JPH02208301A - 米糠由来生理活性多糖ｒｏｎの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は優れた抗腫瘍活性、免疫調節活性並びに感染防
御活性を有する生理活性多［ＲＯＮを米糠から効率よく
抽出、精製することからなる生理活性多ｔ！　ＲＯＮの
製造法に関する。

〔従来の技術〕

本発明に係る生理活性多糖ＲＯＮおよび米糠から該生理
活性多糖ＲＯＮを抽出する方法は既に特公昭６２−７１
７３号公報に開示されている。

従来の方法では、米糠を水と混合後、直ちに加熱して熱
水抽出することが特徴であった。

〔発明が解決しようとする課題〕

従来の技術では目的とする生理活性物質が質的にも量的
にも安定して得にくいところに欠点があった。すなわち
、原料としての品種、収穫年度。

産地あるいは抽出法等の差により目的とする生理活性物
質の含有量や抽出され易さ、物理化学的性質、生理活性
等にバラツキがあり、安定した品質のものを安定した高
い収率で得ることが困難であった。

本発明ではこの点を解決するため、抽出原料としての米
糠を高濃度蔗糖溶液中に浸漬し一定温度で一定期間保持
することにより目的とする生理活性多糖ＲＯＮを蓄積さ
せ、その後加熱抽出、溶媒沈澱を行い、必要に応じてイ
オン交換処理等の精製手段を順次適用して安定した高い
収率で物理化学的、生物学的性質の一定した生理活性多
糖ＲＯＮを得ようとするものである。

〔課題を解決するための手段］ すなわち、本発明は米糠を濃度５〜３０％の蔗Ｆ溶液に
浸漬して１〜７日間保持した後、該米糠懸濁液を熱水抽
出して得た抽出液に極性有機溶媒を加え、生じた沈澱を
分取し、必要に応じて精製処理を行うことを特徴とする
下記の物理化学的性質を有する生理活性多糖ＲＯＮの製
造法を提供するものである。

（１）性状：白色の無晶性粉末で無味無臭（２）溶解性
：水に可溶、濃度を上げると乳白色で粘稠な溶液となる
。ホルムアミド、ジメチルスルホキシドに可？容、アル
コール ゼン，酢酸エチル、ヘキザン，クロロホルム、四塩化炭
素に不溶 （３）水溶液のｐ＋＋：中性ないし弱酸性（４）構成！
Ｊ！：グルコースのみ （５）元素分析値：　Ｃ　：　４４．０〜４５．０χ，
Ｈ：６．１〜６．３χ（６）構造：α−１．６結合を主
鎖としたα−グルカンで少量のＬ３．６位分岐構造を有
する。

（７）蛋白質：殆んど含有せず （８）分子量：２，０００万以上（セファロース−２Ｂ
■ゲル濾過法による） （９）比旋光度：　〔α）　ｇ５＝＋１９５゜〜＋２１
５。

（ｃ＝０．５，　ホルムアミド） ００）呈色反応：アンスロン硫酸反応，フェノール硫酸
反応が陽性、ビューレット反応，ローリー・フォーリン
反応，エルソン・モルガン反応，ヨード反応が陰性 （１１）融点：明確な融点を示さない。

０２）第１図のような紫外部吸収スペクトルを示す。

（１３）第２図のような赤外部吸収スペクトルを示す。

側　第３図のような’　”Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す
。

本発明に用いられる原料米糠は通常の精米において発注
する米糠であり、当該米糠の発止源である玄米の品種，
産地，収穫年度，精白歩合等を問われないが、抽出に先
立って原料中に混在する砕米等はできるだけ除去してお
くことが望ましい。

砕米等の混在物をできるだけ除去した原料米糠に対して
重量比で２〜５０倍量、好ましくは４〜２０倍量の蔗Ｉ
ｌ！溶液を加える。この蔗糖溶液は抽出液の腐敗を防ぎ
、生理活性多糖ＲＯＮの蓄積を促進するためのもので蔗
糖濃度は５〜３０％、好ましくは１０〜２０％が望まし
い。ここで、蔗糖は通常食用とする上白糖．黒糖，糖蜜
．廃糖蜜。

試薬用サッカロース等のいずれも使用できる。

高濃度蔗糖溶液と米糠を混合し、よく撹拌した後、静置
しておいてもよいが、容器内の温度分布物質分布をでき
るだけ均一にするためゆるやかに攪拌することが望まし
い。保持温度は１０〜４５°Ｃ、好ましくは２０〜３０
°Ｃであり、保持期間は１〜７日、好ましくは２〜４日
である。

所定の保持期間が終了した米糠懸濁液を熱水抽出工程に
移す。このときの加熱処理は５０〜２００′Ｃ、好まし
くは１００〜１５０°Ｃの温度で１０分〜１０時間、好
ましくは３０分〜５時間行なうのが適当である。

加熱処理により得られた抽出液は濾過あるいは遠心分離
等の操作によって固形分と分離し、必要に応して適当な
手段、例えば減圧濃縮、限外濾過等の手段を単独もしく
は組み合わせて行ない抽出液を適当量まで濃縮する。ま
た、抽出液中に存在する澱粉や蛋白質はそれぞれ澱粉分
解酵素（アミラーゼ）や蛋白分解酵素（プロテアーゼ）
を適宜作用させて分解５除去することが後の精製工程の
負荷を軽くするためにも望ましい。

このようにして不純物及び沈澱物を可及的に除去した清
澄な抽出液に極性有機溶媒を加えて目的物質を沈澱させ
回収する。ここで用いる極性有機溶媒としてはメタノー
ル、エタノール、アセトン等が使用可能である。極性有
機溶媒の使用量は抽出液中の目的物質の含有量によって
も変動するが、メタノールを用いる場合を例にすると、
メタノール濃度が３０〜５０％（ｖ／ｖ）になるように
添加すればよい。生じた沈澱は濾過、遠心分離、傾斜法
などによって固型物として回収することができる。

一般に１回の溶媒沈澱では不純物をまきこんで純度が劣
ることが多いので、必要に応じてどの操作を数回くり返
すことが望ましい。すなわち、メタノール等の溶媒添加
により生じた沈澱を回収し一１沈澱前と同量の水に溶か
し、第１回目と同濃度になるよう再度メタノール等の溶
媒を添加して目的物質を沈澱させる。この操作を数回く
り返すことにより、目的物質である生理活性多糖ＲＯＮ
の純度は大幅に向上する。

このようにして得られた生理活性多糖ＲＯＮについてさ
らに精製が望まれる場合、前記の操作により得られた生
理活性多ｉＪ！ｉ　ＲＯＮを含む水溶液を陰イオン交換
体であるアンバーライトＩＲ−４Ｂ■ＤＥＡＥ−セファ
ロース■、ＤＥＡＥ−）ヨパル■等を充填したカラムに
かけ水で溶出させたとき吸着されずに溶出される両分を
集め、精製水に対して十分透析して無機イオンを除いた
後、凍結乾燥、噴霧乾燥、極性有機溶媒による沈澱など
を行なって白色粉末状の目的物質である生理活性多ＩＪ
ｊ　ＲＯＮを得ることができる。

このようにして得られた生理活性多１ｉＲＯＮは次の様
な物理化学的性質を有している。

０）性状：白色の無晶性粉末で無味無臭（２）溶解性：
水に可溶、濃度を上げると乳白色で粘稠な溶液となる。

ホルムアミド　ジメチルスルホキシドに可溶、アルコー
ル、アセトン、ベンゼン、酢酸エチル、ヘキザン、クロ
ロホルム、四塩化炭素に不溶 （３）水溶液のｐＨ：中性ないし弱酸性（４）構成？！
　：グルコースのみ （５）元素分析値：　Ｃ：　４４．０〜４５．０％、Ｈ
：６．１〜６．３χ（６）構造：α−１，６結合を主鎖
としたα−グルカンで少量のＬ３，６位分岐構造を有す
る。

（７）蛋白質：殆んど含有せず （８）分子量：２，０００万以上（セファロース−２Ｂ
■ゲル濾過法による） （９）比旋光度：　〔α）　：５＝＋１９５゜〜＋２１
５゜（ｃ＝０．５．　　ホルムアミド） ００）呈色反応：アンスロン硫酸反応、フェノール硫酸
反応が陽性、ビューレット反応、ローリー・フォーリン
反応、エルソン・モルガン反応、ヨード反応が陰性 （１１）融点：明確な融点を示さない。

（１２）第１図のような紫外部吸収スベク１−ルを示す
。

（１３）第２図のような赤外部吸収スペクトルを示す。

θ滲　第３図のような”　Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示ず
。

次いでこの多糖ＲＯＮの生物活性について述べる。

本発明により得られる生理活性多ａｉＲＯＮ（以下、Ａ
と略記する。）は、抗腫瘍活性、免疫調節活性、感染防
御活性等の種々の生理活性を有していることが判明した
。層下にそれぞれの生理活性についてその検定法および
後述する実施例１で得られたＡを投与した実験での検定
結果について詳述する。

（］）抗ＩＩＩ瘍活性について （イ）同系腫瘍メス−Ａに対する生理活性多糖ＲＯＮの
腹腔投与の効果 ６週令メス、平均体重２０ｇのＢＡＬＢ／Ｃ−ＣＲＪマ
ウスに１週間、同系のマウスの腹腔内で継代した癌細胞
メス−Ａをマウス１匹当りｌＸｌ０’個を腹腔内に移植
し、対照群２０匹（１群）、試験群各１０匹（３群）の
計４群に分けた。癌細胞を移植した翌日から連続５日間
、試験群には生理食塩水に溶解したＡをマウス１匹の体
重１ｋｇ当り各１（１３０．１００ｍｇを０．１成ずつ
腹腔内に投与し、対照群には同様にして生理食塩水のみ
を投与した。

以後、生存日数を観察し、延命効果を次式により算出し
た。

３５日後に各マウスを層殺し、増殖したＩ！ｌ！瘍を切
り出し重量を測定した。なお、阻止率は次式により算出
した。

上記（イ）、（ＴＩ）の方法により検定したＡの抗腫瘍
効果は下表の通りであった。

（ロ）同系腫瘍メス−Ａに対する生理活性多糖ＲＯＮの
経口投与の効果 ６週令メス、平均体重２０ｇのＢＡＬＢ／Ｃ−ＣＲＪマ
ウスに１週間、同系のマウスの腹腔内で継代した癌細胞
メス−Ａをマウス１匹当り６Ｘ１０’個を右腋下皮下に
移植し、対照群２０匹（１群）、試験群各１０匹（３群
）の計４群に分けた。癌細胞を移植した翌日から連続１
０日間、試験群には生理食塩水に溶解したＡをマウス１
匹の体重１ｋｇ当り各１０．３０，１００ｍｇを０　、
２　ｍｌずつ経口ゾンデを用いて胃内に投与し、対照群
には同様にして生理食塩水のみを投与した。癌細胞を移
植してから上表より明らかなように腹腔投与、経口投与
ともにマウス体重１ｋｇ当たり３０＋ｎｇ付近を至適投
与量としてＡは強い抗腫瘍活性を有していることが判明
した。

その他にＡは同系腫瘍ルイス肺癌、メラノーマＢ−１６
，同種腫瘍ザルコーマ１８０．エールリッヒ腫瘍等に対
し、投与量１０〜１００■／　ｋｇの範囲で腹腔投与ま
たは経口投与により腫瘍阻止率３０〜７０％の効果が確
認されている。また、Ａを適当なプライマーと組合わせ
てマウスに投与すると、その血清中にＬ−９２９細胞に
対する細胞傷害活性やメスーＡ固形腫瘍に対する壊死作
用を誘導し、また担癌マウスの生体内にも腫瘍壊死因子
を自己誘導することが確認された。したがってＡは後述
するように毒性が全くみられない点とも合わせて極めて
有効な抗腫瘍剤となりうると考えられる。

（２）免疫調節活性について （イ）カーボンクリアランステスト（ＣＣＴ）末法は免
疫調節作用のうち細網内皮系の先進作用について調べる
方法である。

４週令メス、平均体重２０ｇのＪＣＲ−ＣＲＪマウス１
群６匹に、生理食塩水に溶解したＡを２日間腹腔投与し
く対照群は生理食塩水のみを投与）、３日目にカーボン
液（ペリカン製黒インク、商品名：ファウント　インデ
ィアを生理食塩水で５倍に希釈した液）をマウス尾静脈
より０．２５ｍ１注入し、注入直後および１０分後に眼
窩静脈叢より０．０２５ｍ！採血し、３．５誦の０．０
１モル炭酸ナトリウム溶液に懸濁溶解させ、６５０ｎｍ
にて吸光度（ＯＤ６Ｓ、）を測定し、血中カーボン濃度
の減少率を調べた。効果は次式に示す宜食係数で表わし
た。

※Ｔ８時におけるＯＤ６．。をＣＩ、　Ｔ　２時におけ
るＯＤ、５．をＣ２とする。

なお、担癌マウスについてＡの投与開始より７日前にザ
ルコーマ１８０細胞を１×１０７個大腿部筋肉に移植し
、以下同様に試験した。結果は下表の通りであり、正常
マウス、担癌マウスともにＡの１０〜３０ｎ＋ｇ／ｋｇ
、特に３０ｍｇ／ｋｇの投与によりマウスの細網内皮系
の機能が亢進していることが判明した。

ことが示された。

（＋＋）プラークフォーミングセル法（ＰＦＣ）末法は
免疫調節作用のうち、宿主のＢ細胞の賦活による抗体産
生能の増強効果を調べるものである。

４週令メス、平均体重２０ｇのＩＣＲ−ＣＲＪマウス１
群６匹に、生理食塩水に溶解したＡを３日間連続して腹
腔内に投与しく対照群は生理食塩水のみを投与）、４日
目と１１１日目それぞれ羊赤血球４×１０　個を尾静脈
より注入感作せしめ、その４日後にカニンガムの方法で
マウス牌細胞のプラーク形成能を測定した。

結果は下表の通りであり、Ａは１０〜１００ｍｇ／ｋｇ
の投与により抗体産生能を著しく増強している（ハ）遅
延型皮膚反応法（ＤＨＲ） 末法は免疫調節作用のうち宿主のＴ細胞の賦活による細
胞性免疫の作用の増強効果を調べるものである。

８週令メス、平均体重２７ｇのＩＣＩ？−ＣＲＪマウス
１群６匹に、生理食塩水に溶解したＡを８日間連続して
経口投与しく対照群は生理食塩水のみを投与）、投薬開
始後４日目にマウスの刺毛腹部に５％塩化ピクリルエタ
ノール溶液を塗布して一次感作し、１１１日目１％ビク
リルオリーブ油溶液をマウス両耳の表裏に塗布して二次
感作し、その２４時間後に耳厚の増加をゲージで測定し
、塗布前の耳厚との差から耳厚の増加量をみた。一方、
担癌マウスについてはザルコーマ１８０腹水型腫瘍細胞
をｌＸ１（１３個を投薬開始前日にマウス腹腔内に移植
し、以下同様に試験した。

結果は下表の通りであり、Ａは試験した３０〜５００　
ｍｇ／ｋｇの経口投与により、正常マウス、担癌マウス
ともに細胞性免疫能を著しく増強していることが示され
た。

以上、（イ）　、　（＋＋）　、　（＋＋）の各免疫実
験により生理活性多糖ＲＯＮはメカニズムの異なる免疫
作用をそれぞれ顕著に亢進させていることがわかった。

免疫調節剤は一般には生体の免疫機能が低下したり、異
種抗原認識機能が弱い場合などに使用され得ることから
、特に微生物感染症や悪性腫瘍の治療剤。

治療補強剤または併用剤、予防剤あるいは術後回復促進
剤としての薬剤用途が期待される。以上の免疫賦活回復
機能の他にも、免疫調節剤は異常に亢進した生体免疫反
応を正常化し、たとえばリウマチ、膠原病、アレルギー
等の自己免疫疾患にも適用できる場合が考えられる。

（３）感染防御活性について 生体の細菌による感染症に対する防御作用としては、侵
入細菌に対する抗体産生による、いわゆる体液性免疫作
用によるものと、マクロファージや好中球が侵入細菌と
戦う、いわゆる細胞性免疫によるものがあることが知ら
れている。一般には生体はこれら異種細菌の侵入に対し
ては充分な防御作用を持っているが、担癌状態、特に癌
の末期には著しく防御作用が低下することが知られてお
り、通常宿主と共生している非病原菌によってさえ重篤
な結果を招来することが知られている。

そこで、生理活性多＠ＲＯＮがこれらの細菌の感染症に
対して宿主の防御活性を増強するかどうかをエシェリヒ
ア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏ上σおよびリ
ステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ懸■鳩
ｌ郊μ川ａ惑染に対す用防御効果で調べた。

７週令メス、平均体重２６ｇのＩＣＲ−ＣＩ？Ｊマウス
を１群２０匹ずつ用い、生理食塩水に溶解したＡを１０
〜１００　ｍｇ／ｋｇ　（対照群は生理食塩水のみ）マ
ウスの背中皮下に細菌感染１日前、１日後に各１回投与
した。エシェリヒア・コリの場合は２×１０７個を背中
皮下に、リステリア・モノサイトゲネスの場合は２×１
０７個を腹腔内に感染させ、それぞれ１週間観察して、
生残マウス数を比較した。防御効果は次式により算出し
た。

防御効果（％）− 作用の増強効果がみられた。また、感染後投与の場合で
も両感染菌に対して有意な治療効果を示した。

後述するように、生理活性多糖ＲＯＮは毒性が全く見ら
れない点とも合わせて、極めて有効な感染症予防治療剤
となりうると考えられる。

結果は下表の通りであり、への１０〜１００ｍｇ／ｋｇ
の事前投与により、エシェリヒア・コリ感染に対しては
非常に強い防御作用が生じ、リステリア・モノサイトゲ
ネス感染に対しても有意な防御／ ＊　１　：　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｔ　　５
Ｂ−００１＊　　２　　：　　Ｌｉ５ｔｅｒｉａ　　ｍ
０ｎＯＣｔＯｅｎｅＳ　　５Ｂ−０１０次に、生理活性
多糖ＲＯＮの急、性毒性について言及する。５週令オス
のＳＤ　−ＣＲＪラット、体重１２０〜１５０ｇ、１群
１０匹を用いてＡの物理的投与限界である１５ｇ／ｋｇ
を経口投与し観察を続けたところ、金側死亡例がなく体
重増加も対照と変わらず、しかも外観上や剖検上も全く
異常が認められなかった。したがって、Ｌ　Ｄｓｏ＞　
１５　ｇ　／　ｋｇと考えられ、急性毒性はないものと
判断される。

このように優れた抗腫瘍活性、免疫調節活性感染防御活
性を示すＡが比較的容易な操作の組み合わせにより下記
製造例に示されるように大量に得られるので、米糠から
生理活性多糖を工業的に製造する技術上に与える効果は
非常に大なるものである。

さらに、Ａはマウスの肺臓細胞由来のナチュラルキラー
細胞の傷害活性を増強したり、マウスの腹腔常在性マク
ロファージのＬ−９２９細胞に対する傷害活性を賦活す
る作用を有している。また、広汎な免疫賦活活性を有し
、かつインターフェロンやインターリューキン１などの
サイトカイン生産能がみられることからヘルペス、イン
フルエンザ。

エイズ等のウィルス性疾患に対する発症予防治療効果が
期待できる他、慢性肝炎等の肝炎・肝疾患に対する予防
・治療剤としても有用であると考えられる。

また、△ば経口的または非経口的に投与できるので、極
めて有用な抗腫瘍剤、免疫調節剤あるいは感染症予防治
療剤として期待される。

なお、実際の製剤化についてはＡを単独で、あるいは賦
形剤（水、生理食塩水、ポリエチレングリコール、グリ
セロゼラチン、澱粉、デキストリン、乳糖など）と組み
合わせて水剤、火剤１錠剤。

散剤、坐剤なとの剤型にて製造することができる。

さらに、生理活性多ｔ１ＭＲＯＮは医薬品用途のほか、
毒性が認められないこと、経口投与で健康維持に有用な
種々の生理活性機能を有すること、無味無臭で加工し易
いこと等から疾病予防用または保健用途の飲食品、飲食
品添加物等として使用することもできる。

一方、本発明で述べた生理活性多１！ｉＲＯＮは分子量
２．０００万以上の高分子物質であるが、酸加水分解等
によって一定限度まで低分子化したものも元の生理活性
多Ｉｔ！ＲＯＮと同程度の生理活性を有することを見出
した。すなわち、本物質を０．５〜５％、好ましくは１
〜３χの硫酸−ギ酸溶液中で３０〜７０°Ｃ１好ましく
は５０〜６０°Ｃで２〜２４時間、好ましくは３〜６時
間加水分解し、分解液に炭酸バリウムを加えて中和して
遠心分離にて上澄液を得、濃縮後セファローズＣＬ−２
Ｂ　＠、セファデック、２．　Ｇ−２００＠等のカラム
にてゲル濾過を行ない、分子量に応じた数両分を得てそ
れぞれの両分について生物活性を測定したところ、分子
量約１万以上の両分には元の生理活性多Ｉｉ　ＲＯＮと
同程度の活性があることが判明した。

〔実施例〕

次に、本発明を以下の実施例によって詳しく説明する。

実施例１ 市販の米糠を用い篩で砕米等を除いたもの２０ｋｇを、
市販の上白糖２０　ｋｇを溶かして１００ｊ２とした蔗
ＩＪ！溶液（２０％　蔗糖溶液）に加えてよ（撹拌し、
温度を２５°Ｃに維持して３日間保持した。

次いで、この懸濁液を加熱し１２０°Ｃで１時間抽出操
作を行なった後、室温付近まで冷却してから固型物を濾
過した。得られた抽出液を４０１！、に減圧濃縮しｐｌ
＋を６．７とした後、５００ｍｇのα−アミラーゼ（長
瀬産業製）を加え、７０°Ｃで１時間処理したのち温度
を４０°Ｃに下げ、ｐＨを７．４に調整後、アクチナー
ゼＥ■（科研製薬製）２ｇを加えて２時間処理した。次
いで、１００　’Ｃまで加熱して両酵素を失活させ、遠
心分離により不溶物を除去し、最終濃度が４０％（ｖ／
ｖ）となるようにメタノールを加え、生じた沈澱を分離
した。

得られた沈澱物を４０１！、の水に溶解し、再度最終濃
度が４０％（ｖ／ｖ）となるようにメタノールを加え、
生じた沈澱を分離した。このメタノール沈澱による分画
精製をさらに２度行なった後、得られた沈澱を約５１の
水に熔かし、凍結乾燥を行なって１０００ｇの淡黄色粉
末を得た。この淡黄色粉末１０ｇをとり、精製水に熔解
してからセファローズＣＬ−６Ｂ■（ファルマシア製）
のカラムにかけてゲル濾過し、そのボイドボリュームに
溶出された画分を集め、さらにこの両分を陰イオン交換
体ＤＥＡＥ−セファローズＣＬ−６Ｂ■（）７／レマシ
ア製）のカラムにかけ、水で溶出したとき吸着されずに
そのまま溶出する両分を集めて濃縮し、最初の１日は流
水で、次の１日は精製水に対して十分透析した後、凍結
乾燥して生理活性多ｌｉｔ　ＲＯＮの純白色粉末５ｇを
得た。

実施例２ 市販の米糠を用い篩で砕米等を除いたもの２ｋｇを、市
販の黒糖１．５ｋｇを溶かして１０ｆｆｉとした蔗糖溶
液（１５％　蔗糖溶液）に加えてよく攪拌し、温度を３
０’Ｃに保って２日間保持した。以後、実施例１と同様
の操作を、１／１０のスケールで行ない、最終的に生理
活性多糖ＲＯＮの純白色粉末４５０■を得た。

実施例３ 実施例１と同様に処理して得た米糠懸濁液を加熱し１０
０°Ｃで１時間抽出操作を行なった。以後、実施例１と
同様に処理して最終的に生理活性多糖ＲＯＮの純白色粉
末５．５ｇを得た。

実施例４ 実施例１で得た生理活性多糖ＲＯＮの白色粉末２ｇに２
％の硫酸−ギ酸混液１００ｍ＃を加え、６０°Ｃで４時
間加水分解を行なった。分解液に炭酸バリウムを加えて
中和し、遠心分離にて上澄液を得、この半量をセファロ
ーズＣＬ−２Ｂのカラムにかけてゲル濾過を行ない、ボ
イドボリュームに溶出する画分Ｆ、（分子量２０００万
以上）、中間分子量約１００万の画分Ｆ２を得た。また
、残り半量をセファデックスＧ−２００にかけ中間分子
量約１０万、約１万の画分Ｆ３．Ｆ４を得た。それぞれ
の両分を凍結乾燥してＦ＋：４１０ｍｇ、　Ｆｚ：３０
　Ｂｍｇ、　Ｆ＊：２９５■、Ｆ４：２６３■の白色粉
末を得た。

このようにして得られた各両分の生物活性について以下
に示す。

（１）抗腫瘍活性について 同系腫瘍メス−Ａに対する投与量３０■／ｋｇ、経口投
与での効果は次表の通りであった。

（２）免疫調節活性について （イ）カーボンクリアランステスト（ＯＣＴ）担癌マウ
スを用い、投与量３０■／ｋｇ、腹腔段（ｆｆ）プラー
クフォーミングセル（ＰＦＣ）正常マウスを用い、投与
量３０ｍｇ／ｋｇ、腹腔段与で４日目に羊赤血球で感作
した場合の結果は次表の通りであった。

（３）感染防御活性について 感染１日前に３０■／ｋｇを皮下投与した場合の防御活
性は次表に示す通りであった。

（ハ）遅延型皮膚反応（ＤＩＲ） 担癌マウスを用い、投与量３０■／ｋｇ、腹腔投与での
結果は次表の通りであった。

また、感染１日後に３０■／ｋｇを皮下投与した場合の
防御活性は次表に示す通りであった。

以上の結果から、本発明の生理活性多糖ＲＯＮは加水分
解により分子量約１万程度まで小さくしても各種生物活
性は元の生理活性多Ｉｌ！　ＲＯＮと同程度に維持され
ていることが判明した。

一方、低分子化した生理活性多糖ＲＯＮの毒性について
ラットを用いて調べたところ、経口投与による急性毒性
はいずれの両分にも元の生理活性多糖ＲＯＮと同様認め
られず、静脈内注射した場合は元の生理活性多糖ＲＯＮ
がＬＤｓｏ　：　３００　ｍｇ／ｋｇであったのに対し
、分子量が小さくなるに従い毒性が減少し、分子量約１
万のＦ４画分はＬＤ、。〉５ｇ／ｋｇで毒性は全く認め
られない。

このように低分子化された生理活性多ＷＲＯＮが毒性も
なく、各種生物活性を有することは、例えば注射剤とし
て本物質を利用するとき、大変有利な性質と考えられる
。

〔発明の効果〕

米糠を用い、加熱抽出工程に入る前に一定期間蔗糖溶液
中に保持せしめることにより、生理活性多糖ＲＯＮの収
率が飛躍的に上昇（１０倍以上）する。また、質的にも
安定した品質の生理活性多糖ＲＯＮが製造できるように
なった。さらに、生理活性の面からも抗腫瘍活性、免疫
調節活性および感染防御活性ともに従来の製法で最もよ
かったものに匹適する活性のものが安定して製造できる
ようになり、量的、質的にみて大幅な改良が見られ、本
発明は産業利用上大変有利と考えられる。

【図面の簡単な説明】

第１図は生理活性多糖ＲＯＮの紫外線吸収スペクトル、
第２図は同物質の赤外線吸収スペクトル。 第３図は同物質のｌ″Ｃ−ＮＭＲスペクトルである。 ３λ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）米糠を濃度５〜３０％の蔗糖溶液に浸漬して１〜７
   日間保持した後、該米糠懸濁液を熱水抽出して得た抽出
   液に極性有機溶媒を加え、生じた沈澱を分取し、必要に
   応じて精製処理を行うことを特徴とする下記の物理化学
   的性質を有する生理活性多糖ＲＯＮの製造法。 （１）性状：白色の無晶性粉末で無味無臭 （２）溶解性：水に可溶、濃度を上げると乳白色で粘稠
   な溶液となる。ホルムアミド、ジメチルスルホキシドに
   可溶、アルコール、アセトン、ベンゼン、酢酸エチル、
   ヘキサン、クロロホルム、四塩化炭素に不溶 （３）水溶液のｐＨ：中性ないし弱酸性 （４）構成糖：グルコースのみ （５）元素分析値：Ｃ：４４．０〜４５．０％、Ｈ：６
   ．１〜６．３％（６）構造：α−１，６結合を主鎖とし
   たα−グルカンで少量の１，３，６位分岐構造を有する
   。 （７）蛋白質：殆んど含有せず （８）分子量：２，０００万以上（セファロース−２Ｂ
   （Ｒ）ゲル濾過法による） （９）比旋光度：〔α〕＾２＾５＿Ｄ＝＋１９５゜〜＋
   ２１５゜（ｃ＝０．５、ホルムアミド） （１０）呈色反応：アンスロン硫酸反応、フェノール硫
   酸反応が陽性、ビューレット反応、ローリー・フォーリ
   ン反応、エルソン・モルガン反応、ヨード反応が陰性 （１１）融点：明確な融点を示さない。 （１２）第１図のような紫外部吸収スペクトルを示す。 （１３）第２図のような赤外部吸収スペクトルを示す。 （１４）第３図のような＾１＾３Ｃ−ＮＭＲスペクトル
   を示す。