥｔＯＡｃ：ｎＢｕＯＨ：ＡｃＯＨ：ＨｚＯ＝　１　：　１　 ：１　：　１）、このスポットはニンヒドリン陰性である。旋光度は〔α）：＝ ３５．５°（ＣＯ，２；　ＭｅＯＨ）である。

ＮＭＩ’！　’Ｈによる分析は次の結果を示している：（ＣＤ３０Ｄ）：　８． ２７．　ｄｄ（Ｊ＝２．２Ｈｚおよび８．４Ｈｚ）　、ＩＨ（ＡｒＨｚ）　；　 ７．９３゜ｄ（Ｊ＝２．２Ｈｚ）、　ＬＨ（ＡｒＨ，）；　７．６６、　ｄ（Ｊ ＝８．４Ｈｚ）：　ＩＨ（ＡｒＨｓ）；　５．０３゜ｄ　（Ｊ＝１０．１Ｈｚ） および４．９Ｂ、ｄ（Ｊ＝８．１Ｈｚ）、　２）１（ＢｒＣＨｚＡｒ）；　４． ５９゜ｄｄ　（Ｊ＝４．４Ｈｚおよび９．７Ｈｚ）、　１８（ＬｙｓのＣＨｃｒ ）；　４．３８．　ｄ（Ｊ＝１６．９１１ｚ）および４．１３．　ｄ（Ｊ＝１６ ．９Ｈｚ）、　２Ｈ（ＧｌｙのＣＨｚ）　；　４．３０．　ｓ、　２Ｂ（Ｇｌｙ のＣＨｚ）；　４．２４．　ｄ（Ｊ＝１６．９Ｈｚ）および４．１３．　ｄ（Ｊ ＝１６．９Ｈｚ）、　２Ｈ（ＧｌｙのＣＨｚ）　；　４．］、５．　ｄ（Ｊ＝１ ５．８Ｈｚ）および４．０１．　ｄ（Ｊ＝１５．３Ｈｚ）。

２Ｈ（ＧｌｙのＣＨｚ）；　３．１５．　　ｔ（Ｊ＝７．５Ｈｚ）、　２Ｈ（Ｌ ｙｓのＣＨｚ　ｔ　）：　２．２５．　ｔａ。

１Ｈおよび２．０３．　ｔａ、　ＩＨ（ＬｙｓのＣＨ２β）；　１．８９．　ｍ 、　２Ｈ（ＬｙｓのＣＨｔδ）；　１．．７４．　ｍ、　２Ｈ（ＬｙｓのＣＨｚ ｒ）。

元」づ辷Ｌ　　　　　　　　　　　　　　　　旦　　　且　　　−Ｎ−計算値Ｃ ＣｚｔＨｓ＋Ｎ、０ｂＢｒｚとして＞　　　　４０．６９　　４．８１　　１５ ．１０実測値　　　　　　　　　　　　４０．８Ｂ　　　５．０１　　１３．６ ４マススペクトル（ＦＡＢ＞Ｏ）　：　５７８（７９ＢｒのＭＷ”″）５７０（ ”ＢｒのＭ）Ｉ”　） 実】Ｉ津１ 式（ＸＶＩ）のシクロペプチド誘導体の特性、特にウシトリプシンまたはヒトウ ロキナーゼを不活性化する能力を、キック（ｌｉｔｚ）およびウィルソン（Ｗｉ ｌｓｏｎ）の方法（トリプシンおよびウロキナーゼ用）並びにハート（）ｌａｒ ｔ）およびオブライエン（０’　Ｂｒ−１ｅｎ）の方法（トリプシン用）　　（ Ｂｉｏｃｈｅ＋１ｌｉｓｔｒｙ　　１２．２９４０〜２９４５．１９７３に発表 ）を使用して検査する。

この例では、見かけ上の不活性化定数ｋｉ／Ｋｉはニーウシトリプシンに対して は５３Ｍ−’ｓ−’、そして−ヒトウロキナーゼに対しては４．２Ｍ”’ｓ−’ 、である。

しかし乍ら、このシクロペプチド誘導体はエラスターゼに対しては作用を有さな い。

実１圀１ 下記式（ＸＸＩ）のシクロペプチド誘導体の製造：衿Ｈ この式は式（１）のシクロペプチド誘導体に相当し、その際Ｐ−は臭素を表わし 、ＲＺは水素原子を表わし、ＺがＣｏ（Ｇｌｙ）４を表わし、Ｒ３はＮＨを表わ し、そしてＣ０−ＡＡはアルギニンに由来している。

上記シクロペプチド誘導体の製造は実施例１に類似した方法に従うが、第３工程 では、式（Ｘ■）の化合物はαＮＨ，基がブチロキシカルボニル基Ｂｏｃで保護 されているアルギニンと反応させる。これによって式ｃｘｘｍ＞のシクロペプチ ドが得られ、このものは次の特徴を有する： Ｒｆ＝０．５２　（支持体ニジリカゲル：展開溶媒：　ＥｔＯＡｃ：ｎＢｕＯＨ ：ＡｃＯＨ：ＨｚＯ＝　１　：　１　：　１　：　１　）　−融点＝２０５〜２ １５°Ｃ（分解）。

旋光度：　（ｃｒ）　：＝　　２１０”Ｃ（ｃ　Ｏ，２；　ＭｅＯＨ＞。

核磁気共鳴による分析：　（ＣＤｓＯＤ）：　８．２５．　ｄｄ（Ｊ＝２．０Ｈ ｚおよび８．４Ｈｚ）、　ＬＨ（ＡｒＨｚ）；　７．９６．　ｄ（Ｊ＝２．０Ｈ ｚ）、　ＩＨ（ＡｒＨ，）；　７．６６、　ｄ（Ｊ＝８．４．）Ｉｚ）、　ＩＨ （Ａｒ）ｉｓ）；　５．０１．　ｓ、　２Ｈ（ＢｒＣＨｚＡｒ）；　４．６１． 　ｄｄ（Ｊ＝４．７Ｈｚおよび９．２Ｈｚ）、　ＬＨ（ＡｒｇのＣＨα）；　３ ．９〜４．５．　＠、　８Ｂ（Ｇｌｙの４ＣＨｚ）　：３．４５．　ｍ、　２１ ＋（ＡｒｇのＣＨｚδ）；　２．２８．　ｗｒ、　ＩＨおよび２．０６．　ａｓ 、　１［１（ＡｒｇのＣＨ２β）；　１．９３．　ｔａ、　２）１（ＡｒｇのＣ Ｈ２Ｔ　）。

マススペクトル（ＦＡＢ　＞　Ｏ）　　：　５９６（”ＢｒのＭ）Ｉ’　）　　 および５９８　（”　’　ＢｒのＭｌ”　）　　。

側Ｈ殊を 式（ＸＸＩＩＩ）のシクロペプチド誘導体の特性、特にウシトリプシンまたはヒ トウロキナーゼを不活性化する能力は、実施例２と同一の方法を使用しそして２ ５°Ｃで０．０２５Ｍりん酸ナトリウム緩衝液、０．１ＭＮａＣｆ、０．０５％ （ｖ／ｖ）　　）　ウィーン８０およびヒトウロキナーゼではｐ）１７．５で実 施して検査する。見かけ上の不活性化定数ｋｉ／Ｋｉ　はウシトリプシンに対し て１５０Ｍ−’ｓ−’′である。

見かけ上の不活性化定数ｋｉ／Ｋｉはヒトウロキナーゼに対しては１６５Ｍ−’ ｓ−’である。上記誘導体のヒ）　ｔ−ＰＡに関する不活性化または阻止効果特 性は２５°Ｃで０．０５ＭＦ−リス緩衝液、０．０３８ＭＮａＣ１，０，０１％ （ｖ／ｖ）　　）　ウィーン８０中、ｐＨ８，３で検査する。この場合のｋｉ／ Ｋｉは０．３Ｍ−’ｓ−’である。

しかし乍ら、このシクロペプチド誘導体はエラスターゼに対しては作用を有して いない。

夫差韮」− 下記式（ＸＸＴＶ）のシクロペプチド誘導体の製造：、ＣＨ２ ｂＨｓ このシクロペプチド誘導体は式（１）の誘導体に相当し、その際Ｒ１は臭素を表 わし、Ｒ２は水素原子を表わし、ＺはＣｏ（Ｇｕｙ）４を表わし、Ｒ３はＮＨを 表わし、そしてＣｏ−ＡＡはフェニルアラニンに由来している。

上記シクロペプチド誘導体を製造するために、実施例１に類似した操作方法に従 うが、第３工程では、ＮＨ，基がブチロキシカルボニル基で保護されているフェ ニルアラニンを使用する。

これによって式（ＸＸＩＶ）のシクロペプチド誘導体が得られるゆこの誘導体の 特徴は次のとおりである：　Ｒｆ−０，５０（展開溶媒：ＭｅＯＨ２０χ−Ｃ） ＩｚＣＺｚ　８０χ’）：　０．６９　（展開溶媒：　ＥｔＯＡｃ：ｎＲｕＯＨ ：＾ｃＯ）１：ＬＯ＝１　：　１　：　１．　：　ｉ）。

核磁気共鳴による分析：　（ＣＤ３０Ｄ）：　８．１５．　ｄｄ（Ｊ＝２．１Ｈ ｚおよび８．５Ｈｚ）、　ＩＨ（ＡｒＨｚ）；　７．９２．ｄ（Ｊ＝２．２）１ ｚ）、　ＬＨ（ＡｒＨ＋）；　７．６６、　ｄ（Ｊ＝８．５Ｈｚ）、　ＩＨ（Ａ ｒ）ｌｚ）；　７．４．７．　ｖａ、　５Ｈ（ＰｈｅのＡｒＨ）；　５．００． 　ｓ、　２Ｈ（ＢｒＣＨｚＡｒ）；　４．８６．　ｍ、　ＩＨ（ＣＨαＰｈｅ） ；　３．７〜４．２．　ｍ、　８１１Ｃ４ＣＨｔＧｌｙ）；　３．５９．　Ｉｌ ＋、　１Ｂおよび３．２０．　ｍ、　ＩＨ（ＰｈｅのＣ）Ｉ、）。

（ＣＤｓＣＯＯＤ）：　８．０３．　ｄ（Ｊ＝８．３Ｈｚ）、　１Ｍ（Ａｒ）Ｉ ｔ）；　７．７９．　ｓ、　１）１（ＡｒＨ＋）；７．５６．　ｄ（Ｊ＝８．５ ）１ｘ）、　ＩＨ（ＡｒＨｘ）；　７．３６．　ｍ、　５Ｈ（Ｐｈｅの＾ｒＨ） ；　４．９３゜ｄｄ　（Ｊ＝５Ｈ２および１０Ｈｚ）　、　ＩＨ（ＰｈｅのＣＨ α）、　４−８６＋　Ｓ＋　２８（ＢｒＣｌｌｚＡｒ）；４．４３．　ｄ（Ｊ＝ １６．４Ｈｚ）、　０１および４．３５．　ｄ（Ｊ＝１６．４Ｈｚ）、　ＩＨ（ ＧｌｙのＣＬ）；　４．３４．　ｄ（Ｊ＝１６．５Ｈｚ）、　１８および４．１ ７．　ｄ（Ｊ＝１６．４Ｈｚ）、　１Ｂ（ＧｌｙのＣＨｚ）；　４．２７．　ｄ （Ｊ＝１６．６Ｈｚ）、　１Ｂおよび４．１０．　ｄ（Ｊ＝１６．５Ｈｚ）。

１Ｂ（ＧｌｙのＣＨｚ）；　４．０９．　ｄ（Ｊ＝１６．０Ｈｚ）、　ＩＨおよ び３．９２．　ｄ（Ｊ＝１６．１Ｈｚ）、　ＬＨ（ＧｌｙのＣＨｚ）　；　３． ４７．　ｄｄ（Ｊ＝５Ｈｚおよび１５Ｈｚ）、　ＬＨおよび３．１７．　ｄｄ（ Ｊ＝１Ｏｆ（ｚおよび１５Ｈｚ）、　ＩＨ（ＰｈｅのＣＬ）。

融点：１８０〜２００’Ｃ（分解） 旋光度：　　Ｃａ：ｌ　：＝−４６，７’　（ｃ　Ｏ，１２；　ＩＩＭＦ）元１ づ月ｉ　　　　　　　　　　　　　　　　　ＣＨＮ−ｄｆ算イ直（ＣｚｓＨｚＪ Ｊ６Ｂｒ　　３．５Ｈ２０として）　　　４６．１６　　　５．２６　　　１２ ．９２実測値　　　　　　　　　　　　　４６．２３　４．７１　１１．７８マ ススペクトル（ＦＡＢ＜０）　：　５８６（”ＢｒのＭＱ）および５８８　（” 　’　ＢｒのＭＯ）。

実施例１則 式（ＸＸｒＶ）のシクロペプチド誘導体の特性、特にウシキモトリプシンの不活 性化能を、実施例２と同一の方法を使用して検査する。この化合物の見かけ７Ｌ の不活性化定数ｋｉ／にｉは７　Ｍ−’ｓ−’である。

尖施七ユ 下記式（ＸＸＶ）のシクロペプチド誘導体の製造：Ｃ１１□ ｂＨＳ この誘導体は式（１）のシクロペプチド誘導体に相当し、その際Ｒ１はＣＩを表 わし、Ｒ２は水素原子を表わし、ＺはＣｏ−Ｇｕｙを表わし、Ｒ１′はＮＨを表 わし、そしてＣｏ−ＡＡはフェールアラニンに由来している。

出発物は式（ＸＸＩＶ）のシクロペプチド誘導体であり５．そしてジメチルホル ムアミド（ＤＭＦ）中詐酸ナトリうムで、次いでメタノール中トリエチルアミン で、そして最後に塩化チオニルによって連続的に処理する。

最後に、弐（ＸＸＩＶ）のシクロペプチド０．０２５ｇ　（０，０４ミリモル） を酢酸カリウム０．３００ｇ　（３ミリモル）およびＤＭＦａｄ中周囲温度で激 しく撹拌する１２次いで混合物は減圧下で蒸発乾固させる。次いで、これに２０ 　：　８０のメタノール／塩化メチレン混合物２５証を加え、２．３分間攪拌し 、濾過し７て溶媒を留去する。残渣をシリカゲルカラム（シリカゲル６０）のク ロ゛ントグラフィー１、：付し、メタノール（２０χ）およびＣＨｚＣｌｚ（８ ０χ）の混合物で溶出させる。フラクションを合わせ、溶媒を留去する。残渣は メタノール２ｄに熔解させる。エーテルを加え沈殿を生じさせる。

沈殿物を遠心し２、エーテルで洗い、再び遠心し、そして乾燥する。これによ７ って下記式（ＸＸＶ［）に相当するアセテート０．０１８ｇが得られる＝ □ Ｃう１（。

この方法で収量７５９もで得られノーー代（ＸＸＶＩ）の化合物は次の特徴を有 する：融点１９０〜２１０°Ｃ（分解）；Ｒｆ（シリカ）　＝０．５（展開溶媒 ：　Ｍｅｏｌｌ　２０！　　Ｃ１ｈＣ／ｚ　８０％）：　５．５（Ｎ開溶媒：　 ＥｔＯＡｅ：ｎＲｕＯＨ：ＡｃＯＨ：）ＩｇＯ＝　１　：　ｉ　：　１　：　１ 　）。

核磁気共鳴による分析：　（ＣＤＩＯＤ）：８．２０．　ｄｄ（Ｊ＝２．１Ｈｚ および８．４．Ｈｚ）、　　ＩＨ（ＡｒＬ）：　　７．９３．　　ｄ（Ｊ＝２． ２Ｈｚ）、　　ＩＨ（八ｒＨ，）、　７．６４．　　ｄ（Ｊ＝８．４Ｈｚ）、　 １Ｂ（ＡｒＨ３）；　７．４７．　ｍ、　５Ｈ（ＰｈｅのＡｒ）Ｉ）；　５．４ ９．　ｄ（Ｊ＝１２．９Ｈｚ）および５．４３．　ｄ（Ｊ＝１２．９Ｈｚ）、　 ２Ｈ（ＡｃＯＣＨｚＡｒ）；　４．８５．　ｄｄ（Ｊ＝４．６Ｈｚおよび１０． １Ｈｚ）、　１）１（ＰｈｅのＣＨα）；　４．３２．　ｄ（Ｊ＝１６．７Ｈｚ ）、　１Ｂおよび４．０９．　ｄ（Ｊ＝１６．９Ｈｚ）、　１８（ＧｌｙのＣＨ ｚ）；　４．２５．　ｓ、　２Ｈ（ＧｌｙのＣＨｚ）；　４．２４．　ｄ（Ｊ□ １７．１）１ｚ）、１Ｂおよび４．０９．　ｄ（Ｊ＝１６．９Ｈｚ）、　１８（ Ｇ］３１のＣＨ２）；　４．０１．　ｄ（Ｊ＝１５．６）１ｚ）、　ＩＨおよび ３．８２．　ｄ（Ｊ＝１５．７Ｈｚ）。

ＬＨ（ＧｌｙのＣＴｏ）　；　３．６０．　ｄｄ（Ｊ＝４．５Ｈｚおよび１４． ０Ｈｚ）、　１）１および３．１Ｂ、　ｄｄ（Ｊ＝１０．３Ｈｚおよび１４．０ Ｈｚ）、　ＬＨ（ＰｈｅのＣＨｚ）　；　２．２５．　ｓ。

３Ｈ（ＣＨｚＣＯＯ−）　　。

旋光度：　Ｃｃｘ〕：＝　　３６．９’　（ｃ　Ｏ，１３；　ＤＭＦ）。

マススペクトル（ＦＡＢ＜０）　：　５６６（Ｍ”　）；　６００（Ｍ−Ｈ−Ｃ Ｈ３ＣＯＯ）１）一式（ＸＸＶＩ）の誘導体０．０６６ｇ　（０，１２ミリモル ）をメタノール１８戚に溶解し、次いでトリエチルアミン２ｄを加え、そして溶 液を周囲温度で４８時間攪拌する。次いで、混合物は減圧下４０゛Ｃで蒸発乾固 させ、残渣はシリカゲルカラム（シリカゲル６０）でクロマトグラフィーに付し 、ＭｅＯＨ２０χ／ＣＨｚＣＪｚ　８０χの混合物で溶出する。適当なフラクシ ョンを合わせ、溶液を約２ｍに濃縮する。エチルエーテル１５−を加えて沈殿を 生じさせる。沈殿物を遠心し、エーテル中で粉砕し、再び遠心し、次いで真空下 で乾燥する。これによって下記式（ＸＸ■）の誘導体０．０４３ｇが７０％の収 量で得られる： 式（ＸＸ■）の誘導体は次の特徴を有する：融点＝２００〜２２０℃（分解）； Ｒｆ（シリカ）＝０．５０（展開溶媒：　ＭｅＯＨ２０χ−ｃＨｚｃｔｔ　８０ ％）；旋光度：　Ｃα〕’：：＝　−８０，０”　（ｃ　Ｏ，２；　ＤＭＦ）。

核磁気共鳴による分析：　（ＣＤ３０Ｄ）：　８．２３．　ｄｄ（Ｊ＝２．２Ｈ ２および８．３）１ｚ）、　ＬＨ（ＡｒＨｚ）；　８．００．　ｄ（Ｊ＝２．２ Ｈｚ）、　ＩＨ（ＡｒＨ＋）；　７．６３．　ｄ（Ｊ＝８．３）１ｚ）、　１８ （ＡｒＨｚ）；　７．４９．　ｍ、　５Ｈ（ＰｈｅのＡｒＨ）；　４．８７．　 ｓ、　２［１（ＯＣＨｚＡｒ）　；　４．８５．　ｄｄ　１部陰画Ｕ＝４．４［ ｚおよび推定１０．６Ｈｚ）、　ＩＨ（ＰｈｅのＣＨｃｒ）；　４．３８．　ｄ （Ｊ＝１６．８Ｈｚ）、　ＬＨおよび４．１１．　ｄ（Ｊ＝１６．８）１ｚ）。

ＩＨ（ＧｌｙのＣＨｚ）；　４．３０．　ｄ（Ｊ＝１６．３Ｈｚ）、　１Ｂおよ び４．２３．　ｄ（Ｊ＝１６．３Ｈｚ＞、　ＩＨ（ＧｌｙのＣＨｚ）ｉ　４．２ ８．ｄ（Ｊ＝１７．１Ｈｚ）、　ＬＨおよび４．００．　ｄ（Ｊ＝１７．１Ｈｚ ）、　］、ＩＨＧｌｙのＣＨＩ）：　４．０３．　ｄ（Ｊ＝１５．４Ｈｚ）、　 ＩＨおよび３．７８．　ｄ（Ｊ＝１５．４Ｈｚ＞、　ＩＨ（ＣＨｚＧｌｙ）；　 ３．６５．ｄｄ（Ｊ＝４．３！ｌｚおよび１４．２Ｈｚ）、　ＩＨおよび３．１ ？、　ｄｄ（Ｊ＝１０．６Ｈｚおよび１４．２Ｈｚ）、　ＩＨ（ＰｈｅのＣ）ｌ ｘ）。

最後に、式（ＸＸ■）の誘導体０．０１５７ｇ（０，０３ミリモル）をＤＭＦ　 Ｏ，５１１ｉ！に溶解させる。溶液をＯ′Ｃで攪拌し、そしてこれに、ＤＭＦ５ ｄ！中塩化チオニル０．１７ｍの新たに調製した溶液０．２５ｍを０°Ｃに維持 して加える。混合物をＯ′Ｃで１分間、次いで周囲温度で３分間攪拌し、そして 直ちに減圧下で蒸発乾固する。これらの操作は全部で０．０４４３ｇ（０，０８ ミリモル）の式（ＸＸ■）の誘導体を処理するために数回繰り返す。溶媒留去後 に得られた残渣は一緒にする。

精製はシリカゲルカラムクロマトグラフィーで行い、ＭｅＯＨ１５％−ＣＨ，Ｃ Ｚ□８５％の混合物で溶出する。適当なフラクションを合し、溶液を蒸発乾固す る。残渣はメタノール２ｄに溶解させ、エチルエーテルを加えて沈殿させる。沈 殿物を遠心し、エーテル中で粉砕し、再び遠心して真空下で乾燥する。これによ って式（ＸＸＶ）の塩化物０．０２６８ｇが得られ収量は５８％である。式（Ｘ ＸＶ）の誘導体は次の特徴を有する：融点：１７０〜２３０°Ｃ（固体状態で分 解）；Ｒｆ　（シリカ）：０．６７（展開溶媒：　ＭｅＯＨ２０Ｘ　　ＣＨｚＣ Ｚｚ　８０％）；０．７４　（展開溶媒：　ＥｔＯＡｃ：ｎＢｕＯＨ：Ａｃ０） １：ＨｒＯ（１：　１　：　１　：　１　）。

旋光度コ　［α）　：＝−３１，８°（ｃ　Ｏ，８：　ＭｅＯＨ）。

核磁気共鳴による分析：　（ＣＤ：＋ＯＤ）：　８．１７．　ｄｄ（Ｊ＝２．１ Ｈｚおよび８．４）１ｚ）、　ＩＨ（ＡｒＨｚ）；　７．９４．　ｄ（Ｊ＝２． １Ｈｚ）、　ＩＨ（ＡｒＨ＋）；　７．６Ｂ、　ｄ（Ｊ＝８．４Ｈｚ）、　ＩＨ （ＡｒＨｓ）；　７．４８．　ｔｇ、　５Ｈ（ＰｈｅのＡｒＨ）；　４．８６． 　ｄｄ（Ｊ＝４．７Ｈｚおよび１０．０Ｈｚ）、　ＩＨ（ＰｈｅのＣＨα）；　 ４．８３．　ｓ、　２Ｈ（（ｌＪｃＨｌＡｒ）；４．３２．　ｄ（Ｊ＝ｉ７．０ ）ｌｚ）、　ＩＨおよび４．１２．　ｄ（Ｊ＝１７．０Ｈｚ）、　ＩＨ（Ｇｌｙ のＣＨｚ）；　４．２９．　ｓ、　２Ｈ（ＧｌｙのＣＬ）；　４．２３．　ｄ（ Ｊ＝１．６．９Ｈｚ）、１８および４．０９．　ｄＵ＝１６．８）１ｚ）、　Ｌ Ｈ（ＧｌｙのＣＨｚ）　；　４．０１．　ｄ（Ｊ＝１５．８１１ｚ）　。

ＩＨおよび３．８５．　ｄ（Ｊ＝１５．８Ｈｚ）、　１Ｂ（ＧｌｙのＣＨｚ）； 　３．５９．　ｄａ（Ｊ＝４．７Ｈｚおよび１４．０Ｈｚ）、　ＩＨおよび３． １９．　ｄｄ（Ｊ＝１０．１Ｈｚおよび１４．０Ｈｚ）。

１８（Ｐｔ＋ｅのＣＨｚ）。

□　　　　旦且 計算値（ＣｚｓＨｚＪｂＯ７ＣＺ、１．５Ｈ２０として　　５２．６８　　５． ３１実測値　　　　　　　　　　　　　　　　５２，４３　　４．６９マススペ クトル（ＤＣＩ）　：　５４２（”（Ｊ〕Ｍ’　）５４４Ｃ７ＣＩのＭ’） 実ＪｔＪ生班 式（ＸＸＶ）のシクロペプチド誘導体の特性、特にウシキモトリプシンを不活性 化する能力を実施例２と同一の方法を使用して検査する。この化合物の見かけ上 の不活性化定数ｋｉ／Ｋｉは２．８Ｍ−’ｓ−’である。

実施例２，４．６および８の結果を表１に要約する。

夫施斑主 下記式（ＸＸ■）のシクロペプチドの製造：ＮＨ：＋、ＣＦｓＣＯＯ一 式（ＸＸｎ）のシクロペプチド０．１００ｇ　（０，１４ミリモル）およびチオ アニソール１．４１２　ｄ　（１４ミリモル）のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）５ ．６Ｃ１１１溶液を周囲温度で２４時間攪拌する。次いでこれにエチルエーテル ５０ｃｄを加えて、白色沈殿物を形成させる。沈殿物を傾瀉して上澄液を除去す る。沈殿物をエーテルで数回洗い、遠心して集め、真空下で乾燥し、そしてシリ カゲルカラムクロマドグラフィー（シリカゲル６０）により、ＥｔＯＡｃ／ｎＢ ｕｏＩ（／ＡｃＯＨ／ＨｚＯ＝ｌ：ｌ：ｌ：ｌ溶液で溶出して精製する。適当な フラクションを合し、溶液を減圧下で蒸発乾固する。得られた残渣をトリフルオ ロ酢酸２ｄに溶解し、次いでエーテルで沈殿させる。

沈殿物をエーテルで数回洗い、遠心して集めて乾燥する。これをメタノール２ｃ １１Ｙに溶解し、エーテルで再び沈殿させ、エーテルで数回洗い、遠心して集め て乾燥する。次いでこれを水１０ｃｎに溶解する。溶液を濾過した後凍結乾燥す る。これによって式（ＸＸ■）のシクロペプチド０．０５６ｇが白色粉末の形態 で得られる。収量は４８％であり、そして融点は１３５°Ｃ（分解）である。

シリカゲル支持体上でのクロマトグラフィー分析によって、０．１２のＲｆ　（ 展開溶媒：　ＥｔＯＡｃ／ｎＢｕＯＨ／ＡｃＯＨ／ＨｚＯ＝　１　：　１　：　 １　：　１　）が得られる。旋光度は〔α）　ｚｓｏ（５４６ｎｍ）＝−２５， ８°（ｃ　ｏ、２：Ｒ２０）である。ＮＭＲ’Ｈによる分析によって次の結果が 得られる：（口ｚＯ）：　　７．８〜７．３．　ｍ、　　３Ｂ（ＡｒＨ’Ｈ”Ｒ ３）　　；７．６０．　ｍ、　　５Ｈ（Ｃ６Ｈ５Ｓ”）：５．１３．　ｍ、　２ Ｈ（ＡｒＣＨｚＳ”″）；　４．２６．　Ｊ　ＩＨ（ＣＨａ　Ｌｙｓ）；　３． ９４．　ｍ。

８Ｈ（４ＣＨｚ　Ｇａｙ）；　３．２９．　ｓ、　３）１（ＣＨ３Ｓ”）；　２ ．９６．　ｍ、　２Ｈ（（ＪｌｚεＬｙｓ）；１．９〜１．４．　ｍ、　６Ｈ（ ＣＨｚβ７６１．、、ｙｓ）。

ＸＩＪＵ殊刊 下記式（ＸＸＩＸ）のシクロペプチドの製造：この式の化合物は式（Ｉ）のシク ロペプチド誘導体に相当し、その際Ｒ１はＣ６Ｈ５５’（ＣＨ３）−１ＣＦ３Ｃ ＯＯ−を表わし、Ｒ２は水素原子を表わし、ＺはＣ０（ＧｌｙＪａを表わし、Ｒ ２はＮＨを表わし、そしてＣ（０）−ＡＡはアルギニンに由来している。実施例 １（工程１がら６）および実施例９に類似した操作方法に従うが、実施例１の第 ３工程では、式（Ｘ■）の化合物を、αＮＨ，基がブチロキシカルボニル基Ｂｏ ｃで保護されているアルギニンと反応させる。

これによって式（ＸＸＩＸ）のシクロペプチドが得られ、これは次の特徴を有す る：　Ｒｆ＝０．１４　（シリカゲル支持体；展開溶媒ＥｔＯＡｃ／ｎＢｕＯＨ ／ＡｃＯＨ／ＨｚＯ＝　１　：　１　：　１　：　１　）　、融点は１２５〜１ ３０″Ｃ（分解）である。旋光度は〔α）　”’　（５４６ｎｉ）＝　−４°（ ｃ　Ｏ，１；Ｒ２０）である。核磁気共鳴による分析：　’Ｈ（ＤｚＯ）：　７ ．８〜７．３．　ａｉ。

３Ｈ（Ａｒｌ（’Ｉ（”！（３）；　７．６１．　ｍ、　５Ｈ（Ｃ６Ｈ５Ｓ”） ；　５．１０．　ｍ、　２Ｎ（ＡｒＣＨｚＳ”）；４．２８．　ｍ、　１Ｂ（Ｃ ＨａＡｒｇ）；　３．９５．　ｍ、　８Ｈ（４ＣＨ，Ｇｌｙ）；　３．３０．　 ｓ。

３Ｈ（ＣＨｓＳ”）；　３．２０．　ｍ、　２Ｈ（ＣＨｚδＡｒｇ）　ｉ　２． ０〜１．６．　ｍ、　４Ｈ（ＣＨ，Ｒ７Ａｒｇ）。

実皇貫Ｕ 下記式（ＸＸＩＸ’　）のシクロペプチドの製造：Ｈｔ Ｃ，１１Ｂ ＮＨ３，ＣＦ３ＣＯ０− この化合物は化合物（ＸＸＩＸ）の位置異性体である。その式は式（１）のシク ロペプチド誘導体に相当し、その際Ｒ′はＣ，ｌｌ５Ｓ’（ＣＩ！、）−、ＣＦ ３ＣＯ０−を表わし、Ｒ２は水素原子を表わし、Ｚは！？３に対してオルト位（ メタ位の代わりに）のＣｏ（Ｇｕｙ）ａを表わし、Ｒ３はＮ）Ｉを表わし、そし てＣ（０）−ＡＡはアルギニンに由来する。実施例１０に類似する方法に従うが 、但し、αＮＨ，基がＢｏｃ基によって保護されているアルギニンを、（ｎ）と 同一であって２−ニトロ−５−メチル−安息香酸から得られる化合物（Ｒ′）か ら（Ｘ＼１）と同じよう番こして得られた弐（Ｘ■′）の化合物とカップリング さ→！る。

（ＩＩ’　）　　　　　　　　　　　　（Ｘ■′）これによって弐（ＸＸＩＸ’ 　）のシクロペプチドが得られ、これは次の特徴を有する：　Ｒｆ−０，１２（ シリカゲル支持体；展開溶媒ＥｔＯＡｃ／ｎＢｕＯＨ／Ａｃ０）Ｉ／Ｈｚ０　１ 　：　１　：　１　：　１　）　、融点１４０〜１５０″Ｃ（分解）。旋光度Ｃ ｆｆ　”’　（５４６ｎｍ）＝＋７．３７°（ｃ　Ｏ−１；ＨｚＯ）。

核磁気共鳴による分析：　’Ｈ（ＤｚＯ）：　７．７〜７．１＋　ＩＩＩ　８Ｈ （ＡｒＨ’Ｈ”Ｈ’およびＣ，ＨｓＳ”″）；　４．６０．　ｍ、　２Ｈ（Ａｒ Ｃ）ＩｚＳつ；　４．３０．　ｍ、　ＩＩ（（ＣＨａＡｒｇ）Ｒ３，９０，ｍ＋ 　８Ｈ（４ＣＨ２Ｇｌｙ）；　３．３０．　ｓ、および３．１９．ｓ、３Ｈ（Ｃ Ｈ３Ｓ”″）；３．２０．　ｍ、　　２Ｂ（ＣＨｚ６Ａｒｇ）；　２．１〜１． ５．　　ｍ、　　４Ｈ（ＣＨ２βγＡｒｇ）。

実遣割１２ 下記式＜ＸＸＸ）のシクロペプチドの製造：　Ｈ Ｃ＝Ｎ）１ ＮＨ３，ＣＦｉＣＯＯ− この式は式（＋）のシクロペプチドに相当し、その際Ｒ１は（Ｃ１！３）ｚＳ’ 、ＣｈＣＯＯ−を表わし、Ｒ′は水素原子を表わし、ＺはＣ０（Ｇｌｙ）ａを表 わし５、Ｒ３はＩＩＨを表わし１、そしテＣ（０）−ＡＡは７Ｂｖギ、２′ンに 由来する。実施例１Ｏと類似する操作方法に従うが、最終ｒｈ程ではチオアニソ ールの代わりにジメチルスルフィドを使用する。これによって式（ＸＸＸ）のシ クロペプチドが得られ、これは次の特徴を有する：　ｐｒ＝ｏ、ｏｑ　ｃシリカ ゲル支持体；展開溶媒ＥｔＯＡｃ／ｎＢｕｏ）Ｉ／ＡｃＯＨ／ＨｚＯ＝　１　： 　１　：　１　：　１　）　、融点１３０〜１．５０”Ｃ（分解）６旋光度（ｔ ｘ　）　１　Ｓｏ（５４６ｎｍ）　＝　−２５，７°（ｃ　Ｏ，２５；ＨｚＯ） 。

核磁気共鳴による分析：　’Ｈ（ＤｚＯ）；　７．７５．　ｄｄ（Ｊ＝２．１Ｈ ｚおよび８．３Ｈｚ＞、　　ＩＨ（ＡｒＨ”）；　　７．６３．　　ｄ（Ｊ＝２ ．１Ｈｚ）、　　ＩＨ（ＡｒＨ’）；　　７．５４．　　ｄ（Ｊ＝８．３Ｈｚ） 、　　ＩＨ（ＡｒＨ”）；　　４．６８．　　ｓ、　　２８（ＡｒＣＨ，Ｓ”　 ）；　　４．２７．　　ｔｓ、　　ＩＩ（（Ｃg αＡｒｇ）；　　４．２〜３．８．　　ｍ、　　８Ｈ（４ＧＨｚ　Ｇｌｙ）；　 　３．１９．　　ｔ（Ｊ＝６．６Ｈｚ）、　　２Ｈ（ＣＨ，δＡｒｇ）；　２． ８０．　　ｓ、　　６１（（［ＣＨｓｌｔＳ”　）；　２．０〜１．５．　　ｍ 、　　４Ｈ（ＣＨｚβＴＡｒｇ）。

実１１江Ｕ 下記式（ＸＸＸＩ）のシクロペプチドの製造：この式は式（１）のシクロペプチ ド誘導体に相当し、その際Ｒ１は臭素を表わし、Ｒ１はＨを表わし、ＺはＣｏ− Ｇｌｙ２−Ｐｒｏ−Ｇｌｙを表わし、Ｒ３はＮ）ｌを表わしそしてＣ０−ＡＡは アルギニンに由来する。

操作方法は実施例３と同一であるが、第２工程では式（ｎ）の化合物は化合物Ｈ −Ｇ１ｙ、−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＯＣ，Ｒ５と反応させて下記式の化合物を得る： 最終工程の終了時に、式（ＸＸＸＩ）のシクロペプチドが得られる。

旋光度は〔α）　：’、、＝　　３１．１（ｃ　Ｏ，５４；　１ｈｏ）である。

ＮＭＲ’　Ｈによる分析によって次の結果が得られる：　（Ｒ２０）ニア、５４ ゜ｄ（Ｊ＝１．６Ｈｚ）、　ＩＨ（ＡｒＨ＋）；　７．５１．　ｄ（Ｊ＝８Ｈｚ ）、　ＩＨ（ＡｒＨ：＋）；　７．４８．　ｄｄ（Ｊ＝８ｔｌｚおよび１．６Ｈ ｚ）、　１Ｂ（ＡｒＨｚ）；　４．６５．　ｓ、　２Ｂ（ＣＦＩＪｒ）。

災胤桝■ 表２に要約した実施例９〜１３の式ＸＸ■、ＸＸ■、ＸＸ■′、ＸＸＸおよびＸ ＸＸ　Ｉの官能化されたシクロペプチドの不活性化および阻止特性を一定数の酵 素：ウシトリプシン、ヒトウロキナーゼ、ヒトｔ−Ａｒ、ヒトプラスミンおよび ブタ膵臓エラスターゼに関して試験した。動力学的測定は次の緩衝液：０．１Ｍ ）リス、０．ＯＩＭ　ＣａＣＺｚ　、ｐＨ７，２（ウシトリプシン）　　；０． ０２５Ｍりん酸ナトリウム、０．ＬＭ　ＮａＣ１，０，０５χ（ｖ／ｖ）　トウ ィーン８０．　ｐＨ７，５（ヒトウロキナーゼ）　　；０．０５Ｍ　　）リス、 ０．０３８Ｍ　ＮａＣ！、　０．０１χ（ｖ／ｖ）トウイーン８０、ｐＨ８，３ （ヒトｔ　−ＰＡ）　　；　０．ＩＭ　Ｆリス（ブタ膵臓エラスターゼ）；０． ＩＭりん酸ナトリウム、２５χ（ν／ｖ）グリセロール（ヒトプラスミン）中２ ５゛Ｃで実施した。ａと記載したハートおよびオブライエンの方法（Ｂｉｏｃｈ ｅｍｉｓｔｒｙ、　１２．２９４０〜２９４５．１９７３）かまたはｂと記載し たキックおよびウィルソンの方法（Ｊ、Ｂｉｏ、Ｃｈｅｍ、、２３７　３２．３ ２４５〜４２４９．１９６２）のいずれかを使用して、無限基質濃度の不活性化 を示す第１定数ｋｉおよび酵素−インヒビターコンプレックスの解離定数Ｋｉを 測定し、ｋｉ／ＫｉＯ比は不活性化剤の効果を示す見かけ上の第２定数である。

得られた結果は表２に示す。

表１および２の結果に基づいて、実施例９から１３のシクロペプチド誘導体が実 施例１および３の式ＸＶＩおよびＸＸ■の対応する臭化物より良好なインヒビタ ーであることがわかる。

更に、実施例９から１２のシクロペプチド誘導体は水溶液中では実施例１および ３の臭素誘導体より安定である。

かくして、本発明によるシクロペプチド誘導体は特定のプロテアーゼの選択的イ ンヒビターであり、そして前述した病変での治療的適用に使用可能な製薬組成物 の活性物質として使用することができる。

表−土 官能化したシクロペプチドによるセリンプロテアーゼの不活性化を表わす動力学 的パラメータ（２５°Ｃ）実施例５の化合物（ＸＸＩＶ）　　ウシキモトリプシ ン　　７実施例１の化合物（ＸＶＩ）　　　ウシトリプシン　　　　５３ヒトウ ロキナーゼ　　　４．２ 実施例３の化合物（ＸＸＩ［［）　　ウシトリプシン　　　１５０ヒトウロキナ ーゼ　　１６５ ヒトｔ−ＰＡＯ，３ １−呈 官能化したシクロペプチドによるセリンプロテアーゼの不活性化を表わす動力学 的パラメータ（２５°Ｃ）実施例９の誘導体（ＸＸ■）　　トリプシン　　４９ ０ａウロキナーゼ　１４５ｂ プラスミン　　　５３　　　　ｂ エラスターゼ　　０ 実施例１０の誘導体（ＸＸＩＸ）　　　）リプシン　　８２４ａウロキナーゼ　 １９６７　　ａおよびｂｔ−ＰＡ　　　　１．４　　　　ｂ エラスターゼ　　Ｏｂ 実施例１１の誘導体（ＸＸ■′）トリプシ７　　１６．７　　　　ａウロキナー ゼ　　１４　　　　ａ エラスターゼ　　ｏｂ 実施例１２の誘導体（ＸＸＸ）　　トリプシン　　　７ｂウロキナーゼ　１０８ 　　　　ｂ エラスターゼ　　ｏｂ ｔ−ＰＡ　　　　　　Ｏｂ 実施例１３の誘導体（ＸＸＸＩ））リブシン　　２０１６　　　　ａｌ）ＩＬＪ Ｌ： トリブシン：ウシトリプシン ウロキナーゼ：ヒトウロキナーゼ ｔ−ＰＡ　：ヒトプラスミノーゲンの組織アクチベーターブラスミン：ヒトプラ スミン エラスターゼ：ブタ膵臓エラスターゼ ２）方−広： ａニハードおよびオブライエンの方法。

ｂ：キンクおよびウィルソンの方法。

手続補正書動心 平成３年２月２６日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）式 ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）式中、 −Ｒ１は、塩素、フッ素、臭素およびヨウ素原子並びに基ＯＳＯ２Ｒ４、ＯＰ（ Ｏ）Ｒ４２、ＯＣ（Ｏ）Ｒ４およびＳ＋Ｘ■（式中、Ｒ４はアルキル、バーフル オロアルキルまたはアリール基を表わし、その際Ｒ４は異なることができそして Ｘ−はＶ価の陰イオンを表わす）から選択され； −Ｒ２は水素原子、アルキル基、ハロゲン原子、ＮＯ２、ＣＯＯＲ５、ＣＦ３Ｃ ＮまたはＳＯ２Ｒ５（式中、Ｒ５はアルキル基またはアリール基を表わす）であ り； −Ｒ３は酸素原子、硫黄原子または−ＮＨ−を表わし；−Ｚはアミノ酸または同 一若しくは異なる類似体のペプチド配列Ｚ１と末端が芳香核に結合した−（ＣＨ ２）ｎ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎ−または−ＣＯ−（式中、ｎは１から８までの整数で ある）から選択される基からなり； −▲数式、化学式、表等があります▼は式▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、 Ｒ６は−Ｎ−または−ＣＨ−を表わし、そしてＲ７はＨ、−ＣＨ３、−ＣＨ２Ｃ Ｈ（ＣＨ３）２、▲数式、化学式、表等があります▼、−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ２ 、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ２、（ＣＨ２） ４−ＮＨ２−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２−ＳＨ、▲数式、化学式、表等があります▼ 、−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ５、−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４ＯＨ、−（ＣＨ２）３ＮＨＣ（＝Ｎ Ｈ）−ＮＨ２、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨＯＨ−ＣＨ３、▲数式、化学式、表 等があります▼、−（ＣＨ２）ＳＣＨ３、▲数式、化学式、表等があります▼お よび−ＣＨ（ＣＨ３）２の中から選択される基を表わす）または式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ８はＮまたはＣＨを表わし、そしてＲ９は基−（ＣＨ２）３−または −ＣＨ２−ＣＨＯＨ−ＣＨ２を表わす）のアミノ酸またはアミノ酸類似体に由来 する基である、を充足することを特徴とするプロテアーゼインヒビターとして使 用可能なシクロペプチド誘導体並びにその製薬的に受容可能な酸付加塩。 ２）ペプチド配列Ｚ１が同一または異なることができる２から８個のアミノ酸ま たはアミノ酸類似体からなることを特徴とする請求項１に記載のシクロペプチド 誘導体。 ３）Ｒ３がＺに対してオルトまたはメタ位でありそしてＲ１Ｈ２Ｃに対してオル トまたはパラ位であることを特徴とする請求項１および２のいずれか１項に記載 のシクロペプチド誘導体。 ４）▲数式、化学式、表等があります▼が式：▲数式、化学式、表等があります ▼ （式中、Ｒ６はＣＨでありそしてＲ７はＣＨ２−Ｃ６Ｈ５、ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４Ｏ Ｈ、（ＣＨ２）２ＳＣＨ３または ▲数式、化学式、表等があります▼である）を充足することを特徴とし、キモト リプシンインヒビターとして使用可能な、請求項１から３のいずれか１項に記載 のシクロペプチド誘導体。 ５）−ＡＡ−Ｃ−（Ｏ）−が式： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ６はＣＨでありそしてＲ７は−（ＣＨ２）４ＮＨ２または−（ＣＨ２ ）３ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−である）を充足することを特徴とし、トリプシンイン ヒビターとして使用可能な、請求項１から３のいずれか１項に記載のシクロペプ チド誘導体。 ６）−ＡＡ−Ｃ（Ｏ）−が式： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ６はＣＨでありそしてＲ７は−ＣＨ３または−ＣＨ（ＣＨ３）２であ る） を充足することを特徴とし、エラスターゼインヒビターとして使用可能な、請求 項１から３のいずれか１項に記載のシクロペプチド誘導体。 ７）Ｒ１がＣｌ、ＢｒまたはＯＳＯ２Ｒ４であることを特徴とする請求項４から ６のいずれか１項に記載のシクロペプチド誘導体。 ８）Ｒ１がＳ＋Ｒ４２Ｘ■を表わすことを特徴とする請求項１から６のいずれか １項に記載のシクロペプチド誘導体。 ９）Ｒ１がＣ６Ｈ５−Ｓ＋−ＣＨ３またはＣＨ３−Ｓ＋−ＣＨ３を表わすことを 特徴とする請求項８に記載のシクロペプチド誘導体。 １０）Ｒ２が水素原子であることを特徴とする請求項４から９のいずれか１項に 記載のシクロペプチド誘導体。 １１）Ｚが式： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、ｍは４、５または６でありそしてＲ６およびＲ７は請求項１に記載の意 味を有する） を充足することを特徴とする請求項２から１０のいずれか１項に記載のシクロペ プチド誘導体。 １２）請求項１から１１のいずれか１項に記載され、製薬的に受容可能な量のシ クロペプチド誘導体からなることを特徴とする、所定のプロテアーゼを阻害する 特性を有する製薬組成物。 １３）プロテアーゼがトリプシン、キモトリプシン、エラスターゼまたは活性の システインプロテアーゼからなる群に属することを特徴とする請求項１２に記載 の組成物。