JPH03255094A - ヘキサデカペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 「産業上の利用分野」 本発明は、α−カゼインのペプシン分解物から、１ＩＬ
ＩＩＩされた新規ペプチドおよびその薬学的に許容され
る塩に関する。さらに詳しくは、下式（Ｉ）１１−　Ｌ
ｅｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔ　Ｉｅ−５ｅｒ−Ｇ　ｌ　ｎ
−Ａ　ｒｇ−Ｔｙｒ−Ｇ　１ｎ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−八１
ａ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−Ｔｙｒ−Ｏｌ＋　　　・
　・　・　　（１）で示されるヘキサデカペプチドおよ
びその薬学的に許容される塩に関する。式（Ｉ）のペプ
チドおよびその薬学的に許容される塩は血小板凝集阻害
作用を有し、血栓症の治療および予防に有用である。

「従来の技術ノ 生体の血管または心臓の腔内て血液成分が局所的に凝固
したものを血栓といい、血栓は血管内腔の狭窄または閉
塞を引き起こす。そして血栓形成とそれに伴う病的現象
を血栓症と言う。

血栓形成には血小板の凝集が関与しているので血小板凝
集阻害作用を有する化合物は、血栓症の治療および予防
に有用である。

血小板凝集阻害作用を有する化合物は種々知られている
か、血小板凝集阻害作用を有するベブヂトの報告例は数
少ない。

血小板凝集阻害作用が認められているベブヂトとしては
、例えばに−カセインのフラグメントペプチドが報告さ
れている（　Ｅｕｒ、　Ｊ、　ＢＬｏｃｈｅｍ、、１５
８巻、３７９頁、１９８６年参照）が、これは本発明ペ
プチドと全く構造を異にしている。そして、α−カゼイ
ンから血小板凝集阻害作用を有するペプチドが単離され
たとの報告はない。

「発明が解決しようとする課題」 本発明者は、α−カゼインから血小板凝集阻害作用を有
するペプチドを見い出すべく種々検討した。本発明の目
的は血小板凝集阻害作用を有する新規ペプチドおよびそ
の薬学的に許容される塩を提供することにある。

「課題を解決するための手段」 α−カゼインをペプシンで加水分解し、得られる加水分
解物を分画して種々検討の結果、本発明者等は血小板凝
集阻害活性を有する下式（１）％式％ （１） で示される新規ペプチドまたはその薬学的に許容される
塩の単離に成功した。またこの合成にも成功して本発明
を完成した。

なお、本明細書において、アミノ酸、アミノ酸残基、ア
ミノ酸誘導体、ペプチドおよび保護基は１１１Ｐ八Ｃ−
ＩｔｉＢ生化学命名委員会で推奨された記号（Ｂｉｏｃ
ｈｅｍｉｓｌ、ｒｙ、１１巻、１７２６頁、１９７２年
、ＩＩＩＰＡＣＰｕｒｅ　Ａｐｐｌ、４０巻、３１７頁
、１９７４年参照）または当該分野において慣用される
記号を用い、し−アミノ酸およびその残基のＬ記号は省
略する。かかる記号は例えは以下の通っである。

Ｌｅｕロイシン、Ｌｙｓ・リジン、Ｉｌｅ：イソロイシ
ン、Ｓｅｒ：セリン、Ｇｌｎ・グルタミン、　Ｇｌｕグ
ルタ主ン酸、Ａｒｇアルギニン、Ｔｙｒチロシン、Ｐｈ
ｅ：フェニルアラニン、Ａｌａ：アラニン、Ｐｒｏニブ
ロリン、Ｂｏｃ：七−ブデルオキシカルボニル、Ｂｒ−
Ｚ：　ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル、ＣＩ−Ｚ
＋　ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル、　Ｂｚｌ・
ペンシル、Ｍｔｓ・メシチレン−２−スルホニル。

最初に、α−カゼインからの製造法について説明する。

α−カゼインの加水分解は、α−カゼインを塩酸中、ペ
プシンで行う。塩酸には通常０．０５〜１．５規定、好
ましくは約ｏ、ｉ規定の塩酸を使用しその使用量は、通
常α−カゼインに対して７〜２０倍（Ｖ／Ｗ）である。

ペプシンの使用量は、カゼイン１重量部に刻して通常０
．０１〜０．０５重量部であり、好ましくは０．０２〜
０．０３重量部である。

加水分解反応は、通常３５〜３８℃で３０分〜３時間、
好ましくは３７℃で約１時間行う。

次に、上記加水分解反応波にアルカリ、好ましくは、ア
ンモニア水を添加し反応液のｐｌ＋を約４に調整し、不
溶物を除去して加水分解物の水溶液（以下、これを加水
分解液と呼ぶ）を得る。

次に、陽イオン交換体を充填したカラムクロマトグラフ
ィーにより加水分解液から塩基性ペプチド混合物を分画
する。

この操作は、加水分解液を弱酸性〜弱塩基性に調整した
後、陽イオン交換体（緩衝７夜で平衡化済み）を充填し
たカラムに付して加水分解液中の塩基性ベブヂトを吸着
させ、次いで溶出溶媒でこれを溶出させ分画することに
より行なう。

陽イオン交換体には、例えばＣＭ−５ｅｐｈａｄｅｘ　
＠Ｃ−２５、ＣＭ−５ｅｐｈａｄｅｘ　＠Ｃ−５０（い
ずれもファルマシア社製〉の如きカルボキシル基を有す
るイオン交換体（弱酸＋１陽イオン交換体と呼ぶ）を使
用する。

陽イオン交換体の平衡化は、弱酸性〜弱塩基性の緩衝液
を使用する。

溶出溶媒には、例えば、酢酸−アンモニア緩衝液、炭酸
アンモニウム水溶液、アンモニア水溶液等の微塩基性〜
塩基性の溶出溶媒を用い、このｐｉ−１あるいは／およ
び濃度を上昇させながら溶出を行う。

塩基性へブチ）・混合物は溶出溶媒のｐ）Ｉあるいは塙
濃度が高い時に溶出する。例えはイオン交換体としてＣ
Ｍ−５ｅｐｈａｄｅｘ　＠Ｃ−２５（ファルマシア社製
）を用い、溶出溶媒として炭酸アンモニウム水溶液を用
いた場合、炭酸アンモニウム濃度が約０．０２Ｍの時に
溶出し始め、約０．３Ｍの時に溶出し終る。

なお、効率良い分画のために、加水分解液および溶出液
に０．０１〜５重量％の割合で例えば、ポリオキシエヂ
レンアルキルエーテル、ポリオキシエヂレンアルキルフ
ェニルエーテル、グリセリン脂肪酸エステル、ソルビタ
ン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ポリオキシ
エチレンソルビタン脂肪酸エステル等の非イオン界面活
性剤を添加するのが好ましい。

次に、上記の塩基性ペプチド混合物から高速液体クロマ
トグラフィー（ｏＰＬｃ）によって、本発明ペプチドま
たはその塩を単離する。

＋＋　Ｐ　ｔ、　Ｃのカラムには、逆相系カラム、好ま
しくはオクタデシルシリル化シリカゲル（ＯＤＳ）を充
填したカラムを使用する。溶出溶媒には例えばアセトニ
トリル等の有機溶媒と水およびトリフルオロ酢酸どの混
合溶媒を使用し、好ましくは有機溶媒の濃度勾配をかり
て溶出する。ペプチドの検出は、溶出溶媒の２８０ｎｍ
　、　２７５ｎｍ　、　２３５ｎｍあるいは２２０ｎｍ
（１近の吸光度を測定することにより行う。

例えば、カラムにＹＭに　５Ｈ３４３−５０ＤＳ　（２
０ｍｍ　ｘ１５０ｍｍ　、株式会社山村化学研究所製）
を用い、水−アセ）−ニトリル−トリフルオロ酢酸（８
５：１５：Ｇ、１＞から水−アセトニトリル−トリフル
オロ酢酸（３０ニア０＋０．１）の直線的濃度勾配法で
溶出（流速１５．０ｍｌ／分）すると、本発明へブチド
のトリフルオロ酢酸塩は保持時間綿２１．１分で溶出す
るので、この画分を分取し、減圧濃縮、乾燥あるいは凍
結乾燥することにより本発明ペプチドのトリフルオロ酢
酸塩を得ることが出来る。また、目的とする両分は、溶
出液のカルモジュリン依存ホスホジェステラーゼ阻害活
性を指標にして分取することも出来る。カルモジュリン
依存ホスホジェステラーセ明害活性の測定は、ウシ脳カ
ルモジュリンおよびウシ脳ホスホジエステラーセを用い
公知の方法（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｂｔｏｃｈｅｍｉ
ｓｔｒｙ、　４５巻、２２２頁、　１９７２年参照）に
より測定する。

次に、合成による本発明ペプチドまたはその塩の製造方
法について説明する。

本発明のペプチドまたはその塩は、例えば固相法（ペプ
チド合成の基礎と実験、泉屋信夫など、丸着株式会社、
１９８５年出版１ｌ９４頁参照）により逐次、保護アミ
ノ酸を縮合して合成することが出来る。固相担体には４
−（ヒドロキシメチル）フェニルアセトアミドメチルポ
リ（スチレンーコージビニルヘンゼン）　（Ｊｏｕｒｎ
ａｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＡｍｅｒｉｃａｎＣｈｅｍｉｃａ
ｌ　５ｏｃｉｅｔｙ、９８巻、７３５７頁、１９７６年
参照、以下、ＨＯＣＨ２−Ｐ　ａ　ｍ−樹脂と略記）が
好適に用いられる。

アミノ酸のα−アミノ基の保護には、トリフルオロ酢酸
あるいは塩酸で切断され易い保護基、例えばＢｏｃ基か
用いられる。アミノ酸の側鎖官能基にはこれら酸で切断
され難い保護基を用いる。すなわちＴｙｒの水酸基はＢ
ｒ−Ｚ基で、Ａｒｇのグアニジノ基はＭｔｓ基で、Ｌｙ
ｓの６−アミノ基はＣｌ−２基でモしてＳｅｒの水酸基
はＢｚｌ基でそれぞれ保護するのが好適である。

担体上でのペプチド鎖の延長は通常の固相法に従い行う
ことが出来る。すなわち、Ｎ端アミノ基の脱保護と保護
アくノ酸との縮合反応をくり返し担体上にＣ端から順次
ペプチド鎖を延長させ保護ペプチド−Ｉ’ａｍ−樹脂を
得る。

縮合反応は、ジシクロへキシルカルボシイよド法を用い
ることも出来るが、活性エステル法、特に保護アくノ酸
の１−ヒドロキシベンゾトリアゾールエステルを用いる
活性エステル法が副反応が少く好ましい。

担体からのペプチドの切断および保護基の除去は、アニ
ソール存在下にフッ化水素で同時に行うことも出来るが
、担体にｔｌ　ＯＧ　＋＋　２−　Ｐ　ａ　ｌ１１−樹
脂を用いた場合は、アニソールおよびチオアニソールの
存在下にトリフルオロ酢酸とトリメチルシリルプロミド
とで行うことも出来る。

担体からの切断および脱保護により得られた粗ペプチド
またはその塩は、カラムクロマトグラフィーあるいは前
記と同様高速液体クロマトグラフィー等により精製する
ことか出来る。

「発明の効果」 本発明のペプチドおよびその薬学的に許容される塩はア
デノシン−５−ジホスフェート（＾Ｄ＋’）誘発血小板
凝集に対する阻害活性およびコラーゲン誘発血小板凝集
に対する阻害活性を有する（後記試験例１参照）。従っ
て、血栓症の治療および予防に有用である。また、生化
学的試薬としても有用である。

以下、本発明ペプチドの血小板凝集作用について試験例
を挙げて説明する。

［試験例１コ Ｎａｔｕｒｅ、１９４巻、９２７〜９２９頁（１Ｌ６２
年）に記載の方法に従って、以下の通り、アデノシン５
−ジホスフェート（八ＤＰ）　誘発血小板凝集に対する
阻害活性およびコラーゲン誘発血小板凝集に対する阻害
活性を測定した。

１、検体・実施例１のへキサデカペプチド・トリフルオ
ロ酢酸塩 ２、試験方法 （２−１）％血小板血漿（ＰＲＰ）と乏血小板血漿（ｐ
ｐｐ）の調整 モルモット（４７０〜６ｏ０ｇ）　より採取された血液
に１／ｌＯ容の３．８％クエン酸すトリウム水溶液を加
えて１１００ｒ、ｐ、ｍ（１３０Ｘ　ｇ）で１０分間遠
心分離し、血小板濃度の高い上澄を得た。残漬を更に３
００Ｏｒ、ｐ、ｍ（１７００ｘ　ｇ）で１５分間遠心分
離して上澄部分を採取して乏血小板血漿（以下ＰＰＰと
略す）を得た。前記の血小板濃度の高い上澄中の血小板
数をコールタ−カウンター（コールタ−エレクトロニク
ス社）により計算し、Ｉ’ＰＰで５ｘ　１０５ｃｅｌｌ
ｓ／ｍｍ３に希釈して多血小板血漿（以下ＰＲＰ　と略
す）を調製した。

（２−２）へＤＰ誘発凝集阻害試験 回転子を入れた血小板凝集測定用セルにＰＲＰ１６０μ
ｑおよび検体溶液（生理食塩水溶液に溶解して調製）２
０μＱを加え、攪拌した。このセルをヘマトレーサー（
三光バイオサイエンス社製）中、３７℃で１分間インキ
ュベーションした。

その後、５０μＭアデノシンー５゛−ジホスフエ１−　
（ＡＩＩＰ）溶液［ＡＤＰ　　（シグマ社製）を２５ｍ
Ｍｈリスー塩酸緩衝波（ｐＨ７，４）　　に溶解して調
製］　２ｏμＱを加え、血小板の凝集を５分間モニタリ
ングした。

血小板の凝集が最大となった時点（光の透過度が最大と
なった時点）の凝集率（Ｂ）を下記の式により算出した
。

ａ　：　ＰＲＰの光の透過度 ｂ　：　ｐｐｐの光の透過度 Ｃ二上記の方法で血小板凝集を起こさせ血小板凝集が最
大となったときの光の透過度１ ２ 一方、検体溶液の代わりに生理食塩水を加え同様に血小
板を凝集させ、コントロールの凝集率（Ａ＞を求め、下
式により凝集阻害率（％）を算出した。

凝集阻害率（％）＝　　１−　　　　ｘｘＯ。

種々の濃度の検体溶液について上記と同様に試験し、検
体が５０％の凝集阻害率を示す濃度（ＩＣ６゜値）を、
用量反応曲線の直線回帰によって求めた。

（２−３）コラーゲン誘発凝集阻害試験凝集剤としてＡ
ＤＰ溶液を用いるかわりにコラーゲン溶液［コラーゲン
のアイソトニックグルコース懸濁液ｐ　）＋　２　、７
〜２．９（ホルム社製）をアイソトニックグルコース溶
液で１０倍に希釈して調製、濃度１００　、ｕｇ／ｍｌ
　］’１ＱＪ１Ｑヲ加え、血小板の凝集を１０分間モニ
タリングする以外は上記（２−２）　　と同様にして、
ＩＣ１゜値を求めた。

３試験結果 第１表に示す。

第　　１　　表 以下、実３ｉ例を挙げて本発明を説明する。

なお、本発明ペプチドおよびその塩の各種分析は、下記
の方法て実施した。

ペプチドのＣ端アミノ酸分析＋０．２Ｍ　　Ｎ−エチル
モルホリン−酢酸緩衝液（ｐＨ８，５）　０．５ｍｌに
溶解したペプチドまたはその基線８　ｎｍｏｌに対し、
ジイソプロピルフルオロリン酸で処理したカルボキシベ
ブヂダーゼＡ（シグマ社製タイプｒ　）　８　ｐｍｏｌ
を加え、２５℃て反応を行い経時的に遊離のアミノ酸を
アミノ酸分析機で定量することにより行なった。

アくノ酸配列分析：気相プロティンシーケンサ−（アブ
ライトバイオシステムズ社４７１Ａ　）で行なった。

酸加水　解物のアミノ酸分析・４％グリコール酸を含む
８ＮＨＣＩで加水分解（１００℃、２２時間）して得た
加水分解物をアミノ酸分析機（日立８３５型）で行った
。

液体クロマトグラフィー保持時間（Ｒｔ’およびＲｔ’
　）：東ソー株式会社製高速液体クロマ）・グラフを使
用し、下記条件で測定した。

Ｒｔ’の測定条件 カラム：　ＹＭＣ＾３１２０ＤＳ　（６ｍｍ　Ｘ　１５
０ｍｍ、株式会社山村化学研究所製） 溶出二本−アセトニトリルートリフルオロ酢酸（８５＋
１５＋０．１）から水−アセトニトリルートリプルオロ
酢酸（３０ニア０：０．１）の直線的濃度勾配 流速：　１．５ｍｌ／分 検出：　２７５　ｎｍにおりる吸光度 Ｒｔ２の測定条件 溶出に、水−アセトニトリルートリプルオロ酢酸（７９
：２１：０．１）を使用する（濃度勾配をかけない）以
外は、Ｒｔ’の測定の場合に同し。

実施例１ α−カゼイン（シグマ社製）　ｌＯｇを０．１Ｎ塩酸２
００ｍ１に３７℃で懸濁し、これにペプシン（パイオサ
イムラボラトリ−製）　２５０ｍｇを加え、同温で１時
間攪拌した。反応液のｐＨをアンモニア水の添加によっ
て４２に調整した後、遠心分１ｍ　（８０００ｒｐｍ）
　シて不溶物を除去した。

得られた」二清にＴｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００［ポリオキ
シエチレン（１０）オクチルフェニルエーテルの商品名
コを０１％の割合に加え、アンモニア水を添加してその
ｐ＋＋を８６に調整した。この溶液を、０．１％Ｔｒｉ
Ｌｏｎ　Ｘ１００を含む０．１Ｍ−酢酸アンモニアＭ街
液（ｐＨ８，６）で予め平衡化したＣＭ−５ｅｐｈａｄ
ｅｘ　＠Ｃ−２５（ファルマシア製）カラム（ｌｘ　１
９ｃｍ）に通し、０．１！＜Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００
を含む０．１Ｍ酢酸−アンモニア緩衝液（ｐｉ（８，６
）５０ｍｌでカラムを洗浄した。次いで吸着したペプチ
ドを０．１％Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００を含む炭酸アン
モニウム水溶液を用いて、直線的濃度勾配法（炭酸アン
モニウムのＯＭから０．５Ｍまでの直線的濃度勾配、４
００ｍ１　）で溶出させた。２８（ｌｎｍにおける５ ６ 吸光度を有する両分（炭酸アンモニウム濃度０．０２Ｍ
〜０．３Ｍで溶出）を集め、減圧濃縮した。濃縮液を１
６分割し、その１７１６ずつを下記条件の高速液体クロ
マ［・グラフィー（ウォーターズ社製高速液体クロマト
グラフ使用）に付し、保持時間的２１．１分の画分を分
取した。

カラム：　ＹＭＣ５８３４３−５０Ｄ５　（２０ｍｍ　
ｘ　１５０ｍｍ　、株式会社山村化学研究所製） 溶出：水−アセトニトリル−トリフルオロ酢酸（８５：
１５：０．１）から水−アセトニトリル−トリフルオロ
酢酸（３０ニア０：０．１）の直線的濃度勾配 流速：　１５．０ｍ１７分 検出：　２３５ｎｍにおける吸光度 得られた両分を合わせ減圧濃縮後、凍結乾燥して粉状物
として本発明ペプチドのトリフルオロ酢酸塙３５．０ｍ
ｇを得た。

ペプチドのＣ端アミノ酸分析結果・Ｔｙｒアミノ酸配列
配列分析結果Ｈ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−ｒｌｅ−５
ｅｒ−Ｇｌｎ−八ｒｇ−Ｔｙｒ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｐｈ
ｅ−八Ｉａ−ＬｅｕＰｒｏ−Ｇｉｎ−Ｔｙｒ−Ｏｌｌ 酸加水分解物のアくノ酸分析値（モル比）Ｓｅｒ　　０
．９５・ＧＩｕ　　３．１３・Ａｌａ　　ｆ、１４・Ｉ
Ｉｅ　　Ｏ，９６・Ｌｅｕ、２．００；Ｔｙｒｊ、９６
；Ｐｈｅ、１．００；Ｌｙｓ、２．９８Ａｒｇ、１．０
１；Ｐｒｏ、０．８６ 液体クロマトグラフィー保持時間： Ｒｔ’　、約１１．０分、Ｒｔ２．約７．５分実施例２ アプライド・バイオシステム社製モデル４３０Ａベブヂ
ド合威装置を使用し、固相法にて室温で合成した。

Ｂｏｃ−Ｔｙｒ　（Ｂｒ−４）−Ｐａｍ樹脂０．５ｍｍ
ｏｌを出発原料とし、Ｂｏｃ−Ｌｅｕ、　Ｂｏｃ−Ｌｙ
ｓ　（ＣＩ−Ｚ）、Ｂｏｃ−１ｉｅ、　Ｂｏｃ−５ｅｒ
（Ｂｚｌ）、Ｂｏｃ−Ｇｉｎ、Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｍｔｓ
）、Ｂｏｃ−Ｔｙｒ　（Ｂｒ−Ｚ）、Ｂｏｃ−Ｔ’ｈｅ
、Ｂｏｃ−八ｌａ、Ｂｏｃ−Ｐｒｏの各保護アミノ酸を
使用し、■Ｎ瑞１１ｏｃの脱保護■洗浄■中和■洗浄■
縮合反応■洗浄■未反応Ｎ端アミノ基のアセチル化■洗
浄、の各工程をくり返してＣ端部から逐次、樹脂上にペ
プチド鏡を延長させた。

■Ｎ端の脱保護は２０ｍ１のトリフルオロ酢酸−ジクロ
ロメタン混合液（４０：６０）で１０分間処理すること
により行なった。

■の洗浄はＮ〜メチルピロリドン−ジメチルスルホキシ
ド（９５：５）混合溶媒２０ｍ１で行なった。

■の中和はジイソプロピルアミン１ｍｍｏ＋のジクロロ
メタン−ｍｔ夜２０ｍ１で行なった。

■の洗浄はジクロロメタン次いでジメチルスルホキシド
各２０Ｉ１１１で行なった。

■の縮合反応は、保護アミノ酸より調製した４当量の保
護アミノ酸の１−ヒドロキシベンゾトリアゾールエステ
ル（活性エステル）溶液を加え、まず３０分間、次いで
０．２５容量のジメチルスルホキシドを加えて１６分間
、さらに当量のジイソプロピルエチルアミンを加えて７
分間行なった。

なお、活性エステル溶液は、Ｎ−メチルピロリドン４　
　ｍｌにそれぞれ２ｍｍｏｌの保護アミノ酸、ジシクロ
へキシルカルボジイミド、１−ヒドロキシベンゾトリア
ゾールを加え、室温で４０分間攪拌の後、生成するジシ
クロへキシルウレアを濾別することにより調製した。

■の洗浄はジクロロメタン２０ＩＩｌｌにより行なった
。

■のアセチル化は、無水酢酸１０％とジイソプロピルエ
チルアミン５％とを含むジクロロメタン２０ｍ１で２０
分間行なった。

■の洗浄はジクロロメタン２０ｍ１で行った。

最後のＢｏｃ−Ｌｅｕの縮合反応終了後、塩化メチレン
で洗浄、乾燥し保護ペプチド−Ｐａｍ−樹脂を得た。

これを、チオアニソール０．１．ｍ１．アニソール０．
０５ｍ１．トリフルオロ酢酸１ｍｌ　およびトリメチル
シリルプロミド０．１３ｍ１の混合物に加え、室温で２
時間攪拌した。反応混合物をエーテル中に加え、沈殿を
濾取した。これをエーテル、次いでジクロロメタンで洗
浄した後、酢酸−水（３０ニア０）の混合溶媒で抽出し
、抽出液を凍結乾燥して粗ペプチドを得た。

次いで、これを下記条件の高速液体クロマトグラフィー
で精製した。

カラム：センシュ０Ｄ５−５２５１１５　μｍ００＾、
２０ｍｌ１１×２５０ｔｎｍ　Ｃ１８（センシュー科学
社製）　９ ０ 溶出：水−アセトニトリル−トリフルオロ酢酸（９０：
１０＋Ｏ，ｌ）から水−アセトニトリル−トリフルオロ
酢酸（６７＋３３：０．１）の直線的濃度勾配 流速：　７．０ｍｌ／分 検出：　２８０ｎｍにおける吸光度 保時時間的３３．３分の画分を分取し、本発明ペプチド
のトリフルオロ酢酸塩１５１ｍｇを得た。

この化合物の高速液体クロマトグラフィー保持時間Ｒｔ
’およびＲｔ２は、実施例１で得たペプチド・トリフル
オロ酢酸塩のそれとそれぞれ一致した。

酸加水分解物のアミノ酸分析値（モル比）Ｓｅｒ、０．
９０；Ｇｌｕ、３．０７；Ａｌａ、１．Ｏｅ；Ｉｌｅ、
０．９５；Ｌｅｕ、２．００；Ｔｙｒ、２．０２；Ｐｈ
ｅ、１．０３；Ｌｙｓ、２．９９Ａｒｇ、１．ＯＱ：Ｐ
ｒｏ、０．９８゜手続補正書（自制 １、事件の表示 平成２年特許願第５２５５３号 ２、発明の名称 ヘキサデカペプチド ３、補正をする者 事件との関係　　　特許出願人 住所　東京都墨田区墨田五丁目１７番４号〒５３４　　
大阪市部島区友渕町１丁目５番９０号鐘紡株式会社特許
部 電話（０６）　９２１−１２５１ ４、補正命令の日付 ６、補正の対象 明細書の「発明の詳細な説明」の欄 ７、補正の内容 （１）明細書第７頁１６行目の「直線的濃度勾配法」の
後に、ｒ（１００分間かけて濃度勾配をかける）Ｊを挿
入する。

（２）明細書第１５頁１３行目の「直線的濃度勾配」の
後に、「（５０分間かけて濃度勾配をかける）Ｊを挿入
する。

（３）明細書第１６頁１４行目のｒｌ　ｘ　　１９ｃｍ
　」を、１’２．６ｃｍ　Ｘ　　２５ｃｍ　、５と訂正
する。

（４）明細書第１６頁１６行目のｒ６０ｍｌ」を、ｒ　
２００ｍ１　Ｊと訂正する。

（５）明細書第１７頁１２行目の「濃度勾配」の後に’
　（ｒｏｏ分間かけて濃度勾配をかける）ｊを挿入する
。

（６）明細書第２１頁４行目の「濃度勾配」の後に１（
３０分間かけて濃度勾配をかける）Ｊを挿入する。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）下式（ I ） 【遺伝子配列があります】・・・（ I ） で表わされるペプチドまたはその薬学的に許容される塩
   。