JPH0335791A

JPH0335791A - 生理活性多糖ｒｏｎの製造法

Info

Publication number: JPH0335791A
Application number: JP2022022A
Authority: JP
Inventors: Hisao Kato; 久生加戸; Yasuo Yoneda; 米田　保雄; Shun Takeo; 竹尾　駿; Masaru Mitani; 優三谷; Nobuhiro Watanabe; 信宏渡辺
Original assignee: Sapporo Breweries Ltd
Current assignee: Sapporo Breweries Ltd
Priority date: 1989-02-08
Filing date: 1990-02-02
Publication date: 1991-02-15
Also published as: KR900013074A; DE69019543D1; EP0382120A1; EP0382120B1; ES2075075T3; DE69019543T2; CA2009194A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、優れた抗腫瘍活性、免疫調節活性並びに感染
防御活性を有する生理活性多糖ＲＯＮ生産能を有する微
生物または該微生物の培養処理物を用いて該生理活性多
糖ＲＯＮを製造する方法および優れた生理活性多［ＲＯ
Ｎ生産性等を有する・新規微生物に関する。

〔従来の技術〕

本発明に係る生理活性多１１ＲＯＮおよび米糠から該生
理活性多糖ＲＯＮを抽出する方法は既に特公昭６２−７
１７３号公報に開示されている。

〔発明が解決しようとする諜Ｂ〕

上記従来法では米糠を原料として生理活性多糖ＲＯＮを
抽出し、精製するものであるため、原料の品質が不安定
で得られる物質の物性、生理活性等に相当なバラツキが
ある上に、収率が低く、しかも多くの工程を必要とし、
時間的、経済的な課題があった。

そこで、本発明者らは上記課題を解決すべく検討を重ね
た結果、特定の微生物を用いて生理活性多１ｉＲＯＮを
効率よく製造する方法を確立し、本発明を完成するに至
ったのである。

〔課題を解決するための手段〕

すなわち、本発明はロイコノストック属に属し、下記の
性質を有する生理活性多糖ＲＯＮ生産能を有する微生物
または該微生物の培養処理物を用いて該生理活性多糖Ｒ
ＯＮを産生せしめ、採取することを特徴とする生理活性
多１ｉＲＯＮの製造法および優れた生理活性多糖ＲＯＮ
生産性等を有する新規微生物を提供するものである。

（１）性状：白色の無晶性粉末で無味無臭（２）溶解性
：水に可溶、濃度を上げると乳白色で粘稠な溶液となる
。ホルムアミド、ジメチルスルホキシドに可溶、アルコ
ール、アセトン、ベンゼン、酢酸エチル、ヘキサン、ク
ロロホルム、四塩化炭素に不溶（３）水溶液のｐＨ：中性ないし弱酸性（４）構成ｔ１
！＝グルコースのみ（５）元素分析値：　Ｃ：　４４．０〜４５．０％、　
Ｈ：　６．１〜６．３χ（６）構造：α−１，６結合を
主鎖としたα−グルカンで少量の１．３．６位分岐構造
を有する。

（７）蛋白質：殆んど含有せず（８）分子量：透析膜を通過セす、分子量１万以上と推
定される。

（９）比旋光度：　（α）　”＝＋１９０°〜＋２２０
”（ｃ＝０．５．　　ホルムアミド）ＯＩ］）呈色反応：アンスロン硫酸反応、フェノール硫
酸反応が陽性、ビウレット反応、ローリー・フォーリン
反応、エルソン・モルガン反応、ヨード反応が陰性（１０融点：明確な融点を示さない。

（１２）紫外部吸収スペクトル二特徴的吸収を有さず。

ｑつ　赤外部吸収スペクトル：α−グルカンに特徴的吸
収を示す。

（１４）　　Ｉ３Ｃ−ＮＭＲスペクトル：主シグナルと
してα−１，６グルカンに特徴的スペクトルを示す。

（１５）抗腫瘍作用を有す。

本発明において、上記生理活性多ｗＲＯＮは、ロイコノ
ストック属に属し、生理活性多＄１！ＲＯＭ生産能を有
する微生物を培地に培養することにより培養液中に生理
活性多ｔｌＲＯＭを蓄積させ、これを採取することによ
り得られ、また、該微生物の培養処理物を蔗糖に作用さ
せて、該生理活性多ＩＲＯＮを生成せしめ、採取するこ
とによっても得られる。

生理活性多１ｉＲＯＮ生産能を有する微生物としては、
米糠、苔等より分離されたロイコノストック・メセンテ
ロイデス・サブスピーシーズ・デキストラニカムＬｅｕ
ｃｏｎｏｓｔｏｃ　ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ　５ｕ
ｂｓｐ。

ｄｅｘｔｒａｎｉｃｕｍ）ＢＬ−７５株および苔から分
離した同４６−１株があり、その菌学的性質は以下の通
りである。

肚二国抹ダラム染色　　　　　　　　士形　　　態　　　球〜卵型、０．４〜０．７μｍ３〜４
　連鎖、　クラスター形成カタラーゼ　反応オキシダーゼ反応遊離酸素要求性アルギニン　の分解乳酸発酵　　　　へテロ型。

炭水化物からの酸産生アラビノースフラクトースガラクトースグルコースラクトースマンノーストレハロースエスクリンの加水分解性デキストラン産生食塩存在下での生育３．０Ｘ　ＮａＣｊ！６．５Ｘ　ＮａＣｊ！各種初発ｐＩ（での生育ｐ）ｌ　　４．８ｐＨ６，５通性嫌気性り一乳酸＋＋グルコース培地での最終ｐｉ（王立二上抹ダラム染色形　　　　態球〜卵型、０．４〜０．６μｍ。

ペアおよび短い連鎖４．３十ｊｌクラーゼ反応オキシダーゼ反応遊離酸素要求性アルギニン　の分解乳酸発酵　　　　へテロ型。

炭水化物からの酸産生アラビノースフラクトースガラクトースグルコースラクトースマンノーストレハロースエスクリンの加水分解性デキストラン産生通性嫌気性り乳酸食塩存在下での生育３．０Ｘ　Ｎａｃｌ＋６．５Ｘ　ＮａＣ１各種初発ｐＨでの生育ｐｌ＋　　４．８　　　　　　　　　　　±ｐＨ６，５
＋グルコース培地での最終ｐＨ４，１以上の性状から両菌株の菌学的性質を要約すると次の通
りになる。すなわち、１ニゲラム染色陽性で通性嫌気性
である。２：形態は球〜卵型の連鎖である。３：アラビ
ノースを除き、炭水化物からの酸産生は陽性である。４
；乳酸醗酵のタイプかへテロ型であり、産生ずる乳酸が
０体のみである。５：アルギニン分解は陰性である。

ＢＬ　−７５株について「パージエイズ・マニュアル・
オブ・デターミナティブ・バクテリオロジー」第８版（
１９７４年）　（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏ
ｆ　ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅＢａｃｔｅｒｉｏｌｏ
ｇｙ　８ｔｈ　ｅｄｉｔｉｏｎ　１９７４）によれば、
上記の諸性質より本菌株はロイコノストック−廷互赳旦
卸互這逸）属に属し、しかもデキストラン産生陽性であ
り、かつアラビノースからの酸産生が陰性であることお
よび６．５χＮａＣｌ存在下で発育しない点からロイコ
ノストック・デキストラニカム江■ｃｏｎｏｓ　ｔｏｅ
ｄｅｘｔｒａｎｉｃｕｓ）に属する菌株ＢＬ−７５株と
同定し、本菌株は工業技術院微生物工業技術研究所にＦ
ＥＲＭＢＰ−２２４２として寄託した。

その後、ロイコノストック・デキストラニカムの種が名
称変更されたことを知り、新たに見出された４６−１株
とともに、「パージエイズ・マニュアル・オブ・システ
マテインク・バクテリオロジー第２巻」第９版、　（１
９８６年）、および「メソッド・イン・マイクロバイオ
ロジー」１６巻、１４７〜１７８頁（１９８４年）に従
い、再同定し、両菌株とも、ロイコノストック・メセン
テロイデス・サブスピーシーズ・デキストラニカム７山
氏鵬ｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓｓｕｂｓｐ、　ｄｅｘｔ
ｒａｎｉｃｕｍ）に属する菌株と同定された。

従って、ＢＬ−７５株は、ロイコノストック・メセンテ
ロイデス・サブスピーシーズ・デキストラニカムＬｅｕ
ｃｏｎｏｓｔｏｃ　５ｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ　５ｕ
ｂｓｐ、　ｄｅｘｔｒａｎｉｃｕｔａＢＬ−７５株と名
称変更し、４６−１株は、同４６〜１株と命名し、工業
技術院微生物工業技術研究所にＦＥＲＭ　ＢＰ−２６７
０として寄託されている。

本発明者らは、生理活性子＠ＲＯＮ生産菌の検索をさら
に続けたところ、公知菌株の中に上記ＢＬ−７５株、　
４６−１株と同様な生理活性多糖ＲＯＮ生産能を有して
いる菌株を見出した。すなわち、ロイコノストック・メ
センテロイデス・サブスピーシーズ・デキストラニカム
ＮＣＦＢ　５１７株（ＦＥＲＭ　ＢＰ−２７１１）、同
ＮＣＦＢ　５３１株（ＦＥＲＭ　ＢＰ−２７１２）、同
ＨＣＦＢ８６１株（ＦＥＲＭ　ＨＰ−２７１３）、同Ｎ
ＣＦＢ　１３６４株（ＦＩＥＲＭ　ＢＰ２７１４）　、
同ＮＣＦＢ　８８０株（ＦＥＲＭ　ＢＰ−２７１５）、
同ＡＴＣＣ１９５６株、同ＩＦＯ３３４９株などであり
、これら菌株はＢＬ−７５株と同様な方法により、生理
活性多糖ＲＯＮを生産することができる。

したがって、ロイコノストック属に属し、生理活性多糖
ＲＯＮを生産する能力を有する微生物であれば、本発明
による生理活性多糖ＲＯＮの製造に利用することができ
る。

生理活性多糖ＲＯＮを生産する微生物を培養する方法は
、原則的には一般の微生物の培養方法に準ずればよいが
、ロイコノストック属に属する微生物は特に酸素を要求
しない通性嫌気性菌であることから、通常は液体培地に
よる静置培養あるいは温度分布を均一にする目的で緩和
な条件での攪拌培養が有利である。

直接培養により生理活性多糖ＲＯＮを得る場合、培養に
用いる培地としては、炭素源として蔗糖が生理活性多１
ｉＲＯＮの蓄積のために必須である他は、生理活性多［
ＲＯＮ生産菌が利用できる栄養源を含む培地であればよ
く、合成培地、半台底培地、天然培地のいずれも用いら
れる。炭素源として必須である蔗糖としては、粗製品か
ら精製品まで任意に使用でき、たとえば上白糖、黒糖、
Ｉ！蜜。

廃糖蜜、試薬用サッカロース等のいずれも利用すること
ができる。蔗糖の濃度は０．５〜７０％、好ましくは５
〜５０χが望ましい。窒素源としては、肉エキス、ペプ
トン、グルテンミール、大豆粉、コーンステイープリカ
ー、乾燥酵母、酵母エキス、硫酸アンモニウム、尿素等
が用いられ、これらの窒素源を単独あるいは混合して０
．５〜５χ、好ましくは１〜３ｚの割合で培地中に添加
する。その他、必要に応じてリン酸塩２食塩、マグネシ
ウム塩、マンガン塩、コバルト塩、鉄塩などを適宜添加
することができる。

培養温度は、通常の中温菌の培養温度に準ずればよく、
１５〜４５°Ｃ１好ましくは２０〜３０°Ｃにて、培養
ｐＨは５〜７、培養時間５〜９６時間、好ましくは１０
〜２４時間培養することにより、培養液中に生理活性多
糖ＲＯＮを蓄積させることができる。

培養処理物により、生理活性多糖ＲＯＮを得る場合、培
養に用いる培地としては、炭素源として蔗糖が生理活性
多糖ＲＯＮ生産能を有する物質の蓄積のために必須であ
り、蔗糖の濃度は０．１〜１０％、好ましくは１〜５％
が望ましく、他は培養ｐ１１．培養温度、培養時間と共
に直接培養により生理活性多糖ＲＯＮを得る場合と同様
である。

以上の如くして得られた生理活性多［ＲＯＮ生産能を有
する微生物の培養物は、遠心分離等による培養上清のみ
の分離による処理、培養液を超音波破砕等により菌体を
破砕し、必要に応じ遠心分離等により不溶物の除去等に
よる処理、あるいは以上の処理をした培養処理物を更に
半透膜を用い、ｐＨ５〜７の酢酸緩衝液等の緩衝液でＯ
〜３０°Ｃ１５〜７２時間透析による処理等を行なうこ
とにより培養処理物を得ることができる。

該培養処理物を蔗糖に作用せしめることにより生理活性
多糖ＲＯＮを生成せしめることができる。

作用せしめる温度は２０〜４５°Ｃ３好ましくは２５〜
３５°Ｃにて時間は５〜５０時間、ｐ１１５〜７である
。

生産された生理活性多１！　ＲＯＮは、通常培養液中又
は反応液中に含有されるため、遠心分離、濾過等の方法
により菌体や不溶物を除去した後、メタノール、エタノ
ール、プロパノール、ブタノール、アセトン等の極性有
機溶媒による沈澱、または硫酸アンモニウムによる塩析
を単独あるいは併用し、さらにこれらの操作を繰り返す
ことにより採取することができる。また、半透膜を用い
た透析、ゲル濾過、限外濾過、イオン交換樹脂、活性炭
等による処理を必要に応じて単独あるいは組合わせて行
うことによって純度の高い生理活性多ＩＪ！　ＲＯＮを
得ることができる。さらに、噴霧乾燥、凍結乾燥、極性
有機溶媒による沈澱などを行って乾燥させることにより
、白色粉末の生理活性多糖ＲＯＮを製造することができ
る。また、本物質は前記微生物を利用したバイオリアク
ターによってさらに効率よく製造することができる。

以上の方法により得られた生理活性多ＩＪ！　ＲＯＮの
諸性質を以下に示す。

（１）性状：白色の無晶性粉末で無味無臭（２）溶解性
：水に可溶、濃度を上げると乳白色で粘稠な溶液となり
、ホルムアミド、ジメチルスルホキシド等に可溶である
が、有機溶媒たとえばアルコール、アセトン、ベンゼン
、酢酸エチル。

ヘキサン、クロロホルム、四塩化炭素等に不溶である。

（３）水溶液のｐＨｓ本′！７１質の１％水溶液のｐＨ
は中性〜弱酸性である。

（４）構成糖、：本物質を硫酸およびギ酸で完全加水分
解を行い、加水分解物を薄層クロマトグラフイーおよび
高速液体クロマトグラフィーにて、下記の条件でそれぞ
れ分析したところ、グルコース以外の糖は認められなか
った。

■　薄層クロマトグラフィー担体：ワットマン製シリカゲル　ＨＰ−に展開溶媒；ブ
タノール：酢酸：水＝２　：　１　：■　高速液体クロ
マトグラフィーカラム；山村化学型、　ＹＭＣＰＡ−０３展開溶媒；水
ニアセトニトリル＝３０：７０従って、本物質はグルコ
ースのみを構成糖とする多糖であることは明らかである
。

（５）元素分析値：元素分析の結果は、炭素４４．０〜
４５．０％、水素６．１〜６．３％、灰分０．１％であ
る。

（６）構造二本物質は第１図に示す紫外部吸収スペクト
ルの如く特徴的吸収を有さす、第２図に示す赤外部吸収
スペクトルの如く、α−グルカンに特徴的吸収を示しお
よび第３図に示す”　Ｃ−ＮＭＲスペクトルの如く、主
シグナルとしてα−１，６グルカンに特徴的スペクトル
を示す。これらのスペクトルの解析と比旋光度の結果か
ら、本物質はα−結合を有しており、さらに過ヨウ素酸
酸化実験によりグルコース残基１個当り約１．９モルの
過ヨウ素酸を消費し、約０．９８モルのギ酸を生ずるこ
と、スミス分解により多量のグリセリンを検出すること
から１→６グルコシド結合の直鎖を有することが推定さ
れた。さらに詳細な構造を知るために、本物質を完全メ
チル化後、加水分解を行い得られたメチル糖を分析した
ところ、２，３，４．６−テトラ−０−メチルグルコー
ス：　２．３．４−　トリーＯ−メチルグルコース：２
’、４−ジー０−メチルグルコース２１：２５：１で得
られた。従って、本発明の方法により得られる生理活性
子ＩＪｉ　ＲＯＮはα−１，６グルコシド結合を主結合
とし、少量の１．３．６位分岐を有する、グルコースを
唯一の構成糖とする多糖であり、次の基本骨格を有して
いることが推定された。

＋ａ　−Ｄ−Ｇｌｃｐ　　（１→６）％−ｃｒ　−Ｄ−
Ｇｌｃｐ−（１→６）（ここで、Ｇｌｃｐはグルコビラ
ノースを示し、ｐ、ｑはＯ〜５０であり、Ｐ＋（１≦５
０である。）（７）蛋白質：殆んど含有せず（８）分子量二透析膜を通過せず、分子量１万以上と推
定され、後述の実施例１により製造された生理活性多糖
ＲＯＮはセファロース２Ｂ■ゲル濾過法による測定によ
ると分子！２０００万以上と推定された。

（９）　　比旋光度：　〔ｔｘ”Ｊ　：’＝＋１９０’
　−＋２２０゜（ｃ＝０．５．ホルムアミド）００）呈色反応：アンスロン硫酸反応、フェノール硫酸
反応およびクロモトロープ硫酸反応が陽性であり、ビウ
レット反応、ローリー・フォーリン反応、エルマン・モ
ルガン反応およびヨード反応がそれぞれ陰性である。

０υ　融点ニ一定の融点を示さず、２２０°Ｃで褐変し
、２８０℃で黒変して炭化が起こる。

（１２）紫外部吸収スペクトル：第１図に示す紫外部吸
収スペクトルの如く特徴的吸収を有さない。

０３１　　赤外部吸収スペクトル：第２図に示す赤外部
吸収スペクトルの如くα−グルカンに特徴的吸収を示す
。

Ｑ４　　”　Ｃ−Ｎ　Ｍ　Ｒスペクトル；第３図に示す
”Ｃ−ＮＭＲスペクトルの如く、主シグナルとしてα−
１，６グルカンに特徴的スペクトルを示す。

θつ　抗腫瘍活性：本発明で得られる生理活性多＃ＭＲＯＮは硫酸。

塩酸、ギ酸などを数パーセント加え、穏やかに加温する
ことにより部分加水分解を行い、低分子化することがで
きる。低分子化した生理活性子＄Ｊ！ＲＯＮは中和後、
セファロース■、セファデックス■。

トヨパーノーなどを用いたゲル濾過もしくは種々の排除
限界を有する膜による限外濾過等にて分画することによ
り分子量を揃えることができる。

本発明で得られる生理活性多糖ＲＯＮおよび低分子化生
理活性多糖ＲＯＮの中で分子量１万以上のものは抗腫瘍
活性、免疫調節活性、感染防御活性等の種々の生理活性
を有していることが判明した。以下にそれぞれの生理活
性についてその検定法および後述する実施例１で得られ
た生理活性多＄１！ＲＯＮ　（以下、ＲＯＮと略記する
ことがある。）および実施例４で得られた生理活性多＄
Ｊｉ　ＲＯＮを２％硫酸にて部分加水分解することによ
り調製されたＲＯＭ低分子化物Ｆ、（分子量１００万以
上）。

Ｆ、（分子量ｌＯ〜１００万）、Ｆ３（分子量ｌ〜１０
万）を投与した実験での検定結果について詳述する。

（１）　　抗腫瘍活性について（イ）同系腫瘍メス−Ａに対する生理活性多ｔＪ！ＲＯ
Ｍの腹腔投与の効果６週令メス、平均体重２０ｇのＢＡＬＢ／Ｃ−ＣＲＪマ
ウスに１週間、同系のマウスの腹腔内で継代した癌細胞
メス−Ａをマウス１匹当りｌＸｌ０’個を腹腔内に移植
し、対照群２０匹（１群）、試験群各ＩＯ匹（３群）の
計４群に分けた。癌細胞を移植した翌日から連続５日間
、試験群には生理食塩水に溶解したＲＯＭをマウス１匹
の体重１ｋｇ当り各１０．３０，１００■を０．１−ず
つ腹腔内に投与し、対照群には同様にして生理食塩水の
みを投与した。

以後、生存日数を観察し、延命効果を次式により算出し
た。

（ロ）同系腫瘍メス−Ａに対する生理活性子［ＲＯＮの
経口投与の効果６週令メス、平均体重２０ｇのＢＡＬＢ／Ｃ−ＣＲＪマ
ウスに１週間、同系のマウスの腹腔内で継代した癌細胞
メス−Ａをマウス１匹当りｌＸｌ０’個を右腋下皮下に
移植し、対照群２０匹（１群）、試験群各１０匹（３群
）の計４群に分けた。癌細胞を移植した翌日から連続１
０日間、試験群には生理食塩水に溶解したＲＯＮをマウ
ス１匹の体重１ｋｇ当り各１０．３０．１００ｍｇを０
．２ｍｌずつ経口ゾンデを用いて胃内に投与し、対照群
には同様にして生理食塩水のみを投与した。癌細胞を移
植してから３５日後に各マウスを層殺し、増殖した腫瘍
を切り出し重量を測定した。なお、阻止率は次式により
算出した。

上記（イ）　、　（ＩＩ）の方法により検定したＲＯＭ
の抗腫瘍効果は下表の通りであった。

上表より明らかなように腹腔投与、経口投与ともに３０
■／ｋｇ付近を至適投与量として生理活性子［ＲＯＮは
強い抗腫瘍活性を有していることが判明した。

次にＲＯＮ低分子化物Ｆ、、Ｆ、およびＦ、について投
与量をマウス体重１ｋｇ当たり３０■として、上記（イ
）および（ＩＩ）と同様の実験を行った。結果は下表の
通りであった。

上表から明らかなように、部分加水分解を行い低分子化
したＲＯＮにも加水分解前にほぼ匹敵する抗腫瘍活性を
有することが判明した。

その他にＲＯＮおよびその低分子化物は同系腫瘍ルイス
肺癌、メラノーマＢ−１６．同種腫瘍ザルコーマ１８０
．エールリッヒ腫瘍等に対シ、投与１１０〜１００■／
ｋｇの範囲で腹腔投与または経口投与により腫瘍阻止率
３０〜７０％の効果が確認されている。また、ＲＯＭお
よびその低分子化物を適当なブライマーと組合わせてマ
ウスに投与すると、その血清中にＬ９２９細胞に対する
細胞傷害活性やメスーＡ固形腫瘍に対する壊死作用を誘
導し、また担癌マウスの生体内にも腫瘍壊死因子を自己
誘導することが確認された。したがってＲＯＮおよびそ
の低分子化物は後述するように毒性が全くみられない点
とも合わせて極めて有効な抗ｐａ瘍剤となりうると考え
られる。

（２）免疫調節活性について（イ）カーボンクリアランステスト（ＣＣＴ）本性は免
疫調節作用のうちマクロファージの食細胞活性の増強効
果について調べるものである。

４週令メス、平均体重２０ｇのＩＣＲ−ＣＲＪマウス１
群６匹に、生理食塩水に溶解したＲＯＮ、その低分子化
物であるＦ　Ｉ　＋　Ｆ　ＺまたはＦ、を２日間腹腔投
与しく対照群は生理食塩水のみを投与）、３日目にカー
ボン液（ペリカン製黒インク、商品名：ファウント　イ
ンディアを生理食塩水で５倍に希釈した液）をマウス尾
静脈より０．２５−注入し、注入直後および１０分後に
眼窩静脈叢より０．（１２５１ｄｌ採血し、３．５ｄの
０．（１１モル炭酸ナトリウム溶液に懸濁溶解させ、６
５０ｎ−吸光度（ｏｏｂｓ。）を測定し血中カーボン濃
度の減少率を調べた。効果は次式に示す貧食系数で表わ
した。

※Ｔ４時におけるｏＩ）６ｓ、をＣｒ　、　Ｔ　２時に
おける０Ｄｂｓ。をＣ２とする。

なお、担癌マウスについてＲＯＮ、Ｆ、、Ｆ、まタハＦ
　ｘ　（’）　投与開始より７日前にザルコーマ１８０
ｍ胞をｌＸｌ０’個大腿部筋肉に移植し、以下同様に試
験した。結果は下表の通りであり、正常マウス、担癌マ
ウスともにＲＯＮ、　　Ｆ　＋、　Ｆ　ｔまたはＦ。

ＣＤ　１０〜３０ｍｇ／ｋｇ、特ニ３０ｍｇ／ｋｇ（７
）投与によりマウスの細網内皮系の機能が冗進し、マク
ロファージの貧食能が大幅に増進されていることが判明
した。

２−′ （ｒｌ）プラークフォーミングセル法（ＰＦＣ）本性は
免疫ｉｌ１節作用のうち、宿主のＢ１１１胞の賦活によ
る抗体産生能の増強効果を調べるものである。

４週令メス、平均体重２０ｇのＩＣＩ？−ＣＩ？Ｊマウ
ス１群６匹に、生理食塩水に溶解したＲＯＮ、その低分
子化物であるＦ、、Ｆ、またはＦ、を３日間連続して腹
腔内に投与しく対照群は生理食塩水のみを投与）、４日
目と１１１日目それぞれ羊赤血球４Ｘ１０’個を尾静脈
より注入感作せしめ、その４日後にカニンガムの方法で
マウス牌細胞のプラーク形成能を測定した。

結果は下表の通りでありＲＯＮ、Ｆ、、Ｆ、またはＦ、
はｌＯ〜ｌＯＯ■／　ｋｇの投与により抗体産生能を著
しく増強していることが示された。

（ハ〉遅延型皮膚反応法（ＤＩＲ）本性は免疫調節作用のうち宿主のＴ細胞の賦活による細
胞性免疫の作用の増強効果を調べるものである。

８週令メス、平均体重２７ｇのＩＣＲ−ＣＲＪマウス１
群６匹に、生理食塩水に溶解したＲＯＮ、その低分子化
物であるＦ＋、ＦｘまたはＦ、を８日間連続して経口投
与しく対照群は生理食塩水のみを投与）、投薬開始後４
日目にマウスの剃毛腹部に５％塩化ビクリルエタノール
溶液を塗布して一次感作し、１１１日目１％ピクリルオ
リーブ油溶液をマウス両耳の表裏に塗布して二次感作し
、その２４時間後に耳厚の増加をゲージで測定し、塗布
前の耳厚との差から耳厚の増加量をみた。一方、担癌マ
ウスについてはザルコーマ１８０腹水型腫瘍細胞をｌＸ
ｌ０’個を投薬開始前日にマウス腹腔内に移植し、以下
同様に試験した。

結果は下表の通りでありＲＯＮ、Ｆ、、ＦｔまたはＦ、
は試験した３０〜５００■／ｋｇの経口投与により、正
常マウス、担癌マウスともに細胞性免疫能を著しく増強
していることが示された。

以上、（イ）、（口〉、（ハ）の各免疫実験によりＲＯ
Ｎおよびその低分子化物であるＦ、、Ｆ、、Ｆ、はメカ
ニズムの異なる免疫作用をそれぞれ顕著に光道させてい
ることがわかった。免疫調節剤は一般には生体の免疫機
能が低下したり、異種抗原認識機能が弱い場合などに使
用され得ることから、特に微生物やウィルス感染症や悪
性腫瘍の治療剤、治療補強剤または併用剤、予防剤ある
いは手術後回復促進剤としての薬剤用途が期待される。

以上の免疫賦活回復機能の他にも、免疫調節剤は異常に
光道した生体免疫反応を正常化し、たとえばリウマチ、
膠原病、アレルギー等の自己免疫疾患にも適用できる場
合が考えられる。

（３）感染防御活性について一般には生体は異種細菌の侵入に対しては充分な防御作
用を持っているが、担癌状態、特に癌の末期には著しく
防御作用が低下することが知られており、通常宿主と共
生している非病原菌によってさえ重篤な結果を招来する
ことが知られている。

そこでＲＯＮおよびその低分子化物であるＦ、。

Ｆ　ｔ、　Ｆ　ｓがこれらの細菌の感染症に対して宿主
の防御活性を増強するかどうかをエシェリヒア・コリμ
上１虹おニレ袋土比およびリステリア・モノサイトゲネ
ス具１士ｍ櫃熟二ｍμ阻吐感染に対する防御効果で調べ
た。

７週令メス、平均体重２６ｇのＩＣＲ−ＣＲＪマウスを
１群２０匹ずつ用い、生理食塩水に溶解したＲＯＭ。

Ｆ、、Ｆ、またはＦ、を１０−１００■／ｋｇ　（対照
群は生理食塩水のみ）マウスの背中皮下に細菌感染１日
前、−口径に各１回投与した。エシェリヒア・コリの場
合は２Ｘ１０’個を背中皮下に、リステリア・モノサイ
トゲネスの場合は２Ｘ１０’個を腹腔内に感染させ、そ
れぞれ１週間観察して、生残マウス数を比較した。防御
効果は次式により算出した。

防御効果（％）− １群のマウス数結果は下表の通りであり、ＲＯＮ、Ｆ、、Ｆ、またはＦ
、の１０〜１００ｇ／ｋｇの事前投与によりエシェリヒ
ア・コリ感染に対しては非常に強い防御作用が生じ、リ
ステリア・モノサイトゲネス感染に対しても有意な防御
作用の増強効果がみられた。また、感染後投与の場合で
も両感染菌に対して有意な治療効果を示した。

後述するように、ＲＯＮ、Ｆ、、Ｆ、およびＦ、は毒性
が全く見られない点とも合わせて、極めて有効な感染症
予防治療剤となりうると考えられる。

＊　２　：　Ｌｉ５ｔｅｒｉａ　ｍｏｎｏｃ　ｔｏ　ｅ
ｎｅｓＳＲ−（１１０次に、ＲＯＮ、Ｆ、、ＦｌおよびＦ３の急性毒性につい
て言及する。５週令オスのＳＤ　−ＣＲＪラット。

体重１２０〜１５０ｇ、１群１０匹を用いてＲＯＮ。

Ｆｒ、ＦｚおよびＦ、の物理的投与限界である１５ｇ／
ｋｇを経口投与し観察を続けたところ、金側死亡例がな
く体重増加も対照と変わらず、しかも外観上や剖検上も
全く異常が認められなかった。したがって、Ｌ　Ｄ　ｓ
。＞　１５　ｇ／ｋｇと考えられ、急性毒性はないもの
と判断される。

一方、ＲＯＮを静脈内注射した場合の急性毒性はＬＤｓ
ｏ＝３００■／ｋｇであるのに対し、Ｆ、、Ｆ、。

Ｆ、は分子量が小さくなるに従い毒性を減じ、Ｆ。

ではＬＤ、。＞５ｇ／ｋｇで全く毒性が見られなかった
。従って、注射剤として用いる場合に、低分子化した生
理活性多糖ＲＯＮは大変有利な性質を有している。

このように優れた抗腫瘍活性、免疫調節活性。

感染防御活性を示す生理活性多１ｉ　ＲＯＭが、微生物
の発酵生産物として大量に安定して得られるうえに、比
較的容易な手段で純粋な物質とすることが可能であり、
本生理活性多糖ＲＯＮを微生物によって工業的に製造す
る技術上に与える効果は非常に大きい。

さらに、ＲＯＮおよびその低分子化物であるＦｌ。

Ｆ２およびＦ、はマウスの牌臓細胞由来のナチュラルキ
ラー細胞の傷害活性を増強したり、マウスの腹腔常在性
マクロファージのＬ−９２９細胞に対する傷害活性を賦
活する作用を有している。また、床机な免疫賦活活性を
有し、かつインターフェロンなどのサイトカイン生産能
がみられることからヘルペス、インフルエンザ、エイズ
等のウィルス性疾患に対する発症予防治療効果が期待で
きるほか、慢性肝炎等の肝炎・肝疾患に対する予防・治
療剤としても有用であると考えられる。

したがって、ＲＯＮ、Ｆｒ、ＦｔおよびＦ、は経口的ま
たは非経口的に投与できるので、極めて有用な抗腫瘍剤
、免疫ｍｕ剤あるいは感染症予防治療剤として期待され
る。

なお、実際の製剤化についてはＲＯＮ、Ｆｒ、Ｆｘまた
はＦｘを単独で、あるいは賦形剤（水、生理食塩水、ポ
リエチレングリコール、グリセロゼラチン、ｉＷ粉、デ
キストリン、乳糖など）と組み合わせて水剤、丸剤９錠
剤、散剤、坐剤なとの剤型にて製造することができる。

さらに、生理活性多１ｉＲＯＮは医薬品用途のほか、毒
性が認められないこと、経口投与で健康維持に有用な種
々の生理活性機能を有すること、無味無臭で加工し易い
こと等から疾病予防用または保健用途の飲食品、飲食品
添加物等として使用することもできる。

〔実施例〕

次に、本発明を実施例によりさらに詳細に説明する。

実施例１（培養）ロイコノストック・メセンテロイデス・サブスピーシー
ズ・デキストラニカムＢＬ−７５株（Ｆｔ！ＲＭ　ＢＰ
−２２４２）を穿刺培養したものから、８ｄの培地（蔗
１！２．０χ、酵母エキス０．５％、　リン酸水素２カ
リウム２、ＯＬ　ｐＨ７，４）を入れた直径１５ｍの試
験管に菌を接種し、２６°Ｃで２４時間静置培養した０
次いで、この培養液８ｄを、同組成の培地４００ｄを入
れた５００ｄ容の三角フラスコに入れ、２６°Ｃで２４
時間静置培養した。次いで、この培養液４０〇−を２０
　ｊ２（７）３Ｍ培地（蔗糖１５ｘ、酵母エキス０．（
１５％。

リン酸水素２カリウム０．５χ、塩化ナトリウム０．１
″Ａ。

ｐ）１７．４）を入れた３（１１容ジャーファーメンタ
−に接種し、３０’Ｃで１５時間窒素通気下で穏やかに
攪拌（０，２ｖ／ｖ／ａｅｉｎ、攪拌１０ｒｐｍ）　シ
培養を行った。

（精製）上記培養にて得られた培養液２（１１をｐＨ７に調整後
、殺菌の目的で１００℃に加熱した。次いで、連続遠心
分離機により菌体および不溶物の除去を行い、培養上清
１８Ｉｌを得た。

得られた培養上清に終濃度４０Ｘ（ｖ／ｖ）となるよう
にメタノールを徐々に添加して静置した。傾倒して上清
液を除去後、得られた沈澱を６０Ｘ（ｖ／ｖ）メタノー
ルで洗浄した。この沈澱を再度１８２のイオン交換水に
溶解し、メタノールによる沈澱と６０χ（ｖ／ｖ）メタ
ノールによる洗浄を行い、モチ状の白色の沈ｇ　２．８
ｋｇを得た。この沈澱をイオン交換水１５１に溶かし、
噴霧乾燥することにより５５０ｇの生理活性多糖ＲＯＮ
の白色粉末を得た。

実施例２実施例１において、３Ｍ培地に蔗糖の代わりに廃糖蜜を
ｌＯｘの濃度になるように添加したこと以外は実施例１
と同様の方法で培養、遠心分離による菌体の除去、メタ
ノール沈澱を行い、モチ状の沈澱約２．５ｋｇを得た。

得られた沈澱を少量のイオン交換水に溶かし、アセトン
中に滴下することにより沈澱を得、その後真空乾燥する
ことにより４９０ｇの生理活性多糖ＲＯＮの白色粉末を
得た。

実施例３実施例１で得られた培養上清１００−にメタノールを終
濃度で４（１２（ｖ／ｖ）となるように徐々に添加し、
得られたモチ状の沈澱を６０χ（ν／Ｖ）メタノールで
洗浄後、１ＯＯ−のイオン交換水に再溶解し、水で平衡
化した０ＦｉＡＥ−）ヨパール６５０Ｍ［有］に通し素
通りする両分を集め、分画分子量１０万の膜にて限外濾
過を行ない、濃縮、脱塩後、凍結乾燥することにより２
．２ｇの生理活性多＄１ＲＯＮの白色粉末を得た。

実施例４実施例１で得られた生理活性多糖ＲＯＮの白色粉末２．
０ｇを２ｚ硫酸１０（１１１１ニ溶解し、６０℃で４時
間部分加水分解を行った。これを炭酸バリウムにて中和
後、沈澱を遠心分離にて除き、分画分子量１００万、１
０万、１万の膜にて限外濾過を順次行って３画分Ｆ、〜
Ｆ１、すなわちＦ＋（分子量１００万以上）、Ｆｚ（分
子ｆ＃１０〜ｉｏｏ万）、Ｆｓ（分子量１−１０万）を
得た。それぞれの両分を凍結乾燥してＦｌ：約４５（１
１ｇ、Ｆｚｉ約７０（１１ｇ、Ｆ、：約５０（１１１ｇ
の生理活性多＄１ＲＯＮの白色粉末を得た。

実施例５実施例１において、ロイコノストック・メセンテロイデ
ス・サブスピーシーズ・デキストラニカムＢＬ−７５株
（ＦＥＲＭ　ＢＰ−２２４２）の代わりにロイコノスト
ック・メセンテロイデス・サブスピーシーズ・デキスト
ラニカム４６−１株（ＦＥＲＭ　ＢＰ−２６７０）に変
えたこと以外は同様の操作を行い、生理活性多１ｉ　Ｒ
ＯＮの白色粉末５２０ｇを得た。

実施例６実施例１において、ロイコノストック・メセンテロイデ
ス・サブスピーシーズ・デキストラニカムＢＬ−７５株
（Ｆｆ！ＲＭ　ＢＰ−２２４２）の代わりにロイコノス
トック・メセンテロイデス・サブスピーシーズ・デキス
トラニカムＮＣＰＢ　５１７（ＦＥＲＭ　ＢＰ−２７１
１）に変えたこと以外は同様の操作を行い、生理活性多
糖ＲＯＮの白色粉末９９ｇを得た。

実施例７実施例１において、ロイコノストック・メセンテロイデ
ス・サブスピーシーズ・デキストラニカムＢＬ−７５株
（ＦＥＲＮ　ＢＰ−２２４２）の代わりにロイコノスト
ック・メセンテロイデス・サブスピーシーズ・デキスト
ラニカムＮＣＰＢ　５３１（ＰＥＲ阿ＢＰ−２７１２）
に変えたこと以外は同様の操作を行い、生理活性多糖Ｒ
ＯＮの白色粉末６ｇを得た。

実施例８実施例１において、ロイコノストック・メセンテロイデ
ス・サブスピーシーズ・デキストラニカムＢＬ−７５株
（ＦＥＲＭ　ＢＰ−２２４２）の代わりにロイコノスト
ック・メセンテロイデス・デキストラニカムＮＣＦＢ８
６１（ＦＥＲＭ　ＢＰ−２７１３）に変えたこと以外は
同様の操作を行い、生理活性多糖ＲＯＮの白色粉末３ｇ
を得た。

実施例９実施例１において、ロイコノストック・メセンテロイデ
ス・サブスピーシーズ・デキストラニカムＢＬ−７５株
（ＦＥＲＭ　ＢＰ−２２４２）の代わりにロイコノスト
ック・メセンテロイデス・デキストラニカムＮＣＦＢ　
８６４（ＦＥＲＭ　ＢＰ−２７１４）に変えたこと以外
は同様の操作を行い、生理活性多糖ＲＯＮの白色粉末８
５ｇを得た。

実施例１０実施例１において、ロイコノストック・メセンテロイデ
ス・サブスピーシーズ・デキストラニカムＢＬ−７５株
（ＦＥＲＭ　ＢＰ−２２４２）の代わりにロイコノスト
ック・メセンテロイデス・デキストラニカムＮＣＦＢ　
８８０（ＦＥＲＭ　ＢＰ−２７１５）に変えたこと以外
は同様の操作を行い、生理活性多糖ＲＯＮの白色粉末１
２３ｇを得た。

実施例１１実施例１において、ロイコノストック・メセンテロイデ
ス・サブスピーシーズ・デキストラニカムＢＬ−７５株
（ＦＩｌｉＲＭ　ＢＰ−２２４２）の代わりにロイコノ
ストック・メセンテロイデス・デキストラニカムＡＴＣ
Ｃ１９５６に変えたこと以外は同様の操作を行い、生理
活性多糖ＲＯＮの白色粉末１７１ｇを得た。

実施例１２実施例１において、ロイコノストック・メセンテロイデ
ス・サブスピーシーズ・デキストラニカムＢＬ−７５株
（ＦＩｌｉＲＭ　ＢＰ−２２４２）の代わりにロイコノ
ストック・メセンテロイデス・デキストラニカムＩＦＯ
３３４９に変えたこと以外は同様の操作を行い、生理活
性多糖ＲＯＮの白色粉末１０８ｇを得た。

実施例１３（培ＩＩ）ロイコノストック・メセンテロイデス・サブスピーシー
ズ・デキストラニカムＢＬ−７５株（ＦＥＲＭ　ＢＰ−
２２４２）を穿刺培養したものから、８Ｍ１の培地（蔗
１ｍ１２．０χ、酵母エキス０．５χ、リン酸水素２カ
リウム２．０χ、　ｐＨ７，４）を入れた直径１５ｍの
試験管に菌を接種し、２６°Ｃで２４時間静置培養した
０次いで、この培養液４００−に蔗糖４０ｇを添加攪拌
して溶解させ、３０℃で２４時間静置培養を行った。

（精製）上記培養にて得られた培養液４００−をｐＨ７に調整後
、殺菌の目的で１００°Ｃに加熱した０次いで、培養液
を水で２倍に希釈後、遠心分離機により菌体および不溶
物の除去を行い、培養上清７００　ｍを得た。

得られた培養上清に終濃度４０　！（ｖ／ｖ）となるよ
うにメタノールを徐々に添加して静置した。傾倒して上
清液を除去後、得られた沈澱を６０χ（ν／ｖ）メタノ
ールで洗浄した。この沈澱を再度７００戚のイオン交換
水に溶解し、メタノールによる沈澱と６０ｚ（ν／ｖ）
メタノールによる洗浄を行い、モチ状の白色の沈Ｒ６０
ｇを得た。この沈澱をイオン交換水４００　ｄに溶かし
、凍結乾燥することにより１０ｇの生理活性多１ｉＲＯ
Ｎの白色粉末を得た。

実施例１４実施例１３と同様にして得られた培養液（４００ｄ）の
菌体を超音波破砕機により破砕後、遠心分離機により不
溶物を除去し、培養処理液３５０ｍを得た。得られた培
養処理液に蔗糖を４０ｇ添加・攪拌して溶解させ、３０
″Ｃで２４時間放置後、水で２倍に希釈した。これに終
濃度４０％（ｖ／ｖ）となるようにメタノールを徐々に
攪拌しながら添加後しばらく静置した。　（ｌＪｌ倒し
て上澄を除去後、得られた沈澱を６０％（ｖ／ｖ）メタ
ノールで洗浄した。この沈澱を再度４００ｄのイオン交
換水に溶解し、メタノールによる沈澱と６０％（ｖ／ｖ
）メタノールによる洗浄を繰り返しモチ状の白色沈澱を
得た。この沈澱をイオン交換水４００　ｄに溶かし、凍
結乾燥することにより１２ｇの生理活性多ｗｉＲＯＮの
白色粉末を得た。

実施例１５実施例１４において、培養液を超音波破砕しないこと以
外は、実施例１４と同様の方法で処理し、１３ｇの生理
活性多糖ＲＯＮの白色粉末を得た。

実施例１６実施例１５において、培養液を遠心分離して得られた培
養処理液を５０−リン酸緩衝液ｐＨ５，５中で４°Ｃ１
−晩透析する操作を加えたこと以外は、実施例１５と同
様の方法で処理し、１３．５ｇの生理活性多ｔＪ！　Ｒ
ＯＮの白色粉末を得た。

〔発明の効果〕

本発明によれば、生理活性多糖ＲＯＭ　ＯＮを微生物の
発酵生産物として高い収量で安定して得ることができる
。本発明により得られる生理活性多ＩＪ！ＲＯのように
毒性が無い上に抗腫瘍活性、免疫調節活性、感染防御活
性を有する物質は極めて少なく、このような物質を微生
物により安定的に製造することが可能となったことは、
産業上大変有利である。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明により製造された生理活性多糖ＲＯＭの
紫外部吸収スペクトル、第２図は同物質の赤外部吸収ス
ペクトル、第３図は同物質の１３０−ＭＲスペクトルである。

Claims

【特許請求の範囲】１）ロイコノストック属に属し、下記の性質を有する生
理活性多糖ＲＯＮ生産能を有する微生物を培養し、培養
物から該生理活性多糖ＲＯＮを採取することを特徴とす
る生理活性多糖ＲＯＮの製造法。（１）性状：白色の無晶性粉末で無味無臭（２）溶解性：水に可溶、濃度を上げると乳白色で粘稠
な溶液となり、ホルムアミド、ジメチルスルホキシドに
可溶、アルコール、アセトン、ベンゼン、酢酸エチル、
ヘキサン、クロロホルム、四塩化炭素に不溶（３）水溶液のｐＨ：中性ないし弱酸性（４）構成糖：グルコースのみ（５）元素分析値：Ｃ：４４．０〜４５．０％、Ｈ：６
．１〜６．３％（６）構造：α−１，６結合を主鎖とし
たα−グルカンで少量の１，３，６位分岐構造を有する
。（７）蛋白質：殆んど含有せず（８）分子量：透析膜を通過せず、分子量１万以上と推
定される。（９）比旋光度：〔α〕＾２＾５＿Ｄ＝＋１９０°〜＋
２２０°（ｃ＝０．５，ホルムアミド）（１０）呈色反応：アンスロン硫酸反応、フェノール硫
酸反応が陽性、ビウレット反応、ローリー・フォーリン
反応、エルソン・モルガン反応、ヨード反応が陰性（１１）融点：明確な融点を示さない。（１２）紫外部吸収スペクトル：特徴的吸収を有さず。（１３）紫外部吸収スペクトル：α−グルカンに特徴的
吸収を示す。（１４）＾１＾３Ｃ−ＮＭＲスペクトル：主シグナルと
してα−１，６グルカンに特徴的スペクトルを示す。（１５）抗腫瘍作用を有す。２）生理活性多糖ＲＯＮの生産能を有する微生物がロイ
コノストック・メセンテロイデス・サブスピーシーズ・
デキストラニカムＢＬ−７５株（ＦＥＲＭＢＰ−２２４
２）、同ＮＣＦＢ５１７株（ＦＥＲＭＢＰ−２７１１）
、同ＮＣＦＢ５３１株（ＦＥＲＭＢＰ−２７１２）、同
ＮＣＦＢ８６１株（ＦＥＲＭＢＰ−２７１３）、同ＨＣ
ＦＢ８６４株（ＦＥＲＭＢＰ−２７１４）、同ＮＣＦＢ
８６０株（ＦＥＲｎＢＰ−２７１５）、同４６−１株（
ＦＥＲＭＢＰ−２６７０）、同ＡＴＣＣ１９５６株、同
ＩＦＯ３３４９株およびそれらの変異株からなる群から
選ばれる１種の微生物である請求項１記載の製造法。３）生理活性多糖ＲＯＮの生産能を有する微生物がロイ
コノストック・メセンテロイデス・サブスピーシーズ・
デキストラニカムＢＬ−７５株（ＦＥＲＭＢＰ−２２４
２）または同４６−１株（ＦＥＲＭＢＰ−２６７０）で
ある請求項１記載の製造法。４）ロイコノストック属に属し、下記の性質を有する生
理活性多糖ＲＯＮ生産能を有する微生物の培養処理物を
蔗糖に作用させて該生理活性多糖ＲＯＮを生成せしめ、
採取することを特徴とする生理活性多糖ＲＯＮの製造法
。（１）性状：白色の無晶性粉末で無味無臭（２）溶解性：水に可溶、濃度を上げると乳白色で粘稠
な溶液となり、ホルムアミド、ジメチルスルホキシドに
可溶、アルコール、アセトン、ベンゼン、酢酸エチル、
ヘキサン、クロロホルム、四塩化炭素に不溶（３）水溶液のｐＨ：中性ないし弱酸性（４）構成糖：グルコースのみ（５）元素分析値：Ｃ：４４．０〜４５．０％、Ｈ：６
．１〜６．３％（６）構造：α−１，６結合を主鎖とし
たα−グルカンで少量の１，３，６位分岐構造を有する
。（７）蛋白質：殆んど含有せず（８）分子量：透析膜を通過せず、分子量１万以上と推
定される。（９）比旋光度：〔α〕＾２＾５＿Ｄ＝＋１９０°〜＋
２２０°（ｃ＝０．５，ホルムアミド）（１０）呈色反応：アンスロン硫酸反応、フェノール硫
酸反応が陽性、ビウレット反応、ローリー・フォーリン
反応、エルソン・モルガン反応、ヨード反応が陰性（１１）融点：明確な融点を示さない。（１２）紫外部吸収スペクトル：特徴的吸収を有さず。（１３）紫外部吸収スペクトル：α−グルカンに特徴的
吸収を示す。（１４）＾１＾３Ｃ−ＮＭＲスペクトル：主シグナルと
してα−１，６グルカンに特徴的スペクトルを示す。（１５）抗腫瘍作用を有す。５）生理活性多糖ＲＯＮの生産能を有する微生物がロイ
コノストックメセンテロイデスサブスピーシーズ・デキ
ストラニカムＢＬ−７５株（ＦＥＲＭＢＰ−２２４２）
、同ＨＣＦＢ５１７株（ＦＥＲＭＢＰ−２７１１）、同
ＮＣＦＢ５３１株（ＦＥＲＭＢＰ−２７１２）、同ＮＣ
ＦＢ８６１株（ＦＥＲＭＢＰ−２７１３）、同ＮＣＦＢ
８６４株（ＦＥＲＭＢＰ−２７１４）、同ＮＣＦＢ８８
０株（ＦＥＲＭＢＰ−２７１５）、同４６−１株（ＦＥ
ＲＭＢＰ−２６７０）、同ＡＴＣＣ１９５６株、同ＩＦ
Ｏ３３４９株およびそれらの変異株からなる群から選ば
れる１種の微生物である請求項４記載の製造法。６）生理活性多糖ＲＯＮの生産能を有する微生物が、ロ
イコノストック・メセンテロイデス・サブスピーシーズ
・デキストラニカムＢＬ−７５株（ＦＥＲＭＳＰ−２２
４２）または同４６−１株（ＦＢＲＭＢＰ−２６７０）
である請求項４記載の製造法。７）ロイコノストック・メセンテロイデス・サブスピー
シーズ・デキストラニカムＢＬ−７５株（ＦＥＲＭＢＰ
−２２４２）または同４６−１株（ＦＥＲＭＢＰ−２６
７０）。