JPH0322992A

JPH0322992A - 微生物を利用した光学活性ベンゾヒドロール誘導体の製造法

Info

Publication number: JPH0322992A
Application number: JP8472890A
Authority: JP
Inventors: Takeshi Oishi; 大石　武; Hiroyuki Akita; 秋田　弘幸; Masahiro Kato; 昌宏加藤
Original assignee: Chugai Pharmaceutical Co Ltd; RIKEN Institute of Physical and Chemical Research
Current assignee: Chugai Pharmaceutical Co Ltd; RIKEN Institute of Physical and Chemical Research
Priority date: 1989-03-31
Filing date: 1990-03-30
Publication date: 1991-01-31

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】皮皇上夏肌五立夏本発明は、一般式（１）ｖ１１（式中Ｘ及びＹは、同一又は異なって、ハロゲン原子を
示し、ｍ及びｎは、それぞれＯ〜３の整数を示す．）で
表されるベンゾフェノン誘導体を基質として、これを一般式（ＩＩ）（式中Ｒ及びＲ′は、互いに異なって水素原子又は水酸
基を示し、Ｘ及びＹは、同一又は異なって、ハロゲン原
子を示し、ｍ及びｎはそれぞれＯ〜３の整数を示す．）
で表されるペンゾヒドロール誘導体に不斉的に還元する
能力を有するロドスボリジウム属に属する微生物を一般
式（１）で表される化合物に接触させて、一般式（■）
で表される化合物に変換し、次いでこの一般式（ｎ）で
表される化合物を採取することを特徴とする一般式（ｎ
）で表される化合物の製造法に関するものである．一般式（ｎ）で示されるペンゾヒドロール誘導体は、光
学活性を必要とする医薬、農薬等例えば植物生長調節剤
として知られているイナベンフィドの合威中間体として
広く利用されうる極めて有用な物質である．Ｕ仁伎歪一般式（ｎ）で示される光学活性ペンゾヒドロール誘導
体の製造法に関しては、本出願人の中外製薬株式会社が
先に出願した特願昭６３　−　７９８２７号（昭和６３
年３月３１日出Ｉｌｌｌ）の明細書中に記載した、ＲＳ
−２−アミノー５−クロロベンゾヒドロールから、Ｌ一
酒石酸を用いて、Ｓ−２−アミノー５クロロベンゾヒド
ロールを得る光学分割法が知られているだけであり、ベ
ンゾフェノン誘導体を生物化学的手法による不斉還元に
て光学活性ペンゾヒドロール誘導体を得る製造法は知ら
れていない．’ｌ　　｛　　゜　　　　　　　　　　　
　量ところで一般式（ＩＩ）で示される化合物を得るの
に、従来の光学分割法を用いると、光学純度や収率がい
ずれも低く、工程数も長く、更には再結晶を２度行なわ
なければならないなどの煩雑な操作を必要としなければ
ならないため設備、コストの面においても工業的に非常
に不利であった．そこで、本発明者等は、これらの事情
に鑑み、一ａ式（ＩＩ）で示されるペンゾヒドロール誘
導体を工業的に優れた製法で得るべく鋭意研究を重ねた
結果、一般式（１）で示されるベンゾフェノン誘導体を
基質として、これを一般式（ＩＩ）で示されるペンゾヒ
ドロール誘導体に不斉的に還元する能力を有するロドス
ボリジウム属に属する微生物を一般式（１）で表される
化合物に接触させることにより、一般式（■）で表され
るペンゾヒドロール誘導体を、高光学純度、高収率で得
られることを見出し本発明を完成するに至った．量　　
　′　　るｔ・　の本発明に用いられる微生物は、以下説明する方法によっ
て見い出すことができる．例えば、グルコース、ＫＨ．ＰＯ４、（Ｎ｝＋４）　ｔ
ｓＯａ、イーストエキス、尿素、ＭｇＳ０４・７ＨｘＯ
、ＣａＣｌ１２ＬＯ、微量ミネラル溶液（ＦｅＳＯａ　
Ｈ　７ＨｔＯ、ＭｎＣｆｆｉｚ　’　４ＬＬＺｎＳＯａ
・７Ｈ，０からなる．）等からなる培地に、微生物を植
菌し、前培養を行う．これに一般式（１）で示されるベ
ンゾフェノン誘導体を熔解した界面活性剤を加え本培養
を行い、培養後、等量の酢酸エチルで抽出、精製を行う
．得られた反応混合物を薄層クロマトグラフィーで分離
することにより、一般式（ｎ）で示されるペンゾヒドロ
ール誘導体を得ることができる．本発明に使用し得る微生物としては不斉還元能力を有す
るロドスボリジウム属に属する微生物であればよく、例
えば、ロドスボリジウム・トルロイデス（Ｒｈｏｄｏｓ
ｐｏｒｉｄｉｕｍ　ｔｏｒｕｌｏｉｄｅＳ）などがあげ
られる．この微生物は、ＩＦＯ　０５５９，＾ＴＣＣ　
１５３８５，ＣＢＳ１４等の番号で寄託されている．こ
れらの微生物の培養には、通常これらの微生物が責化し
うる栄ｌＩ源であれば何でも使用しうる．例えばグルコ
ース、スクロース、フルクトース等の炭水化物、エタノ
ール、グリセロール等のアルコール頻、バラフィン等の
炭化水素、酢酸、プロビオン酸等の有機酸、大豆油等の
炭素源またはこれらの混合物、酵母エキス、ペプトン、
肉エキス、コーンスチープリカー、硫安、アンモニア等
の含窒素無機もしくは有機栄養源、リン酸塩、マグネシ
ウム、鉄、マンガン、カリウム等の無機栄養源およびビ
オチン、チアξン等のビタミン類を適宜配合した通常の
培地が用いられる．培養方法としては、栄養培地のｐＨ
を４．０〜９．０の範囲で好気的に、１５〜４０℃の温
度範囲で前培養として１〜５日間、基質添加後の本培養
では、１〜２０日間培養する．本発明で用いられる界面
活性剤としては、特に制限はないが、好ましくは、例え
ば、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ソ
ルビタン脂肪酸エステル等があげられる．本発明の不斉還元反応の方法としては、培養液をそのま
ま用いる方法、遠心分離等により菌体を分離し、これを
リン酸緩衝液あるいは水等に再懸濁したものに一般式（
１）で示されるベンゾフエノン誘導体を添加し、反応さ
せる方法等がある．この反応の際、グルコース、スクロ
ース等の炭素源をエネルギー源として添加しても良い．
反応によって生成した一般式（Ｉｔ）で示されるペンゾ
ヒドロール誘導体の採取は、反応液から直接あるいは菌
体分離後、酢酸エチル、ジクロ口メタン等の溶剤で抽出
し、脱水後クロマトグラフィーにて情製することにより
高純度の一般式（ＩＩ）で示されるペンゾヒドロール誘
導体が容易に得られる．又、本発明により得られる一般式（■）で示されるペン
ゾヒドロール誘導体の光学純度は、高速液体クロマ１・
グラフィーにより決定することができる．又、−ａ式（
Ｉｔ）で表される化合物に、ロゲン原子を示す．）で表
される化合物を、適当な溶媒中で反応させることにより
、植物生長ｙ４節作用を有する一般式（Ｉ［Ｉ）（Ｒ，　Ｒ’，　Ｘ，　Ｙ．　ｍ，　ｎは前記と同一の
意味を示す．）で示されるイソニコチン酸アニリド誘導
体を得ることができる．この場合適当な脱酸剤を用いる
と反応はより円滑に進行する．適当な溶媒としては、ベ
ンゼン、トルエン、キシレン、ジクロロメタン、クロロ
ホルム、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジメチルホ
ルムアミド等があげられる．脱酸剤としては、とリジン
、トリエチルアミン、カ性ソーダ、カ性カリ、炭酸ソー
ダ、炭酸カリ等があげられる．反応は室温においても進
行するが、場合によっては冷却あるいは加熱して行って
も良い．好ましい反応温度は０〜６０℃である．反応時
間は、反応条件の選定にもよるが、ｌ〜３時間で完結す
る．反応終了後常法により分離、精製することにより、
一般式（ＩＩＩ）で表される化合物を生或できる．以下、本発明をさらに詳細に実施例にて説明するが、本
発明は、これらに限定されるわけではない．実紅ｌ壓Ｌ蒸留水ｔｌ中に、グルコース５０　ｇ　ＳＫＨｔＰＯｎ
　１　ｇ　，（ＮＨ４）　ｘｓＯ４１　ｇ　−　イース
トエキスＩｇ，尿素０．５ｇＳＭｇＳＯｉ’７１ｌｔＯ
　Ｏ．５ｇ，　ＣａＣｆｌ’２ＨｚＯ　ｏ．ｓｇ及び微
量ミネラル溶液（蒸留水１０ｉｄ中に、ＦｅＳＯ．−マ
ＵＸＯ１０ｍｇ，　ＭｎＣｆ１４１１ｘ０　１０ｍｇ及
びＺｎＳＯ．　・７ＨｔＯ　１０ｅ＋ｇを熔解させたも
の）２−を加えた液体培地２００−にロドスボリジウム
・トルロイデスを植菌し、３０℃で３日間前培養を行っ
た．これに、界面活性剤丁ｗｅｅｎ　８０　（ポリオキ
シエチレンソノレビタンモノオレイン酸エステル、和光
純薬製）０．３ｄ中に、２−アミノー５−クロロベンソ
゛フェノン３０■をｔ容解した溶液を加え、３０゜Ｃで
３日間本培養した．反応後、この培養液を酢酸エチルで
抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧下留去
した．得られた反応混合物を薄層クロマトグラフィー（
シリカゲルプレート、展開溶媒一ヘキサン：酢酸エチル
（３：ｌ））で分離することにより、光学活性の２−ア
ξノー５−クロロペンゾヒドロール１８．１＠置（化学
収率６０％）が得られた．これをメタノールに溶解し、
高速液体クロマトグラフィー（カラム：ダイセル社製Ｃ
ＩＩＩＲＡＬＰＡＣ＠−ＯＰ，　ｔ８出溶剤：メタノー
ル、流速：　１　ｄ／ｓｉｎ）により分析を行うと、Ｓ
体が４。５１分、Ｒ体が５．２３分の保持時間で分離さ
れ、光学純度は９９％ｅ．ｅ．以上であった．１貞廻１実施例１により得られるＳ−２−アξノー５一クロロベ
ンゾヒドロール２．３４　ｇのピリジン（１０００−）
ｆ＠液に、水冷下イソニコチン酸クロリド塩酸塩１．７
８　ｇを加えた．室温で１時間攪拌した後、水を加え、
減圧乾固し、残渣を酢酸エチルー水間に分配した．有機
層を飽和食塩水で洗浄後、芒硝で乾燥した．乾燥後、こ
の有機層を減圧濃縮して得られた結晶を、酢酸エチル一
〇一ヘキサンから再結晶して、Ｓ−４′−クロロー２′
＝（α−ヒドロキジベンジル）イソニコチン酸アニリド
２．７０ｇヲｌｌた。

［α］　＋＋”＋１４．６１　（Ｃ＝１．１２，　Ｍｅ
ＯＨ）融点　１６５〜１６６゜Ｃ実１０壓よ実施例１の２−アミノー５−クロロペンゾフエノンの代
わりに、基質として２−アミノー３’，４’，５−トリ
クロロベンゾフエノンを用いて、同様に反応させたとこ
ろ、光学活性２−アミノー３’，４’５−トリクロロベ
ンゾヒドロールを得た．これをメタノールに溶解し、高
速液体クロマトグラフィ−（カラム：ダイセル社製ＣＩ
ＩＩＲＡＬＰＡＣ＠−ＯＰ，溶出溶剤：メタノール、流
速ｌｍ／鋤ｉｎ）により、光学純度を求めると９９％ｅ
．ｅ．以上であった．この光学活性体をＸ線結晶構造解
析したところ、ｌｏｏ％Ｓ体であることが分かった。

災嵐班土実施例１の２−アミノー５−クロロペンゾフエノンの代
わりに基質として、２−アミノー４′−ブロモー５−ク
ロロベンゾフエノンを用いて、同様に反応させたところ
、光学活性２−アミノー４′−ブロモー５−クロロベン
ゾヒドロールを得た．これをメタノールに溶解し、高速
液体クロマトグラフィー（カラム：ダイセル社製Ｃ旧Ｒ
ＡＬＰＡＣ＠　−ＯＰ，溶出溶剤：メタノール、流速：
　１　ｄ／ｓｉｎ）により光学純度を求めると９９％ｅ
．ｅ．以上であった．災施目ｉ実施例ｌの２−アミノー５−クロロペンゾフェノンの代
わりに基質として、２−アミノー３′，５−ジクロロベ
ンゾフェノンを用いて、同様に反応させたところ、光学
活性２−アξノー３′，５−ジクロロペンゾヒドロール
を得た．これをメタノールに溶解し、高速液体クロマト
グラフィー（カラム：ダイセル社製Ｃ｝ＩＩＲＡＬＰＡ
Ｃ＠−ＯＰ，溶出熔剤：メタノール、流速：　１　ｄ／
ｓｉｎ）により光学純度を求めると９９％ｅ．ｅ．以上
であった．裏施世旦実施例１の２−アξノー５−クロロベンゾフェノンの代
わりに基質として、２〜アミノー５−クロロ−４′−フ
ルオロペンゾフェノンを用いて、同様に反応させたとこ
ろ、光学活性２−アごノー５−クロロ−４１−フルオロ
ベンゾヒドロールヲｌｔ％　タ，これをメタノールに溶
解し、高速液体クロマトグラフィ−（カラム：ダイセル
社製ＣＨＩＩ？ＡＬＰＡＣ＠　−ｏｐ，溶出溶剤：メタ
ノール、流速：Ｉ一／鵬ｉｎ）により、光学純度を求め
ると６５％ｅ．８．であった．災旌■工実施例ｌの２−アミノー５−クロロベンゾフヱノンの代
わりに基質として、２−アミノー３′−クロロペンゾフ
ェノンを用いて、同様に反応させたところ、光学活性２
−アごノー３′−クロロペンゾヒドロールを得た．これ
をメタノールに溶解し、高速液体クロマトグラフィー（
カラム：ダイセル社製ＣＨＩＲＡＬＰＡＣ＠−００，溶
出溶剤：メタノール、流速：　１　ｄ／ｍｔｎ）により
、光学純度を求めると７１％ｅ．ｅ．であった。

裏胤梃韮実施例１の２−アミノー５−クロロベン７’７エノンの
代わりに基質として、２−アミノー３′−ブロモベンゾ
フエノンを用いて、同様に反応させたところ、光学活性
２−アξノー３′−ブロモヘンゾヒドロールを得た．こ
れをメタノールに溶解し、高速液体クロマトグラフィ−
（カラム：ダイセル社製Ｃ旧ＲＡＬＰＡ（Ｊ−０［１，
溶出熔剤：メタノール、流速：　１　ｄ／ｓｉｎ）によ
り、光学純度を求めると６５％ｅ．ｅ．であった．裏旌班エ実施例１の２−アミノー５−クロロペンゾフエノンの代
わりに基質として、２−アミノー４′，５一ジクロロペ
ンゾフェノンを用いて、同様に反応させたところ、光学
活性２−アミノー４′，５−ジクロロベンゾヒドロール
を得た．これをメタノールに溶解し、高速液体クロマト
グラフィー（カラム：ダイセル社製ＣＨＩＲＡＬＰＡＣ
”−ＯＰ，溶出溶剤：メタノール、流速：　１　ｄ／ｓ
ｉｎ）により、光学純度を求めると９９％ｅ．ｅ．であ
った．又亙坐益来本発明によれば、医薬、農薬等の合或中間体として利用
されうる一般式（ｌｒ）で示されるペンゾヒドロール誘
導体を、極めて高光学純度、高収率に製造でき、又、工
程数も短く、工業的に優れた製法を提供できる．平戒２年６月２日

Claims

【特許請求の範囲】１、一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｘ及びＹは、同一又は異なってハロゲン原子を示
し、ｍ及びｎは、それぞれ０〜３の整数を示す。）で表
されるベンゾフェノン誘導体を基質として、これを一般式（II） ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｒ及びＲ′は、互いに異なって水素原子又は水酸
基を示し、Ｘ及びＹは、同一又は異なってハロゲン原子
を示し、ｍ及びｎはそれぞれ０〜３の整数を示す。）で
表されるベンゾヒドロール誘導体に不斉的に還元する能
力を有するロドスポリジウム属に属する微生物を一般式
（ I ）で表される化合物に接触させて一般式（II）で
表される化合物に変換し、次いでこの一般式（II）で示
される化合物を採取することを特徴とする一般式（II）
で示される化合物の製造法。２、微生物がロドスポリジウム・トルロイデスである請
求項１記載の製造法。３、一般式（III） ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｒ及びＲ′は、互いに異なって水素原子又は水酸
基を示し、Ｘ及びＹは、同一又は異なってハロゲン原子
を示し、ｍ及びｎはそれぞれ０〜３の整数を示す。）で
表されるイソニコチン酸アニリド誘導体を製造する方法
において、一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｘ及びＹは、同一又は異なってハロゲン原子を示
し、ｍ及びｎは、それぞれ０〜３の整数を示す。）で表
されるベンゾフェノン誘導体を基質として、これを一般
式（II） ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｒ及びＲ′は、互いに異なって水素原子又は水酸
基を示し、Ｘ及びＹは、同一又は異なってハロゲン原子
を示し、ｍ及びｎはそれぞれ０〜３の整数を示す。）で
表されるベンゾヒドロール誘導体に不斉的に還元する能
力を有するロドスポリジウム属に属する微生物を一般式
（ I ）で表される化合物に接触させて一般式（II）で
表される化合物に変換し、次いでこの一般式（II）で示
される化合物に、一般式（IV） ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｚは、ハロゲン原子を示す。）で表される化合物
を反応させることを特徴とする方法。４、微生物がロドスポリジウム・トルロイデスである請
求項３記載の方法。