JPH03500050A

JPH03500050A - 免疫グロブリンｅの応答を減少させる方法

Info

Publication number: JPH03500050A
Application number: JP1502003A
Authority: JP
Inventors: コフマン，ロバート・エル; ドゥ・ヴリー，ジャン・エグベール
Original assignee: シェリング・バイオテック・コーポレーション
Priority date: 1988-02-02
Filing date: 1989-01-30
Publication date: 1991-01-10
Also published as: MY107079A; HK35196A; EP0327283A1; EP0327283B1; IL89124A; IE890302L; US5676940A; EP0397764A1; CA1341477C; IE63097B1; PT89573B; DE68908431T2; HU211059B; IL89124A0; AU629536B2; ZA89766B; DK183590A; NZ227812A; PT89573A; DK183590D0

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】免疫グロブリンＥの応答を減少させる方法本発明は、一般的に免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）の過剰生産に関連する免疫症状の治療法に関し、より詳細にはインターロイキン−４の作用を阻害することにより、Ｉ　ＭＥの生産を減少させる方法に関する。

定義されているところによれば、ＩｇＥ−媒介　応答の主な生理学的機能は、外来物を除去することである。この応答は５つのフェーズに分けることができる＝ＩｇＥ−生産性Ｂ細胞は刺激され、抗原に応答しくフェーズｌ）、活性化されてＩｇＥ抗体を分泌する（フェーズ２）；生産された抗体はマスト細胞および組織中の好塩基球に結合しくフェーズ３、抗体固定）、抗原と細胞１；結合したＩｇＨの相互作用はこれらの細胞を活性化し、それらの顆粒球に保持されている化学媒介因子の放出を引き起こす（７エーズ４、脱顆粒反応）；そして最後にこの媒介因子が生体から微生物ではない外米物を除去するために、複雑な組織応答を誘導する（フェーズ５）。この防御機構の一部分は、その外来物が住む組織を自ら攻撃することである。他の生体部分を傷つけることなく外米物を除去することは、極めて微妙な作業である。活性化されマスト細胞および好塩基球から放出された媒介因子は、もし適正でない時に放出されたり、または誤った目的物に向かりたならば、かなりの害を、死でさえも、引き起こす。このＩｇＥの応答は、きちんと制御され、目的が達成された後すぐ１；弱められなければならない。この制御がきらんと機能している限り、生体の正常な部位には危害がないが、制御が失敗するとこの有利な反応が有害な反応へと転換する。すべての人の約９０％は、自分達のＩｇＥを防御の目的のみに使用することには困難はないが、残る不幸な１０％の人々は、抗原によるＩｇＥ応答の刺激を行う制御機能が遺伝的に欠損しており、外来物に対して何ら関係をもたない抗原に応答する。最初はこの遺伝的欠損は、ヒトに限られると考えられていたが、後に同様な欠損が他の数種の哺乳動物にも発見されｔ；。

この不適当に刺激されたＩｇＥ応答は、アレルギーまたはアトピーに分類される病状である多数の症状を引き起こす；クライン（Ｋｌｅｉｎ）、免疫学：自己− 非自己認識の科学（１ｍｍｏ＋＋ｏｌｏｇｙ：　ＴｂｔＳｃｉ！ｎｃｚ　ｏｒ　Ｓ＊Ｉｆ−Ｎｏｉｓｅｌｆ　Ｄｉｓｅｒｉｍｉｏ＊ｊｉｏｎ）（Ｊｏｂｎｔ　ＷｉｌＢ　＆　Ｓ。

ｕｓ、Ｎｔｖ　Ｙｏｔｋ、１９１υ参照。

最近ではグルココルチコイド　ステロイドがアレルギーの治療薬として最も有効である。しかしながら、長期に渡るステロイドの治療は多くの有害な副作用と関連している：ボッドマンおよびギルマン、治療の薬理学的基礎（Ｇｏｏｄ＋ｉｘｎ　ｉｏｄ　Ｇ１１ｉｘｎ、丁ｂｅ　Ｐｈｉｒｍａｅｅｌｏ（ｉｅ＊±Ｂｓｓ力ｏｆ　Ｔｂ５ｒｓｐ＊ｏｔｉｅｓ、６ｔｂ　Ｅｄ、（ＭｓｅＭｉｌｌ■ｒｕｂ１ｉｓＴｈｉＢ　ＣｏｍｐｓＢ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、＋９８０））結局、ＩｇＨの過剰生産に関連する免疫不全の治療法のための代替的アプローチの可能性は重要な臨床的利用を有するに違いない。

それ故に本発明は、ヒトインターロイキン−４（ＩＬ−４）の拮抗剤を有効量で投与することによりＩｇＥレベルを減少させる方法を提供するものである。好ましいＩＬ−４の拮抗剤はモノクローナル抗体、またはそれから通常の方法により導かれる結合組成物である。

ヒトインターロイキン−４の拮抗剤は好ましくは、ヒトインターロイキン−４の活性を高める免疫グロブリンＥをブロックできるモノクローナル抗体、ヒトインターロイキン−４の活性を高める免疫グロブリンＥをブロックできるモノクローナル抗体の７ラグメント、まｔ：はヒトインターロイキン−４の活性を高める免疫グロブリンＥをブロックできるモノクローナル抗体の重鎮可変領域および軽鎖可変領域を含む結合組成物である。

本発明は、ヒトにおいてＩＬ−４がＩｇＨの生産を増加させるという発見に基づく。それ故に本発明の方法は、患者に有効量または症状を改善できる量のヒトＩ　Ｌ−４拮抗剤を投与することより成る。

好ましくは本発明の拮抗剤はヒトＩＬ−４に特異的な抗体由来のものである。より好ましくは本発明の拮抗剤はＩＬ−４に特異的なフラグメントまたは結合組成物より成る。

抗体はジスルフィド結合で一緒に結合しているポリペプチド鎖の集合体より成る。軽鎖および重鎮と呼ばれるふたつの主要なポリペプチド鎖が抗体のすべての主要な構造上のクラス（アイソタイプ）を形成している。重鎮および軽鎖は双方ともさらに可変領域および定常領域と呼ばれるサブ領域に分けられる。

重鎮は、ひとつの可変領域と３つの異なる定常領域よりなり、軽鎖は、ひとつの可変領域（重鎮のものとは異なる）とひとつの定常領域（重鎮のものとは異なる）より成る。重鎮および軽鎖のこの可変領域が抗体の結合特異性を担っている。

ここで用いた重鎮可変領域はひとつのポリペプチドを意味し、（１）これは１１０から１２５までのアミノ酸鎖長であり（この番号は重鎮のＮ末端アミノ酸から始まる）（２）このアミノ酸配列は、本発明のモノクローナル抗体の重鎮に対応する。同様に軽鎖可変領域とはポリペプチドを意味しく１）これは９５から１１５までのアミノ酸鎖長であり（この番号はＬ鎖のＮ末端アミノ酸から始まるン　（２）このアミノ酸配列は、本発明のモノクローナル抗体の軽鎖に対応する。

ここで使用している”モノクローナル抗体”という用語はヒト！Ｌ−４に特異的に結合できる免疫グロブリンの均一な集合体を呼ぶ言葉である。

ここで用いる”結合組成物”とはふたつのポリペプチド鎖から成る組成物、即ち（１）　ａ！能的に会合させたとき、ヒト！Ｌ−４に高い結合親和性を持つ構造を帯びそして、（２）ハイブリドーマが生産するヒト！Ｌ−４に特異的なモノクローナル抗体、から誘導されたペプチド鎖から成る組成物を意味する。″機能的に会合する”とはさまざまな手段により、ＦａｂまたはＦｖのような天然の抗体フラグメントのようなふたつのポリペプチド鎖が結合するために互いに位置することまたはカルボキシ末端に遺伝子工学的に作成したシスティンを含むペプチドリンカ−の方法などを含む。通常このふたつのポリペプチド鎖は、ヒ）　Ｉ　Ｌ −４に特異的なモノクローナル抗体の軽鎖可変領域および重鎮可変領域に相当する。

好ましくは、本発明の拮抗剤は、ヒトＩＬ−４に特異的なモノクローナル抗体由来のものである。Ｉ　Ｌ−４の活性を増強させるＩｇＥをブロッキングできる能力のあるモノクローナル抗体は、Ｔ−細胞増殖に基づいたＩＬ−４の標準インビトロアッセイにより選別される：例えばヨコタ等（上述）。ネズミにおける系においてＩＬ−４のすべての生物学的活性は、単一のモノクローナル抗体にてブロックすることができるということが観察された。このようにすべての活性は単一部位すなわちタンパク質上のレセプター結合部位にて媒介される。

本発明のハイプリドーマは、周知の方法にて作成される。通常その過程には、所望の抗体を生産するＢ−リンパ球と不滅化したセルラインとの融合が食まれる。

あるいは、抗体産生不滅化セルラインを作成するｌこめに非融合法も可能であり、本発明の範囲に含まれる。例えばウィルスで誘導した形質転換：カサリ等（Ｃｓｓｓｌｉ　ｔｔ　ｉｌ、）、”　Ｂ−リンパ球の抗原特異性選択で得られるヒトのモノクローン細胞およびＥＢＶによる形質転換（Ｈａｍａｍ　Ｍｅｅｏｃｌｏｍｘｌｓ　Ｉｒｏｎ　Ａ＋＋ｔｉｌ＊ｎ−５ｐｅｃｉｆｉｃ　５ｅｌｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｂ　Ｌｙ＋ｅｐＴｈｏｃｙＬｅｓ　＊ｎｄ　Ｔｒｉｍｓｆｏｒｍｌｔｉａａ　ｂｙ　ＥＢＶ）”５ｅｉｓｎｃ＊、Ｖｏｌ、２３４．ｐｌｓ、４７ｇ −４０（ＩＢＭ）、、不滅化しｔ；セルラインは通常、形質転換された哺乳動物、特にげっし類、ウシまたはヒトを起源とするミエローマ細胞である。最も頻繁には、便利さと入手のし易さから、ラットまたはマウスミエローマ細胞が使用されている。

適切なリンパ球を目的の抗原を注射した哺乳動物から得る方法はよく知られている。一般的には、ヒトを起源とした細胞を所望するのであれば、末梢血リンパ球（ＰＢＬｓ）が用いられ、ヒトではない哺乳動物種を所望する・のであれば、肺臓細胞またはリンパ節細胞が用いられる。宿主である哺乳動物は、精製抗原を繰り返し注射され、不滅化したセルラインに融合させるために収穫される前に、所望の抗体を生産する細胞を作り出すようにされる。融合に関する技術についても文献等でよく知られており、一般的には細胞をポリエチレングリコールなどの融合剤と一緒に混合する操作を含む。ハイブリドーマは、ＨＡＴ選択法などの標準的な方法で選別する。ヒト−ヒトハイブリドーマが特に好ましい。これらのハイブリドーマの中から、所望の抗体を分泌するものはウェスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡなどの標準的なイムノアッセイ法でそれらの培養液をアッセイして選別される。抗体は、標準的なタンパク質精冥技術、例えば、チジュセン（Ｔｉｊｓｓｅｍ）、エンザイムイムノアッセイの実際と理論（Ｐｒｓｃｌｉｅ！＊ｎｄ　ＴＴｈｅｅ１７　ｏｆ　Ｅａｔｙｍｅ　Ｉｍｓ＋ｕｅｓｓｓｅ７ｓ）（Ｅｌｓｅｖｉｓｒ。

Ａｍ５ｔｔｒｄ目、＋９１５）の方法を使用して、培養液より回収される。上記技術を応用するガイダンスについては、数多くの文献を入手できる：例えば、コーラ−等（Ｋｏｂｌ＠ｒ　ｅＬ　ａｌ、、ハイブリドーマ技術（Ｈｙｂｒｉｄｏｍｉ　Ｔｅｃｂａｉ＋Ｈｅ５）（Ｃｏｌｄ　５ｐｒｉｏ！ＩＩＡｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒｓｔｏｒ７．Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、（１００））；チジュセン（Ｔｉｊｓｓｅｍ）エンザイムイムノアッセイの実際と理論（Ｐｒｘｃｔｉｃ２ｓｏｄ　Ｔｂｔｏｒｙ　＠ｆ　Ｅｎｚｙｍｅ　ＩｍｍｕｅｏｘｓｓｉｙＸＥｌｓｅｖｉｓｒ、Ａｍ５ｊｅｒｄ＊ｍ、　１９１５）；カンプベル（Ｃｓｍｐｂ＊］Ｉ）、モノクローナル抗体技術（Ｍｏｎｏｃｌｏｎｉｌ　Ａ１１ｂｏｄｙ　ＴｅｃｈＩＩｏｌｅｇり　（Ｅｌｓ＠ｖｉ＠ｒ、ＡｓｓＬｅｒｄａｗ、１９Ｎ）；ファージル（Ｉｌａｒｒ！１１）モノクローナルハイブリドーマの抗体：技術と応用（Ｍａｏｏｃｌｅ＋＋ｓｌ　Ｉｌｙｂｒｉｄｏｍｘ　Ａｅｔｔｂｅｉｉｅｓ：Ｔｓｅｂｎｉｑｕｓｓ　！Ｉｌｄ　Ａｐｐｌｉｃｓｊｉｏｎ）（ＣＲＣＰｒｔｓｓ、　Ｂｏｃｔ　Ｒｓｔｏｎ、　ＦＬ、１９１２）およびその他。

抗体７ラグメントの使用および作成に関しても周知であるｉ例えば、Ｆｅｂフラグメントについては：チジュセン（Ｔｉｊｓｓｅｍ）（Ｐｒｘｃｔｉｃｓ　５１１ｄ　Ｔｈ＠ｅｒｙ　ｏｆ　Ｅｌｚｙｍｅ　ｌａｗ℃ｎｏａｓｓｓｙｓ（Ｅｌｓｓｖｉｅｒ、Ａｍ５ｌ＊ｒｄａｍ、１９１５）　；およびＦｖフラグメントについてはホフマン等（Ｅａｃｈｍ■＊ｔ　ｉｌ、）、Ｂｉｏｅｂｅｍｉｓｔｒｙ、Ｖｏｌ、Ｉ２．ｐ（ｓ、＋１３０−１１３５（１９７３）、シャーロン等（Ｓｈｘｒｏｅ　ｅｔ　ｘｌ、）、Ｂｉｅｃｂｔｍｉｓｔｒｙ、　Ｖｏｌ−１５，ｐ（ｓ１５Ｎ−１５！４（Ｈ７Ｄｊ’；よびエーリッヒ等（Ｅｂｒｌｉｃｂ　ｔＬ　ｓｌ、）、米国特許４，３５５，１１２３；および抗体の半量体についてはオーディトーレーハーグリーペス（Ａｕｄｉｔｏｒｓ−Ｅｉｒｇｒ＊ｓｖ＊ｓ）、米国特許４，４７０，９２５を参照。さらに本発明の（？、金物および組成物は、周知の技術により二重特異抗体を構築するため１＝も使用できる。例えばハイブリドーマの再度の融合（すなわちクワドローマ）（ｑＨｄｒａｍｓｓ）と呼ばれているものを形成する）：リーディング（ｌｓａｄｉａｌ）、米国特許４，４７４．４０を参照：または半量体の化学的耳結合による：ブレンナン等（Ｂｒｅｍｍａｍ）、＋Ｓｃｉ！ｍｅ＊、Ｖｏ１．２２Ｇ、Ｐ！ｓ、１１−Ｉ３（１９１５）を参照。

本発明のハイブリドーマおよびモノクローナル抗体は、遺伝子組み替えで製造した成熟ヒトＩＬ−４のグリコジル化されｔ；タイプまたはグリコリル化されていないタイプのどちらにｔ二いして生産することもできる。一般的にグリコジル化されていないタイプのヒト！Ｌ−４はＥ、Ｃｏ１１中で生産され、グリコジル化されたタイプのものは哺乳動物の宿主細胞、例えばＣＶＩまｔ；はｃｏｓサル細胞、マウスＬ細胞などの中で生産される。遺伝子組み替えで生産された成熟ヒトＩＬ−４は、標準的な手順を用いて、発現ベクターを宿主細胞に導入して生産される：例えばマニアチス等（Ｍ■１ｓｔｉｓｔｔ　ｍｌ、ｌモレキュラークローニング；ア　ラボラトリ−マニュアル（Ｎｏｌｅｃｗｌ＊ｒ　ＣｌｏｍｉＢ：　Ａ　Ｌ＊ｂｏｒｉｔｏｒ７　Ｍｓ＋＋ａ＊１）（Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｇ　Ｅｘｒｂ。

ｒ　Ｌｓｂｏｒ＊ｔｏｒ７．　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、１９１０；オカヤマおよびバーブ（Ｏｋｉｙｘｍ＊５ＩＩｄ　Ｂｓｒｌ）、Ｍｏ１．Ｃｏ１１．Ｂｉｏｌ、、Ｔｏｌ、２．ｐ（ｓ、１６１−１７０（１ＮりおよびＭｏ１．３．ｐｌｓ　！５ｏ−２１９（１９３３）；バーマー（Ｉｌｓｍｅｒ）、Ｇｅ＋ｕｔｉｅ　Ｅｎ（ｉｎｅｅｒｉｕ、Ｖｏｌ、Ｌｐｔｓ、１３−１００（Ｉｔｓ・）および米国特許４，５９９，３０１．カウフマン等（Ｌｍｆｍｉａ　ｅｔ　ａｌ、）、、Ｍｏ１ −Ｃｅ１１．１ｉｏ＋、Ｖｏｌ、Ｌｐｇｓ、１３０４−１３１！（１■υ：等である一度所望のタンパク質をコードするヌクレオチド配列が知られるかまたはさもなければ入手できれば、バクテリアまたは哺乳動物の発現ベクターの構築は文献等で周知である；例えばデボワー（ＤＩｌｌｏｅｒ）は、米国特許番４５１，４３３の中でバクテリアの発現ベクター中で使用されるプロモーターを開示し；ゲラデル等（Ｇ＊ｄｄｃ１＊ｔ　ｍｌ、ｌは米国特許４，１０１，９１０の中で、およびリッグスＱｉｔｔｓ）は米国特許４，４３１，７３９の中で大腸菌の発現システムにょる哺乳動物のタンパク質の生産を開示し：リッグス（上述）、フェレティ等（Ｆｅｒｒｅｔｔｉ　ａｔ　ａｌ、）ｊ’ｒｏｅ、Ｎｅ口、轟ｃｓｄ、Ｓｃｉ、、Ｖａ１．Ｈ，ｐＩｓ、５５９−ｃｈ、Ｖ＠１．＋３．ｐｌｓ、２９５！ −０７７（１９＄５）、オＪ：びムーレンパー）／％等□ｌｌ１ｌ！ｍｂｓｅｌ＋　！ｔ　ｉｌ、）、Ｊ、Ｂｉｏｌ、ＣＩ＋ｅｍ、、Ｖｏｌ、２６＋、ｐｔｓ、７１！−７０（１１１６）、はバクテリア内での発現のためにどのように合成遺伝子を構築するかを開示している。それ故にこれら文献の内容は参照によって本明細書に含まれる。成熟ヒトＩＬ−のアミノ酸配列はヨコタ（Ｙｏｋｏｔａ）等によって明らかにされており、またヨコタ（Ｙｏｋｏｔａ）等（上述）によって記載されたベクターが運ぶヒトＩＬ−４をコードしているｃＤＮムはＲｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤのムｍｅｒｉｃ＊ｍ　Ｔｙｐｅ　ＣｉｌＣｌｌｌ　Ｃｏ１１＊ｃｔｉｏｍ　（轟ＴＣＣ）に寄託されている：寄託番号６７ＯＮ。多くのバクテリア発現ベクターおよび宿主は、市販されておりまたはムＴＣＣを通じて入手できる。好ましくは、宿主動物を免疫するヒ）　ＩＬ−４は、すでに述べたｐｃＤベクターによって暫時にトランス７エクシ１ンされｆニーＣ０Ｓ、ＣＶＩまたはマウスＬ＃Ｂ胞の培養上澄から単離される。

本発明のハイブリドーマに特徴的な抗体および抗体フラグメントはメツセンジャーロムの抽出、ｃＤＮＡライブラリーの構築、この抗体分子の部分をコードしているクローンの選択、による遺伝子工学的な手段を用いて生産することもできる。：例えば９オール等（Ｗｉｌｉ　ｓｔ　ａｌ、）、Ｎ＋＋ｅｌｔｉｃ　Ａｃ１ｄ　Ｒｅｓ＊ｒｃｋ、Ｔｅｌ、５　ｐＨｉ、３１１３−３１２８（１０８）ｉザクト等（２ｓｋｌｌ　ｓＬ　ｓｌ、）、Ｎｍｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄ　Ｒｅ５ｅｒａｃｈ、　Ｔ。

Ｌ、Ｓ、ｐＨ，３ＨＩ−３６０１（１９寥Ｏ）、カビリー等（Ｃｉｌ＋１ｌ１７　ｅｔ　Ｉ１．）、Ｐｒｏｃ、Ｎｅｗ１．Ａｅ＊ｄ−Ｓｅｉ、Ｖｏｌ、１１．ｐｔｓｊ２７３−１２７７（１９＄４）、ボス等（Ｉｌ＋ｓｓ　ｔｔａｌ、）、Ｎｍｃｌ＊ｉｃ　Ａｃ１ｄ　ｆｆ１Ｂｅｒｓｃｌ＋、Ｖｏｌ、Ｈｐｌｓｊ７９１− ３凰Ｈ（１９１４）、アムスター等（ム１ｔｓｔｅｒ　ｅｔ　Ｉ１．）、Ｎ＋＋ｅｌｅｉｅ　Ａｃ１ｄ　Ｒｅ５ｓ＊ｒｃｋ、置、Ｓ、ｐ（ｓ。

２１１５５−２１１６５（＋９１０）およびモーア等（Ｍｏｏｒ　！ｔ　ｍｌ、）、米国特許４．Ｈ！。

３３４、特にこのような技術は異種間のモノクローナル抗体、即ち一種の動物由来の抗体の結合領域がもう一種の動物由来の非結合領域とつながっているものを生産するにも利用できる：例えばリウー等（Ｌｉｔ　５ｔｔ１．）、Ｐｒｏｅ、Ｎ５ｔ１．Ａｅ＊ｄ、Ｓｅｔ、、Ｖｏｌ、１４．１ｇＳ−３４３９−３４４３（１０７）。

本発明の拮抗薬は、薬剤組成物としても投与される。このような組成物は、本発明のモノクローナル抗体またはそれらの結合フラグメントの少なくともひとつを薬学的に効果的なキャリアー中に有効量で含んでいる。薬学的なキャリアーは本発明の組成物を患者に与える際に適当な生体適合性がある非毒性物質の任意の物質である。滅菌水、アルコール、脂質、ワックス、および生体に不活性な固体がキャリアーに含まれる。薬学的に受容される補助薬（例えばバッファー試薬、分散剤）もこの薬学組成物に組み込まれ得る。一般的に、このような薬剤の非経口適用物として有効な組成物は周知である；例えばレミングトンの薬剤科学（Ｒｅｍｉｃ（ｔ。

ｎ’ｓ　Ｉ’ｂａｒｍ＠ｅｅａｔｉｅｓｌ　Ｓｃｉ！ｍｅｓ）、１５１ｋ　Ｅｄ（Ｍｅｅｋ　Ｐ＋＋ｂｌｉｓｂｉｅ（Ｃａｍｐ■ｙ、Ｅｘｓｔｅ＋＋、Ｐ轟、＋ｔＵ）を参照。別の方法として、本発明の組成物は薬剤埋没システムによって患者の体に導入され得る。；例えばウルクハルト等（Ｕｒｑｎｂｓｒｔ　Ｎ　ｉｌ、）、ムｎｎ、Ｒｅｖ、　Ｐｂ＊ｒｍｘｃｏ１．Ｔｏｘｉｅｍｌ、、Ｖａｌ、２４．ｐｆｓ、Ｈ９−２３６（１９１４）。

本発明の拮抗薬が抗体から作成された時、それらは通常非経口、好ましくは静脈注射を通して投与される。このようなタンパク質のまたはペプチドの拮抗剤は免疫原性を有するので、好ましくはゆっくりと投与され、または通常のＩＴ上セツト皮下のデボ−製剤から投与される。

非経口投与される時、抗体または７ラグメントは、注射するために適当な薬学的に受け入れられる非経口用媒質とともに投与単位形態（溶液、懸濁液、乳状液）に通常形成される。このような媒質はもともと非毒性で、非治療的なものである。このようなものの例としては正常食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液およびハンクス溶液などがある。固体状オイルおよびオレイン酸エチルなどの溶液状でない媒質も使用されうる。好ましい媒質は５％デキストロース／生理食塩水である。媒質は、等優性や化学安定性を増す物質、例えばバッファーや防腐剤を少量含んでもよい。抗体は好ましくは実質的に凝集物および他のタンパク質を含まない、濃度約５から３０　Ｂ／ｍｌ、好ましくはｌＯから２０　ｍｌ／ｍｌの純粋物に形成される。静脈注射用にはこれはその倹約１から２０　ｍｇ／ｍｌの濃度範囲に調整される。

拮抗薬の投薬処決の選択は、拮抗薬の血清中の消失速度、免疫不全に伴う血清中のＩＬ−４レベル、拮抗薬の免疫原性、目的ＩＬ−４に対する接近性（例えば、もし非−血清ＩＬ−４をブロックすべき場合）、ＩＬ−４の拮抗薬への親和性に対するＩｔ−４のそのレセプターへの親和性、などの事柄を含むいくつかの因子に依存する。好ましくはこの投薬九法は、患者に投薬されて、受は入れられる副作用に一致する最大量である。よって投与される拮抗薬の量は、拮抗の種類および治療をする症状の程度に部分的に依存する。投与量の選択のガイドラインは、抗体の治療に村ける利用に関する文献に見いだすことができる。：例えばバッハ等（Ｉｌｓｅｂ４ｔ　１１．）、１２章、フェローネ等（Ｆ！ｒｒｏｇ！ｓｔ　１１）、、ｓｄｓ、モノクローナル抗体ハンドブック（Ｉｌｘｍｄｂｏｏｋ　ｏｌ　Ｍｏｎｏｃｌｏａｓｌ　Ａｎ！１ｂｏｄｉｅｓ）中（Ｎｏｄｅｓ　Ｐｏ１ｌｉｃｉＬｉｏｎｓ、Ｆｘｒｋ　ＲｉｄＨ，ｉＪ、１９１５）；およびルセル（Ｉｔ＋＋ｓｓ＊！Ｉ）、ｐＨ５−３０３７３５７、およびスミス等（Ｓｍｉｔｈ　ｕ　ｉｌ、）、ｐ（ｓ−３６５−３８９、ハーバ−等（Ｂｘｂｓｒ　ｅｔ　Ｉｌ、）、ｅｄｓ、ヒト診断および治療１；おける抗体（Ａｎｔｉｂａｄｉｅｓ　ｉｍ　Ｂａ１ｉｎ　Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｘｎｄ　Ｔｂｅｒ暑ｐｙ）中ｓ　（Ｒｓｖｅｉ　ＰｒＣｓ５．ＮｅｖＹｏｒｋ、＋９７７）。特に拮抗剤がモノクローナル抗体またはＦｓｂの大きさの７ラグメント（結含組成物を含む）を含む拮抗剤である時は、好ましい投与量は、１日あたり約１−２０　Ｂ／Ｊの範囲内である。

より好ましくは投与量は１日あたり約１からｘ（ｌｏｔ／口の範囲内である。

上述した本発明の詳細な説明および描写の目的で提供したものである。これらは本発明の網羅的記載または、開示された特定の態様に本発明を限定することを意図しておらず、上述の説明の点から、明らかに修飾および変更が可能である。態様は本発明の原理を最もよく説明し、実用的な応用により当業者がさまざまな実施態様および特別な用途に適するように修飾できるように選択した。本発明の範囲は、これから述べる請求の範囲にて定められる。

出願人は、ｐｅＤ−ヒト−！Ｌ−４を持つＥ、Ｃｏ１１．ＭＣｌ０６１をＲｏｃｋｖｉｌｌ、ＭＤ。

Ｉｔｓムのム−５ｒｉｃ＊＋＋　Ｔｙｐｅ　Ｃａ１ｌ　Ｃｍ１ｋ＋＋ｒ＊　ｃｏｌｌｅｃｌｉａｍ　（ムＴＣＣ）に寄託番号１７１Ｈ９で寄託した。この寄託は特許手続の目的のための微生物の寄託の国際的な取り決めに関するブタペスト条約（＋９７？）のもとで行われた。

補正書の翻訳文提出書（特許法第１８４条の８）特許庁長官　植　松　敏　殿　し１１、特許出願の表示ＰＣＴ／ＵＳ８９１００２８５２、発明の名称免疫グロブリンＥの応答を減少させる方法３、ｃ１許出願人住　所　アメリカ合衆国カリフォルニア用９４３０４−１１０４゜パロ・アルド、カリフォルニア・アベニニ−９０１名　称　シェリング・バイオチック・コーポレーション４、代理人住　所　東京都千代田区大手町二丁目２番１号新大手町ビル　２０６区５、補正書の提出日平成１年１２月２０日ヒトインターロイキン−４の拮抗剤は好ましくは、ヒトインターロイキン−４の活性を高める免疫グロブリンＥをブロックできるモノクローナル抗体、ヒトインターロイキン−４の活性を高める免疫グロブリンＥをブロックできるモノクローナル抗体の重鎮可変領域および軽鎖可変領域を含む結合組成物である。

本発明は、ヒトにおいてＩ　Ｌ−４がＩｇＨの生産を増加させるという発見に基づく。それ故に本発明の方法は、患者に有効量または症状を改善できる量のヒト！Ｌ−４拮抗剤を投与することより成る。

フィンケルマン等（Ｆ、ｉｎｋｃ１ｍ■ｔｌ　＊１．）はＦｒｅｅ、　Ｎ５ｔ１．　Ａｃａｄ　。

Ｓｅｔ、ＵＳＡ　Ｖｏｌ、＄３．ＤＥＣ、ｌＨ６，ｐｐ、９６７５−９６７８．の中でネズミ（ｍｏｏｓｔ）ＢＳＦ−１のモノクローナル抗体のマウス投与法について報告しており、すなわちネズミＩＬ−４が、マウスのポリクローナルＩｇＨの生産を減少させる。しかしながらネズミＩＬ−４とヒトＩＬ−４の間の相同性は比較的少なく（約４０％）、この活性がヒトにおけるヒトＩＬ−４にもたらされるという期待の根拠はない。

重鎮は、ひとつの可変領域と３つの異なる定常領域よりなり、軽鎖は、ひとつの可変領域（重鎮のものとは異なる）とひとつの定常領域（重鎮のものとは異なる）より成る。重鎖および軽鎖のこの可変領域が抗体の結合特異性を担っている。

ここで用いた重鎮可変領域はひとつのポリペプチドを意味し、（１）これは１１０から１２５までのアミノ酸鎖長であり（この番号は重鎮のＮ末端アミノ酸から始まる）（２）このアミノ酸配列は、本発明のモノクローナル抗体の重鎮に対応する。同様に軽鎖可変領域とはポリペプチドを意味しくｌ）これは９５から１１５までのアミノ酸鎖長であり（この番号はＬ鎖のＮ末端アミノ酸から始まる）（２）このアミノ酸配列は、本発明のモノクローナル抗体の軽鎖に対応する。

ここで使用している“モノクローナル抗体”という用語はヒトＩＬ−４ｔ：特異的に結合できる免疫グロブリンの均一な集合体を呼ぶ言葉である。

ここで用いる”結合組成物“とはふたつのポリペプチド鎖から成る組成物、即ち（１）機能的に会合させた時、ヒ）　Ｉ　Ｌ−４に高い結合親和性を持つ構造を帯び、そして（２）ハイブリドーマが生産するヒトＩＬ−４に特異的なモノクローナル抗体、から誘導されたペプチド鎖から成る組成物を意味する。”機能的に会合する”とはさまざまな手段により、ＦａｂまたはＦｖのような天然の抗体フラグメントのようなふたつのポリペプチド鎖が結合するために互いに位置することまたはカルボキシ末端に遺伝子工学的に作成したシスティンを含むペプチドリンカ−の方法などを含む。通常このふたつのポリペプチド鎖は、ヒ）　Ｉ　Ｌ− ４に特異的なモノクローナル抗体の軽鎖可変領域および重鎮可変領域に相当する。

好ましくは、本発明の拮抗剤は、ヒｌ−Ｉ　Ｌ−４に特異的なモノクローナル抗体由来のものである。ＩＬ−４の活性を増強させるＩｇＥをブロッキングできる能力のあるモノクローナル抗体は、Ｔ−細胞増殖に基づいたＩＬ−４の標準インビトロアッセイにより選別される；例えばヨコタ等（Ｙｏｋｏｔ＊　ｔｔ　＊ｌ、）　Ｐｒ上−Ｎｓｔｌ、Ａｃ５ｄ、Ｓｃｉ、ＤＳＡ　Ｖｏｌ、＄３．Ａｎ（ａｓｋ　１９１６．ｐＢｓｓ５１９４−５１９８゜ネズミにおける系においてＩＬ −４のすべての生物学的活性は、単一のモノクローナル抗体にてブロックすることができるということが観察された。このようにすべての活性は単一部位、すなわちタンパク質内のレセプター結合部位にて媒介される。

８、免疫グロブリンＥの応答を減少させるために用いる治療薬組成物の調製のｔ：めのヒト　インターロイキン−４の拮抗薬の使用。

９、ヒトインターロイキン〜４の拮抗薬が、ヒト　インターロイキン−４の活性を増強させる免疫グロブリンＥをブロックするモノクローナル抗体、ヒト　インターロイキン−４の活性を増強させる免疫グロブリンＥをブロックするモノクローナル抗体の７ラグメントおよびヒト　インターロイキン−４の活性を増強させる免疫グロブリンＥをブロックするモノクローナル抗体の重鎮可変領域および軽鎖可変領域をふくむ結合組成物、から選択される請求項８に記載の方法。

１０、該モノクローナル抗体がヒト−ヒトハイプリドーマにより生産されるＦａｂフラグメントである請求項９に記載の方法。

国際調査報告ｂ＋−…−＾−心！−％ｉ＠　ＰＣＴ／ＵＳ　８９１０ｎプ只、国際調査報告　ＰＣＴ／ＵＳ　Ｂｅ２Ｏ。２６５Ｓ＾　２６５９５

Claims

【特許請求の範囲】

１．ヒトインク−ロイキン−４の拮抗薬の有効量を投与することよりなるヒト中の免疫グロブリンＥ応答を減少させる方法。
２．ヒトインクーロイキン−４に対する該拮抗薬が、ヒトインターロイキン−４の活性を増強させる免疫グロブリンＥをブロックできるモノクローナル抗体、ヒトインクーロイキン−４の活性を増強させる免疫グロブリンＥをブロックできるモノクローナル抗体のフラグメントおよびヒトインターロイキン−４の活性を増強させる免疫グロブリンＥをブロックできるモノクローナル抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域をふくむ結合組成物、から選択される請求項１に記載の方法。
３．該モノクローナル抗体の該フラグメントがＦａｂフラグメントである請求項２に記載の方法。
４．該モノクローナル抗体がヒトーヒトハイプリドーマにより生産される請求項２に記載の方法。
５．該モノクローナル抗体の該フラグメントがＦａｂフラグメントである請求項４に記載の方法。
６．該投与ステップが、約１から２０ｍｇ／ｍｌの濃度の範囲で該拮抗薬を含む静脈注射を含む請求項２に記載の方法。
７．該投与ステップがさらに１日あたり約１から２０ｍｇ／ｋｇ（個体体重）の範囲の拮抗薬を静脈注射することを含む請求項６に記載の方法。
８．免疫グロブリンＥの応等を減少させるために用いる治療薬組成物の調製のためのヒトインクーロイキン−４の拮抗薬の使用。
９．ヒトインターロイキン−４の拮抗薬が、ヒトインターロイキン−４の活性を増強させる免疫グロブリンＥをブロックできるモノクローナル抗体、ヒトインターロイキン−４の活性を増強させる免疫グロブリンＥをブロツクできるモノクローナル抗体のフラグメントおよびヒトインターロイキン−４の活性を増強させる免疫グロブリンＥをブロックでさるモノクローナル抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域をふくむ結合組成物、から選択される請求項８に記載の方法。
１０．該モノクローナル抗体がヒトーヒトハイプリドーマにより生産されるＦａｂフラグメントである請求項９に記載の方法。