JPH03294222A - コラーゲンの異常蓄積を伴う疾病の治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、コラーゲンの異常蓄積を伴う疾病の治療剤に
関する。さらに詳しくは一般式（Ｉ）（式中、Ｒ＋Ｊｉ
ｓよびＲ２はそれぞれ水素原子またはメチル基を示し、
Ｒ５は水素原子、メチル基またはエチル基を示す、但し
、Ｒ１％Ｒ２およびＲｓは　同時に水素原子ではない、
） で表わされるエタノールアミン誘導体またはその薬学的
に許容される塩を有効成分とするコラーゲンの異常蓄積
を伴う疾病の治療剤に関する。

［従来の技術］ コラーゲンの異常蓄積を伴う疾病には、肝線維症（肝硬
変症、慢性肝炎を含む広義の肝線維症を意味する）、肺
線維症、ケロイド、肥厚性壕痕ならびに強皮症等の疾病
が挙げられる（最新医学、４２巻、１０号、２０７５〜
２１３９頁、１９８７年参照）、これら疾病は治療困難
であり、これに対する治療剤は現在のところ未だ確立さ
れていないと冨える。

コラーゲンの異常蓄積を伴う疾病に於いては、コラーゲ
ンの合成と分解のバランスが失われていることが示唆さ
れており、例えば肝硬変症に伴う肝線維化はコラーゲン
生合成増加（５ｃｉｅｎｃｅ、１７６壱、７９５頁、１
９７２年参照）やコラーゲン分解能の低下（Ｂｉｏｃｈ
ｅｍｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ、１１８巻、２２９頁、
１９７０年およびＬｉｆｅ　５ｃｉｅｎｃｅｓ、３０巻
、１６号、１３７９頁、１９８２年参照）により生ずる
と考えられている。

このうち、コラーゲン分解能の低下はコラーゲン分解の
律速酵素であるコラゲナーゼ活性の低下によると考えら
れる。例えば、プレオマイシンにより誘発された線維症
マウス由来の皮膚線維芽細胞（皮膚、１４巻、４号、２
１７頁、１９７２年参照）、強皮症患者の皮膚　（Ｊｏ
ｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ｉｎｖｅｓ−ｔ
ｉｇａｔｉｏｎ、５６巻、１１７５頁、１９７５年参照
）およびアルコール性肝硬変症患者の肝組織内（Ｌｉｆ
ｅ　５ｃｉｅ−ｎｃｅｓ、３０壱、１８号、１３７９頁
、１９８２年参照）ではコラゲナーゼが低下していると
いう。

従りて、コラゲナーゼの異常蓄積を伴う疾病の治療には
異常蓄積したコラーゲンを分解させる必要があり、この
ためにコラゲナーゼの産生促進が必要である。このこと
は、すでに例えば肝硬変症の治療に於いて指摘されてい
る（医学のあゆみ、１３６４！、１３号、１０２７頁、
１９８６年参照）。

コラゲナーゼは前駆体であるプロコラゲナーゼとして細
胞より分泌され、生体内ではその後プラスミンやストロ
メライシン等のタンパク分解酵素によってコラゲナーゼ
に活性化される（Ｂｉｏｃｈｅ＠１−ｃａｌ　Ｊｏｕｒ
ｎａｌ、１８８＠、２１頁、１９７７年およびＰｒｏｃ
−ｅｅｄｉｎｇｓ　　ｏｆ　　ｔｈｅ　　Ｎａｔｉｏｎ
ａｌ　　Ａｃａｄｅｍｙ　　ｏｆ　　５ｃｉｅｎｃｅｓ
ｏｆ　ｔｈｅ　［１，５，＾０．８６巻、２６３２頁、
１９８９年参照）ので、コラゲナーゼの産生促進には、
プロコラゲナーゼ産生促進作用を有する化合物が有効と
考えられる。

［発明が解決しようとする課題］ 本発明者は、プロコラゲナーゼ産生促進作用を有し、コ
ラーゲンの異常蓄積を伴う疾病の治療剤を得るべく種々
検討した。

本発明の目的は、コラーゲンの異常蓄積を伴う疾病の優
れた治療剤を提供することにある。

［課題を解決するための手段］ 本発明者等は、種々の化合物をスクリーニングした結果
、前記一般式（１）で表わされるエタノールアミン絖導
体またはその薬学的に許容される塩がプロコラゲナーゼ
産生を促進することを見出し、この知見をもとに本発明
を完成した。

一般式（１）で表わされる化合物の具体例としては、例
えばＮ−メチルエタノールアミン、Ｎ。

Ｎ−ジメチルエタノールアミン、２−アミノ−１−プロ
バノール及び２−アミノ−１−ブタノール等を挙げるこ
とが出来る。

また一般式（Ｉ）で表わされる化合物の薬学的に許容さ
れる塩としては、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン
酸塩等の無機酸塩、および酢酸塩、フマール酸塩、マレ
イン酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、ｌ）−トルエンスル
ホン酸塩等の有機酸塩を挙げることが出来る。

本発明の治療剤は、経口または注射、経皮等の非経口で
ヒトに投与される。

社口投与の剤形としては、錠剤、顆粒剤、散剤、細粒剤
、硬カプセル剤等の固形製剤のほか、シロップ剤、エリ
キシル剤、軟カプセル剤等の液剤が含まれる。かかる製
剤は常法によって製造され、錠剤、顆粒剤、散剤、細粒
剤ンよ、一般式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容
される塩と、例えば、乳糖、でんぷん、結晶セルロース
、ステアリン酸マグネシウム、ヒドロキシブ口ビルセル
ロース、タルク等の通常の医薬添加物とを混合して製造
され、硬カプセル剤は上記の細粒剤、散剤を適宜カプセ
ルに充填して製造される。

また、シロップ剤は、白糖、０−ソルビトール、カルボ
キシメチルセルロース等を含む水溶液にバラオキシ安息
香酸メチル、バラオキシ安息香酸プロピル等の防腐剤と
共に一般式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され
る塩を溶解または懸濁して製造され、エリキシル剤は一
般式（１）の化合物またはその薬学的に許容される塩の
エタノール溶液にグリセリン、オレンジ油、レモン油、
コリアンター油、アニス油、タルク等を混合して製造さ
れる。

軟カプセル剤は、脂質賦形剤、例えば、植物油、油性エ
マルジョン、グリコール類等に一般式（１）の化合物ま
たはその薬学的に許容される塩を溶解または懸濁し、軟
カプセルに充填して製造される。

注射剤は、一般式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許
容される塩を生理食塩水あるいは例えば、植物油、油性
エマルシヨン、グリコール等の脂質賦形剤に溶解または
乳化させ無菌的にアンプルあるいはバイヤルに封入する
ことによって製造される。

経皮剤には、軟膏剤、ローション剤、バッグ剤、ゲル剤
、クリーム剤、液剤、スプレー剤および貼付剤等が含ま
れる。かかる製剤は、一般式（Ｉ）の化合物またはその
薬学的に許容される塩と、通常の医薬添加物、例えばワ
セリン、スクワラン、流動パラフィン等の炭化水素、ス
テアリルアルコール、セタノール等の高級アルコール、
ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル
等の高級脂肪酸の低級アルキルエステル、ラノリン等の
動物性油脂、グリセリン、プロピレングリコール等の多
価アルコール、マクロゴール４００、マクロゴール４０
００等のポリエチレングリコール、モノステアリン酸グ
リセリン等のグリセリン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸
ナトリウム、モノステアリン酸ポリエチレングリコール
、ポリオキシエチレンアルキルエーテルリン酸（商品名
、ＮＩにＫＯＬ、ＤＤＰ−２，日本サーファクタント工
業株式会社）などの界面活性剤、蝋、樹脂、水および要
すればバラオキシ安息香酸ブチル、バラオキシ安息香酸
メチル等の防腐剤とを混合し腎常法により製造すること
が出来る。

本発明治療剤は、経口または非経口で投与される８例え
ば、肝線維症、肺線維症等、臓器にコラーゲンが異常蓄
積した疾病には経口または注射により、ケロイド、肥厚
性壊痕等、上皮にコラーゲンが異常蓄積した疾病には経
皮または局所注射により本発明治療剤を投与するのが好
ましい、投与量は、患者の年齢、体重、症状あるいは投
与方法等により異なるが、成人に投与する場合、一般に
は１回当り化合物（Ｉ）として０．５〜１００ＯＨの量
を１日、１〜３回投与する。そして例えば、肝線維症、
肺線維症等の臓器にコラーゲンが異常蓄積した疾病に対
し、経口または注射により全身投与する場合には１回当
り３０〜１００ＯＨの投与量が適当であり、ケロイド、
肥厚性瘉痕等の上皮にコラーゲンが異常蓄積した疾病に
対し、経皮により局所投与する場合には一回当り１〜５
０１ｇの投与量が適当である。

［発明の効果］ 一般式（Ｉ）の化合物およびその薬学的に許容される塩
はプロコラ−ゲナーゼの産生を促進させた（後記試験例
１参照）、そして、動物を用いた試験においても、コラ
ーゲンの異常蓄積に伴う疾病、例えば肝線維症の治療に
有効である事が確かめられた（後記試験例２参照）。

一方、一般式（Ｉ）の化合物およびその薬学的に許容さ
れる塩の毒性は低く（後記試験例３参照）、また皮膚刺
激性も低い（後記試験例４参照）。

以上の事実は、一般式（Ｉ）の化合物およびその薬学的
に許容される塩がコラーゲンの異常蓄積に伴う各種疾病
の治療および予防剤として有用であることを示すもので
ある。

以下、試験例を挙げて本発明の詳細な説明する。なお、
試験例中に用いる下記略号はつぎの意味を有する。

ＨＦ培地：ハムＦ−１２粉末培地（日永製薬社製）　１
０．６ｇを蒸留水１１に溶解して調製した培地。

ＩＬ二五ヱＪＪ　：　ＨＦ培地１１当りに、粉末イーグ
ルアミノ酸ビタミン培地（日永製薬社製）１．７８ｇ　
、炭酸水素ナトリウム１．８ｇ、硫酸ストレプトマイシ
ン５０ｍｇおよび硫酸カナマイシン６Ｇｍｇを加えた後
、炭酸ガスを吹１込んでｐｌ＋を約７に調整した培地。

トリス：トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン ｌ旦互ｊｉｊ＠Ｊｉ　：　Ｑ、５Ｍ　ＮａＣ１、１ｍＭ
　Ｃａ（１２、および０．０５ｖ／ｖｔ　Ｂｒ１Ｊ−３
５（ポリオキシエチレンラウリルアルコールエーテルの
商品名）を含む５０ｍＭ２−（Ｎ−モルホリノ）エタン
スルホン酸モノハイドレート水溶液をトリス水溶液にて
４℃でｐＨ６，５に調整した緩衝液。

Ｌ聚互盈１：　０．５ＭＮａＣ１，１ｍＭ　ＣａＣｌ２
および０．０５ｖ／ｖ駕Ｂｒ１ｊ−３５を含む２５−Ｍ
酢酸水溶液をトリス水溶液にて４℃でｐＨ４，５に調整
した緩衝液。

１見Σ二人亙１！　：　Ｍ　Ｅ　Ｓ　１１衝液をトリス
水溶液にて４℃でｐＨ７に調整した緩衝液。

ＭＥＳ−Ｂ　　　　：ＭＥＳｉｌ衝ｉと、酢酸ｍａＨ液
とを混合し、４℃にてｐＨ６，２に調整した緩衝液。

見見Σ−Ｃ亙１！　：　Ｍ　Ｅ　Ｓ　ＩＩ衝含液、酢酸
ａ含液とを混合し、　４℃にてｐＨ５，２に調整した緩
衝液。

：　０．２ＭＮａＣ１，５＋＊ＭＣａＣ１２，０，０５
ｖ／ｖｔＢｒｉＪ−３５および０．［＋２１！／ｖ％Ｎ
ａＮ３を含有する５０５Ｍ　トリス水溶液を塩酸にて室
温でｐＨ７，５に調整した緩衝液。

（試験例１）プロコラゲナーゼ産生促進作用１）試験化
合物 ・Ｎ−メチルエタノールアミン ・Ｎ、Ｎ−ジメチルエタノールアミン ・２−アミノ−１−プロパノール ・２−アミノ−１−ブタノール ２）使用細胞 ヒト線維肉腫細胞ＨＴ１０８０　（ＡＴＣＣＩ、ＣＬ１
２１）由来で無血清無蛋白培地に於いて生育可能な足場
非依存性細胞（ヒト線維肉腫ＨＴ−Ｐ　１１と呼ぶ、鐘
紡株式会社、生化学研究所保有）を用いて試験した。こ
の細胞を、以下の通り前培養し、細胞懸濁液を調整して
試験した。

ヒト線維肉腫ＨＴ−ｐＨを、ＨＦ−ＡＶ培地に密度Ｉ　
Ｘ　１０’／’１１に懸濁し、この懸濁液をフラスコ（
底面積それぞれ７５ｃｍ”）に２０■１ずつ加え、９５
％空気−５％炭酸ガスの雰囲気下に３７℃で３日間静置
培養した。

３日間培養の後、遠心分離（６００ｒｐｍ、　１０分間
）により細胞を集めた。得られた細胞を、ＨＦ−ＡＶ培
地に懸濁し、密度７ＸＩＯ’／■１の細胞懸濁液を調製
した。

３）試験方法 上記の細胞懸濁液を２ｍｌずつ６穴プレート（底面積９
．４Ｃ■２）に加え、９５％空気−５％炭酸ガスの雰囲
気下に３７℃で１日培養した。その後、１０■Ｍ濃度の
各試験化合物水溶液（塩酸にてｐＨ７に調整）をＨＦ−
ＡＶ培地で６００ＭＭ濃度に希釈し、この溶液０．４１
ずつを培養液に加え、９５％空気−５％炭酸ガスの雰囲
気下、１３日間培養した。培養終了後、培養液に対し！
／２００容ノ１０ｖ／鵠Ｂｒ１ｊ−３５水溶液を加え、
遠心分１［（６００ｒｐｍ、１ｏ分間）により細胞を除
去し培養上溝液を得た。

次に、培養土清液０．５１にＭＥＳ−Ａ緩衝液０．５ｍ
ｌ　’ｒ加え、ＭＥｓ−Ａｌｌ？＃液で平衡化した亜鉛
キレ−ティングセファロース６Ｂ■　（ファルマシア製
）　０．５ｍｌを充填したカラムに供した。カラムにＭ
ＥＳ−Ｂｌ衝含液Ｄｌｍｌずつを４回流し、コラゲナー
ゼ阻害物質をカラムより溶出し除去した。次にＭＥＳ−
Ｃ緩衝液の１１ずつを２回流し、溶出液を集めプロコラ
ゲナーゼ溶液２１を得た。

プロコラゲナーゼ溶液にｌＮＮａＯＨを加え溶液のｐＨ
を約７に調整した後、ＭＥＳ−Ａｌｌｌｌ含液え２．５
ｍｌ　とし、次いで測定用Ｍ！衝含液てコラゲナーゼ活
性が約０．１〜０．７　ｇ位／ｍｌの溶液を調製し、こ
れを試験液とした。

次に、試験液５０μＱにトリプシン溶液（シグマ社製、
Ｔｙｐｅ　１２を測定用ａｉｚ液にて濃度１ｍｇ／ｍｌ
に調整）２０μ口を添加し、３５℃にて５分間インキュ
ベートした後、ダイズトリブシンインヒビター溶液（メ
ルク社製Ｎｏ、２４０２０を測定用緩衝液にて濃度３ｍ
ｇ／ｍｉに調整）３０μＱを添加してトリプシンを失活
させ、コラゲナーゼ溶液を得た。

フルオレラセンイソチオシアネートで標識された１型コ
ラーゲン（ＦＩＴ（ニーコラーゲン、コスモバイオ社製
）の０．０１Ｎ酢酸溶液（濃度ｌａｇ／ｍｌ）を基買溶
液として用い、未井等の方法（炎症、４巻、２号、１２
３頁、１９８４年参照）に準じて上記コラゲナーゼ溶液
の活性（単位／■ｌ）を測定した。そして、上記のトリ
プシン処理によりプロコラゲナーゼから生じるコラゲナ
ーゼが、３５℃にて１分間当り１ｇのＩ型コラーゲン（
ＦＩＴＣ−コラーゲン）を分解する量をプロコラゲナー
ゼの１単位とし、プロコラゲナーゼ産生量（単位／■ｉ
＠１液）を求めた（この値をＡとする）。

一方、対照試験として試験化合物水溶液のかわりに蒸留
水を加え、上記と同様の操作により試験化合物を添加し
ない場合のプロコラゲナーゼ産生量（単位／１）を求め
た（この値をＢとする）。

次いでこれらの値から下式によりプロコラゲナーゼ産生
促進率（％）を算出した。

４）試験結果 第１表に示す。

第 表 １′無添加（対照）に比べｐ＜ｏ　、　０１にて有意差
音（Ｄｕｎｃａｎ法）上記の通り一般式（Ｉ）の化合物
はプロコラゲナーゼ産生を促進させる。

（試験例２）肝線維症に対する治療効果肝Ｍ維症モデル
動物を作成し試験した。

１）試験化合物 Ｎ−メチルエタノールアミン ２）試験動物 ウィスター系雄性ラット（５週齢、体重１２２ｇ〜１３
４　ｇ、　　１群５匹）。

３）試験方法 肝機能改善効果の薬剤スクリーニング法（小澤光監修、
新薬開発のための薬効スクリーニング法、７５頁、丸善
、１９８４年発行）に準じ、四塩化炭素（以下ＣＣｌ４
と略記する）とオリーブ油との等量混合物を１回につき
２ｍｌ／ｋｇ、週２回（月曜、木曜）の割合でラット背
部皮下に１０週間投与して肝線維症ラットを作成した。

Ｎ−メチルエタノールアミンを蒸留水に溶解しＩＮ　Ｈ
ＣＩでｐＨ７に調整した溶液（Ｎ−メチルエタノールア
ミンとして濃度６６．６■ｇ／ｍｌ　）を１回当り、３
＋ａｌ／ｋｇの割合でＣＣｌ４投与開始から４週目より
１日１回ずつ７週間（但し日曜日は除く）ラットに経口
投与した。

その後腹部大動脈より採血し、ヘパリン処理した試験管
に採取した。これを遠心分離して血漿を得、後記の生化
学検査を行うまで一８０℃に凍結保存した。

また、全採血によりラットを死亡させて肝臓を摘出し、
その重量を測定し、水冷下にて２分割した。そして半分
を肝臓中ヒドロキシプロリンの定量用として一８０℃に
凍結し、残り半分を組織学的検査用として１０％ホルマ
リン液で固定した。

一方、未処置群として、試験化合物水溶液の代りに蒸留
水を３ｍｌ／ｋｇの割合で肝線維症ラットに同上スケジ
ュールにて投与する群を設け、同様に採血および肝臓摘
出を行なった。

また、正常ラット群として、ＣＣｌ４も試験化合物水溶
液も投与しない群をもうけ、同様に採血および肝臓摘出
を行った。

そして、上記の各肝臓および血漿を用いて、肝臓中およ
び血中のヒドロキシプロリンを定量した。なお、ヒドロ
キシプロリンはコラーゲン量の指標である（Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ　ｏｆ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ａｎａｌｙｓｉ
ｓ、１５巻、２５頁、１９６７年参照）。また、肝障害
の指標となる下記の、血漿の生化学的検査［下記（ｂ）
（ｈ）参照］および肝臓の組織学的検査（ｉ）も行・た
。

それぞれの検査項目および検査方法は以下のｉりである
。

（ａ）肝臓中および血中のヒドロキシプロリン（１下、
）ｌｙｐと略記する）量 （ａ−１）肝臓中のＨｙｐの定量法 的１００−ｇの肝臓をとり、その重量を精密に重量し、
これに生理食塩水２５０μＱを加えたのち龜ヒスコトロ
ンホモジナイザー（日本医理科器拳製作所製）にて激し
く攪拌（２８０００ｒｐ厘、３０手間）して粉砕した。

得られた懸濁液を遠心分線（１５０００ｒｌｌ■、１０
分間）し、上溝試料と沈殿す料に分けた。それぞれの試
料に６Ｎ塩酸を加２２閣ｌとし、１１０℃で２４時間加
水分解した。加Ａ分解液を遠心濃縮によって塩酸を除去
し、濃嗣物を０．０ＩＮ塩酸に溶解した。この溶液を高
速袢体クロマトグラフィーを用いたポストカラムアミノ
酸分析法（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｎ
ａｔｉｏｎａｌ＾ｃａｄｅｍｙ　　ｏｆ　　５ｃｉｅｎ
ｃｅｓ　　ｏｆ　　ｔｈｅ　　ｔｌ、ｓ、＾９．７２　
壱、２号、６１９頁、１９７５年参照）にて定量するこ
とにより、上清試料と沈殿試料のＨｙｐ量をそれぞれ求
めた。そして、上清試料と沈殿試料のＨＹＤ量とを合計
し、この値と肝臓重量から単位肝臓重量当りのＨ１量（
μ■０１７ｇ肝臓）を求めた。

（ａ−２）血中）１ｙｐの定量法 血漿１００μａに５ｗ／Ｖ％スルホサリチル酸水溶液１
００μＱを水冷下で添加し、遠心分＠　（１００００ｒ
ｐｍ、３分間）して上滑を得、上清中の）ｌｙｐを（ａ
−１）　と同様にして高速液体クロマトグラフィーを用
いたポストカラムアミノ酸分析法にて定量した。

（ｂ）グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ（以
下、６Ｐ丁と略記）量 Ｋａｒｍｅｎ法（全弁　泉、臨床検査法提要、改訂第２
９版、５１４頁、金原出版株式会社、　１９８３年参照
）にて測定した。

（Ｃ）グルタミン酸オキザロ酢酸トランスアミナーゼ（
以下、ＧＯＴと略記）量 Ｍａｒ＋ａｅｎ法（全弁　泉、臨床検査法提要、改訂第
２９版、５１４頁、金原出版株式会社、　１９８３年参
照）にて測定した。

（ｄ）γ−グルタミルトランスペプチダーゼ（以下γ−
ＧＴＰと略記）量 Ｌ−γ−グルタミルーｐ−ニトロアニリドを基買とする
方法（全弁　泉、臨床検査法提要、改訂第２９版、５３
２頁、金原出版株式会社、１９８３年参照）にて測定し
た。

（ｅ）総ビリルビン量 Ｍａｌｌｏｙ−Ｅｖｅｌｙｎ法（全弁　泉、臨床検査法
提要、改訂第２９版、７２４頁、金原出版株式会社、ｌ
５８３年参照）にて測定した。

（ｆ）アルカリホスファターゼ量 Ｂｅｓｓｅｙ−Ｌｏｗｒｙ法（全弁　泉、臨床検査法提
要、改訂第２９版、４９６頁、金原出版株式会社、１９
８３年参！りにて測定した。

（ｇ）チモール混濁試験値（以下、ＴＴＴと略記）消化
器病学会肝機能研究班の標準操作法（全弁　泉、臨床検
査法提要、改訂第２９版、７１１頁、金原出版株式会社
、１９８３年参照）にて測定した。

（ｈ）硫酸亜鉛混濁試験値（以下、ＺＴＴと略記）消化
器病学会肝機能研究班のｍ準操作法（全弁　泉、臨床検
査法提要、改訂第２９版、７１Ｏ頁、金原出版株式会社
、　１９８３年参照）にて測定した。

（ｉ）肝臓の組織学的検査 常法にて肝臓を薄切し、ヘマトキシンエオシン染色の後
に顕微鏡下に観察した。

４）試験結果 肝臓中および血中のｏｙｐ量、ならびに肝障害の指標と
なる、血漿の生化学的検査値を第２表二のように未処置
群に比べ、試験化合物投与群の肝臓中Ｈ１量は有意に低
く、血中）Ｉｙｐ量は有意に高かった。このことは本発
明の治療剤がプロコラゲナーゼ産生を促進し、その結果
、線維化した肝臓組織のコラーゲンの分解を促進して血
中に１（ｙｐが遊離したことを示している。

また、試験化合物投与群では未処置群に比べ、血漿の生
化学的検査値（ＧＰＴ、　ＧＯＴ、γ−ＧＴＰ、総ビリ
ルビン、アルカリホスファターゼ、ＴＴＴおよびＺＴＴ
の多量）が有意に低いことより、試験化合物が肝線維症
に伴う肝障害を改善したと言える。

一方、肝臓の組織学的検査において、試験化合物投与群
では、未処置群に比べて肝障害に基く、びまん性肝細胞
空胞形成、細胆管増生および総胆管上皮細胞造成をそれ
ぞれ軽減していることが観察された。この事も試験化合
物が肝線維症に伴う肝障害の改善に有効であることを示
している。

以上の試験結果は、上記の試験化合物を有効成分とする
本発明治療剤が肝線維症に伴う肝障害の改善に有効であ
る事を示している。

（試験例３）　急、性毒性試験 １）試験化合物 試験例１に同じ。

２）試験方法および試験結果 塩酸にてｐＨ７に調整した各試験化合物水溶液を０．２
１１／ｋｇ体重（検体として２ｇ／ｋｇ体重）の割合で
ＩＣＲ系雄性マウス（５適齢、体重２４〜２８ｇ。

群５匹）に経口投与した。その後７日間マウスを観察し
たがいずれの検体投与群においても全く死亡例は認めら
れなかった。

（試験例４）　皮膚刺激性試験 ｌ）試験化合物 試験例１に同じ。

２）試験方法 日本在来種雄性家兎（体重的３ｋｇ　）を用い、ドレイ
ツ法（＾ＰＰＲ＾ｌ５ＡＬ　ＯＦ　ＴＨＥ　５ＡＦＥＴ
Ｙ　ＯＦＣ）ＩＥＭＩＣＡＬＳ　　ＩＮ　　ＦＯＯＤＳ
、ＤＲＡＧＳ　　ＡＮＤ　　ＣＯ５ＭＥ丁ＩＣ５，ｐ、
４６゜１９５９、　Ｅｄｉｔｅｄ　ａｎｄ　Ｐｕｂｌｉ
ｓｈｅｄ　ｂｙ　Ｔ）ＩＥ　ＥＤＩＴＯＲＩ＾ＬＣＯＭ
ＭＩＴＴＥＥ、＾５ＳＯＣＩＡＴＩＯＮ　ＯＦ　ＦＯＯ
Ｄ　＆　ＤＲＵＧ　０ＦＦＩＣＩ−ＡＬＳ　ＯＦ　Ｕ、
Ｓ、＾、）に準じて試験した。すなわち、毛を刈り取っ
た家兎背部に擦傷部位（損傷皮膚）を作成し、損傷皮膚
と正常皮膚のそれぞれに、塩酸にてｐＨ７に調整した試
験化合物の１ｗ／ｖ零水溶汲水溶液０ｌをバッチテスト
用絆創膏（１，２Ｘ　１．６ｃｍ、リボンエイド［Ｆ］
　リバーテープ製薬株式会社製）に浸潤させて貼付した
。２４時間後、絆創膏を剥離し、皮膚の紅斑および浮腫
状態を観察し、さらに絆創膏剥離の４８時間後も同様に
観察した。

そして以下の評価基準にてそれぞれ紅斑スコアおよび浮
腫スコアを付けた。

紅斑スコア、および浮腫スコア基準 このスコアと下式に基づき、−次刺激スコアを計算した
。

−声　スコア計 一次刺激スコア■ ここで各記号は以下の意味を有する。

次に、 一次刺激スコアと下記の基準に基づき、試験化合物の刺
激度を判定した。

３）試験結果 各試験化合物の一次刺激スコアおよび刺激度を第３表に
示す。

［実施例］ 以下実施例を挙げて本発明を説明する。

実施例１　錠剤 １ｆｉｉ中に有効成分としてＮ−メチルエタノールアミ
ン塩酸塩１００Ｂを含有する錠剤を以下の通り調製した
。

（処方） Ｌ±　　　　　　　　　　　　　１創１１Ｎ−メチルエ
タノールアミン塩酸塩　５０乳　　　１１１０ トウモロコシデンプン　　　　　　　３０結晶セルロー
ス　　　　　　　　　　　　８ヒドロキシプロピルセル
ロース　　　　１ステアリン酸マグネシウム　　　　　
　１（操作） Ｎ−メチルエタノールアミン塩酸塩、乳糖、トウモロコ
シデンプンおよび結晶セルロースの混合物に、ヒドロキ
シプロピルセルロースを３０ｇの水に溶解して加え、充
分練合した。この練合物を２０メツシユの篩に通して顆
粒状に造粒し乾燥した後、得られた顆粒にステアリン酸
マグネシウムを混合し、１錠２００Ｉ１ｇに打錠した。

実施例２　カプセル剤 １カプセル中に有効成分としてＮ、Ｎ−ジメチルエタノ
ールアミン塩酸塩１００ｍｇを含有するカプセル剤を以
下の通り調製した。

（処方） 隨±　　　　　　　　　　　　　　　　　１皇１ユ旺Ｎ
、Ｎ−ジメチルエタノールアミン塩酸塩　１００乳　　
　糖　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１
００トウモロコシデンプン　　　　　　　　　　５０結
晶セルロース　　　　　　　　　　　　４フステアリン
酸マグネシウム　　　　　　　　３（操作） 上記の各成分を充分混合し、混合物の３００ｔａｇずつ
を２号カプセルに充填してカプセル剤を得た。

実施例３　顆粒剤 １ｇ中に有効成分として２−アミノ−１−プロパノール
塩酸塩１００ｍｇを含有する顆粒剤を以下の通り調製し
た。

（処方） 床土　　　　　　　　　　　　　　　（１１ｊ）２−ア
ミノ−１−プロパノール塩酸塩　１００乳　　　糖　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４７０ト
ウモロコシデンプン　　　　　　　　４００ヒドロキシ
プロピルセルロース　　　　　３０（操作） ２−アミノ−１−プロパノール塩酸塩、乳糖およびトウ
モロコシデンプンの混合物に、水１０００ｇに溶解した
ヒドロキシプロピルセルロースを加え充分練合した。こ
の練合物を２０メツシユの篩に通して造粒し乾燥し、整
粒を行って顆粒剤を得た。

実施例４　シロップ剤 １■１中に有効成分としてＮ−メチルエタノールアミン
塩酸塩１００鳳ｇを含有するシロップ剤を以下の通り調
製した。

（ＩＡ方） Ｌ±　　　　　　　　　　　　　　　１皇１ユ旺（ａ　
　Ｎ−メチルエタノールアミン塩酸塩　１００（ｂ　バ
ラオキシ安息香酸メチル　　　　　０，３（Ｃバラオキ
シ安息香酸プロピル　　　　０．１５（ｄ　白糖　　　
　　　　　　　　　　　　３００（ｅ　　７０Ｗ／Ｖ零
Ｄ−ソルビトール水溶液　　２５０（ｆ　クエン酸ナト
リウム　　　　　　　　１０（ｇ　クエン酸　　　　　
　　　　　　　　１．５（ｈ）　！！製氷を加えて全量
１０００ｉ１とする（操作） 精製水４００■ｌに９０℃で上記（ｂ）〜（ｄ）の成分
を加え溶解し、次いで上記成分（ｅ）を同温で加え充分
混合してから３０℃まで冷却した。この混合物へＮ−メ
チルエタノールアミン塩酸塩１００ｇを精製水１００＋
＋＋１に溶解して加え、３０℃で３０分間攪拌した。次
に上記成分（ｆ）および（ｇ）を加え２０分攪拌し、精
製水を加えて全量１０１００Ｏとし、無菌濾過を行いシ
ロップ剤を得た。

実施例５　注射剤 ２−アミノ−１−ブタノール塩酸塩１０ｇを注射用生理
食塩水に溶解し２００１１の溶液とし、無菌濾過による
除菌を行った。除菌した溶液を３鳳ｌ容量の褐色アンプ
ルに２Ｉｌずつ分注した。アンプル内を無菌的に窒素置
換し、アンプルを溶封して１アンプル中に有効成分とし
て２−アミノ−１−ブタノール塩酸塩１００１ｇを含有
する注射剤を得た。

実施例６　軟膏 １００ｇ中に有効成分としてＮ−メチルエタノールアミ
ン塩酸塩５００ｍｇを含有する軟膏を以下の通り調製し
た。

（ＩＡ方） Ｆ！ｉ＝ｉ　　　　　　　　　　　　　　　１ｉｌ」）
（ａ）Ｎ−メチルエタノールアミン塩酸塩　　０．１（
ｂ）バラオキシ安息香酸メチル　　　　　０．１（ｃ）
プロピレングリコール　　　　　　　６．７（ｄ）精製
水　　　　　　　　　　　　　　４４．０（ｅ）スクワ
ラン　　　　　　　　　　　　４・７（ｆ）白色ワセリ
ン ２４．０ （ｇ’）ステアリルアルコール ８．７ （ｈ）ミリスチン酸イソプロピル　　　　　６．０サー
ファクタント工業株式会社製）１．３（ｊ）ポリオキシ
エチレンアルキルエーテルリン酸（商品名ＮＩにＫＯＬ
　ＤＤＰ−２、日本サーファクタント工業株式会社製）
２．３（ｋ）モノステアリン酸グリセリン　　　　２．
０（１）バラオキシ安息香酸ブチル　　　　　０．１（
操作） 上記（ａ）〜（ｄ）の成分を湯浴で８０℃に加温して混
合し、この混合物を、８０℃に加温した上記（ｅ）〜（
１）の成分混合物中に攪拌しながら徐々に加えた。次に
、ホモジナイザー（ＴＯＫＵＳＨｔｌＫＩＫＡ　ＫＯＧ
ＹＯ製）で２．５分間激しく攪拌（２５００ｒｐｍ）　
　シ各成分を充分乳化分散させた後、攪拌しながら徐々
に冷却して軟膏を得た。

実施例フ　ローション １００ｇ中に有効成分として２−アミノ−１−ブタノー
ルアミン塩酸塩１００Ｂを含むローションを以下の通り
調製した。

底±　　　　　　　　　　　　　　　　　１豆１（ｇ）
ａ）２−アミノ−１−ブタノール塩酸塩　０．１ｂ）ラ
ウリル硫酸ナトリウム　　　　　　０゜５Ｃ）精製水　
　　　　　　　　　　　　　９２．８ｄ）サラシミツロ
ウ　　　　　　　　　　０．１ｅ）セタノール（商品名
ビナソールＮＡ＾４８、日本油脂株式会社製）１．５ （ｆ）濃グリセリン　　　　　　　　　　　５．０（操
作） 上記（ａ）〜（ｃ）の成分を湯浴で８０℃に加温して混
合した。一方（ｄ）〜（ｆ）の成分も同様にして混合し
、この混合物へ（ａ）〜（Ｃ）の混合物を攪拌しながら
徐々に加え、ホモジナイザー（ＴＯＫＵＳＨＩＩＫＩＫ
ＡＫＯＧＹＯ製）で２．５分間激しく攪拌（２５０Ｏｒ
ｐｍ）　シた。攪拌しながら徐々に室温まで冷却してロ
ーションを得た。

実施例８　軟膏 Ｎ−メチルエタノールアミン塩酸塩のかわりに２−アミ
ノ−１−プロパノール塩酸塩を用いる他は、実施例６と
同様にして２−アミノ−１−プロパノール塩酸塩を含有
する軟膏を得た。

実施例９　ローシ纏ン ２−アミノ−１−ブタノール塩酸塩のかわりにＮ、Ｎ−
ジメチルエタノールアミン塩酸塩を用いる他は実施例７
と同様にしてＮ、Ｎ−ジメチルエタノールアミン塩酸塩
を含有するローションを得た。

手続補正書（自船 平成２年り月！６日 事件の表示 平成２年特許願第９７０７１号 ２、発明の名称 コラーゲンの異常蓄積を伴う疾病の治療剤３、補正をす
る者 事件との関係　　　特許出願人 住所　東京都墨田区墨田五丁目１７番４号〒５３４　　
大阪市部島区友渕町１丁目鐘紡株式会社特許部 電話（０６）　９２１−１２５１ ５番９０号 ６、補正の対象 明細書の「発明の詳細な説明」の欄 ７、補正の内容 （１）明細書′ｉ４４頁１０行目〜１１行目の「コラゲ
ナーゼ」を、「コラゲナーゼ活性１と訂正する。

（２）明細［１４頁１６行目〜１７行目の「コラゲナー
ゼ活性が」を、ｒプロコラゲナーゼとして１と訂正する
。

（３）明細書第１５頁１６行目のｒ単位／ｍｌ培養液Ｊ
を、ｒ単位／培養液１１１Ｊと訂正する。

（４）明細書第１６頁１行目のｒ単位／■ｌ」を、ｒ単
位／培養液１１Ｊと訂正する。

手続補正書（自発） 平成２年１２月２６日 平成２年特許願第９７０７１号 ２、発明の名称 コラーゲンの異常蓄積を伴う疾病の治療剤３、補正をす
る者 事件との関係　　　特許出願人 住所　東京都墨田区墨田五丁目１７番４号連絡先 〒５３４　　大阪市部島区友渕町１丁目鐘紡株式会社特
許部 電話（０δ）　９２１−１２５１ ４、補正命令の日付 （自発　） ５、補正により増加する請求項の数 ５番９０号 なし、〆−Ｎ ６、補正の対象 明細書の「発明の詳細な説明」の欄 ７、補正の内容 （１）明細書第４頁１２行目の「コラゲナーゼ」を、「
コラーゲン」と訂正する。

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼・・・（ I ） （式中、Ｒ＿１およびＲ＿２はそれぞれ水素原子または
   メチル基を示し、Ｒ＿３は水素原子、メチル基またはエ
   チル基を示す。但し、Ｒ＿１、Ｒ＿２およびＲ＿３は同
   時に水素原子ではない。） で表わされるエタノールアミン誘導体またはその薬学的
   に許容される塩を有効成分とするコラーゲンの異常蓄積
   を伴う疾病の治療剤。
2. （２）Ｎ−メチルエタノールアミンまたはその薬学的に
   許容される塩を有効成分とする特許請求の範囲第（１）
   項記載の治療剤。
3. （３）Ｎ，Ｎ−ジメチルエタノールアミンまたはその薬
   学的に許容される塩を有効成分とする特許請求の範囲第
   （１）項記載の治療剤。
4. （４）２−アミノ−１−ブタノールまたはその薬学的に
   許容される塩を有効成分とする特許請求の範囲第（１）
   項記載の治療剤。
5. （５）２−アミノ−１−プロパノールまたはその薬学的
   に許容される塩を有効成分とする特許請求の範囲第（１
   ）項記載の治療剤。